Biz görsel modeli yardım için video üretimi ve kurgusu ve Carleton Dr Martin Bertrand Immersive Media Studio / Sinir Rejenerasyon Laboratuvar uzman teknik yardım için Carleton Immersive Media Studio Marc Leonard teşekkür etmek istiyorum. Yazarlar minnetle Dr Marilyn Keaney ve Ottawa Hayvan Bakım ve Veteriner Hizmetleri Üniversitesi&#39;nde adanmış tüm personelin uzman tavsiyesi kabul. Bu çalışma SALB, Yaşlanma CIHR Enstitüsü ve SALB ve SF, Kanada Vakfı Nörodejeneratif Lipidomics Sağlık Araştırma / CIHR Eğitim Programı (TGF 96121) Stratejik Eğitim Girişimi, Sağlık Araştırma Kanada Enstitüsü (CIHR, MOP 62826) tarafından finanse edilmiştir SF, SF Ontario Yenilik Güven ve SF Autodesk Araştırma Yenilik. ACM CIHR Banting ve iyi doktora ödülü aldı. NV Yaşlanma ve Nörodejeneratif Lipidomics yılında CIHR Eğitim Programı Enstitüsü sonrası profesyonel bursu alır.

1. Hazırlanması Reaktifler <ol><li> Gerekinceye kadar steril vajinal lavaj için, oda sıcaklığında, sıkıca kapatılmış bir kap içinde çifte damıtılmış su (GKD 2 O) ve depo otoklava. </li><li> Sitolojik değerlendirme için GKD 2 O. 100 ml kristal viyole toz 0.1 g ekleyebilir İyice karıştırın. Gerekinceye kadar kristal mor leke (% 0.1), oda sıcaklığında, sıkıca kapatılmış bir kap içinde muhafaza edilebilir. </li></ol> 2. Toplama Vajinal Hücreler (Vajinal Lavaj) <ol><li> Steril 200 ul ucu ucuna bir lateks ampul yerleştirin ve steril GKD 2 O bir ses kılavuz olarak ucu tonlamalarını kullanarak yaklaşık 100 ul hazırlar. </li><li> Onu kafes fare dışarı kaldırın ve kendinize doğru onu arka / arka ucu ile kafes hazne (kapaklı) onu yerleştirmek. </li><li> Sıkıca kuyruk kavrayın ve arka uç yükseltmek. Şimdi fare hazne kavrayarak sadece onu ön pençeleri var olacaktır. Bu noktada, fare idrara. Öyleyse, Idrara çıkma durana kadar bekleyin. Orada vajinal kanal girişinde sol idrar olmalı, ayrı bir ucu (yani, sizin örnek toplama ucu) kullanarak fazla GKD 2 O ile açılış durulama isteyebilirsiniz. </li><li> Vajinal (ve servikal) stimülasyon sıçanlarda 1,2 pseudopregnancy uyarabilir olarak orifis nüfuz edemez özen vajinal kanalın açılışında GKD 2 O dolu ucu sonu yerleştirin. Son raporlar fareler yine bakım tekrarlanan analizler 3 invazivlik derecesini en aza indirmek için alınması gereken bu etkiyi daha az duyarlı olduğunu düşündürmektedir. </li><li> Yavaşça vajinal kanalın açılışında su (~ 25-50 ul) hacminin yarısına dörtte sınırdışı ampulü bastırın. Sıvı kendiliğinden ucu ekleme olmadan kanal içine aspire olacaktır. Yavaşça ampul üzerine uyguladığı basınca bırakın. Sıvı ucu geri çekilecek. Sıvı aspirasyonu önlemek için çok hızlı bir şekilde serbest basınç kaçınınampul takın. Filtre edilmiş uç bu amaç için yararlı olabilir. </li><li> Tek bir örnek bir hücre elde etmek için yeterli sayıda aynı ucu, ampul, ve sıvı ile bir önceki adımda 4-5 kez tekrarlayın. </li><li> Cam slayt üzerine sıvı yerleştirin ve yayma tamamen oda sıcaklığında kurumaya bırakın. Kuruduktan sonra, bu östrus lekeler hemen lekeli veya saklanan ve daha sonraki bir tarihte lekeli olabilir. </li></ol> 3. Kristal Violet kullanarak Sitolojik Boyama * 4 <ol><li> Kristal viyole 1 dakika leke içeren bir Coplin kavanoz (veya diğer benzer boyanma damar) içinde kuru slayt yerleştirin. </li><li> GKD 2 O. içeren ikinci Coplin kavanoz çıkarın 1 dakika GKD 2 O ile slayt yıkayın. Tekrarlayın. </li><li> Lekeli smear ile temas kaçınarak, hafif vergili doku silecek ile slayt kenarlarından aşırı GKD 2 O çıkarın. </li><li> Yayma ve kapak üstüne gliserol Pipet yaklaşık 15 ulslip. Alternatif olarak, diğer histolojik montaj reaktifler, bir daha kalıcı olmayan, leke difüzyon elde etmek için kullanılabilir. </li></ol> Burada anlatılan * boyama yöntemi, herhangi bir laboratuvar yapılabilir basit bir işlemdir. Diğer yöntemler ek ayrıntıları sağlayabilir. Örneğin, Papanicolaou yöntemiyle, çekirdekli epitel hücrelerinin vadesi olgun hücrelere lekeli turkuaz ve daha olgun hücreler pembe ya da turuncu-lekeli ile ayırt edilebilir. Bu farklılıklar, erken ya da geç Proestrus hazırlamak için de kullanılabilir. 4 4. Vajinal Sitoloji <ol><li> Hücre tipleri mevcut belirlemek için ışık mikroskobunda smear inceleyin. Mikroskop incelemesi için coverslipping gliserol kullanıldığı zaman kristal viyole saat boyunca hücrelerin dağılacaktır olarak lekeleme hemen sonra yapılmalıdır. Fotomikrografı sitoloji belgelemek için analiz sırasında alınmalıdır. </li><li> Entir inceleyerek başlayındüşük büyütmede e smear. Temsili bir alan seçin ve daha yüksek bir büyütme taşımak. Eğer (temsili sonuçlar, Şekil 1A-C) yassı epitel hücreleri, lökositler, ve / veya çekirdekli epitel hücreleri boynuzsu görür. Hücrelerin mevcut oran, numune toplama zamanı (temsilcisi sonuçlar, Şekil 1D-G) ve onun derhal hormonal durumu (tartışma, Şekil 2) fare östrus evresini belirlemek için izin verir. </li></ol> 5. Temsilcisi Sonuçlar Sitoloji: Üç birincil hücre tipleri vaginal smear örneklerinde tespit edilebilir: (1) çekirdekli epitel hücreleri (Şekil 1A), (2) skuamöz epitel hücreleri (Şekil 1B), ve (3) lökosit (Şekil 1C) Boynuzsu. Çekirdekli epitel hücreleri hafifçe lekeli sitoplazma, koyu lekeli plazma zarı ve oval nükleus var ( <strong&gt; Şekil 1A). Boynuzsu skuamöz epitel hücreleri çekirdekli epitel öncekilerden daha şekil daha çok köşeli, düzgün lekeli ve bir çekirdek (Şekil 1B) yoksundur. Polimorfonükleer lökositler onların düzensiz şekil, koyu lekeli polimorfik nukleus ve küçük boyutu (Şekil 1C, siyah oklar) ile epitel hücreleri ayırt edilebilir. Idrar kontaminasyon yayma mevcut olmalı, ürik asit kristalleri kolayca herhangi beklenen hücre tipleri (Şekil 3) benzemeyen kendi kristal yapılar tarafından algılanır. Bu meydana, ve baskın hücre tipi belirsiz tespiti halinde, smear atılır ve Aşamalandırma amacıyla kullanılmaz edilmelidir. Hazırlama: lekeleri içinde gözlenen hücre tipleri arasında nispi oranı, numune toplama gününde (şekil 1D-G) fare estrojen döngüsü aşamasına belirlemek için kullanılabilir. Proestrus sırasında hücreler hemen hemen özeldiryuvarlak kümeleri, epitel hücreleri (Şekil 1D, beyaz ok ile gösterilen temsili hücre) çekirdeğini iyi biçimlidir. Kızgınlık sırasında hücreler ağırlıklı yoğun dolu kümeleri bulunan skuamöz epitel hücreleri, (Şekil 1E, ok ucu ile gösterilen temsili hücre) Boynuzsu edilir. Metestrus sırasında, küçük koyu lekeli lökosit (Şekil 1F, siyah ok ile gösterilen temsili hücre) baskındır. Boynuzsu yassı epitel hücreleri genellikle parçacıkları, (Şekil 1F, beyaz ok ucu ile gösterilen temsili hücre) içinde görülebilir. Diestrus sırasında nadir Boynuzsu skuamöz epitel hücreleri hala (Şekil 1G, siyah ok ucu ile gösterilen temsili hücre) mevcut olabilir, ancak lökosit hala (Şekil 1G, siyah ok ile gösterilen temsili hücre) baskındır. Metestrus diestrus içinde çekirdekli epitel hücrelerinin görünümü (diestrus ile ayırt edilebilir <stron<html> g&gt; Şekil 1G, temsili hücre) beyaz okla gösterilir. <img src="/files/ftp_upload/4389/4389fig1.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1. Vaginal smear sitolojik değerlendirilmesi östrus aşamada tanımlamak için kullanılan üç ana hücre tipi vajinal smear örneklerinde tespit edilmiştir:. (A) çekirdekli epitel hücreleri, (B) Boynuzsu skuamöz epitel hücreleri, ve (C) lökositler. Yayma mevcut olan bu hücre tipleri oranı (D) Proestrus, (E) kızışma, (F) metestrus, ya da (G) diestrus olarak temsil eden sonuçlar tarif fareler belirlemek için kullanılabilir. Temsilcisi Boynuzsu skuamöz epitel hücreleri E, F ve G noktası Siyah ok başları. Temsilcisi leykocytes C, F ve G noktası siyah oklar. D ve G vurgulamak temsilcisi Beyaz oklar epitel hücreleri çekirdekleşirken. . Jpg &quot;alt =&quot; Şekil 2 &quot;/&gt; Şekil 2. Vajinal smear sitoloji yatan endokrin olayları yansıtır. Ayrıntılar ayrıca Tartışma sağlanmaktadır. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/4389/4389fig2large.jpg" target="_blank">büyük bir rakam görmek için buraya tıklayın</a> . <img src="/files/ftp_upload/4389/4389fig3.jpg" alt="Şekil 3" /> Şekil 3,. Ürik asit kristalleri idrar-kontamine örneklerin bugünkü şu kristal violet boyama olabilir. (A) Kristaller şeffaf ve çeşitli boyutlarda ((B) büyütülmüş oklar ve kutulu bölge) olabilir. Resim hücreleri, bu alanda bulunmaktadır. Sitolojik boyama için kullanılan alanlar içinde ürik asit kristal kirlenme mevcut olmalı, doğru hücre tipleri mevcut ve yayma atılmalıdır tespit etmek zor olabilir. Ölçek bar = 50 mikron.

<ol>
	<li>Adler, N. T., Zoloth, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Copulatory+behavior+can+inhibit+pregnancy+in+female+rats.">Copulatory behavior can inhibit pregnancy in female rats.</a> Science. 168, 1480-1482 (1970).</li><li>Adler, N. T., Resko, J. A., Goy, R. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+copulatory+behavior+on+hormonal+change+in+the+female+rat+prior+to+implantation.">The effect of copulatory behavior on hormonal change in the female rat prior to implantation.</a> Physiology. 5, 1003-1007 (1970).</li><li>Yang, J. J., Larsen, C. M., Grattan, D. R., Erskine, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mating-induced+neuroendocrine+responses+during+pseudopregnancy+in+the+female+mouse.">Mating-induced neuroendocrine responses during pseudopregnancy in the female mouse.</a> Journal of. 21, 30-39 (2009).</li><li>Hong, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+the+mouse+estrus+cycle+in+response+to+BRCA1+inactivation+suggest+a+potential+link+between+risk+factors+for+familial+and+sporadic+ovarian+cancer.">Changes in the mouse estrus cycle in response to BRCA1 inactivation suggest a potential link between risk factors for familial and sporadic ovarian cancer.</a> Cancer research. 70, 221-228 (2010).</li><li>Hawkins, S. M., Matzuk, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+menstrual+cycle:+basic+biology.">The menstrual cycle: basic biology.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1135, 10-18 (2008).</li><li>Walmer, D. K., Wrona, M. A., Hughes, C. L., Nelson, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lactoferrin+expression+in+the+mouse+reproductive+tract+during+the+natural+estrous+cycle:+correlation+with+circulating+estradiol+and+progesterone.">Lactoferrin expression in the mouse reproductive tract during the natural estrous cycle: correlation with circulating estradiol and progesterone.</a> Endocrinology. 131, 1458-1466 (1992).</li><li>Parkening, T. A., Collins, T. J., Smith, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Plasma+and+pituitary+concentrations+of+LH,+FSH,+and+prolactin+in+aging+C57BL/6+mice+at+various+times+of+the+estrous+cycle.">Plasma and pituitary concentrations of LH, FSH, and prolactin in aging C57BL/6 mice at various times of the estrous cycle.</a> Neurobiology of aging. 3, 31-35 (1982).</li><li>Sarkar, D. K., Chiappa, S. A., Fink, G., Sherwood, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gonadotropin-releasing+hormone+surge+in+pro-oestrous+rats.">Gonadotropin-releasing hormone surge in pro-oestrous rats.</a> Nature. 264, 461-463 (1976).</li><li>Rajendren, G., Gibson, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+confocal+microscopic+study+of+synaptic+inputs+to+gonadotropin-releasing+hormone+cells+in+mouse+brain:+regional+differences+and+enhancement+by+estrogen.">A confocal microscopic study of synaptic inputs to gonadotropin-releasing hormone cells in mouse brain: regional differences and enhancement by estrogen.</a> Neuroendocrinology. 73, 84-90 (2001).</li><li>Kumar, T. R., Wang, Y., Lu, N., Matzuk, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Follicle+stimulating+hormone+is+required+for+ovarian+follicle+maturation+but+not+male+fertility.">Follicle stimulating hormone is required for ovarian follicle maturation but not male fertility.</a> Nature. 15, 201-204 (1997).</li><li>Montgomery, V., Loutradis, D., Tulchinsky, D., Kiessling, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FSH-induced+ovulation+in+intact+and+hypophysectomized+mice.">FSH-induced ovulation in intact and hypophysectomized mice.</a> Journal of reproduction and fertility. 84, 1-6 (1988).</li><li>Mihm, M., Gangooly, S., Muttukrishna, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+normal+menstrual+cycle+in+women.">The normal menstrual cycle in women.</a> Animal reproduction science. , 124-229 (2011).</li><li>Appelgren, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Histochemical+demonstration+of+drug+interference+with+progesterone+synthesis.">Histochemical demonstration of drug interference with progesterone synthesis.</a> Journal of reproduction and. 19, 185-186 (1969).</li><li>Sander, V. A., Facorro, G. B., Piehl, L., de Celis Rubin, E., Motta, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+DHEA+and+metformin+on+corpus+luteum+in+mice.">Effect of DHEA and metformin on corpus luteum in mice.</a> Reproduction. 138, 571-579 (2009).</li><li>Stocco, C., Telleria, C., Gibori, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+control+of+corpus+luteum+formation,+function,+and+regression.">The molecular control of corpus luteum formation, function, and regression.</a> Endocrine reviews. 28, 117-149 (2007).</li><li>Rudolph, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+overt+menstruation+in+intact+mice.">Induction of overt menstruation in intact mice.</a> PLoS One. 7, e32922 (2012).</li><li>Yano, J., Lilly, E., Barousse, M., Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epithelial+cell-derived+S100+calcium-binding+proteins+as+key+mediators+in+the+hallmark+acute+neutrophil+response+during+Candida+vaginitis.">Epithelial cell-derived S100 calcium-binding proteins as key mediators in the hallmark acute neutrophil response during Candida vaginitis.</a> Infection and immunity. 78, 5126-5137 (2010).</li><li>Whitten, W. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Occurrence+of+anoestrus+in+mice+caged+in+groups.">Occurrence of anoestrus in mice caged in groups.</a> The Journal of endocrinology. 18, 102-107 (1959).</li><li>Lamond, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+stimulation+derived+from+other+animals+of+the+same+species+on+oestrous+cycles+in+mice.">Effect of stimulation derived from other animals of the same species on oestrous cycles in mice.</a> The Journal of endocrinology. 18, 343-349 (1959).</li><li>Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+longitudinal+study+of+estrous+cyclicity+in+aging+C57BL/6J+mice:+I.+Cycle+frequency,+length+and+vaginal+cytology.">A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: I. Cycle frequency, length and vaginal cytology.</a> Biology of reproduction. 27, 327-339 (1982).</li><li>Felicio, L. S., Nelson, J. F., Finch, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+studies+of+estrous+cyclicity+in+aging+C57BL/6J+mice:+II.+Cessation+of+cyclicity+and+the+duration+of+persistent+vaginal+cornification.">Longitudinal studies of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: II. Cessation of cyclicity and the duration of persistent vaginal cornification.</a> Biology of reproduction. 31, 446-453 (1984).</li><li>Van Der Lee, S., Boot, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+pseudopregnancy+in+mice.+II.">Spontaneous pseudopregnancy in mice. II.</a> Acta physiologica et pharmacologica Neerlandica. 5, 213-215 (1956).</li><li>Van Der Lee, S., Boot, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spontaneous+pseudopregnancy+in+mice.">Spontaneous pseudopregnancy in mice.</a> Acta physiologica et pharmacologica Neerlandica. 4, 442-444 (1955).</li><li>Armaiz-Pena, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Estrous+cycle+modulates+ovarian+carcinoma+growth.">Estrous cycle modulates ovarian carcinoma growth.</a> Clinical cancer research : an official journal of the American Association for Cancer Research. 15, 2971-2978 (2009).</li><li>Jemiolo, B., Harvey, S., Novotny, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Promotion+of+the+Whitten+effect+in+female+mice+by+synthetic+analogs+of+male+urinary+constituents.">Promotion of the Whitten effect in female mice by synthetic analogs of male urinary constituents.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 83, 4576-4579 (1986).</li></ol>

Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması beyan ederim. Hayvanlar üzerinde tüm deneyler Ottawa Hayvan Bakım Komitesi Üniversitesi ve Hayvan Bakımı Kanada Konseyi tarafından belirlenen kurallara ve yönetmeliklere tam uyum içinde yapıldı.

Hücre tipoloji Bu değişiklikler altta yatan endokrin olaylar göstergesidir. Estrojen döngüsü Proestrus faz adet döngüsünün 5 insan foliküler faz karşılık gelir ve 17-β-estradiol düzeyleri 6 dolaşan bir ön-ovulatuar artışın, aynı zamanda prolaktin 7 küçük dalgalanma (Şekil 2 ile tanımlanır, Proestrus, sol panel). 17-β-estradiol artış dolaylı uyarır gonadotropin salgılatıcı sırayla, sirkülasyon 8,9 içine luteinizan hormon ve follikül uyarıcı hormon serbest bırakmak için ön hipofiz içinde duyarlı hücreleri aktive, hipotalamus ve septumda hormon nöronlar (Şekil 2 , Proestrus, sol panel). Proestrus yılında hayvanlardan alınan vajinal smear, hücreler neredeyse sadece oval nükleuslu epitel hücreleri (Şekil 1D, Şekil 2, Proestrus, sağ panel) vardır. Folikül uyarıcı Horm yılında zirvekızışma 10,11 içine bir düzeyde sinyalleri yumurtlama ve giriş. Kızgınlık sırasında, 17-β-östradiol düzeyleri düşüş ve prolaktin seviyeleri zirve 6,7 (Şekil 2, Östrus, sol panel). Vajinal smear kümeleri genellikle düzensiz şekilli Boynuzsu skuamöz epitel hücreleri (Şekil 1E, Şekil 2, Östrus, sağ panel) neredeyse özel algılama ile karakterizedir. Metestrus girmesi progesteron hormon düzeyleri 6 sürekli bir artış ile çakışmaktadır ve insan luteal faz 12 (Şekil 2, Metestrus, sol panel) başlangıcına karşılık gelir. Progesteron seviyeleri yükselmeye başlar ve korpus luteum aktivasyon 6,13,14 (Şekil 2, Metestrus, sol panel) yanıt olarak 17-β-estradiol düzeyleri küçük bir dalgalanma var gibi. Bu aşamada sırasında vajinal smear mevcut hücre tipleri parçalanmış, boynuzsu epitel hücreleri ve küçük koyu lekeli lökosit (Figür vardırE 1F, Şekil 2, Metestrus, sağ panel). Son olarak, farelerde diestrus içine giriş oluşur ve progesteron seviyeleri insan geç luteal faz 12 karşılık gelen tepe 6, dolaşan. Corpus luteum Regresyon progesteron seviyeleri 15,16 bir sonraki keskin bir düşüş (Şekil 2, Diestrus, sol panel) yol açar. Lökositler diestrus sırasında smear baskındır. Boynuzsu epitel hücrelerinin sıklığı azalır ve çekirdekleşirken epitel hücrelerinin hemen önce Proestrus (Şekil 1G, Şekil 2, Diestrus, sağ panel) geçiş algılanabilir başlarız. Özetle, bu basit, rutin protokolü günlük hormonal dalgalanmalar tahmin ve aşağıdaki önlemler alındığı takdirde üreme durumunu değiştirmeden deneysel farelerde östrus sahne kurmak için kullanılabilir. Örnekleme günde bir kez invazif olmayan bir protokol kullanılarak azalan fazla yapılmalıdırvajinal kanal, aspirasyon ve ajitasyon tekrarlanan penetrasyonu ile karşılaştırıldığında burada belirlemiş. Bu sitolojik değerlendirme yanıltabilecek smear mevcut olduğu lökosit ve diğer hücre tipleri ile sonuçlanan bir inflamatuvar yanıt 17 sonuçlanan vajinal tahrişe neden olabilir. Dahası, koloni yer kadınlarda, iyi anestrous 18 indüksiyonu ve bu tanımlama üreme, cinsiyet hormonal etkisi yorumlanması yararlıdır, ve hastalık çalışmaları gibi farklı farelerde uzun diestrus ve kızışma aşamaları görmek normaldir. Döngüsü uzunluğu değişkenlik de yaş ile birlikte kadın ve 7,19-21 kolonileri içinde konut farklılıkları (bireysel ya da grup-konut) tarafından tanıtıldı. Sadece kadınların koloniler içinde yer Dişiler bisiklet durdurma ve bisiklet bisiklet 24,25 ortaya çıkarmak için erkek idrar ile önceden kafesleri maruz tarafından yeniden aktarabileceği rağmen uzamış diestrus 18,22,23 bir devlet girebilirsiniz. Böylece, individua kurmakBelirli bir fare için l döngü uzunlukları, iki tam devir gözlenir kadar burada açıklanan non-invaziv değerlendirmeler, bakım, günlük yapılması tavsiye edilir.

<table border="1"><tbody><tr><td> Isim </td><td> Şirket </td><td> Katalog # </td></tr><tr><td> Steril 200 ul pipet uçları </td><td> DiaMed </td><td> E340901 </td></tr><tr><td> Lateks ampul (1 mi) </td><td> Balıkçı </td><td> 03-488-21 </td></tr><tr><td> Cam mikroskop slaytlar </td><td> Balıkçı </td><td> 12-550-15 </td></tr><tr><td> Kristal Violet (25 g) leke </td><td> Balıkçı </td><td> C581-25 </td></tr><tr><td> Hafif iş Doku Silecekler </td><td> VWR </td><td> 82003-820 </td></tr><tr><td> Gliserin </td><td> Balıkçı </td><td> BP229-1 </td></tr><tr><td> Mikroskop Kapak Cam (22x30) </td><td> Balıkçı </td><td> 12-544A </td></tr></tbody></table>

performing vaginal lavage, crystal violet staining, and vaginal cytological evaluation for mouse estrous cycle staging identification

Kemirgenlerde üreme durumunu değerlendirmede hızlı bir araç değil sadece üreme disfonksiyon çalışmada yararlıdır ama aynı zamanda patolojik karşılaştırmadan sonra doku dejenerasyonu hormonal regülasyonu (veya rejenerasyon) içine yeni fare hastalık modelleri ve soruşturmaların üretimi için gereklidir. Proestrus, kızgınlık, metestrus ve diestrus: fare üreme (veya östrus) döngüsü 4 aşamadan ayrılmıştır. Over steroid 17-β-östradiol ve progesteron seviyelerini dolaşan Tanımlı dalgalanmalar, gonadotropinler luteinizan ve uyarıcı hormonlar folikül ve bu üreme aşamaları luteotropic prolaktin hormonu sinyal geçişi. Murin vajinal kanal içinde hücre tipolojisi değişiklikler bu temel endokrin olayları yansıtmaktadır. Çekirdekli epitel hücreleri, boynuzsu yassı epitel hücreleri, ve vajinal smear içinde mevcut lökositlerin göreli oran günlük değerlendirme mürin estrojen belirlemek için kullanılabiliraşamaları. Invazivlik derecesi, ancak bu örneklerin üreme durumunu değiştirmez ve smear sitolojik değerlendirilmesi bulandırabilir inflamatuar bir yanıt ortaya çıkarmak olabilir toplayarak istihdam. Burada, biz onu üreme döngüsü değiştirmeden bir kadın fare östrus siklusunun evresini belirlemek için kullanılabilecek basit, non-invaziv protokol açıklar. Biz nasıl dört vajinal smear baskın hücre tipolojisinin toplanması ve analizi ile östrus siklusunun evreleri ve bu değişikliklerin endokrin durumuna göre yorumlanabilir göstermek ayırt ayrıntı.

Watch this Scientific Journal Video about Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification at JoVE.com

Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification

Burada, basit, non-invaziv toplama ve vaginal smear örneklerinin sitolojik değerlendirmesi ile fare üreme (Proestrus, kızgınlık, metestrus veya diestrus) aşamasında nasıl belirleneceği açıklanmaktadır. Biz daha vajinal sitoloji fare üreme döngüsü boyunca geçiş yatan hormonal seviyeleri dolaşımdaki nasıl yansıttığını açıklar.

Fare Östrus Döngüsü Evreleme Tanımlaması Vajinal Lavaj, Kristal Violet Boyama ve Vajinal Sitolojik Değerlendirilmesi Sahne

A rapid means of assessing reproductive status in rodents is useful not only in the study of reproductive dysfunction but is also required for the ...

performing-vaginal-lavage-crystal-violet-staining-vaginal-cytological

Research

JoVE Journal

Biology

110.1K Görüntüleme.  Neural Regeneration Laboratory and Ottawa Institute of Systems Biology. Burada, basit, non-invaziv toplama ve vaginal smear örneklerinin sitolojik değerlendirmesi ile fare üreme (Proestrus, kızgınlık, metestrus veya diestrus) aşamasında nasıl belirleneceği açıklanmaktadır. Biz daha vajinal sitoloji fare üreme döngüsü boyunca geçiş yatan hormonal seviyeleri dolaşımdaki nasıl yansıttığını açıklar.

Video: Performing Vaginal Lavage, Crystal Violet Staining, and Vaginal Cytological Evaluation for Mouse Estrous Cycle Staging Identification

A Reversible, Non-invasive Method for Airway Resistance Measurements and Bronchoalveolar Lavage Fluid Sampling in Mice

Airway hyperreactivity (AHR) measurements and bronchoalveolar lavage (BAL) fluid sampling are essential to experimental asthma models, but repeated procedures to obtain such measurements in the same animal are generally not feasible.  Here, we demonstrate protocols for obtaining from mice repeated measurements of AHR and bronchoalveolar lavage fluid samples.  Mice were challenged intranasally seven times over 14 days with a potent allergen or sham treated.  Prior to the initial challenge, and within 24 hours following each intranasal challenge, the same animals were anesthetized, orally intubated and mechanically ventilated.  AHR, assessed by comparing dose response curves of respiratory system resistance (RRS) induced by increasing intravenous doses of acetylcholine (Ach) chloride between sham and allergen-challenged animals, were determined.  Afterwards, and via the same intubation, the left lung was lavaged so that differential enumeration of airway cells could be performed.  These studies reveal that repeated measurements of AHR and BAL fluid collection are possible from the same animals and that maximal airway hyperresponsiveness and airway eosinophilia are achieved within 7-10 days of initiating allergen challenge.  This novel technique significantly reduces the number of mice required for longitudinal experimentation and is applicable to diverse rodent species, disease models and airway physiology instruments.  

Repeated measurements of rodent respiratory physiology and sampling of airway inflammatory cells are desirable, but generally not feasible. Here we describe a repeatable method for orally intubating mice that permits repeated measurements of airway hyperreactivity and sampling of airway inflammatory cells.

Havayolu Direnci Ölçümleri ve Fare Bronkoalveolar Lavaj Sıvısı Örnekleme için, geri dönüşümlü, Non-invaziv Yöntemi

Airway hyperreactivity (AHR) measurements and bronchoalveolar lavage (BAL) fluid sampling are essential to experimental asthma models, but repeated ...

Biyoloji

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models. This paper describes the development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, treatment of cancer via oral delivery of drugs, and monitoring of tumor cell behavior in response to drug treatment in real time using in vivo imaging system. In this orthotopic model, ovarian tumor cells expressing luciferase are applied topically by injecting them directly into the mouse bursa where each ovary is enclosed. Upon injection of D-luciferin, a substrate of firefly luciferase, luciferase-expressing cells generate bioluminescence signals. This signal is detected by the in vivo imaging system and allows for a non-invasive means of monitoring tumor growth, distribution, and regression in individual animals. Drug administration via oral gavage allows for a maximum dosing volume of 10 mL/kg body weight to be delivered directly to the stomach and closely resembles delivery of drugs in clinical treatments. Therefore, techniques described here, development of an orthotopic mouse model of ovarian cancer, oral delivery of drugs, and in vivo imaging, are useful for better understanding of human ovarian cancer and treatment and will improve targeting this disease.

In vivo Imaging and Therapeutic Treatments in an Orthotopic Mouse Model of Ovarian Cancer

Orthotopic animal models of ovarian cancer replicate better human disease and therefore enhance our understanding of cancer progression and tumor response to therapy. A mouse model receives an intrabursal injection of luciferase-expressing ovarian tumor cells. Treatment is administered via oral gavage. Tumor growth is monitored by in vivo imaging system.

In vivo Görüntüleme ve Yumurtalık Kanseri Ortotopik Fare Modeli Tedavi Tedaviler

Human cancer and response to therapy is better represented in orthotopic animal models.  This paper describes the development of an orthotopic mouse model ...

Evaluation of Mammary Gland Development and Function in Mouse Models

The human mammary gland is composed of 15-20 lobes that secrete milk into a branching duct system opening at the nipple. Those lobes are themselves composed of a number of terminal duct lobular units made of secretory alveoli and converging ducts1. In mice, a similar architecture is observed at pregnancy in which ducts and alveoli are interspersed within the connective tissue stroma. The mouse mammary gland epithelium is a tree like system of ducts composed of two layers of cells, an inner layer of luminal cells surrounded by an outer layer of myoepithelial cells denoted by the confines of a basement membrane2. At birth, only a rudimental ductal tree is present, composed of a primary duct and 15-20 branches. Branch elongation and amplification start at the beginning of puberty, around 4 weeks old, under the influence of hormones3,4,5. At 10 weeks, most of the stroma is invaded by a complex system of ducts that will undergo cycles of branching and regression in each estrous cycle until pregnancy2. At the onset of pregnancy, a second phase of development begins, with the proliferation and differentiation of the epithelium to form grape-shaped milk secretory structures called alveoli6,7. Following parturition and throughout lactation, milk is produced by luminal secretory cells and stored within the lumen of alveoli. Oxytocin release, stimulated by a neural reflex induced by suckling of pups, induces synchronized contractions of the myoepithelial cells around the alveoli and along the ducts, allowing milk to be transported through the ducts to the nipple where it becomes available to the pups 8. Mammary gland development, differentiation and function are tightly orchestrated and require, not only interactions between the stroma and the epithelium, but also between myoepithelial and luminal cells within the epithelium9,10,11. Thereby, mutations in many genes implicated in these interactions may impair either ductal elongation during puberty or alveoli formation during early pregnancy, differentiation during late pregnancy and secretory activation leading to lactation12,13. In this article, we describe how to dissect mouse mammary glands and assess their development using whole mounts. We also demonstrate how to evaluate myoepithelial contractions and milk ejection using an ex-vivo oxytocin-based functional assay. The effect of a gene mutation on mammary gland development and function can thus be determined in situ by performing these two techniques in mutant and wild-type control mice.

This method describes how to dissect and assess mammary gland development and function from mice. Excised mammary glands are assessed for the degree of development using whole mount while milk ejection is evaluated using an oxytocin-based myoepithelial cell contraction assay.

Fare Modeller Meme Bezi Geliştirme ve Fonksiyon Değerlendirme

The human mammary gland is composed of 15-20 lobes that secrete milk into a branching duct system opening at the nipple. Those lobes are themselves ...

Live Cell Cycle Analysis of Drosophila Tissues using the Attune Acoustic Focusing Cytometer and Vybrant DyeCycle Violet DNA Stain

Flow cytometry has been widely used to obtain information about DNA content in a population of cells, to infer relative percentages in different cell cycle phases. This technique has been successfully extended to the mitotic tissues of the model organism Drosophila melanogaster for genetic studies of cell cycle regulation in vivo. When coupled with cell-type specific fluorescent protein expression and genetic manipulations, one can obtain detailed information about effects on cell number, cell size and cell cycle phasing in vivo. However this live-cell method has relied on the use of the cell permeable Hoechst 33342 DNA-intercalating dye, limiting users to flow cytometers equipped with a UV laser. We have modified this protocol to use a newer live-cell DNA dye, Vybrant DyeCycle Violet, compatible with the more common violet 405nm laser. The protocol presented here allows for efficient cell cycle analysis coupled with cell type, relative cell size and cell number information, in a variety of Drosophila tissues. This protocol extends the useful cell cycle analysis technique for live Drosophila tissues to a small benchtop analyzer, the Attune Acoustic Focusing Cytometer, which can be run and maintained on a single-lab scale.

Live Cell Cycle Analysis of Drosophila Tissues using the Attune Acoustic Focusing Cytometer and Vybrant DyeCycle Violet DNA Stain

A protocol for cell cycle analysis of live Drosophila tissues using the Attune Acoustic Focusing Cytometer is described. This protocol simultaneously provides information about relative cell size, cell number, DNA content and cell type via lineage tracing or tissue specific expression of fluorescent proteins in vivo.

Canlı Hücre Döngüsü Analizi<em&gt; Drosophila</emAkort Akustik Odaklama Sitometreyi ve Vybrant DyeCycle Violet DNA Leke kullanarak&gt; Dokular

Flow cytometry has  been widely used to obtain information about DNA content in a population of  cells, to infer relative percentages in different cell ...

Pyrosequencing for Microbial Identification and Characterization

Pyrosequencing is a versatile technique that facilitates microbial genome sequencing that can be used to identify bacterial species, discriminate bacterial strains and detect genetic mutations that confer resistance to anti-microbial agents. The advantages of pyrosequencing for microbiology applications include rapid and reliable high-throughput screening and accurate identification of microbes and microbial genome mutations. Pyrosequencing involves sequencing of DNA by synthesizing the complementary strand a single base at a time, while determining the specific nucleotide being incorporated during the synthesis reaction. The reaction occurs on immobilized single stranded template DNA where the four deoxyribonucleotides (dNTP) are added sequentially and the unincorporated dNTPs are enzymatically degraded before addition of the next dNTP to the synthesis reaction. Detection of the specific base incorporated into the template is monitored by generation of chemiluminescent signals. The order of dNTPs that produce the chemiluminescent signals determines the DNA sequence of the template. The real-time sequencing capability of pyrosequencing technology enables rapid microbial identification in a single assay. In addition, the pyrosequencing instrument, can analyze the full genetic diversity of anti-microbial drug resistance, including typing of SNPs, point mutations, insertions, and deletions, as well as quantification of multiple gene copies that may occur in some anti-microbial resistance patterns.

Pyrosequencing is a versatile technique that facilitates microbial genome sequencing that can be used to identify bacterial species, discriminate bacterial strains, and detect genetic mutations that confer resistance to anti-microbial agents. In this video, the procedure for microbial amplicon generation, amplicon pyrosequencing, and DNA sequence analysis will be demonstrated.

Mikrobiyal Tanımlama ve Karakterizasyonu için Pyrosequencing

Pyrosequencing is a versatile technique that facilitates microbial genome sequencing that can be used to identify bacterial species, discriminate ...

Cytological Analysis of Spermatogenesis: Live and Fixed Preparations of Drosophila Testes

Drosophila melanogaster is a powerful model system that has been widely used to elucidate a variety of biological processes. For example, studies of both the female and male germ lines of Drosophila have contributed greatly to the current understanding of meiosis as well as stem cell biology. Excellent protocols are available in the literature for the isolation and imaging of Drosophila ovaries&#160;and testes3-12. Herein, methods for the dissection and preparation of Drosophila testes for microscopic analysis are described with an accompanying video demonstration. A protocol for isolating testes from the abdomen of adult males and preparing slides of live tissue for analysis by phase-contrast microscopy as well as a protocol for fixing and immunostaining testes for analysis by fluorescence microscopy are presented. These techniques can be applied in the characterization of Drosophila mutants that exhibit defects in spermatogenesis as well as in the visualization of subcellular localizations of proteins.

Cytological Analysis of Spermatogenesis: Live and Fixed Preparations of Drosophila Testes

Methods for isolating and preparing Drosophila testes samples (live and fixed) for imaging by phase-contrast and fluorescence microscopy are described herein.&#160;

Spermatogenez sitolojik analizi: Canlı ve Sabit Hazırlıklar<em&gt; Drosophila</em&gt; Testisler

Drosophila melanogaster is a powerful model system that has been widely used to elucidate a variety of biological processes. For example, studies of both ...

Methods for Staging Pupal Periods and Measurement of Wing Pigmentation of Drosophila guttifera

Diversified species of Drosophila (fruit fly) provide opportunities to study mechanisms of development and genetic changes responsible for evolutionary changes. In particular, the adult stage is a rich source of morphological traits for interspecific comparison, including wing pigmentation comparison. To study developmental differences among species, detailed observation and appropriate staging are required for precise comparison. Here we describe protocols for staging of pupal periods and quantification of wing pigmentation in a polka-dotted fruit fly, Drosophila guttifera. First, we describe the method for detailed morphological observation and definition of pupal stages based on morphologies. This method includes a technique for removing the puparium, which is the outer chitinous case of the pupa, to enable detailed observation of pupal morphologies. Second, we describe the method for measuring the duration of defined pupal stages. Finally, we describe the method for quantification of wing pigmentation based on image analysis using digital images and ImageJ software. With these methods, we can establish a solid basis for comparing developmental processes of adult traits during pupal stages.

Methods for Staging Pupal Periods and Measurement of Wing Pigmentation of Drosophila guttifera

Protocols for staging pupal periods and measurement of wing pigmentation of Drosophila guttifera are described. Staging and quantification of pigmentation provide a solid basis for studying developmental mechanisms of adult traits and enable interspecific comparison of trait development.

Evreleme pupa dönemi ve ölçüm kanat pigmentasyon Drosophila guttifera yöntemleri

Diversified species of Drosophila (fruit fly) provide opportunities to study mechanisms of development and genetic changes responsible for evolutionary ...

Trans-inner Cell Mass Injection of Embryonic Stem Cells Leads to Higher Chimerism Rates

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current blastocyst injection protocol. Here we report that a simple rotation of the embryo, and injection through Trans-Inner cell mass (TICM) increased the percentage of chimeric mice from 31% to 50%, with no additional equipment or further specialized training. 26 different inbred clones, and 35 total clones were injected over a period of 9 months. There was no significant difference in either pregnancy rate or recovery rate of embryos between traditional injection techniques and TICM. Therefore, without any major alteration in the injection process and a simple positioning of the blastocyst and injecting through the ICM, releasing the ES cells into the blastocoel cavity can potentially improve the quantity of chimeric production and subsequent germline transmission.

Here we present a protocol to increase chimera production without the use of new equipment. A simple orientation change of the embryo for injection can increase the number of embryos produced, and potentially reduce the timeline to germline transmission.

Trans-iç hücre embriyonik kök hücrelerin kitle enjeksiyon daha yüksek Chimerism oranları için yol açar.

In an effort to increase efficiency in the creation of genetically modified mice via ES Cell methodologies, we present an adaptation to the current ...

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

Caenorhabditis elegans is an exceptional model organism in which to study lipid metabolism and energy homeostasis. Many of its lipid genes are conserved in humans and are associated with metabolic syndrome or other diseases. Examination of lipid accumulation in this organism can be carried out by fixative dyes or label-free methods. Fixative stains like Nile red and oil red O are inexpensive, reliable ways to quantitatively measure lipid levels and to qualitatively observe lipid distribution across tissues, respectively. Moreover, these stains allow for high-throughput screening of various lipid metabolism genes and pathways. Additionally, their hydrophobic nature facilitates lipid solubility, reduces interaction with surrounding tissues, and prevents dissociation into the solvent. Though these methods are effective at examining general lipid content, they do not provide detailed information about the chemical composition and diversity of lipid deposits. For these purposes, label-free methods such as GC-MS and CARS microscopy are better suited, their costs notwithstanding.

Quantification of Lipid Abundance and Evaluation of Lipid Distribution in Caenorhabditis elegans by Nile Red and Oil Red O Staining

Nile red staining of fixed Caenorhabditis elegans is a method for quantitative measurement of neutral lipid deposits, while oil red O staining facilitates qualitative assessment of lipid distribution among tissues.

Lipid bolluk ve değerlendirme Lipid dağılımı Nil kırmızı ve O kırmızı petrol boyama tarafından Caenorhabditis elegans miktar

Caenorhabditis elegans is an exceptional model organism in which to study lipid metabolism and energy homeostasis. Many of its lipid genes are conserved ...

Identification and Dissection of Diverse Mouse Adipose Depots

Adipose tissues are complex organs with a wide array of functions, including storage and mobilization of energy in response to local and global needs, uncoupling of metabolism to generate heat, and secretion of adipokines to regulate whole-body homeostasis and immune responses. Emerging research is identifying important regional differences in the developmental, molecular, and functional profiles of adipocytes located in discrete depots throughout the body. Different properties of the depots are medically relevant since metabolic diseases often demonstrate depot-specific effects. This protocol will provide investigators with a detailed anatomic atlas and dissection guide for the reproducible and accurate identification and excision of diverse mouse adipose tissues. Standardized dissection of discrete adipose depots will allow detailed comparisons of their molecular and metabolic characteristics and contributions to local and systemic pathologic states under various nutritional and environmental conditions.

Adipocytes exist in discrete depots and have diverse roles within their unique microenvironments. As regional differences in adipocyte character and function are uncovered, standardized identification and isolation of depots is crucial for advancement of the field. Herein, we present a detailed protocol for the excision of various mouse adipose depots.

Çeşitli fare Adipose depoları tanımlama ve diseksiyon

Adipose tissues are complex organs with a wide array of functions, including storage and mobilization of energy in response to local and global needs, ...