Yüksek Çözünürlüklü Yapı Belirleme için Tek Katmanlı Grafenin Kriyo-Elektron Mikroskobu Izgaralarına Uygulanması

Kriyo-elektron mikroskobu numunesinin hazırlanmasında yaygın bir zorluk, hava-su arayüzünde partikül lokalizasyonudur ve partiküllerin tercih edilen yönelimleri benimsemesine ve denatüre olmasına neden olur. Bunun yerine, parçacıkların, grafen gibi ince filmin desteklediği ızgara yüzeyinde durması daha iyidir. Diğer bir zorluk, grafen tarafından da ele alınabilecek nispeten yüksek numune konsantrasyonlarına duyulan gereksinimdir.

Grafen kaplı ızgaralar, kriyoEM yapısının belirlenmesi için çok sayıda avantaj sağlar, ancak tarihsel olarak şirket içinde tekrarlanabilir bir şekilde üretilmesi zor ve ticari olarak satın alınması maliyeti engelleyici olmuştur. Bu protokol, tek katmanlı grafenin sağlam bir şekilde biriktirilmesine izin verir, böylece araştırmalarında bu ızgaraları kullanan kullanıcıların önündeki engeli azaltır. Grafen, malzeme özellikleri nedeniyle benzersizdir.

Tek katmanlı bir karbon tabakasıdır ve bu nedenle minimum arka plan gürültüsü sergiler. İnce bir amorf karbon tabakası veya grafen oksit pulları gibi diğer cryoEM ızgara destekleri, tek bir tek tabaka olarak uygulanamaz ve daha fazla arka plan sinyaline katkıda bulunur. Grafenin cryoEM ızgaralarına uygulanması için sağlam bir protokol oluşturduğumuza göre, doğrudan hücre lizatlarından ızgara üzerinde yakalama için afinite tutamaçlarına sahip grafen kaplı ızgaraların işlevselleştirilmesini sürdürmek istiyoruz.

Bu, cryoEM numune hazırlamadaki başka bir darboğazı hafifletebilir.