Serebral iskemi-reperfüzyonun bu iki damarlı oklüzyon fare modeli inmenin patofizyolojisini araştırabilir. Bu model iskemik beyin ve serebral iskemi-reperfüzyon sonrası davranış açığı bağışıklık hücrelerinin sızan beynin toplu istikrarlı bir enfarkt hacmi neden olacaktır. Bu modelde kortikal bölgelerde enfarktüs etüt ve mortalite oranı düşüktür.
Ligasyon MCAO reperfüzyon modeli distal MCA boyutunu ortaya çıkarmak için kraniyotomi gerektirdiğinden, boyutu kolayca teyit edilebilir, ve muayene distal MCAO kan akımı işlem sırasında bozuldu olup olmadığını basittir. Farelere ameliyata kadar su ve yiyeceklere ücretsiz erişim sağlayın. Cerrahi aletleri otoklav ve cerrahi tablo ve ekipman dezenfekte etmek için% 70 etanol kullanın.
Sekiz ila 12 haftalık bir fareyi anestezi ettikten sonra, sağlam bir ayak tutamını kullanarak test edildiğinde pedal refleksi olmadığından emin olun. Fare anestezi altında yken göz kuruluğu önlemek için veteriner merhem kullanın. Kan basıncını izlemek için, ilk saç kaldırmak ve daha sonra rektal sıcaklık ve arteriyel kan gazları izlemek için non-invaziv kan basıncı sistemi ve fizyolojik bir izleme sistemi kullanın.
Fareye subkutan bir profilaktik antibiyotik enjekte edin. Daha sonra, fareyi ısıtma yastığının üzerindeki supine pozisyonuna yerleştirin. Cildi ortaya çıkarmak için, ventral boyun bölgesinde ve sağ göz ile sağ kulak arasındaki bölgede kürkü tıraş etmek için elektrikli makaslar kullanın.
Epilasyon kremi ile hayvanın vücudundan kürk temizleyin ve% 70 etanol ile cerrahi site dezenfekte. Sonra iris makas kullanarak boyun bir santimetre uzunluğunda orta hat kesi kesti. Iris forceps ile, dikkatle fiziksel yaralanmaya neden olmadan vagus sinirleri ücretsiz ortak karotis arter incelemek, ve arter izole etmek için 5-0 ipek sütür kullanın.
Daha sonra, sağ göz ve sağ kulak arasındaki orta noktada kafa derisi 0.3 santimetrelik bir kesi yapmak için iris makas kullanın. Mikro makas kullanarak, zigomatik ve squamosal kemik ortaya çıkarmak için temporalis kas kesti. Bir stereo diseksiyon mikroskobu altında fare yerleştirin ve sağ tarafta distal orta serebral arter üzerinde doğrudan iki mililitrelik bir delik oluşturmak için bir mikro matkap kullanın.
Sağ taraftaki distal MCA'nın gövdesini inkâr etmek için 10-0 dikiş kullanın ve sağ cca'yı tıkamak için travmatik olmayan bir anevrizma klipsi kullanın. Iskemi istenilen süre sonra, MCA ve CCA kan akışını geri yüklemek için dikiş ve anevrizma klip sök. Kafaya deri kesisini kapatmak için bir dikiş klipsi kullanın ve servikal deri kesilerini cerrahi tutkalla kapatın.
Ağrı kesici için deri altı buprenorfin enjekte edin. Isıtma yastığıüzerinde hayvanın vücut ısısını 36,5 artı veya eksi 0,5 santigrat derecede koruyun ve anesteziden tamamen iyileşene kadar gözetimsiz bırakmayın veya diğer hayvanların şirketine iade etmeyin. Son olarak, fareyi otoklav kafesine yerleştirin, böylece tamamen iyileştikten sonra su ve yiyeceklere serbestçe erişebilsin.
Kafatası ortaya çıkarmak için anestezi ve kafası kesilmiş farenin başının derisinde bir kesi yapmak için iris makas kullanın. Sonra frontal kemiğin ön kesmek için işletim makas kullanın, ve iris makas ile, sagittal sütür boyunca kafatası kesti. Bir kemik rongeur ile, frontal ve parietal kemik kenara itin ve beyin ortaya çıkarmak.
Beyni çıkarın ve fare beyin matrisine yerleştirin. İki mililitrelik koronal dilimler elde etmek için jilet kullanın ve 50 mililitrelik tüpler% 2 TTC beş mililitre ile dolu yerleştirin. Koronal dilimler elde etmek için fare beyin matris kullanırken, kesme boyutu farklı beyinlerde aynı olmalıdır.
Kesme boyutu beyin dilimlerinin boyutunu etkiler, bu da enfarktüs boyutunun hesaplanmasını etkiler. 37 santigrat derece 10 dakika için% 2 TTC ve 1X PBS ile beyin dilimleri leke ve sonra% 10 formalin ile iki kez durulayın. 24 saat boyunca oda sıcaklığında% 10 formalin beyin dilimleri düzeltin.
Fazla formalin imal etmek için kağıt üzerinde kağıt üzerinde beyin dilimleri kuruduktan sonra, temiz bir plastik slayt üzerinde düzenlemek, kaudal onları yönlendirme, ve başka bir temiz plastik slayt ile kaplayın. Bir tarayıcı kullanarak slaydı tarayın. Slaydın ters çevirin ve ters tarafı tazyin.
Önce görüntü dosyasını açarak ve görüntü için ölçeği ayarlayarak, her bölümün enfarktüs alanını hesaplamak için ImageJ yazılımını kullanın. Ardından enfarktüs alanını seçmek için freehand seçimini kullanın ve ilgi alanını ölçmek için ilgi alanı yatırım getirisi yöneticisini kullanın. Son olarak, her bölüm için enfarktüs alanlarını toplamı ve toplam enfarktüs hacmini tahmin etmek için sonucu kesit kalınlığıile çarpın ve el yazmasında açıklandığı gibi istatistiksel analizi tamamlayın.
Bu MCAO reperfüzyon prosedürü sırasında iskemi süresinin artması sağ MCA bölgesinin serebral korteksinde farklı iskemi kaynaklı infarkt hacmi ve nöronal kayıp üretti. Ayrıca, iskemi MCAO reperfüzyon sonra 48 saat hayvanın lokomotor aktivitesini azalttı. Serebral iskemi-reperfüzyonsonra, periferik bağışıklık hücrelerinin bir yığın iskemik beynin ipsilateral hemisfer sızmış.
Buna ek olarak, bu iki damarlı oklüzyon modeli MCAO modeli ile karşılaştırıldığında, infarkt hacimleri önemli ölçüde farklı değildi. Mikro matkap kafatasında bir delik oluştururken dikkatle kullanılmalıdır. Uygunsuz hareketle, MCA'dan kanamaya neden olan kolay.
MCA zarar görmemeli ve ligasyon işleminden önce ve sonra kanamadan kaçınılmalıdır. MCA oklüzyonu ve reperfüzyon durumu lazer Doppler tarafından kontrol edilebilir. Bu yöntem MCA kan akışının durumunu teyit edebilir.
