Sandeep Khurana NIH (K08DKO81479) tarafından desteklenmektedir. Vikrant Rachakonda (T32DK067872) tarafından desteklenmektedir.

Burada gösterilen örnekler Gürcistan Regents University IACUC tarafından onaylanmış deneylerden vardır - Protokol No: # 2011-0408 Reaktifler 1. Hazırlık <ol><li> Diseksiyon çözüm stok hazırlayın: stok diseksiyon solüsyonu (5x) 500 ml için, 21.18 g NaCl, 0.875 gr KCI, 0,739 gr MgSO 4, 1.049 gr MOPS ve Milli-Q su 450 ml 0.019 gr EDTA çözülür. 1 N NaOH ile 7.3-7.4 pH ayarlayın. Milli-Q su ile 500 ml hacim hazırlayın. Stok çözelti 7-10 gün kadar saklanabilir. Kimyasallar ve satıcıların bir listesi için Tablo 1&#39;e bakınız. MM konsantrasyon için Tablo 2&#39;ye bakınız. </li><li> Çalışma diseksiyon çözüm hazırlayın: her gün taze çalışma diseksiyon çözüm hazırlayın. 100 ml çalışma çözeltisi için 0.091 g glikoz, Milli-Q su içinde 79.8 ml 0.016 gr NaH 2 PO 4 ve 0.022 g sodyum piruvat çözülür. VOLU getirmek için 0.2 ml 1M CaCl2 ve 20 ml diseksiyon çözüm stok ekle100 ml beni. </li><li> Fizyolojik tuzlu solüsyonu (PSS) hazırlanması: 950 ml, 1.000 mi PSS hazırlamak için 0.365 g KCI, 6,545 gr NaCl, 0.296 gr MgSO 4, 0.163 g KH 2 PO 4 çözülür, 2,072 g glikoz, 2,184 g NaHCO 3. ve 2,383 g HEPES Milli-Q su içinde işlenmiştir. 1 N NaOH ile 7.3-7.4 pH ayarlayın. Milli-Q su ile 1,000 ml sesi olun. 2 ml solüsyon çıkarın ve 1 M CaCI2, 2 ml ile değiştirin. (Taze PSS günlük hazırlıklı olmak gerekiyor) </li><li> Ca 2+ olmadan, 100 ml PSS için 0.036 g KCI, 0.654 gr NaCl, 0.029 gr MgSO 4, 0.016 gr KH 2 PO 4, 0.207 gr glikoz, 0.218 gr NaHCO 3, 0.238 çözülür: kalsiyum (Ca 2+) ücretsiz PSS hazırlayın g HEPES, 0.015 g EGTA ve 0.0026 g sodyum nitroprussid (SNP) Milli-Q su içinde 95 ml. 1 N NaOH ile 7.3-7.4 pH ayarlayın. Milli-Q su ile 100 ml hacim Makyaj. </li></ol> Cam kanüller 2. Hazırlık <ol><li> Cam pipetler çekinüreticinin yönergelerine uygun olarak bir pipet çektirmenin kullanarak 100-150 mikron uçlu kanüller oluşturmak için. </li><li> Konik bir mikroelektrot beveller kullanılarak cam kanül ipuçları, yangın onları parlatmak ve bir ısıtıcı prob kullanılarak ~ 45 ° cam kanül ipuçlarını bükün. </li><li> Mikropipet tutucu içine kanüller yükleyin ve perfüzyon odasına üzerine mikropipet tutucu takın. </li></ol> Perfüzyon Odası 3. hazırlanması <ol><li> 5 dakika her biri için diseksiyon çözeltisi, ardından Milli-Q suyu ile durulayın perfüzyon odasına. Diseksiyon çözeltisinin 2 ml&#39;si ile bölme yerleştirin. </li><li> Kanül içinden emme diseksiyon çözüm 10 ml şırınga kullanarak ve dikkatlice kabarcıkları olmadan tüm kanül ve ekli boru doldurun. Kabarcıklarının oluşmasını önlemek için yavaşça emme uygulayın. </li><li> Her künt forseps kullanarak yarım düğüm ile iki sütür hazırlayın. Oftalmik tek fılamentli naylon dikişlerle yana (10-0, 0.2 mt), sadece knot hazırlamak için kullanılanÇapı, 1-2 mm, diseksiyon mikroskobu gerekli olabilir. </li><li> Diseksiyon mikroskobu altında görselleştirme, biraz uzakta ucundan kısmen kapalı dikiş knot ile her iki kanüller yüklemek için diseksiyon forseps kullanabilir. Daha sonra bu knot kanüllü arter uçları üzerine dikkatlice kaydırdı edilecek ve tamamen kapattı. </li></ol> Sprague-Dawley Rats gelen Mesenterik Arter Arcade 4. Koleksiyonu <ol><li> Bu deneyler önce yerel Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) onayı isteyin. Kontrollü sıcaklık ve aydınlatma ve suya serbest erişime izin ve ticari bir kemirgen yemi ile hayvan barınağında Ev hayvanları. </li><li> Intraperitonal ketamin enjeksiyonu (80 mg / kg) ve ksilazin (10 mg / kg) sıçanlarda anestezisi. Ayak-tutam tarafından ve gerektiğinde Administer ek anestezik eğer derin anestezi onaylayın. </li><li> Cerrahi anestezi onayladıktan sonra, dekapitasyon hayvan euthanize. Uti için AAALAC yönergeleri izleyinHayvan ötanazi için uygun yöntemler lizing. </li><li> Sternum için pelvis bir orta hat laparotomi gerçekleştirmek için bir diseksiyon makas ve forseps kullanın. Bu iki adımda yapılır: İlk olarak, deri insizyon ve ikinci olarak, altta yatan tabaka kas insizyon. Bakım karın içi organları kesmemeye dikkat edilmelidir. </li><li> Pilor için bağırsak yakın ve ileo-çekal kavşağına yakın uzak ucuna proksimal ucunu kesin. Hem besin bulamacı ve böylece hücre dışı banyo solüsyonunun kirlenmesini önlemek dışkı sızıntısı önlemek için ayrı ayrı biter kravat. Besleme damar, yani üst mezenterik arter yakınındaki tabanında mezenter İnsizyon ve buz gibi soğuk diseksiyon çözeltisi içeren 50 ml&#39;lik bir behere bütün ince bağırsak mezenterik yatak aktarın. </li><li> Hasat doku 5 dakika boyunca buz gibi soğuk diseksiyon çözeltisi içinde kalmak ve kan kurtulmak taze diseksiyon çözümü ile durulayın izin verin. </li></ol> 5. İzolasyon ve 4 th Kanülasyon </sup&gt; Sipariş Mezenterik Arter <ol><li> Bir sylgard kaplı çanak sağ taraftaki bağırsağın proksimal ucunu aşağı pin. (Şekil 1) mezenter yaymak için aşağı kesimi iğneleme ve kan damarlarını açığa bir saat yönünün tersinde yolunda kalan bağırsak uzatın. Not: Oda sıcaklığında arter segmentleri izole. Aksi takdirde buz üzerinde çanak içeren mezenterik çarşı yerleştirin. Bizim kurumda olanlar dahil olmak üzere bazı laboratuvarlar, 4 ° C&#39;de arterleri incelemek için soğutucu üniteleri kullanın. </li><li> Stereo Zoom mikroskobu altında sipariş küçük mezenterik arterler inci 3 rd ve 4 küçük makas kullanarak ince bağırsağa (~ 260 mikron) paralel teşrih. Öncelikle kaplama yağ uzak teşrih. Sonra ven teşrih ve V-şekilli şube noktası ile arteri izole. Seçilen parçayı ponksiyon için dikkatli olun. Bir 2. siparişi şube yakın yağ diseksiyon başlayın ve 3. ya da 4. ord için yol bulmaker gemiler. <ol><li> Not: Arterler ve venler kendi duvar kalınlığı dayalı ayırt edilebilir - arteriyel duvar ven yıllardan daha kalındır. Ayrıca, bağ dokusu bitişik zaman arterler yok kolaylıkla iken gemiler, damarlar çöküşüne hafifçe dik çekilir. Lümen çapı arterlerin yana &lt;400 mikron biz (çapı &lt;300 mikron lümen) sipariş sıçan mezenterik arterler inci 4 kullanılan bu protokol için sistemik vasküler direncin önemli siteler vardır. </li></ol></li><li> Ince bağırsağa arter paralel 4-5 mm&#39;lik bölümü izole edin. Ince bağırsağın içine gömmek tüm 5. sipariş dalları görselleştirmek ve biraz uzakta şube kökenli onları kesip bir kısmını korumak. Şube Bunlar korunmuş kısımları sonradan kanülasyon rehberlik, bir perfüzyon odasına arter segmentleri aktarmak için (diseksiyon forseps ile) siteleri tutan ve olarak hizmet vermektedir. </li><li> Ardından 2 kesi uzak yaparak arter segmentleri kesti5. sipariş arterin her tarafında şube ve perfüzyon odasına transfer (Şekil 1C ve efsane bakınız). </li><li> (: 100-150 mikron çap) diseksiyon forseps ile arteriyel segmentinin ipuçları tutarak diseksiyon forseps kullanarak cam mikropipet biri gemilerin bir ucunu cannulate. Kanüle ucuna önceden yüklenmiş kısmen kapalı dikiş kaydırın ve emniyete alın. Not: arterin yakın ucu in situ ortamda taklit etmek servo kontrollü basınç ayar cihazına bağlı olan bir cam kanül üzerine kanüle edilebilir. </li><li> Bir diseksiyon çözüm kanül ve stopcock bağlayan tüp diseksiyon çözüm şırınga bu birleşir gibi bu kanül bağlı stopcock 10 ml şırınga yüklenen takın. Yavaşça şırınga yükseltmek. çözüm üzerinde yerçekimi kuvveti geminin açık ucundan içi damar kanı kaldıracaktır. Intra-arteriyel kan ayrılmasından sonra, Stopcock kapatın. Alternatif, basınç denetleyicisi stopcock takın açın ve yavaşça aynı sonucu elde etmek 5-10 mm Hg basıncı artırmak Not:. </li><li> Dikkatle arteryel segmentin çözülmüş ucuna mümkün olduğunca yakın, diğer bir kanül getirerek bir ikinci cam kanül üzerine kapların uzak ucunu bağlayın. Kanüle ucuna önceden yüklenmiş kısmen kapalı dikiş kaydırın ve emniyete alın. Bakım römorkör veya arteriyel segmentler çekmeyin alınmalıdır. Her iki kanüller bağlı stopcocks kapalı olduğundan emin olun. </li><li> Canlı video kaydı ile donatılmış inverted mikroskop aşamasına perfüzyon odasına aktarın. </li><li> Bir servo kontrollü basınç düzenleyici cihazı arteryel segmentin yakın ucuna bağlı kanülün Stopcock bağlayın ve stabil lümen içi basıncını korumak için kapalı kalır musluk için diğer kanüle takılı olduğundan emin olun. </li><li> Daha sonra, emiş ağzı a vakum boru eklemeknd perfüzyon odasının perfüzyon portuna tüp. Not: Eğimli iğne noktası perfüzyon için emme ve künt bir iğne bağlantı noktası için kullanılır. </li><li> Tek satır içi çözüm ısıtıcı ile sıcak PSS ile geminin perfüzyon başlatın (37 ° C, gaz karışımı ile dengelenmiş: nötr pH ve yeterli oksijenasyonu 17 korumak için% 5 CO 2,% 5 O 2 ve% 90 N) 2 ml / dak kullanarak bir peristaltik pompası. Da vakumu açın. Sürekli sıcaklığını izlemek için odasında bir termistör yerleştirin. </li><li> Odasında PSS sıcaklığı yaklaştığında ~ 37 ° C (genellikle 5 dakika içinde), yavaş yavaş 20 ila 100 mmHg intraluminal basınç artışı ve sızıntı olup olmadığını kontrol edin damarları. Bu basınç regülatörü otomatik basınç ayarı kullanılarak yapılır. Sızıntı ile gemiler atın ve başka bir segment ile değiştirin. sızıntıları ile gemiler baskıyı tutmak mümkün olmayacaktır. </li><li> 100 mmHg basıncı korurken virajlı için arteriyel segmenti değerlendirin.Vida kolu kullanarak, arteriyel segmentinde düzeltmek için kanül taşıyın. Üzerinde arter segmentleri germeyin; Gol in vivo arter segmenti uzunluğu taklit etmektir. </li><li> 70 mmHg basıncı azaltmak (mezenterik çarşı 18 in vivo basınç taklit etmek) ve arteriyel segmenti stabilize ve miyojen sesi geliştirmeye olanak sağlar. Arterler (40-70 mmHg), deneysel strateji ve vasküler yatağa göre değişken basınç altında olabilir. Önceden yayınlanmış yorum farklı vasküler yatak 8&#39;den arter segmentlerinde MT değişkenlik mükemmel bir inceleme sağlar. </li></ol> Arter Çap 6. Ölçümü <ol><li> Tek renkli bir görüntü şarj çiftli aygıt kamera ile donatılmış bir mikroskop 10X objektif View at arterler. Video kare kapmak ve gerçek zamanlı kenar algılama sistemi kullanılarak lümen çapı ölçün. Kullanılan ekipman bir listesi, Tablo 3&#39;te verilmektedir. </li><li> Monitör ve kayıt damar dsürekli iameter. </li><li> MT gelişmesi için gözlemleyin. Not: sıçan mezenterik direnç arterlerde, 70 mmHg, MT geliştirme çapında% 20 azalma ~ ile karakterize olduğu görülmektedir. MT damar yatak ve hayvan türlerine göre değişir. </li><li> 1 mcM fenilefrin (Phe) ve 1 uM asetilkolin (ACh) ile vazokonstriktör ve vazodilatör yanıtları değerlendirerek damar canlılığı onaylayın. </li><li> Her bir deneyin sonunda, 20 dakika boyunca -serbest PSS Ca 2 + arterleri inkübe pasif çapı (PD) belirler. </li></ol> 7. andMyogenic Tepki <ol><li> 20 mm Hg basıncı azaltmak ve çapı stabilize etmek için izin verir. Artan adımlar (20, 40, 60, 80 ve 100), intraluminal basınç artış ve her basınç basamağında arterler (genellikle 5 dakika içinde) sabit bir çapı elde etmek için izin verir. </li><li> 20 mmHg intraluminal basıncı azaltmak ve 2 + -ücretsiz PSS 0.39 mM içeren Ca arteriyel segmenti kuluçkayaEGTA ve 0.1 mM SNP. Arteriyel çapı (genellikle 15 dk) stabilize etmek için izin verin. </li><li> 0.39 mM EGTA ve 0.1 mM SNP içeren Ca 2 + -ücretsiz PSS basınç adım yanıtı tekrarlayın. </li></ol> Verilerin Sonuçlarının ve Hesaplama 8. yorumlanması <ol><li> Ca 2+ gözlemlenen çapı yüzde fark aşağıdaki hesaplamaya göre her basınçta 2 + -ücretsiz PSS Ca karşı ihtiva-eden olarak MT hesaplayın: <img alt="Denklem 1" fo:src="/files/ftp_upload/50997/50997eq1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50997/50997eq1.jpg" /></li><li> Çapı vazomosyon geçiren arter için 1 dakika için plato fazı ortalaması alınarak hesaplanabilir. Ilişkiye göre maksimal gevşeme (% PD) yüzde olarak toplanan verileri Express:% PD = 100 x [ΔD / PD]; ΔD önce ve herhangi bir araştırma bileşik (örneğin, Phe) ilave edildikten sonra çapı arasındaki fark; PD ayrıca pasif çapı (birmaksimal çapı). </li></ol>

<ol>
	<li>Christensen, K. L., Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Location+of+resistance+arteries.">Location of resistance arteries.</a> J Vasc Res. 38, 1-12 (2001).</li><li>Rietzschel, E. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oxidized+low-density+lipoprotein+cholesterol+is+associated+with+decreases+in+cardiac+function+independent+of+vascular+alterations.">Oxidized low-density lipoprotein cholesterol is associated with decreases in cardiac function independent of vascular alterations.</a> Hypertension. 52, 535-541 (2008).</li><li>Hill, M. A., Ege, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Active+and+passive+mechanical+properties+of+isolated+arterioles+from+STZ-induced+diabetic+rats.+Effect+of+aminoguanidine+treatment.">Active and passive mechanical properties of isolated arterioles from STZ-induced diabetic rats. Effect of aminoguanidine treatment.</a> Diabetes. 43, 1450-1456 (1994).</li><li>Osol, G., Cipolla, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interaction+of+myogenic+and+adrenergic+mechanisms+in+isolated,+pressurized+uterine+radial+arteries+from+late-pregnant+and+nonpregnant+rats.">Interaction of myogenic and adrenergic mechanisms in isolated, pressurized uterine radial arteries from late-pregnant and nonpregnant rats.</a> Am J Obstet Gynecol. 168, 697-705 (1993).</li><li>Cipolla, M. J., McCall, A. L., Lessov, N., Porter, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reperfusion+decreases+myogenic+reactivity+and+alters+middle+cerebral+artery+function+after+focal+cerebral+ischemia+in+rats.">Reperfusion decreases myogenic reactivity and alters middle cerebral artery function after focal cerebral ischemia in rats.</a> Stroke. 28, 176-180 (1997).</li><li>Ren, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+myogenic+response+in+the+afferent+arteriole+of+spontaneously+hypertensive+rats.">Enhanced myogenic response in the afferent arteriole of spontaneously hypertensive rats.</a> Am J Physiol Heart Circ Physiol. 298, H1769-H1775 (2010).</li><li>Hayashi, K., Epstein, M., Saruta, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+myogenic+responsiveness+of+the+renal+microvasculature+in+experimental+hypertension.">Altered myogenic responsiveness of the renal microvasculature in experimental hypertension.</a> J Hypertens. 14, 1387-1401 (1996).</li><li>Schubert, R., Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+myogenic+response:+established+facts+and+attractive+hypotheses.">The myogenic response: established facts and attractive hypotheses.</a> Clin Sci (Lond). 96, 313-326 (1999).</li><li>Bridges, L. E., Williams, C. L., Pointer, M. A., Awumey, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenteric+artery+contraction+and+relaxation+studies+using+automated+wire+myography.">Mesenteric artery contraction and relaxation studies using automated wire myography.</a> J Vis Exp. , (2011).</li><li>Buus, N. H., Vanbavel, E., Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+Sensitivity+of+Rat+Mesenteric+Small+Arteries+to+Agonists+When+Studied+as+Ring+Preparations+or+as+Cannulated+Preparations.">Differences in Sensitivity of Rat Mesenteric Small Arteries to Agonists When Studied as Ring Preparations or as Cannulated Preparations.</a> British Journal of Pharmacology. 112, 579-587 (1994).</li><li>Falloon, B. J., Stephens, N., Tulip, J. R., Heagerty, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+small+artery+sensitivity+and+morphology+in+pressurized+and+wire-mounted+preparations.">Comparison of small artery sensitivity and morphology in pressurized and wire-mounted preparations.</a> Am J Physiol. 268, H670-H678 (1995).</li><li>Schubert, R., Wesselman, J. P. M., Nilsson, H., Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noradrenaline-induced+depolarization+is+smaller+in+isobaric+compared+to+isometric+preparations+of+rat+mesenteric+small+arteries.">Noradrenaline-induced depolarization is smaller in isobaric compared to isometric preparations of rat mesenteric small arteries.</a> Pflugers Archiv-European Journal of Physiology. 431, 794-796 (1996).</li><li>Khurana, S., Raina, H., Pappas, V., Raufman, J. P., Pallone, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+deoxycholylglycine,+a+conjugated+secondary+bile+acid,+on+myogenic+tone+and+agonist-induced+contraction+in+rat+resistance+arteries.">Effects of deoxycholylglycine, a conjugated secondary bile acid, on myogenic tone and agonist-induced contraction in rat resistance arteries.</a> PLoS One. 7, e32006 (2012).</li><li>Bayliss, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+local+reactions+of+the+arterial+wall+to+changes+of+internal+pressure.">On the local reactions of the arterial wall to changes of internal pressure.</a> J Physiol. 28, 220-231 (1902).</li><li>Hughes, J. M., Bund, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Arterial+myogenic+properties+of+the+spontaneously+hypertensive+rat.">Arterial myogenic properties of the spontaneously hypertensive rat.</a> Exp Physiol. 87, 527-534 (2002).</li><li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+vascular+smooth+muscle+cells+in+situ.">Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ.</a> Nature. 260, 617-619 (1976).</li><li>Raina, H., Zacharia, J., Li, M., Wier, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+by+Ca2+/calmodulin+of+an+exogenous+myosin+light+chain+kinase+in+mouse+arteries.">Activation by Ca2+/calmodulin of an exogenous myosin light chain kinase in mouse arteries.</a> J Physiol. 587, 2599-2612 (2009).</li><li>Fenger-Gron, J., Mulvany, M. J., Christensen, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenteric+blood+pressure+profile+of+conscious,+freely+moving+rats.">Mesenteric blood pressure profile of conscious, freely moving rats.</a> J Physiol. 488 (Pt 3), 753-760 (1995).</li><li>Davis, M. J., Hill, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Signaling+mechanisms+underlying+the+vascular+myogenic+response).">Signaling mechanisms underlying the vascular myogenic response).</a> Physiol Rev. 79, 387-423 (1999).</li><li>Osmond, J. M., Mintz, J. D., Dalton, B., Stepp, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Obesity+increases+blood+pressure,+cerebral+vascular+remodeling,+and+severity+of+stroke+in+the+Zucker+rat.">Obesity increases blood pressure, cerebral vascular remodeling, and severity of stroke in the Zucker rat.</a> Hypertension. 53, 381-386 (2009).</li><li>Ge, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endogenously+produced+20-HETE+modulates+myogenic+and+TGF+response+in+microperfused+afferent+arterioles.">Endogenously produced 20-HETE modulates myogenic and TGF response in microperfused afferent arterioles.</a> Prostaglandins Other Lipid Mediat. 102-103, 42-48 (2013).</li><li>Ryan, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Placental+ischemia+impairs+middle+cerebral+artery+myogenic+responses+in+the+pregnant+rat.">Placental ischemia impairs middle cerebral artery myogenic responses in the pregnant rat.</a> Hypertension. 58, 1126-1131 (2011).</li><li>Bagi, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Type+2+diabetic+mice+have+increased+arteriolar+tone+and+blood+pressure:+enhanced+release+of+COX-2-derived+constrictor+prostaglandins.">Type 2 diabetic mice have increased arteriolar tone and blood pressure: enhanced release of COX-2-derived constrictor prostaglandins.</a> Arterioscler Thromb Vasc Biol. 25, 1610-1616 (2005).</li></ol>

Yazarlar herhangi bir mali çatışmalar var.

Kritik adımlar, sorun giderme ve modifikasyonları Tipik bir izobarik damar hazırlık olarak, arter sıcak (37 ° C) PSS ile perfüze iki cam kanüller arasında 70 mmHg basınç altındadır. 30-45 dakika sonra, arterler 20-30 dk stabilize çapında kendiliğinden azalma ile karakterize, MT gelişir. çeşitli vasküler yataklar direnç arterler değişken MT geliştirmek. Cremastric arterler PD MT ~% 40 elde edebilir ise örnek sıçan direnci için mezenterik arterler, ~ PD% 25 MT gelişti...

Küçük direnç arterler SVR önemli belirleyicileri ve birçok hastalığın 1,2 patofizyolojisinde önemli bir rol oynamaktadır. Diyabet 3, gebelik 4, iskemi-reperfüzyon 5, obezite ve hipertansiyonun 6,7 gibi koşullar genellikle değiştirilmiş mikrovasküler işlevi ile ilişkilidir. Vasküler myography çeşitli hastalıklarda mikrovasküler fonksiyonu değişiklikleri önemli bilgiler sağlamak değil, aynı zamanda terapötik hedefleri belirlemek yardımcı ve vazoaktif bileşiklerin etkinliğini değerlendirmek değil sadece. Vasküler fonksiyon izometrik veya izobarik damar koşulları altında 8 izole küçük arterleri kullanarak çalışılmıştır. Izometrik myography detaylı açıklaması başka yerde 9 sağlanır. Ancak izobarik hazırlıkları 10-12 karşı izometrik elde edilen verilerdeki farklılıklar vardır. Basınçlı arteriyel hazırlıklar yakın fizyolojik koşullarda mikrovasküler fonksiyonunun çalışma izin beri,Elde edilen bulgular, vasküler yatağa 8,13 in vivo davranışları ile iyi korelasyon olabilir. 1902 yılında Bayliss ilk damar çapı 14 transmural basınç etkisi nitelendirdi. O basıncında bir azalma damar genişlemesi takip etti tavşan, kedi ve köpeklerde çeşitli vasküler yataklar küçük direnç arterlerinin gözlenen ve basınçtaki bir artış, vazokonstriksiyon izledi. Bu olgu, miyojenik yanıt olarak bilinir. Bayliss ve sonraki araştırmacılar izobarik koşullarda küçük direnç arterler MT 15,16 olarak bilinen sürekli daralma geliştirmek görülmektedir. Miyojenik yanıt ve MT Her iki basınç myography (PM) tekniği kullanılarak değerlendirilebilir. PM küçük arterler, venler ve diğer gemilerin vazoaktiviteye belirlemek için öncelikle kullanılır. Adından da anlaşılacağı gibi - - vasküler çapına vazoaktif bileşiklerin etkisini değerlendirmek ek olarak, AM intravasküler basıncı aracılı ch değerlendirmek için kullanılırvasküler çapına anges. Son birkaç yıl içinde, video mikroskobu ve cam pipet PM gerçekleştirmek için daha kolay yaptık çekerek gelişmiş bilgisayar yazılımı, gelişmeler. Ancak, küçük kan damarlarının canlı bozulmamış kesimleri diseksiyonu sıkıcı ve bazen zorlayıcı olmaya devam etmektedir. Burada sıçanlardan izole edilen küçük mezenterik direnç arterlerinde miyojenik tepkisini incelemek için ayrıntılı bir protokol özetlemektedir.

<table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Chemical</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Acetylcholine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>A6625</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Calcium chloride (CaCl2)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>223506</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>D-(+)-Glucose</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G5767</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ethylene glycol-bis(2-aminoethylether)-N,N,N',N'-tetra acetic acid (EGTA)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E3889</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ethylene diamine tetra acetic acid (EDTA)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>E9884</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>H3784</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Magnesium sulfate (MgSO4)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M7506</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>MOPS</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M5162</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Phenylephrine</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P6126</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Potassium chloride (KCl)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P3911</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Potassium phosphate (KH2PO4)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P5655</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium bicarbonate (NaHCO3 )</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S6014</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium chloride (NaCl)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S7653</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium hydroxide (NaOH)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S5881</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium nitroprusside</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>13451</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium phosphate monobasic monohydrate (NaH2PO4)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>S9638</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P8574</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Table 1.</td>
		 </tr>
		 <tr>
		 <td></td>
		 <td></td>
		 <td></td>
		 <td>
 <table border="1">
		<tbody>
		 <tr>
			<td>Physiological salt solution (1000 ml)</td>
			<td> mM</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>KCl</td>
			<td>4.9</td>
			<td>0.365 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>112</td>
			<td>6.545 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>MgSO4.7H2O</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.296 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.163 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>11.5</td>
			<td>2.072 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>26</td>
			<td>2.184 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>10</td>
			<td>2.383 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>2</td>
			<td>2 ml (1M stock)</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>De-ionized water</td>
			<td></td>
			<td>998 ml</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ca2+ free physiological salt solution (100 ml)</td>
			<td> mM</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>KCl</td>
			<td>4.9</td>
			<td>0.036 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>112</td>
			<td>0.645 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>MgSO4.7H2O</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.029 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>KH2PO4</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.016 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>11.5</td>
			<td>0.207 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaHCO3</td>
			<td>26</td>
			<td>0.218 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>HEPES</td>
			<td>10</td>
			<td>0.238 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>EGTA </td>
			<td>0.39</td>
			<td>0.015 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium nitroprusside </td>
			<td>0.1</td>
			<td>0.0026 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>De-ionized water</td>
			<td></td>
			<td>100 ml</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dissection solution, stock (500 ml)</td>
			<td> mM</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>145</td>
			<td>21.18 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>KCl</td>
			<td>4.7</td>
			<td>0.875 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>MgSO4</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.739 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>MOPS</td>
			<td>2</td>
			<td>1.049 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>EDTA</td>
			<td>0.02</td>
			<td>0.019 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>De-ionized water</td>
			<td></td>
			<td>500 ml</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Working dissection solution (100 ml)</td>
			<td> mM</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dissection solution stock</td>
			<td>20 ml</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>1.2</td>
			<td>0.091 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>NaH2PO4</td>
			<td>5</td>
			<td>0.016 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Sodium pyruvate</td>
			<td>2</td>
			<td>0.022 g</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>2</td>
			<td>0.2 ml (1M stock)</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>De-ionized water</td>
			<td></td>
			<td>79.8 ml</td>
		 </tr>
	 </tbody>
</table>
 </td>
	 </tr>
		 <tr>
		 <td></td>
		 <td></td>
		 <td></td>
		 <td>Table 2. Composition of Experimetnal solutions</td>
	 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Equipment</td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>CCD Monochrome Camera</td>
			<td>The imaging Source</td>
			<td>DMK 21AU04</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Single inline solution heater</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0102</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Thermistor</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>64-0108</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dual automatic temperature controller</td>
			<td>Warner Instruments</td>
			<td>TC-344B</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Flaming/Brown micropipette puller</td>
			<td>Sutter Instruments </td>
			<td>P-97</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Fluorescence System Interface</td>
			<td>IonOptix</td>
			<td>model FSI-700</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Forceps and scissors </td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ion Wizard-Core and Analysis</td>
			<td>IonOptix</td>
			<td>Ion Wizard 6.0</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Laboratory tubing</td>
			<td>Silastic </td>
			<td>508-005</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Male Sprague Dawley rat</td>
			<td>Harlan Laboratories</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Master flex console drive</td>
			<td>Cole-parmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Milli-Q Plus Ultrapure Water System</td>
			<td>Millipore</td>
			<td>ZD5211584</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Ophthalmic monofilament nylon suture </td>
			<td>Ethicon </td>
			<td>9007G</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Photometry and Dimensioning Microscope</td>
			<td>Motic</td>
			<td>AE31</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Pressure Servo Controller with peristaltic pump and pressure transducer</td>
			<td>Living Systems Instrumentation</td>
			<td>PS-200</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Nikon Instruments Inc</td>
			<td>SMZ660</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Vessel Chamber</td>
			<td>Living Systems Instrumentation</td>
			<td>CH-1</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Dissection dish</td>
			<td>Living Systems Instrumentation</td>
			<td>DD-90-S</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Thin Wall Glass Capillaries</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>TW120-6</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td>Microforge</td>
			<td>Stoelting</td>
			<td>51550</td>
			<td></td>
		 </tr>
		 <tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Table 3.</td>
		 </tr>
	 </tbody>
</table>

assessing myogenic response and vasoactivity in resistance mesenteric arteries using pressure myography

Küçük direnç arterlerin daralması ve artan veya intraluminal basınç azalması karşısında sırasıyla dilate; Miyojenik tepki olarak bilinen bu fenomen, yerel kan akımının önemli bir düzenleyicisidir. Izobarik koşullarda küçük direnç arterler sistemik vasküler direnç (SVR) önemli bir belirleyicisi olan Miyojenik tonu (MT) olarak bilinen daralmasını sürekli geliştirirler. Bu nedenle, küçük direnç arterlerde ex vivo basınçlı hazırlıkları yakın fizyolojik devletlerde mikrovasküler fonksiyonunu incelemek için önemli araçlardır. Bunu elde etmek için, küçük bir direnç, arter (çap ~ 260 um) bir taze izole sağlam kademeli bir, iki küçük cam kanüller ve basınçlı üzerine monte edilir. Bu arter hazırlıklar vivo özellikleri ve gerçek zamanlı olarak damar tonusu izin değerlendirmesinde en korur. Burada sıçanlardan basınçlı küçük direnç mezenterik arterlerde vazoaktiviteye değerlendirilmesi için ayrıntılı bir protokol sağlar; Bu arterler geliştirmeksürekli vazokonstriksiyon - maksimal çapının yaklaşık 25% - 70 mmHg basınçlı. Bu arter preparatları çeşitli hastalıkların hayvan modellerinde mikrovasküler fonksiyonunda değişiklik intra-arteryal basınç ve vazoaktiviteye arasındaki ilişki ile ilgili araştırma bileşiklerin etkisini incelemek ve belirlemek için kullanılabilir.

Tipik bir basınç myograph kurulumunun şematik gösterimi, Şekil 1 &#39;de gösterilmiştir. Kabın iki ucu cam mikropipet ile kanüllenmiş ve her iki tarafta da dikiş ile sabitlenir. Boru ve açık valf yardımı ile, tek bir kanül servo kontrollü bir basınç regülatörü bağlanır; Diğer Kanül, bir kapalı vana bağlanır. odacık bir CCD kamera bağlı bir inverted mikroskop ile gözlenir PSS ve damar çapı değişiklikleri ile perfüze. 70 mmHg basınç arte...

Watch this Scientific Journal Video about Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography at JoVE.com

Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

Basınç myography basınçlı zaman sürekli daralma geliştirmek küçük arterlerin vazoaktiviteye değerlendirmek için kullanılır. Bu yazıda sıçanların, vazoaktiviteye ve damar çapı intraluminal basıncın etkisi küçük mezenterik arterler izole segmentlerinde değerlendirmek için ayrıntılı bir protokol sağlar.

Basınç myography kullanma Direnç Mezenterik Arter ise andMyogenic Tepkisi ve vazoaktiviteye Değerlendirilmesi

Small resistance arteries constrict and dilate respectively in response to increased or decreased intraluminal pressure; this phenomenon known as myogenic ...

assessing-myogenic-response-vasoactivity-resistance-mesenteric

Research

JoVE Journal

Medicine

16.6K Görüntüleme.  Georgia Regents University.  Basınç myography basınçlı zaman sürekli daralma geliştirmek küçük arterlerin vazoaktiviteye değerlendirmek için kullanılır. Bu yazıda sıçanların, vazoaktiviteye ve damar çapı intraluminal basıncın etkisi küçük mezenterik arterler izole segmentlerinde değerlendirmek için ayrıntılı bir protokol sağlar. 

Video: Assessing Myogenic Response and Vasoactivity In Resistance Mesenteric Arteries Using Pressure Myography

Mesenteric Artery Contraction and Relaxation Studies Using Automated Wire Myography

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between 100-400 &mu;m in diameter function primarily in directing blood flow to various organs according to the overall requirements of the body. The rat mesenteric artery has a diameter greater than 100 &mu;m. The myography technique, first described by Mulvay and Halpern1, was based on the method proposed by Bevan and Osher2. The technique provides information about small vessels under isometric conditions, where substantial shortening of the muscle preparation is prevented. Since force production and sensitivity of vessels to different agonists is dependent on the extent of stretch, according to active tension-length relation, it is essential to conduct contraction studies under isometric conditions to prevent compliance of the mounting wires. Stainless steel wires are preferred to tungsten wires because of oxidation of the latter, which affects recorded responses3.The technique allows for the comparison of agonist-induced contractions of mounted vessels to obtain evidence for normal function of vascular smooth muscle cell receptors.
We have shown in several studies that isolated mesenteric arteries that are contracted with phenylyephrine relax upon addition of cumulative concentrations of extracellular calcium (Ca2+e). The findings led us to conclude that perivascular sensory nerves, which express the G protein-coupled Ca2+-sensing receptor (CaR), mediate this vasorelaxation response. Using an automated wire myography method, we show here that mesenteric arteries from Wistar, Dahl salt-sensitive(DS) and Dahl salt-resistant (DR) rats respond differently to Ca2+e. Tissues from Wistar rats showed higher Ca2+-sensitivity compared to those from DR and DS. Reduced CaR expression in mesenteric arteries from DS rats correlates with reduced Ca2+e-induced relaxation of isolated, pre-contracted arteries. The data suggest that the CaR is required for relaxation of mesenteric arteries under increased adrenergic tone, as occurs in hypertension, and indicate an inherent defect in the CaR signaling pathway in Dahl animals, which is much more severe in DS.
The method is useful in determining vascular reactivity ex vivo in mesenteric resistance arteries and similar small blood vessels and comparisons between different agonists and/or antagonists can be easily and consistently assessed side-by-side6,7,8.

An automated myography method for force measurements in isolated mesenteric arteries is described. It employs a Mulvany-Halpern Auto Dual Wire Myograph 510A to determine responses to phenylephrine and extracellular calcium. The method allows consistent determination of isometric responses to agonists in small vessels of diameters of 60 - 300 &mu;m, independently.

Otomatik Tel kasılmaların kâğıda çizilmesi Yüklü daralma ve Rahatlama Çalışmaları

Proximal resistance vessels, such as the mesenteric arteries, contribute substantially to the peripheral resistance. These small vessels of between ...

Tıp

Epidural Intracranial Pressure Measurement in Rats Using a Fiber-optic Pressure Transducer

Elevated intracranial pressure (ICP) is a significant problem in several forms of ischemic brain injury including stroke, traumatic brain injury and cardiac arrest. This elevation may result in further neurological injury, in the form of transtentorial herniation1,2,3,4, midbrain compression, neurological deficit or increased cerebral infarct2,4. Current therapies are often inadequate to control elevated ICP in the clinical setting5,6,7 . Thus there is a need for accurate methods of ICP measurement in animal models to further our understanding of the basic mechanisms and to develop new treatments for elevated ICP.
In both the clinical and experimental setting ICP cannot be estimated without direct measurement. Several methods of ICP catheter insertion currently exist. Of these the intraventricular catheter has become the clinical 'gold standard' of ICP measurement in humans8. This method involves the partial removal of skull and the instrumentation of the catheter through brain tissue. Consequently, intraventricular catheters have an infection rate of 6-11%9. For this reason, subdural and epidural cannulations have become the preferred methods in animal models of ischemic injury. 
Various ICP measurement techniques have been adapted for animal models, and of these, fluid-filled telemetry catheters10 and solid state catheters are the most frequently used11,12,13,14,15. The fluid-filled systems are prone to developing air bubbles in the line, resulting in false ICP readings. Solid state probes avoid this problem (Figure 1). An additional problem is fitting catheters under the skull or into the ventricles without causing any brain injury that might alter the experimental outcomes. Therefore, we have developed a method that places an ICP catheter contiguous with the epidural space, but avoids the need to insert it between skull and brain. 
An optic fibre pressure catheter (420LP, SAMBA Sensors, Sweden) was used to measure ICP at the epidural location because the location of the pressure sensor (at the very tip of the catheter) was found to produce a high fidelity ICP signal in this model. There are other manufacturers of similar optic fibre technologies13 that may be used with our methodology. Alternative solid state catheters, which have the pressure sensor located at the side of the catheter tip, would not be appropriate for this model as the signal would be dampened by the presence of the monitoring screw. 
Here, we present a relatively simple and accurate method to measure ICP. This method can be used across a wide range of ICP related animal models.

A novel technique to record the pressures within the skull is described. The minimally invasive method uses a fibre-optic pressure sensing system to accurately measure intracranial pressure (ICP) in anaesthetized rats without causing significant brain trauma. The technique may be used in a wide range of experimental models.

Bir Fiber optik Basıç kullanarak Sıçanlarda Epidural İntrakraniyal Basınç Ölçümü

Elevated intracranial pressure (ICP) is a significant problem in several forms of ischemic brain injury including stroke, traumatic brain injury and ...

Isolating and Using Sections of Bovine Mesenteric Artery and Vein as a Bioassay to Test for Vasoactivity in the Small Intestine

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that system. Changes in blood flow to the small intestine can result in effects on the absorptive functions of the organ. Particular interest in toxins liberated from feedstuffs through fermentative and digestive processes has developed in ruminants as an area where productive efficiencies could be improved. The video associated with this article describes an in vitro bioassay developed to screen compounds for vasoactivity in isolated cross-sections of bovine mesenteric artery and vein using a multimyograph. Once the blood vessels are mounted and equilibrated in the myograph, the bioassay itself can be used: as a screening tool to evaluate the contractile response or vasoactivity of compounds of interest; determine the presence of receptor types by pharmacologically targeting receptors with specific agonists; determine the role of a receptor with the presence of one or more antagonists; or determine potential interactions of compounds of interest with antagonists. Through all of this, data are collected real-time, tissue collected from a single animal can be exposed to a large number of different experimental treatments (an in vitro advantage), and represents vasculature on either side of the capillary bed to provide an accurate picture of what could be happening in the afferent and efferent blood supply supporting the small intestine.

The small intestine is frequently exposed to toxins that can influence blood flow and negatively impact nutrient absorption. Using a multimyograph and mesenteric artery and vein isolates, compounds or toxins of interest can be screened for vasoactivity.

Bir Biyoassay olarak Sığır Mezenterik Arter ve Ven Bölüm yalıtma ve kullanma İnce Barsak vazoaktiviteye için Test

Mammalian gastrointestinal systems are constantly exposed to compounds (desirable and undesirable) that can have an effect on blood flow to and from that ...

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. Despite the discovery of key regulators of uterine contractility, this process is still not fully understood. Transgenic mice provide an ideal model in which to study parturition. Previously, the only method to study uterine contractility in the mouse was ex vivo isometric tension recordings, which are suboptimal for several reasons. The uterus must be removed from its physiological environment, a limited time course of investigation is possible, and the mice must be sacrificed. The recent development of radiometric telemetry has allowed for longitudinal, real-time measurements of in vivo intrauterine pressure in mice. Here, the implantation of an intrauterine telemeter to measure pressure changes in the mouse uterus from mid-pregnancy until delivery is described. By comparing differences in pressures between wild type and transgenic mice, the physiological impact of a gene of interest can be elucidated. This technique should expedite the development of therapeutics used to treat myometrial disorders during pregnancy, including preterm labor.

Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

This manuscript provides a protocol for implanting telemeters in the mouse for the purpose of measuring intrauterine pressures during pregnancy.

Rahim içi Telemetri Fare Kontraktil Basıncını Ölçmek<em&gt; İn Vivo</em

A complex integration of molecular and electrical signals is needed to transform a quiescent uterus into a contractile organ at the end of pregnancy. ...

Trabecular Meshwork Response to Pressure Elevation in the Living Human Eye

The mechanical characteristics of the trabecular meshwork (TM) are linked to outflow resistance and intraocular pressure (IOP) regulation. The rationale behind this technique is the direct observation of the mechanical response of the TM to acute IOP elevation. Prior to scanning, IOP is measured at baseline and during IOP elevation. The limbus is scanned by spectral-domain optical coherence tomography at baseline and during IOP elevation (ophthalmodynamometer (ODM) applied at 30 g force). Scans are processed to enhance visualization of the aqueous humor outflow pathway using ImageJ. Vascular landmarks are used to identify corresponding locations in baseline and IOP elevation scan volumes. Schlemm canal (SC) cross-sectional area (SC-CSA) and SC length from anterior to posterior along its long axis are measured manually at 10 locations within a 1 mm segment of SC. Mean inner to outer wall distance (short axis length) is calculated as the area of SC divided by its long axis length. To examine the contribution of adjacent tissues to the effect IOP elevations, measurements are repeated without and with smooth muscle relaxation with instillation of tropicamide. TM migration into SC is resisted by TM stiffness, but is enhanced by the support of its attachment to adjacent smooth muscle within the ciliary body. This technique is the first to measure the living human TM response to pressure elevation in situ under physiological conditions within the human eye.

Trabecular meshwork (TM) migration into Schlemm&#8217;s canal space can be induced by acute pressure elevation by ophthalmodynamometer, and observed by spectral domain optical coherence tomography. The goal of this method is to quantify the morphometric response of the living outflow tract to acute pressure elevation in living tissues in situ.

Yaşayan İnsan Eye Basınç Artışı trabeküler Tepki

The mechanical characteristics of the trabecular meshwork (TM) are linked to outflow resistance and intraocular pressure (IOP) regulation. The rationale ...

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

Recently-developed cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR)-modulating drugs correct surface expression and/or function of the mutant CFTR channel in subjects with cystic fibrosis (CF). Identification of subjects that may benefit from these drugs is challenging because of the extensive heterogeneity of CFTR mutations, as well as other unknown factors that contribute to individual drug efficacy. Here, we describe a simple and relatively rapid assay for measuring individual CFTR function and response to CFTR modulators in vitro. Three dimensional (3D) epithelial organoids are grown from rectal biopsies in standard organoid medium. Once established, the organoids can be bio-banked for future analysis. For the assay, 30-80 organoids are seeded in 96-well plates in basement membrane matrix and are then exposed to drugs. One day later, the organoids are stained with calcein green, and forskolin-induced swelling is monitored by confocal live cell microscopy at 37 &#176;C. Forskolin-induced swelling is fully CFTR-dependent and is sufficiently sensitive and precise to allow for discrimination between the drug responses of individuals with different and even identical CFTR mutations. In vitro swell responses correlate with the clinical response to therapy. This assay provides a cost-effective approach for the identification of drug-responsive individuals, independent of their CFTR mutations. It may also be instrumental in the development of future CFTR modulators.

Forskolin-induced Swelling in Intestinal Organoids: An In Vitro Assay for Assessing Drug Response in Cystic Fibrosis Patients

This protocol describes an assay for measuring CFTR function and CFTR modulator responses in cultured tissue from subjects with cystic fibrosis (CF). Biopsy-derived intestinal organoids swell in a cAMP-driven fashion, a response that is defective (or strongly reduced) in CF organoids and can be restored by exposure to CFTR modulators.

Forskolin kaynaklı bağırsak Organoids şişme: Bir<em&gt; İn Vitro</em&gt; Deney Kistik Fibrozis Hastalarında İlaç Tepki değerlendirilmesi için

Recently-developed cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR)-modulating drugs correct surface expression and/or function of the mutant ...

A Cell Culture Model of Resistance Arteries

The myoendothelial junction (MEJ), a unique signaling microdomain in small diameter resistance arteries, exhibits localization of specific proteins and signaling processes that can control vascular tone and blood pressure. As it is a projection from either the endothelial or smooth muscle cell, and due to its small size (on average, an area of ~1 &#181;m2), the MEJ is difficult to study in isolation. However, we have developed a cell culture model called the vascular cell co-culture (VCCC) that allows for in vitro MEJ formation, endothelial cell polarization, and dissection of signaling proteins and processes in the vascular wall of resistance arteries. The VCCC has a multitude of applications and can be adapted to suit different cell types. The model consists of two cell types grown on opposite sides of a filter with 0.4 &#181;m pores in which the in vitro MEJs can form. Here we describe how to create the VCCC via plating of cells and isolation of endothelial, MEJ, and smooth muscle fractions, which can then be used for protein isolation or activity assays. The filter with intact cell layers can be fixed, embedded, and sectioned for immunofluorescent analysis. Importantly, many of the discoveries from this model have been confirmed using intact resistance arteries, underscoring its physiological relevance.

A cell culture model of resistance arteries is described, allowing for the dissection of signaling pathways in endothelium, smooth muscle, or between endothelium and smooth muscle (the myoendothelial junction). The selective application of agonists or protein isolation, electron microscopy, or immunofluorescence can be utilized using this cell culture model.

Hücre kültür manken direnç arter

The myoendothelial junction (MEJ), a unique signaling microdomain in small diameter resistance arteries, exhibits localization of specific proteins and ...

Evaluation of Vascular Control Mechanisms Utilizing Video Microscopy of Isolated Resistance Arteries of Rats

This protocol describes the use of in vitro television microscopy to evaluate vascular function in isolated cerebral resistance arteries (and other vessels), and describes techniques for evaluating tissue perfusion using Laser Doppler Flowmetry (LDF) and microvessel density utilizing fluorescently labeled Griffonia simplicifolia (GS1) lectin. Current methods for studying isolated resistance arteries at transmural pressures encountered in vivo and in the absence of parenchymal cell influences provide a critical link between in vivo studies and information gained from molecular reductionist approaches that provide limited insight into integrative responses at the whole animal level. LDF and techniques to selectively identify arterioles and capillaries with fluorescently-labeled GS1 lectin provide practical solutions to enable investigators to extend the knowledge gained from studies of isolated resistance arteries. This paper describes the application of these techniques to gain fundamental knowledge of vascular physiology and pathology in the rat as a general experimental model, and in a variety of specialized genetically engineered &#34;designer&#34; rat strains that can provide important insight into the influence of specific genes on important vascular phenotypes. Utilizing these valuable experimental approaches in rat strains developed by selective breeding strategies and new technologies for producing gene knockout models in the rat, will expand the rigor of scientific premises developed in knockout mouse models and extend that knowledge to a more relevant animal model, with a well understood physiological background and suitability for physiological studies because of its larger size.

This manuscript describes in vitro video microscopy protocols for evaluating vascular function in rat cerebral resistance arteries. The manuscript also describes techniques for evaluating microvessel density with fluorescently labeled lectin and tissue perfusion using Laser Doppler Flowmetry.

Sıçan izole direnç arter Video mikroskobu kullanan vasküler kontrol mekanizmalarının değerlendirilmesi

This protocol describes the use of in vitro television microscopy to evaluate vascular function in isolated cerebral resistance arteries (and other ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Cardiac Response to &#946;-Adrenergic Stimulation Determined by Pressure-Volume Loop Analysis

Determination of the cardiac function is a robust endpoint analysis in animal models of cardiovascular diseases in order to characterize effects of specific treatments on the heart. Due to the feasibility of genetic manipulations the mouse has become the most common mammalian animal model to study cardiac function and to search for new potential therapeutic targets. Here we describe a protocol to determine cardiac function&#160;in vivo using pressure-volume loop measurements and analysis during basal conditions and under &#946;-adrenergic stimulation by intravenous infusion of increasing concentrations of isoproterenol. We provide a refined protocol including ventilation support taking into account the positive end-expiratory pressure to ameliorate negative effects during open-chest measurements, and potent analgesia (Buprenorphine) to avoid uncontrollable myocardial stress evoked by pain during the procedure. All together the detailed description of the procedure and discussion about possible pitfalls enables highly standardized and reproducible pressure-volume loop analysis, reducing the exclusion of animals from the experimental cohort by preventing possible methodological bias.

Cardiac Response to &amp;#946;-Adrenergic Stimulation Determined by Pressure-Volume Loop Analysis

Here we describe a cardiac pressure-volume loop analysis under increasing doses of intravenously infused isoproterenol to determine the intrinsic cardiac function and the &#946;-adrenergic reserve in mice. We use a modified open-chest approach for the pressure-volume loop measurements, in which we include ventilation with positive end-expiratory pressure.

Basınç-Hacim Döngüsü Analizi ile Belirlenen β-Adrenerjik Stimülasyona Kardiyak Yanıt

Determination of the cardiac function is a robust endpoint analysis in animal models of cardiovascular diseases in order to characterize effects of ...