Başlamak için, otoklavlanmış cerrahi aletleri ameliyat masasına yerleştirin. Anestezi uygulanan farenin karnını tıraş edin ve fareyi cerrahi tahta üzerinde sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Karnı povidon iyot ve ardından %70 etanol ile temizleyin.
Kuruluğu önlemek için farenin gözlerinin altına oftalmik merhem yerleştirin. Fareyi cerrahi tahta üzerindeki yerine sabitleyin. Veri toplama yazılımını başlatın ve kaydetmeye başlayın.
Ventilatörü kilogram başına dört mililitre olarak açın ve pozitif son ekspiratuar basıncın yaklaşık iki santimetre su olduğundan emin olun. Makas kullanarak, ksifoid işleminden kasık simfizine kadar bir orta hat laparotomisi yapın. Daha sonra künt bir alet yardımıyla, medial-lateral viseral rotasyon gerçekleştirin ve infrahepatik inferior vena kava'yı görselleştirin.
Heparini 20 gauge iğne ile inferior vena kava içine enjekte edin. Bir makas kullanarak, cildi sternal çentikten mandibula açısının hemen altına kadar kesin ve trakeaya doğru incelemeye başlayın. Ardından, trakeayı ortaya çıkarmak için gerekli kayış kaslarını kör bir şekilde inceleyin.
Kıkırdaklı halkalar arasındaki ön trakea üzerinde enine bir kesi yapın ve trakeanın arka kısmını kesmemeye dikkat edin. Soluk borusunun etrafına 5-0 ipek dikiş atın. Endotrakeal tüpü kıkırdak halkalarına yerleştirin ve 5-0 ipek sütür ile sabitleyin.
Endotrakeal tüpü ventilatöre bağlayın ve göğsün uygun şekilde yükselmesini sağlayın. Makas kullanarak medyan sternotomi yapın ve göğüs boşluğuna girin. Akciğerlerin yanlışlıkla manipüle edilmesini önleyerek, kalbi ve akciğerleri açığa çıkarmak için göğüs duvarı ekartörleri yerleştirin.
Keskin ve künt diseksiyon kombinasyonu ile timusu anterior mediastenden çıkarın. Pulmoner arteri tanımlayın ve kanülasyona hazırlanmak için etrafına 5-0 ipek bir dikiş yerleştirin. Arteriyel kanülü pulmoner arter içine yerleştirmek için makas kullanarak sağ ventrikül çıkış yolunda iki ila üç milimetrelik bir kesi yapın ve 5-0 sütür ile sabitleyin.
Sıçanı ötenazi yaptıktan sonra, havası alınmış akciğer koruma sıvısını, akciğerleri yerçekimi yıkamak için arteriyel kanüle hızlı bir şekilde bağlayın. Arteriyel kanülü EVLP devresine bağlayın. Silindir pompasını açın ve az miktarda perfüzatın akciğerden ve sol ventrikülden göğüs boşluğuna akmasına izin verin.
Perfüzat sol atriyumdan dışarı akmaya başladığında, silindir pompasını kapatın. Daha sonra, sol ventriküle küçük bir forseps yerleştirin ve mitral kapak halkasını hafifçe gerin. Kalbin etrafına 5-0 ipek bir kravat yerleştirin ve gevşek bir şekilde bağlayın.
Sol atriyum kanülünü sol ventriküle yerleştirin ve kanülü atriyum içinde görünene kadar ilerletin. Sol atriyumu önceden bağlanmış 5-0 dikiş ile sabitleyin. Yemek borusunu tanımlayın ve diyaframa mümkün olduğunca yakın bir hemostat ile klempleyin.
Ardından, hemostatın altındaki yemek borusunu kesin. Omurgayı kılavuz olarak kullanarak, kalp-akciğer bloğunu çevredeki yapılara bağlayan tüm ligamentöz ekleri makasla kesin. Daha sonra trakeayı boyundan ayırın ve kalp-akciğer bloğunu serbest bırakmak için trakeayı endotrakeal tüpün üzerinde kesin.
Kalp-akciğer bloğunu EVLP devresi içindeki torasik cekete taşıyın ve sol atriyum kanülünü devreye takın. Silindir pompasını açın ve vantilatör monitörünü bağlayın. Sisteme hava embolisi girmediğinden emin olmak için kabarcık kapanını kontrol edin.
İlk 15 dakika boyunca ventilasyon ve perfüzyon ayarlarını yavaşça istenen deneysel seviyelere değiştirin. Ek olarak, perfüzyon akış hızını istenen hıza ve basınca yükseltin. Belirlenen zaman noktalarında, perfüzat gaz seviyelerini ve solunum fonksiyon testlerini kontrol edin.
Test edilen tüm perfüzatlar, sol atriyum kısmi oksijen basıncında hafif bir azalma gösterdi ve RBC bazlı perfüzat bir saatte önemli ölçüde azaldı. Sonraki birkaç saat boyunca, hem polihHB hem de kontrol perfüzatları stabil sol atriyum kısmi oksijen basıncına sahipti. Oksijenin delta kısmi basıncı, RBC perfüzat grubunda bir saat içinde önemli ölçüde azalırken, polihHB ve kontrol perfüzatlarında anlamlı olmayan bir eğilimle stabil kalmıştır.
Sol atriyum parsiyel karbondioksit basıncı, ilk saatten sonra RBC ve kontrol perfüzatında polihHB'ye kıyasla anlamlı derecede düşüktü ve bu eğilim sonraki saatlerde de devam etti. Karbondioksitin delta kısmi basıncı, bir saat sonra RBC perfüzatında önemli ölçüde artmış ve bundan sonra hem polihHB hem de kontrol perfüzatında stabil kalmıştır. Gerçek zamanlı akciğer fizyolojik verileri, RBC perfüzatının ilk bir saat içinde pulmoner vasküler direnci önemli ölçüde artırdığını göstermektedir.
Hem polihHB hem de kontrol perfüzatları, dönem boyunca düşük ve stabil pulmoner vasküler direnci korurken, akciğer ağırlığındaki değişiklik başlangıçta RBC perfüzatında anlamlıydı, tüm perfüzatlarda devam eden bir artışla, polihHB'de biraz daha fazlaydı. RBC perfüzatında uyum ilk bir saat içinde önemli ölçüde azalırken, diğer perfüzatlarda önemli ölçüde azalmamıştır. PolyhHB dört saat sonra en yüksek uyuma sahipti.
