Biz minnetle Anja Lauterbach (Lehrstuhl BIOMATERIALIEN), Lorenz Summa (Sandler AG) ve Armin Boeck (B / S / H / G) teknik ve bilimsel destek kabul. SEM-görüntüleme Johannes Diehl (Lehrstuhl BIOMATERIALIEN) ile gerçekleştirildi. Fonlama BMBF (01RB0710) elde edildi.

1. Dope Hazırlık İplik <ol><li> EADF4 (C16) protein liyofilize alın. </li><li> Yüksek hassasiyetli bir ölçek kullanarak, 1 ml&#39;lik bir reaksiyon kabı içinde eADF4 (C16), 20 mg tartılır. </li><li> Heksafloroizopropanol (HFIP) 200 ul ekleyin ve Parafilm ile gemi mühür. Not: HFIP son derece değişken ve zararlı olduğunu. Dikkatli bir güvenlik kabini, pipet altında solunum yolu, çalışmalarında zarar ve tüp kap gibi. </li><li> Vortex 1 dakika için süspansiyon ve daha fazla çözüm temizlemek için sallayın. Sağlamak için, proteinin tüm miktarı tamamen çözülür ki, aşırı gece bekleyin. </li></ol> 2. Elektro <ol><li> Yer karşı elektrot ve elektrot (-22.5 kV) ve karşı elektrot (2,5 kV) hem de önceden belirlenmiş voltaj üstünde filtre malzemesi: elektro cihazı (Şekil 1) hazırlayın. 315 ul / saat debi ayarlayın. Not: while elektrospinning, toksik HFIP buharlaşacaktır. Sizin elektro cihazı bir davlumbaz bağlı olduğundan emin olun. </li><li> Ticari olarak satılan 20 G iğne alın ve 30 mm&#39;lik uzunluğu bir el değirmeni ile keskin ucu eziyet. Bir 1 ml şırınga ve iğne bağlayın. Not: Bir uçak iğne ucu iyi tanımlanmış bir Taylor koni oluşturmak için gereklidir. </li><li> Şırınga içine tüm iplik uyuşturucu (200 ul) yükleyin. Tam çözüm, eğirme işlemi sırasında çekirdek izin vermek amacıyla, havanın 100 ul ile uyuşturucu Yerleşimi. Not: iğne tıkanmasını önlemek için, iplik dop içinde hiç parçacık (kümeler veya kirleri) olduğundan emin olun. Bir davlumbaz altında çalışmak! </li><li> Elektro cihazın şırınga pompası için dolu şırınga takın ve bir damlacık iğne ucunda görünene kadar dikkatle şırınga üzerine piston basın. Piston kilitleyin. </li><li> Uzaklığını ayarlayıniğne ucu ve 8-20 cm karşıt elektrot arasında. </li><li> Şırınga pompası başlatın ve iğne açıklıktan (genellikle kurumuş) damlacık çıkarın. Hemen elektro cihazın tüm güvenlik kurulumları etkinleştirin ve en kısa sürede yeni bir damlacık göründüğü gibi yüksek gerilim kaynağı başlar. Iplik Uyuşturucunun elektro sonra başlayacaktır. Iplik süresini kontrol etmek için bir kronometre kullanın. Not: Çözeltinin kurumasını engellemek ve böylece tıkanma iğne için, hemen kurutuldu damlacık çıkardıktan sonra eğirme işlemini başlatmak için gereklidir. </li><li> Rekombinant örümcek ipek proteinlerin elektro beri nem ve sıcaklığa bağlıdır, tek tek laboratuvar koşulları doğru proses parametrelerinin bir uyum (Şekil 2) gerekli olabilir. Not: yeterli bir akış hızı sağlar (Şekil 2B) kurumasını önlemek için damlacık. Düşük bir humidi varsaty çevreleyen atmosferde, bağıl nem ayarlamak veya akış oranını yükseltmek. Uygun bir Taylor konisi oluşana kadar gerilimi alt (Şekil 2A). Ucu (Şekil 2C) de bir çözüm olduğunda, akış hızı yükseltmek ve bir damlacık oluşuncaya kadar gerilimi düşük. Sonra düzenli ve istikrarlı Taylor Koni (Şekil 2A) kurmak için gerilim ayarlayın. </li><li> 30 şırınga pompası kapama anahtarı elektro sec / 60 sn / 90 sn sonra. Düşen damlalarını önlemek amacıyla, şırınga içinde kalan basınç serbest bırakmak için yüksek gerilim kaynağını kapatmadan önce 10 saniye bekleyin. </li><li> Adımlar 6-8 bu karşılaştırma için poliamid, polipropilen ve poliester dokuma olmayan kafesleri, hem de siyah bir kağıt filtre malzemeleri, farklı türlerde gerçekleştirilebilir. </li><li> Sonraki istikrar deneyler için bir dokunmamış örgü üretmek, filtre malzemesi yerine siyah kağıt kullanın ve 5 7 adımları uygulayın. Elektrospinning 5 dakika sonra, durdurmakişlem, adım 8&#39;de tarif edildiği gibi. </li></ol> 3. İpek Nonwoven Ağlar tedavi sonrası <ol><li> 60 Ön ısı fırın ° C </li><li> EADF4 (C16) dokunmamış kafesleri dikey ve bir kilitlenebilir cam kap içinde 2 cm bir mesafe ile filtre yüzeylerde yerleştirin. Kap daha sonra bir etanol ve su tanıtmak için kullanılacak iki açıklığa sahip olmalıdır. Not: filtre malzemeleri sabitlerken, geçirgenlik deneyleri için gerekli olan alan kelepçeleri zarar olmadığından emin olun. </li><li> Tedavi sonrası kabın iç taban (Şekil 3) işaret silikon tüp ile iki adet 60 ml şırınga, etanol ile doldurulmuş bir su ile doldurulmuş bir bağlayın. Not: Uygulamadan sonra kabından sıvıyı edebilmek için, mümkün olduğunca yakın alt boru açıklıklar yerleştirin. </li><li> Ov tedavi sonrası kap yerleştirintr ve şırınga ekstrüzyon ile 60 ml etanol ilave edin. Tedavi süresini kontrol etmek için bir kronometre kullanın. </li><li> Etanol buhar tedavi 90 dakika sonra, cam şırınga ile ethanol çıkartılmış ve ikinci şırınga ile 60 ml su ilave edin. </li><li> Başka bir 90 dakika bekleyin, daha sonra su çıkarmak ve fırın kapatın. Tamamen soğuyana kadar yoğunlaştırılmasıyla damlalarını önlemek amacıyla, fırın içinde bırakılabilir. </li></ol> 4. Örümcek İpek Nonwoven Ağlar Analizi <ol><li> Siyah kağıt veya diğer çıkarılabilir destek stabilite testleri için ipek dokuma kafes hazırlayın. Karton dışında iki kare kesin ve çift yapışkan yapışkan bant ayarlayın. Ipek dokuma örgü üzerine bir kare siyah kağıt üzerinde biriken basın ve ipek lifleri (SEM-görüntüleme sonraki için aşırı lifleri tutmak) en fazla kesmek için bir neşter kullanın. Dikkatlice kağıttan dokunmamış ayırmak amacıyla çerçeve çıkarın. Ikinci çerçeve ile bu adımı yineleyin(Şekil 4). </li><li> Pratik daldırma testi: Her bir parça (1 cm 2), sonrası tedavi ve arıtılmamış ipek dokuma örgü kesin ve deiyonize suya daldırma. Tedavi dokunmamış örgü (Şekil 5) istikrarlı olacak ise arıtılmamış ipek dokuma örgü hemen eriyecektir. Daldırma sonra, daldırma örnek kuru ve SEM görüntüleme için hazırlayın. </li><li> Fourier dönüşümü kızılötesi spektroskopi (FTIR)-ölçüm ve sonraki Fourier kendini deconvolution (FSD): dokunmamış kafes tedavi sonrası üzerine ipek proteinleri yapısal değişiklikler hakkında bilgi elde etmek için, FTIR parametreler kullanılarak uygulanabilir: Geçirgenlik 800 4000 cm -1 mod, tarama, 60 birikimleri ölçülen ve her spektrum için ortalaması alınır, bir referans spektrumu başına ölçülür. Verilerin kantitatif analizi için, FS (Şekil 6 ve Şekil 7) kullanılabilir. Böylece, eğrileri verileri ar indirgenir1.590 ve 1.705 cm-1 ve bir temel düzeltme arasında adet gerçekleştirilir. Yerel bir en küçük kareler uygun 22 (1611, 1619, 1624, 1630 1640, 1650, 1659, 1666, 1680, 1691, 1.698 cm -1) önceki çalışmalarda alınan pik pozisyonlarına göre hesaplanır. </li><li> SEM görüntü: SEM elyaf çapları ve farklı filtre yüzeylerde ipek lifleri morfolojisini araştırmak ve lif morfolojisi (Şekil 8) tedavi sonrası etkisini analiz etmek için uygulanabilir. Yeterince ayrıntılı görüntüler elde etmek için 25.000 x 5.000 x büyütme kullanın. </li></ol> 5. Hava geçirgenliği <ol><li> Bir Akustron hava geçirgenliği cihazın ölçüm alanda filtre malzemesinin doğru boyda parçası yerleştirin. Not :: Eğer hava geçirgenliği cihazın başka tür kullanırsanız, DIN gereklerine 53 887, DIN 53 120, ISO yerine getirir emin olun 9237 ve ASTM D 737-96 standartları. </li><li>Bir Akustron hava geçirgenliği cihazı (veya başka gibi 5.1 tasvir) kullanır. Gerekli normlu veri hesaplarsanız [l / (m 2 x sn)]. </li><li> Sizin örnek farklı parçaları ile 1. ve 2. adımları en az 10 kez tekrarlayın ve aritmetik orta (Şekil 9) hesaplar. Not: Ölçme hava geçirgenliği cihazın temas ve dokunmamış örgü gerektirir. Böylece, örneklerin dikkatli bir işleme hassas ipek dokunmamış örgü rüptürü önlemek için şarttır. </li></ol> 6. Filtre Etkinliğinin Belirlenmesi <ol><li> Basınç kontrolü ve böyle bir evrensel parçacık büyüklük (Palas GmbH, Karlsruhe, Alm) olarak partikül sayacı ile uygun bir makine kullanın. </li><li> Cihaz ve ölçü partikül tutma (Şekil 10), filtrenin örnekleri yerleştirin. Aerosol: Di-etil-hekzil-sebacat (DEHS); partikül boyutları: 0,3-3 mikron; süresi: 30 sn; sıvı hızı: 2.350 cm / sn; hava akışı: 3.400 m 3 / saat. <br/&gt; Not: Dikkatli örnek tutun ve dokunmamış örgü yıkımı önlemek ve herhangi bir kirliliği önlemek için yüzeyine dokunmayın. Performans ölçümleri için eşit kalitede yeterli örnekleri oluşturmak emin olun. </li></ol>

<ol>
	<li>Gosline, J. M., Guerette, P. A., Ortlepp, C. S., Savage, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+mechanical+design+of+spider+silks:+From+fibroin+sequence+to+mechanical+function.">The mechanical design of spider silks: From fibroin sequence to mechanical function.</a> J. Exp. Biol. 202, 3295-3303 (1999).</li><li>Vollrath, F., Basedow, A. B. P., Engstr&#246;m, W., List, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+tolerance+to+spider+silks+and+protein+polymers+in+vivo.">Local tolerance to spider silks and protein polymers in vivo.</a> In Vivo. 16, 229-234 (2002).</li><li>Allmeling, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spider+silk+fibres+in+artificial+nerve+constructs+promote+peripheral+nerve+regeneration.">Spider silk fibres in artificial nerve constructs promote peripheral nerve regeneration.</a> Cell Prolif. 41, 408-420 (2008).</li><li>Huemmerich, D., Helsen, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+structure+elements+of+spider+dragline+silks+and+their+contribution+to+protein+solubility.">Primary structure elements of spider dragline silks and their contribution to protein solubility.</a> Biochemistry. 43, 13604-13612 (2004).</li><li>Huemmerich, D., Slotta, U., Scheibel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Processing+and+modification+of+films+made+from+recombinant+spider+silk+proteins.">Processing and modification of films made from recombinant spider silk proteins.</a> Appl. Phys. a-Mater. 82, 219-222 (2006).</li><li>Leal-Egana, A., Lang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interactions+of+Fibroblasts+with+Different+Morphologies+Made+of+an+Engineered+Spider+Silk+Protein.">Interactions of Fibroblasts with Different Morphologies Made of an Engineered Spider Silk Protein.</a> Adv. Eng. Mater. 14, 67-75 (2012).</li><li>Wohlrab, S., Spiess, K., Scheibel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Varying+surface+hydrophobicities+of+coatings+made+of+recombinant+spider+silk+proteins.">Varying surface hydrophobicities of coatings made of recombinant spider silk proteins.</a> J. Mater. Chem. 22, 22050-22054 (2012).</li><li>Hermanson, K. D., Huemmerich, D., Scheibel, T., Bausch, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Engineered+microcapsules+fabricated+from+reconstituted+spider+silk.">Engineered microcapsules fabricated from reconstituted spider silk.</a> Adv. Mater. 19, 1810-1815 (2007).</li><li>Spiess, K., Wohlrab, S., Scheibel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+characterization+and+functionalization+of+engineered+spider+silk+films.">Structural characterization and functionalization of engineered spider silk films.</a> Soft Matter. 6, 4168-4174 (2010).</li><li>Slotta, U. K., Rammensee, S., Gorb, S., Scheibel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+engineered+spider+silk+protein+forms+microspheres.">An engineered spider silk protein forms microspheres.</a> Angew. Chem.-Int. Edit. 47, 4592-4594 (2008).</li><li>Schacht, K., Scheibel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Controlled+hydrogel+formation+of+a+recombinant+spider+silk+protein.">Controlled hydrogel formation of a recombinant spider silk protein.</a> Biomacromolecules. 12, 2488-2495 (2011).</li><li>Exler, J. H., Hummerich, D., Scheibel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+amphiphilic+properties+of+spider+silks+are+important+for+spinning.">The amphiphilic properties of spider silks are important for spinning.</a> Angew. Chem.-Int. Edit. 46, 3559-3562 (2007).</li><li>Sundaray, B., Subramanian, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrospinning+of+continuous+aligned+polymer+fibers.">Electrospinning of continuous aligned polymer fibers.</a> Appl. Phys. Lett. 84, 1222 (2004).</li><li>Van Hulle, S. W. H., Bjorge, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Performance+assessment+of+electrospun+nanofibers+for+filter+applications.">Performance assessment of electrospun nanofibers for filter applications.</a> Desalination. 249, 942-948 (2009).</li><li>Zhou, S. B., Peng, H. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+and+characterization+of+a+novel+electrospun+spider+silk+fibroin/poly(D,L-lactide)+composite+fiber.">Preparation and characterization of a novel electrospun spider silk fibroin/poly(D,L-lactide) composite fiber.</a> J. Phys. Chem. B. 112, 11209-11216 (2008).</li><li>Stephens, J. S., Fahnestock, S. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+electrospinning+and+solution+casting+protocols+on+the+secondary+structure+of+a+genetically+engineered+dragline+spider+silk+analogue+investigated+via+fourier+transform+Raman+spectroscopy.">Effects of electrospinning and solution casting protocols on the secondary structure of a genetically engineered dragline spider silk analogue investigated via fourier transform Raman spectroscopy.</a> Biomacromolecules. 6, 1405-1413 (2005).</li><li>Greiner, A., Wendorff, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrospinning:+a+fascinating+method+for+the+preparation+of+ultrathin+fibers.">Electrospinning: a fascinating method for the preparation of ultrathin fibers.</a> Angew. Chem.-Int. Edit. 46, 5670-5703 (2007).</li><li>Smit, E., Buttner, U., Sanderson, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+yarns+from+electrospun+fibers.">Continuous yarns from electrospun fibers.</a> Polymer. 46, 2419-2442 (2005).</li><li>Teo, W. E., Ramakrishna, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+on+electrospinning+design+and+nanofibre+assemblies.">A review on electrospinning design and nanofibre assemblies.</a> Nanotechnology. 17, 89-106 (2006).</li><li>Greiner, A., Wendorff, J. H., Yarin, A. L., Zussman, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biohybrid+nanosystems+with+polymer+nanofibers+and+nanotubes.">Biohybrid nanosystems with polymer nanofibers and nanotubes.</a> Appl. Microbiol. Biotechnol. 71, 387-393 (2006).</li><li>Spiess, K., Lammel, A., Scheibel, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recombinant+spider+silk+proteins+for+applications+in+biomaterials.">Recombinant spider silk proteins for applications in biomaterials.</a> Macromolecular Biosciences. 10, 998-1007 (2010).</li><li>Hu, X., Kaplan, D., Cebe, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Determining+beta-sheet+crystallinity+in+fibrous+proteins+by+thermal+analysis+and+infrared-+spectroscopy.">Determining beta-sheet crystallinity in fibrous proteins by thermal analysis and infrared- spectroscopy.</a> Macromolecules. 39, 6161-6170 (2006).</li></ol>

Biz ifşa hiçbir şey yok.

Yeni filtre cihazları sabit veya daha yüksek filtre verim hava filtrasyon genel enerji tüketimini azaltarak izin vermelidir. Burada, bu tür cihazların örümcek ipek dokuma olmayan kullanılarak oluşturulmuştur. Düşük yüzey gerilimi ve yüksek uçuculuğu nedeniyle, HFIP elektro işlemi için, uygun bir çözücü olarak seçilmiştir. Ayrıca, sulu ipek çözüm önceki deneylerde test edilmiş, ancak hiçbir lif elde edilebilir. Burada, bu yüzey gerilimi azaltmak ve böylece, çözelti eğirme özelliklerini geliştirmek amacıyla katkı maddeleri kullanmak için önemli olacaktır. En kritik adım yüksekliği, gerilim ve ekstrüzyon hızı iplik, koşulları ve kullanılan malzeme konsantrasyonu ve eğirme çözeltisinin çözücü ayarlamaktır. Performans sırasında, ucu tıkanma örneğin su buharı şeklinde nem ile iğne ucu sağlayarak önlenebilir, ancak elektro kurulumunda eklemeler her türlü sonradan rahatsız olabilirhassas süreci ve elektrik alanı. Temel proses parametreleri (konsantrasyon, gerilim, mesafe, nem) ayrı ayrı deney serisi (veriler gösterilmemiştir) üzerinden taşıma belirlenmiştir. Dikkate tüm parametreleri alarak bir sürekli Taylor koni ve düzgün lifleri oluşturmak için iplik süreci dikkat çekmek için çok önemlidir. Filtre verimli filtre malzemelerinin en önemli parametrelerden biridir. Bu parametre, özellikle filtre malzemesinin yapısı tarafından etkilenir. Dokuma düzgün gözenek boyutları ve daha sonra tutarlı hava geçirgenliği devralır. Bu gözenekleri doldurmak için ve sıfır hata filtre oluşturmak için bu şablonu malzemelerin homojen dokunmamış kafesleri oluşturmak için çok önemlidir. Bizim filtrelerinde filtre etkinliğini dokunmamış örgü tabakalarının sayısı, bu nedenle, eğirme süresi (ipek proteinleri) üzerinde doğrudan bağımlılık gösterir ve. Tek lifler arasındaki boşluklar, sürekli olarak tutma o sağlayan doldurulurf küçük parçacıklar. Bu çalışmada biz yüksek filtre verimlilik gösteren, örümcek ipek dokunmamış kafesleri ile yeni bir filtre malzemesi üretmek için bir yöntem tanıttı. Bu nedenle, bu filtreler hava filtrasyon sistemlerinde gelecekteki kullanım için umut verici adaylardır.

Güç ve genişletilebilirlik bunların kombinasyonu nedeniyle, örümcek ipek lifleri diğer birçok doğal veya sentetik liflerden 1 daha fazla kinetik enerji emebilir. Ayrıca, çoğu sentetik polimer malzemeler aksine ipek malzemeler toksik olmayan ve biyolojik olarak uyumlu ve 2,3 dahil zaman hiçbir alerjik reaksiyona neden. Olası sağlık riskleri örümcek ipek kullanılarak önlenebilir. Bu özellikler tıbbi ve teknik çeşitli uygulamalar için örümcek ipek son derece cazip kılmaktadır. Örümcekler kendi yamyamlık davranışları nedeniyle çiftlik olamaz çünkü, biyoteknolojik yöntemleri hem maliyet-etkin ve yeterli miktarda 4, örümcek ipek proteinleri üretmek için geliştirilmiştir. Rekombinant ipek proteini eADF4 (C16) Araneus diadematus Fibroinin 4 (ADF4) doğal sekansına göre tasarlandı. eADF4 (C16) 48kDa 5 arasında bir molekül ağırlığına sahip ve (hexafluorois çeşitli çözücüler içinde çözünüropropanol (HFIP) 6, 7 ve formik asit, sulu tamponlar) 8. eADF4 (C16) bu tür filmlerin 9, kapsüller 8, parçacıklar 10, hidrojeller 11, kaplamalar 7, lifler 12 ve dokuma olmayan kafesleri 6 farklı morfolojiler içine işlenebilir. Kimyasal stabilite nedeniyle, ikinci filtre uygulamalarında yüksek potansiyel sunmaktadır. Burada, electrospun rekombinant örümcek ipek proteinleri bir dokunmamış ağ dahil olmak üzere hava filtre cihazları imal etmek bir protokol mevcut. Elektro-ya da elektrostatik eğirme tipik olarak daha önce filtre uygulamaları 14 araştırılmıştır 10 nm ila -10 um 13 ve dokunmamış bir kafes aralığında çapa sahip polimer lifleri üretmek için kullanılan bir tekniktir. Geçmişte, başarılı bir şekilde elektro-de yeniden birleştirme yoluyla üretilen 16 örümcek ipek gibi rejenere 15 işlenmesi için uygulanmıştırproteinler. Tipik olarak, yüksek elektrik voltajı (5-30 kV), bir şırınga ve 8-20 cm&#39;lik bir mesafede yerleştirilmiş bir karşı elektrot (0-20 kV) uygulanır. Güçlü elektrostatik alan ücret çözüm içinde itici güçleri neden olur. Yüzey gerilimi aşılırsa, bir Taylor koni oluşmuş ve ince bir jet ucu 17,18 den sürer edilir. Oluşumundan sonra, bükme istikrarsızlıklar daha da çözücü buharlaşır gibi uzanan neden jet içinde meydana, ve sağlam bir lif oluşur. Son olarak, elyaf rastgele bir dokunmamış ağ 19 ile karşıt elektrot üzerine yatırılır. Çap ve yüzey topoloji (gözenekli, yumuşak) gibi lif özellikleri Konsantrasyon, viskozite, yüzey serbest enerji ve çözücü en içsel elektriksel iletkenlik ve geçirgenlik 20 gibi çözüm parametreleri ile değişiklik gösterebilir. Çözelti içindeki proteinin konsantrasyonuna bağlı olarak, 80-1,100 nm çapa sahip düzgün fiberler HFIP sonuçlar içinde çözüldü eADF4 (C16) arasında elektro.HFIP gelen eADF4 (C16) electrospun ağırlıklı olarak α-sarmal ikincil yapı gösterir ve lifler suda 6 çözünür. Ipek lifleri stabilize etmek amacıyla, β-levhası yapıları etanol ile muamele ile indüklenen olması gerekir. Daha önce belirlenmiş sonrası tedavi yöntemleri 21 aksine, bu çalışma eADF4 (C16) nonwovenlar ipek lifleri morfolojisini korumak amacıyla etanol buharı ile muamele edilmiştir. İkincil yapı analizi, literatürde tarif edildiği gibi 22 Fourier transform kızılötesi spektroskopisi (FTIR) ve daha sonra kendi kendine-Fourier dekonvolüsyon (FSD) kullanılarak gerçekleştirildi. FSD FTIR spektrumları çözüm Birkaç örtüşen gruplarından oluşan sağlayan bir sinyal işleme aracıdır. Böylece, ben bölgesinin ortasında geniş ve belirsiz bantları gelişmiş zirve kararları ile bir deconvoluted spektrum almak için bir yüksek geçiş filtresi kullanılarak daralmış olabilir. Eff değerlendirmek içinipek dokunmamış kafesleri ile tamamlanır filtre substratların iciency, hava geçirgenliği test standart protokollere göre bir Akustron cihazı kullanılarak yapıldı. Biriktirme oranları Palas evrensel parçacık büyüklük kullanılarak ölçüldü.

air filter devices including nonwoven meshes of electrospun recombinant spider silk proteins

Araneus diadematus Fibroin 4 (ADF4), rekombinant örümcek ipek proteini eADF4 doğal dizisi göre (C16) tasarlandı. Bu son derece tekrarlanan protein 48kDa arasında bir molekül ağırlığına sahip ve (heksafloroizopropanol (HFIP), formik asit ve sulu tamponlar), farklı çözücüler içinde çözünür. eADF4 (C16) gibi filmler, kapsüller, parçacıklar, hidrojeller, kaplamalar, fiberler ve dokuma olmayan kafesleri olarak morfolojileri içine işlenir, çeşitli teknik uygulamalar için yüksek bir potansiyel sağlamaktadır. Kimyasal stabilite ve kontrollü morfolojisine bağlı olarak, ikinci filtre maddeleri geliştirmek için de kullanılabilir. Bu protokol, electrospun rekombinant örümcek ipek proteinlerin dokunmamış kafes birikimi ile, farklı hava filtresi cihazların verimliliğini artırmak için bir prosedür mevcut. Düz elyaf HFIP sonuçlar içinde çözüldü eADF4 (C16) arasında elektro. Farklı elyaf çapları (80-1,100 nm) ve protein konsantrasyonu değişimi (% 5-25 w / v) sonuçdokunmamış örgü böylece gözenek boyutları. Protein yeni gerilmiş lifler ağırlıklı bir α-sarmal ikincil yapısını gösterir çünkü HFIP ikinci eADF4 (C16) electrospun tedavi sonrası gerekli olan ve bu yüzden elyaflar suda çözünür. Etanol buharı ile muamele ipek lifleri ve kafes morfolojisi koruyarak suya dayanıklı, istikrarlı β-yaprak yapıları, oluşumu neden olur. İkincil yapı analizi Fourier transform kızılötesi spektroskopisi (FTIR) ve daha sonra kendi kendine-Fourier dekonvolüsyon (FSD) kullanılarak gerçekleştirildi. Birincil amacı üstüne ipek dokunmamış katmanları ekleyerek mevcut filtre yüzeylerin filtre verimliliğini artırmak için oldu. Süresi elektro etkisi ve filtre verimliliği böylece dokunmamış tabaka kalınlığı değerlendirmek için, partikül birikimi ölçümleri ile birlikte hava geçirgenliği testleri. Deneyler standardına göre gerçekleştirilmiştirprotokolleri.

% 10 konsantrasyon ile rekombinant örümcek ipek çözümler elektro HFIP ikinci ağ / hac dokunmamış kafesleri oluşumuna izin veren, 80 ila 120 nm arasında değişen çapa sahip düzgün fiberler ile sonuçlanmıştır. Etanol buharı ile tedavi sonrası ipek dokunmamış tedavi sonrası uygun bir şekilde (Şekil 8) olarak kurulan, bu nedenle, oldu göze çarpan morfolojik değişiklikler, yol vermedi. Yapısal değişiklikler FT-IR ve grupları tek katkı zirveleri (Şekil 6) analiz uygulandı arasında daha sonraki FSD ile tespit edildi. Bu α-sarmal und gelişigüzel kıvrımlı yapı içeriğinin (Şekil 7) azalır tedavi sonrası, β-levhası yapıları bir artışa yol açtığını göstermiştir edilebilir. Bu sonuç hemen hemen su (Şekil 5) içine dokuma olmayan bir işlem sonrası daldırma ile ispat edilebilir. Hatta bir hafta sonra, dokunmamış örgü yıkımı ortaya çıkar. Iplik durasyon electrospun liflerin artan yoğunluğuna göre basınç düşüşü nedeniyle filtre malzemeleri ipek nonwoven uygulanması ile ilgili en önemli parametredir. Böylece uzun iplik süreleri und hava geçirgenliği üstel azalma elyaf katmanları sonucu daha yüksek bir sayı. Bu etki, tedavi sonrası önce ve sonra, farklı filtre substrat malzeme (Şekil 9) için tespit edilebilir. Benzer şekilde, alt-mikrometre partiküllerinin artar ipek ihtiva eden filtre maddeleri (Şekil 10) filtreleme verimliliği. Kısa iplik süreleri (30 sn) düşük filtre verimliliği, daha yüksek iplik süreleri (90 sn) daha yüksek verim yol elde ederken. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="5.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50492/50492fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50492/50492fig1.jpg" /> Şekil 1. Yüksek elektrik gerilim (0-30 kV) i<html> s ipek çözeltisi ile doldurulmuş bir şırınga uygulanır ve bir karşı elektrod (0-20 kV) 8-20 cm&#39;lik bir mesafede yerleştirilir. Bu kurulum ücret çözüm içinde itici güçleri uyararak, güçlü bir elektrostatik alan yol açar. Yüzey gerilimi aşılırsa, bir Taylor konisi oluşur ve ince bir püskürtme ucundan sürer edilir. Oluşumundan sonra, bükme istikrarsızlıklar daha da çözücü buharlaşır gibi uzanan neden jet içinde meydana, ve sağlam bir lif oluşur. Son olarak, elyaf rastgele bir dokumasız örgü şeklinde karşıt elektrot üzerine yatırılır. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/50492/50492fig2.jpg" /> Düzenli Taylor koni (A), bir kuru damlacık (B) ve damlacık (C) olmadan kurulum Şekil 2.. Fotoğrafları. iles/ftp_upload/50492/50492fig3highres.jpg &quot;src =&quot; / files/ftp_upload/50492/50492fig3.jpg &quot;/&gt; Buhar sonrası tedavi sırasında Şekil 3. Şematik prosedürü. İlk adım olarak, bölme etanol ile doldurulur, ve numune 90 dakika boyunca 60 ° C de buhara tutulmuştur. Sonraki kullanım için dokunmamış kafesleri yumuşatmak için, 60 90 dakika boyunca etanol kaldırılır ve lifler su buharı ile buharda ° C <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50492/50492fig3large.jpg" target="_blank">büyük rakam görmek için buraya tıklayın</a> . <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/50492/50492fig4.jpg" /> Şekil 4,. Tedavi sonrası için kullanılmak üzere ipek bağlı dokunmamış bir kafes olan bir karton çerçeve Fotoğraf. <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/50492/50492fig5.jpg" /> Şekil 5,. ElectrospBM ve daha sonra art işlemden kuru durumda, (A) ve sudan (B) kapsamında dokunmamış. <img alt="Şekil 6," fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50492/50492fig6highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50492/50492fig6.jpg" /> Şekil 6,. Bir amid (A) ve tedavi edilmemiş bir işlem sonrası (B), örümcek ipek dokumasız örgü arasında bandın Fourier kendini deconvoluted absorbans spektrumu. Düz çizgi dekonvolüsyon sonra elde olarak tek bir katkı zirveleri (noktalı çizgi) kaynaklanan emme bandı gösterir. İlgili eğrileri atama literatürde 22 daha önce yayınlanmış değerlere dayanmaktadır. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50492/50492fig6large.jpg" target="_blank">büyük rakam görmek için buraya tıklayın</a> . <img alt="Şekil 7" fo:conten<html> t-width = &quot;5in&quot; fo: src = src = &quot;/ files/ftp_upload/50492/50492fig7.jpg&quot; / &quot;/ files/ftp_upload/50492/50492fig7highres.jpg&quot;&gt; Şekil 7. Olmayan tedavi ve eADF4 (C16) sonrası tedavi edilen dokunmamış kafes İkincil yapısı içeriği. <img alt="Şekil 8," fo:content-width="6in" fo:src="/files/ftp_upload/50492/50492fig8highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50492/50492fig8.jpg" /> . Electrospun eADF4 Şekil 8 SEM görüntüleri (C16)-lifleri farklı filtre yüzeylerde: Polyamid (PA), önce (S1) ve sonrası Polyester (PE), Polipropilen (PP) ve saf eADF4 (C16) lifleri (S2) post- etanol buharı ile tedavi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50492/50492fig8large.jpg" target="_blank">büyük rakam görmek için buraya tıklayın</a> . / Ftp_upload/50492/50492fig9.jpg &quot;/&gt; Şekil 9,. Hava permeabilite testleri, daha önce (A) ve tedavi sonrası (B) sonra, etanol buharı ile ipek dokunmamış kafesleri, artan eğirme kez daha sonra, hava geçirgenlik düşürücü fazla dokumasız tabakalara yol açar. <img alt="Şekil 10" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50492/50492fig10highres.jpg" src="/files/ftp_upload/50492/50492fig10.jpg" /> Şekil 10. Etanol ile tedavi sonrası sonra, ipek tabaka miktarı etkileyen farklı iplik süresinde poliamid filtre malzemeleri üzerinde electrospun örümcek ipek dokunmamış kafesleri, üzerinde di-etil-hekzil-sebacat aerosol Filtre verimi.

Watch this Scientific Journal Video about Air Filter Devices Including Nonwoven Meshes of Electrospun Recombinant Spider Silk Proteins at JoVE.com

Air Filter Devices Including Nonwoven Meshes of Electrospun Recombinant Spider Silk Proteins

Örümcek ipek lifleri olağanüstü mekanik özellikler gösterir. Mühendislik<em&gt; Araneus diadematus</em&gt; Fibroin 4 (eADF4) elektrospinning kullanarak dokunmamış kafes içine işlenebilir. Burada, eADF4 dokunmamış kafes hava filtreleme cihazların performansını artırmak için kullanılır.

Electrospun Rekombinant Örümcek İpek Proteinlerin Nonwoven Ağlar dahil Hava Filtresi Cihazları

Based on the natural sequence of Araneus diadematus Fibroin 4 (ADF4), the recombinant spider silk protein eADF4(C16) has been engineered. This highly ...

air-filter-devices-including-nonwoven-meshes-electrospun-recombinant

Research

JoVE Journal

Bioengineering

16.0K Görüntüleme.  University of Bayreuth. Örümcek ipek lifleri olağanüstü mekanik özellikler gösterir. Mühendislik Araneus diadematus Fibroin 4 (eADF4) elektrospinning kullanarak dokunmamış kafes içine işlenebilir. Burada, eADF4 dokunmamış kafes hava filtreleme cihazların performansını artırmak için kullanılır.

Video: Air Filter Devices Including Nonwoven Meshes of Electrospun Recombinant Spider Silk Proteins

Postproduction Processing of Electrospun Fibres for Tissue Engineering

Electrospinning is a commonly used and versatile method to produce scaffolds (often biodegradable) for 3D tissue engineering.1, 2, 3 Many tissues in vivo undergo biaxial distension to varying extents such as skin, bladder, pelvic floor and even the hard palate as children grow. In producing scaffolds for these purposes there is a need to develop scaffolds of appropriate biomechanical properties (whether achieved without or with cells) and which are sterile for clinical use. The focus of this paper is not how to establish basic electrospinning parameters (as there is extensive literature on electrospinning) but on how to modify spun scaffolds post production to make them fit for tissue engineering purposes - here thickness, mechanical properties and sterilisation (required for clinical use) are considered and we also describe how cells can be cultured on scaffolds and subjected to biaxial strain to condition them for specific applications.
Electrospinning tends to produce thin sheets; as the electrospinning collector becomes coated with insulating fibres it becomes a poor conductor such that fibres no longer deposit on it. Hence we describe approaches to produce thicker structures by heat or vapour annealing increasing the strength of scaffolds but not necessarily the elasticity. Sequential spinning of scaffolds of different polymers to achieve complex scaffolds is also described. Sterilisation methodologies can adversely affect strength and elasticity of scaffolds. We compare three methods for their effects on the biomechanical properties on electrospun scaffolds of poly lactic-co-glycolic acid (PLGA).
Imaging of cells on scaffolds and assessment of production of extracellular matrix (ECM) proteins by cells on scaffolds is described. Culturing cells on scaffolds in vitro can improve scaffold strength and elasticity but the tissue engineering literature shows that cells often fail to produce appropriate ECM when cultured under static conditions. There are few commercial systems available that allow one to culture cells on scaffolds under dynamic conditioning regimes - one example is the Bose Electroforce 3100 which can be used to exert a conditioning programme on cells in scaffolds held using mechanical grips within a media filled chamber.4 An approach to a budget cell culture bioreactor for controlled distortion in 2 dimensions is described. We show that cells can be induced to produce elastin under these conditions. Finally assessment of the biomechanical properties of processed scaffolds cultured with or without cells is described.

Electrospun scaffolds can be processed post production for tissue engineering applications. Here we describe methods for spinning complex scaffolds (by consecutive spinning), for making thicker scaffolds (by multi-layering using heat or vapour annealing), for achieving sterility (aseptic production or sterilisation post production) and for achieving appropriate biomechanical properties.

Doku Mühendisliği için elektrospinning Liflerin Postprodüksiyon İşleme

Electrospinning is a commonly used and versatile method to produce  scaffolds (often biodegradable) for 3D tissue engineering.1, 2, 3 Many tissues in vivo ...

Biyomühendislik

Synthetic Spider Silk Production on a Laboratory Scale

As society progresses and resources become scarcer, it is becoming increasingly important to cultivate new technologies that engineer next generation biomaterials with high performance properties. The development of these new structural materials must be rapid, cost-efficient and involve processing methodologies and products that are environmentally friendly and sustainable. Spiders spin a multitude of different fiber types with diverse mechanical properties, offering a rich source of next generation engineering materials for biomimicry that rival the best manmade and natural materials. Since the collection of large quantities of natural spider silk is impractical, synthetic silk production has the ability to provide scientists with access to an unlimited supply of threads. Therefore, if the spinning process can be streamlined and perfected, artificial spider fibers have the potential use for a broad range of applications ranging from body armor, surgical sutures, ropes and cables, tires, strings for musical instruments, and composites for aviation and aerospace technology. In order to advance the synthetic silk production process and to yield fibers that display low variance in their material properties from spin to spin, we developed a wet-spinning protocol that integrates expression of recombinant spider silk proteins in bacteria, purification and concentration of the proteins, followed by fiber extrusion and a mechanical post-spin treatment. This is the first visual representation that reveals a step-by-step process to spin and analyze artificial silk fibers on a laboratory scale. It also provides details to minimize the introduction of variability among fibers spun from the same spinning dope. Collectively, these methods will propel the process of artificial silk production, leading to higher quality fibers that surpass natural spider silks.

Despite the outstanding mechanical and biochemical properties of spider silks, this material cannot be harvested in large quantities by conventional means. Here we describe an efficient strategy to spin artificial spider silk fibers, which is an important process for investigators studying spider silk production and their use as next-generation biomaterials.

Bir Laboratuvar Ölçekli Sentetik Örümcek İpek Üretimi

As society progresses and resources become scarcer, it is becoming increasingly important to cultivate new technologies that engineer next generation ...

Biosensor for Detection of Antibiotic Resistant Staphylococcus Bacteria

A structurally transformed lytic bacteriophage having a broad host range of Staphylococcus aureus strains and a penicillin-binding protein (PBP 2a) antibody conjugated latex beads have been utilized to create a biosensor designed for discrimination of methicillin resistant (MRSA) and sensitive (MSSA) S. aureus species 1,2. The lytic phages have been converted into phage spheroids by contact with water-chloroform interface. Phage spheroid monolayers have been moved onto a biosensor surface by Langmuir-Blodgett (LB) technique 3. The created biosensors have been examined by a quartz crystal microbalance with dissipation tracking (QCM-D) to evaluate bacteria-phage interactions. Bacteria-spheroid interactions led to reduced resonance frequency and a rise in dissipation energy for both MRSA and MSSA strains. After the bacterial binding, these sensors have been further exposed to the penicillin-binding protein antibody latex beads. Sensors analyzed with MRSA responded to PBP 2a antibody beads; although sensors inspected with MSSA gave no response. This experimental distinction determines an unambiguous discrimination between methicillin resistant and sensitive S. aureus strains. Equally bound and unbound bacteriophages suppress bacterial growth on surfaces and in water suspensions. Once lytic phages are changed into spheroids, they retain their strong lytic activity and show high bacterial capture capability. The phage and phage spheroids can be utilized for testing and sterilization of antibiotic resistant microorganisms. Other applications may include use in bacteriophage therapy and antimicrobial surfaces.

Lytic phage biosensors and antibody beads are able to discriminate between methicillin resistant (MRSA) and sensitive staphylococcus bacteria. The phages were immobilized by a Langmuir-Blodgett method onto a surface of a quartz crystal microbalance sensor and worked as broad range staphylococcus probes. Antibody beads recognize MRSA.

Antibiyotik Dirençli Stafilokok bakteri tespiti için biyosensör

A structurally transformed lytic bacteriophage having a broad host range of Staphylococcus aureus strains and a penicillin-binding protein (PBP 2a) ...

Designing Silk-silk Protein Alloy Materials for Biomedical Applications

Fibrous proteins display different sequences and structures that have been used for various applications in biomedical fields such as biosensors, nanomedicine, tissue regeneration, and drug delivery. Designing materials based on the molecular-scale interactions between these proteins will help generate new multifunctional protein alloy biomaterials with tunable properties. Such alloy material systems also provide advantages in comparison to traditional synthetic polymers due to the materials biodegradability, biocompatibility, and tenability in the body. This article used the protein blends of wild tussah silk (Antheraea pernyi) and domestic mulberry silk (Bombyx mori) as an example to provide useful protocols regarding these topics, including how to predict protein-protein interactions by computational methods, how to produce protein alloy solutions, how to verify alloy systems by thermal analysis, and how to fabricate variable alloy materials including optical materials with diffraction gratings, electric materials with circuits coatings, and pharmaceutical materials for drug release and delivery. These methods can provide important information for designing the next generation multifunctional biomaterials based on different protein alloys.

Blending is an efficient approach to generate biomaterials with a broad range of properties and combined features. By predicting the molecular interactions between different natural silk proteins, new silk-silk protein alloy platforms with tunable mechanical resiliency, electrical response, optical transparency, chemical processability, biodegradability, or thermal stability can be designed.

Biyomedikal Uygulamalar için İpek-ipek Protein Alaşım Materyalleri Tasarlama

Fibrous proteins display different sequences and structures that have been used for various applications in biomedical fields such as biosensors, ...

Optimizing Attachment of Human Mesenchymal Stem Cells on Poly(&#949;-caprolactone) Electrospun Yarns

Research into biomaterials and tissue engineering often includes cell-based in vitro investigations, which require initial knowledge of the starting cell number. While researchers commonly reference their seeding density this does not necessarily indicate the actual number of cells that have adhered to the material in question. This is particularly the case for materials, or scaffolds, that do not cover the base of standard cell culture well plates. This study investigates the initial attachment of human mesenchymal stem cells seeded at a known number onto electrospun poly(&#949;-caprolactone) yarn after 4 hr in culture. Electrospun yarns were held within several different set-ups, including bioreactor vessels rotating at 9 rpm, cell culture inserts positioned in low binding well plates and polytetrafluoroethylene (PTFE) troughs placed within petri dishes. The latter two were subjected to either static conditions or positioned on a shaker plate (30 rpm). After 4 hr incubation at 37&#160;oC, 5% CO2, the location of seeded cells was determined by cell DNA assay. Scaffolds were removed from their containers and placed in lysis buffer. The media fraction was similarly removed and centrifuged &#8211; the supernatant discarded and pellet broken up with lysis buffer. Lysis buffer was added to each receptacle, or well, and scraped to free any cells that may be present. The cell DNA assay determined the percentage of cells present within the scaffold, media and well fractions. Cell attachment was low for all experimental set-ups, with greatest attachment (30%) for yarns held within cell culture inserts and subjected to shaking motion. This study raises awareness to the actual number of cells attaching to scaffolds irrespective of the stated cell seeding density.

Optimizing Attachment of Human Mesenchymal Stem Cells on Poly(&amp;#949;-caprolactone) Electrospun Yarns

This article describes a range of set-ups for seeding human mesenchymal stem cells onto materials, in this case electrospun yarns, that do not cover the base of standard culture well plates in order to maximize and quantify the number of cells that initially attach compared to the known seeding density.

Poli (ε-kaprolakton) electrospun İplik İnsan Mezenkimal Kök Hücre Ek Optimize

Research into biomaterials and tissue engineering often includes cell-based in vitro investigations, which require initial knowledge of the starting cell ...

Electrospun Nanofiber Scaffolds with Gradations in Fiber Organization

The goal of this protocol is to report a simple method for generating nanofiber scaffolds with gradations in fiber organization and test their possible applications in controlling cell morphology/orientation. Nanofiber organization is controlled with a new fabrication apparatus that enables the gradual decrease of fiber organization in a scaffold. Changing the alignment of fibers is achieved through decreasing deposition time of random electrospun fibers on a uniaxially aligned fiber mat. By covering the collector with a moving barrier/mask, along the same axis as fiber deposition, the organizational structure is easily controlled. For tissue engineering purposes, adipose-derived stem cells can be seeded to these scaffolds. Stem cells undergo morphological changes as a result of their position on the varied organizational structure, and can potentially differentiate into different cell types depending on their locations. Additionally, the graded organization of fibers enhances the biomimicry of nanofiber scaffolds so they more closely resemble the natural orientations of collagen nanofibers at tendon-to-bone insertion site compared to traditional scaffolds. Through nanoencapsulation, the gradated fibers also afford the possibility to construct chemical gradients in fiber scaffolds, and thereby further strengthen their potential applications in fast screening of cell-materials interaction and interfacial tissue regeneration. This technique enables the production of continuous gradient scaffolds, but it also can potentially produce fibers in discrete steps by controlling the movement of the moving barrier/mask in a discrete fashion.

Here, we present a protocol to fabricate electrospun nanofiber scaffolds with gradated organization of fibers and explore their applications in regulating cell morphology/orientation. Gradients with regard to physical and chemical properties of the nanofiber scaffolds offer a wide variety of applications in the biomedical field.

Fiber Teşkilatı geçişleri ile electrospun Nanolif iskeleleri

The goal of this protocol is to report a simple method for generating nanofiber scaffolds with gradations in fiber organization and test their possible ...

Engineered 3D Silk-collagen-based Model of Polarized Neural Tissue

Despite huge efforts to decipher the anatomy, composition and function of the brain, it remains the least understood organ of the human body. To gain a deeper comprehension of the neural system scientists aim to simplistically reconstruct the tissue by assembling it in vitro from basic building blocks using a tissue engineering approach. Our group developed a tissue-engineered silk and collagen-based 3D brain-like model resembling the white and gray matter of the cortex. The model consists of silk porous sponge, which is pre-seeded with rat brain-derived neurons, immersed in soft collagen matrix. Polarized neuronal outgrowth and network formation is observed with separate axonal and cell body localization. This compartmental architecture allows for the unique development of niches mimicking native neural tissue, thus enabling research on neuronal network assembly, axonal guidance, cell-cell and cell-matrix interactions and electrical functions.

Insight into the complex actions of the brain requires advanced research tools. Here we demonstrate a novel silk-collagen-based 3D engineered model of neural tissue resembling brain-like architecture. The model can be used to study neuronal network assembly, axonal guidance, cell-cell interactions and electrical activity.

Polarize Sinir Doku Engineered 3D İpek-kolajen bazlı Modeli

Despite huge efforts to decipher the anatomy, composition and function of the brain, it remains the least understood organ of the human body. To gain a ...

Fabricating Cotton Analytical Devices

A robust, low-cost analytical device should be user-friendly, rapid, and affordable. Such devices should also be able to operate with scarce samples and provide information for follow-up treatment. Here, we demonstrate the development of a cotton-based urinalysis (i.e., nitrite, total protein, and urobilinogen assays) analytical device that employs a lateral flow-based format, and is inexpensive, easily fabricated, rapid, and can be used to conduct multiple tests without cross-contamination worries. Cotton is composed of cellulose fibers with natural absorptive properties that can be leveraged for flow-based analysis. The simple but elegant fabrication process of our cotton-based analytical device is described in this study. The arrangement of the cotton structure and test pad takes advantage of the hydrophobicity and absorptive strength of each material. Because of these physical characteristics, colorimetric results can persistently adhere to the test pad. This device enables physicians to receive clinical information in a timely manner and shows great potential as a tool for early intervention.

To investigate simple fabrication approaches for multiple assay needs, we created a fluid-absorbing channel system made of cotton material. This device was used to establish a multiple detection platform, and solve contamination issues that commonly affect lateral flow-based biomedical devices, for clinical urinalysis of nitrite, total protein, and urobilinogen.

Pamuk Analitik Cihazlar imalatı

A robust, low-cost analytical device should be user-friendly, rapid, and affordable. Such devices should also be able to operate with scarce samples and ...

Manufacture and Drug Delivery Applications of Silk Nanoparticles

Silk is a promising biopolymer for biomedical and pharmaceutical applications due to its outstanding mechanical properties, biocompatibility and biodegradability, as well its ability to protect and subsequently release its payload in response to a trigger. While silk can be formulated into various material formats, silk nanoparticles are emerging as promising drug delivery systems. Therefore, this article covers the procedures for reverse engineering silk cocoons to yield a regenerated silk solution that can be used to generate stable silk nanoparticles. These nanoparticles are subsequently characterized, drug loaded and explored as a potential anticancer drug delivery system. Briefly, silk cocoons are reverse engineered first by degumming the cocoons, followed by silk dissolution and clean up, to yield an aqueous silk solution. Next, the regenerated silk solution is subjected to nanoprecipitation to yield silk nanoparticles &#8211; a simple but powerful method that generates uniform nanoparticles. The silk nanoparticles are characterized according to their size, zeta potential, morphology and stability in aqueous media, as well as their ability to entrap a chemotherapeutic payload and kill human breast cancer cells. Overall, the described methodology yields uniform silk nanoparticles that can be readily explored for a myriad of applications, including their use as a potential nanomedicine.

Nanoparticles are emerging as promising drug delivery systems for a broad range of indications. Here, we describe a simple yet powerful method to manufacture silk nanoparticles using reverse engineered Bombyx mori silk. These silk nanoparticles can be readily loaded with a therapeutic payload and subsequently explored for drug delivery applications.

İpek Nanopartiküller imalatı ve İlaç Dağıtım Uygulamaları

Silk is a promising biopolymer for biomedical and pharmaceutical applications due to its outstanding mechanical properties, biocompatibility and ...

Material Formation of Recombinant Spider Silks through Aqueous Solvation using Heat and Pressure

Many spiders produce seven types of silks. Six of the silks are fiber in form when produced by the spiders. These fibers are not water soluble. In order to reproduce the remarkable mechanical properties of spider silks, they must be produced in heterologous hosts as spiders are both territorial and cannibalistic. The synthetic analogs of spider silk also tend to be insoluble in aqueous solutions. Thus, a large percentage of research in recombinant spider silks rely upon organic solvents that are detrimental to large scale production of materials. Our group&#8217;s method forces the solvation of these recombinant spider silks into water. Remarkably, when these proteins are prepared using this method of heat and pressure, a wide range of material forms can be prepared from the same solution of recombinant spider silk proteins (rSSp) including: films, fibers, sponge, hydrogel, lyogel, and adhesives. This article demonstrates the production of the solvated rSSp and material forms in a manner that is more easily understood than from written materials and methods alone.

Here, we present a protocol to produce water soluble recombinant spider silk protein solutions and the material forms that can be formed from those solutions.

Isı ve basınç kullanarak sulu solvasyon yoluyla rekombinant örümcek Silks malzeme oluşumu

Many spiders produce seven types of silks. Six of the silks are fiber in form when produced by the spiders. These fibers are not water soluble. In order ...