Bu eser, Organ nakli, perfüzyon, mühendislik ve rejenerasyon Ohio State Üniversitesi'nde NIH T32AI 106704-01A1 ve T. Flesch Fonu tarafından desteklenmiştir.

Tüm yordamları kurumsal hayvan bakım kurallarına göre gerçekleştirilen ve Ulusal Araştırma Konseyi insana ilişkin bakım ve laboratuvar kullanım hayvanlar (IACUC) Kılavuzu ve Ohio Devlet Üniversitesi IACUC Komitesi tarafından onay uğramıştır.
1. ilk kurulum
<ol><li>
Aşağıdakileri birleştirerek perfüzyon çözüm hazırlamak: 86 mL % 25 albümin, Williams ın medya 184 mL, 30 mL penisilin/streptomisin (10 U/mL penisilin ve 0.01 mg/mL streptomisin), insülin (50 U/L), heparin (0.01 U/mL), L-glutamine (0.292 g/L) ve hidrokortizon (0,010 g/L) 300 mL toplam hacmiyle. Temel perfusate ve PEG-kedi grubu için PEG-kedi 625 U/mL ekleyin.
	<ol>
<li>Tris (hydroxymethyl) aminomethane (THAM) pH 7.4 için kullanarak perfusate çözüm tampon. Bir arteryel kan gazı makine perfusate pH onaylamak için kullanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Devre (resim 1) ayarlayın.
	<ol>
<li>Sıcak su banyosu açın ve 37 ° C'ye ayarlayın Isınmak organ odası izin.</li>
		<li>Karışık ve tamponlu perfusate rezervuar dökün ve dolaşımı başlar. Not: Bu adımda belirtilen perfusate adım 1.1.1 hazırlanmıştır.</li>
		<li>Satır içi oxygenator aracılığıyla akış sayaç için oxygenating gaz (%95 oksijen ve % 5 karbon dioksit) açın.</li>
		<li>Veri toplama yazılımı açın ve "deneme süresi için kaydetmek Başlat".</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Cerrahi mikroskop ve ameliyathane (Şekil 2) ayarlayın.
	<ol>
<li>Isınma kurulu, elektrokoter ve anestezi ve izleme donanımları hayati (kalp hızı ve oksijen doygunluk) de dahil olmak üzere tüm ekipmanları açın. Not: Mikroskop ayarları kullanılan mikroskobunun göre değişir ve kullanıcının konfor için ayarlanabilir.</li>
		<li>İnhalasyon (molekül ağırlığı 184.5 g/mol) için sıvı isoflurane 10 mL ile 10 mL anestezi şırıngaya doldur ve anestezi birimine yerleştirin.</li>
		<li>0.5 mL şırınga heparin (50 U), cerrahi aletler, pozisyon, 4-0 ile 7-0 ipek sütür, steril pamuk temizleme bezi ve 4 cm x 4 dokuma olmayan cm gazlı bez sünger uygun şekilde (Şekil 2).</li>
	</ol>
</li>
	<li>İsoflurane odası hazırlamak.</li>
</ol>2. anestezi indüksiyon
<ol><li>Aşağıdaki kişisel koruyucu donanımları (PPE): cerrahi maske, cerrahi eldiven, tek kullanımlık elbisesi.</li>
	<li>Tartmak iri fare. Not: 250-350 g arasında Sprague-Dawley rat kullanın.</li>
	<li>Oksijen kompresör ve isoflurane açın. Rat, isoflurane odasına tartılır sonra yerleştirin ve kapağı güvenli. 2 L/dak oksijen ile teslim % 6 isoflurane kullanarak anestezi neden. Not: kullanılan belirli anestezi sistemde kullanılan tam isoflurane doz bağlı olacaktır.</li>
	<li>Hayvanın karın saç. klip için elektronik makası kullanın
</li>
	<li>Hayvan isoflurane odasında değiştirin.</li>
	<li>Ameliyat odasında bulunan anestezi birimi açın.</li>
	<li>Anestezi tamamen indüklenen zaman fareyi isoflurane odasından kaldırın. Bir ayak çimdik kullanarak anestezi derinliği onaylayın.</li>
</ol>3. satın alma prosedürü
<ol><li>
16 G portal kol düğmesi (Şekil 3) hazırlayın.
	<ol>
<li>16 G angiocatheter ile başlar. 7 mm bölüm hortumunun kesmek. 3.5 mm. deşmek orta nokta itibariyle ölçerek 7 mm bölüm orta noktasını belirlemek ve tüp ön yarısı kaldırın.</li>
		<li>Şimdi düz bu bölümü ezmek için bir hemostat kullanın. Daha hafif bir dudak oluşturmak için angiocatheter diğer ucundaki eritmek için kullanın. İpucu doğrudan alevin içine koymayın veya tutuşturmak olacak.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Safra kanalını kanül hazırlayın.
	<ol>
<li>27 G angiocath alın ve sadece kateter bırakarak enjeksiyon bağlantı noktası kesti. Bu 27 G cannular boru 10 cm bölümüne bağlanın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Pozisyonu burnu fareyle anestezi burun konisi ve onun dört ekstremite immobilize. Hayati belirtileri sol arka ekstremite için monitör ekleyerek izlemek. Uygun anestezi derinliği onaylamak için bir ayak çimdik gerçekleştirin. Anestezi % 4 isoflurane devam (tartmak hayvanlar için > 250 g).</li>
	<li>Hayvanın karın % 70 izopropil alkol ile sprey. Kurumasını sağlar. Steril örtü üzerinde hayvan yer.</li>
	<li>Keskin makas ve deri (Şekil 4) yoluyla uzanan pubis kullanarak bir ensizyon xiphoid üzerinden yapmak. Yavaşça Karın zarını girin ve kas deşmek. Bu kesi aşağı yönü mesane ve bu kesi üstün yönüyle karaciğer zarar görmesini önlemek için dikkat ediniz.</li>
	<li>Belgili tanımlık kesme bir haç karaciğer alt kenarlığını düzeyde oluşturmak için sağ ve sol yanal için genişletmek.</li>
	<li>Anestezi % 2 aşağı çevirmek (tartı hayvanlar için > 250 g).</li>
	<li>Xiphoid bir eğri sivrisinek kelepçe ve kaburga kaburga ekartör (Şekil 5) kullanarak kullanarak işlemi geri çek.</li>
	<li>Falciform, frenik, kesme ve gastrohepatic bağ keskin makas ile kesme.</li>
	<li>Bulun ve frenik damar kökenli sızıntı önlemek mümkün olduğunca yakın 7-0 dikiş ile kravat-off.</li>
	<li>Steril ıslatılmış pamuk uç aplikatör kullanarak fare içini ve barsak % 0,9 normal salin ile ıslatılmış gazlı bez şal. İnce bağırsak damarlara germek değil için dikkat ediniz.</li>
	<li>İnferior vena kava (IVC aşırı doku kaldırmak için) üzerinde incelemek. Bifurkasyon için sadece üstün IVC arkasında incelemek ve bir 4-0 ipek sütür daha sonra kullanmak (Şekil 6) döngüsü geçirin.</li>
	<li>Şu adrenal ven maruz sağlamak için sağ böbrek geri çek. Superior gazlı bez ile karaciğer sağ lob geri çek. 7-0 ipek sütür ile Şu adrenal ven IVC gibi mümkün olduğunca yakın bağlayın ve kravat (Şekil 7) distal genelinde dağlamak.</li>
	<li>Dikkatlice splenik ven incelemek, iki 7-0 ipek sütür kullanarak bağla ve arasında iki dikiş kesti.</li>
	<li>Bağlayın ve gerekirse ek damarlar için portal ven üzerinde ek uzunluğu 7-0 ipek sütür kullanarak ligate. Not: Bazen aşağı karaciğer arasındaki şu adrenal ven infrahepatic IVC küçük dalları vardır.</li>
	<li>İncelemek gastroduodenal arter, gastroduodenal arter 7-0 ipek sütür ile bağlayın ve gastroduodenal arter ligate.</li>
	<li>Hepatik arter teşrih ve çevresinde (Şekil 8) 7-0 ipek sütür kravat yerleştirin.</li>
	<li>
Safra kanalını incelemek.
	<ol>
<li>Safra kanalını uzunluğunu denetleyin. Safra kanalını distal uçta bir 7-0 ipek sütür kullanarak bağlayın. 7-0 ipek sütür safra kanalını çevresinde bir döngü mümkün olduğunca proksimale yer.</li>
		<li>Küçük makas ile kesme kanalının yarı çapı bir delik ve bir 27 G kateter proksimale safra kanalını yerleştirin. Kateter Roma Peep kravat dikiş (Şekil 9) kullanarak yerde bağla.</li>
	</ol>
</li>
	<li>0.5 mL heparin (50 U) penis ven veya IVC 27 G iğne kullanarak hayvanın enjekte. Not: 27 G insülin şırınga de bunun yerine kullanılabilir.</li>
	<li>Kelepçe ve 4-0 ipek sütür daha önce yerleştirilmiş kullanarak IVC kravat.</li>
	<li>Daha önce yerleştirilmiş kullanarak hepatik arter 7-0 ipek sütür bağla.</li>
	<li>Portal ven mikrocerrahi klipi kullanarak kelepçe. Portal ven 22 G angiocatheter kullanarak cannulate. Floş portal ven ile soğuk % 0,9 normal salin ile 1 mL heparin (100 U) karaciğer kadar 60 mL (Şekil 10) blanches. Not: karaciğer hemen beyazlatmak değil Eğer bu Steril Pamuklu tıp uygulayıcıları ile masaj.</li>
	<li>Suprahepatic IVC ortaya çıkarmak ve yüksek mümkün olduğunca göğsünden kesti.</li>
	<li>Bir hepatectomy aşağıdaki gibi yapın. Diyafram kesmek, hepatik arter kesmek, IVC kesmek, portal ven kesmek, herhangi bir ek bağ kesilmiş ve karaciğer çıkar. Karaciğer buz soğuk % 0,9 normal salin (Şekil 11) yerleştirin.</li>
	<li>Yeri 16 G vasküler manşet portal ven (Şekil 12). Karaciğer ex vivo normothermic karaciğer perfüzyon devre üzerinde yerleştirin.</li>
</ol>4. Ex Vivo Normothermic karaciğer perfüzyon
Not: burada kullanılan perfusate Protokolü adım 1.1.1 hazırlanmıştır.
<ol><li>Portal ven kanülü kelepçeli portal ven (Şekil 13) yerleştirin.</li>
	<li>Portal ven kanülü yerleştirme sırasında başlatmak için 2 mL/dk devre üzerinden perfusate akışını korumak. İzlemek için herhangi bir sivri portal ven basıncında monitör; Bu gemi tıkandı haline ve kanül yeniden konumlandırma gereklidir gösterebilir.</li>
	<li>7-0 ipek dikiş kullanarak perfusate dönüş akışını IVC kanül içinde dikiş.</li>
	<li>Bir kez her iki kanüller yerdesiniz, 10-16 cmH2O dizi fizyolojik bir basınç gelinceye kadar debi 1 mL/dk dönüm başlar.</li>
	<li>
1 mL örnek öncesi ve sonrası limanlarda 0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 ve perfüzyon 240 min al. 1 mL örnek iki 0.5 mL örnek bölün. Not: 0.5 mL bu protokolü adım 4.5.1 kullanılan ve 0.5 mL kullanılan protokol adım 4.5.2.<ol>
<li>Ek bu Örneğin kriyojenik tüpler 0.5 mL sıvı azot dondur.</li>
		<li>Perfusate kalan 0.5 mL kullanarak bir arteryel kan gazı analizi yap.</li>
		<li>Kan gazı analizi her zaman noktası çalıştırdıktan sonra (0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 ve 240 min) pH seviyeleri incelemek ve pH 7.4 dönmek için gerektiği gibi perfusate tampon.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Perfüzyon 4 h sonucunda, karaciğer perfüzyon devre bağlantısını kesin. Karaciğer 0.5 g parçalara bölün. Ek kriyojenik tüpler karaciğer dokusunda sıvı azot dondur.</li>
</ol>5. sonrası deneme Analizi
<ol><li>
Alanin aminotransferaz (ALT) düzey, 0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 ve 240 min bir ticari Renkölçer tahlil kit kullanarak perfusate belirler.
	<ol>
<li>Kısacası, perfusate tepki mix reaktifler 60 dk. optik yoğunluk değerleri 570 ölçü için 37 ° C'de ile kuluçkaya Mikroplaka Okuyucu kullanarak nm.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Karaciğer dokusu 0.5 g 100 µL lizis arabelleği ile homojenize ve dokusu adenozin trifosfat (ATP), glutatyon (GSH) ve malondialdehit (MDA) için lysate analiz.
	<ol>
<li>Kısacası, bir ticari tahlil kit kullanarak karaciğer doku örnekleri ATP düzeylerini ölçmek. Örnek ile reaksiyon tampon mix ve 30 dk. ölçü 570, optik yoğunluk için oda sıcaklığında kuluçkaya Mikroplaka Okuyucu kullanarak nm.</li>
		<li>Bir ticari tahlil kit kullanarak karaciğer doku örnekleri GSH düzeyleri ölçmek. Doku örnekleri tahlil kokteyl ile karıştırın. 405-414 nm optik yoğunluk değerlerinde ölçmek.</li>
		<li>Bir ticari tahlil kit kullanarak karaciğer doku örnekleri MDA düzeyleri ölçmek. TBA ve ısı ile 95 ° C 60 dk. santrifüj kontrollerimiz örnekleri karıştırın ve süpernatant bir 96-şey tabağa aktarın. 532, optik yoğunluk ölçmek nm.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Karaciğer dokusu 0.5 g 100 µL lizis arabelleği ile homojenize ve doku bir ticari tahlil kit kullanarak göreli caspase-3/7 etkinlik için lysate analiz.
	<ol>
<li>Doku lysate ile caspase-3-7 reaktif tahlil tampon mix ve 30 dk için oda sıcaklığında kuluçkaya.</li>
		<li>Her şey Mikroplaka Okuyucu kullanarak floresans düzeyini ölçmek.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Apoptotik hücre bir ticari in situ ölüm algılama kit kullanarak karaciğer doku örneklerinde düzeyini belirler.
	<ol>
<li>0,5 g doku ile 10 U/mL İndinavir K 10 min için kesitler ve 60 dk. gerçekleştir floresan mikroskop kullanarak analiz için 37 ° C'de tepki karışımı ile kuluçkaya önceden tedavi.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>. National Data. Overall by Organ. Current U.S. Waiting List. Based on OPTN data as of October 19, 2017 Available from: <a target="_blank" href="https://optn.transplant.hrsa.gov/data/view-data-reports/national-data/">https://optn.transplant.hrsa.gov/data/view-data-reports/national-data/</a> (2017)</li><li>. National Data, Transplants by Donor Type, U.S. Transplants Performed January 1, 1988 - December 31, 2016, For Organ = Liver Available from: <a target="_blank" href="https://optn.transplant.hrsa.gov/data/view-data-reports/national-data/">https://optn.transplant.hrsa.gov/data/view-data-reports/national-data/</a> (2017)</li><li>Nemes, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extended+criteria+donors+in+liver+transplantation+Part+I:+reviewing+the+impact+of+determining+factors.">Extended criteria donors in liver transplantation Part I: reviewing the impact of determining factors.</a> Expert Rev Gastroenterol Hepatol. 10 (7), 827-839 (2016).</li><li>Nemes, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Extended-criteria+donors+in+liver+transplantation+Part+II:+reviewing+the+impact+of+extended-criteria+donors+on+the+complications+and+outcomes+of+liver+transplantation.">Extended-criteria donors in liver transplantation Part II: reviewing the impact of extended-criteria donors on the complications and outcomes of liver transplantation.</a> Expert Rev Gastroenterol Hepatol. 10 (7), 841-859 (2016).</li><li>Pezzati, D., Ghinolfi, D., De Simone, P., Balzano, E., Filipponi, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Strategies+to+optimize+the+use+of+marginal+donors+in+liver+transplantation.">Strategies to optimize the use of marginal donors in liver transplantation.</a> World J Hepatol. 7 (26), 2636-2647 (2015).</li><li>Marecki, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+ex+situ+machine+perfusion+preservation:+A+review+of+the+methodology+and+results+of+large+animal+studies+and+clinical+trials.">Liver ex situ machine perfusion preservation: A review of the methodology and results of large animal studies and clinical trials.</a> Liver Transpl. 23 (5), 679-695 (2017).</li><li>Barbas, A. S., Knechtle, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expanding+the+Donor+Pool+With+Normothermic+Ex+Vivo+Liver+Perfusion:+The+Future+Is+Now.">Expanding the Donor Pool With Normothermic Ex Vivo Liver Perfusion: The Future Is Now.</a> Am J Transplant. 16 (11), 3075-3076 (2016).</li><li>Dries, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+normothermic+machine+perfusion+and+viability+testing+of+discarded+human+donor+livers.">Ex vivo normothermic machine perfusion and viability testing of discarded human donor livers.</a> Am J Transplant. 13 (5), 1327-1335 (2013).</li><li>Westerkamp, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=End-ischemic+machine+perfusion+reduces+bile+duct+injury+in+donation+after+circulatory+death+rat+donor+livers+independent+of+the+machine+perfusion+temperature.">End-ischemic machine perfusion reduces bile duct injury in donation after circulatory death rat donor livers independent of the machine perfusion temperature.</a> Liver Transpl. 21 (10), 1300-1311 (2015).</li><li>Selzner, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normothermic+ex+vivo+liver+perfusion+using+steen+solution+as+perfusate+for+human+liver+transplantation:+First+North+American+results.">Normothermic ex vivo liver perfusion using steen solution as perfusate for human liver transplantation: First North American results.</a> Liver Transpl. 22 (11), 1501-1508 (2016).</li><li>Whitson, B. A., Black, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+assessment+and+repair+centers:+The+future+of+transplantation+is+near.">Organ assessment and repair centers: The future of transplantation is near.</a> World J Transplant. 4 (2), 40-42 (2014).</li><li>Tolboom, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subnormothermic+machine+perfusion+at+both+20&#176;C+and+30&#176;C+recovers+ischemic+rat+livers+for+successful+transplantation.">Subnormothermic machine perfusion at both 20&#176;C and 30&#176;C recovers ischemic rat livers for successful transplantation.</a> J Surg Res. 175 (1), 149-156 (2012).</li><li>Nagrath, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+preconditioning+of+donor+organs:+defatting+fatty+livers+by+normothermic+perfusion+ex+vivo.">Metabolic preconditioning of donor organs: defatting fatty livers by normothermic perfusion ex vivo.</a> Metab Eng. 11 (4-5), 274-283 (2009).</li><li>Boehnert, M. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Normothermic+acellular+ex+vivo+liver+perfusion+reduces+liver+and+bile+duct+injury+of+pig+livers+retrieved+after+cardiac+death.">Normothermic acellular ex vivo liver perfusion reduces liver and bile duct injury of pig livers retrieved after cardiac death.</a> Am J Transplant. 13 (6), 1441-1449 (2013).</li><li>Sch&#246;n, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+transplantation+after+organ+preservation+with+normothermic+extracorporeal+perfusion.">Liver transplantation after organ preservation with normothermic extracorporeal perfusion.</a> Ann Surg. 233 (1), 114-123 (2001).</li><li>Reddy, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Non-heart-beating+donor+porcine+livers:+the+adverse+effect+of+cooling.">Non-heart-beating donor porcine livers: the adverse effect of cooling.</a> Liver Transpl. 11 (1), 35-38 (2005).</li><li>Banan, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+strategy+to+decrease+reperfusion+injuries+and+improve+function+of+cold-preserved+livers+using+normothermic+ex+vivo+liver+perfusion+machine.">Novel strategy to decrease reperfusion injuries and improve function of cold-preserved livers using normothermic ex vivo liver perfusion machine.</a> Liver Transpl. 22 (3), 333-343 (2016).</li><li>Held, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> An Introduction to Reactive Oxygen Species: Measurement of ROS in Cells. , 1-14 (2012).</li><li>Chen, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reperfusion+liver+injury-induced+superoxide+dismutase+and+catalase+expressions+and+the+protective+effects+of+N-acetyl+cysteine.">Reperfusion liver injury-induced superoxide dismutase and catalase expressions and the protective effects of N-acetyl cysteine.</a> Transplant Proc. 39 (4), 858-860 (2007).</li><li>Chen, B., Tang, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protective+effects+of+catalase+on+retinal+ischemia/reperfusion+injury+in+rats.">Protective effects of catalase on retinal ischemia/reperfusion injury in rats.</a> Exp Eye Res. 93 (5), 599-606 (2011).</li><li>He, Y. Y., Hsu, C. Y., Ezrin, A. M., Miller, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polyethylene+glycol-conjugated+superoxide+dismutase+in+focal+cerebral+ischemia-reperfusion.">Polyethylene glycol-conjugated superoxide dismutase in focal cerebral ischemia-reperfusion.</a> Am J Physiol. 265 (1 Pt 2), H252-H256 (1993).</li><li>I&#351;lekel, S., I&#351;lekel, H., G&#252;ner, G., Ozdamar, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alterations+in+superoxide+dismutase,+glutathione+peroxidase+and+catalase+activities+in+experimental+cerebral+ischemia-reperfusion.">Alterations in superoxide dismutase, glutathione peroxidase and catalase activities in experimental cerebral ischemia-reperfusion.</a> Res Exp Med (Berl). 199 (3), 167-176 (1999).</li><li>Li, G., Chen, Y., Saari, J. T., Kang, Y. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Catalase-overexpressing+transgenic+mouse+heart+is+resistant+to+ischemia-reperfusion+injury.">Catalase-overexpressing transgenic mouse heart is resistant to ischemia-reperfusion injury.</a> Am J Physiol. 273 (3 Pt 2), H1090-H1095 (1997).</li><li>Nowak, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunotargeting+of+catalase+to+lung+endothelium+via+anti-angiotensin-converting+enzyme+antibodies+attenuates+ischemia-reperfusion+injury+of+the+lung+in+vivo.">Immunotargeting of catalase to lung endothelium via anti-angiotensin-converting enzyme antibodies attenuates ischemia-reperfusion injury of the lung in vivo.</a> Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 293 (1), L162-L169 (2007).</li><li>Beckman, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+dismutase+and+catalase+conjugated+to+polyethylene+glycol+increases+endothelial+enzyme+activity+and+oxidant+resistance.">Superoxide dismutase and catalase conjugated to polyethylene glycol increases endothelial enzyme activity and oxidant resistance.</a> J Biol Chem. 263 (14), 6884-6892 (1988).</li><li>Yabe, Y., Nishikawa, M., Tamada, A., Takakura, Y., Hashida, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+delivery+and+improved+therapeutic+potential+of+catalase+by+chemical+modification:+combination+with+superoxide+dismutase+derivatives.">Targeted delivery and improved therapeutic potential of catalase by chemical modification: combination with superoxide dismutase derivatives.</a> J Pharmacol Exp Ther. 289 (2), 1176-1184 (1999).</li><li>Yabe, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+neutrophil-mediated+hepatic+ischemia/reperfusion+injury+by+superoxide+dismutase+and+catalase+derivatives.">Prevention of neutrophil-mediated hepatic ischemia/reperfusion injury by superoxide dismutase and catalase derivatives.</a> J Pharmacol Exp Ther. 298 (3), 894-899 (2001).</li><li>Ushitora, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prevention+of+hepatic+ischemia-reperfusion+injury+by+pre-administration+of+catalase-expressing+adenovirus+vectors.">Prevention of hepatic ischemia-reperfusion injury by pre-administration of catalase-expressing adenovirus vectors.</a> J Control Release. 142 (3), 431-437 (2010).</li><li>Kakizaki, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Effects+of+Short-Term+Subnormothermic+Perfusion+after+Cold+Preservation+on+Liver+Grafts+from+Donors+after+Cardiac+Death:+An+Ex+Vivo+Rat+Model.">The Effects of Short-Term Subnormothermic Perfusion after Cold Preservation on Liver Grafts from Donors after Cardiac Death: An Ex Vivo Rat Model.</a> Transplantation. , (2018).</li><li>Kumar, R., Chung, W. Y., Dennison, A. R., Garcea, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+Vivo+Porcine+Organ+Perfusion+Models+as+a+Suitable+Platform+for+Translational+Transplant+Research.">Ex Vivo Porcine Organ Perfusion Models as a Suitable Platform for Translational Transplant Research.</a> Artif Organs. , (2017).</li><li>Nativ, N. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liver+defatting:+an+alternative+approach+to+enable+steatotic+liver+transplantation.">Liver defatting: an alternative approach to enable steatotic liver transplantation.</a> Am J Transplant. 12 (12), 3176-3183 (2012).</li><li>Yeung, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ex+vivo+adenoviral+vector+gene+delivery+results+in+decreased+vector-associated+inflammation+pre-+and+post-lung+transplantation+in+the+pig.">Ex vivo adenoviral vector gene delivery results in decreased vector-associated inflammation pre- and post-lung transplantation in the pig.</a> Mol Ther. 20 (6), 1204-1211 (2012).</li><li>Goldaracena, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inducing+Hepatitis+C+Virus+Resistance+After+Pig+Liver+Transplantation-A+Proof+of+Concept+of+Liver+Graft+Modification+Using+Warm+Ex+Vivo+Perfusion.">Inducing Hepatitis C Virus Resistance After Pig Liver Transplantation-A Proof of Concept of Liver Graft Modification Using Warm Ex Vivo Perfusion.</a> Am J Transplant. 17 (4), 970-978 (2017).</li><li>Van Raemdonck, D., Neyrinck, A., Rega, F., Devos, T., Pirenne, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Machine+perfusion+in+organ+transplantation:+a+tool+for+ex+vivo+graft+conditioning+with+mesenchymal+stem+cells?.">Machine perfusion in organ transplantation: a tool for ex vivo graft conditioning with mesenchymal stem cells?.</a> Curr Opin Organ Transplant. 18 (1), 24-33 (2013).</li><li>Pratschke, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Results+of+the+TOP+Study:+Prospectively+Randomized+Multicenter+Trial+of+an+Ex+Vivo+Tacrolimus+Rinse+Before+Transplantation+in+EDC+Livers.">Results of the TOP Study: Prospectively Randomized Multicenter Trial of an Ex Vivo Tacrolimus Rinse Before Transplantation in EDC Livers.</a> Transplant Direct. 2 (6), e76 (2016).</li><li>Pratschke, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protocol+TOP-Study+(tacrolimus+organ+perfusion):+a+prospective+randomized+multicenter+trial+to+reduce+ischemia+reperfusion+injury+in+transplantation+of+marginal+liver+grafts+with+an+ex+vivo+tacrolimus+perfusion.">Protocol TOP-Study (tacrolimus organ perfusion): a prospective randomized multicenter trial to reduce ischemia reperfusion injury in transplantation of marginal liver grafts with an ex vivo tacrolimus perfusion.</a> Transplant Res. 2 (1), 3 (2013).</li><li>Nativ, N. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elevated+sensitivity+of+macrosteatotic+hepatocytes+to+hypoxia/reoxygenation+stress+is+reversed+by+a+novel+defatting+protocol.">Elevated sensitivity of macrosteatotic hepatocytes to hypoxia/reoxygenation stress is reversed by a novel defatting protocol.</a> Liver Transpl. 20 (8), 1000-1011 (2014).</li><li>Lonze, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+ex+vivo+delivery+of+short+hairpin+RNAs+for+control+of+hepatitis+C+viral+transcript+expression.">In vitro and ex vivo delivery of short hairpin RNAs for control of hepatitis C viral transcript expression.</a> Arch Surg. 147 (4), 384-387 (2012).</li></ol>

Tüm yazarlar onlar hiçbir ilgili açıklamalar var rapor.

Ekimi için karaciğer allogrefler önemli bir sıkıntısı bulunmamaktadır ve yanıt olarak donör ölçüt genişletilmiş1,2,3,4,5olmuştur. Donör sıkıntısı sonucu olarak değerlendirmek ve organ fonksiyon6,7değiştirmek için bir yöntem olarak NEVLP tanıttı. NEVLP bir fare modelini tasar...

Karaciğer nakli için bekleme listesinde 14,578 hasta var ve yaklaşık 7000 nakli yıl1,2başına gerçekleştirilir. Bu önemli donör sıkıntısı yanıt olarak, karaciğer bağış ölçütlerini genişletmiştir; Bu marjinal organ veya genişletilmiş ölçüt bağış anılır ve nakli birincil greft disfonksiyon ve gecikmiş graft fonksiyonu3daha yüksek oranda ile standart ölçütleri allogrefler daha sonra daha az şey gerçekleştirmek için beklenen, 4,5,6. Sonuç olarak, NEVLP değerlendirmek ve organ fonksiyon6,7değiştirmek için bir yöntem olarak tanıttı. Biz NEVLP bir sıçan model tasarlanmış ve Roman molekül katkı maddeleri karaciğer perfusate için test önemli potansiyel uygulamaları – birini göstermek için bu modeli kullanılmıştır.
NEVLP fare (sıçan) ve domuz modelleri yanı sıra atılan insan organları6,8,9değerlendirilmiştir. NEVLP ilk insan çalışmaların sonuçlarını da son zamanlarda yayımlanan10olmuştur. Hipotermik makine perfüzyon açıkça böbrek korunması için standart haline gelmiştir, karaciğer hangi makinede perfüzyon gerçekleşmesi gereken sıcaklık hala tartışmalı olsa da. NEVLP ile karşılaştırıldığında hipotermik birçok önerilen avantajları vardır ve subnormothermic perfüzyon. Bunlar sınırlı koruma yaralanma, normal organ fonksiyon fizyolojik koşullar altında organ performansını değerlendirmek için yetenek ve organ onarım, yenileme ve değiştirme7,11için bir platform olarak restorasyonu içerir, 12,13,14,15,16,17.
Domuz NEVLP modelleri kullanarak çok sayıda çalışmalar tamamlanmıştır. Ne zaman insan organlarını veya insan klinik çalışmalar göz önüne alındığında modelleri kullanarak atılan bu modeller nispeten ucuzdur, bizim küçük hayvan NEVLP modeli karşılaştırıldığında çok pahalı olmakla birlikte. Önemli bir bileşeni olan deney perfusate maliyetidir. Biz perfusate nispeten düşük bir maliyetle, 300 mL ile bir 4 h perfüzyon tamamlamak edebiliyoruz. Ayrıca, fareler de dahil olmak üzere küçük hayvanların domuz maliyeti ile karşılaştırıldığında çok düşük maliyetidir.
İle karşılaştırıldığında diğer modellerinde NEVLP sıçan, burada sunulan modeli uygulamak oldukça basit ve geniş bir uygulama yelpazesi vardır. Perfüzyon devre Şekil 1' de görülebilir. Perfusate bir su ceketli kapsayıcı olan perfusate rezervuar (1), içinde başlar. Perfusate su deposu silindir pompa (2) tarafından çekti ve bir windkessel (3) ve oxygenator (4) içine itti. Oxygenator countercurrent gaz ve perfusate akışı için maksimum gaz değişimi sağlamak için ayarlanır. Perfusate sonra bir Isıtma gelirleri (5) iç emin olmak için perfüzyon odası olduğunu fizyolojik sıcaklığında kangal ve hava kabarcıkları orada perfüzyon önlemek için bir kabarcık tuzak (6) öncesi organ (7) ve sonrası organ (8) olmak perfusate izin örnek bağlantı noktaları tatmak. Perfusate sonra karaciğer portal ven kanülü yoluyla girer. Portal ven kanülü değerleri veri toplama yazılımı üzerinde çizelgeleri bir basınç monitör bağlı olduğu. Perfusate sonra karaciğer IVC kanül aracılığıyla çıkar ve basınç ekolayzer bloğu (9) içine akar. Son olarak, perfusate basınç bloğundan silindir pompa ile çekti ve göle boşalttım. Bu model için portal ven sürekli perfüzyon içerir ve hepatik arter ve her biri ayrı ve ek devre gerektirir, bazı diğer modellerinde kullanılan diyaliz pulsatil akışı bırakır ama olmamak daha önce gösterilmiştir gerekli9,13.
Roman bir terapötik molekül eklenmesi için perfusate keşfetmek için enzim katalaz seçtik. Katalaz ROS18etkilerini azaltmak için iç hücreleri savunma mekanizmasının bir parçası olduğu bir endojen ROS çöpçü var. Katalaz ifade hepatik iskemi reperfüzyon hasarı19' artar. Katalaz deneysel ilavesi iskemi-reperfüzyon göz, beyin ve akciğer20,21,22,23,24azaltmak için kanıtlanmıştır. Pegylation endotel hücreleri25katalaz endotel ve katalaz alımını yardım için hedef göstermiştir. PEG-kedi sistemik hepatik iskemi-reperfüzyon hasarı azaltmada sınırlı etkinliği ile idare edilmiştir; Ancak, PEG-kedi bir izole organ perfüzyon devre için geliştirilmiş yol açacak ekleme26,27,28sonuç olan. Burada, bizim temel perfusate PEG-kedi ekleyin ve onun yeteneğini göstermek karaciğer koruma yaralanma azaltmak.

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;Perfusate&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>8% Albumin</td><td>CLS Behring, King of Prussia, PA</td><td>0053-7680-32</td><td></td></tr><tr><td>Williams Media</td><td>Sigma Aldrich, St. Louis, MO</td><td>W1878</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/Streptomycin</td><td>Sigma Aldrich, St. Louis, MO</td><td>P4333</td><td></td></tr><tr><td>Insulin</td><td>Eli Lilly, Indianapolis, IL</td><td>0002-8215-91</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Fresnius Lab, Lake Zurich, IL</td><td>C504701</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamine</td><td>Sigma Aldrich, St. Louis, MO</td><td>G3126</td><td></td></tr><tr><td>Hydrocortisone</td><td>Sigma Aldrich, St. Louis, MO</td><td>H0888</td><td></td></tr><tr><td>THAM</td><td>Hospira, Inc,</td><td>0409-1593-04</td><td></td></tr><tr><td>Polyethylene Glycol - Catalase</td><td>Sigma Aldrich</td><td>S9549 SIGMA</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Personal Protective Equipment &lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Surgical Mask</td><td>Generic</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Protective Gown</td><td>Generic</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Gloves</td><td>Generic</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Liver Procurement&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sprague-Dawley Rat</td><td>Harlan Sprague Dawley Inc.</td><td>250 -350 grams</td><td></td></tr><tr><td>Surgical Microscope</td><td>Leica</td><td>M500-N w/ OHS</td><td></td></tr><tr><td>Charcoal Canisters</td><td>Kent Scientific</td><td>SOMNO-2001-8</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Piramal Healthcare</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Pressure-Lok Precision Analytical Syringe&amp;nbsp;</td><td>Valco Instruments Co, Inc.</td><td>SOMNO-10ML</td><td></td></tr><tr><td>Electrosurgical Unit</td><td>Macan</td><td>MV-7A</td><td></td></tr><tr><td>Warming Pad</td><td>Braintree Scientific</td><td>HHP2</td><td></td></tr><tr><td>SomnoSuite Small Animal Anesthesia System</td><td>Kent Scientific</td><td>SS-MVG-Module</td><td></td></tr><tr><td>PhysioSuite</td><td>Kent Scientific</td><td>PS-MSTAT-RT</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane chamber</td><td>Kent Scientific</td><td>SOMNO-0530LG</td><td></td></tr><tr><td>SurgiVet</td><td>Isotec</td><td>CDS 9000 Tabletop</td><td></td></tr><tr><td>Oxygen</td><td>Praxair</td><td>98015</td><td></td></tr><tr><td>Rib retractors</td><td>Kent Scientific</td><td>INS600240</td><td></td></tr><tr><td>GenieTouch</td><td>Kent Scientific</td><td>GenieTouch</td><td></td></tr><tr><td>Normal Saline</td><td>Baxter</td><td>NDC 0338-0048-04</td><td></td></tr><tr><td>4x4 Non-Woven Sponges</td><td>Criterion</td><td>104-2411</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Q-Tips</td><td>Henry Schein Animal Health</td><td>1009175</td><td></td></tr><tr><td>U-100 27 Gauge Insulin Syringe</td><td>Terumo</td><td>22-272328</td><td></td></tr><tr><td>5mL Syringe</td><td>BD</td><td>REF 309603</td><td></td></tr><tr><td>4-0 Braided Silk Suture</td><td>Deknatel, Inc.</td><td>198737LP</td><td></td></tr><tr><td>7-0 Braided Silk Suture</td><td>Teleflex Medical</td><td>REF 103-S</td><td></td></tr><tr><td>16 gauge Catheters</td><td>BBraun Introcan Safety</td><td>4252586-02</td><td></td></tr><tr><td>14 gauge Catheters</td><td>BBraun Introcan Safety</td><td>4251717-02</td><td></td></tr><tr><td>Bile Duct Cannular Tubing</td><td>Altec</td><td>01-96-1727&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp;&amp;nbsp; &amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Liver Perfusion Circuit Components &lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Water Bath Warmer</td><td>Lauda Ecoline Staredition</td><td>E103</td><td></td></tr><tr><td>Data Collection Software</td><td>ADInstruments&amp;nbsp;</td><td>Labchart 7</td><td></td></tr><tr><td>Liver Perfusion Circuit</td><td>Harvard Apparatus</td><td>73-2901</td><td></td></tr><tr><td>Membrane Oxygenator</td><td>Mediac SPA</td><td>M03069</td><td></td></tr><tr><td>Roller Pump</td><td>Ismatec</td><td>ISM827B</td><td></td></tr><tr><td>Gas (95% oxygen and 5% carbon dioxide)</td><td>Praxair</td><td>98015</td><td></td></tr><tr><td>Organ Chamber</td><td>Harvard Apparatus</td><td>ILP-2</td><td></td></tr><tr><td>1.8 mL Arcticle Cryogenic Tube</td><td>USA Scientific</td><td>1418-7410</td><td></td></tr><tr><td>Mucasol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Z637181</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Microsurgical Instruments&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Small Scissors</td><td>Roboz</td><td>RS-5610</td><td></td></tr><tr><td>Large Scissors</td><td>S&amp;amp;T</td><td>SAA-15</td><td></td></tr><tr><td>Forceps - Large Angled</td><td>S&amp;amp;T</td><td>JFCL-7</td><td></td></tr><tr><td>Forceps - Small Angled</td><td>S&amp;amp;T</td><td>FRAS-15 RM-8</td><td></td></tr><tr><td>Clip Applier</td><td>ROBOZ</td><td>RS-5440</td><td></td></tr><tr><td>Scissors - non micro</td><td>FST 14958-11</td><td>14958-11</td><td></td></tr><tr><td>Forceps - Straight Tip</td><td>S&amp;amp;T</td><td>FRS-15 RM8TC</td><td></td></tr><tr><td>Large Microsurgical Clip</td><td>Fine Scientific Tools</td><td>18055-01</td><td></td></tr><tr><td>Small Microsurgical Clip</td><td>Fine Scientific Tools</td><td>18055-01</td><td></td></tr><tr><td>Small Microsurgical Clip</td><td>Fine Scientific Tools</td><td>18055-02</td><td></td></tr><tr><td>Small Microsurgical Clip</td><td>Fine Scientific Tools</td><td>18055-03</td><td></td></tr><tr><td>Small Mosquito Clamps</td><td>Generic</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Post-Experiment Analysis &lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alanine Aminotransferase (ALT) Activity Colorimetric/Fluorometric Assay Kit</td><td>BioVision</td><td>K752</td><td></td></tr><tr><td>Adenosine Triphosphate (ATP) Colorimetric/Fluorometric Assay Kit</td><td>BioVision</td><td>K354</td><td></td></tr><tr><td>Glutathione Assay Kit</td><td>Cayman Chemical</td><td>703002</td><td></td></tr><tr><td>Lipid Peroxidation (MDA) Assay Kit</td><td>Abcam</td><td>ab118970</td><td></td></tr><tr><td>Caspase-Glo 3/7 Assay Systems</td><td>Promega</td><td>G8090</td><td></td></tr><tr><td>POLARstar OMEGA Microplate Reader</td><td>BMG LABTECH</td><td>N/A</td><td></td></tr></tbody></table>

a small animal model of ex vivo normothermic liver perfusion

Ekimi için karaciğer allogrefler önemli bir sıkıntısı bulunmamaktadır ve yanıt olarak donör ölçüt genişletilmiştir. Sonuç olarak, normothermic ex vivo karaciğer perfüzyon (NEVLP) değerlendirmek ve organ işlevini değiştirmek için bir yöntem olarak tanıttı. NEVLP ile karşılaştırıldığında hipotermik pek çok avantajı vardır ve perfüzyon subnormothermic dahil olmak üzere düşük koruma yaralanma, normal organ fonksiyon değerlendirmesi organ performans ve organ onarım için bir platform olarak fizyolojik koşullarda restorasyonu , yenileme ve değiştirme. Fare ve domuz NEVLP modelleri anlatmıştık. Biz NEVLP bir fare modeli göstermek ve onun önemli uygulamalardan birini göstermek için bu modeli kullanan — terapötik bir molekül için karaciğer perfusate eklendi kullanımı. Katalaz endojen reaktif oksijen türleri (ROS) Scavenger ve iskemi-reperfüzyon göz, beyin ve akciğer azaltmak için kanıtlanmıştır. Pegylation katalaz endotel için hedef göstermiştir. Burada, temel perfusate pegile-katalaz (PEG-CAT) eklendi ve karaciğer koruma yaralanma azaltmak için onun yetenek gösterdi. Bir avantaj bizim kemirgen NEVLP modeli ile karşılaştırıldığında daha büyük hayvan modelleri ucuz olmasıdır. Bir Bu çalışmada bu şu anda sonrası perfüzyon karaciğer nakli içermez kısıtlamasıdır. Bu nedenle, tahmin fonksiyonu sonrası organ nakli kesin olarak yapılamaz. Ancak, sıçan karaciğer nakli modeli de kurulur ve kesinlikle bu modeli ile birlikte kullanılabilir. Sonuç olarak, sıçan kullanarak bir ucuz, basit, kolay kopyalanabilir NEVLP modeli göstermiştir. Bu model uygulamaları test roman perfusates ve perfusate katkı maddeleri, test organ değerlendirme için tasarlanmış yazılım ve organları onarmak için tasarlanmış deneyler içerebilir.

Bir örnek boyutu grubu başına üç sıçan kullanıldı. ALT 0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 ve perfüzyon 240 min ölçüldü. Kullandığımız öğrencinin t-testleri temel perfusate ve temel perfusate artı, her zaman bir noktada PEG-kedi gruplar arasında karşılaştırılması. Temel perfusate ve temel perfusate artı PEG-kedi grupları karşılaştıran, işte önemli ölçüde daha az (p < 0,05) ALT taban perfusate artı PEG-kedi grubu 150, 180, 210 ve 240 ...

Watch this Scientific Journal Video about A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion at JoVE.com

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

Ex Vivo Normothermic karaciğer perfüzyon küçük bir hayvan Model

Önemli karaciğer donör kan olmadığını ve karaciğer bağış için ölçüt genişletilmiştir. Normothermic ex vivo karaciğer perfüzyon (NEVLP) değerlendirmek ve organ işlevini değiştirmek için geliştirilmiştir. Bu çalışma NEVLP bir fare modeli gösterir ve karaciğer koruma yaralanma azaltmak için pegile-katalaz, yeteneğini sınar.

There is a significant shortage of liver allografts available for transplantation, and in response the donor criteria have been expanded. As a result, ...

a-small-animal-model-of-ex-vivo-normothermic-liver-perfusion

Research

JoVE Journal

Medicine

A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

13.3K Görüntüleme.  Ohio State University Wexner Medical Center. Önemli karaciğer donör kan olmadığını ve karaciğer bağış için ölçüt genişletilmiştir. Normothermic ex vivo karaciğer perfüzyon (NEVLP) değerlendirmek ve organ işlevini değiştirmek için geliştirilmiştir. Bu çalışma NEVLP bir fare modeli gösterir ve karaciğer koruma yaralanma azaltmak için pegile-katalaz, yeteneğini sınar.

Video: A Small Animal Model of Ex Vivo Normothermic Liver Perfusion

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

The use of ex vivo perfused models can mimic the physiological conditions of the liver for short periods, but to maintain normal homeostasis for an extended perfusion period is challenging. We have added the kidney to our previous ex vivo perfused liver experiment model to reproduce a more accurate physiological state for prolonged experiments without using live animals. Five intact livers and kidneys were retrieved post-mortem from sacrificed pigs on different days and perfused for a minimum of 6 hr. Hourly arterial blood gases were obtained to analyze pH, lactate, glucose and renal parameters. The primary endpoint was to investigate the effect of adding one kidney to the model on the acid base balance, glucose, and electrolyte levels. The result of this liver-kidney experiment was compared to the results of five previous liver only perfusion models. In summary, with the addition of one kidney to the ex vivo liver circuit, hyperglycemia and metabolic acidosis were improved. In addition this model reproduces the physiological and metabolic responses of the liver sufficiently accurately to obviate the need for the use of live animals. The ex vivo liver-kidney perfusion model can be used as an alternative method in organ specific studies. It provides a disconnection from numerous systemic influences and allows specific and accurate adjustments of arterial and venous pressures and flow.

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

Study of the animal organ physiology can be achieved by performing an experimental ex vivo perfusion system. The addition of a porcine kidney, as a homeostatic organ to our previously developed ex vivo liver perfusion model can be a principal step to achieve a better physiological environment.

The use of ex vivo perfused models can mimic the physiological conditions of the liver for short periods, but to maintain normal homeostasis for an ...

Tıp

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for liver transplantation die without receiving an organ transplant or are delisted for disease progression. One strategy to increase the donor pool is the utilization of marginal grafts, such as fatty livers, grafts from older donors, or donation after cardiac death (DCD). The current preservation technique of cold static storage is only poorly tolerated by marginal livers resulting in significant organ damage. In addition, cold static organ storage does not allow graft assessment or repair prior to transplantation.
These shortcomings of cold static preservation have triggered an interest in warm perfused organ preservation to reduce cold ischemic injury, assess liver grafts during preservation, and explore the opportunity to repair marginal livers prior to transplantation. The optimal pressure and flow conditions, perfusion temperature, composition of the perfusion solution and the need for an oxygen carrier has been controversial in the past.
In spite of promising results in several animal studies, the complexity and the costs have prevented a broader clinical application so far. Recently, with enhanced technology and a better understanding of liver physiology during ex vivo perfusion the outcome of warm liver perfusion has improved and consistently good results can be achieved.
This paper will provide information about liver retrieval, storage techniques, and isolated liver perfusion in pigs. We will illustrate a) the requirements to ensure sufficient oxygen supply to the organ, b) technical considerations about the perfusion machine and the perfusion solution, and c) biochemical aspects of isolated organs.

Technique of Subnormothermic Ex Vivo Liver Perfusion for the Storage, Assessment, and Repair of Marginal Liver Grafts

Marginal grafts, such as fatty livers, grafts from older donors, or livers retrieved after cardiac death (DCD) tolerate conventional, cold static storage only poorly. We developed a novel model of subnormothermic ex vivo liver perfusion for preservation, assessment, and repair of marginal liver grafts prior to transplantation.

Subnormothermic Tekniği<em&gt; Ex vivo</em&gt; Karaciğer Depolama, Değerlendirme Perfüzyon ve Marjinal Karaciğer Greft Onarımı

The success of liver transplantation has resulted in a dramatic organ shortage. In most transplant regions 20-30% of patients on the waiting list for ...

Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse

Metabolic diseases such as diabetes, pre-diabetes, non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), and nonalcoholic steatohepatitis (NASH) are becoming increasingly common. Ex vivo liver perfusions allow for a comprehensive analysis of liver metabolism using nuclear magnetic resonance (NMR), in nutritional conditions that can be rigorously controlled. As in silico simulations remain a primarily theoretical means of assessing hormone actions and the effects of pharmaceutical intervention, the perfused liver remains one of the most valuable test beds for understanding hepatic metabolism. As these studies guide basic insights into hepatic physiology, results must be accurate and reproducible. The greatest factor in the reproducibility of ex vivo hepatic perfusion is the quality of surgery. Therefore, we have introduced an organized and streamlined method to perform ex vivo mouse liver perfusions in the context of in situ NMR experiments. We also describe a unique application and discuss common issues encountered in these studies. The overall purpose is to provide an uncomplicated guide to a technique we have refined over several years that we deem the golden standard for obtaining reproducible results in hepatic resections and perfusions in the context of in situ NMR experiments. The distance to the center of the field for the magnet as well as the inaccessibility of the tissue to intervention during the NMR experiment makes our methods novel.

Ex Vivo Hepatic Perfusion Through the Portal Vein in Mouse

The protocol describes a straightforward method of resectioning an intact mouse liver for metabolic studies through portal vein perfusion.

Eski Vivo Farede Portal Damarından Hepatik Perfüzyon

Metabolic diseases such as diabetes, pre-diabetes, non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD), and nonalcoholic steatohepatitis (NASH) are becoming ...

Biyokimya

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. As this technology expands and improves, the ability to potentially evaluate and improve the quality of substandard lungs prior to transplant is a critical need. In order to more rigorously evaluate these approaches, a reproducible animal model needs to be established that would allow for testing of improved techniques and management of the donated lungs as well as to the lung-transplant recipient. In addition, an EVLP animal model of associated pathologies, e.g., ventilation induced lung injury (VILI), would provide a novel method to evaluate treatments for these pathologies. Here, we describe the development of a rat EVLP lung program and refinements to this method that allow for a reproducible model for future expansion. We also describe the application of this EVLP system to model VILI in rat lungs. The goal is to provide the research community with key information and &#8220;pearls of wisdom&#8221;/techniques that arose from trial and error and are critical to establishing an EVLP system that is robust and reproducible.

Method of Isolated Ex Vivo Lung Perfusion in a Rat Model: Lessons Learned from Developing a Rat EVLP Program

Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed lung transplantation in humans to become more readily available by enabling the ability to assess organs and expand the donor pool. Here, we describe the development of a rat EVLP program and refinements that allow for a reproducible model for future expansion.

İzole Yöntemi<em&gt; Ex vivo</emBir Rat Modelinde&gt; Akciğer Perfüzyon: Sıçan EVLP Programı Geliştirme Öğrenilmiş Dersler

The number of acceptable donor lungs available for lung transplantation is severely limited due to poor quality. Ex-Vivo Lung Perfusion (EVLP) has allowed ...

Normothermic Ex Vivo Liver Machine Perfusion in Mouse

This protocol presents an optimized erythrocytes-free NEVLP system using mouse livers. Ex vivo preservation of mouse livers was achieved by employing modified cannulas and techniques adapted from conventional commercial ex vivo perfusion equipment. The system was utilized to evaluate the preservation outcomes following 12 h of perfusion. C57BL/6J mice served as liver donors, and the livers were explanted by cannulating the portal vein (PV) and bile duct (BD), and subsequently flushing the organ with warm (37 &#176;C) heparinized saline. Then, the explanted livers were transferred to the perfusion chamber and subjected to normothermic oxygenated machine perfusion (NEVLP). Inlet and outlet perfusate samples were collected at 3 h intervals for perfusate analysis. Upon completion of the perfusion, liver samples were obtained for histological analysis, with morphological integrity assessed using modified Suzuki-Score through Hematoxylin-Eosin (HE) staining. The optimization experiments yielded the following findings: (1) mice weighing over 30 g were deemed more suitable for the experiment due to the larger size of their bile duct (BD). (2) a 2 Fr (outer diameter = 0.66 mm) polyurethane cannula was better suited for cannulating the portal vein (PV) when compared to a polypropylene cannula. This was attributed to the polyurethane material&#39;s enhanced grip, resulting in reduced catheter slippage during the transfer from the body to the organ chamber. (3) for cannulation of the bile duct (BD), a 1 Fr (outer diameter = 0.33 mm) polyurethane cannula was found to be more effective compared to the polypropylene UT - 03 (outer diameter = 0.30 mm) cannula. With this optimized protocol, mouse livers were successfully preserved for a duration of 12 h without significant impact on the histological structure. Hematoxylin-Eosin (HE) staining revealed a well-preserved morphological architecture of the liver, characterized by predominantly viable hepatocytes with clearly visible nuclei and mild dilation of hepatic sinusoids.

Normothermic Ex Vivo Liver Machine Perfusion in Mouse

A normothermic ex vivo liver perfusion (NEVLP) system was created for mouse livers. This system requires experience in microsurgery but allows for reproducible perfusion results. The ability to utilize mouse livers facilitates the investigation of molecular pathways to identify novel perfusate additives and enables the execution of experiments focused on organ repair.

Normothermic Ex Vivo Karaciğer Makinesi Farede Perfüzyon

This protocol presents an optimized erythrocytes-free NEVLP system using mouse livers. Ex vivo preservation of mouse livers was achieved by employing ...

Mühendislik

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous perfusion of organs provides the opportunity to improve organ quality and allows ex situ viability assessment of donor livers prior to transplantation. This video article provides a step by step protocol for ex situ normothermic machine perfusion (37 &#176;C) of human donor livers using a device that provides a pressure and temperature controlled pulsatile perfusion of the hepatic artery and continuous perfusion of the portal vein. The perfusion fluid is oxygenated by two hollow fiber membrane oxygenators and the temperature can be regulated between 10 &#176;C and 37 &#176;C. During perfusion, the metabolic activity of the liver as well as the degree of injury can be assessed by biochemical analysis of samples taken from the perfusion fluid. Machine perfusion is a very promising tool to increase the number of livers that are suitable for transplantation.

Ex Situ Normothermic Machine Perfusion of Donor Livers

Here we present a protocol describing oxygenated ex situ machine perfusion of donor liver grafts. This article contains a step by step protocol to procure and prepare the liver graft for machine perfusion, prepare the perfusion fluid, prime the perfusion machine and perform oxygenated normothermic machine perfusion of the liver graft.

Donör karaciğerleri Ex Situ Normotermik Makinesi Perfüzyonu

In contrast to conventional static cold preservation (0-4 &#176;C), ex situ machine perfusion may provide better preservation of donor livers. Continuous ...

Large-Animal Model of Donation after Circulatory Death and Normothermic Regional Perfusion for Cardiac Assessment

The increase in demand for cardiac transplantation throughout the years has fueled interest in donation after circulatory death (DCD) to expand the organ donor pool. However, the DCD process is associated with the risk of cardiac tissue injury due to the inevitable period of warm ischemia. Normothermic regional perfusion (NRP) allows for an in situ organ assessment, allowing the procurement of hearts determined to be viable. Here, we describe a clinically relevant large-animal model of DCD followed by NRP. Circulatory death is established in anesthetized pigs by stopping mechanical ventilation. After a preset warm ischemia period, an extracorporeal membrane oxygenator (ECMO) is used for a NRP period lasting at least 30 min. During this reperfusion period, the model allows the collection of various myocardial biopsies and blood samples for initial cardiac evaluation. Once NRP is weaned, biochemical, hemodynamic, and echocardiographic assessments of cardiac function and metabolism can be performed before organ procurement. This protocol closely simulates the clinical scenario previously described for DCD and NRP in heart transplantation and has the potential to facilitate studies aimed at decreasing ischemia-reperfusion injury and enhance cardiac functional preservation and recovery.

The protocol describes a large-animal (porcine) model of donation after circulatory death, followed by thoracoabdominal normothermic regional perfusion that closely simulates the clinical scenario in heart transplantation, and has the potential to facilitate therapeutic studies and strategies.

Dolaşım Ölümü Sonrası Büyük Hayvan Bağış Modeli ve Kardiyak Değerlendirme için Norannemik Bölgesel Perfüzyon

The increase in demand for cardiac transplantation throughout the years has fueled interest in donation after circulatory death (DCD) to expand the organ ...

Rat Model of Normothermic Ex-Situ Perfused Heterotopic Heart Transplantation

Heart transplantation is the most effective therapy for end-stage heart failure. Despite the improvements in therapeutic approaches and interventions, the number of heart failure patients waiting for transplantation is still increasing. The normothermic ex situ preservation technique has been established as a comparable method to the conventional static cold storage technique. The main advantage of this technique is that donor hearts can be preserved for up to 12 h in a physiologic condition. Moreover, this technique allows resuscitation of the donor hearts after circulatory death and applies required pharmacologic interventions to improve donor function after implantation. Numerous animal models have been established to improve normothermic ex situ preservation techniques and eliminate preservation-related complications. Although large animal models are easy to handle compared to small animal models, it is costly and challenging. We present a rat model of normothermic ex situ donor heart preservation followed by heterotopic abdominal transplantation. This model is relatively cheap and can be accomplished by a single experimenter.

Here, we present an assessment protocol of a heterotopically implanted heart after normothermic ex situ preservation in the rat model.

Normotermik Ex-Situ Perfüze Heterotopik Kalp Transplantasyonunun Sıçan Modeli

Heart transplantation is the most effective therapy for end-stage heart failure. Despite the improvements in therapeutic approaches and interventions, the ...

<meta charset="utf8"></head><body>Domuz Ex Situ İzole Karaciğer Perfüzyon Modelinin Geliştirilmesi ve Validasyonu

Porcine Normothermic Isolated Liver Perfusion

Porcine models of liver ex situ normothermic machine perfusion (NMP) are increasingly being used in transplant research. Contrary to rodents, porcine livers are anatomically and physiologically close to humans, with similar organ size and bile composition. NMP preserves the liver graft at near-to-physiological conditions by recirculating a warm, oxygenated, and nutrient-enriched red blood cell-based perfusate through the liver vasculature. NMP can be used to study ischemia-reperfusion injury, preserve a liver ex situ before transplantation, assess the liver's function prior to implantation, and provide a platform for organ repair and regeneration. Alternatively, NMP with a whole blood-based perfusate can be used to mimic transplantation. Nevertheless, this model is labor-intensive, technically challenging, and carries a high financial cost.
In this porcine NMP model, we use warm ischemic damaged livers (corresponding to donation after circulatory death). First, general anesthesia with mechanical ventilation is initiated, followed by the induction of warm ischemia by clamping the thoracic aorta for 60 min. Cannulas inserted in the abdominal aorta and portal vein allow flush-out of the liver with cold preservation solution. The flushed-out blood is washed with a cell saver to obtain concentrated red blood cells. Following hepatectomy, cannulas are inserted in the portal vein, hepatic artery, and infra-hepatic vena cava and connected to a closed perfusion circuit primed with a plasma expander and red blood cells. A hollow fiber oxygenator is included in the circuit and coupled to a heat exchanger to maintain a pO2 of 70-100 mmHg at 38 &#176;C. NMP is achieved by a continuous flow directly through the artery and via a venous reservoir through the portal vein. Flows, pressures, and blood gas values are continuously monitored. To evaluate the liver injury, perfusate and tissue are sampled at predefined time points; bile is collected via a cannula in the common bile duct.

<meta charset="utf8"></head><body>Domuz Normomik İzole Karaciğer Perfüzyonu

The porcine model of liver normothermic machine perfusion (NMP), described here, can be successfully used to study NMP as a preservation strategy, a tool for viability assessment, and a platform for organ repair. It holds a high translational value, however it is technically challenging and labor-intensive.

Domuz Normomik İzole Karaciğer Perfüzyonu

Porcine models of liver ex situ normothermic machine perfusion (NMP) are increasingly being used in transplant research. Contrary to rodents, porcine ...

Ex Vivo Normothermic karaciğer perfüzyon küçük bir hayvan Model

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Steps for the Autologous Ex vivo Perfused Porcine Liver-kidney Experiment

Subnormothermic Tekniği

Eski Vivo Farede Portal Damarından Hepatik Perfüzyon

İzole Yöntemi

Normothermic Ex Vivo Karaciğer Makinesi Farede Perfüzyon

Donör karaciğerleri Ex Situ Normotermik Makinesi Perfüzyonu

Dolaşım Ölümü Sonrası Büyük Hayvan Bağış Modeli ve Kardiyak Değerlendirme için Norannemik Bölgesel Perfüzyon

Normotermik Ex-Situ Perfüze Heterotopik Kalp Transplantasyonunun Sıçan Modeli

Domuz Normomik İzole Karaciğer Perfüzyonu

Domuz Normomik İzole Karaciğer Perfüzyonu