Bu çalışma Regione Veneto (Ricerca Sanitaria Finalizzata n.292/2008 ve Ricerca Sanitaria Finalizzata 2009) hibe yoluyla kısmen desteklenmiştir. Yazarlar, insan oküler küreler kullanımı 2009/2010 özet verileri için, Dr C. Griffoni teşekkür ederim.

1. Kornea in situ olarak eksizyonu Oküler Küre gelen <ol><li> Yaklaşık 15 dakika kullanmadan önce laminar hava akımı kabini açın. % 70 izopropil alkol kullanarak laminar akım temizleyin. Bu tür cerrahi kap ve maske gibi kişisel koruyucu giysiler giyin. El ve ön kol fırçalayın ve steril bir havlu ile kurulayın. Aseptik teknik kullanarak steril eldiven ve önlük veya kollu giyin. </li><li> Aseptik olarak steril bir alet tepsisine yerleştirerek steril alan ayarlayın. Aletler steril olduğundan emin olun. Steril alet paketi açın ve herhangi bir kontaminasyon kaçınarak steril bölgeye çevirin. </li><li> Bu kullanım kolaylığı için steril alanın kenarına bitişik olacak şekilde göz küreleri içeren şişelerde (göz kavanoz) ile birlikte tüm steril malzeme ve aletler (Tablo 2) yerleştirin. </li><li> Tablo 3&#39;te belirtildiği gibi önceden hazırlanmış koruma / saklama ortamı ile şişeleri etiketlemek ve koyunI-PVP ile birlikte laminar hava akışı kapağı (iyot-polivinilpirrolidon), sodyum tiosülfat ve bir steril salin çözelti yüzeyinde m PBS (fosfat tamponlu tuzlu su). </li><li> Onlar 4 ° C&#39;de buzdolabı korunur gibi oküler doku ve çözümleri normal oda sıcaklığına ulaşmasını sağlayın Tekrar ısınma / soğutma çevrimleri kaçının. Çözüm kapakları ve iç yüzü gözü kavanoz kavanoz kendi yanında bakacak tutun. </li><li> Steril forseps kullanarak göz kavanoz tüller ve süngerleri çıkarın. Oküler küreler dekontamine için 2 dakika süreyle steril I-PVP% 0.5 &#39;lik dünya daldırın. Steril alanın dışında, steril tepsinin kapağındaki iki forseps yerleştirin. Steril forseps başka bir çift kullanarak 1 dakika boyunca sodyum tiyosülfat% 0.1 &#39;dünya aktarın. Aynı forseps kullanarak, steril serum fizyolojik (PBS) içeren şişe için dünya transfer onu işletilmektedir kadar terk. T diğer oküler dünya için aynı işlemi tekrarlayıno Aynı donör. </li><li> Laminer hava akımı motor kapağının altında çalışarak, ortaya korneadan steril kornea bırakarak gazlı bez (bandaj) ve yaklaşık 5 mm sklera kullanarak dünyanın sarın. Göz ampul sadece yeterli basıncı muhafaza elinde olabilir. Doku tamamını cerrahisi sırasında nemli tutulmalıdır. </li><li> Forseps konjonktivanın tüm nihai kalıntıları çıkarmak için makas ile birlikte kullanılır. Diğer araçlardan ayrı yukarıdaki işlemi için kullanılan aletler tutun. Limbus bölgede 3-4 mm skleral kesi gerçekleştirmek için bir neşter bıçak kullanın, sonra altta yatan uveal dokuyu perfore kaçınarak, 360 ° kesi uzatmak veya korneanın normal eğrilik deformasyona neden. Vitreus vücut salgısı kaçınarak dört küçük boşluklar bırakarak dört büyük kesiler kesin. Dört boşluklar başka doku hiçbir kaldırma sağlamak kesilir. </li><li> Küçük skleral plakların varlığı kesme engel olabilir, bu nedenle comp emin olunmikrocerrahi makas ile skleral eksizyonu Lete. Bu işlem koroid, retina ve vitreus zarar vermeden yapılmalıdır. </li><li> Bu tamamlanmasını sağlamak üzere kesi inceleyin. Insizyon sadece kornea ile yazışmalarda noktada siliyer organlarına doğru corneo-skleral rim yapışır yapıldıysa. </li><li> Steril alanın merkezine yakın sarılı oküler dünyanın aşağı ayarlayın. Aşağı ve uzak corneo-skleral düğmesini siliyer cisim-koroid çekmek için eksizyon için kullanılan skleral jant sabit ve elini tutmak için forseps kullanılarak kornea kaldırılması. </li><li> Yavaşça corneo-skleral düğmesinden kalan yapışıklıklar ayırın. Ne çapraz kornea gerginliğe neden ne de ön kamara üzerine aşağı gerilemek olanak verebilecek bir şekilde corneo-skleral rim çekin. </li><li> Kornea endotel hücre yoğunluğu bir tryp kullanarak bir hipotonik çözüm ve hücre ölümleri kontrol edilir kullanılarak kontrol ediliryaklaşık 1 dakika ile hücreleri için bir mavi boyama daha sonra bir optik mikroskop altında sayıldı ve hücre / mm 2 olarak ölçülür. Posterior Petri plakanın alt bakmalıdır ise ön kamara kapağını bakmalıdır. Endotel hücre yoğunluğu 100X büyütme altında objektif bir ızgara kullanarak manuel sayılabilir. İtalya&#39;da transplantasyonu için asgari kabul sayımı 2200 endotel hücre / mm 2 &#39;dir. </li><li> Tablo 3&#39;te gösterildiği RT (oda sıcaklığında) muhafaza önceden hazırlanmış kornea depolama ortamına bir kornea tırnak kullanarak corneo-skleral rim aktarın. </li><li> Doğal kristalin lens için arka kamara inceleyin. Sklera hazırlanmış ise, dünyanın tüm uvea kalıntıları ve vitreus çıkarın. Dikkatle kakışıyor ve aseptik teknik kullanılarak, ilgili gözünü kavanoza kalan arka segment dönmek. Yeni enstrümanlar kullanarak diğer dünya için prosedürü tekrarlayın. Kornea zekâ Fixh kornea pençe ve 31 medya depolama (organ kültürü) altında muhafaza ° C Şekil 1a&#39;da gösterilen çıkarıldı kornea, daha sonra keratoplasti ya araştırmalar için kullanılabilir. </li><li> Uygun çöp bidonları içine gereksiz malzeme ve biyo-tehlikeli atık bertaraf edin. Iş% 70 izopropil alkol sprey kullanarak bittikten sonra çalışma alanı temizleyin. </li><li> 28 gün sonra korneanın tüm değerlendirme parametreleri tutar, varsa [böyle morfolojisi gibi, hücre sayımı, şeffaflık, kalınlık ve mikrobiyoloji testleri - bakteriyel ve BACTEC 9240 cihaz (Becton Dickinson, Milan, İtalya) kullanarak mantar], daha sonra sevk edilebilir Tablo 4&#39;te gösterildiği gibi, taşıyıcı kullanılarak hastanelerde. Kornea kaldırıldı laminar hava akımı kabin altında orta taşıma depolama konulmalıdır. </li><li> Olarak, depolama sırasında, kornea nakli için gerekli her zamanki boyutundan daha kalın olur, göz bankaları kalınlığı azaltmak için de şişme maddeler kullanmayın. Bizulaşım ortamda normal boyutuna geri kornea almak için% 6 dekstran T500 kullanın. % 4-8 dekstran T500 kullanılabilir rağmen,% 6 bizim için iyi hizmet etmiştir. Bu daha kolay cerrahlar hemen onu alırsınız gibi kornea nakli için yapar. </li></ol> 2. Kornea eksizyon Oküler Küre gelen Retina Eviserasyon <ol><li> Çıkarılması takiben, kornea morfolojisi ve endotelyal hücre yoğunluğuna bağlı nakli ya araştırmalar için seçilir ve 31 depolama veya korunması orta yerleştirilir ° C. Oküler dünyanın kalan, ardından cerrahi amaçlı gibi sklera izolasyon gibi daha sonra kullanmak için işlenmiş araştırma için retinanın vb edilir </li><li> Retina eksizyonu öncesinde, oküler dünyanın bozulmamış ve kaldırılır sklera bir parçası sadece korneanın olduğundan emin olun. Jelatinimsi vitreus dışarı salgılayan ise bir retina doku kaldırmak için zor olur. </li><li> Donör aşağıda 65 yaş ise, sklera olduğunuserolojik testler sonrasında cerrahi amaçlı steril PBS altında korunmuş. Bu durumda, sklera, kesilmemiş sadece camsı gövdesi kaldırılır ve tüm sklerasına korunur. </li><li> Retina eksizyon için, steril forseps ve makas kullanılarak optik sinir doğru hareket sklera kornea tarafı küçük bir kesik veya kesi ile başlar. Forseps kullanarak skleranın parçası tutun ve düz vitreus vücuda zarar kaçınarak parçası kısmen kesme optik sinir doğru makasla kesti. </li><li> Birlikte sıkışmış olarak Koroid plaklar sklera ayrılmalıdır. Koroid dokusu ortaya çıkarmak için tüm sklera kesin. Sklera tamamen kesilir sonra, optik sinir yakınında keserek vitreus vücudun geri kalan ile sklera ayırın. Şekil 2a&#39;da gösterildiği gibi koroidin kaplı camsı gövdenin tamamını bilya görülebilir. </li><li> İki steril forseps kullanma biri ile toplayıp yavaşça koroid tabakasının uzaklaştırılmasıforseps çifti ve diğer çıkarmadan. Alternatif olarak, koroid tabakası makas kullanılarak kaldırılabilir ancak retinaya zarar verebilir, bu ideal kaçınılmalıdır. Kısmen koroid tabakası çıkarın ve kaldırma kolaylaştırmak için kesti. </li><li> Koroid tabakası kaldırıldıktan sonra, retina şeffaf bir tabaka açık olarak Şekil 2b&#39;de gösterilmektedir görülecektir. Koroid tabakası da kaldırılmış olabilir bir iç Bruch membranı vardır ama bir göz ile tespit etmek zordur. </li><li> Benzer şekilde, Şekil 2 c &#39;de gösterildiği gibi retinal tabakası kaldırma için iki forseps kullanabilir. Bu optik sinir yakınında eksize eğer retinada yüksek miktarda izole etmek kolaydır. Şekil 2B&#39;de gösterildiği gibi, gözün tüm tabakalar artık görülebilir. </li><li> Retina dokusu kaldırıldıktan sonra, farklı amaçlar için kullanılabileceğini ve korunması için kullanılan bu nedenle sonraki adımları ve koşulları buna göre değişebilir. Örneğin,retina dokusunun RNA stabilizasyonu reaktifleri (RNAlater gibi) veya lizis tamponu (RNA ya da DNA izolasyonu için), dispase / tripsin (hücre izolasyonu için), sabitleme çözümleri (önceden için parafin veya OCT dokuların embed içeren tüpler yerleştirilebilir immünhistokimya). </li><li> Tüm çalışma alanı temizleyin ve% 70 izopropil alkol sprey kullanarak temizleyin. </li></ol> 3. Temsilcisi Sonuçlar Şekil 1a da görüldüğü gibi corneo-skleral rim skleral jant ve endotel morfolojisi, genellikle penetran keratoplasti için kullanılan kornea bu tür gerekli miktarı ile doğru şekilde eksize kornea olduğunu. Eksize korneanın ön stromada donukluk varlığı ile bozuksa, korneanın endotel keratoplasti / arka lameller keratoplasti (stroma bir parçası olan endotel) için kullanılabilir. Endotel tabakasının zarar görmüş veya endotel hücre yoğunluğu &lt;2200 hücre / mm 2 ise (Bu takdirde, Oysaalian standart), kornea ön lameller keratoplasti (anterior stromada bir parçası olan epitel) için kullanılabilir. Endotel hücre sayımı gerekli az ise kornea tamamen bozuksa Şekil 1b, 3b ve 3c veya atılır gösterildiği gibi, bu araştırma için kullanılır olabilir, oysa, korneanın anterior lameller keratoplasti veya araştırma için kullanılabilir. Hasar doku ilgilenmedikleri bir nedeni olabilir, stromal ya Descemet endotel izleri yol önce katarakt ameliyatları, hastanın yaşam vb sırasında fiziksel yaralanma gelişimi nedenle, bunun için optik mikroskop altında yarık lambası ve sonra her doku kontrol etmek için gerekli olur ince izleri / kıvrımlar / müfrezeleri. Kornea genellikle organ kültürü (yaklaşık 31 ° C), genellikle Avrupa ülkeleri ya hipotermik koşulları kullanılmıştır (yaklaşık 4 ° C), genellikle kullanılan ABD. Olarak iki farklı koşullar altında muhafaza edilir Bu baraj yenilenmesine yardımcı olarak biz organ kültürü kullanınyaşlı epitel hücreleri, yüksek bir post mortem zaman yeniden canlandırmak endotel hücre kontrol etmek, bir cerrahi planlama için yeterli bir pencere sağlar 4 haftalık bir depolama süresi, vb kornea mikrobiyolojik (bakteriyel ve fungal) ve serolojik test için yeterli zaman verir de 7 gün boyunca taşıma ortamı muhafaza edilebilir. Sklera tüm koroidal plaklar nazik kaldırılması sağlanması parçası kısmen kesilmiş olabilir. Şekil 4 &#39;de gösterildiği gibi, optik sinir, koroid veya retina keskin kesilirken camsı sıvı ifraz olabilir. RNA analiz için eksize eğer retina kısa sürede dokular eksize gibi RNAlater muhafaza edilmelidir. Genellikle ° taze Eppendorf tüpleri (güvenli kilit boruları, 2 ml) C ye kadar kullanılan veya sevk kuru ile koroid ve retina tabakasının 1X1 cm eksize edilir ve 4 az 24 saat süreyle RNAlater içinde tutmak sonra -80 ° C altında korunur buz. Retina dokusunun uzak iris gelen optik sinir yakınında iki forseps kullanılarak eksize edilmelidirretina alınırken veya diğer pigmentli yapıları ile kirlenmesini önlemek için ve RNA gibi hemen koruyarak konteyner aktarılması gerekiyor siliyer marjı kararsız alır. <img src="/files/ftp_upload/3765/3765fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1 bir iyi bir de kötü kalite kornea arasında karşılaştırma: a.) Düzgün eksize korneanın. Böyle bir kornea genellikle 4 hafta süreyle organ kültürü altında muhafaza edilir. Mikrobiyolojik (BACTEC 9240 cihaz kullanarak) ve morfolojik (hücre ölüm tespiti için tripan mavisi ile boyanan hücrelerin ve 100X büyütme ile mikroskop altında hücreleri inceleyerek) muayene hastane (Şekil 3a) taşındığında önce gerçekleştirilir; b) bükük kornea , bunlar da yüksek Descemet kıvrımları ve yarık lamba mikroskopta incelenir yüksek endotel hücre hasarına bağlı greft reddedilmesine yol açmaktadır. Böyle bir kornea genellikle res için kullanılırrama veya atılır. <img src="/files/ftp_upload/3765/3765fig2.jpg" alt="Şekil 2" /> Şekil 2. Retina dokusunun doğru bir eksizyonu sağlamak için kullanılan yöntem. A) 95 mm kavisli veya künt ucu steril makas ve 0.70 mm diş steril forseps ile yönetilen 100 mm 11X2 ile 24mm bıçak kullanarak oküler Dünya&#39;dan sklera Dissecting. Sklera forseps makas kullanırken optik sinir doğru düz bir şekilde kesilmesi ile bir tarafı tutarak kesilmelidir. Koroid tabakası artık kolaylıkla görülecektir; b) 0.70 mm diş steril forseps tarafından yönetilen iki adet 100 mm 11X2 kullanarak, koroid yatan şeffaf retina tabakasının ortaya bir apart yırtmadan tarafından kaldırılır; c) Şeffaf retina tabakası çok dikkatli yakın eksize edilir Aynı forseps kullanılarak vitreus sıvı atılımı olmadan optik sinir. Forseps Her iki retinanın her tarafında tutmak gerekir ve doku hafifçe başlıyorum çıkarılmalıdırg optik sinir yakınında retina dokusunun iyi bir miktar elde etmek için, kornea doğru hareket. Doku farklı boyutlarda halinde kesilmiş ve analiz deneyler için kullanılan olabilir; d) kornea çıkarılmasını takiben gözün Farklı katmanlar bu şekilde görülebilir. Koroid vücut gözün diğer bölümlerine zarar vermeden retina tarafından ilk takip kaldırılır. <img src="/files/ftp_upload/3765/3765fig3.jpg" alt="Şekil 3" /> Şekil 3. Bir optik mikroskobun 100x büyütme altında incelendi hücre yoğunluğu ve morfolojisi farklı karşılaştırılması. A) İyi endotel hücre yoğunluğu (&gt; 2200 hücre / mm 2) ve morfolojisi (az polimorfizm, düşük dejenerasyon, hiçbir distrofi ve% 0 nakli için uygun olan bir korneada ölüm); b) Zayıf endotel hücre yoğunluğu (yaklaşık 1.200-1.400 hücre / mm 2) ve morfoloji (çok yüksek polimorfizm ve Degenyaklaşık% 30-40 mortalite ile birlikte hücrelerin tüketmekte) Tripan mavisi sonra gözlenir; oküler Dünya&#39;dan kornea alınırken c) endotelyal hücrelerin bir kısmı, endotel tabakasının ayrılması nedeniyle zarar görmektedir. Bu tripan mavisi ile bölgede boyanmış hücrelerin ölüm gözlenmesi ile teyit edilir, d) Descemet kıvrımları, bükme çapraz kornea gerginlik yaratma, eksizyon sırasında yoğun vb araçları kullanarak nedeniyle kornea kötü kullanımından oluşur. Şekil korneanın çevresi ve optik bölge arasında bulunan kalın gelişmiş iatrojenik kıvrımlar gösterir. <img src="/files/ftp_upload/3765/3765fig4.jpg" alt="Şekil 4" /> Koroid ve retinal dokulara Şekil 4. Hasarlar zamanla korneanın eksize ederken vitreus sıvısının vücuttan atılır. Retina zor kaliteli bir doku wi tüketim yapma vitreus karışmış olurkontaminasyon thout. <img src="/files/ftp_upload/3765/3765table1.jpg" alt="Tablo 1" /> Tablo 1. Fondazione Banca de 2009 ve 2010 sırasında insan göz küreleri kullanılarak yapılan faaliyetler çeşitli özeti Occhi (Venezia, İtalya) Degli. Dokuların yaklaşık% 60 ve böylece bilimsel ve tıbbi araştırmalar için (yaklaşık% 40) oküler küreler yüksek bir sayı bırakarak nakli için kullanıldı. <img src="/files/ftp_upload/3765/3765fig1sup.jpg" alt="Ek Şekil 1" /> Ek Şekil 1. Insan gözü 5 anatomisi. Insan gözü farklı yerlerinde dokuların yerini kesin olarak takip için kullanılır, bu şekilde belirtilir.

<ol>
	<li>Fay, A., Goldman, L., Ausiello, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diseases+of+the+visual+system.">Diseases of the visual system.</a> Cecil Medicine. , (2007).</li><li>Parekh, M., Megaw, R., Ray-Chaudhuri, A., Ahmad, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Patents+in+Limbal+Stem+Cell+Biology.">Patents in Limbal Stem Cell Biology.</a> Recent patents on Regenerative Medicine. 1, 207-212 (2011).</li><li>Pharm, U. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Eye:+The+physiology+of+human+perception.">The Eye: The physiology of human perception.</a> Britannica educational publishing. 36, 19-27 (2011).</li><li>Lang, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Ophthalmology: A pocket textbook atlas. , 115-117 .</li><li>Liesbeth, P. e. l. s. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+Culture:+The+method+of+choice+for+preservation+of+human+donor+corneas.">Organ Culture: The method of choice for preservation of human donor corneas.</a> Br. J. Ophthalmol. 81, 523-525 (1997).</li><li>Meyer, J. S., Howden, S. E., Wallace, K. A., Verhoeven, A. D., Wright, L. S., Capowski, E. E., Pinilla, I., Martin, J. M., Tian, S., Stewart, R., Pattnaik, B., Thomson, J., Gamm, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optic+vesicle-like+structures+derived+from+human+pluripotent+stem+cells+facilitate+a+customized+approach+to+retinal+disease+treatment.">Optic vesicle-like structures derived from human pluripotent stem cells facilitate a customized approach to retinal disease treatment.</a> Stem Cells. , (2011).</li><li>Trifunovic, D., Karali, M., Camposampiero, D., Ponzin, D., Banfi, S., Marigo, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-resolution+RNA+expression+atlas+of+retinitis+pigmentosa+genes+in+human+and+mouse+retinas.">A high-resolution RNA expression atlas of retinitis pigmentosa genes in human and mouse retinas.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 49, 2330-2336 (2008).</li><li>Mora, P., Montanini, L., Ferrari, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Retina. 30, 1555 (2010).</li><li>Claybon, A., Bishop, A. J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+of+a+Mouse+Eye+for+a+Whole+Mount+of+the+Retinal+Pigment+Epithelium.">Dissection of a Mouse Eye for a Whole Mount of the Retinal Pigment Epithelium.</a> J. Vis. Exp. (48), e2563 (2011).</li><li>Skeie, J. M., Tsang, S. H., Mahajan, V. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evisceration+of+Mouse+Vitreous+and+Retina+for+Proteomic+Analyses.">Evisceration of Mouse Vitreous and Retina for Proteomic Analyses.</a> J. Vis. Exp. (50), e2795 (2011).</li></ol>

Yazarlar çıkar çatışma var.

Doğru eksizyon ve kornea kalınlığı ve retina dokularında uygun korunması, gerekse bu endotel hasarı veya Descemet kıvrım sayısı yüksek gibi küçük kusurları greft sıcaklık değişimlerinin ise korneanın hatası veya yanlış ele retina dokuların bütünlüğünü tehlikeye atabilir yol açabilir gibi kritik öneme sahiptir. Bu yazının amacı, kornea kalınlığı ve retina dokularında transplantasyon veya araştırma amaçlı kullanım tehlikeye hasar veya tadilat neden olmadan, en iyi şekilde iz...

Kornea ve retinanın eksizyonu için malzemeler. <table border="1"><tbody><tr><td> Ürün tanımı </td><td> Boyutlar </td><td> Firma / Kurum </td></tr><tr><td> Güvenlikli neşter atılabilir </td><td> Blade boyutu 15 </td><td> Swann-Morton </td></tr><tr><td> Steril bandajlar </td><td> 5 cm X 5 cm, 8 katlı, 5 adet </td><td> Artsana </td></tr><tr><td> Steril tek kullanımlık tıbbi havlu </td><td> 35 X 50 cm </td><td> U.Jet </td></tr><tr><td> Steril makas </td><td> Bıçakları 24 mm / toplam uzunluk. Künt, 95 mm kavisli </td><td> e.janach </td></tr><tr><td> Steril forseps </td><td> Paslanmaz çelik -100 mm 11 X 2 0.70 mm diş tarafından yönetildi </td><td> e.janach </td></tr><tr><td> Kornea pençe - Tek kullanımlık tıbbi cihaz </td><td></td><td> NIIOS (Hippocratech) </td></tr&gt; <tr><td></td><td> Hazırlıklar </td><td></td></tr><tr><td> PBS </td><td> [10x] 900 ml d / w (saf su) 100 ml PBS </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> Na-tiyosülfat </td><td> PBS [1x] 1 litre 1 gr Na-tiyosülfat </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr><tr><td> I-PVP </td><td> 1 litre d / w 5 gm I-PVP </td><td> Sigma-Aldrich </td></tr></tbody></table> Tablo 2. Tablosu kornea ve retina çıkarılması ve bunların alınan şirket için kullanılan malzemeler açıklanmaktadır. Depolama ortamı için malzeme (2000 mL). <table border="1"><tbody><tr><td> Bileşenleri </td><td> Satıcı </td><td> Katalog numarası </td><td> Konsantrasyon </td><td> Miktar </td></tr><tr><td> MEM(1X) sıvı </td><td> Invitrogen </td><td> 32360-034 </td><td></td><td> 1900 ml&#39;lik </td></tr><tr><td> Sodyum piruvat </td><td> Invitrogen </td><td> 11360-039 </td><td> 1mM (10ml / l) </td><td> 20 ml </td></tr><tr><td> L-glutamin </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-032 </td><td> 2mm (10ml / l) </td><td> 20 ml </td></tr><tr><td> Antimikotik / Antibiyotik </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> A5955-20ML </td><td> 10 ml / l </td><td> 20 ml </td></tr><tr><td> Yeni doğan buzağı serumu </td><td> Invitrogen </td><td> 26010-74 </td><td> 2 (% 20 ml / l) </td><td> 40 ml </td></tr></tbody></table> Tablo 3. Depolama ortamı için malzemeler. Depolama ortamı hazırlanması Bir kavanozun içinde yukarıda verildiği gibi belirli konsantrasyonları kullanılarak tüm malzemeyi ekleyin ve iyice karıştırın. Onları filtrelemeperistaltik bir pompa yardımı ile 0.2 mikron filtre gözenek büyüklüğüne (Millipore, Milan, İtalya) kullanarak. Oda sıcaklığında şişe içinde orta muhafaza. Taşıma ortamı için malzeme (2000 mL). <table border="1"><tbody><tr><td> Bileşenleri </td><td> Satıcı </td><td> Katalog numarası </td><td> Konsantrasyon </td><td> Miktar </td></tr><tr><td> MEM (1X) sıvı </td><td> Invitrogen </td><td> 32360-034 </td><td></td><td> 1800 ml&#39;lik </td></tr><tr><td> Sodyum piruvat </td><td> Invitrogen </td><td> 11360-039 </td><td> 1mM (10 ml / l) </td><td> 20ml </td></tr><tr><td> L-glutamin </td><td> Invitrogen </td><td> 25030-032 </td><td> 2mm (10 ml / l) </td><td> 20ml </td></tr><tr><td> Yeni doğan buzağı serumu </td><td> Invitrogen </td><td> 26010-74 </td><td> 2 (% 20 ml / l) </td&gt; <td> 40 ml </td></tr><tr><td> Dekstran T500 </td><td> Pharmacosmos </td><td> 551005004007 </td><td> % 6 (60 g / L) </td><td> 120 g / l </td></tr></tbody></table> Tablo 4. Taşıma ortamı için malzeme. Taşıma ortamı hazırlanması MEM ~ 1.5 litre Dekstran% 6 ekleyin ve gece boyunca bekletin. Medyada geri kalan malzemeleri ekleyin ve bir vakum pompası ile 0.2 mikron filtre (Millipore, Milan, İtalya) kullanarak filtre. Oda sıcaklığında şişe içinde orta muhafaza.

a simplified technique for in situ excision of cornea and evisceration of retinal tissue from human ocular globe

Enükleasyon dünyanın geri kalanı rahat bırakmak, bir kadavra donörden oküler dünyanın alma işlemidir. Eksizyon oküler dünya onu ayrı keserek, oküler dokularda, özellikle kornea alma anlamına gelir. Eviserasyon retina gibi burada sözü edilen iç organlarının çıkarılması işlemidir. Oküler dünya kornea, sklera, vitreus, lens, iris, retina, koroid, kaslar vb (Ek Şekil 1) oluşur. Bir hasta kornea hasarı sorunum olduğunda, kornea kaldırılması gerekiyor ve sağlıklı bir keratoplastic ameliyatları tarafından nakledilen gerekir. Genetik bozukluklar veya retinal fonksiyon kusurları görme bozabilir. İnsan göz küreleri göz gibi bankacılık, insan kornea veya sklera nakli ve oküler dokular üzerinde araştırma gibi çeşitli cerrahi işlemler için kullanılabilir. Ancak, insan kornea kalınlığı ve retina eksizyon pek fazla bilgi Muhtemelen, l nedeni varinsan dokularına imited erişilebilirlik. Benzer prosedürler açıklayan çalışmaların çoğu hayvan modelleri üzerinde gerçekleştirilir. Araştırma bilim adamları, insan göz gelişimi, homeostasis ve işlevine bilgilerini genişletmek için uygun bir şekilde diseke ve iyi korunmuş oküler dokuların durumu güveniyor. Biz bunların yaklaşık% 40 (Tablo 1) araştırma amaçlı kullanılan vardır out oküler küreler yüksek miktarda aldıkça, tüketim teknikleri tanımlayarak, bu dokular üzerindeki deneylerin büyük miktarda gerçekleştirmek ve bunları düzenli olarak muhafaza edebiliyoruz. Kornea retina üzerine ışık iletimi sağlar ve bu amaçla her zaman şeffaflık iyi derecede tutmalıdır avasküler bir dokudur. Kornea içinde, kök hücrelerin bir rezervuar olduğu limbus bölgede, epitel hücrelerinin yeniden yardımcı olur ve kornea şeffaflık ve açıklık korumak konjonktiva aşırı kısıtlar. Boyutu ve th<html> bunlardan birini değişiklikler dalıp, belirsiz vizyon yol açabileceği gibi korneanın ickness, net görüş için önemlidir. Kornea 5 katmandan oluşur; endotelyum a) epitel, b) Bowman tabakası, c) stroma, d) Descemet membran ve E). Tüm katmanları net bir vizyon 4,5,6 sağlamak için düzgün çalışması gerekir. Koroid Bruch membranı ile iç sınırlanmış sklera ve retina arasındaki ara tunik, ve gözün kan akışından sorumludur. Koroidin da retinanın 5,6 dış tabakaları için sıcaklık ve malzeme besleme düzenleyen yardımcı olur. Bir photoreceptive parçası olmayan bir alıcı parçası: retinanın oküler küre (Ek Şekil 1) arka kapsar ve iki bölümden oluşur sinir dokusunun bir katmandır. Retina, kornea ve lens gelen ışığı almak için yardımcı olur ve sonunda optik sinir 5,6 yardımı ile beyne iletilir kimyasal enerjiye dönüştürür. bu doku amaçlayan araştırma amaçlı vazgeçilmez olarak ove_content &quot;&gt; Bu yazının amacı, insan oküler küreler gelen kornea kalınlığı ve retina dokuların diseksiyonu için bir protokol sağlamaktır. komşu dokuları ile çapraz bulaşmayı önleme ve RNA bütünlüğünün korunması temel bir öneme sahiptir (i) oküler dokuların transcriptome, (ii) karakterize rejeneratif tıp projeleri için kök hücre izolasyonu, ve (iii) etkilenen / Normal bireylerden dokular arasındaki histolojik farklılıkları değerlendirmek. Bu yazıda tekniği tarif şu anda kaldırmak için kullanabileceğiniz kornea, bir göz Dünya&#39;dan koroid ve retina dokularında. Burada insan göz küresi ve kornea kalınlığı ve retina dokularının eksize diseksiyonu için ayrıntılı bir protokol sağlar. beraberindeki Video araştırmacılar alımı için uygun bir tekniği öğrenmek için yardımcı olacak düzenli bulması zor değerli insan dokularının.

Watch this Scientific Journal Video about A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe at JoVE.com

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

Kağıt kadavra donör oküler Dünya&#39;dan retina dokuları içini temizlemek için basitleştirilmiş bir tüketim kornea tekniği ve açıklar. Tekniği oküler dünyanın diğer dokulara zarar vermeden nakli, cerrahi veya araştırma amaçlı kullanılmak üzere özel tüketim kaliteli dokular için yardımcı olacaktır Burada anlatılan.

Için Basitleştirilmiş Tekniği<em&gt; Yerinde</emİnsan Oküler Globe gelen Kornea ve Retina Doku Eviserasyon of&gt; eksizyonu

Enucleation is the process of retrieving the ocular globe from a cadaveric donor leaving the rest of the globe undisturbed. Excision refers to the ...

a-simplified-technique-for-situ-excision-cornea-evisceration-retinal

Research

JoVE Journal

Medicine

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

20.7K Görüntüleme.  Fondazione Banca Degli Occhi del Veneto O.N.L.U.S.. Kağıt kadavra donör oküler Dünya'dan retina dokuları içini temizlemek için basitleştirilmiş bir tüketim kornea tekniği ve açıklar. Tekniği oküler dünyanın diğer dokulara zarar vermeden nakli, cerrahi veya araştırma amaçlı kullanılmak üzere özel tüketim kaliteli dokular için yardımcı olacaktır Burada anlatılan.

Video: A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

Technique to Collect Fungiform (Taste) Papillae from Human Tongue

The sense of taste is critical for human life. It informs the body about the quality of food that will be potentially ingested and stimulates metabolic processes that prepare the alimentary canal for digestion. Steady progress is being made towards understanding the early biochemical and molecular events underlying taste transduction (for a review, Breslin and Spector, 20081). However, progress to date has largely resulted from animal models. Yet, since marked differences in receptor specificity and receptor density vary among species, human taste transduction will only be understood by using human taste tissue. Here we describe a biopsy technique to collect human fungiform papillae, visible as rounded pink anterior structures, about 0.5 mm in diameter that contain taste buds. These biopsied papillae are used for several purposes including the isolation of viable taste bud cells, in situ hybridization, immunohistochemistry and, through techniques of molecular biology, the identification of taste-specific novel proteins.

Technique to Collect Fungiform Taste Papillae from Human Tongue

Knowledge of molecular mechanisms underlying gustatory transduction has recently enjoyed significant advances, largely due to using animal models. However, the wide diversity in taste sensitivity and specificity among mammals warrants studies in human tissue. We describe a biopsy technique to collect living taste cells from the papillae on human tongue.

İnsan Dil Mantar (Tat) papilla toplayın Tekniği

The sense of taste is critical for human life. It informs the body about the quality of food that will be potentially ingested and stimulates metabolic ...

Tıp

A Simplified Technique for Producing an Ischemic Wound Model

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work well in non-ischemic wounds may not work in human diabetic wounds because vasculopathy is one major factor that hinders healing of these wounds. We published an article in 2007 describing a rabbit ear ischemic wound model created by a minimally invasive surgical technique. Since then, we have further simplified the procedure for easier operation. On one ear, three small skin incisions were made on the vascular pedicles, 1-2 cm from the ear base. The central artery was ligated and cut along with the nerve. The whole cranial bundle was cut and ligated, leaving only the caudal branch intact. A circumferential subcutaneous tunnel was made through the incisions, to cut subcutaneous tissues, muscles, nerves, and small vessels. The other ear was used as a non-ischemic control. Four wounds were made on the ventral side of each ear. This technique produces 4 ischemic wounds and 4 non-ischemic wounds in one animal for paired comparisons. After surgery, the ischemic ear was cool and cyanotic, and showed reduced movement and a lack of pulse in the ear artery. Skin temperature of the ischemic ear was 1-10 &deg;C lower than that on the normal ear and this difference was maintained for more than one month. Ear tissue high-energy phosphate contents were lower in the ischemic ear than the control ear. Wound healing times were longer in the ischemic ear than in the non-ischemic ear when the same treatment was used. The technique has now been used on more than 80 rabbits in which 23 were diabetic (diabetes time ranging from 2 weeks to 2 years). No single rabbit has developed any surgical complications such as bleeding, infection, or rupture in the skin incisions. The model has many advantages, such as little skin disruption, longer ischemic time, and higher success rate, when compared to many other models. It can be safely used in animals with reduced resistance, and can also be modified to meet different testing requirements.

We have developed a minimally invasive technique to create a rabbit ischemic ear wound model by dividing the central artery and nerve and the cranial neurovascular bundle. A subcutaneous tunnel then cuts all subcutaneous tissues. This procedure causes minimal skin disruption and can be safely used in diabetic animals.

Bir İskemik Yara Model üretmek için Basitleştirilmiş Tekniği

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work ...

Multi-electrode Array Recordings of Human Epileptic Postoperative Cortical Tissue

Epilepsy, affecting about 1% of the population, comprises a group of neurological disorders characterized by the periodic occurrence of seizures, which disrupt normal brain function. Despite treatment with currently available antiepileptic drugs targeting neuronal functions, one third of patients with epilepsy are pharmacoresistant. In this condition, surgical resection of the brain area generating seizures remains the only alternative treatment. Studying human epileptic tissues has contributed to understand new epileptogenic mechanisms during the last 10 years. Indeed, these tissues generate spontaneous interictal epileptic discharges as well as pharmacologically-induced ictal events which can be recorded with classical electrophysiology techniques. Remarkably, multi-electrode arrays (MEAs), which are microfabricated devices embedding an array of spatially arranged microelectrodes, provide the unique opportunity to simultaneously stimulate and record field potentials, as well as action potentials of multiple neurons from different areas of the tissue. Thus MEAs recordings offer an excellent approach to study the spatio-temporal patterns of spontaneous interictal and evoked seizure-like events and the mechanisms underlying seizure onset and propagation. Here we describe how to prepare human cortical slices from surgically resected tissue and to record with MEAs interictal and ictal-like events ex vivo.

We here describe how to perform multi-electrode array recordings of human epileptic cortical tissue. Epileptic tissue resection, slice preparation and multi-electrode array recordings of interictal and ictal events are demonstrated in detail.

İnsan Epileptik Ameliyat sonrası Kortikal Doku Çok elektrot Dizi Kayıtlar

Epilepsy, affecting about 1% of the population, comprises a group of neurological disorders characterized by the periodic occurrence of seizures, which ...

Isolation and Excision of Murine Aorta; A Versatile Technique in the Study of Cardiovascular Disease

Cardiovascular disease is a broad term describing disease of the heart and/or blood vessels. The main blood vessel supplying the body with oxygenated blood is the aorta. The aorta may become affected in diseases such as atherosclerosis and aneurysm. Researchers investigating these diseases would benefit from direct observation of the aorta to characterize disease progression as well as to evaluate efficacy of potential therapeutics. The goal of this protocol is to describe proper isolation and excision of the aorta to aid investigators researching cardiovascular disease. Isolation and excision of the aorta allows investigators to look at gross morphometric changes as wells as allowing them to preserve and stain the tissue to look at histologic changes if desired. The aorta may be used for molecular studies to evaluate protein and gene expression to discover targets of interest and mechanisms of action. This technique is superior to imaging modalities as they have inherent limitations in technology and cost. Additionally, primary isolated cells from a freshly isolated and excised aorta can allowing researchers to perform further in situ and in vitro assays. The isolation and excision of the aorta has the limitation of having to sacrifice the animal however, in this case the benefits outweigh the harm as it is the most versatile technique in the study of aortic disease.

Pathology of the aorta can lead to severe morbidity and mortality, therefore research of disease progression and potential therapies is warranted. Here, we present a protocol to isolate and excise the murine aorta to aid researchers in their investigation of cardiovascular disease.

İzolasyon ve Kemirgen Aort eksizyonu; Kardiyovasküler Hastalığı Çalışmasında Çok Yönlü Tekniği

Cardiovascular disease is a broad term describing disease of the heart and/or blood vessels. The main blood vessel supplying the body with oxygenated ...

Establishment of Human Epithelial Enteroids and Colonoids from Whole Tissue and Biopsy

The epithelium of the gastrointestinal tract is constantly renewed as it turns over. This process is triggered by the proliferation of intestinal stem cells (ISCs) and progeny that progressively migrate and differentiate toward the tip of the villi. These processes, essential for gastrointestinal homeostasis, have been extensively studied using multiple approaches. Ex vivo technologies, especially primary cell cultures have proven to be promising for understanding intestinal epithelial functions. A long-term primary culture system for mouse intestinal crypts has been established to generate 3-dimensional epithelial organoids. These epithelial structures contain crypt- and villus-like domains reminiscent of normal gut epithelium. Commonly, termed &#8220;enteroids&#8221; when derived from small intestine and &#8220;colonoids&#8221; when derived from colon, they are different from organoids that also contain mesenchyme tissue. Additionally, these enteroids/colonoids continuously produce all cell types found normally within the intestinal epithelium. This in vitro organ-like culture system is rapidly becoming the new gold standard for investigation of intestinal stem cell biology and epithelial cell physiology. This technology has been recently transferred to the study of human gut. The establishment of human derived epithelial enteroids and colonoids from small intestine and colon has been possible through the utilization of specific culture media that allow their growth and maintenance over time. Here, we describe a method to establish a small intestinal and colon crypt-derived system from human whole tissue or biopsies. We emphasize the culture modalities that are essential for the successful growth and maintenance of human enteroids and colonoids.

We describe a method to establish human enteroids from small intestinal crypts and colonoids from colon crypts collected from both surgical tissue and biopsies. In this methodological article, we present the culture modalities that are essential for the successful growth and maintenance of human enteroids and colonoids.

Tüm Doku ve Biyopsi İnsan Epitelyal Enteroids ve Colonoids kurulması

The epithelium of the gastrointestinal tract is constantly renewed as it turns over. This process is triggered by the proliferation of intestinal stem ...

Corneal Epithelial Abrasion with Ocular Burr As a Model for Cornea Wound Healing

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to injury. In fact, the most common type of eye injury found in clinic is a corneal abrasion. Here, we utilize an ocular burr to induce an abrasion resulting in removal of the corneal epithelium in vivo on anesthetized mice. This method allows for targeted and reproducible epithelial disruption, leaving other areas intact. In addition, we describe the visualization of the abraded epithelium with fluorescein staining and provide concrete advice on how to visualize the abraded cornea. Then, we follow the timeline of wound healing 0, 18, and 72 h after abrasion, until the wound is re-epithelialized. The epithelial abrasion model of corneal injury is ideal for studies on epithelial cell proliferation, migration and re-epithelialization of the corneal layers. However, this method is not optimal to study stromal activation during wound healing, because the ocular burr does not penetrate to the stromal cell layers. This method is also suitable for clinical applications, for example, pre-clinical test of drug effectiveness.

This protocol describes a method to inflict an abrasion to the ocular surface of the mouse, and to follow the wound healing process thereafter. The protocol takes advantage of an ocular burr to partially remove the surface epithelium of the eye in anaesthetized mice.

Kornea epitel aşınma oküler Burr ile bir Model olarak kornea için yara iyileşme

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to ...

Effect of Artificial Tear Formulations on the Metabolic Activity of Human Corneal Epithelial Cells after Exposure to Desiccation

Artificial lipid-containing tear formulations are developed to reduce tear evaporation by the restoration of a deficient tear lipid layer. Artificial tear formulations that prevent cell desiccation will result in ocular surface protection and the maintenance of cell metabolic activity. During dehydration, cells undergo the process of loss of metabolic activity and subsequently cell death. This work describes a method for assessing the efficacy of artificial tear formulations. The metabolic dye (i.e., alamarBlue) changes from a low fluorescent molecule resazurin to a fluorescent molecule resorufin in viable cells. The biological performance of an artificial tear formulation is measured as the ability of the formulation to (a) maintain cell viability and (b) provide cell protection from desiccation. Growth media and saline are used as controls for the cell viability/desiccation tests. Cells are incubated with test solutions for 30 min and then desiccated for 0 or 5 min at 37 &#176;C and 45% relative humidity. Cell metabolic activity after initial exposure and after cell desiccation is then determined. The results show the comparative effects of eye drop formulations on cell metabolic activity and desiccation protection. This method can be used to test dry eye formulations that are designed to treat individuals with evaporative dry eye.

The purpose of this protocol is to evaluate if different artificial tear formulations can protect human corneal epithelial cells from desiccation using an in vitro model. After exposure to artificial tear formulations and desiccation, human corneal epithelial cells are assessed for metabolic activity.

Yapay Gözyaşı Formülasyonlarının Desiccation'a Maruz Kalma sonrası İnsan Kornea Epitel Hücrelerinin Metabolik Aktivitesi Üzerine Etkisi

Artificial lipid-containing tear formulations are developed to reduce tear evaporation by the restoration of a deficient tear lipid layer. Artificial tear ...

Characterization of a Novel Human Organotypic Retinal Culture Technique

Previous human organotypic retinal culture (HORC) models have utilized detached retinas; however, without the structural support conferred by retinal pigment epithelium-choroid (RPE-choroid) and sclera, the integrity of the fragile retina can easily be compromised. The aim of this study was to develop a novel HORC model that contains the retina, RPE-choroid and sclera to maintain retinal integrity when culturing retinal explants.
After cutting circumferentially along the limbus to remove iris and lens, four deep incisions were made to flatten the eyecup. In contrast to previous HORC protocols, a trephine was used to cut through not only the retina but also the RPE-choroid and sclera. The resultant triple-layered explants were cultured for 72 h. Hematoxylin and Eosin staining (H&#38;E) was used to assess anatomical structures and retinal explants were further characterized by immunohistochemistry (IHC) for apoptosis, M&#252;ller cell integrity and retinal inflammation. To confirm the possibility of disease induction, explants were exposed to high glucose (HG) and pro-inflammatory cytokines (Cyt), to mimic diabetic retinopathy (DR). The Luminex magnetic bead assay was used to measure DR-related cytokines released into the culture medium.
H&#38;E staining revealed distinct retinal lamellae and compact nuclei in retinal explants with the underlying RPE-choroid and sclera, while retinas without the underlying structures exhibited reduced thickness and severe nuclei loss. IHC results indicated absence of apoptosis and retinal inflammation as well as preserved M&#252;ller cell integrity. The Luminex&#160;assays showed significantly increased secretion of DR-associated pro-inflammatory cytokines in retinal explants exposed to HG + Cyt relative to baseline levels at 24 h.
We successfully developed and characterized a novel HORC protocol in which retinal integrity was preserved without apoptosis or retinal inflammation. Moreover, the induced secretion of DR-associated pro-inflammatory biomarkers when exposing retinal explants to HG + Cyt suggests that this model could be used for clinically translatable retinal disease studies.

This study aims to develop a novel human organotypic retinal culture (HORC) model that prevents compromising retinal integrity during explant handling. This is achieved by culturing the retina with the overlying vitreous and the underlying retinal pigment&#160;epithelium-choroid (RPE-choroid) and sclera.

Yeni bir İnsan Organotipik Retina Kültürü Tekniğinin Karakterizasyonu

Previous human organotypic retinal culture (HORC) models have utilized detached retinas; however, without the structural support conferred by retinal ...

Retinal Organoid Induction System for Derivation of 3D Retinal Tissues from Human Pluripotent Stem Cells

Retinal degenerative diseases are the main causes of irreversible blindness without effective treatment. Pluripotent stem cells that have the potential to differentiate into all types of retinal cells, even mini-retinal tissues, hold huge promises for patients with these diseases and many opportunities in disease modeling and drug screening. However, the induction process from hPSCs to retinal cells is complicated and time-consuming. Here, we describe an optimized retinal induction protocol to generate retinal tissues with high reproducibility and efficiency, suitable for various human pluripotent stem cells. This protocol is performed without the addition of retinoic acid, which benefits the enrichment of cone photoreceptors. The advantage of this protocol is the quantification of EB size and plating density to significantly enhance the efficiency and repeatability of retinal induction. With this method, all major retinal cells sequentially appear and recapitulate the main steps of retinal development. It will facilitate downstream applications, such as disease modeling and cell therapy.

Here we describe an optimized retinal organoid induction system, which is suitable for various human pluripotent stem cell lines to generate retinal tissues with high reproducibility and efficiency.

İnsan Pluripotent Kök Hücrelerinden 3D Retinal Dokuların Türetilmesi için Retinal Organoid İndüksiyon Sistemi

Retinal degenerative diseases are the main causes of irreversible blindness without effective treatment. Pluripotent stem cells that have the potential to ...

Human Subcutaneous Adipose Tissue Sampling Using a Mini-Liposuction Technique

Studies on adipose tissue are useful in understanding metabolic and other conditions. Human subcutaneous adipose tissue is accessible. With appropriate training and strict adherence to aseptic technique, subcutaneous adipose samples can be safely and efficiently obtained in a non-clinical setting by researchers. Following the administration of local anesthetic lateral to the umbilicus, a 14 G needle attached to a 5 or 10 mL syringe is inserted through the skin into the subcutaneous tissue. Under suction, the syringe is moved in a reciprocating, slicing motion to isolate fragments of adipose tissue. Withdrawing the plunger is enough to ensure that adipose tissue fragments are aspirated through the needle into the syringe. A single biopsy can collect about 200 mg of tissue. This biopsy technique is very safe for both participants and research staff. Following the biopsy, participants can resume most everyday activities, although they should avoid swimming and overly strenuous activities for 48 h to avoid excessive bleeding. Participants can safely undergo 2 biopsies within a single day, meaning that the technique can be applied in before-after acute intervention studies.

The manuscript and associated video demonstrate a percutaneous biopsy technique to obtain samples of subcutaneous adipose tissue from areas surrounding the umbilicus. This method is a low-risk and efficient way to investigate a range of parameters (e.g., gene or protein expression, enzyme activity, lipid content) within adipose tissue.

Mini Liposuction Tekniği ile İnsan Subkutan Yağ Dokusu Örneklemesi

Studies on adipose tissue are useful in understanding metabolic and other conditions. Human subcutaneous adipose tissue is accessible. With appropriate ...