Yazarlar sıcak Dr KK Fenrich Dr MC teşekkür ederim. Amoureux, P. Weber ve yararlı tartışmalar için A. Jaouen; M. Hocine, C. Meunier, M. Metwaly, S. Bensemmane, J. Bonnardel, IBDML de hayvan imkan ve teknik destek için IBDML de PicSIL görüntüleme platformu personel personel. Bu çalışma GR, Agence Nationale de la Recherche (ANR JCJC PathoVisu3Dyn), federasyona Institut National du Kanser (INCA-DGOS-INSERM6038) hibe tarafından desteklenen federasyon burs tarafından, FD la Recherche sur le Cerveau (FRC) dökmek CR de la Recherche Médicale ve Cancéropole PACA.

Tüm deneysel prosedürleri laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı için Fransız mevzuatına uygun olarak ve 24 Kasım Avrupa Topluluğu Konseyi Direktifi, 1986 (86/609/EEC) uygun olarak yapılmıştır. Hayvanlar üzerinde araştırma Yön Départementale des Hizmetler Vétérinaires des Bouches-du-Rhône (lisans D-13-055-21) tarafından yetkilendirilmiş ve Provence Cote d&#39;Azur n ° 14 (Proje 87-04.122.012) etik komitesi tarafından onaylandı . 1.. Sferoitlerin Hazırlık <ol><li> Agaroz kaplı Petri yemeklerin hazırlanması <ol><li> Fetal sığır serumu ile takviye edilmiş olmayan hücre kültür ortamı, 100 ml agaroz 1 g karıştırın. Bir mikrodalga fırın için (40 saniye boyunca 850 Watt, daha sonra 3 x 15 saniye, her mikrodalga oturum arasında solüsyonu ilave edin) çözeltisi kaynamaya ve agaroz tamamen çözünmesi için. Steri sağlamak için 120 ° C de 20 dakika boyunca, bu,% 1 agaroz çözeltisi otoklav. vasıflı Not: Tamamen otoklav protokolden önce agaroz çözmek için özen. İnhomojenlik küremsiler oluşumunu olumsuz yönde etkileyebilir. </li><li> Bir kez otoklavdan alınır, 100 x 20 mm Petri tabaklarda% 1 agaroz çözeltisi 10 ml dökün. % 1 agaroz çözelti katılaşmasını sağlamak için oda sıcaklığında Petri-tabaklar 20 dakika bırakın. </li><li> Nem elde etmek için agaroz üzerinde PBS 10 ml ilave edilir. Buharlaşmayı önlemek için parafilm ile sarılarak agaroz kaplı Petri kutularına kapağını sıkıca kapatın. Düzgün PBS tabakası ile nemlendirilir ise Petri kapları, 4 ° C &#39;de en fazla 2 ay boyunca saklanabilir. </li></ol></li><li> Sferoid kültür <ol><li> Bir tek tabaka olarak tavsiye edilen ortam içinde, 75 cm 2 şişe, kültüründe glioma hücreleri. </li><li> Glioma hücre 2B tek tabaka ihtiva eden bir şişeye toplanan &quot;ön şartlandırılmış ortam&quot; 1,5 ml,% 1 agaroz kaplı Petri kabı birinden yerine PBSs. </li><li> Glioma hücrelerinin 2B tek tabaka içeren şişeden gelen orta çıkarın. </li><li> Yavaşça, 10 ml PBS ile tek tabaka yıkayın. </li><li> Bir tripsin / EDTA solüsyonu% 0.05 &#39;lik 2 ml ilave edilir ve 37 ° C Not şişe 4 dakika inkübe: Kuluçka süresi, kullanılan hücre hattına göre değişebilir. </li><li> Yavaşça hücre süspansiyonu, floş Tiripsinin eylemi durdurmak için kültür ortamı 8 ml Not:. Hücre ölümünü artırır gibi hücre süspansiyonu hava temizlemesini dikkat edin. </li><li> Steril bir şişe içinde hücre süspansiyonu 6 ml koyun. </li><li> 800 rpm&#39;de 4 dakika santrifüj şişe. </li><li> Süpernatantı ve yavaşça kültür ortamının 3 ml hücre tortu askıya. </li><li> Hazırlanan kaplanmış agaroz Petri kabındaki hücre süspansiyonu tohum. </li><li> Arzu edilen çapta sferoidler oluşana kadar 2-3 gün boyunca bir% 5 CO2 atmosferinde 37 ° C&#39;de Petri kabı koyun. </li></ol></li></ol&gt; 2.. Sferoid ve Pencere İmplantasyonu <ol><li> Enjeksiyon sisteminin hazırlanması <ol><li> 10 dakika boyunca% 70 etanol içinde sonikasyon ile temiz bir cam kılcal kısımların (çapı 1 mm). Kadar kuru kuvözde su önce yerleştirilmesi ile iki kez durulayın. </li><li> Küçük bir stok hazırlamak için bir pipet çektirmesi ile birkaç temizlenmiş cam kılcal damarları çekin. </li><li> Tipik olarak 300-350 mikron bir dış çapı ve 250-300 um&#39;lik bir iç çapı: istenen boyutta bir eğimli ekstremite elde etmek için doku bir kağıt parçası üzerine ekstremite kazımayla çekilmiş kılcal ucu kırın. Bu şekil verme işlemi sırasında, oküler dereceli bir mira ile donatılmış bir Makroskop&#39;ta kullanarak kılcal çapını kontrol eder. </li><li> Iç çap kapiller dış çapını uygun plastik boru bir parça kullanarak 3 yollu bir manifolda kılcal olmayan şivli ekstremite bağlayın. </li><li> Plastik Tubin kullanmag, bir Manifolddaki iki başka yollar bağlamak 25 ul mikrolitre şırınga ve histo-uyumlu mineral yağ ile dolu bir 1 ml şırınga. </li><li> Mikrolitre şırınga ile 1 ml şırınga ile bir yol oluşturmak için çeşitli seçme ayarlayın. Kaldırmak mikrolitre şırınga piston ve 1 ml şırınganın pistonu iterek dışarı sızar kadar mikrolitre şırınga içine geriye madeni yağ enjekte. Bakımı tüp içinde hava kabarcıkları bırakmak için ise mikrolitre şırınga pistonu değiştirin. </li><li> Kılcal ve 1 ml şırınga ile bir yol oluşturmak için çeşitli seçme ayarlayın. Tüp içinde hava kabarcıkları bırakmamaya dikkat çekerken bunun ucundan dışarı sızar kadar mineral yağı ile kılcal doldurun. </li><li> Mikrolitre şırınga ile kılcal arasında bir bağlantı kurmak için manifoldu seçici ayarlayın. Mineral yağ, yaklaşık 10 ul boşaltınız. </li><li> PBS çözeltisi içine kılcal ucu Dipve mikrolitre şırınga ölçer kullanarak, kılcal PBS 5ml&#39;lik emmek. Petrol ve PBS arasındaki menisküs açıkça görülebilir olduğuna dikkat edin. </li><li> Cerrahi Makroskop&#39;ta altında uydurma bir 3 eksenli mikromanipülatör kılcal düzeltmek. Bu sistem, görsel kontrol altında enjeksiyon yerinde için kılcal hedeflemek için kullanılacaktır. </li></ol></li><li> Sferoid implantasyonu <ol><li> Hafifçe (1-1,5 dakika boyunca hava içinde% 1.5), bir indüksiyon odasında İsofluranın soluma ile fare sakinleştirici. </li><li> Ketamin / Xylazine (120 mg / kg, 12 mg / kg) bir karışımı, bir intra-peritoneal enjeksiyonu ile hayvan anestezisi. Anestezi genellikle hayvanın vücut sıcaklığını azaltır unutmayın. Bu 26 ° C&#39;de bir odada cerrahi ile devam etmek ve altta yatan bir ısı kontrollü ısıtma pedi ile hayvan sıcak tutmak için tavsiye edilir. </li><li> Gözlerin kurumasını önlemek için göz merhemi sürün. </li><li> Hayvanın derisi tıraş. </li><li> Yerkulak çubukları ve bir ağızlık ile bir stereotaktik çerçeve içinde bir hayvan. </li><li> Povidon iyot (% 3 sabun, sonra% 10 çözeltisi) ile cildi temizleyin. </li><li> Bir neşter ile kafa derisi ortasında uzunlamasına bir 1 cm uzunluğunda kesi olun. Makas parietal kemikler üzerinde deriyi kesip kaldırmak. </li><li> Bir neşter bıçağı ile yavaşça kafatası üzerinde periost çıkarın. Cömertçe sonra çimento bağlılık için pürüzlü bir yüzey oluşturmak için kemik üstüne siyanoakrilat geçerlidir. </li><li> 4 mm çaplı kranyotomi oluşturmak için bir cerrahi Makroskop&#39;ta altında parietal kemik Matkap. Cömertçe ısınmasını önlemek için, bütün işlem sırasında penisilin (1000 U / ml) ve Streptomicin (1 mg / ml) içeren buz gibi soğuk PBS ilave edin. Forseps ve ıslak steril bir gazlı bez ile küçük kemik parçaları çıkarın. Uzak kanamalar önlemek için parietal kafatası sütür en az 1mm matkap özen gösterin. </li><li> Cam pencere kapalı olacak kraniotomi sınırında ince kemik. Amaç e olanbeyin ve cam arasında maksimum temas yüzeyi ile cam pencerenin nsure daha sonra düzlemsel yerleştirme. Yavaş yavaş bir forseps kullanarak kemiği kaldırmak ve PBS çözeltisi ile maruz dura-mater temizleyin. </li><li> , 5 mm çapında yuvarlak cam lamel alın alkol ile temizlenmesi ve kağıt mendil ile kurulayın. Kraniotomi için bir kapak olarak lamel kullanımı ve beynin büyük bir düz yüzeye cam ile temas alır onaylamak için deneyin. Gerekirse lamel için daha ince yan kemikleri çıkarın. Yavaşça yerine kez lamel üzerinde baskı uygulayarak eğer beyin düz sıkılmış kadar devam edin. </li><li> Tekrar alkol ile lamel temizleyin, kağıt mendil ile kurulayın ve ayrı kaydedin. </li><li> 26 gauge iğne ile henüz ana kan damarlarının kaçınarak kraniotomi merkezinde dura-mater bir delik yapmak. Sadece dura-mater açmak için bu adımın amacı olarak beyin dokusunda olduğu zarar için değil emin olun. </li><li> Yavaşça dura mater-wi temizleyinhemorajik kan kaldırmak için PBS çözüm inci. Sfero enjeksiyon hazırlarken doku kağıt parçası ile örtün. </li><li> Aşama 2.1 &#39;de hazırlanan küremsi enjeksiyon sistemi ile, aşama 1.2&#39; de hazırlanan Petri çanağından kılcal iç çapa (yaklaşık 200-250 um) uygun yuvarlak sfero emmek. Sferoid yaklaşık 5 ul kültür ortamı ile birlikte gelmelidir. Onun ağırlığı altında kılcallığı ucu aşağı düşmek gerekir. </li><li> Kraniotomi kapak ve enjeksiyon sistemi altında hayvan konumlandırmak için kullanılan ıslak mendil kağıdı çıkarın. </li><li> Bu dura-mater yapılan delik değene kadar enjeksiyon pipet indirin. Ardından, 250 um tarafından tekrar düşürmek. 30 saniye bekleyin. </li><li> Yavaş yavaş kağıt mendil ince bir parça ile fazla sıvıyı dışarı pompalama sırasında mikrolitre şırınga pistonu (2-3 | il) kullanılarak, küremsi enjekte edilir. 30 saniye bekleyin ve sonra hafifçe yüzeyine doğru 50 mikron ile enjeksiyon pipet kaldırın. 30 sn ve repea tekrar bekleyinyüzeyine kadar 50 um &#39;lik adımlarla ile kaldırma işlemi t. Bekleme sürelerini pipet sadık kalacağına sfero çıkarma önler. </li><li> Bir floresan Makroskop&#39;ta ile beyindeki sfero varlığını teyit edin. </li><li> 100-300 mikron çapında bir Petri tabağına PBS çözeltisi ile çapraz bağlanmış jel dekstran boncuk karıştırın. 1dk bekleyin ve bazı hidrate boncuk balık. Kraniotomi bitişik kemik üzerine koyun. </li><li> Makroskopik denetimi altında, dura mater-açılış büyüklüğüne benzer bir çapı olan bir boncuk seçin. Forseps kullanılarak iki yarım çapraz bağlı dekstran boncuk jel kesin. </li><li> Yavaşça sfero doğru dışbükey yüzü enjeksiyon deliğine bir çapraz bağlı dekstran jel hemi-boncuk koydu. Konkav sınır çevreleyen dura mater-temas elde edene kadar yavaşça aşağı doğru sfero ve basın kaldırmak için özen gösterin. </li><li> Bir cam slayt siyanoakrilat tutkal bir damla koyun; dro içine bir kürdan ucu daldırmayapıştırıcı bir miktar almak s. Çabuk yaklaşık tutkal damgası olarak bitişik dura mater-için, çapraz bağlanmış jel hemi-dekstran boncuk kenarlarını kapatırlar. Kürdan çapraz bağlı dekstran jel hemi-boncuk yapıştırma önlemek için hızlı ve doğru hareketleri gerçekleştirmek için özen gösterin. Kurutulmuş kez görüntüleme engel değilse yaymak ve engelleyebilir tutkal aşırı kaçının. Tutkal kuru ve daha sonra PBS çözeltisi ile kraniyotomi ve çevresindeki kemik temizlemek için 2 dakika bekleyin. </li></ol></li><li> Pencere implantasyonu <ol><li> Kraniotomi yukarıdaki lamel yuvarlak 5 mm çapa koyun (2.2.12 bakınız). Örtücü camın kenarları, kraniyotomi dış de kafatası, inceltilmiş olmalıdır. Lamel kenarlarında dura mater-inceltilmiş ve kemik ile temas halinde olmalıdır. Aksi skar dokusu optik netlik geliştirmek ve engelleyebilirler dura-mater ve cam lamel arasında doğrudan bir temas olması çok önemlidir. </li><li> Bir doku ile, inci PBS absorbelamel merkezinde küçük bir basınç uygularken, e bir örtücü cam, kenarları bu çözüm bu nedenle tam olarak kraniotomiye kapsamaz. Bu, kemik, cam ve beyin ilgili bölgenin tarafında birbirine yapıştırılmış sağlayacaktır. </li><li> Yavaşça kemik ve lamel arasındaki sınırda siyanoakrilat uygularken, bir forseps ile lamel merkezinde küçük bir basınç muhafaza edin. Tutkal kendiliğinden PBS çözeltisi ile arayüzü kadar yayılacak. Çözüm tutkal hidrofobiklik verilen bir engel olarak hareket edecektir. Sızdırmazlık bir dakikadan daha az etkili olabilir ama o sabit kadar lamel taşımak için değil, aşırı dikkat etmelisiniz. Bu başka türlü dura mater-dolayısıyla cerrahi bir başarısızlığa yol üzerinde siyanakrilat sızıntıya neden olur. </li><li> Tutkal cam üstüne yayılmış olurdu durumda aksi optik netlik azaltabilir gibi, spiral hareketler yaparak bir mikro-neşter bıçak kullanarak kaldırabilirsiniz. Cam lamel Durin kırmamaya dikkatg aşırı basınç nedeniyle prosedür. </li><li> Bitişik kafatası doğru lamel kenarlarında dental çimento uygulayarak cam fiksasyon birleştirin. Kafa derisi kadar tüm maruz kafatası kapsayacak emin olun. İlave çimento kullanarak, amacın daldırma için gerekli havuzu oluşturmak için lamel etrafında yan duvarlar ördün. Diş çimento az 10 dakika içinde tedavi edecek. </li></ol></li></ol> 3. Post-operatif Bakım ve Görüntüleme için Hazırlık <ol><li> Post-operatif bakım <ol><li> Stereotaktik çerçeve fareyi çıkarın, Deksametazon (0.2 mg / kg) ve Rimadyl pelvik bölgeler üzerinde (5 mg / kg) sc enjekte ve sıcak bir doku-yuva ile onu kafesine yatıyordu. </li><li> Anestezi etkileri yok kadar hayvan izleyin. Ameliyattan sonra genel 2-3 saat içinde, fareler tamamen mobil. Hayvansal gıda ve suya kolay erişimi olduğundan emin olun. Agaroz ihtiva eden glikoz ile (hayvan sağlamak agaroz% 3, glukoz% 3). </li><li> Her gün, hayvan ağırlığı izlemek ve ameliyat sonrası ilk 10d için Deksametazon (0.2 mg / kg) ve Rimadyl (5 mg / kg) sc enjekte edilir. Kaybı, orijinal ağırlığının% 15 aştığında etik hususlar için, fareler euthanize. Kafa içi basınç hayvan için, motor bozukluklara yol açan tümör boyutu artar. Bu bağımlı tümör hücre hattı ve çeşitli gecikmeler ameliyat sonrası oluşur. Özel bakım kullanılan hücre hattı ile Deneyin son nokta karakterize etmek için alınmalıdır. </li></ol></li><li> Görüntüleme için hazırlık <ol><li> Hafif bir indüksiyon odası (1-1,5 dakika boyunca hava içinde% 1.5), izofluran teneffüs ile fare sakinleştirici. </li><li> Ketamin / Xylazine (100 mg / kg, 10 mg / kg) bir karışımı, bir intra-peritoneal enjeksiyonu ile hayvan anestezisi. Böyle bir anestezi genellikle gözlem 45 dakika izin verir. Uzun görüntüleme oturumları gerçekleştirmek için, fare içinde İsofluranın sürekli solunması altına yerleştirilirhava (% 0.25-0.75). </li><li> Gözlerin kurumasını önlemek için göz merhemi sürün. </li><li> Stereotaktik çerçeve üzerinde hayvan koyun ve earbars ile kafatası engellemek. </li><li> Kan damarları görselleştirmek için, bir flüoresan boya intravenöz olarak enjekte edilebilir. </li><li> Penceresi kirli görünüyorsa, yavaşça ince bir bıçak ve bir doku köşesi ile enkaz kaldırarak temizlenebilir. Her zaman diş çimento ile uyumlu değildir ve bu pencerenin altındaki beyin serin gibi penceresini temizlemek için alkol kullanmayın. </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>DeAngelis, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+tumors.">Brain tumors.</a> N Engl J Med. 344, 114-123 (2001).</li><li>Ricard, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+brain+tumours+in+adults.">Primary brain tumours in adults.</a> Lancet. 379, 1984-1996 (2012).</li><li>Prados, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phase+III+randomized+study+of+radiotherapy+plus+procarbazine,+lomustine,+and+vincristine+with+or+without+BUdR+for+treatment+of+anaplastic+astrocytoma:+final+report+of+RTOG+9404.">Phase III randomized study of radiotherapy plus procarbazine, lomustine, and vincristine with or without BUdR for treatment of anaplastic astrocytoma: final report of RTOG 9404.</a> Int J Radiat Oncol Biol Phys. 58, 1147-1152 (2004).</li><li>Piao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glioblastoma+resistance+to+anti-VEGF+therapy+is+associated+with+myeloid+cell+infiltration,+stem+cell+accumulation,+and+a+mesenchymal+phenotype.">Glioblastoma resistance to anti-VEGF therapy is associated with myeloid cell infiltration, stem cell accumulation, and a mesenchymal phenotype.</a> Neuro Oncol. 14, 1379-1392 (2012).</li><li>Zhai, H., Heppner, F. L., Tsirka, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia/macrophages+promote+glioma+progression.">Microglia/macrophages promote glioma progression.</a> Glia. 59, 472-485 (2011).</li><li>Studwell, A. J., Kotton, D. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+shift+from+cell+cultures+to+creatures:+in+vivo+imaging+of+small+animals+in+experimental+regenerative+medicine.">A shift from cell cultures to creatures: in vivo imaging of small animals in experimental regenerative medicine.</a> Mol Ther. 19, 1933-1941 (2011).</li><li>Ustione, A., Piston, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+introduction+to+multiphoton+microscopy.">A simple introduction to multiphoton microscopy.</a> J Microsc. 243, 221-226 (2011).</li><li>Ricard, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Short-term+effects+of+synchrotron+irradiation+on+vasculature+and+tissue+in+healthy+mouse+brain.">Short-term effects of synchrotron irradiation on vasculature and tissue in healthy mouse brain.</a> J Synchrotron Radiat. 16, 477-483 (2009).</li><li>von Baumgarten, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bevacizumab+has+differential+and+dose-dependent+effects+on+glioma+blood+vessels+and+tumor+cells.">Bevacizumab has differential and dose-dependent effects on glioma blood vessels and tumor cells.</a> Clin Cancer Res. 17, 6192-6205 (2011).</li><li>Helmchen, F., Denk, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deep+tissue+two-photon+microscopy.">Deep tissue two-photon microscopy.</a> Nat Methods. 2, 932-940 (2005).</li><li>Mostany, R., Portera-Cailliau, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+craniotomy+surgery+procedure+for+chronic+brain+imaging.">A craniotomy surgery procedure for chronic brain imaging.</a> J Vis Exp. , 680 (2008).</li><li>Lathia, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+in+vivo+evidence+for+tumor+propagation+by+glioblastoma+cancer+stem+cells.">Direct in vivo evidence for tumor propagation by glioblastoma cancer stem cells.</a> PLoS One. 6, (2011).</li><li>Madden, K. S., Zettel, M. L., Majewska, A. K., Brown, E. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+tumor+imaging:+live+imaging+of+glioma+by+two-photon+microscopy.">Brain tumor imaging: live imaging of glioma by two-photon microscopy.</a> Cold Spring Harb Protoc. 2013, (2013).</li><li>Winkler, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+glioma+cell+invasion+in+vivo+reveals+mechanisms+of+dissemination+and+peritumoral+angiogenesis.">Imaging glioma cell invasion in vivo reveals mechanisms of dissemination and peritumoral angiogenesis.</a> Glia. 57, 1306-1315 (2009).</li><li>Newcomb, E., Zagzag, D., Van Meir, E. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ch.+12.">Ch. 12.</a> CNS Cancer, Cancer Drug Discovery and Development. , 227-241 (2009).</li><li>Ulrich, T. A., de Juan Pardo, E. M., Kumar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mechanical+rigidity+of+the+extracellular+matrix+regulates+the+structure,+motility,+and+proliferation+of+glioma+cells.">The mechanical rigidity of the extracellular matrix regulates the structure, motility, and proliferation of glioma cells.</a> Cancer Res. 69, 4167-4174 (2009).</li></ol>

Yazarlar, hiçbir rakip mali çıkarlarını olmadığını beyan ederim.

Bu yaklaşım, optik görüntüleme yöntemlerinin kullanımı gün ve haftalarda bir ortotopikal implante glioma büyüme üzerinde izlemenizi sağlar. Aynı hayvan daha sonra patoloji sırasında hemen hemen herhangi bir beyin görüntüleme yöntemi tabi tutulabilir; henüz iki-foton mikroskopi özgü hazırlık yaşayan hayvanın beyninde subsellüler çözünürlük elde etmek için eşsiz bir fırsat sunuyor. Bizim protokol glioma hücreleri hasarlı dura aracılığıyla merkezi sinir sistemine bırakabilirsiniz ...

Glioblastoma multiforme 12 aylık bir medyan sağkalım ile erişkinlerde beyin tümörü en agresif formu ve% 5, 5-yıllık sağkalım oranı olarak beliriyor. Klinik tedavi cerrahi, radyoterapi ve sık sık birlikte kullanılan kemoterapi dayanır. Ancak bu tedavilerin etkisi 1-3 palyatif kalır. Şimdiye kadar, nöro-onkoloji çalışmaların çoğu (örneğin 4,5) bakın sadece statik bir görünüm sağlayabiliyoruz ve tümör taşıyan hayvanların büyük kohortlar gerçekleştirilen farklı zaman noktalarında kurban teknikleri güveniyor. Intravital görüntüleme göre izleme yöntemlerinin son gelişmeler glioma büyümesi ve tümör hücrelerinin ve zaman içinde aynı hayvan üzerinde kendi patofizyolojik mikro arasındaki etkileşimlerin incelenmesinde sağlar. Bu 6 ana kadar ulaşılmaz bilgi oldu seçkin parçasına yol açar. Ilgi hücrelerinde floresan etiketler ifade eden transjenik hayvanların kullanımı olabilir,Bu yazıda, tümör hücreleri ve nöronlar arasındaki örneğin belirli etkileşimleri çalışmak d. Geçtiğimiz on yıl içinde, intravital iki-foton mikroskopi 7 (&gt; 500 dura-mater altında mikron) temel nöro-onkoloji çalışmaları ve klinik öncesi denemeler fare beyninin derin Intravital gözlem gerçekleştirme yeteneği için 8,9 bir altın standart haline gelmiştir mikrometrik uzamsal çözünürlük 10. Kronik kafatası pencere 11, implante orthotopical hayvan modelleri intravital iki foton mikroskobu kullanarak, aynı fare 9,12 üzerinde zamanla tümör ilerlemesini takip etmek mümkündür. Bu, daha önce yayınlanmış hayvan modellerinin en önemli dezavantajlarından biri, dura mater-hücre süspansiyonu 9,13,14 enjeksiyonundan sonra kapalı değildir gibi tümör gelişimini düzenleyen fiziksel kısıtlamaları taklit kalmamasıdır ancak bir. Glioma hücre sızabilenheterotopik birine ortotopik glioma modeli dönüştürüyor epidural boşluk. Burada sunulan hayvan modeli, bir çapraz-bağlanmış jel hemi-dekstran boncuk ve histo-uyumlu yapıştırıcı ile dura mater-sızdırmaz ardından 200 um&#39;lik bir derinlikte serebral kortekste floresan glioma hücrelerinin bir sferoit olması ile enjekte edilmesini kapsar . Tümör büyümesi patofizyolojik fiziksel kısıtlamaları muhafaza beyin parankiması ile sınırlandırılmıştır. Tümörün Yukarıdaki implante kronik bir cam pencere Intravital iki-foton mikroskopi için kolay bir optik erişim sağlar. Zamanla glioma büyüme takibini gerçekleştirmek ve (floresan Dekstranların vurgulanır nöronlar ve damar burada) olan mikro ile etkileşimini incelemek mümkündür ilgi hücrelerinde floresan etiketleri sentezleyen transgenik hayvanlar kullanma.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1337">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:425px;">Drill</td>
			<td style="width:383px;">Dremel (Germany)</td>
			<td style="width:156px;">398</td>
			<td style="width:375px;">any high quality surgical bone drill would suffice</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;width:425px;">Drill burr (#1/4 Carbide Round Burr)</td>
			<td style="width:383px;">World Precision Instruments (USA)</td>
			<td>501860 (#1/4)</td>
			<td>also sold by Harvard Apparatus</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;">Tissue scissors</td>
			<td style="width:383px;">World Precision Instruments (USA)</td>
			<td>14395</td>
			<td style="width:375px;"></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;">Dumont tweezers M5S</td>
			<td style="width:383px;">World Precision Instruments (USA)</td>
			<td>501764</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;">Dental cement</td>
			<td>GACD (USA)</td>
			<td>12-565 &#38; 12-568</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;">Cyanoacrylate</td>
			<td>Eleco-EFD (France)</td>
			<td>Cyanolit 201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;">Glass capillaries without filament</td>
			<td>Clark Electromedical Instruments (UK)</td>
			<td>GC100-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;">Microliter syringe (25 &#181;l)</td>
			<td>Hamilton (USA)</td>
			<td>702</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;">Micromanipulator</td>
			<td style="width:383px;">World Precision Instruments (USA)</td>
			<td>Kite-R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;">T derivation (3-way stopcock - Luer lock)</td>
			<td style="width:383px;">World Precision Instruments (USA)</td>
			<td>14035-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;">Stereotactic frame (mouse adaptor)</td>
			<td style="width:383px;">World Precision Instruments (USA)</td>
			<td>502063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;">Glass coverslips</td>
			<td>Warner Instruments (USA)</td>
			<td>CS-5R (64-0700)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;">Cross-linked dextran gel (Sephadex) G50 Coarse 100-300 &#181;m beads</td>
			<td>Available from various suppliers including Sigma (Germany)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;">Eye ointment</td>
			<td>TVM (France)</td>
			<td>Ocry-gel</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;">Fluorescence macroscope</td>
			<td>Leica MZFLIII (Germany)</td>
			<td></td>
			<td>also sold by other companies</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;">Two-photon microscope</td>
			<td>Zeiss LSM 7MP (Germany)</td>
			<td></td>
			<td>also sold by other companies (Nikon, &#8230;)</td>
		</tr>
		<tr height="38">
			<td height="38" style="height:38px;">Infrared tunable femtosecond laser (Ma&#239;-Ta&#239;)</td>
			<td>Spectra Physics (USA)</td>
			<td></td>
			<td>also sold by other companies</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an orthotopic glioblastoma mouse model maintaining brain parenchymal physical constraints and suitable for intravital two-photon microscopy

Glioblastoma multiforme (GBM), bugüne kadar hiçbir iyileştirici tedaviler ile beyin tümörlerinin en agresif formudur. Bu patolojinin murin modelleri dura mater-kesi sonra beyin parankiması içine glioma hücre süspansiyonunun enjekte dayanır. Hücreler Intravital iki foton mikroskopi için erişilebilir olması yüzeysel enjekte edilir ise, yüzeysel enjeksiyonlar fizyopatolojik koşullarını özetlemek için başarısız. Nitekim, enjeksiyon yolu ile kaçan çoğu tümör hücreleri parankimden mekanik kısıtlamaların yokluğunda anormal hızlı genişletmek ekstra dural alan ulaşır. Bizim gelişmeler fokal bir glioma sfero yerleştirilmesi yerine, serebral korteks yüzeysel katmanlarında glioma hücrelerinin bir süspansiyonu enjekte değil, aynı zamanda bir ortamda yapıştırılmış bir çapraz bağlı dekstran jel hemi-boncuk ile enjeksiyon yerinde tıkanma değil sadece oluşmaktadırding parankimi ve siyanoakrilatın ile dura mater-mühürlü. Toplamda bu önlemler, beyin dokusu içinde, tümör hücrelerinin genişleme ve fizyolojik infiltrasyonu uygulanması. Bir cam pencere skar dokusu gelişimi yokluğunda hafta içinde kronik görüntüleme izin kafatasına çimentolu ile Kranyotomi nihayet kapatıldı. Biz glioma hücreleri, nöronlar (örn. Thy1-CFP fare) ve vasküler bir floresan boya (intravenöz enjeksiyon ile vurgulanır) arasında meydana gelen etkileşim dinamikleri intravital ile görselleştirilebilir göstermiştir floresan tümör hücreleri ile aşılanmış floresan transgenik hayvanların yararlanarak Hastalığın ilerlemesi sırasında iki foton mikroskopisi. Minimal tehlikeye serebral ortamında mikroskobik çözünürlükte görüntünün bir tümör olasılığı nöro-onkoloji ve uyuşturucu testi alanını yararına olmalıdır cari GBM hayvan modellerinde bir gelişmeyi temsil etmektedir. </p&gt;

Cerrahi protokolü (Şekil 1) gerçekleştirildiğinde, hayvanların kurban edilmesine dek hafta boyunca floresan mikroskobu ile gözlenebilir. Inflamatuar reaksiyon, bir ya da iki hafta içinde kaybolur ameliyattan sonra gözlenebilir. Tümör büyümesi floresan makroskopi ve iki foton mikroskobu (Şekil 2) dahil olmak üzere çeşitli mikroskopi teknikleri ile gözlenebilir. Burada tasvir örnek görüntüler bir floresan Makroskop&#39;ta ve femtosaniye darbeli kızılötesi ayarlana...

Watch this Scientific Journal Video about An Orthotopic Glioblastoma Mouse Model Maintaining Brain Parenchymal Physical Constraints and Suitable for Intravital Two-photon Microscopy at JoVE.com

An Orthotopic Glioblastoma Mouse Model Maintaining Brain Parenchymal Physical Constraints and Suitable for Intravital Two-photon Microscopy

Biz, tümörün büyüme sırasında oynayan normal biyo-fiziksel kısıtlamalar tekrarıdır intravital iki foton mikroskopi için farelerde kortikal glioblastoma ortotopik bir model oluşturduk. Tümörün yukarıdaki kafatasını yerine bir kronik cam pencere, iki-foton mikroskobu ile zamanla tümörün ilerlemesinin takibini sağlar.

Ortotopik Glioblastoma Fare Modeli Beyin parankim fiziksel kısıtlamaları bakımı ve Intravital İki foton Mikroskopi için uygundur

Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive form of brain tumors with no curative treatments available to date.
Murine models of this pathology ...

an-orthotopic-glioblastoma-mouse-model-maintaining-brain-parenchymal

Research

JoVE Journal

Medicine

19.6K Görüntüleme.  Aix Marseille University.  Biz, tümörün büyüme sırasında oynayan normal biyo-fiziksel kısıtlamalar tekrarıdır intravital iki foton mikroskopi için farelerde kortikal glioblastoma ortotopik bir model oluşturduk. Tümörün yukarıdaki kafatasını yerine bir kronik cam pencere, iki-foton mikroskobu ile zamanla tümörün ilerlemesinin takibini sağlar. 

Video: An Orthotopic Glioblastoma Mouse Model Maintaining Brain Parenchymal Physical Constraints and Suitable for Intravital Two-photon Microscopy

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and subsequent cell adhesion. After their bladders are transurethrally catheterized and drained, animals are again catheterized to permit insertion of a platinum wire into bladders without damaging the urethra or bladder. The catheters are made of Teflon to serve as an insulator for the wire, which will conduct electrical current into the bladder to create a burn injury. An electrocautery unit is used to deliver 2.5W to the exposed end of the wire, burning away extracellular layers and providing attachment sites for carcinoma cells that are delivered in suspension to the bladder through a subsequent catheterization. Cells remain in the bladder for 90 minutes, after which the catheters are removed and the bladders allowed to drain naturally. The development of tumor is monitored via ultrasound. Specific attention is paid to the catheterization technique in the accompanying video.

Bladder tumors are established in female mice in a minimally invasive fashion through catheterization, local cauterization, and subsequent adhesion of carcinoma cells to the burn sites.

Murin Mesane Kanseri bir Ortotopik Model

In this straightforward procedure, bladder tumors are established in female C57 mice through the use of catheterization, local cauterization, and ...

Tıp

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient management strategies. Orthotopic mouse models of oral cancer have been developed to facilitate the study of factors that impact invasion and serve as model system for evaluating anti-tumor therapeutics. In these systems, visualization of disseminated tumor cells within oral cavity tissues has typically been conducted by either conventional histology or with in vivo bioluminescent methods. A primary drawback of these techniques is the inherent inability to accurately visualize and quantify early tumor cell invasion arising from the primary site in three dimensions. Here we describe a protocol that combines an established model for squamous cell carcinoma of the tongue (SCOT) with two-photon imaging to allow multi-vectorial visualization of lingual tumor spread. The OSC-19 head and neck tumor cell line was stably engineered to express the F-actin binding peptide LifeAct fused to the mCherry fluorescent protein (LifeAct-mCherry). Fox1nu/nu mice injected with these cells reliably form tumors that allow the tongue to be visualized by ex-vivo application of two-photon microscopy. This technique allows for the orthotopic visualization of the tumor mass and locally invading cells in excised tongues without disruption of the regional tumor microenvironment. In addition, this system allows for the quantification of tumor cell invasion by calculating distances that invaded cells move from the primary tumor site. Overall this procedure provides an enhanced model system for analyzing factors that contribute to SCOT invasion and therapeutic treatments tailored to prevent local invasion and distant metastatic spread. This method also has the potential to be ultimately combined with other imaging modalities in an in vivo setting.

A comprehensive overview of the techniques involved in generating a mouse model of oral cancer and quantitative monitoring of tumor invasion within the tongue through multi-photon microscopy of labeled cells is presented. This system can serve as a useful platform for the molecular assessment and drug efficacy of anti-invasive compounds.

Oral Skuamöz Hücre Karsinomu Ortotopik Fare Modeli Tümör Hücre Invasion Multi-foton Görüntüleme

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Combination Radiotherapy in an Orthotopic Mouse Brain Tumor Model

Glioblastoma multiforme (GBM) are the most common and aggressive adult primary brain tumors1. In recent years there has been substantial progress in the understanding of the mechanics of tumor invasion, and direct intracerebral inoculation of tumor provides the opportunity of observing the invasive process in a physiologically appropriate environment2. As far as human brain tumors are concerned, the orthotopic models currently available are established either by stereotaxic injection of cell suspensions or implantation of a solid piece of tumor through a complicated craniotomy procedure3. In our technique we harvest cells from tissue culture to create a cell suspension used to implant directly into the brain. The duration of the surgery is approximately 30 minutes, and as the mouse needs to be in a constant surgical plane, an injectable anesthetic is used. The mouse is placed in a stereotaxic jig made by Stoetling (figure 1). After the surgical area is cleaned and prepared, an incision is made; and the bregma is located to determine the location of the craniotomy. The location of the craniotomy is 2 mm to the right and 1 mm rostral to the bregma. The depth is 3 mm from the surface of the skull, and cells are injected at a rate of 2 &mu;l every 2 minutes. The skin is sutured with 5-0 PDS, and the mouse is allowed to wake up on a heating pad. From our experience, depending on the cell line, treatment can take place from 7-10 days after surgery. Drug delivery is dependent on the drug composition. For radiation treatment the mice are anesthetized, and put into a custom made jig. Lead covers the mouse's body and exposes only the brain of the mouse. The study of tumorigenesis and the evaluation of new therapies for GBM require accurate and reproducible brain tumor animal models. Thus we use this orthotopic brain model to study the interaction of the microenvironment of the brain and the tumor, to test the effectiveness of different therapeutic agents with and without radiation.

The purpose of this article is to describe the use of an orthotopic glioblastoma model for chemoradiation studies. This article will go though cell processing, implanting, and radiotherapy of the mouse using an intracranial model.

Bir Ortotopik Fare Beyin Tümörü Modelinde Kombinasyon Radyoterapi

Glioblastoma multiforme (GBM) are the most common and aggressive adult primary brain tumors1. In recent years there has been substantial progress in the ...

An Orthotopic Mouse Model of Anaplastic Thyroid Carcinoma

Several types of animal models of human thyroid carcinomas have been established, including subcutaneous xenograft and orthotopic implantation of cancer cells into immunodeficient mice. Subcutaneous xenograft models have been valuable for preclinical screening and evaluation of new therapeutic treatments. There are a number of advantages to using a subcutaneous model; 1) rapid, 2) reproducible, and 3) tumor establishment, growth, and response to therapeutic agents may be monitored by visual inspection. However, substantial evidence has shed light on the short-comings of subcutaneous xenograft models1-3. For instance, medicinal treatments demonstrating curative properties in subcutaneous xenograft models often have no notable impact on the human disease. The microenvironment of the site of xenographic transplantation or injection lies at the heart of this dissimilarity.
Orthotopic tumor xenograft models provide a more biologically relevant context in which to study the disease. The advantages of implanting diseased cells or tissue into their anatomical origin equivalent within a host animal includes a suitable site for tumor-host interactions, development of disease-related metastases and the ability to examine site-specific influence on investigational therapeutic remedies. Therefore, orthotopic xenograft models harbor far more clinical value because they closely reproduce human disease. For these reasons, a number of groups have taken advantage of an orthotopic thyroid cancer model as a research tool4-7.
Here, we describe an approach that establishes an orthotopic model for the study of anaplastic thyroid carcinoma (ATC), which is highly invasive, resists treatment, and is virtually fatal in all diagnosed patients. Cultured ATC cells are prepared as a dissociated cellular suspension in a solution containing a basement membrane matrix. A small volume is slowly injected into the right thyroid gland. Overall appearance and health of the mice are monitored to ensure minimal post-operative complications and to gauge pathological penetrance of the cancer. Mice are sacrificed at 4 weeks, and tissue is collected for histological analysis. Animals may be taken at later time-points to examine more advance progression of the disease. Production of this orthotopic mouse model establishes a platform that accomplishes two objectives: 1) further our understanding of ATC pathology, and 2) screen current and future therapeutic agents for efficacy in combating ATC.

Generation of an orthotopic mouse model of anaplastic thyroid carcinoma is described here. This technique employs surgical placement of human anaplastic thyroid cancer cells into the thyroid of immunodeficient mice, thus creating a more clinically relevant setting to study disease progression as well as screen innovative therapeutic interventions.

Anaplastik Tiroid Kanseri Ortotopik Fare Modeli

Several types of animal models of human thyroid carcinomas have been established, including subcutaneous xenograft and orthotopic implantation of cancer ...

An Orthotopic Bladder Cancer Model for Gene Delivery Studies

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are needed. The tumor microenvironment can significantly influence tumor development and therapy response. It is therefore often desirable to grow tumor cells in the organ from which they originated. This protocol describes an orthotopic model of bladder cancer, in which MB49 murine bladder carcinoma cells are instilled into the bladder via catheterization. Successful tumor cell implantation in this model requires disruption of the protective glycosaminoglycan layer, which can be accomplished by physical or chemical means. In our protocol the bladder is treated with trypsin prior to cell instillation. Catheterization of the bladder can also be used to deliver therapeutics once the tumors are established. This protocol describes the delivery of an adenoviral construct that expresses a luciferase reporter gene. While our protocol has been optimized for short-term studies and focuses on gene delivery, the methodology of mouse bladder catheterization has broad applications.

Implantation of cancer cells into the organ of origin can serve as a useful preclinical model to evaluate novel therapies. MB49 bladder carcinoma cells can be grown within the bladder following intravesical instillation. This protocol demonstrates catheterization of the mouse bladder for the purpose of tumor implantation and adenoviral delivery.

Gene Teslim Çalışmaları Ortotopik Mesane Kanseri Modeli

Bladder cancer is the second most common cancer of the urogenital tract and novel therapeutic approaches that can reduce recurrence and progression are ...

An Orthotopic Murine Model of Human Prostate Cancer Metastasis

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but rather the formation of distinct metastasis, the ability to effectively model this progression pre-clinically is of high value. In this model, cells are directly implanted into the ventral lobe of the prostate in Balb/c athymic mice, and allowed to progress for 4-6 weeks. At experiment termination, several distinct endpoints can be measured, such as size and molecular characterization of the primary tumor, the presence and quantification of circulating tumor cells in the blood and bone marrow, and formation of metastasis to the lung. In addition to a variety of endpoints, this model provides a picture of a cells ability to invade and escape the primary organ, enter and survive in the circulatory system, and implant and grow in a secondary site. This model has been used effectively to measure metastatic response to both changes in protein expression as well as to response to small molecule therapeutics, in a short turnaround time.

This orthotopic model of human prostate cancer allows for quantification of tumor size, circulating tumor cells, and formation of distinct metastasis to the lung. As cells must escape the primary organ, enter the blood stream, and implant into a secondary site, this model effectively recapitulates the scenario in humans.

İnsan Prostat Kanser metastaz Ortotopik fare modeli

Our laboratory has developed a novel orthotopic implantation model of  human prostate cancer (PCa). As PCa death is not due to the primary tumor, but  ...

Acute Brain Trauma in Mice Followed By Longitudinal Two-photon Imaging

Although acute brain trauma often results from head damage in different accidents and affects a substantial fraction of the population, there is no effective treatment for it yet. Limitations of currently used animal models impede understanding of the pathology mechanism. Multiphoton microscopy allows studying cells and tissues within intact animal brains longitudinally under physiological and pathological conditions. Here, we describe two models of acute brain injury studied by means of two-photon imaging of brain cell behavior under posttraumatic conditions. A selected brain region is injured with a sharp needle to produce a trauma of a controlled width and depth in the brain parenchyma. Our method uses stereotaxic prick with a syringe needle, which can be combined with simultaneous drug application. We propose that this method can be used as an advanced tool to study cellular mechanisms of pathophysiological consequences of acute trauma in mammalian brain in vivo. In this video, we combine acute brain injury with two preparations: cranial window and skull thinning. We also discuss advantages and limitations of both preparations for multisession imaging of brain regeneration after trauma.

Acute brain trauma is a severe injury that has no adequate treatment to date. Multiphoton microscopy allows studying longitudinally the process of acute brain trauma development and probing therapeutical strategies in rodents. Two models of acute brain trauma studied with in vivo two-photon imaging of brain are demonstrated in this protocol.

Boyuna İki foton görüntüleme ile takip Farelerde Akut Beyin Travma

Although acute brain trauma often results from head damage in different accidents and affects a substantial fraction of the population, there is no ...

Bioluminescence Imaging of an Immunocompetent Animal Model for Glioblastoma

In contrast to commonly reported human glioma xenograft animal models, GL261 murine glioma xenografts recapitulate nearly all relevant clinical and histopathologic features of the human disease. When GL261 cells are implanted intracranially in syngeneic C57BL/6 mice, the model has the added advantage of maintaining an intact immune microenvironment. Stable expression of luciferase in GL261 cells allows non-invasive cost effective bioluminescence monitoring of intracranial tumor growth. We have recently demonstrated that luciferase expression in GL261 cells does not affect the tumor growth properties, tumor cell immunomodulatory cytokine expression, infiltration of immune cells into the tumor, or overall survival of animals bearing the intracranial tumor. Therefore, it appears that the GL261 luciferase glioma model can be useful in the study of novel chemotherapeutic and immunotherapeutic modalities. Here we report the technique for generating stable luciferase expression in GL261 cells and how to study the in vitro and in vivo growth of the tumor cells by bioluminescence imaging.

GL261 glioma cells provide a useful immunocompetent animal model of glioblastoma. The goals of this protocol are to demonstrate proper techniques for monitoring intracranial tumor growth using in vivo bioluminescence imaging, and to verify the utility of luciferase-modified GL261 cells for studying tumor immunology and immunotherapeutic approaches for treating glioblastoma.

Glioblastoma&#39;nın için bir Immünkompetan Hayvan Modeli Biyoparlaklık Görüntüleme

In contrast to commonly reported human glioma xenograft animal models, GL261 murine glioma xenografts recapitulate nearly all relevant clinical and ...

An Orthotopic Mouse Model of Spontaneous Breast Cancer Metastasis

Metastasis is the primary cause of mortality of breast cancer patients. The mechanism underlying cancer cell metastasis, including breast cancer metastasis, is largely unknown and is a focus in cancer research. Various breast cancer spontaneous metastasis mouse models have been established. Here, we report a simplified procedure to establish orthotopic transplanted breast cancer primary tumor and resultant spontaneous metastasis that mimic human breast cancer metastasis. Combined with the bioluminescence live tumor imaging, this mouse model allows tumor growth and progression kinetics to be monitored and quantified. In this model, a low dose (1 x 104 cells) of 4T1-Luc breast cancer cells was injected into BALB/c mouse mammary fat pad using a tuberculin syringe. Mice were injected with luciferin and imaged at various time points using a bioluminescent imaging system. When the primary tumors grew to the size limit as in the IACUC-approved protocol (approximately 30 days), mice were anesthetized under constant flow of 2% isoflurane and oxygen. The tumor area was sterilized with 70% ethanol. The mouse skin around the tumor was excised to expose the tumor which was removed with a pair of sterile scissors. Removal of the primary tumor extends the survival of the 4T-1 tumor-bearing mice for one month. The mice were then repeatedly imaged for metastatic tumor spreading to distant organs. Therapeutic agents can be administered to suppress tumor metastasis at this point. This model is simple and yet sensitive in quantifying breast cancer cell growth in the primary site and progression kinetics to distant organs, and thus is an excellent model for studying breast cancer growth and progression, and for testing anti-metastasis therapeutic and immunotherapeutic agents in vivo.

An orthotopic breast cancer primary tumor model and surgical removal of primary tumor to extend mouse life to generate spontaneous metastasis are described. The tumor growth and progression are monitored and quantified by luciferase fluorescence imaging.

Spontan Meme Kanseri metastaz Ortotopik Fare Modeli

Metastasis is the primary cause of mortality of breast cancer patients. The mechanism underlying cancer cell metastasis, including breast cancer ...

Intravital Microscopy and Thrombus Induction in the Earlobe of a Hairless Mouse

Thrombotic complications of vascular diseases are one leading cause of morbidity and mortality in industrial nations. Due to the complex interactions between cellular and non-cellular blood components during thrombus formation, reliable studies of the physiology and pathophysiology of thrombosis can only be performed in vivo. Therefore, this article presents an ear model in hairless mice and focuses on the in vivo analysis of microcirculation, thrombus formation, and thrombus evolution. By using intravital fluorescence microscopy and the intravenous (iv) application of the respective fluorescent dyes, a repetitive analysis of microcirculation in the auricle can easily be performed, without the need for surgical preparation. Furthermore, this model can be adapted for in vivo studies of different issues, including wound healing, reperfusion injury, or angiogenesis. In summary, the ear of hairless mice is an ideal model for the in vivo study of skin microcirculation in physiological or pathophysiological conditions and for the evaluation of its reaction to different systemic or topical treatments.

The ear model of the hairless SKH1-Hrhr mouse enables intravital fluorescence microscopy of microcirculation and phototoxic thrombus induction without prior surgical preparation in the examined microvascular bed. Therefore, the ear of the hairless mouse is an excellent in vivo model to study the complex interactions during microvascular thrombus formation, thrombus evolution, and thrombolysis.

Bir Tüysüz fare kulak memesi içinde intravital Mikroskopi ve trombüs İndüksiyon

Thrombotic complications of vascular diseases are one leading cause of morbidity and mortality in industrial nations. Due to the complex interactions ...