Başlamak için, döllenmiş tavuk yumurtalarını nemlendirilmiş bir inkübatörde kuluçkaya yatırın. Daha sonra,% 0.25 EDTA tamponu ile iki kez CMF salin hazırlayın. Daha sonra HBSS çözeltisinde tavuk embriyolarının derisini soyun ve 15 ila 20 dakika boyunca buz üzerinde iki kez CMF-EDTA çözeltisinde inkübe edin.
Epitel ve mezenşimi dikkatlice ayırmak için bir çift saatçi forseps kullanın. Daha sonra izole edilmiş epitel ve mezenşimi HBSS içeren tek bir temiz tabağa aktarın. Rekombinasyon için, mezenşimi HBSS içeren bir Petri kabına yerleştirin, ardından epiteli mezenkimin ön / arka ekseni boyunca hizalayarak üzerine yerleştirin.
Alternatif olarak, epiteli mezenkimal anterior arka eksenden 90 derece döndürün. Daha sonra, yeniden birleştirilen derileri altı kuyucuklu kültür kabındaki kültür eklerine aktarın. Recombined cildi çevreleyen fazla HBSS'yi çıkarın.
Ek parçanın dış kuyusuna %10 FBS içeren DMEM ekledikten sonra, kesici uç haznesine ince bir tabaka DMEM pipetleyin ve eksplantın yarı nemli kaldığından emin olun. Son olarak, cilt rekombinantlarını% 5 karbondioksit ve% 95 hava ortamında 37 derecede bir inkübatöre yerleştirin. Monte edilmiş bir diseksiyon mikroskobu ile hızlandırılmış fotoğrafçılık kullanarak ilk cilt gelişim aşamalarındaki fenotipik değişiklikleri izleyin.
Rekombinasyondan kısa bir süre sonra yeni plakodlar ortaya çıktı ve rekombinasyondan iki gün sonra kısa tüy tomurcuklarına dönüştü. Uzun tüy tomurcukları dört günde gelişti. Epitel 90 derece döndürüldüğünde, yeni tomurcukların yönü epitel tarafından belirlendi.
