Biz bioprinter ile yardım için Deborah Studer teşekkür ederim. Iş hibe anlaşması n kapsamında Avrupa Birliği Yedinci Çerçeve Programı (FP7/2007-2013) ° NMP4-SL-2009-229292 tarafından finanse edildi.

1. Poloxamer 407 karışımların hazırlanması Mevcut ise, soğuk bir odada (4 ° C) &#39;de poloksamer çözeltinin hazırlanması gerçekleştirin. Mevcut değilse, buz gibi soğuk su ile dolu bir beher cam bir şişe yerleştirin. Daha yüksek sıcaklıklarda poloksamer, jelleşme noktasının üzerinde olacak ve düzgün bir şekilde çözülür olmayacaktır. <ol><li> Bir cam şişe içine buz gibi soğuk PBS çözeltisinden 60 ml ilave edilir ve manyetik bir karıştırıcı kullanılarak kuvvetli bir şekilde karıştırılır. </li><li> Poloksamer 24.5 gram ağırlığında ve soğuk PBS için küçük miktarlarda ekleyin. Poloksamer kısmen daha eklemeden önce çözünmüş kadar bekleyin. </li><li> Tüm Poloksamer çözünmüş kadar çözüm karıştırın. </li><li> 100 ml &#39;lik bir son hacim elde edilene kadar soğuk PBS ile ekleyin. Nihai konsantrasyon% 24.5 w / v olacak </li><li> Çözüm karıştırma durdurun ve ° C çözümünde kabarcıklar ve köpük kadar yok oldu 4 de bekletin. Jel içinde sıkışıp kalırlar Bubbles p aktarılırrinter kartuş ve basılı kurban kalıplara kusurları yol açacaktır. </li><li> Filtre (0.22 mikron filtre) İğne yapışmasına neden olabilir istenmeyen parçacıkları çıkarmak için doğrudan baskı kartuşunun içine çözüm. Filtreleme adımı filtrede poloksamer jelleşme önlemek (ya da değilse, soğutulmuş uçlarına, filtre vs ile temin edilebilir) soğuk bir odaya yapılmalıdır. ° C kadar 30 dakika deney önce 4 de yüklü kartuşu dışarıda tutun. </li></ol> 2. 3D Printer hazırlanması Bu çalışmada kullanılan 3D yazıcı regenHU gelen &quot;biyo&quot; oldu. Sistemin çekme kısmı birkaç bölümden oluşmaktadır. En iyi bir basınç altında, kartuşun Luer-kilit adaptörü üzerinden bir konektöre bağlanmıştır. Bağlayıcı, kartuşun çıkış ve bir solenoid valf girişi arasındaki boşluk köprü oluşturur. Solenoid valfinin çıkışında, farklı çaplarda iğneler de kullanılabilir. Malzeme bir alt üzerine haddelenmektedirvakum bir hareket aşamasına düzenlenen olduğunu tedir. Sistemin büyük parçaları Şekil 1 &#39;de tasvir edilmiştir. Diğer ekstrüzyon tabanlı sistemler baskı işlemi için kullanılan ve optimizasyon süreci her sistem için yapılması gereken edilebilir. <ol><li> Ultra saf su ile doldurulmuş ayrı bir 1.5 ml&#39;lik test tüpü içine selenoid valf (meme çapı 0,3 mm) ve iğne (iç çap 0.15 mm) yerleştirin ve 30 dakika için temizlemek için ısıtılmış bir ultrasonik banyosuna koyun. Etanol ile temizlenmiş vanalar durulayın ve bir azot silahla kurulayın. </li><li> Vana ve iğne yazıcı hem de boş, temiz kartuşu takın. </li><li> Sisteme 3 bar basınç uygulayın ve basınçlı hava ile yüklü vana ve iğne herhangi bir kalıntı sıvı dışarı darbe. Küçük bir iğne çapları için, iğne tıkayabilecek küçük partiküllerin girişini önlemek için basınçlı hava çıkış filtresi monte edilmiş bir (ortak bir şırınga filtresi, 0.45 mikron gözenek boyutu) olması tavsiye edilir. </li&gt; <li> Poloksamer yüklü kartuş basınç kapatın ve yükleyin. Poloksamer, oda sıcaklığında ve jel ulaşmak, böylece kartuş, kartuş montaj önce soğutma yaklaşık olarak 30 dakika üzerinden alınmalıdır. </li><li> Sisteme 3 bar basınç uygulayın ve iğne ucu ulaşır ve sürekli bir iplikçik haddelenmiş kadar Poloksamer dağıtmak. </li></ol> 3. Baskı Parametreleri optimizasyonu Doğru 3D yapılar oluşturmak için, yazdırma işlemi seçilen malzeme ve konsantrasyon için optimize edilmiş olması gerekir. Viskozite ve 3D baskı sistemine bağlı olarak her bir malzeme parametreleri sabit bir dizi için özel bir dağıtım hacmi ve çizgi kalınlığı verecektir. <ol><li> Uygun bir CAD yazılımı (çizimler ISO dosyaları oluşturmak mümkün) ile, yazdırmak düşündüğünüz yapı olarak aynı uzunlukta hakkında tek bir çizgi çizin. </li><li> Bir mikroskop cam slayt 25 mm x 75 mm x 1 yerleştirinmm veya yazıcı başka bir yüzey ve vakum açarak sabitleyin. </li><li> Yazıcı yazılımında, 50 Hz yüksek frekans için selenoid valf ayarlayın ve 3 bar yüksek basınç ayarlayın. </li><li> 300 mm / dak bir sahne hızı ile tek bir satır bir kat yazdırın. </li><li> İstenen çizgi genişliği ulaşana kadar baskıyı azaltmak. Ayrıca vananın açma süresi ile çekilmiş olan ses kontrol edebilirsiniz. </li><li> Hiçbir sürekli hat artık basılabilir kadar valf sıklığını azaltmak. Bu değerin üzerinde bir frekans seçin. </li></ol> Not: İstediğiniz çizgi genişliği ve sürekli çizgiler elde edildikten sonra, bir basılı katman sonra en uygun sahne hızı ve iğne kaldırma yani tabaka kalınlığı belirler. <ol start="7"><li> Her üst üste birkaç kat yazdırın ve iğne çeşitli basılı katmanları sonra önceki katman üzerinde doğru pozisyonda olup olmadığını görmek. Tabaka kalınlığı (iğne asansör ayarlayın) Her bir katman bir sonraki (Şekil 3) üzerine basılı olduğu. </li><li> 300 mm / haddelenmiş katmanları öncekilerin (Şekil 4) ile aynı pozisyonlarda başlangıç ​​ve bitiş böylece dk adım adım gelen sahne sahne hızını azaltmak. Çok yüksek sahne hızları ekstrüde malzeme Önceki katmana dokundu önce sahne hareket neden olur. </li><li> Yazdırmak için ayağı yapılar. Adımları 3.1.-3.8 takip, ancak bunun yerine tek bir çizgi çizerek tek bir noktadan çizin. Sütunlar yazdırırken odaklanmak parametreler ayağı yatırılması gereken konumda baskı kafasının basıncı (tabaka kalınlığı ve poloksamerin ayağı çapı düzenleyen), vananın açılması zaman (haddelenmiş hacim) ve ikamet zaman vardır . </li><li> Parametreleri optimize zaman, bir çizgi birkaç kat baskı sağlam bir duvar, ya da noktaları, bir ayağı durumunda sonuçlanmalıdır. Daha sonra kullanmak için parametreleri kaydedin. </li></ol> Bu noktadan itibaren optimizasyon işlemi sırasında bulunan parametreleri kullanın. <ol><li> Bir cam mikroskop lamı üzerine iç yapısı (burada bir ayağı dizidir) yazdırın ve gece kurumaya bırakın. Bu a) yapı büyüklüğü ve kalınlığını azaltır ve b) önlenebilir havalanma dolgu sırasında, bu nedenle yapı ve substrat arasında daha iyi bir yapışma sağlar. </li><li> CAD yazılımı ile, uzak yıkandı ve doldurduktan niyetinde yapıyı çevreleyen bir dış duvar oluşan bir yapı çizin. Poloksamer ile yapı yazdırın. Duvarın baskı 6 dakika sürer. </li></ol> Dikkat: duvar iğne nedeniyle boyutlarının iç yapısının en az 3,5 mm uzaklıkta basılacak sahiptir. Aksi takdirde, dış duvarın baskı iç yapısının bozulmasına neden olur <ol start="3"><li> Eğer Sacr doldurulacak istediğiniz çözümü hazırlayınificial ile kalıp (deiyonize su içinde, burada bir% 1 agaroz). Agaroz solüsyon, 35 ° C ile 45 ° C arasındaki bir sıcaklıkta olmalıdır Bu sıcaklık altında, agaroz çok hızlı pekiştireceğiz, poloksamer yapısını yumuşatır çünkü bu sıcaklığı üzerinde, bu basılı ayağı yok olabilir. </li><li> Yavaş yavaş bir pipet kullanarak dolgu çözüm kurban kalıp doldurun. Bu, duvar iç yapısının yok olmasını önlemek için yavaş yavaş yapılmalıdır. </li><li> Backfilled çözüm jel izin veya kullanılan polimer bağlı olarak çapraz bağ. Agaroz durumunda katılaşma 10 dakika boyunca 4 ° C&#39;de gerçekleştirildi. </li><li> Poloksamer yapısı elüt için 10 dakika için bir buz banyosu içinde, doldurulmuş geçici kalıbın koyun. </li><li> Bir kağıt doku ile yeniden toprakla yapısı leke ve yeni bir cam mikroskop lamı üzerine yerleştirin. Arasındaki boşluğa boşluğu gelen üçüncü hidrojel sızmasını önlemek için cam mikroskop lamı üzerine dikkatlice yapısı basınbackfilled yapısı ve cam mikroskop lamı. </li></ol> 5. Boşluklar doldurulması <ol><li> Yıkanan poloksamer kalan boşlukları doldurmak için, bir 30 G iğne ile donatılmış bir şırınga içine amaçlanan polimer çözeltisi doldurun. Bu örnekte,% 0,05 &#39;lik ilavesi ile 0.15 M NaCl çözeltisi içinde bir% 1 aljinat metakrilat kullanılan ağ / hac lityum fenil-2 ,4,6-trimethylbenzoylphosphinate (LAP) ve% 2.5 v / v Alexa-488 konjuge fibrinojen . Alexa-488 konjuge fibrinojen görselleştirme amacıyla eklenmiştir. </li><li> 5 dakika ve görüntü için yüksek yoğunluklu UV lamba (100 Watt, 365 nm, yüzey mesafesinde 3,5 cm idi) ile polimer Photopolymerize bir epi-floresan veya konfokal mikroskop kullanılarak inşa. </li></ol>

<ol>
	<li>Fedorovich, N. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+photocrosslinked+Lutrol+hydrogel+for+tissue+printing+applications.">Evaluation of photocrosslinked Lutrol hydrogel for tissue printing applications.</a> Biomacromolecules. 10, 1689-1696 (2009).</li><li>Lee, K. B., Park, S. J., Mirkin, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Protein+nanoarrays+generated+by+Dip-Pen+Nanolithography.">Protein nanoarrays generated by Dip-Pen Nanolithography.</a> Abstr Pap Am Chem S. 223, C94 (2002).</li><li>Whitesides, G. M., Ostuni, E., Takayama, S., Jiang, X., Ingber, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Soft+lithography+in+biology+and+biochemistry.">Soft lithography in biology and biochemistry.</a> Annual review of biomedical engineering. 3, 335-373 (2001).</li><li>Mironov, V., Reis, N., Derby, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review:+bioprinting:+a+beginning.">Review: bioprinting: a beginning.</a> Tissue engineering. 12, 631-634 (2006).</li><li>Odde, D. J., Renn, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Laser-guided+direct+writing+of+living+cells.">Laser-guided direct writing of living cells.</a> Biotechnology and bioengineering. 67, 312-318 (2000).</li><li>Derby, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioprinting:+inkjet+printing+proteins+and+hybrid+cell-containing+materials+and+structures.">Bioprinting: inkjet printing proteins and hybrid cell-containing materials and structures.</a> J Mater Chem. 18, 5717-5721 (1039).</li><li>Therriault, D., White, S. R., Lewis, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chaotic+mixing+in+three-dimensional+microvascular+networks+fabricated+by+direct-write+assembly.">Chaotic mixing in three-dimensional microvascular networks fabricated by direct-write assembly.</a> Nature. 2, 265-271 (2003).</li><li>Engelhardt, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fabrication+of+2D+protein+microstructures+and+3D+polymer-protein+hybrid+microstructures+by+two-photon+polymerization.">Fabrication of 2D protein microstructures and 3D polymer-protein hybrid microstructures by two-photon polymerization.</a> Biofabrication. 3, 025003 (2011).</li><li>Mironov, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Printing+technology+to+produce+living+tissue.">Printing technology to produce living tissue.</a> Expert opinion on biological therapy. 3, 701-704 (2003).</li><li>Mironov, V., Kasyanov, V., Drake, C., Markwald, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+printing:+promises+and+challenges.">Organ printing: promises and challenges.</a> Regenerative medicine. 3, 93-103 (2008).</li><li>Mironov, V., Kasyanov, V., Markwald, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+printing:+from+bioprinter+to+organ+biofabrication+line.">Organ printing: from bioprinter to organ biofabrication line.</a> Current opinion in biotechnology. 22, 667-673 (2011).</li><li>Fedorovich, N. E., De Wijn, J. R., Verbout, A. J., Alblas, J., Dhert, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+fiber+deposition+of+cell-laden,+viable,+patterned+constructs+for+bone+tissue+printing.">Three-dimensional fiber deposition of cell-laden, viable, patterned constructs for bone tissue printing.</a> Tissue engineering. Part A. 14, 127-133 (2008).</li><li>Dhariwala, B., Hunt, E., Boland, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+prototyping+of+tissue-engineering+constructs,+using+photopolymerizable+hydrogels+and+stereolithography.">Rapid prototyping of tissue-engineering constructs, using photopolymerizable hydrogels and stereolithography.</a> Tissue engineering. 10, 1316-1322 (2004).</li><li>Cook, C., Wang, T., Derby, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inkjet+Printing+of+Enzymes+for+Glucose+Biosensors.">Inkjet Printing of Enzymes for Glucose Biosensors.</a> Mater Res Soc Symp P. 1191, 103-109 (2009).</li><li>Cui, X., Gao, G., Qiu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+myotube+formation+using+bioprinting+technology+for+biosensor+applications.">Accelerated myotube formation using bioprinting technology for biosensor applications.</a> Biotechnol Lett. , 1-7 (2012).</li><li>Wang, T. M., Cook, C., Derby, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fabrication+of+a+Glucose+Biosensor+by+Piezoelectric+Inkjet+Printing.">Fabrication of a Glucose Biosensor by Piezoelectric Inkjet Printing.</a> , 82-85 (2009).</li><li>Shim, J. H., Lee, J. S., Kim, J. Y., Cho, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioprinting+of+a+mechanically+enhanced+three-dimensional+dual+cell-laden+construct+for+osteochondral+tissue+engineering+using+a+multi-head+tissue/organ+building+system.">Bioprinting of a mechanically enhanced three-dimensional dual cell-laden construct for osteochondral tissue engineering using a multi-head tissue/organ building system.</a> J. Micromech. Microeng. 22, (2012).</li><li>Malmsten, M., Lindman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-Assembly+in+Aqueous+Block+Copolymer+Solutions.">Self-Assembly in Aqueous Block Copolymer Solutions.</a> Macromolecules. 25, 5440-5445 (1021).</li><li>Cebotari, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Clinical+application+of+tissue+engineered+human+heart+valves+using+autologous+progenitor+cells.">Clinical application of tissue engineered human heart valves using autologous progenitor cells.</a> Circulation. 114, I132-I137 (2006).</li><li>Matsumura, G., Hibino, N., Ikada, Y., Kurosawa, H., Shin'oka, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Successful+application+of+tissue+engineered+vascular+autografts:+clinical+experience.">Successful application of tissue engineered vascular autografts: clinical experience.</a> Biomaterials. 24, 2303-2308 (2003).</li><li>Kropp, B. P., Zwischenberger, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-engineered+autologous+bladders:+new+possibilities+for+cystoplasty.">Tissue-engineered autologous bladders: new possibilities for cystoplasty.</a> Nature clinical practice. Urology. 3, 588-589 (2006).</li><li>Oberpenning, F., Meng, J., Yoo, J. J., Atala, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=De+novo+reconstitution+of+a+functional+mammalian+urinary+bladder+by+tissue+engineering.">De novo reconstitution of a functional mammalian urinary bladder by tissue engineering.</a> Nature. 17, 149-155 (1999).</li><li>Wood, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+engineering+of+skin.">Tissue engineering of skin.</a> Clinics in plastic surgery. 39, 21-32 (2012).</li><li>Groeber, F., Holeiter, M., Hampel, M., Hinderer, S., Schenke-Layland, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+tissue+engineering--in+vivo+and+in+vitro+applications.">Skin tissue engineering--in vivo and in vitro applications.</a> Clinics in plastic surgery. 39, 33-58 (2012).</li><li>Bannasch, H., Momeni, A., Knam, F., Stark, G. B., Fohn, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+engineering+of+skin+substitutes.">Tissue engineering of skin substitutes.</a> Panminerva medica. 47, 53-60 (2005).</li><li>Jakab, K., Neagu, A., Mironov, V., Forgacs, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+printing:+fiction+or+science.">Organ printing: fiction or science.</a> Biorheology. 41, 371-375 (2004).</li><li>Boland, T., Mironov, V., Gutowska, A., Roth, E. A., Markwald, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+and+organ+printing+2:+fusion+of+cell+aggregates+in+three-dimensional+gels.">Cell and organ printing 2: fusion of cell aggregates in three-dimensional gels.</a> The anatomical record. Part A, Discoveries in molecular, cellular, and evolutionary biology. 272, 497-502 (2003).</li><li>Mironov, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Organ+printing:+tissue+spheroids+as+building+blocks.">Organ printing: tissue spheroids as building blocks.</a> Biomaterials. 30, 2164-2174 (2009).</li><li>Raimondi, M. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Two-photon+laser+polymerization:+from+fundamentals+to+biomedical+application+in+tissue+engineering+and+regenerative+medicine.">Two-photon laser polymerization: from fundamentals to biomedical application in tissue engineering and regenerative medicine.</a> Journal of applied biomaterials. 10, 56-66 (2012).</li><li>Miller, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+casting+of+patterned+vascular+networks+for+perfusable+engineered+three-dimensional+tissues.">Rapid casting of patterned vascular networks for perfusable engineered three-dimensional tissues.</a> Nature. 11, 768-774 (2012).</li><li>Billiet, T., Vandenhaute, M., Schelfhout, J., Van Vlierberghe, S., Dubruel, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+trends+and+limitations+in+hydrogel-rapid+prototyping+for+tissue+engineering.">A review of trends and limitations in hydrogel-rapid prototyping for tissue engineering.</a> Biomaterials. 33, 6020-6041 (2012).</li><li>Murphy, S. V., Skardal, A., Atala, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+hydrogels+for+bio-printing+applications.">Evaluation of hydrogels for bio-printing applications.</a> Journal of biomedical materials research. Part A. 101, 272-284 (2013).</li><li>He, J., Li, D., Liu, Y., Gong, H., Lu, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Indirect+fabrication+of+microstructured+chitosan-gelatin+scaffolds+using+rapid+prototyping.">Indirect fabrication of microstructured chitosan-gelatin scaffolds using rapid prototyping.</a> Virtual and Physical Prototyping. 3, 159-166 (2008).</li><li>Sachlos, E., Reis, N., Ainsley, C., Derby, B., Czernuszka, J. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+collagen+scaffolds+with+predefined+internal+morphology+made+by+solid+freeform+fabrication.">Novel collagen scaffolds with predefined internal morphology made by solid freeform fabrication.</a> Biomaterials. 24, 1487-1497 (2003).</li><li>Lee, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On-demand+three-dimensional+freeform+fabrication+of+multi-layered+hydrogel+scaffold+with+fluidic+channels.">On-demand three-dimensional freeform fabrication of multi-layered hydrogel scaffold with fluidic channels.</a> Biotechnology and bioengineering. 105, 1178-1186 (2010).</li><li>Turturro, M., Christenson, M., Larson, J., Papavasiliou, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Matrix+metalloproteinase+(MMP)+sensitive+PEG+diacrylate+(PEGDA)+hydrogels+with+spatial+variations+in+matrix+properties+direct+vascular+cell+invasion.">Matrix metalloproteinase (MMP) sensitive PEG diacrylate (PEGDA) hydrogels with spatial variations in matrix properties direct vascular cell invasion.</a> J. Tissue. 6, 302-302 (2012).</li><li>Butterworth, A., Garcia, M. D. L., Beebe, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photopolymerized+poly(ethylene)+glycol+diacrylate+(PEGDA)+microfluidic+devices.">Photopolymerized poly(ethylene) glycol diacrylate (PEGDA) microfluidic devices.</a> Roy. Soc. Ch. , 4-6 (2005).</li><li>Shachar, M., Tsur-Gang, O., Dvir, T., Leor, J., Cohen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effect+of+immobilized+RGD+peptide+in+alginate+scaffolds+on+cardiac+tissue+engineering.">The effect of immobilized RGD peptide in alginate scaffolds on cardiac tissue engineering.</a> Acta biomaterialia. 7, 152-162 (2011).</li><li>Jeon, O., Bouhadir, K. H., Mansour, J. M., Alsberg, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Photocrosslinked+alginate+hydrogels+with+tunable+biodegradation+rates+and+mechanical+properties.">Photocrosslinked alginate hydrogels with tunable biodegradation rates and mechanical properties.</a> Biomaterials. 30, 2724-2734 (2009).</li><li>Mauck, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+tissue+engineering+of+articular+cartilage+through+dynamic+loading+of+chondrocyte-seeded+agarose+gels.">Functional tissue engineering of articular cartilage through dynamic loading of chondrocyte-seeded agarose gels.</a> J. Biomech. Eng-T Asme. 122, 252-260 (2000).</li><li>D'Arrigo, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyaluronic+acid+methacrylate+derivatives+and+calcium+alginate+interpenetrated+hydrogel+networks+for+biomedical+applications:+physico-chemical+characterization+and+protein+release.">Hyaluronic acid methacrylate derivatives and calcium alginate interpenetrated hydrogel networks for biomedical applications: physico-chemical characterization and protein release.</a> Colloid Polym. Sci. 290, 1575-1582 (2012).</li><li>Pescosolido, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hyaluronic+Acid+and+Dextran-Based+Semi-IPN+Hydrogels+as+Biomaterials+for+Bioprinting.">Hyaluronic Acid and Dextran-Based Semi-IPN Hydrogels as Biomaterials for Bioprinting.</a> Biomacromolecules. 12, 1831-1838 (2011).</li><li>Guo, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hydrogels+of+collagen/chondroitin+sulfate/hyaluronan+interpenetrating+polymer+network+for+cartilage+tissue+engineering.">Hydrogels of collagen/chondroitin sulfate/hyaluronan interpenetrating polymer network for cartilage tissue engineering.</a> J. Mater. Sci-Mater. M. 23, 2267-2279 (2012).</li></ol>

Yazarlar beyan bir şey yok.

Burada, ilk kez, mevcut, hızlı bir şekilde bağlı olarak ~ 20 ° C arasında poloksamer edilen jel-sol geçiş için soğuk suyla yıkandı, olabilir, bir geçici kalıp için bir thermoresponsive polimerin kullanılması Sürecin hızı yeterli çözünürlüğe sahip basılamaz biopolimer yapıların hızlı oluşturma için Poloksamer ilginç hale getirir. Burada anlatılan teknik, bir hidrojel içinde ya da daha önce bir başka malzeme 35 için rapor edildiği gibi mikroakışkan kanallarının oluş...

Doku mühendisliği yaklaşımları insan doku ve organları 19,20 rejenerasyonu ile ilgili olarak son yıllarda çok ilerleme kaydettik. Bununla birlikte, şimdiye kadar, doku mühendisliği odak çoğu zaman basit bir yapı ya da mesane 21,22 ya da deri 23-25 ​​kadar küçük boyutlara sahip doku ile sınırlı kalmıştır. Insan vücudu, ancak, hücreler ve hücre dışı matris bir uzamsal tanımlanmış bir şekilde düzenlenmiş çok sayıda karmaşık üç boyutlu bir doku içerir. Bu dokuların üretimi için, bir teknik belirtilen pozisyonlarda üç boyutlu bir yapı içinde hücre ve hücre dışı matriks iskele yerleştirebilirsiniz gereklidir. Bioprinting üretim karmaşık üç boyutlu dokuların vizyonu 10,11,26-28 gerçekleştirilebilir böyle bir tekniği olma potansiyeline sahiptir. Bioprinting desenlendirme için malzeme transferi süreçlerinin kullanımı &quot;olarak tanımlanan ve biyolojik rel montaj olduğunuteknisyenleri tarafından, geçerli malzemeler - moleküller, hücre, doku ve biyolojik biyomalzemeler -. bir veya daha fazla biyolojik fonksiyonları &quot;4 gerçekleştirmek için bir reçete kuruluşla Birkaç farklı teknikler kapsar iki alt mikron çözünürlüklü kadar farklı çözünürlüklerde ve uzunluk ölçüleri, az çalışan ekstrüzyon baskı 1,12,30 için 420 mikron 150 mikron bir çözünürlük foton polimerizasyon 29. Tek bir malzeme veya malzeme kombinasyonu her yöntemin 31 gereksinimlerini tatmin edecek. ekstrüzyon baskı için, anahtar parametreleri viskozite ve jelleşme zaman vardır Yüksek viskozite ve hızlı jelleşme arzu 32,. 3D baskı karmaşık geometrileri 30,33,34 oluşturmak için kurban kalıp kolay oluşturulmasını sağlayan bir tekniktir. Bu işlem, bir ekstrüzyon bioprinter gibi bir hızlı prototip tekniği kullanılarak bir kalıbın yapımında dayanmaktadır. Oluşturulan kurban kalıp kullanılırOnların düşük viskoziteli ve yavaş jelleşme süresi nedeniyle yazdırmak için zor malzemelerden kompleks yapılar oluşturmak için. Burada sunulan yöntem, düşük bir sıcaklıkta hızlı bir şekilde çözünür ve doğru bir şekilde ekstrüde edilebilir bir malzemeden oluşan bir geçici kalıp oluşturulmasını içerir. Blok kopolimer, poli (etilen glikol) 99-poli (propilen glikol), 67-poli (etilen glikol) 99 (aynı zamanda Pluronic ® F 127 veya poloksamer 407 olarak da bilinir), bu gereksinimleri yerine getirmektedir. Zaten bildiğimiz kadarıyla, sıvı ortamlarda kendi istikrarsızlık nedeniyle değiştirilmemiş sürümünde yazdırmak için hiç kullanılmamış, ekstrüzyon baskı 1 değiştirilmiş bir versiyonu kullanılmıştır ama olmuştur. Poloksamer 407, aynı zamanda, ters termal duyarlı davranış, 18, ​​yani soğutma üzerine bir sol bir jelden bu değişiklikleri gösterir. En önemlisi, çok yüksek sadakat karmaşık keyfi kavisli yapılarına yazdırılabilir. Bu sayede, bir yapısal bir hidrojel oluşturmaDüşük viskoziteli bir madde, bu durumda yavaş jelleşen agaroz, basılı geçici kalıp içine çözeltisi pipetleme. Yüksek sadakat ve döküm yapılandırılmış hidrojel gelen onun hızlı elüsyon bir maske ya da sık sık taşbaskı yöntemleri gerekli olduğu gibi bir damga kullanmadan farklı geometri ile kalıp oluşturmak için hızlı ve esnek bir yöntem yapar ile kurban kalıp baskı kombinasyonu. Dökülmüş yapısal hidrojel daha da düşük viskozite nedeniyle ekstrüzyon baskı için uygun değildir başka bir malzeme ile doldurulabilir. Bu bizim durumumuzda bir düşük viskoziteli aljinat metakrilat çözümdür. Burada bir ayağı dizinin örneğinde hidrojel desenlendirme için thermoresponsive ters kurban kalıp yöntem mevcut.

<table border="1">
 <tbody>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>REAGENTS</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Poloxamer (Pluronic F127)</td>
 <td>Sigma</td>
 <td>P2443</td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>PBS</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td><a href="http://products.invitrogen.com/ivgn/en/US/adirect/invitrogen?cmd=catProductDetail&amp;productID=10010015" target="_blank">10010-015</a></td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>CAD software</td>
 <td>regenHU</td>
 <td>BioCAD</td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Alginate methacrylate</td>
 <td>Innovent e.V Technologieentwicklung Jena</td>
 <td></td>
 <td >Synthesized by Innovent for the FP7 Project Nr NMP4-SL-2009-229292</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Fibrinogen From Human Plasma, Alexa Fluor 488 Conjugate</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>F13191</td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Lithium phenyl-2,4,6-trimethylbenzoylphosphinate (LAP)</td>
 <td>Innovent e.V Technologieentwicklung Jena</td>
 <td></td>
 <td >Synthesized by Innovent for the FP7 Project Nr NMP4-SL-2009-229292</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Agarose</td>
 <td>Lonza</td>
 <td>50004</td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td></td>
 <td></td>
 <td></td>
 <td>EQUIPMENT</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Bioprinter</td>
 <td>regenHU</td>
 <td>Biofactory</td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Valve</td>
 <td>regenHU</td>
 <td>300 &mu;m Nozzel Diameter</td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Needle</td>
 <td>regenHU</td>
 <td>150 &mu;m Inner Diameter</td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Zeiss Axioobserver with ApoTome</td>
 <td>Zeiss</td>
 <td></td>
 <td ></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>UV Light Source</td>
 <td>UVP</td>
 <td>Blak-Ray B-100AP High Intensity UV Lamp</td>
 <td>100 W</td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

printing thermoresponsive reverse molds for the creation of patterned two-component hydrogels for 3d cell culture

Bioprinting hızlı prototipleme sektöründe kökeni olan bir gelişmekte olan bir teknolojidir. Farklı baskı süreçleri temas bioprinting 1-4 (ekstrüzyon, daldırma kalem ve yumuşak litografi), temassız bioprinting 5-7 (lazer ileri transferi, mürekkep püskürtmeli birikimi) ve bu iki foton fotopolimerizasyon 8 olarak lazer tabanlı teknikler ayrılabilir. Bu tür farklı hücre tipleri 17 ko-kültür etkileri gibi temel biyolojik sorulara cevap vermek için bu gibi doku mühendisliği 9-13, biyosensör mikroüretim 14-16 gibi bir araç olarak bir çok uygulama için kullanılabilir. Ortak fotolitografik veya yumuşak-taş baskı yöntemlerinin aksine, ekstrüzyon bioprinting ayrı bir maske ya da damga gerektirmeyen bir avantaja sahiptir. CAD yazılımı kullanarak, yapının tasarımı hızla operatörün gereklerine göre değiştirilebilir ve ayarlanabilir. Bu litografi tabanlı daha esnek bioprinting yaparyaklaşımlar. Burada örnek olarak bir hidrojel içinde ayağı bir dizi kullanarak bir çok malzeme 3D yapısı oluşturmak için bir kurban kalıp baskı göstermektedir. Bu yapı taşları bir sinir kılavuz kanalı içinde bir damar ağı veya tüpler için içi boş yapılarının temsil edebilir. Geçici kalıp için seçilen malzeme poloksamer 407, 4 sıvıdır mükemmel baskı özelliklerine sahip bir polimer thermoresponsive ° C idi ve jelleştirme sıcaklığının üzerinde bir katı madde ~ 20 ° C&#39;de% 24,5 ağırlık / hacim çözümler 18. Bu özellik, poloksamer dayalı geçici kalıp talep üzerine akıtılan olmasını sağlar ve özellikle dar geometrileri için, bir katı maddenin yavaş çözünme üzerinde avantajlara sahiptir. Poloxamer kurban kalıp oluşturmak için mikroskop cam slaytlar basılmıştır. Agaroz kalıp içine pipetlenir ve jelleştirme kadar soğutuldu. Buz gibi soğuk suda poloksamer elüsyon sonra, agaroz kalıp boşlukları aljinat metakrilat sp ile doldurulmuşturFITC etiketli fibrinojen ile iked. Dolu boşluklar daha sonra UV ile çapraz bağlantılı olduğu ve yapı bir epi-floresan mikroskop ile görüntülendi.

Örnek sonuçlar ters kalıp tekniği (Şekil 2&#39;de gösterildiği gibi) olan bir ikinci malzeme ile doldurulabilir yapılandırılmış bir jel oluşturacaktır olduğunu göstermektedir. Her baskı sürecinin başında baskı parametreleri ilk optimize edilmiştir. Parametreler adım adım ayarlamalar Şekil 3 ve tek bir hat basılır Şekil 4 &#39;de gösterilen baskılı katmanlı yapıları ile sonuçlanacaktır. Tabaka kalınlığı (bir basılı katman sonra i...

Watch this Scientific Journal Video about Printing Thermoresponsive Reverse Molds for the Creation of Patterned Two-component Hydrogels for 3D Cell Culture at JoVE.com

Printing Thermoresponsive Reverse Molds for the Creation of Patterned Two-component Hydrogels for 3D Cell Culture

Bir bioprinter bir kurban kalıp dayalı desenli hidrojeller oluşturmak için kullanıldı. Poloksamer kalıp ikinci bir hidrojel ile dolduruldu ve daha sonra üçüncü bir hidrojel ile doldurulmuş boşluklar bırakarak elüt edilmiştir. Bu yöntem Biyopolimerlerin karmaşık mimarileri oluşturmak için hızlı sağım ve poloksamerin iyi baskı kullanır.

Desenli ve Yaratılış 3D Hücre Kültürü için iki bileşenli Hidrojeller için Thermoresponsive Ters Kalıpları Baskı

Bioprinting is an emerging technology that has its origins in the rapid prototyping industry. The different printing processes can be divided into contact ...

printing-thermoresponsive-reverse-molds-for-creation-patterned-two

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

15.0K Görüntüleme.  Cartilage Engineering & Regeneration. Bir bioprinter bir kurban kalıp dayalı desenli hidrojeller oluşturmak için kullanıldı. Poloksamer kalıp ikinci bir hidrojel ile dolduruldu ve daha sonra üçüncü bir hidrojel ile doldurulmuş boşluklar bırakarak elüt edilmiştir. Bu yöntem Biyopolimerlerin karmaşık mimarileri oluşturmak için hızlı sağım ve poloksamerin iyi baskı kullanır.

Video: Printing Thermoresponsive Reverse Molds for the Creation of Patterned Two-component Hydrogels for 3D Cell Culture

Detection of Infectious Virus from Field-collected Mosquitoes by Vero Cell Culture Assay

Mosquitoes transmit a number of distinct viruses including important human pathogens such as West Nile virus, dengue virus, and chickungunya virus. Many of these viruses have intensified in their endemic ranges and expanded to new territories, necessitating effective surveillance and control programs to respond to these threats. One strategy to monitor virus activity involves collecting large numbers of mosquitoes from endemic sites and testing them for viral infection. In this article, we describe how to handle, process, and screen field-collected mosquitoes for infectious virus by Vero cell culture assay. Mosquitoes are sorted by trap location and species, and grouped into pools containing &le;50 individuals. Pooled specimens are homogenized in buffered saline using a mixer-mill and the aqueous phase is inoculated onto confluent Vero cell cultures (Clone E6). Cell cultures are monitored for cytopathic effect from days 3-7 post-inoculation and any viruses grown in cell culture are identified by the appropriate diagnostic assays. By utilizing this approach, we have isolated 9 different viruses from mosquitoes collected in Connecticut, USA, and among these, 5 are known to cause human disease. Three of these viruses (West Nile virus, Potosi virus, and La Crosse virus) represent new records for North America or the New England region since 1999. The ability to detect a wide diversity of viruses is critical to monitoring both established and newly emerging viruses in the mosquito population.

We describe a method to process and screen field-collected mosquitoes for a diversity of viruses by Vero cell culture assay. By employing this technique, we have detected 9 different viruses from 4 taxonomic families in mosquitoes collected in Connecticut.

Vero Hücre Kültür Testi ile Alan toplanan Sivrisinekler Enfeksiyon Virüs Algılama

Mosquitoes transmit a number of distinct viruses including important human pathogens such as West Nile virus, dengue virus, and chickungunya virus. Many ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

A Primary Neuron Culture System for the Study of Herpes Simplex Virus Latency and Reactivation

Herpes simplex virus type-1 (HSV-1) establishes a life-long latent infection in peripheral neurons. This latent reservoir is the source of recurrent reactivation events that ensure transmission and contribute to clinical disease. Current antivirals do not impact the latent reservoir and there are no vaccines. While the molecular details of lytic replication are well-characterized, mechanisms controlling latency in neurons remain elusive. Our present understanding of latency is derived from in vivo studies using small animal models, which have been indispensable for defining viral gene requirements and the role of immune responses. However, it is impossible to distinguish specific effects on the virus-neuron relationship from more general consequences of infection mediated by immune or non-neuronal support cells in live animals. In addition, animal experimentation is costly, time-consuming, and limited in terms of available options for manipulating host processes. To overcome these limitations, a neuron-only system is desperately needed that reproduces the in vivo characteristics of latency and reactivation but offers the benefits of tissue culture in terms of homogeneity and accessibility.
Here we present an in vitro model utilizing cultured primary sympathetic neurons from rat superior cervical ganglia (SCG) (Figure 1) to study HSV-1 latency and reactivation that fits most if not all of the desired criteria. After eliminating non-neuronal cells, near-homogeneous TrkA+ neuron cultures are infected with HSV-1 in the presence of acyclovir (ACV) to suppress lytic replication. Following ACV removal, non-productive HSV-1 infections that faithfully exhibit accepted hallmarks of latency are efficiently established. Notably, lytic mRNAs, proteins, and infectious virus become undetectable, even in the absence of selection, but latency-associated transcript (LAT) expression persists in neuronal nuclei. Viral genomes are maintained at an average copy number of 25 per neuron and can be induced to productively replicate by interfering with PI3-Kinase / Akt signaling or the simple withdrawal of nerve growth factor1. A recombinant HSV-1 encoding EGFP fused to the viral lytic protein Us11 provides a functional, real-time marker for replication resulting from reactivation that is readily quantified. In addition to chemical treatments, genetic methodologies such as RNA-interference or gene delivery via lentiviral vectors can be successfully applied to the system permitting mechanistic studies that are very difficult, if not impossible, in animals. In summary, the SCG-based HSV-1 latency / reactivation system provides a powerful, necessary tool to unravel the molecular mechanisms controlling HSV1 latency and reactivation in neurons, a long standing puzzle in virology whose solution may offer fresh insights into developing new therapies that target the latent herpesvirus reservoir.

The protocol describes an efficient and reproducible model system to study herpes simplex virus type 1 (HSV-1) latency and reactivation. The assay employs homogenous sympathetic neuron cultures and allows for the molecular dissection of virus-neuron interactions using a variety of tools including RNA interference and expression of recombinant proteins.

Herpes Çalışmaları A Primer Nöron Kültür Sistem Virüs gecikmesi ve Yeniden Simplex

Herpes simplex virus type-1 (HSV-1) establishes a life-long latent infection in peripheral neurons. This latent reservoir is the source of recurrent ...

Monitoring Dendritic Cell Migration using 19F / 1H Magnetic Resonance Imaging

Continuous advancements in noninvasive imaging modalities such as magnetic resonance imaging (MRI) have greatly improved our ability to study physiological or pathological processes in living organisms. MRI is also proving to be a valuable tool for capturing transplanted cells in vivo. Initial cell labeling strategies for MRI made use of contrast agents that influence the MR relaxation times (T1, T2, T2*) and lead to an enhancement (T1) or depletion (T2*) of signal where labeled cells are present. T2* enhancement agents such as ultrasmall iron oxide agents (USPIO) have been employed to study cell migration and some have also been approved by the FDA for clinical application. A drawback of T2* agents is the difficulty to distinguish the signal extinction created by the labeled cells from other artifacts such as blood clots, micro bleeds or air bubbles. In this article, we describe an emerging technique for tracking cells in vivo that is based on labeling the cells with fluorine (19F)-rich particles. These particles are prepared by emulsifying perfluorocarbon (PFC) compounds and then used to label cells, which subsequently can be imaged by 19F MRI. Important advantages of PFCs for cell tracking in vivo include (i) the absence of carbon-bound 19F in vivo, which then yields background-free images and complete cell selectivityand(ii) the possibility to quantify the cell signal by 19F MR spectroscopy.

Monitoring Dendritic Cell Migration using 19F / 1H Magnetic Resonance Imaging

Tracking of cells using MRI has gained remarkable attention in the past years. This protocol describes the labeling of dendritic cells with fluorine (19F)-rich particles, the in vivo application of these cells, and monitoring the extent of their migration to the draining lymph node with 19F/1H MRI and 19F MRS.

Kullanarak İzleme Dendritik Hücre Göç<sup&gt; 19</sup&gt; F /<sup&gt; 1</sup&gt; H Manyetik Rezonans Görüntüleme

Continuous  advancements in noninvasive imaging modalities such as magnetic resonance  imaging (MRI) have greatly improved our ability to study ...

Organoids as Model for Infectious Diseases: Culture of Human and Murine Stomach Organoids and Microinjection of Helicobacter Pylori

Recently infection biologists have employed stem cell derived cultures to answer the need for new and better models to study host-pathogen interactions. Three cellular sources have been used: Embryonic stem cells (ESC), induced pluripotent stem cells (iPSC) or adult stem cells. Here, culture of mouse and human gastric organoids derived from adult stem cells is described and used for infection with the gastric pathogen Helicobacter pylori. Human gastric glands are isolated from resection material, seeded in a basement matrix and embedded in medium containing growth factors epidermal growth factor (EGF), R-spondin, Noggin, Wnt, fibroblast growth factor (FGF) 10, gastrin and transforming growth factor (TGF) beta inhibitor. In these conditions, gastric glands grow into 3-dimensional organoids containing 4 lineages of the stomach. The organoids expand indefinitely and can be frozen and thawed similarly as cell lines. For infection studies, bacteria are microinjected into the lumen of the organoids. Infected organoids are processed for imaging. The described methods can be adapted to other organoids and infections with other bacteria, viruses or parasites. This allows the study of infection-induced changes in primary cells.

Stem cell derived cultures harbor tremendous potential to model infectious diseases. Here, the culture of mouse and human gastric organoids derived from adult stem cells is described. The organoids are microinjected with the gastric pathogen Helicobacter pylori.

Enfeksiyon Hastalıkları Modeli Olarak Organoids: Helicobacter Pylori ve İnsan Kültür ve kemirgen Mide Organoids ve Mikroenjeksiyon

Recently infection biologists have employed stem cell derived cultures to answer the need for new and better models to study host-pathogen interactions. ...

Flow Cytometry-based Assay for the Monitoring of NK Cell Functions

Natural killer (NK) cells are an important part of the human tumor immune surveillance system. NK cells are able to distinguish between healthy and virus-infected or malignantly transformed cells due to a set of germline encoded inhibitory and activating receptors. Upon virus or tumor cell recognition a variety of different NK cell functions are initiated including cytotoxicity against the target cell as well as cytokine and chemokine production leading to the activation of other immune cells. It has been demonstrated that accurate NK cell functions are crucial for the treatment outcome of different virus infections and malignant diseases. Here a simple and reliable method is described to analyze different NK cell functions using a flow cytometry-based assay. NK cell functions can be evaluated not only for the whole NK cell population, but also for different NK cell subsets. This technique enables scientists to easily study NK cell functions in healthy donors or patients in order to reveal their impact on different malignancies and to further discover new therapeutic strategies.

A simple and reliable method is described here to analyze a set of NK cell functions such as degranulation, cytokine and chemokine production within different NK cell subsets.

Akış NK Hücre Fonksiyonları İzleme Testi Sitometri tabanlı

Natural killer (NK) cells are an important part of the human tumor immune surveillance system. NK cells are able to distinguish between healthy and ...

Mouse- and Human-derived Primary Gastric Epithelial Monolayer Culture for the Study of Regeneration

In vitro studies of gastric wound repair typically involves the use of gastric cancer cell lines in a scratch-wound assay of cellular proliferation and migration. One critical limitation of such assays, however, is their homogenous assortment of cellular types. Repair is a complex process which demands the interaction of several cell types. Therefore, to study a culture devoid of cellular subtypes, is a concern that must be overcome if we are to understand the repair process. The gastric organoid model may alleviate this issue whereby the heterogeneous collection of cell types closely reflects that of the gastric epithelium or other native tissues in vivo. Demonstrated here is a novel, in vitro scratch-wound assay derived from human or mouse 3-dimensional organoids which can then be transferred to a gastric epithelial monolayer as either intact organoids or as a single cell suspension of dissociated organoids. The goal of the protocol is to establish organoid-derived gastric epithelial monolayers that can be used in a novel scratch-wound assay system to study gastric regeneration.

Here we describe a protocol for establishing and culturing human- and mouse-derived 3-dimensional (3D) gastric organoids, and the method for the transfer of 3D organoids to a 2-dimensional monolayer. The use of the gastric epithelial monolayer as a novel scratch-wound assay for regeneration studies is also described.

Fare ve insan elde edilen birincil Gastrik epitel Monolayer kültür yenilenme çalışmaları için

In vitro studies of gastric wound repair typically involves the use of gastric cancer cell lines in a scratch-wound assay of cellular proliferation and ...

Bacterial Cell Culture at the Single-cell Level Inside Giant Vesicles

We developed a method for culturing bacterial cells at the single-cell level inside giant vesicles (GVs). Bacterial cell culture is important for understanding the function of bacterial cells in the natural environment. Because of technological advances, various bacterial cell functions can be revealed at the single-cell level inside a confined space. GVs are spherical micro-sized compartments composed of amphiphilic lipid molecules and can hold various materials, including cells. In this study, a single bacterial cell was encapsulated into 10&#8211;30 &#956;m GVs by the droplet transfer method and the GVs containing bacterial cells were immobilized on a supported membrane on a glass substrate. Our method is useful for observing the real-time growth of single bacteria inside GVs. We cultured Escherichia coli (E. coli) cells as a model inside GVs, but this method can be adapted to other cell types. Our method can be used in the science and industrial fields of microbiology, biology, biotechnology, and synthetic biology.

We demonstrate single-cell culture of bacteria inside giant vesicles (GVs). GVs containing bacterial cells were prepared by the droplet transfer method and were immobilized on a supported membrane on a glass substrate for direct observation of bacterial growth. This approach may also be adaptable to other cells.

Dev veziküller Içinde tek hücreli seviyede bakteriyel hücre kültürü

We developed a method for culturing bacterial cells at the single-cell level inside giant vesicles (GVs). Bacterial cell culture is important for ...

High Throughput Co-culture Assays for the Investigation of Microbial Interactions

The study of interactions between microorganisms has led to numerous discoveries, from novel antimicrobials to insights in microbial ecology. Many approaches used for the study of microbial interactions require specialized equipment and are expensive and time intensive. This paper presents a protocol for co-culture interaction assays that are inexpensive, scalable to large sample numbers, and easily adaptable to numerous experimental designs. Microorganisms are cultured together, with each well representing one pairwise combination of microorganisms. A test organism is cultured on one side of each well and first incubated in monoculture. Subsequently, target organisms are simultaneously inoculated onto the opposite side of each well using a 3D-printed inoculation stamp. After co-culture, the completed assays are scored for visual phenotypes, such as growth or inhibition. These assays can be used to confirm phenotypes or identify patterns among isolates of interest. Using this simple and effective method, users can analyze combinations of microorganisms rapidly and efficiently. This co-culture approach is applicable to antibiotic discovery as well as culture-based microbiome research and has already been successfully applied to both applications.

The co-culture interaction assays presented in this protocol are inexpensive, high throughput, and simple. These assays can be used to observe microbial interactions in co-culture, identify interaction patterns, and characterize the inhibitory potential of a microbial strain of interest against human and environmental pathogens.

Mikrobiyal Etkileşimlerin İncelemi için Yüksek İş-İş Ortağı Tahlilleri

The study of interactions between microorganisms has led to numerous discoveries, from novel antimicrobials to insights in microbial ecology. Many ...

Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification (RT-LAMP) Assay for the Specific and Rapid Detection of Tilapia Lake Virus

Tilapia lake virus disease (TiLVD), an emerging viral disease in tilapia caused by the tilapia lake virus (TiLV), is a persistent challenge in the aquaculture industry that has resulted in the mass morbidity and mortality of tilapia in many parts of the world. An effective, rapid, and accurate diagnostic assay for TiLV infection is therefore necessary to detect the initial infection and to prevent the spread of the disease in aquaculture farming. In this study, a highly sensitive and practical reverse transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP) method is presented to detect tilapia lake virus in fish tissue. A comparison of the RT-qPCR and RT-LAMP assays of infected samples revealed positive results in 63 (100%) and 51 (80.95%) samples, respectively. Moreover, an analysis of uninfected samples showed that all 63 uninfected tissues yielded negative results for both the RT-qPCR and RT-LAMP assays. The cross-reactivity with five pathogens in tilapia was evaluated using RT-LAMP, and all the tests showed negative results. Both the liver and mucus samples obtained from infected fish showed comparable results using the RT-LAMP method, suggesting that mucus can be used in RT-LAMP as a nonlethal assay to avoid killing fish. In conclusion, the results demonstrated that the presented RT-LAMP assay provides an effective method for TiLV detection in tilapia tissue within 1 h. The method is therefore recommended as a screening tool on farms for the rapid diagnosis of TiLV.

Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification RT-LAMP Assay for the Specific and Rapid Detection of Tilapia Lake Virus

We present an RT-LAMP assay for the detection of TiLV in tilapia fish using simple instruments over a relatively short period of time compared to conventional RT-PCR techniques. This protocol may help control the epidemic spread of TiLVD, especially in developing countries.

Tilapia Lake Virüs Ünün Özel ve Hızlı Tespiti İçin Ters Transkripsiyon Döngü Aracılı İzomal Amplifikasyon (RT-LAMP) Testi

Tilapia lake virus disease (TiLVD), an emerging viral disease in tilapia caused by the tilapia lake virus (TiLV), is a persistent challenge in the ...

P. aeruginosa Infected 3D Co-Culture of Bronchial Epithelial Cells and Macrophages at Air-Liquid Interface for Preclinical Evaluation of Anti-Infectives

fDrug research for the treatment of lung infections is progressing towards predictive in vitro models of high complexity. The multifaceted presence of bacteria in lung models can re-adapt epithelial arrangement, while immune cells coordinate an inflammatory response against the bacteria in the microenvironment. While in vivo models have been the choice for testing new anti-infectives in the context of cystic fibrosis, they still do not accurately mimic the in vivo conditions of such diseases in humans and the treatment outcomes. Complex in vitro models of the infected airways based on human cells (bronchial epithelial and macrophages) and relevant pathogens could bridge this gap and facilitate the translation of new anti-infectives into the clinic. For such purposes, a co-culture model of the human cystic fibrosis bronchial epithelial cell line CFBE41o- and THP-1 monocyte-derived macrophages has been established, mimicking an infection of the human bronchial mucosa by P. aeruginosa at air-liquid interface (ALI) conditions. This model is set up in seven days, and the following parameters are simultaneously assessed: epithelial barrier integrity, macrophage transmigration, bacterial survival, and inflammation. The present protocol describes a robust and reproducible system for evaluating drug efficacy and host responses that could be relevant for discovering new anti-infectives and optimizing their aerosol delivery to the lungs.

P. aeruginosa Infected 3D Co-Culture of Bronchial Epithelial Cells and Macrophages at Air-Liquid Interface for Preclinical Evaluation of Anti-Infectives

We describe a protocol for a three-dimensional co-culture model of infected airways, using CFBE41o- cells, THP-1 macrophages, and Pseudomonas aeruginosa, established at the air-liquid interface. This model provides a new platform to simultaneously test antibiotic efficacy, epithelial barrier function, and inflammatory markers.

P. aeruginosa Anti-Enfektiflerin Klinik Öncesi Değerlendirilmesi Için Hava-Sıvı Arabiriminde Bronşiyal Epitel Hücrelerin in enfekte 3D Eş Kültür

fDrug research for the treatment of lung infections is progressing towards predictive in vitro models of high complexity. The multifaceted presence of ...