Murin Beyin Dokusu Kesitlerinin Ex Vivo Floresan Mikroskobu

Başlamak için, optimum kesme sıcaklığı bileşiğinde saklanan flaş donmuş beyni 80 santigrat derece depodan çıkarın ve kriyostat odasının içine yerleştirin. Numunelerin hazne sıcaklığına ısınmasına izin verin. Tek kenarlı bir tıraş bıçağı kullanarak, beyni enjeksiyon bölgesinde koronal olarak kesin.

Az miktarda optimum kesme sıcaklığı kullanarak numuneyi numune diskine monte edin. Numunenin dengeli bir şekilde monte edilmesi için haznenin içinde soğutulmuş bir ağırlıkla yeterli basınç uygulayın. Takılan numuneyi ve numune diskini numune kafasına taşıyın.

20 mikrometrelik bölümler alarak dokuyu istenen derinliğe kadar kesin. İstenen derinliğe ulaşıldığında, kriyostatı numunenin beş ila yedi mikrometrelik bölümlerini alacak şekilde ayarlayın. Ardından bölümleri önceden etiketlenmiş cam sürgünün üzerine monte edin.

Bölümleri %4 paraformaldehit içinde 15 dakika sabitleyin. Sabitlemeden sonra, bu slaytı DPBS ile üç kez durulayın. Slaytın üzerine DAPI içeren 40 mikrolitrelik bir montaj ortamı damlası ekleyin.

Ortamın üzerine dikkatlice bir cam kapak askısı yerleştirin. Floresan mikroskobu altında, DAPI ve Cy5.5 kullanarak dokuyu görselleştirin. Tümör dokularının ex vivo floresan mikroskobu, gözlenen CY 5.5 floresan sinyali, manyetik nanopartiküllerin iletimini doğruladı.