Yazarlar Dr kabul etmek istiyorum. DMT basınç myograph ve Dr kullanımı için Paul Huang ve Dmitriy Atochin. Yüksek yağlı diyet ya da standart diyetle beslenen fareler sağlamak için Binglan Yu ve Chong Lei. FİNANSMAN KAYNAĞI Bu çalışma Harvard Tıp Fakültesi (ES Buys) den Tıp Alimler için Bilim Geliştirme Amerikan Kalp Derneği (ES Buys) Grant 10SDG2610313, ve Eleanor ve Miles Shore 50. Yıl Bursu programı tarafından desteklenmiştir.

1. Çözüm hazırlanması <ol><li> 500X EDTA stok: 500 mg EDTA-Na 2 • 2H 2 O ağırlığında ve 50 ml deiyonize suda çözülür. Oda sıcaklığında saklayın. </li><li> KCl çözeltisi depolarizan. <ol><li> 3.69 g NaCl, 18.64 g KCl, 0.36 g MgSO 4 susuz, 0.41 g KH 2 PO 4, 0.46 g CaCl2 • 2H 2 O: K10X stok solüsyonu hazırlayın 250 ml deiyonize su içinde çözülür. Oda sıcaklığında saklayın. </li><li> 100 ml son KCI çözeltisi 1X depolarize için: 0.21 NaHCO3, 90 ml deiyonize su içinde 0.18 g glikoz çözülür. K10X stok solüsyonu 10 ml ilave edilir. 500X EDTA çözeltisi 95 ul ekle. İyice karıştırın. 4 ° C&#39;de saklayın Bir hafta içinde kullanın. </li></ol></li><li> Deney günü (1 litre için) taze HEPES-PSS çözüm hazırlayın. <ol><li> 6.96 g NaCl, 0.35 g KCl, 0.288 g MgSO 4 • 7H 2 O, 0,1605 g KH 2 PO 4, 2.38 g HEPES. 100 ml suda çözülüriyonu giderilmiş su. Balon A. olarak işaretle </li><li> 0.312 g CaCl2 • 2H 2 O 100 ml deiyonize su içinde çözülür. Balon B. olarak işaretle </li><li> 1.25 g NaHCO3, 0.991 g glikoz. 98 ml deiyonize su içinde çözülür. Şişesi C olarak işaretle </li></ol></li><li> Şişesi C. büyük bir şişede 700 ml deiyonize su Take 500X EDTA 2 ml ekleyin. Sürekli vorteks ile büyük şişe içinde şişesi A, B ve C içeriği dökün. NaOH ile pH&#39;ı 7.4 &#39;e ayarlayın. </li></ol> 2. Uyuşturucu kullanılmış <ol><li> Fenilefrin (10 -2 M), 10 ml deiyonize su içinde 20.37 mg çözülür. -80 Kısım 1 ml ve mağaza ° C Seri deney gününde 10 -3 10, -4, -5 10 ve 10 -6 mol / L elde etmek için seyreltilir. </li><li> Asetilkolin (10 -2 M), 10 ml deiyonize su içinde 18.17 mg çözülür. -80 Kısım 1 ml ve mağaza ° C Seri 10 -3, 10 -4, 10 -5 ve 10 -6 elde etmek için sulandırmakmol / deney gününde L. </li></ol> 3. Fareler Erkek WT ve sGCα 1 - / - S6 ve B6 zemin üzerine fareler bu çalışma boyunca incelendi. SGCα 1 - / - 4,5 önceden tarif edildiği gibi oluşturulmuştur. Konut ve deney hayvanlarında (fare) ile ilgili prosedürler Massachusetts Genel Hastanesi, Boston, MA Araştırma Hayvan Bakım Alt Komitesi tarafından onaylanmıştır. 4. Mezenterik Arter Vasküler Reaktivite ölçümü <ol><li> Ile fareler euthanize pentobarbital (200 mg / kg, ip). Karın boşluğu açın ve mezenterik doku teşrih. Izole ve bağ ve yağ dokusu serbest 3. düzenin bir mezenterik arter incelemek ve buz-soğuk HEPES-PSS% 95 O 2 /% 5 15 dakika için CO 2 ile önceden dengelenmiş çözüm. Arter yerleştirin Hiçbir mezenterik dallanma ile 2-3 mm uzunluğunda halkalar kesinarter. Damarlarda kan olduğunda mikro damarları düzeyde arter ve venler arasında ayırım problemlidir. Onu dışarı diseksiyon önce hala hayvan sağlam iken Bu nedenle, geminin belirlenmesi tavsiye ederiz. </li><li> Giriş ve çıkış vanaları ile 10 ml şırınga yardımı ile HEPES-PSS çözümü ile basınç myograph odası (DMT Model 110P ve 11P sürümü 1.31, Şekil 2) cam kanüller doldurun. Aşırı basınç kanüller bağlı kırılgan dönüştürücü zarar gibi kanül Dolum nazikçe ve dikkatli bir şekilde yapılmalıdır. Doldurduktan sonra kanül sıkı giriş ve çıkış vanaları hem kapatın. </li><li> Sağ kanül üzerine geminin bir ucunu monte edin ve dikkatle naylon sütür biri ince iplikçik ile kravat. , Bir şırınga yardımı ile, temizleme ve giriş valfi ile Hepes çözeltisi ile kabın doldurun. Yakın damar için sol kanül getirmek ve bunun üzerine teknenin diğer ucu monte edilir. Naylon sütür ile kravat. Doldurmakodasını HEPES çözeltisi ile 10 ml&#39;ye ile. Hafifçe bir şırınga yardımı ile giriş valfi ile HEPES çözüm iterek sızıntı olup olmadığını kontrol edin. </li><li> Myograph ve video kamera altında odası takın. Odacığın içinde oksijen ve ısı (37 ° C) olmalıdır. Valfi kapalı iken, birinci HEPES çözeltisi haznesindeki tüp P1 giriş valfi bağlayın. Tüp içinde hava kabarcığı kalmayıncaya kadar tüp aracılığıyla herhangi bir kabarcık ve çözüm geçmesine izin. Vanasını açın. </li><li> Tüp P2 basınç regülatörü gelen ile odasının sol valfi bağlayın. Kabarcıkları için tekrar kontrol edin. Tüm sistemi herhangi bir kabarcıkları veya sızıntı olmamalıdır. </li><li> Myo-arayüzü panelinde veya yazılım içindeki basınç menüsüne gidin ve akış KAPALI açarken pompa açın. </li><li> Programı açın ve TOPLA tıklayın. Gemi artık ekran (Şekil 3) üzerinde görülmelidir. Geminin audiomonitoring sağlayan bir mikroskop üzerine monte bir kamera ile görüntülenmiştirng ve damar lümen, damar çapı ve duvar kalınlığı analizi. </li><li> Yavaş yavaş myo-arayüzü panelinde veya program P1 basıncı seçerek P1 valfi ile interluminal basıncını yükseltmek ve aşağıdaki gibi basınç değeri girin; 5 mmHg → 10 → 20 → 40 → 60 mmHg. Gerginliğini ayarlamak veya dikey veya boyuna micropositioner (Şekil 2) yardımı ile buna göre zorlanma; Gemi bazen büküm veya basınç artarken dürülmüş eğilimindedir. 60 mm Hg de damar dengeye ve 37 ° C de 45 dakika boyunca en azından. Dengeleme sırasında önceden ısıtılmış HEPES ile bir kez banyo çözüm değiştirin. </li><li> KCI depolarize 10 ml çözelti uygulanır, tam olarak düz kas hücreleri depolarize ve maksimum daralma elde etmek için banyo, 37 ° C&#39;de önceden ılıtılır. Istikrarlı bir sıkıştırmadan sonra, HEPES çözelti 3 kez her 10 dakikada bir banyo ile yıkayın. </li><li> Istikrarlı ve üreme ile endotel gemi ve bütünlüğü canlılığı kontrolfenilefrin ilavesi (10 -5 M) ve asetilkolin için ible yanıtları (10 -5 M). HEPES çözüm her 10 dakika ile 3 kez durulayın. </li><li> (10 -5 M) fenilefrin ekle gemi preconstrict için, ve istikrarlı bir daralma elde edildiğinde, asetilkolin artan dozlarda (10 -9, 3 x 10 sıralı eklenmesiyle kümülatif konsantrasyon-vazodilatasyon yanıt eğrisi (CRC) gerçekleştirmek - 9, 10 -8, 3 x 10 -8, 10 -7, 3 x 10 -7, 10 -6, 3 x 10 -6 ve 10 -5 M). Son dozdan sonra HEPES çözümü ile 3 kez yeni CRC başlamadan önce her 10 dakikada yıkayın. </li><li> 2 mM EGTA içeren 2 + ücretsiz PSS Ca uygulayarak pasif lümen çapı belirleyin. Tüm parametreleri hesaplamak için kullanılacak her bir doz-yanıt (Şekil 4), için kaydedilen iz önlem lümen çapı. </li><li> Perc gibi tüm asetilkolin gevşeme yanıtları ifadefenilefrin preconstriction sonra lümen çapı entage değişiklik, aşağıdaki denklemi kullanarak, fenilefrin sıkıştırmadan sonra kalsiyum içermeyen çap ve çapı arasındaki fark ile karşılaştırıldığında: </li><li> Yüzde dilatasyon =% 100 x [(D x - B I) / (D Ca içermeyen - D i)], burada D ölçülen lümen çapına ve x = i, ve kalsiyum içermeyen her agonist dozu ortalama arter çapı ifade (x), başlangıç ​​çapı aşağıdaki (i) daralma fenilefrin ve Ca 2 + ücretsiz tampon (Ca-ücretsiz). </li></ol> 5. İstatistiksel Analiz Tüm sürekli ölçümler ortalama ± SEM olarak ifade edildi. Mezenterik arterlerde vasküler reaktivite tekrarlayan ölçümler iki yönlü ANOVA ile analiz edilir. Tüm durumlarda, p &lt;0.05 istatistiksel olarak anlamlı kabul edilmiştir.

<ol>
	<li>Bridges, L. E., Williams, C. L., Pointer, M. A., Awumey, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenteric+artery+contraction+and+relaxation+studies+using+automated+wire+myography.">Mesenteric artery contraction and relaxation studies using automated wire myography.</a> J. Vis .Exp. (55), e3119 (2011).</li><li>Arribas, S. M., Daly, C. J., McGrath, I. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurements+of+vascular+remodeling+by+confocal+microscopy.">Measurements of vascular remodeling by confocal microscopy.</a> Methods Enzymol. 307, 246-273 (1999).</li><li>Lei, C., Yu, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhaled+Nitric+Oxide+Attenuates+the+Adverse+Effects+of+Transfusing+Stored+Syngeneic+Erythrocytes+in+Mice+with+Endothelial+Dysfunction+after+Hemorrhagic+Shock.">Inhaled Nitric Oxide Attenuates the Adverse Effects of Transfusing Stored Syngeneic Erythrocytes in Mice with Endothelial Dysfunction after Hemorrhagic Shock.</a> Anesthesiology. , (2012).</li><li>Buys, E. S., Cauwels, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=sGC&#945;1&#946;1+attenuates+cardiac+dysfunction+and+mortality+in+murine+inflammatory+shock+models.">sGC&#945;1&#946;1 attenuates cardiac dysfunction and mortality in murine inflammatory shock models.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 297 (2), H654-H663 (2009).</li><li>Buys, E. S., Sips, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gender-specific+hypertension+and+responsiveness+to+nitric+oxide+in+sGC&#945;1+knockout+mice.">Gender-specific hypertension and responsiveness to nitric oxide in sGC&#945;1 knockout mice.</a> Cardiovasc. Res. 79 (1), 179-186 (2008).</li><li>Panza, J. A., Quyyumi, A. A., Brush, J. E., Epstein, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Abnormal+endothelium-dependent+vascular+relaxation+in+patients+with+essential+hypertension.">Abnormal endothelium-dependent vascular relaxation in patients with essential hypertension.</a> N. Engl. J. Med. 323 (1), 22-27 (1990).</li><li>Huang, P. L., Huang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertension+in+mice+lacking+the+gene+for+endothelial+nitric+oxide+synthase.">Hypertension in mice lacking the gene for endothelial nitric oxide synthase.</a> Nature. 377 (6546), 239-242 (1995).</li><li>Friebe, A., Koesling, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+function+of+NO-sensitive+guanylyl+cyclase:+what+we+can+learn+from+genetic+mouse+models.">The function of NO-sensitive guanylyl cyclase: what we can learn from genetic mouse models.</a> Nitric Oxide. 21 (3-4), 149-156 (2009).</li><li>Ehret, G. B., Munroe, P. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+variants+in+novel+pathways+influence+blood+pressure+and+cardiovascular+disease+risk.">Genetic variants in novel pathways influence blood pressure and cardiovascular disease risk.</a> Nature. 478 (7367), 103-109 (2011).</li><li>Buys, E. S., Raher, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetic+modifiers+of+hypertension+in+soluble+guanylate+cyclase+alpha1-deficient+mice.">Genetic modifiers of hypertension in soluble guanylate cyclase alpha1-deficient mice.</a> J. Clin. Invest. 122 (6), 2316-2325 (2012).</li><li>Kauffenstein, G., Laher, I., Matrougui, K., Guerineau, N. C., Henrion, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Emerging+role+of+G+protein-coupled+receptors+in+microvascular+myogenic+tone.">Emerging role of G protein-coupled receptors in microvascular myogenic tone.</a> Cardiovascular Research. 95 (2), 223-232 (2012).</li><li>Ruilope, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypertension+in+2010:+Blood+pressure+and+the+kidney.">Hypertension in 2010: Blood pressure and the kidney.</a> Nat. Rev. Nephrol. 7 (2), 73-74 (2011).</li><li>Michael, S. K., Surks, H. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+blood+pressure+arising+from+a+defect+in+vascular+function.">High blood pressure arising from a defect in vascular function.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105 (18), 6702-6707 (2008).</li><li>Mendelsohn, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+hypertension,+the+kidney+is+not+always+the+heart+of+the+matter.">In hypertension, the kidney is not always the heart of the matter.</a> J. Clin. Invest. 115 (4), 840-844 (2005).</li></ol>

Yazarlar ifşa hiçbir şey yok.

Fare kısmen çünkü böylece insan patofizyolojisi için fare modelleri üreten genetik değişiklikler, tanıtmak olasılığı, birçok araştırmacı için tercih edilen deneysel model vardır. Vazoaktif küçük direnç durumu değil, büyük boru gemilerin büyük ölçüde damar sistemi 11 boyunca kan akışının düzenlenmesi tanımlar. Fare gibi küçük hayvanlar, direnç damar boyutu mikrovasküler fonksiyonunu incelemek için bir tel myograph en kullanılmasını önler. Basınç myographs yaln?...

Basınç myograph sistemleri küçük arterler, damarlar ve diğer gemilerin fizyolojik fonksiyonu ve özellikleri ölçmek için kullanılır. Bir damar veya damar bozulmamış bir küçük bir kısmı, iki küçük cam kanül üzerine monte edilmiş ve kabın in vivo özellikleri (Şekiller 1 ve 2) &#39;deki en korumasına izin verir, uygun bir lümen basınca kadar basınçlı hale getirilir. Bir basınç myograph yakın fizyolojik durumu izole damarlarının yapısal özellikleri (örneğin miyojenik sesi) soruşturma izin, vasküler yatağın in vivo davranış yansıtır. Kas kasılması bir güç dönüştürücü 1 doğrudan mekanik bağlantı ile değerlendirilir tel kasılmaların kâğıda çizilmesi, üzerinde baskı kasılmaların kâğıda çizilmesi avantajlarından bazıları, ise damar sisteminde geliştirilen genel direnci tanımlamak mikro direnci arterler, okudu olabilir (i) tel Myograph büyük boru damar sertliği, (ii) t sınırlıdırhiçbir teller (iii) geminin doğal şekline daha iyi muhafaza edilmesi, damar lümene gereken beri endotel zarar şapka riski azalır, ve (iv) bu gemi boyutu geniş bir de incelenebilir baskılar veya kayma gerilmesi 2. Küçük damarların incelenmesi hipertansiyon gibi kardiyovasküler hastalıklarda değişmiş vasküler sesi katkıda patofizyolojisi ve moleküler mekanizmaları anlamak için daha büyük kanal arterler okuyan daha bilgilendirici olabilir. Örneğin, 8 hafta boyunca fareler yüksek yağlı diyet beslenme ile ilişkili endotelyal fonksiyon bozukluğu ancak aort halkaları 2. dereceden mezenterik arterler 3 (Şekil 3) gösterilmiştir olabilir. Basınç kasılmaların kâğıda çizilmesi başka bir avantajı da, basınçlı kabın iç miyojenik daralma mevcut olmasıdır, ve bu olay da endotele rolü ve fonksiyonu incelenmiştir edilebilir. Burada, Descrengelli nitrik oksit (NO)-cGMP sinyal bir ortamda fare mezenterik 3. amacıyla direnci arterlerin vasküler reaktivite incelemek için bir basınç myograph bir kullanımı IBE.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Cataloge No.</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP358</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>CaCl2 (2H2O)</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>C79-500</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>KCl</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P9333</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>MgSO4 </td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>M65-500</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>KH2PO4 </td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P3786</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaHCO3 </td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP328</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaOH</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S318</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>D-Glucose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G8270</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP121</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3375</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Phenylephrine</td>
			<td>Acros Organics</td>
			<td>AC20724</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Acetylcholine</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A6625</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Pressure Myograph System</td>
			<td>DMT</td>
			<td></td>
		 </tr>
		</tbody>
 </table>

assessing murine resistance artery function using pressure myography

Basınç myograph sistemleri, küçük arterlerin fonksiyonel değerlendirilmesinde zarif yararlıdır uygun bir transmural basınç basınç uygulanır. Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi elde Yakın fizyolojik durum vasküler yatağın in vivo davranış için çıkarım olabilir farmakolojik ve fizyolojik uyaranlara, içsel yanıtları derinlemesine karakterizasyonu izin verir. Basınç myograph geleneksel tel myographs üzerinde birçok avantajı vardır. Örneğin, küçük direnç damarları sıkı kontrol ve fizyolojik ilgili lümen içi basınçta incelenebilir. Burada, asetilkolin yanıt olarak vazo-dinlenmek için fenilefrin ile preconstricted 3. amacıyla mezenterik arter (uzun 3-4 mm),, kabiliyeti çalışma. Mezenterik arter 60 mmHg&#39;lik sabit bir basınçta muhafaza edilen bir basınçlı ve kapalı sistem bağlı iki kanül üzerine monte edilmiştir. Damar lümeni ve dış çapı vardır continuousinsi sırasıyla, fenilefrin ve asetilkolin yanıt olarak vazokonstriksiyon ve vasorelaxation gerçek zamanlı kantitatif sağlayan bir video kamera kullanılarak kaydedildi. Kardiyovasküler hastalık etiyolojisinde çalışma basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi uygulanabilirliğini göstermek için, sistemik hipertansiyon bir fare modelinde endotel bağımlı vasküler fonksiyonu değerlendirildi. Çözünebilir guanilat siklaz (- / - sGCα 1) arasında α alt birimi 1 eksikliği farenin zaman 129S6 (S6), arka plan (sGCα -/-S6 1) üzerine, hipertansiyon, ancak zaman bir C57BL / 6 (B6), arka (sGCα üzerine 1 -/-B6). Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi kullanarak, göstermektedir ki engelli endotel bağımlı vasorelaxation in sGCα 1-eksikliği sonuçları. Vasküler disfonksiyon sGCα 1 daha sGCα 1 -/-S6 daha belirgindir -/-B6 fareler, muhtemelen katkınınsGCα 1 -/-B6 farelerde daha sGCα 1 -/-S6 en yüksek kan basıncına ng. Basınç kasılmaların kâğıda çizilmesi böylece kalp-damar hastalığı altında yatan mekanizmaları içine bizim fikir artırmada, damar kasılma ve gevşeme çeşitli uyaranların etkisini değerlendirmek için kullanılabilecek nispeten basit, ama hassas ve mekanik olarak yararlı bir tekniktir.

NO merkezi insanlarda 6 ve hayvan modellerinde 7 hem de kan basıncını homeostazın katılır. Vasküler düz kas gevşeme kontrol etmek için hiçbir kabiliyeti çözünebilir guanilat siklaz (SGC), cGMP 8 üreten bir heme içeren heterodimerik bir enzimi aracılık etmektedir. Son zamanlarda, kan basıncı-değiştirerek genetik varyant insanlarda 9&#39;da kan basıncının düzenlenmesinde SGC ve alaka gösteren, sGCα 1 ve sGCβ 1 genleri içeren bi...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Murine Resistance Artery Function Using Pressure Myography at JoVE.com

Assessing Murine Resistance Artery Function Using Pressure Myography

Basınç kasılmaların kâğıda çizilmesi olarak, bir geminin bir sağlam küçük bir bölümü iki küçük kanüller üzerine monte edilir ve uygun bir lümen basınca basınçlandırılmıştır. Burada, fare 3 vasorelaxation tepki ölçmek için yöntem tarif<sup&gt; Rd</supC57 ve sGCα olarak&gt; için mezenterik arterler<sub&gt; 1</sub<sup&gt; - / -</sup&gt; Basıncı kasılmaların kâğıda çizilmesi kullanarak fareler.

Basınç kasılmaların kâğıda çizilmesi kullanarak Murine Direnç Arter Fonksiyon değerlendirilmesi

Pressure myograph systems are  exquisitely useful in the functional assessment of small arteries, pressurized  to a suitable transmural pressure. The  ...

assessing-murine-resistance-artery-function-using-pressure-myography

Research

JoVE Journal

Biology

21.9K Görüntüleme.  Massachusetts General Hospital, Harvard Medical School. Basınç kasılmaların kâğıda çizilmesi olarak, bir geminin bir sağlam küçük bir bölümü iki küçük kanüller üzerine monte edilir ve uygun bir lümen basınca basınçlandırılmıştır. Burada, fare 3 vasorelaxation tepki ölçmek için yöntem tarif Rd için mezenterik arterler 1

Video: Assessing Murine Resistance Artery Function Using Pressure Myography

Measuring Blood Pressure in Mice using Volume Pressure Recording, a Tail-cuff Method

The CODA 8-Channel High Throughput Non-Invasive Blood Pressure system measures the blood pressure in up to 8 mice or rats simultaneously. The CODA tail-cuff system uses Volume Pressure Recording (VPR) to measure the blood pressure by determining the tail blood volume. A specially designed differential pressure transducer and an occlusion tail-cuff measure the total blood volume in the tail without the need to obtain the individual pulse signal. Special attention is afforded to the length of the occlusion cuff in order to derive the most accurate blood pressure readings. VPR can easily obtain readings on dark-skinned rodents, such as C57BL6 mice and is MRI compatible. The CODA system provides you with measurements of six (6) different blood pressure parameters; systolic and diastolic blood pressure, heart rate, mean blood pressure, tail blood flow, and tail blood volume. Measurements can be made on either awake or anesthetized mice or rats. The CODA system includes a controller, laptop computer, software, cuffs, animal holders, infrared warming pads, and an infrared thermometer. There are seven different holder sizes for mice as small as 8 grams to rats as large as 900 grams.

The CODA 8-Channel High Throughput Non-Invasive Blood Pressure system measures the blood pressure in up to 8 mice or rats simultaneously. This tail-cuff system uses Volume Pressure Recording (VPR) to measure the blood pressure by determining the tail blood volume.

Cilt Basınç Kaydı, Kuyruk manşet Yöntemi kullanarak Fare Tansiyon Ölçüm

The CODA 8-Channel High Throughput Non-Invasive Blood Pressure system measures the blood pressure in up to 8 mice or rats simultaneously. The CODA ...

Biyoloji

Bioassays for Monitoring Insecticide Resistance

Pest resistance to pesticides is an increasing problem because pesticides are an integral part of high-yielding production agriculture. When few products are labeled for an individual pest within a particular crop system, chemical control options are limited. Therefore, the same product(s) are used repeatedly and continual selection pressure is placed on the target pest. There are both financial and environmental costs associated with the development of resistant populations. The cost of pesticide resistance has been estimated at approximately $ 1.5 billion annually in the United States. This paper will describe protocols, currently used to monitor arthropod (specifically insects) populations for the development of resistance. The adult vial test is used to measure the toxicity to contact insecticides and a modification of this test is used for plant-systemic insecticides. In these bioassays, insects are exposed to technical grade insecticide and responses (mortality) recorded at a specific post-exposure interval. The mortality data are subjected to Log Dose probit analysis to generate estimates of a lethal concentration that provides mortality to 50% (LC50) of the target populations and a series of confidence limits (CL's) as estimates of data variability. When these data are collected for a range of insecticide-susceptible populations, the LC50 can be used as baseline data for future monitoring purposes. After populations have been exposed to products, the results can be compared to a previously determined LC50 using the same methodology.

This manuscript demonstrates and discusses techniques used to survey pesticide susceptibility and detect resistance to contact and systemic pesticides in arthropod pests.

İnsektisit Direnci İzleme için biyoanalizlere

Pest resistance to pesticides is an increasing problem because pesticides are an integral part of high-yielding production agriculture. When few products ...

Exploring Arterial Smooth Muscle Kv7 Potassium Channel Function using Patch Clamp Electrophysiology and Pressure Myography

Contraction or relaxation of smooth muscle cells within the walls of resistance arteries determines the artery diameter and thereby controls flow of blood through the vessel and contributes to systemic blood pressure. The contraction process is regulated primarily by cytosolic calcium concentration ([Ca2+]cyt), which is in turn controlled by a variety of ion transporters and channels. Ion channels are common intermediates in signal transduction pathways activated by vasoactive hormones to effect vasoconstriction or vasodilation. And ion channels are often targeted by therapeutic agents either intentionally (e.g. calcium channel blockers used to induce vasodilation and lower blood pressure) or unintentionally (e.g. to induce unwanted cardiovascular side effects).
Kv7 (KCNQ) voltage-activated potassium channels have recently been implicated as important physiological and therapeutic targets for regulation of smooth muscle contraction. To elucidate the specific roles of Kv7 channels in both physiological signal transduction and in the actions of therapeutic agents, we need to study how their activity is modulated at the cellular level as well as evaluate their contribution in the context of the intact artery.
The rat mesenteric arteries provide a useful model system. The arteries can be easily dissected, cleaned of connective tissue, and used to prepare isolated arterial myocytes for patch clamp electrophysiology, or cannulated and pressurized for measurements of vasoconstrictor/vasodilator responses under relatively physiological conditions. Here we describe the methods used for both types of measurements and provide some examples of how the experimental design can be integrated to provide a clearer understanding of the roles of these ion channels in the regulation of vascular tone.

Measurements of Kv7 (KCNQ) potassium channel activity in isolated arterial myocytes (using patch clamp electrophysiological techniques) in parallel with measurements of constrictor/dilator responses (using pressure myography) can reveal important information about the roles of Kv7 channels in vascular smooth muscle physiology and pharmacology.

Patch Clamp Elektrofizyoloji ve Basınç kasılmaların kâğıda çizilmesi kullanarak arteriyel düz kas KV7 Potasyum Kanal Fonksiyon Exploring

Contraction  or relaxation of smooth muscle cells within the walls of resistance arteries  determines the artery diameter and thereby controls flow of ...

RNA Secondary Structure Prediction Using High-throughput SHAPE

Understanding the function of RNA involved in biological processes requires a thorough knowledge of RNA structure. Toward this end, the methodology dubbed "high-throughput selective 2' hydroxyl acylation analyzed by primer extension", or SHAPE, allows prediction of RNA secondary structure with single nucleotide resolution. This approach utilizes chemical probing agents that preferentially acylate single stranded or flexible regions of RNA in aqueous solution. Sites of chemical modification are detected by reverse transcription of the modified RNA, and the products of this reaction are fractionated by automated capillary electrophoresis (CE). Since reverse transcriptase pauses at those RNA nucleotides modified by the SHAPE reagents, the resulting cDNA library indirectly maps those ribonucleotides that are single stranded in the context of the folded RNA. Using ShapeFinder software, the electropherograms produced by automated CE are processed and converted into nucleotide reactivity tables that are themselves converted into pseudo-energy constraints used in the RNAStructure (v5.3) prediction algorithm. The two-dimensional RNA structures obtained by combining SHAPE probing with in silico RNA secondary structure prediction have been found to be far more accurate than structures obtained using either method alone.

High-throughput selective 2' hydroxyl acylation analyzed by primer extension (SHAPE) utilizes a novel chemical probing technology, reverse transcription, capillary electrophoresis and secondary structure prediction software to determine the structures of RNAs from several hundred to several thousand nucleotides at single nucleotide resolution.

Yüksek verim SHAPE kullanarak RNA İkincil Yapısı Tahmin

Understanding the function of RNA involved in biological processes requires a thorough knowledge of RNA structure. Toward this end, the methodology dubbed ...

Assessing Cerebral Autoregulation via Oscillatory Lower Body Negative Pressure and Projection Pursuit Regression

The process by which cerebral perfusion is maintained constant over a wide range of systemic pressures is known as &#8220;cerebral autoregulation.&#8221; Effective dampening of flow against pressure changes occurs over periods as short as ~15 sec and becomes progressively greater over longer time periods. Thus, slower changes in blood pressure are effectively blunted and faster changes or fluctuations pass through to cerebral blood flow relatively unaffected. The primary difficulty in characterizing the frequency dependence of cerebral autoregulation is the lack of prominent spontaneous fluctuations in arterial pressure around the frequencies of interest (less than ~0.07 Hz or ~15 sec). Oscillatory lower body negative pressure (OLBNP) can be employed to generate oscillations in central venous return that result in arterial pressure fluctuations at the frequency of OLBNP. Moreover, Projection Pursuit Regression (PPR) provides a nonparametric method to characterize nonlinear relations inherent in the system without a priori assumptions and reveals the characteristic non-linearity of cerebral autoregulation. OLBNP generates larger fluctuations in arterial pressure as the frequency of negative pressure oscillations become slower; however, fluctuations in cerebral blood flow become progressively lesser. Hence, the PPR shows an increasingly more prominent autoregulatory region at OLBNP frequencies of 0.05 Hz and below (20 sec cycles). The goal of this approach it to allow laboratory-based determination of the characteristic nonlinear relationship between pressure and cerebral flow and could provide unique insight to integrated cerebrovascular control as well as to physiological alterations underlying impaired cerebral autoregulation (e.g., after traumatic brain injury, stroke, etc.).

Cerebral perfusion is maintained across a range of pressures via cerebral autoregulation. However, characterizing autoregulation requires prominent pressure fluctuations at regulated frequencies. The described protocol will show how oscillatory lower body negative pressure can generate pressure fluctuations to provide data for projection pursuit regression for quantification of the autoregulatory curve.

Salınım Alt Vücut Negatif Basınç ve Projeksiyon Takip regresyon yoluyla Serebral otoregülasyonda Değerlendirilmesi

The process by which cerebral perfusion is maintained constant over a wide range of systemic pressures is known as &#8220;cerebral autoregulation.&#8221; ...

Measuring Respiratory Function in Mice Using Unrestrained Whole-body Plethysmography

Respiratory dysfunction is one of the leading causes of morbidity and mortality in the world and the rates of mortality continue to rise. Quantitative assessment of lung function in rodent models is an important tool in the development of future therapies. Commonly used techniques for assessing respiratory function including invasive plethysmography and forced oscillation. While these techniques provide valuable information, data collection can be fraught with artefacts and experimental variability due to the need for anesthesia and/or invasive instrumentation of the animal. In contrast, unrestrained whole-body plethysmography (UWBP) offers a precise, non-invasive, quantitative way by which to analyze respiratory parameters. This technique avoids the use of anesthesia and restraints, which is common to traditional plethysmography techniques. This video will demonstrate the UWBP procedure including the equipment set up, calibration and lung function recording. It will explain how to analyze the collected data, as well as identify experimental outliers and artefacts that results from animal movement. The respiratory parameters obtained using this technique include tidal volume, minute volume, inspiratory duty cycle, inspiratory flow rate and the ratio of inspiration time to expiration time. UWBP does not rely on specialized skills and is inexpensive to perform. A key feature of UWBP, and most appealing to potential users, is the ability to perform repeated measures of lung function on the same animal.

The assessment of respiratory physiology has traditionally relied upon techniques, which require restraint or sedation of the animal. Unrestrained whole-body plethysmography, however, provides precise, non-invasive, quantitative analysis of respiratory physiology in animal models. In addition, the technique allows repeated respiratory assessment of mice allowing for longitudinal studies.

Yarı Tüm vücut pletismografisi kullanılarak Farelerde Solunum Fonksiyon Ölçme

Respiratory dysfunction is one of the leading causes of morbidity and mortality in the world and the rates of mortality continue to rise. Quantitative ...

Cardiac Pressure-Volume Loop Analysis Using Conductance Catheters in Mice

Cardiac pressure-volume loop analysis is the &#8220;gold-standard&#8221; in the assessment of load-dependent and load-independent measures of ventricular systolic and diastolic function. Measures of ventricular contractility and compliance are obtained through examination of cardiac response to changes in afterload and preload. These techniques were originally developed nearly three decades ago to measure cardiac function in large mammals and humans. The application of these analyses to small mammals, such as mice, has been accomplished through the optimization of microsurgical techniques and creation of conductance catheters. Conductance catheters allow for estimation of the blood pool by exploiting the relationship between electrical conductance and volume. When properly performed, these techniques allow for testing of cardiac function in genetic mutant mouse models or in drug treatment studies. The accuracy and precision of these studies are dependent on careful attention to the calibration of instruments, systematic conduct of hemodynamic measurements and data analyses. We will review the methods of conducting pressure-volume loop experiments using a conductance catheter in mice.

Cardiac pressure-volume loop analysis is the most comprehensive way to measure cardiac function in the intact heart. We describe a technique to perform and analyze cardiac pressure volume loops, using conductance catheters.

Farelerde İletkenlik Balon Kullanımı kalp Basınç Hacim Döngüsü Analizi

Cardiac pressure-volume loop analysis is the &#8220;gold-standard&#8221; in the assessment of load-dependent and load-independent measures of ventricular ...

Intracavernosal Pressure Recording to Evaluate Erectile Function in Rodents

Erectile dysfunction (ED) is defined as the inability to attain or keep an erection of the penis, and this has become a prevalent male sexual disorder. Rodents are employed by many studies to research the physiology/pathology of erectile function. Erectile function in rodents can be evaluated by measuring the intracavernosal pressure (ICP). In practice, ICP can be monitored following electrical stimulation of the cavernous nerves (CNs). The arterial pressure of the carotid artery (the mean arterial pressure) is used as the reference for ICP. Using ICP recording protocols, many key parameters of erectile function can be measured from the ICP response curve. The ICP measurement provides more information than the apomorphine-induced penile erection test, and is cheaper than telemetric monitoring of the corpus spongiosum penis, making this method the most popular one to evaluate erectile function. However, compared to the easily-performed APO-induced erectile function test, successful ICP recordings require attention to detail, practice, and adherence to the operation method. In this work, an introduction to ICP recording in rats is provided to complement the procedure efficiently.

Intracavernosal pressure recording (ICP) is an important method to evaluate the erectile function of experimental animals. Here, a detailed protocol is demonstrated for the recording procedure of ICP by catheterizing the crura penis and then electrically stimulating the cavernous nerves in rats.

İntrakavernozal basınç kayıt Rodents erektil işlev değerlendirmek için

Erectile dysfunction (ED) is defined as the inability to attain or keep an erection of the penis, and this has become a prevalent male sexual disorder. ...

Induction of Right Ventricular Failure by Pulmonary Artery Constriction and Evaluation of Right Ventricular Function in Mice

The mechanism of right ventricular failure (RVF) requires clarification due to the uniqueness, high morbidity, high mortality, and refractory nature of RVF. Previous rat models imitating RVF progression have been described. Compared with rats, mice are more accessible, economical, and widely used in animal experiments. We developed a pulmonary artery constriction (PAC) approach which is comprised of banding the pulmonary trunk in mice to induce right ventricular (RV) hypertrophy. A special surgical latch needle was designed that allows for easier separation of the aorta and the pulmonary trunk. In our experiments, the use of this fabricated latch needle reduced the risk of arteriorrhexis and improved the surgical success rate to 90%. We used different padding needle diameters to precisely create quantitative constriction, which can induce different degrees of RV hypertrophy. We quantified the degree of constriction by evaluating the blood flow velocity of the PA, which was measured by noninvasive transthoracic echocardiography. RV function was precisely evaluated by right heart catheterization at 8 weeks after surgery. The surgical instruments made inhouse were composed of common materials using a simple process that is easy to master. Therefore, the PAC approach described here is easy to imitate using instruments made in the lab and can be widely used in other labs. This study presents a modified PAC approach that has a higher success rate than other models and an 8-week postsurgery survival rate of 97.8%. This PAC approach provides a useful technique for studying the mechanism of RVF and will enable an increased understanding of RVF.

Here, we provide a useful approach for studying the mechanism of right ventricular failure. A more convenient and efficient approach to pulmonary artery constriction is established using surgical instruments made inhouse. In addition, methods to evaluate the quality of this approach by echocardiography and catheterization are provided.

Pulmoner arter daralması ve farelerde sağ ventrikül fonksiyonunun değerlendirilmesi ile sağ ventrikül yetmezliği indüksiyonu

The mechanism of right ventricular failure (RVF) requires clarification due to the uniqueness, high morbidity, high mortality, and refractory nature of ...

Performing In Vivo and Ex Vivo Electrical Impedance Myography in Rodents

Electrical impedance myography (EIM) is a convenient technique that can be used in preclinical and clinical studies to assess muscle tissue health and disease. EIM is obtained by applying a low-intensity, directionally focused, electrical current to a muscle of interest across a range of frequencies (i.e., from 1 kHz to 10 MHz) and recording the resulting voltages. From these, several standard impedance components, including the reactance, resistance, and phase, are obtained. When performing ex vivo measurements on excised muscle, the inherent passive electrical properties of the tissue, namely the conductivity and relative permittivity, can also be calculated. EIM has been used extensively in animals and humans to diagnose and track muscle alterations in a variety of diseases, in relation to simple disuse atrophy, or as a measure of therapeutic intervention. Clinically, EIM offers the potential to track disease progression over time and to assess the impact of therapeutic interventions, thus offering the opportunity to shorten the clinical trial duration and reduce sample size requirements. Because it can be performed noninvasively or minimally invasively in living animal models as well as humans, EIM offers the potential to serve as a novel translational tool enabling both preclinical and clinical development. This article provides step-by-step instructions on how to perform in vivo and ex vivo EIM measurements in mice and rats, including approaches to adapt the techniques to specific conditions, such as for use in pups or obese animals.

Performing In Vivo and Ex Vivo Electrical Impedance Myography in Rodents

This article details how to perform in vivo (using surface and needle electrode arrays) and ex vivo (using a dielectric cell) electrical impedance myography on the rodent gastrocnemius muscle. It will demonstrate the technique in both mice and rats and detail the modifications available, (i.e., obese animals, pups).

Kemirgenlerde In Vivo ve Ex Vivo Elektriksel Empedans Miyografisi Gerçekleştirme

Electrical impedance myography (EIM) is a convenient technique that can be used in preclinical and clinical studies to assess muscle tissue health and ...