Başlamak için, katmanlı bir polipropilen mikrosantrifüj tüpüne 100 miligram bitki dokusu tozu eklemek için önceden soğutulmuş bir spatula kullanın. Ardından hemen tüpe bir mililitre% 20 metanol ekleyin. Kapaklı tüpü oda sıcaklığında üç saat boyunca sallanan bir çalkalayıcı üzerine yerleştirin.
Daha sonra, tüpü 10 dakika boyunca 9.464 G'de santrifüjleyin ve süpernatanı bir LC-MS otomatik örnekleyici şişesine toplayın. Bir elektrosprey iyonizasyon kaynağı ve bir ters faz HPLC sütunu ile bir LC-MS cihazı kurun. HPLC için, çözücü A olarak suda% 0.1 formik asit ve çözücü B olarak asetonitrilde% 0.1 formik asit kullanın. Kolon fırın sıcaklığını 45 santigrat dereceye ve akış hızını dakikada 0.5 mililitreye ayarlayın.
Çözücü B konsantrasyonunun 26 dakika içinde %1'den %50'ye yükselmesi için 30 dakikalık bir gradyan ayarlayın, ardından 26.01 dakikada hızla %1 B'ye dönün ve dört dakika bekleyin. Kütle spektrometresinin çalışma parametrelerini yapılandırın.
Arayüz voltajını dört kilovolta, nebulize edici gaz akışını dakikada üç litreye ve ısıtma gazı akışını dakikada 10 litreye ayarlayın. Çözülme hattı sıcaklığını 250 santigrat dereceye, ısı bloğu sıcaklığını 400 santigrat dereceye ve arayüz sıcaklığını 300 santigrat dereceye ayarlayın. Kurutma gazı akışını dakikada 10 litreye ve çarpışma kaynaklı ayrışma gazı basıncını 17 kilopaskal'a ayarlayın.
Elektrosprey iyonizasyon kaynağı pozitif modunda bir MS yöntemi oluşturun, 100 ila 1.000 dalton kütle aralığını kapsayan hem Q3 hem de Q1 taramalarını içerir ve Q1 taraması, otomatik izotop dışlama ile bir anket olayı olarak hizmet eder. 50 ila 1.000 daltonluk bir kütle penceresi, eksi 20 voltluk çarpışma hücresi enerjisi ve 0,2 saniyeden daha kısa bir olay süresi ile Q1 taramasına bir ürün iyon tarama bağlantısı ekleyin. Ardından, eksi 20 voltluk çarpışma hücresi enerjileri ve 0,75 saniyelik olay süreleri ile LC yönteminin uzunluğuna eşit pozitif mod öncü iyon taramaları eklemek için MS yöntemini ayarlayın.
Her durumda, otomatik izotop hariç tutma veya deizotop işlevlerinin etkinleştirildiğinden emin olun. Monosübstitüe edilmiş, ikame edilmiş ve trisübstitüe edilmiş tropan alkaloid fragmanları için ana yük değerlerini ayarlayın. Daha sonra, MS-MS yöntemine, eksi 20 voltluk çarpışma hücresi enerjileri ve 0,75 saniyelik olay süreleri ile LC yönteminin uzunluğuna eşit pozitif mod nötr kayıp taramaları ekleyin.
Her durumda, otomatik izotopik dışlama veya deizotoping işlevlerinin etkinleştirildiğinden emin olun. Tiglik asit, asetil grupları ve fenillaktik veya tropik asit esterlerinden türetilen esterler için tropan alkaloidleri üzerindeki esterler için ilgilenilen nötr kayıp kütlelerini ayarlayın. LC-MS yöntemini indirin ve ilgilenilen örnekler için veri dosyaları oluşturun.
HPLC kolonu 45 santigrat derecede dengelendikten sonra, 10 ila 20 mikrolitre numune enjekte edin.
