Başlamak için, murin arka bacak eksplantının 48 saatlik deksametazon ön işlemi tamamlanmak üzereyken yeterli miktarda steril kültür ortamını önceden ısıtın. Ön işlem sona erdiğinde, ön işlem görmüş eksplantları biyogüvenlik kabinine taşıyın. Yüksüz grup için, ön işlem ortamını aspire edin ve eksplantları taze Petri kaplarına aktarın.
İnkübatöre geri göndermeden önce her yemeğe 70 mililitre kültür ortamı ekleyin. Eksplant platformlarını temel gerilim ve statik çarpma grubuna hazırlamak için, kavrama plakalarının boyutuna uyacak şekilde zımpara kağıdı parçaları kesin. Statik çarpma grubu için, örgülü misina parçalarını kesin ve hattın uzunluğu boyunca yarıya kadar gevşek bir el üstü düğüm bağlayın.
Her akrilik banyoyu kaplayacak şekilde alüminyum folyo parçalarını yırtın ve üzerlerine %70 etanol püskürtün. Hazırlanan bileşenleri biyogüvenlik kabinine aktarın. Platform montajı için akrilik banyo, taban, hacim azaltma ekleri, klips ve tutamaklar gibi bileşenleri düzenleyin.
Platform bileşenlerini, olası kültür ortamı sızıntılarını içermek için yeterli hacme sahip ikincil kapların içine yerleştirin. Kapları en az bir saat boyunca en az% 10 ağartıcı çözeltisine batırın. Çamaşır suyu çözeltilerini musluk suyuyla durulayın.
Durulanan bileşenleri biyogüvenlik kabinine aktardıktan sonra, plakaları tutamaklara sabitlemek için M3 vidalar ve sıkıştırma yayları kullanın. Tutamakları bir M5 vida kullanarak tabana güvenli bir şekilde takın ve M6 vidaları plakalara temas edene kadar takın. Çift taraflı bant kullanarak zımpara kağıdı yapıştırarak plakaların işlevselliğini artırın.
Zımpara kağıdının plakalara yapışmasını kolaylaştırmak için tutamakları kapatın. Bir platformu yüklemek için, tutamakları tamamen açın ve üst bacağı ve dizini plakalar arasına dikkatlice yerleştirmek için forseps kullanın. Uzvu yerinde tutmak için tutamakları yavaşça kapatın.
Açıkta kalan femur başını veya ayağını kavramak için forseps kullanın ve yerine sabitlemek için forsepsleri kademeli olarak kapatırken diz fleksiyon açısını ayarlayın. Temel gerginlik grubu için, tutamakları kapatırken diz eklemini uzatın. Statik sıkışma grubu durumunda, tutamakları kapatırken diz eklemini esnetin.
Statik çarpma grubu için, ipin üst düğümünü distal pençenin etrafına yerleştirin ve iyice sıkın. İpi, eksplantın altındaki tabandaki bir yuvadan ve klips deliğinden geçirin. Tabanı akrilik banyoya yerleştirin ve klipsi banyonun üst kenarına sabitleyin.
Ayağı dorsiflex yapmak için, ipi tibiaya göre en az 110 dereceye ulaşana kadar çekin. Dizeyi klipten çıkarken işaretlemek için kalıcı bir işaretleyici kullanın. Dorsifleksiyon açısının gelecekteki ölçümü için bu dorsifleksli pozisyonda eksplantın bir fotoğrafını çekin.
Tabanı kurulumdan çıkarın ve hacim azaltma ekini tabandaki bir ray boyunca kaydırarak takın. Tabanı akrilik banyoya geri yerleştirin ve klipsi üst kenara yeniden yerleştirin. İşaretli dizeyi kılavuz olarak kullanın.
Ayağı orijinal dorsifleksiyon açısına geri döndürmek için çekin ve statik dorsifleksiyon pozisyonunu korumak için ipi bant kullanarak banyonun dışına sabitleyin. Temel gerginlik grubu için, eksplant tutamaklar arasına yerleştirildikten sonra, dorsifleksiyon açısını ölçmek için bir fotoğraf çekin. Ardından hacim azaltma parçasını tabana kaydırın ve akrilik banyoya yerleştirin.
Eksplantları daldırmak için her platforma 125 mililitre önceden ısıtılmış kültür ortamı ekleyin. Banyonun üstünü alüminyum folyo ile kapladıktan sonra, tüm kurulumu ikincil bir kaba yerleştirin. İkincil kabı yedi gün boyunca inkübatöre ve kültüre yerleştirin.
