Bu çalışma Overstreet Vakfı&#39;nın fon tarafından desteklenmiştir.

1. Temel Hücre Kültürü ile Devam Etmeden Önce Kurma <ol><li> NeuroCult NSC Bazal Orta ve NeuroCult NSC Proliferation Takviyeler tam NSC orta yapmak için, sırası ile, 9:1 oranında karıştırılmaktadır. </li><li> Bir 37 ° C&#39;de su banyosu orta ısınması için kullanılır. </li><li> Isıyla inaktive fetal buzağı serumu (FCS), uygun miktarda çözdürüldü. </li><li> Epidermal büyüme faktörü (10 mcg / ml EGF), temel fibroblast büyüme faktörü (10 mcg / ml b-FGF) ve fosfat% 0.2 heparin solüsyonu dahil stok büyüme faktörü çözümleri uygun miktarda tuz (PBS) çözdürülen tamponlu. </li><li> Doku kültürü matara (T25, T75 veya &amp; T175) MGK genişlemesi ve farklılaşması için gereklidir. </li><li> Doku kültürü 96 ve 24 kuyucuğu tedavi ve cam lamelleri sıralanmış hücreleri kaplama için gereklidir. </li></ol> 2. NSC&#39;lerde izolasyonu ve Genişleme (Pasajlanması) <ol><li> Nöral kök ve ataları fare b izole ve genişletilmişAyrı bir protokol 1, 2 3&#39;te tarif edildiği gibi yağmura. </li><li> Neurospheres (birincil veya geçişli neurospheres) altkültür (çapı 150-200 mikron) için hazır olduğunuzda, orta içeren küreler uygun bir boyut steril doku kültürü tüpüne aktarılır ve 5 dakika 800 rpm (110 g) santrifüj edilir oda sıcaklığında. </li><li> Süpernatan kaldırılır ve orta küreler önceden ısıtılmış% 0.05 tripsin-EDTA 1 ml içinde yeniden süspansiyon haline getirilmiştir. </li><li> 2-3 dakika için 37 ° C&#39;de su banyosunda inkübasyondan sonra, soya fasulyesi tripsin inhibitörü eşit hacimde tripsin aktivitesi durdurmak için hücre süspansiyonu ilave edilir. </li><li> Tripsin tamamen inaktive edilmiş olduğundan emin olmak için, hücre süspansiyonu hafifçe aşağı yukarı 3-5 kez pipetle ve. </li><li> 5 dakika boyunca 800 rpm (110 g) santrifüj sonra, süpernatan kaldırılır ve hücre tam NSC ortamın 1 ml içinde tekrar süspanse edilir. </li><li> Hücre süspansiyonu 10μl trypa 90 ul ile karıştırılırn mavi bir hücre sayımı yapmak. Not: Diğer uygun hücre dilüsyonları de kullanılabilir. </li><li> Aşağıda tarif edildiği gibi hücreleri daha sonra altkültürü 1, 2 ya da farklılaşma için kullanılmaktadır. </li></ol> 3. Nöral Kök ve Progenitör Hücre Farklılaşma, Neuroblast Assay (NBA) <ol><li> Ayrışmış neurospheres kaynaklanan Hücreler 20 ng / ml EGF, 10 ng / ml bFGF,% 0.2 heparin 1 ul / ml,% 5 ile desteklenmiş tam NSC ortamda 2-3 x 10 5 hücre / ml &#39;lik bir konsantrasyonda kaplanir ısı uygun bir boyut doku kültürü balonuna FCS inaktive. 5 ml orta T75 için T25, 20 ml ve T175 şişeler için 40 ml için kullanılır. Not: FCS hücreleri sıkıca substrat eklemek neden olur ve NBA kültürü için kaplama şişeler için bir ihtiyaç vardır. </li><li> Külture matara sonra 3-4 gün süreyle% 5 CO 2 ile 37 ° C nemli inkübatörde inkübe edilir. Bu dönemde MGK döl yüzeye tutunur ve hücre monolayer olarak çoğalırlar sırasında, proliferasyon aşamasında denir. </li><li> Kültür% 90-95 birleşmiş, her şişenin orta olduğunda herhangi bir büyüme faktörleri olmaksızın% 5 FCS ile desteklenmiş tam MGK orta geçilir. </li><li> Kültür şişeler tekrar başka bir 3-4 gün için% 5 CO 2 ile 37 ° C nemli inkübatörde inkübe edilir. Bu dönem nöronal ataları bir astrositik monolayer üstünde görünür ve olgunlaşmamış nöronal hücrelerin koloniler yapmak için çoğalırlar sırasında, farklılaşma aşaması denir. Farklılaşma aşamasının günde 4-5, kültür akış sitometrisi teknolojisi kullanılarak neuroblast hücrelerin izolasyonu için hazırdır. </li></ol> 4. Akım Sitometri için Hücre Hazırlık TrypsiniWHO <ol><li> Farklılaşma aşamasının günde 4-5 soyundan NSC farklılaşma kültürü kültürden FCS kaldırmak için PBS uygun bir miktarda (T25 için 2 ml, T75 için 4 ml ve T175 şişesinde 8 ml) ile bir defa yıkanır. Not: FCS bloklar Tripsin-EDTA aktivitesi. </li><li> Daha sonra, önceden ısıtılmış% 0.05 tripsin-EDTA (T25 için 2 ml, T75 için 4 ml ve T175 şişesinde 8 mi) yeterli bir miktarda hücre mono tabakasında kapsayacak şekilde, her şişesine eklendi ve 1-2 dakika süreyle inkübe edilir 37 ° C inkübatör nemlendirilmelidir. </li><li> Şişeye kültürü üzerinde Tripsin-EDTA etkisini değerlendirmek için mikroskop altında kontrol edilir. Şişe daha sonra tek elle tutulan ve balonun altındaki hücreleri çıkarmak için diğer elinizle sıkıca tutulur. </li><li> Soya fasulyesi tripsin inhibitörü eşit hacimde tripsin aktivitesi gidermek için balona ilave edilir. Hücre süspansiyonu yavaşça tripsin inaktivasyon sağlamak ve homojen bir tek hücre elde etmek için aşağı yukarı pipetlenir ve birsüspansiyon. Not: Alternatif olarak,% 5 FCS ile takviye orta tripsin aktivitesi gidermek için kullanılabilir. </li><li> Non-ayrışmış topaklar kaldırmak için, hücre süspansiyonu, 40-mikron boyutunda gözenekli filtreden geçirilir. </li><li> Hücre süspansiyonu daha sonra 5 dakika boyunca 800 rpm (110g) santrifüj edilir, süpernatan kaldırılır ve hücre tam NSC orta uygun bir hacmi içinde tekrar süspanse edilir. </li><li> Hücre süspansiyonu bir son hacim hücre yoğunluğu 2-3x10 6 -cells/ml aşmayacak şekilde ayarlanır. Yüksek hücre yoğunluğu akım sitometri makine akışı tıkanmaya neden olabilir. </li><li> Sadece fiziksel özelliklerine göre nöronal hücrelerin izole etmek isterseniz, şimdi bölüm 4 açıklanan sıralama FACS geçebilirsiniz. </li><li> Sıralama önce, Propidium iyodür (PI, Sigma, PBS içerisinde 500 ug / ml), 1 ul / ölü hücreleri çıkarmak için hücre süspansiyonu ml &#39;lik bir konsantrasyonda eklenir. </li></ol> Cel Canlıl immün Daha yüksek bir NBA kültürden tek bir hücre hasat nöronal hücre saflığı, PSA-NCAM (erken olgunlaşmamış nöronal progenitörlerin bir işaretleyici) ve sonra nöronal popülasyondan pozitif hücreleri için boyanmış edilebilir elde etmek için FACS makinası kullanılarak izole edilebilir. <ol><li> Bir hücre sayımı yapıldıktan sonra, NBA kültürden tek bir hücre süspansiyonu dört gruba ayrılmıştır: <ul><li> Yalnız Hücreler grubunda, parametreler ve kapıları (0.5-1 x 10 6 hücre) ayarlamak için bir kontrol olarak hizmet vermektedir. </li><li> Hücreler artı PI, parametreler ve kapıları (0.5-10 x 10 6 hücre) ayarlamak için bir kontrol olarak hizmet vermektedir. Bu gruptan PI negatif hücreler hücreleri fiziksel özelliklerine göre de sıralanabilir. </li><li> Ayrıca parametreleri ve kapıları (1-2 x 10 6 hücre) ayarlamak için bir kontrol olarak hizmet İkincil yalnız (İzotip kontrol) grubu. </li><li> Ulaşmak için PSA-NCAM için lekeli immün grubu (8-10 x 10 6 hücre)olgunlaşmamış nöronal hücre, bir daha arıtılmadan. Sıralama üzerine ölü hücreleri çıkarmak için, PI de bu gruba eklenir. </li></ul></li><li> Immün başlatmak için hücre 5 dakika boyunca 800 rpm (110 g) santrifüj edilir. Süpernatan kaldırılır ve hücre tam NSC orta 100 ul içinde tekrar süspanse edilir. </li><li> Fikoeritrin (PE) konjuge anti-PSA-NCAM antikoru PSA-NCAM için boyanmış üzere hücre süspansiyonu için 05-10 Ekim / ml x 10 hücreleri 6 arasında bir oranda eklenir. Aynı şekilde, bir PE konjuge fare IgG1 izotip kontrolü antikoru izotip kontrolü hücre süspansiyonu ilave edilir. Kullanılacak antikorun konsantrasyonunu ilgili antikor spesifikasyon kağıda talimatları izleyin. Hücre süspansiyonu daha sonra yavaşça karıştırılır ve karanlıkta 10-15 dakika oda sıcaklığında inkübe edilir. </li><li> Hücre süspansiyonu (PSA-NCAM ve izotip kontrolü tüpler), sonra 5 dakika boyunca 800 rpm (110 g) santrifüj edilir, süpernatan kaldırılır ve hücre yeniden suspe olan birkomple NSC ortamın 1 ml nded. </li><li> Numunelerinden aşırı un-sınırlı antikorlar kaldırmak için, adım 4 2-3 kez tekrarlanır. </li><li> Sonra tekrar süspanse Propidium iyodür (PI, Sigma, PBS içerisinde 500 ug / ml) hücre süspansiyonları, 1 ul / ml (hücreleri artı PI, izotip kontrolü ve bir konsantrasyonda eklenir, orta uygun bir hacminde hücre PSA- flow sitometri ile analiz edildiğinde NCAM lekeli örnekleri) ölü hücreleri çıkarmak. </li><li> Tam orta 1 ml içeren 15 ml steril falcon tüpleri farklı hücre popülasyonu doğru sıralanır hücreleri toplamak için hazırlanmıştır. </li></ol> 5.. Olgunlaşmamış Nöronlar floresan aktive Hücre Sıralama (FACS) <ol><li> FACS makine akım sitometri tesisi uzman teknisyen ile kullanım kılavuzuna talimat dayalı kurulur. </li><li> Fosfat (PBS) veya başka uygun bir çözüm dependin tamponluüretici talimatları g, 90 mikron meme aracılığıyla 28 PSI kılıf sıvısı olarak kullanılabilir. </li><li> Sistem üzerinde fark basınç sıralama tetik oranı 2500 olayları / saniye aşmadığı gibi ayarlanır. </li><li> Tek başına hücrelerinden hücre süspansiyonu grubu FACS makinesi aracılığıyla gerçekleştirilir. </li><li> İlk olarak, hücreler (olaylar), boyutu (Forward Scatter (FSC) ışık) karşı farklı hücre popülasyonu ayırt etmek için iç karmaşıklığı (Side Scatter (SSC) ışık) göre çizilir. Bunu yapmak için, FSC ve SSC için gerilim parametreleri hücreleri akış sitometrisi plot görülebilir şekilde ayarlanması gerekmektedir. </li><li> Hücre kümeleri ve çiftler dışlamak için, hücrelerin ilk forward scatter alanı (FSC-A) karşı forward scatter darbe genişliği (FSC-W) ve tek hücre nüfus 1 (P1) gibi kapılı olduğu dayalı çizilmiştir. Daha sonra P1 hücreleri yan dağılım alanı (SSC-A) karşı tarafında dağılım darbe genişliği (FSC-W) ve tek hücre gat bu kez dayalı çizilirnüfusu 2 (P2) olarak ed. Bu iki ardışık kapıları, kümeleri veya çiftleri (yüksek FSC darbe genişliği ve yüksek SSC darbe genişliği) kuran dahil edilmektedir. </li><li> Ölü veya zarar görmüş hücreleri dışlamak için, tek hücre (P2) FSC-A ve tek bir canlı hücre nüfus bağımlı olduğu karşısında PI reaktivite göre çizilir. </li><li> Tek canlı hücreleri hücre boyutu ve iç ayrıntı göre farklı hücre popülasyonu ayırt etmek için FSC karşı SSC göre çizilir. Bu aşamada iki ana hücre popülasyonlarının FSC düşük SSC düşük (P3) ve FSC yüksek SSC Yüksek (P4) hücre popülasyonu olarak gated vardır. </li><li> Sıralamak için FSC düşük SSC düşük nüfus ile PSA-NCAM immün-reaktif olgunlaşmamış nöronal hücrelerin kontrolden ilk FSC düşük SSC düşük nüfus (artı PI ve izotip kontrol hücreleri) grupları FSC-A versus PE immunoreaktivitesi göre çizilen ve olumsuz bir hücreleri (P5) kapılı, ve PSA-NCAM den sonra pozitif hücrelerlekeli grubu nüfus 6 (P6) olarak gated vardır. </li><li> Gerekli tüm kapıları ayarladıktan sonra ilgi hücreleri 1ml MGK besiyeri içeren 15 ml steril doku kültürü tüpler halinde sıralanır. </li><li> Sıralanır hücreleri daha sonra, 5 dakika süreyle 1200 rpm (240 g) santrifüj edilir. </li><li> Süpernatant atılır ve pellet gerçekleştirilir vasatı (pelet boyutuna bağlı olarak) ve hücre sayımı, uygun bir hacmi içinde tekrar süspanse edilir. </li><li> Hücreler daha sonra,% 5 FCS ve 20 ng / ml insan rekombinant BMP4 5 ile 20-30 x 10 3 hücrelik bir yoğunlukta / kuyu tam NSC orta 200-250 ul içinde, poli-L-Ornithine kaplanmış 96-kuyucuklu plaklar içinde kaplanir . </li></ol> Not: katın 96 kuyuları, poli-L-Ornithine çalışma solüsyonu için 100 ul (1.5 ml Poli-O ve steril PBS 8.5 ml), her oyuğa ilave edilir ve plaka, en azından biri için bir 37 ° C inkübatöründe inkübe edilir saat. Sonra, steril PBS ile Poli-O kaldırılır ve her oyuğa üç kez yıkanır(PBS 10 dakika süre ile de, her zaman kalsın). Poli-L-Ornithine / kuyu 24-kuyucuklu plaklar kullanılması durumunda çözeltisi çalışma 500 ul kullanabilir. <ol start="14"><li> Hücreler daha sonra sıralama soğuk% 4 paraformaldehit kullandıktan sonra farklı zaman noktalarında sabit ve farklı hücre popülasyonlarının doğru sıralanır hücre fenotipi değerlendirmek için uygun nöronal ve glial hücre belirteçleri için boyanmış edilir. </li></ol> 6. Temsilcisi Sonuçlar Neuroblast assay (NBA) farklılaşma kültürde, kaplama hücrelerin doku kültürü yüzeye tutunur ve bir tek tabaka olarak büyür. Ilk hücre kaplama yoğunluğuna bağlı olarak, kültürü 3-4 gün sonra% 90-95 konfluent kültür dönüşecektir. Bu aşamada, özellikle astrositik hücre monolayer üst 4,5 üzerinde küçük yuvarlak nöronal progenitör hücreler (Şekil 1) ile görüntülenebilir altında olabilir. Bir büyüme faktörü ücretsiz orta orta geçtikten sonra, nöronal progenitör hücrelerin başlatmakhızla bölünen ve 4-5 gün içinde astrositik tek tabakalı (Şekil 2) üstüne olgunlaşmamış neuroblast hücreleri kümeleri oluşturmak. Hücre boyutunu (FSC) ve iç ayrıntı (SSC) (Şekil 3) dayalı FSC düşük SSC düşük ve FSC yüksek SSC yüksek; farklılaşma aşamasında 4-5 gün ayrışmış NBA kültür Flow sitometri analizi, iki ana hücre popülasyonu gösterir. FSC yüksek SSC yüksek nüfus doğru sıralanır hücreler çoğunlukla iken sıralı hücrelerin immün floresan analizi, nöronal hücrelerin esas FSC düşük SSC düşük nüfus (bunların% 75&#39;den fazla β-III tubulin ifade ile) yer olduğunu gösteriyor immünoreaktif astrositler (Şekil 4) GFAP. Kadar yakın homojenlik (% 97) ve immatür nöronal hücrelerin saflaştırma FSC düşük SSC düşük nüfus (Şekil gelen PSA-NCAM IR hücrelerin pozitif seçimi ile elde edilebilir3, 4). E14 fare ganglionik tubera izole NSC&#39;lerde üretilen zenginleştirilmiş nöronal hücrelerin farklılaşması üzerine bir GABAerjik fenotip ve ekspres DARPP-32, orta dikenli nöronların bir göstergesi, (Şekil 5) edinirler. <img src="/files/ftp_upload/3712/3712fig1.jpg" alt="Şekil 1"/> Proliferasyon sahne 4. günde E14 fare sinir kök hücrelerinden Şekil 1. Neuroblast tahlil kültürü. Bu tek tabakalı kültüre düz astrositik hücreler (ok başları) altında ve üstünde yuvarlak nöronal progenitör hücreleri (oklar) oluşur. Orijinal büyütme; 20 x. <img src="/files/ftp_upload/3712/3712fig2.jpg" alt="Şekil 2"/> A) Faz kontrast, B) immünofloresan boyama:. Farklılaşma aşamasında 4. günde E14 fare sinir kök hücrelerinden Şekil 2 Neuroblast tahlil kültürü. Olgunlaşmamış nöronal hücrelerin (kümelenme Not A oklar (B A, GFAP boyama ok başları) üstüne B&gt; ve β III tubulin boyama). Orijinal büyütme; 20 x. <img src="/files/ftp_upload/3712/3712fig3.jpg" alt="Şekil 3"/> . Şekil 3 Temsilcisi tür araziler: A). FSC vs çiftler ve ölü hücreleri dışlanması önce SSC tür arsa. B, C). FSC ve SSC darbe genişlik. GE&#39;ye dayalı çiftler dışlanması için Sıralama araziler). Ölü ve hasar görmüş hücrelerin Dışlama Propidium İyodür immünreaktivite dayanmaktadır. E). Çiftler ve ölü hücreleri dışlandıktan sonra FSC vs SSC arsa, FSC düşük SSC düşük ve FSC yüksek SSC yüksek nüfus olarak adlandırılan iki ana nüfus gösteriyor. F, G). Sıralama araziler FSC düşük SSC düşük nüfus ile PSA-NCAM IR olgunlaşmamış hücreler izole etmek. Hücrelerinden Şekil 4. Temsilcisi mikrograflarından Kaplama sonrası farklı topluluklarda bir gün sıralanır. A) FSC düşük SSC düşük nüfus (bu hücreler nöronlar olan fazla% 75). B) FSC yüksek SSC yüksek nüfus (bu hücrelerin çoğunluğu astrositler vardır ). C) PSA-NCAM FSC düşük SSC düşük nüfus (hemen hemen tüm sıralı hücrelerin nöronlar vardır) + &#39;den sıralanmış hücreler. Orijinal Büyütme; 20 x. <img src="/files/ftp_upload/3712/3712fig5.jpg" alt="Şekil 5,"/> Şekil 5. Sıralandı immatür nöronlar GABAerjik nöronlar (A) ve ekspres DARPP-32 (B), orta dikenli nöronlar için bir belirteç içinde farklılık gösterir.

<ol>
	<li>Azari, H., Rahman, M., Sharififar, S., Reynolds, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Expansion+of+the+Adult+Mouse+Neural+Stem+Cells+Using+the+Neurosphere+Assay.">Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (45), e2393 (2010).</li><li>Azari, H., Sharififar, S., Rahman, M., Ansari, S., Reynolds, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishing+Embryonic+Mouse+Neural+Stem+Cell+Culture+Using+the+Neurosphere+Assay.">Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay.</a> J. Vis. Exp. (47), e2457 (2011).</li><li>Siebzehnrubl, F. A., Vedam-Mai, V., Azari, H., Reynolds, B. A., Deleyrolle, L. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+Characterization+of+Adult+Neural+Stem+Cells.">Isolation and Characterization of Adult Neural Stem Cells.</a> Methods. Mol. Biol. 750, 61-77 (2011).</li><li>Scheffler, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypic+and+functional+characterization+of+adult+brain+neuropoiesis.">Phenotypic and functional characterization of adult brain neuropoiesis.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 102, 9353-9358 (2005).</li><li>Azari, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+of+immature+neuronal+cells+from+neural+stem+cell+progeny.">Purification of immature neuronal cells from neural stem cell progeny.</a> PLoS One. 6, e20941-e20941 (2011).</li><li>Amariglio, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor-Derived+Brain+Tumor+Following+Neural+Stem+Cell+Transplantation+in+an+Ataxia+Telangiectasia+Patient.">Donor-Derived Brain Tumor Following Neural Stem Cell Transplantation in an Ataxia Telangiectasia Patient.</a> Plos Medicine. 6, 221-231 (2009).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Tanımlanan sinir hücre popülasyonu izole yeteneği (yani nöron, astrositler ve oligodendrosit) nöral kök hücrelerin klinik uygulama (NSC&#39;lerde) ile ilişkili bazı engelleri çözebilir. İlk olarak, tamamen donör hücrelerinin başlangıç ​​nüfusu karakterize mümkün kılmaktadır. İkincisi, bizim hastalığın doğasına ve aşama bağlı olarak, belirli bir oranı ile, belirli bir hücre tipinde ya da farklı hücre tipleri bir kombinasyonunu kullanmak için olanak sağlar. Son olarak, zenginleşt...

<table border="1"><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Tip </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> NeuroCult MGK Bazal Orta </td><td> Orta </td><td> Kök Hücre Teknolojileri </td><td> 05700 </td><td></td></tr><tr><td> NeuroCult MGK Proliferation Takviyeler </td><td> Orta takviyesi </td><td> Kök Hücre Teknolojileri </td><td> 05701 </td><td></td></tr><tr><td> % 0.05 tripsin-EDTA </td><td> Reaktif </td><td> Gibco </td><td> 25300-062 </td><td></td></tr><tr><td> Soya tripsin inhibitörü </td><td> Reaktif </td><td> Sigma </td><td> T6522 </td><td></td></tr><tr><td> Pen / Strep </td><td> Reaktif </td><td> Gibco </td><td> 15140-122 </td><td></td></tr><tr><td> * MEM </td><td> Reaktif </td><td> Gibco </td><td> 41500-018 </td><td> HEM bileşeni </td></tr><tr><td> * HEPES </td><td> Reaktif </td><td> Sigma </td><td> H4034 </td><td> HEM bileşeni </td></tr><tr><td> * Damıtılmış su </td><td> Reaktif </td><td> Gibco </td><td> 15230-147 </td><td></td></tr><tr><td> Hücre süzgeç </td><td> Elek </td><td> BD Falcon </td><td> 352340 </td><td></td></tr><tr><td> T25 şişesi </td><td> Kültür ware </td><td> Nalge Nunc uluslararası </td><td> 136196 </td><td></td></tr><tr><td> T80 şişesi </td><td> Kültür ware </td><td> Nalge Nunc uluslararası </td><td> 178905 </td><td></td></tr><tr><td> 15 ml&#39;lik tüplere </td><td> Kültür ware </td><td> BD Falcon </td><td> 352096 </td><td></td></tr><tr><td> 50 ml&#39;lik tüplere </td><td> Kültür ware </td><td> BD Falcon </td><td> 352070 </td><td&gt; </td></tr><tr><td> EGF </td><td> Büyüme faktörü </td><td> Ar-Ge </td><td> 2028-EG </td><td></td></tr><tr><td> b-FGF </td><td> Büyüme faktörü </td><td> Ar-Ge </td><td> 3139-FB </td><td></td></tr><tr><td> Heparin </td><td> Büyüme faktörü </td><td> Sigma </td><td> H4784 </td><td> PBS içinde yeniden </td></tr><tr><td> Anti-PSA-NCAM-PE </td><td> Antikor </td><td> Miltenyi Biotec </td><td> 130-093-274 </td><td></td></tr><tr><td> PE-Konjuge fare IgG1 </td><td> Izotip kontrolü antikoru </td><td> BD Pharminogen </td><td> 556029 </td><td></td></tr><tr><td> Heparin </td><td> Büyüme faktörü </td><td> Sigma </td><td> H4784 </td><td> PBS içinde yeniden </td></tr><tr><td> HrBMP-4 </td><td> Büyüme faktörü </td><td> Ar-Ge </td><td> 314-BP-010 </td><td></td></tr><tr><td> Poli-L-OrnitHine </td><td> Reaktif </td><td> Sigma </td><td> P4957 </td><td></td></tr><tr><td> Fötal Buzağı Serumu </td><td> Orta Supplement </td><td> Gibco </td><td> 10099-141 </td><td></td></tr><tr><td> GFAP </td><td> Antikor </td><td> DAKO </td><td> Z0334 </td><td></td></tr><tr><td> B-III tubulin </td><td> Antikor </td><td> Promega </td><td> G7121 </td><td></td></tr></table> * HEM, mix 1 x MEM 10 L paket ve 1M HEPES 160 ml yapmak ve distile su kullanılarak 8.75 L ses getirmek için. 7.4 &#39;e ayarlanır ve nihai PH 4 ° C&#39;de depolamak

the neuroblast assay: an assay for the generation and enrichment of neuronal progenitor cells from differentiating neural stem cell progeny using flow cytometry

Nöral kök hücreler (NSC&#39;lerde) izole ve genişletilebilir büyük ölçekli, neurosphere testi kullanılarak ve merkezi sinir sistemi (MSS) üç ana hücre tiplerine diferansiye; yani, astrositler, oligodendrosit ve nöronlar. Bu özellikler nöral kök ve progenitör hücreler, uyuşturucu taraması, neurotoxicology ve elektrofizyoloji gibi in vitro çalışmalar ve birçok nörolojik hastalıklarda hücre replasman tedavisi için kullanılması için hücre paha biçilmez bir yenilenebilir kaynak haline getiriyor. Ancak pratikte, MGK döl, nöronlar ve oligodendrosit düşük üretim ve farklılaşma klinik uygulamaları sınırlamak takip astrositlerin baskın heterojen. Burada, floresans aktive hücre ayırma (FACS) teknolojisi kullanılarak mürin NSC soyu ile olgunlaşmamış nöronların kuşak ve sonraki temizleme için yeni bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yöntemi kullanarak, zenginleştirilmiş nöronal progenitör hücre popülasyonu zekâ elde edilebilirherhangi bir fark astrosit ve iyi niyetli MGK kirlenme olduğu görüldü. Prosedürü MGK döl izole ve akım sitometri teknolojisini kullanarak fiziksel (boyut ve iç karmaşıklık) ve floresan özelliklerine göre olgunlaşmamış nöronal hücrelerin izolasyonu ve zenginleşmesi ile takip neurosphere testi kullanılarak E14 fare ganglionik tubera, genişletilmiş farklılaşma içerir. Genel olarak, MGK döl ayırt etmek neurospheres ve 6-8 gün üretmek için 5-7 gün sürer ve çok olgunlaşmamış nöronal hücrelerin saf izole.

Watch this Scientific Journal Video about The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytomet

The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

Bu video protokolü akış sitometrisi teknolojisi kullanılarak fiziksel (boyutu ve iç boyu) ve floresan özelliklerine bağlı olarak kök sinir hücrelerini yenilenebilir bir kaynaktan (NSC&#39;lerde) den nöronal progenitör hücre üretimi ve daha sonra saflaştırma için yeni bir yöntem gösterilmektedir.

Neuroblast Test: Akım Sitometri Kullanımı Farklılaşan Nöral Kök Hücre Döl nöronal Progenitör Hücrelerinin üretilmesi ve zenginleştirilmesi için bir Testi

Neural stem cells (NSCs) can be isolated and expanded in large-scale, using the neurosphere assay and differentiated into the three major cell types of ...

the-neuroblast-assay-an-assay-for-generation-enrichment-neuronal

Research

JoVE Journal

Neuroscience

15.4K Görüntüleme.  The University of Florida. Bu video protokolü akış sitometrisi teknolojisi kullanılarak fiziksel (boyutu ve iç boyu) ve floresan özelliklerine bağlı olarak kök sinir hücrelerini yenilenebilir bir kaynaktan (NSC'lerde) den nöronal progenitör hücre üretimi ve daha sonra saflaştırma için yeni bir yöntem gösterilmektedir.

Video: The Neuroblast Assay: An Assay for the Generation and Enrichment of Neuronal Progenitor Cells from Differentiating Neural Stem Cell Progeny Using Flow Cytometry

Isolation and Expansion of the Adult Mouse Neural Stem Cells Using the Neurosphere Assay

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a chemically defined serum-free culture system known as the neurosphere assay (NSA). In this assay, the majority of differentiated cell types die within a few days of culture but a small population of growth factor responsive precursor cells undergo active proliferation in the presence of epidermal growth factor (EGF) and/ basic fibroblastic growth factor (bFGF). These cells form colonies of undifferentiated cells called neurospheres, which in turn can be subcultured to expand the pool of neural stem cells. Moreover, the cells can be induced to differentiate, generating the three major cell types of the CNS i.e. neurons, astrocytes, and oligodendrocytes. This assay provides an invaluable tool to supply a consistent, renewable source of undifferentiated CNS precursors, which could be used for in vitro studies and also for therapeutic purposes.
This video demonstrates the NSA method to generate and expand NSCs from the adult mouse periventricular region, and provides technical insights to ensure one can achieve reproducible neurosphere cultures. The procedure includes harvesting the brain from the adult mouse, micro-dissection of the periventricular region, tissue preparation and culture in the NSA. The harvested tissue is first chemically digested using trypsin-EDTA and then mechanically dissociated in NSC medium to achieve a single cell suspension and finally plated in the NSA. After 7-10 days in culture, the resulting primary neurospheres are ready for subculture to reach the amount of cells required for future experiments.

This video protocol demonstrates the neurosphere assay method to generate and expand neural stem cells from the adult mouse periventricular region, and provides technical insights to ensure one can achieve reproducible neurosphere cultures.

Neurosphere Testi Yetişkin Fare Nöral Kök Hücre İzolasyonu ve Genişleme

Isolation and expansion of the putative neural stem cells (NSCs) from the adult murine brain was first described by Reynolds and Weiss in 1992 employing a ...

Nörobilim

Establishing Embryonic Mouse Neural Stem Cell Culture Using the Neurosphere Assay

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life span of the animal. They can potentially replace cells that are lost in the aging process or in the process of injury and disease. The existence of neural stem cells (NSCs) was first described by Reynolds and Weiss (1992) in the adult mammalian central nervous system (CNS) using a novel serum&#8208;free culture system, the neurosphere assay (NSA). Using this assay, it is also feasible to isolate and expand NSCs from different regions of the embryonic CNS. These in vitro expanded NSCs are multipotent and can give rise to the three major cell types of the CNS. While the NSA seems relatively simple to perform, attention to the procedures demonstrated here is required in order to achieve reliable and consistent results. This video practically demonstrates NSA to generate and expand NSCs from embryonic day 14-mouse brain tissue and provides technical details so one can achieve reproducible neurosphere cultures. The procedure includes harvesting E14 mouse embryos, brain microdissection to harvest the ganglionic eminences, dissociation of the harvested tissue in NSC medium to gain a single cell suspension, and finally plating cells in NSA culture. After 5-7 days in culture, the resulting primary neurospheres are passaged to further expand the number of the NSCs for future experiments.

This video protocol demonstrates the application of the neurosphere assay for the isolation and expansion of neural stem cells from the ganglionic eminences of embryonic day 14-mouse brain.

Neurosphere Testi kullanarak Embriyonik Fare Nöral Kök Hücre Kültürü oluşturulması

In mammalians, stem cells acts as a source of undifferentiated cells to maintain cell genesis and renewal in different tissues and organs during the life ...

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). Furthermore, this serum-free culture system has also been employed to expand stem cells and determine their frequency from a variety of tumors and normal tissues. It has been shown recently that a one-to-one relationship does not exist between neurosphere formation and NSCs. This suggests that the NSA as currently applied, overestimates the frequency of NSCs in a mixed population of neural precursor cells isolated from both the embryonic and adult mammalian brain. This video practically demonstrates a novel collagen based semi- solid assay, the neural-colony forming cell assay (N-CFCA), which has the ability to discriminate stem from progenitor cells based on their long-term proliferative potential, and thus provides a method to enumerate NSC frequency. In the N-CFCA, colonies &ge;2 mm in diameter are derived from cells that meet all the functional criteria of a NSC, while colonies &lt; 2mm are derived from progenitors. The N-CFCA procedure can be used for cells prepared from different sources including primary and cultured adult or embryonic mouse CNS cells. Here we use cells prepared from passage one neurospheres generated from embryonic day 14 mice brain to perform N-CFCA. The cultures are replenished with proliferation medium every seven days for three weeks to allow the plated cells to exhibit their full proliferative potential and then the frequency of neural progenitor and bona fide neural stem cells is calculated respectively by counting the number of colonies that are &lt; 2mm and the ones that are &ge;2mm in reference to the number of cells that were initially plated.

This video protocol demonstrates how to discriminate and enumerate bona fide neural stem cells in a mixed population of neural precursor cells using the neural colony-forming cell assay.

Hücre Testi Şekillendirme Sinir-Koloni: Sinir Progenitör Hücreler Bona Fide Sinir Kök Hücreler Ayırım Bir Testi

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding fundamental biological mechanisms. Striking progress has been particularly evident in Drosophila, whose extensive toolkit of mutants and transgenic lines provides a convenient model to study evolutionarily-conserved developmental and cell biological mechanisms. We are interested in understanding the mechanisms that control cell fate specification in the adult peripheral nervous system (PNS) in Drosophila. Bristles that cover the head, thorax, abdomen, legs and wings of the adult fly are individual mechanosensory organs, and have been studied as a model system for understanding mechanisms of Notch-dependent cell fate decisions. Sensory organ precursor (SOP) cells of the microchaetes (or small bristles), are distributed throughout the epithelium of the pupal thorax, and are specified during the first 12 hours after the onset of pupariation. After specification, the SOP cells begin to divide, segregating the cell fate determinant Numb to one daughter cell during mitosis. Numb functions as a cell-autonomous inhibitor of the Notch signaling pathway.
Here, we show a method to follow protein dynamics in SOP cell and its progeny within the intact pupal thorax using a combination of tissue-specific Gal4 drivers and GFP-tagged fusion proteins 1,2.This technique has the advantage over fixed tissue or cultured explants because it allows us to follow the entire development of an organ from specification of the neural precursor to growth and terminal differentiation of the organ. We can therefore directly correlate changes in cell behavior to changes in terminal differentiation. Moreover, we can combine the live imaging technique with mosaic analysis with a repressible cell marker (MARCM) system to assess the dynamics of tagged proteins in mitotic SOPs under mutant or wildtype conditions. Using this technique, we and others have revealed novel insights into regulation of asymmetric cell division and the control of Notch signaling activation in SOP cells (examples include references 1-6,7 ,8).

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

In this video, we describe a method for live cell imaging of asymmetrically dividing sensory organ progenitor cells and epidermal cells in intact Drosophila pupae

Bozulmamış Duyu Organ Öncü Hücreler Canlı hücre Görüntüleme Drosophila Pupa

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Isolation and Culture of Neural Crest Cells from Embryonic Murine Neural Tube

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to mesenchymal transition (EMT) and migrates throughout the embryo, giving rise to diverse cell types 1-3. NC also has the unique ability to influence the differentiation and maturation of target organs4-6. When explanted in vitro, NC progenitors undergo self-renewal, migrate and differentiate into a variety of tissue types including neurons, glia, smooth muscle cells, cartilage and bone. 
NC multipotency was first described from explants of the avian neural tube7-9. In vitro isolation of NC cells facilitates the study of NC dynamics including proliferation, migration, and multipotency. Further work in the avian and rat systems demonstrated that explanted NC cells retain their NC potential when transplanted back into the embryo10-13. Because these inherent cellular properties are preserved in explanted NC progenitors, the neural tube explant assay provides an attractive option for studying the NC in vitro. 
To attain a better understanding of the mammalian NC, many methods have been employed to isolate NC populations. NC-derived progenitors can be cultured from post-migratory locations in both the embryo and adult to study the dynamics of post-migratory NC progenitors11,14-20, however isolation of NC progenitors as they emigrate from the neural tube provides optimal preservation of NC cell potential and migratory properties13,21,22. Some protocols employ fluorescence activated cell sorting (FACS) to isolate a NC population enriched for particular progenitors11,13,14,17. However, when starting with early stage embryos, cell numbers adequate for analyses are difficult to obtain with FACS, complicating the isolation of early NC populations from individual embryos. Here, we describe an approach that does not rely on FACS and results in an approximately 96% pure NC population based on a Wnt1-Cre activated lineage reporter23. 
The method presented here is adapted from protocols optimized for the culture of rat NC11,13. The advantages of this protocol compared to previous methods are that 1) the cells are not grown on a feeder layer, 2) FACS is not required to obtain a relatively pure NC population, 3) premigratory NC cells are isolated and 4) results are easily quantified. Furthermore, this protocol can be used for isolation of NC from any mutant mouse model, facilitating the study of NC characteristics with different genetic manipulations. The limitation of this approach is that the NC is removed from the context of the embryo, which is known to influence the survival, migration and differentiation of the NC2,24-28.

Isolation of embryonic neural crest from the neural tube facilitates the use of in vitro methods for studying migration, self-renewal, and multipotency of neural crest.

Embriyonik Mürin Nöral Tüp çıkan sinirsel Crest Hücre İzolasyonu ve Kültür

The embryonic neural crest (NC) is a multipotent progenitor population that originates at the dorsal aspect of the neural tube, undergoes an epithelial to ...

Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a source of transplantable cells for regenerative applications after disease or accidents. Neural crest (NC) cells are the precursors for a large variety of adult somatic cells, such as cells from the peripheral nervous system and glia, melanocytes and mesenchymal cells. They are a valuable source of cells to study aspects of human embryonic development, including cell fate specification and migration. Further differentiation of NC progenitor cells into terminally differentiated cell types offers the possibility to model human diseases in vitro, investigate disease mechanisms and generate cells for regenerative medicine. This article presents the adaptation of a currently available in vitro differentiation protocol for the derivation of NC cells from hPSCs. This new protocol requires 18 days of differentiation, is feeder-free, easily scalable and highly reproducible among human embryonic stem cell (hESC) lines as well as human induced pluripotent stem cell (hiPSC) lines. Both old and new protocols yield NC cells of equal identity.

Neural crest (NC) cells derived from human pluripotent stem cells (hPSC) have great potential for modeling human development and disease and for cell replacement therapies. Here, a feeder-free adaptation of the currently widely used in vitro differentiation protocol for the derivation of NC cells from hPSCs is presented.

İnsan Pluripotent dan Sinir Crest Progenitör Hücreler besleyici ücretsiz Derivasyon Kök Hücre

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Flow Cytometry Protocols for Surface and Intracellular Antigen Analyses of Neural Cell Types

Flow cytometry has been extensively used to define cell populations in immunology, hematology and oncology. Here, we provide a detailed description of protocols for flow cytometric analysis of the cluster of differentiation (CD) surface antigens and intracellular antigens in neural cell types. Our step-by-step description of the methodological procedures include: the harvesting of neural in vitro cultures, an optional carboxyfluorescein succinimidyl ester (CFSE)-labeling step, followed by surface antigen staining with conjugated CD antibodies (e.g., CD24, CD54), and subsequent intracellar antigen detection via primary/secondary antibodies or fluorescently labeled Fab fragments (Zenon labeling). The video demonstrates the most critical steps. Moreover, principles of experimental planning, the inclusion of critical controls, and fundamentals of flow cytometric analysis (identification of target population and exclusion of debris; gating strategy; compensation for spectral overlap) are briefly explained in order to enable neurobiologists with limited prior knowledge or specific training in flow cytometry to assess its utility and to better exploit this powerful methodology.

We provide a detailed description of a protocol for flow cytometric analysis of surface antigens and/or intracellular antigens in neural cell types. Critical aspects of experimental planning, step-by-step methodological procedures, and fundamental principles of flow cytometry are explained in order to enable neurobiologists to exploit this powerful technology.

Sinir Hücresi Tipleri Yüzey Akış Sitometri Protokolleri ve Hücre içi Antijen Analizleri

Flow cytometry has been extensively used to define cell populations in immunology, hematology and oncology. Here, we provide a detailed description of ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. They successively generate transit amplifying cells (TACs) and neuroblasts that differentiate into neurons once they integrate the olfactory bulbs. Emerging fluorescent activated cell sorting (FACS) techniques have allowed the isolation of NSCs as well as their progeny and have started to shed light on gene regulatory networks in adult neurogenic niches. We report here a cell sorting technique that allows to follow and distinguish the cell cycle dynamics of the above-mentioned cell populations from the adult SVZ with a LeX/EGFR/CD24 triple staining. Isolated cells are then plated as adherent cells to explore in details their cell cycle progression by time-lapse video microscopy. To this end, we use transgenic Fluorescence Ubiquitination Cell Cycle Indicator (FUCCI) mice in which cells are red-fluorescent during G1 phase due to a G1 specific red-Cdt1 reporter. This method has recently revealed that proliferating NSCs progressively lengthen their G1 phase during aging, leading to neurogenesis impairment. This method is easily transposable to other systems and could be of great interest for the study of the cell cycle dynamics of brain cells in the context of brain pathologies.

We report a Fluorescent Activated Cell Sorting (FACS)-based method to isolate neural stem cells (NSCs) and their progeny from the subventricular zone (SVZ) of the adult mouse brain. Applied to Fluorescence Ubiquitination Cell Cycle Indicator (FUCCI) transgenic mice, it allows the study of cell cycle progression by live imaging.

Hücre Yetişkin Fare subventricular Bölgesinden Nöral Kök ve Progenitör Hücreler Sıralama ve Hücre Döngüsü Dynamics Canlı görüntüleme

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...

Enumeration of Neural Stem Cells Using Clonal Assays

Neural stem cells (NSCs) have the ability to self-renew and generate the three major neural lineages &#8212; astrocytes, neurons and oligodendrocytes. NSCs and neural progenitors (NPs) are commonly cultured in vitro as neurospheres. This protocol describes in detail how to determine the NSC frequency in a given cell population under clonal conditions. The protocol begins with the seeding of the cells at a density that allows for the generation of clonal neurospheres. The neurospheres are then transferred to chambered coverslips and differentiated under clonal conditions in conditioned medium, which maximizes the differentiation potential of the neurospheres. Finally, the NSC frequency is calculated based on neurosphere formation and multipotency capabilities. Utilities of this protocol include the evaluation of candidate NSC markers, purification of NSCs, and the ability to distinguish NSCs from NPs. This method takes 13 days to perform, which is much shorter than current methods to enumerate NSC frequency.

Neural stem cells (NSCs) refer to cells&#160;which can self-renew and differentiate into the three neural lineages. Here, we describe a protocol to determine NSC frequency in a given cell population using neurosphere formation and differentiation under clonal conditions.

Nöral Kök Hücre Sayım klonal Tahliller Kullanma

Neural stem cells (NSCs) have the ability to self-renew and generate the three major neural lineages &#8212; astrocytes, neurons and oligodendrocytes. ...

Identifying Cell Surface Markers of Primary Neural Stem and Progenitor Cells by Metabolic Labeling of Sialoglycan

Neural stem and progenitor cells (NSPCs) are the cellular basis for the complex structures and functions of the brain. They are located in specialized niches in vivo and can be isolated and expanded in vitro, serving as an important resource for cell transplantation to repair brain damage. However, NSPCs are heterogeneous and not clearly defined at the molecular level or purified due to a lack of specific cell surface markers. The protocol presented, which has been previously reported, combines a neural-endothelial co-culture system with a metabolic glycan labeling method to identify the surface sialoglycoproteome of primary NSPCs. The NSPC-endothelial co-culture system allows self-renewal and expansion of primary NSPCs in vitro, generating a sufficient number of NSPCs. Sialoglycans in cultured NSPCs are labeled using an unnatural sialic acid metabolic reporter with bioorthogonal functional groups. By comparing the sialoglycoproteome from self-renewing NSPCs expanded in an endothelial co-culture with differentiating neural culture, we identify a list of membrane proteins that are enriched in NSPCs. In detail, the protocol involves: 1) set-up of an NSPC-endothelial co-culture and NSPC differentiating culture; 2) labeling with azidosugar per-O-acetylated N-azidoacetylmannosamine (Ac4ManNAz); and 3) biotin conjugation to modified sialoglycan for imaging after fixation of neural culture or protein extraction from neural culture for mass spectrometry analysis. Then, the NSPC-enriched surface marker candidates are selected by comparative analysis of mass spectrometry data from both the expanded NSPC and differentiated neural cultures. This protocol is highly sensitive for identifying membrane proteins of low abundance in the starting materials, and it can be applied to marker discovery in other systems with appropriate modifications

Presented here is a protocol that combines an in vitro neural-endothelial co-culture system and metabolic incorporation of sialoglycan with bioorthogonal functional groups to expand primary neural stem and progenitor cells and label their surface sialoglycoproteins for imaging or mass-spectrometry analysis of cell surface markers.

Primer Nöral Kök ve Progenitor Hücrelerinin Hücre Yüzey Belirteçlerinin Sialoglycan'ın Metabolik Etiketlemesi ile Belirlenmesi

Neural stem and progenitor cells (NSPCs) are the cellular basis for the complex structures and functions of the brain. They are located in specialized ...