We greatly acknowledge financial support by NIH R01 CA123495, U01 CA151815, R01 CA136841, grants from the Department of Neurosurgery at Cedars-Cedars Medical Center and Arrogene Technology Inc.

Tüm deneyler in vivo yapılan ve IACUC protokolleri ile tam bir uyum içindedir cerrahi ve cerrahi olmayan prosedürler dahil olmak üzere resmi hayvan yönetmeliklere uymak. Polymalic asit 1. Biyoüretim <ol><li> Agarda kürelerin bir tohum kültür büyütün ve kuvöz ve bazal kültür ortamı 8,9 belirtti Termo bir 25 ° C ile 100 ml kültür ortamına Plasmodia aktarmak. </li><li> Sporlanmasını önlemek için ışık altında hariç ağırlık dolu 500 ml mikro plasmodium bir miktarda üretir. </li><li> 10 L biyoreaktör kap içinde 8 L bazal ortam içinde süspansiyon haline getirilmiş 80 g CaCO 3 hazırlayın. Monte edilmiş reaksiyon kabına 500 ml dolu mikro plasmodia aktarılır ve 25 ° C&#39;de süzüldü, hava ve bir kademeli karıştırıcı ile 150 rpm karıştırma 10 L / dakikalık bir akış hızı ile 75 saat boyunca bio-işleme izin verir. </li><li> Kültür suyu PMLA üretim sonunu gösteren pH 4.8 olduğunda sonlandırma ve t ile PMLA içeriğini ölçmekO / Fe (III) deneyi hidroksamat. </li><li> 17 ° C&#39;ye soğutun ve suyu hücreler yer çekimi ile yerleşmeye izin verir. </li><li> 4 ° C&#39;ye kadar soğutulur ve pH 7.5 &#39;e ayarlayın, 2 M NaOH kullanın. (5 ° C&#39;de 20 mM Tris-HCl, pH 7.5 ile dengelenmiş DEAE iri taneli,) üst yönde alt DEAE-selüloz 1.5 L ile doldurulmuş bir sütun üzerinden süpernatantı Pompa. </li><li> Yukarıdan aşağıya doğru bir yön değişiminden sonra 0.3 M NaCl ihtiva eden tampon 3 sütun ile yıkanır ve 0.7 M NaCl mevcudiyetinde PMLA elute. </li><li> 0.1 M CaCl2 ayarlayın ve% 80 buz soğuk etanol ile PMLA-Kalsiyum hızlandırabilir. , 50 kDa ve tuz tamponu yokluğunda su kullanımı - 300 kDa, - 50 - 80 kDa ve 10 ila 80 arasında PMLA-kalsiyum içine Sephadex G25 üzerinde paylarına ayırmaktadır. </li><li> Bir Amberlite IR 120H + kolonu üzerinde her fraksiyonu geçmek ve liyofılizasyondan hemen sıvı azot içinde-akış polymalic asit dondurma. </li><li> Kuru aseton içerisinde çözülür. Filtre işleminden sonra çözücü madde ortadan kaldırmakEksi 20 ° C sıcaklıkta kuru hava akımı, Lyophilize ve mağaza </li></ol> 2.. Polymalic asit bazlı Nano İlaç sentezi <ol><li> Susuz aseton, 1 ml ve 2 mi dimetil formamid (DMF) içinde 1 mmol N-hidroksisüksinimid ve 1 mmol disikloheksil karbodiimit PMLA in-H ve 116 mg (1 mmol malyl birimleri) karıştırılarak PMLA (P) karboksil grubu aktive. 3 saat boyunca 20 ° C&#39;de karıştırın. MPEG 5000-NH2 0.05 mmol trietilamin (TEA), ardından 1 ml DMF (malyl birimlerinin 0.05 mol%) of 0,05 mmol ekleyin. </li><li> Akıllı DMF 0.4 mmol lösin etil ester (LOEt) (malyl birimlerinin% 40 mol) içinde çözülmüş, damla ekleyin 0.1 mmol 2-tiyol-1-etilamin (2-MEA) (malyl birimlerinin% 10 mol) ve 0.5 mmol TEA, her DMF. Her eklemeden sonra, 1 saat izin ve cevap (ince tabaka kromatografisi, TLC) ninhydrin negatif reaksiyon tarafından tamamlanması için kontrol edin. </li><li> Fosfat tamponlu tuzlu su (30 dakika, pH 6.8) ile kendiliğinden hidroliz ile kalan NHS-ester çıkarmak mı. PD üzerinde Desalt-10 Kolon liyofilizasyon beyaz bir toz olarak &quot;preconjugate&quot; elde edilir. Eksi 20 ° C&#39;de saklayın kuru </li><li> 100 mM sodyum fosfat, 150 mM NaCI, pH 5.5 içinde 4.5 ml 30 mg antikor (mAb, IgG2a-κ) çözülür. </li><li> 5 mM tris (2-karboksi etil) 20 ° C&#39;de 30 dakika boyunca fosfin hidroklorür ile disülfıt bağlarını azaltır ve PD-10 sütun üzerinde saflaştırılması. </li><li> Aynı tampon, 2 ml Mal-PEG 3400-Mal çözülür ve 10 ml&#39;lik son hacminde, indirgenmiş mAb ekleyin ve 4 ° C&#39;de gece boyunca karışmaya Vivaspin 20, dışlanma 30 kD üzerinde 2.5 ml Konsantre ve Sephadex G75 üzerinde arındırmak. Sn-HPLC ürün üzerinde doğrulamak ve fotometrik 280 nm dalga boyunda miktarını ölçmek. </li><li> Mal-PEG-Mal-mAb atfetmek için &quot;preconjugate&quot; P / PEG 5000 (% 5) / LOEt (% 40) / mAb (% 0,2) / 2-MEA (% 10) elde etmek tioller. , Yukarıda belirtilen pH 5.5 tamponu içinde 50 mg (P / mPEG 5000 / LOEt/2-MEA) 200 nmol mAb-PEG 3400-Mal 5 ml karıştırılarak yapın sulfhy konsantrasyonunu ayarlamak2 mM Dryl ve 3 saat (verim% 98) 20 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> Çözünürleştirilir 3&#39;-H 2 N-AON DMF / PBS ninhidrin testi (1:1 v / v) DMF / metanol ((pH 7.2) ile reaksiyona N-süksinimidil-3-(2-piridilditio) propionat (SPDP) ) ve daha sonra su ve Lyophilize olarak, metanol içinde Sephadex LH20 üzerinde AON-PDP-saflaştırılması. </li><li> Disülfid değişim reaksiyonu sona kadar gece boyunca yukarıda hazırlanan Mal-PEG 3400-Mal-mAb-preconjugate ile pH 5.5 tampon maddesi içinde 800 nmol aktif AON inkübe edin. </li><li> Dahil floresan Alexa Fluor 680-maleimid polimer-2-MEA-SH ile tioeter oluşturur. 3-piridilditio-propiyonat (PDP) ile aşırı SÜLFİDRİL Blok ve Sephadex G75 üzerinde arındırmak. 4 ° C&#39;de saklayın ya da daha fazla, kullanılıncaya kadar -80 ° C&#39;de donduruldu. </li></ol> 3.. Tahliller ve Özellikleri <ol><li> Sek-HPLC analizi ile, 4 ° C ve 37 ° C de bir saflığa ve stabiliteye PBS içinde ve serum için testler yapın. Molec olarak polistiren sülfonat kullanınular ağırlık standartları. Nano boyut dağılımı ve zeta-potansiyelleri ölçün. Ticari sistemleri kullanın. </li><li> 320 ul örnek 10 ul% 160 (ağırlık / hacim) hidroksil amonyum klorür ve% 10 NaOH 160 ul (w / v) ilave edin. 10-15 dakika sonra, (w / v) Fe (III) Cl 3 12,% 5,% 160 ul ile karıştırmak (v / v) ve hidroksamat HCl / Fe 540 A oku (III). PMLA 1 mg / ml PMLA 2,5 A 540 tekabül varsayarak hesaplayın. </li><li> 110 ° C &#39;de 2 M HCI içinde gece boyunca nano ilaç hidrolize örnekleri değini ile ters faz kromatografi ile ilgili deney malik asit, malik asit standartları eklendi. 100 mM ditiotreitol ile nano ilaç ayrılması ve morfolino AON standartlarına karşı kantitatif ters fazlı HPLC ile Morfolino-AON ölçer. </li><li> Bölünme olmaksızın nano ilaç almak ve protein analiz kiti kullanılarak antikor ölçmek. Amonyum ferrothiocyanate ile reaksiyonunu izin vererek mPEG&#39;in ölçmek, sonra kloroform ile ayıklamak ve 510 nm dalga boyunda 10 absorbans okundu </sup&gt;. </li><li> Iyi antikor aktivitesini ve colligation test başına nano ilaç (1-10 ug mAb) 5 ul ELISA gerçekleştirin. Plaka kaplanmış antijenler peroksidaz-birleştirilmiş ve sekonder antikor olarak, sırasıyla, 0.5 ug / oyuk transferin reseptörü ve HER2 kullanın. </li><li> (Örnekler Tablo 1 ve Tablo 2) malik asit (% 100) ile ilgili AON, mPEG&#39;e ve mAB&#39;nin elde% hesaplamak ve tasarımı ile amaçlanan% ile karşılaştırın. </li></ol> 4.. In vitro test <ol><li> (4,5-dimetiltiazol-2-il) -5 - - (3-karboksimetoksifenil) -2 - (4-sülfofenil sarı bir reaktif [3 azaltma etkinliği zaman içinde yaşamda kalan hücrelerin kanser hücreleri ve kültürlenmiş bir ölçü ile nano ilaç inkübe )-2H-tetrazolyum, iç tuz] (MTS), bir mavi boya ve bir fotometre ile göreceli absorbansını. Kit tedarikçi tarafından yönergeleri izleyin. </li><li> In vitro ya da Western blot analizi için ex vivo hücre ekstreleri hazırlayın. Buz çıkarma b kullanınSDS ve proteaz inhibitörü kokteyli içeren uffer. SDS-poliakrilamid jel elektroforezi azaltarak ayrı proteinler. </li><li> Numune ekstrelerinde ilgi proteinler için western blotting yapın. Alkalin fosfataz konjuge sekonder antikor kullanın. </li><li> Floresan etiketleme kullanarak hücre alımını ve nano ilaç polimer platformu, AON ve Endozomlar co-lokalizasyon göstermek için konfokal mikroskopi kullanın. Floresan etiket olarak AON için nano konjuge platformu ve Lissamine için Alexa Fluor 680 takın. Etiketlenmiş moleküllerin dağılımının görselleştirmek için bir mikroskop 5X spektral tarayıcı ve oturma kanser hücrelerini kullanma </li><li> Leke endozom Stiril Kırmızı floresan boya ile membranlar ve endozom ko veya salınımını göstermektedir. </li></ol> 5. In vivo test <ol><li> Insan HER2-pozitif meme kanseri fare modeli (: Cr: (MCr)-Foxnnm çıplak fare Tac) hazırlayın. Pelet salan bir 0.72 mg 17β-estradiolu takın (90-gün release) subcutaneously her fare boyun. </li><li> Daha sonra deri altından sağ böğrüne 1 x 10 7 BT-474 tümör hücresinin enjekte edilmesi ve tümör büyümesine izin. </li><li> Tümörler, kuyruk damarına her bir antikorun 2.5 mg / kg AON ve / veya 4.5 mg / kg ihtiva eden 150 | il nano konjugat püskürtülmesiyle boyutunda 120 mm3 olduğunda tedavi başlatın. Tedavisi için, haftada iki kez toplam altı kez enjekte. </li><li> Iki zayıf çap pergeli ile tümör boyutu ölçülür ve formülün (uzunluk x genişlik x derinlik) x (π / 6) kullanılarak hacimlerini hesaplamak. 2 hafta son enjeksiyondan sonra servikal dislokasyon Ketamin ve Deksmedetomidinin çözeltisi ile sedasyon sonra hayvanlar Euthanize. </li><li> Morfolojik değerlendirme için H &amp; E ile tümörleri ve leke bölümleri izole. </li><li> Bir hayvan ölçekte ilaç dağıtım değerlendirmek için, bir flüoresan görüntüleme sistemi kullanır. 24 ve 48 saat sonra Alexa Fluor 680 etiketli nano ilaç ve resim enjekte edilir. </li><li> Hayvan Euthanize ve Fluor tespitizole edilmiş perfüze edilmiş ve tümörler ve organlarda Escence. </li></ol>

<ol>
	<li>Koboldt, D. C., Fulton, R. S., McLellan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+molecular+portraits+of+human+breast+tumors.+Cancer+Genome+Atlas+Network.">Comprehensive molecular portraits of human breast tumors. Cancer Genome Atlas Network.</a> Nature. 490, 61-70 (2012).</li><li>Kwong, L. N., Costello, J. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Oncogenic+NRAS+signaling+differentially+regulates+survival+and+proliferation+in+melanoma.">Oncogenic NRAS signaling differentially regulates survival and proliferation in melanoma.</a> Nat. Med. 18, 1503-1510 (2012).</li><li>Gerlinger, M., Rowan, A. J., Gerlinger, M., Rowan, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intratumor+heterogeneity+and+branched+evolution+revealed+by+multiregion+sequencing.">Intratumor heterogeneity and branched evolution revealed by multiregion sequencing.</a> N. Engl. J. Med. 366, 883-892 (2012).</li><li>Yap, T. A., Workman, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exploiting+the+cancer+genome:+strategies+for+the+discovery+and+clinical+development+of+targeted+molecular+therapies.">Exploiting the cancer genome: strategies for the discovery and clinical development of targeted molecular therapies.</a> Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 52, 549-573 (2012).</li><li>Chatterjee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cancer+Biomarkers:+Knowing+the+Present+and+Predicting+the+Future.">Cancer Biomarkers: Knowing the Present and Predicting the Future.</a> Future Oncol. 1, 37-50 (2005).</li><li>Suh, K. S., Sarojini, S., Youssif, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue+Banking,+Bioinformatics,+and+Electronic+Medical+Records:+The+Front-End+Requirements+for+Personalized+Medicine.">Tissue Banking, Bioinformatics, and Electronic Medical Records: The Front-End Requirements for Personalized Medicine.</a> J. Oncology. , (2013).</li><li>Ljubimova, J. Y., Holler, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biocompatible+nanopolymers:+the+next+generation+of+breast+cancer+treatment.">Biocompatible nanopolymers: the next generation of breast cancer treatment.</a> Future Medicine, Nanomedicine. 7, 1-4 (2012).</li><li>Lee, B. -. S., Vert, M., Holler, E., Steinb&#252;chel, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Water-soluble aiphatic polyesters: poly(malic acid)s. Biopolymers 3a. , 75-103 (2002).</li><li>Lee, B. -. S., Fujita, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polycefin,+a+new+prototype+of+multifunctional+nanoconjugate+based+on+poly(beta-L-malic+acid)+for+drug+delivery.">Polycefin, a new prototype of multifunctional nanoconjugate based on poly(beta-L-malic acid) for drug delivery.</a> Bioconjugate Chem. 17, 317-326 (2006).</li><li>Nag, A., Mitra, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+colorimetric+assay+for+estimation+of+polyethylene+glycol+and+polyethylene+glycolated+protein+using+ammonium+ferrothiocyanate.">A colorimetric assay for estimation of polyethylene glycol and polyethylene glycolated protein using ammonium ferrothiocyanate.</a> Analytical Biochem. 237, 224-231 (1996).</li><li>Ding, H., Inoue, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+brain+tumor+growth+by+intravenous+poly(beta-L-malic)+acid+nanobioconjugate+with+pH-dependent+drug+release.">Inhibition of brain tumor growth by intravenous poly(beta-L-malic) acid nanobioconjugate with pH-dependent drug release.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 107, 18143-18148 (2010).</li><li>Inoue, S., Ding, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanobioconjugate+inhibition+of+HER2/neu+signaling+and+synthesis+provides+efficient+mouse+breast+cancer+treatment.">Nanobioconjugate inhibition of HER2/neu signaling and synthesis provides efficient mouse breast cancer treatment.</a> Cancer Research. 71, 1454-1464 (2011).</li><li>Maeda, H., Sawa, T., Konno, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+tumor-targeted+delivery+of+macromolecular+drugs,+including+the+EPR+effect+in+solid+tumor+and+clinical+overview+of+the+prototype+polymeric+drug+SMANS.">Mechanism of tumor-targeted delivery of macromolecular drugs, including the EPR effect in solid tumor and clinical overview of the prototype polymeric drug SMANS.</a> J. Control. Release. 74, 47-61 (2001).</li><li>Ljubimova, J. Y., Fujita, M., Ljubimov, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poly(malic+acid)+nanoconjugates+containing+various+antibodies+and+oligonucleotides+for+multitargeting+drug+delivery.">Poly(malic acid) nanoconjugates containing various antibodies and oligonucleotides for multitargeting drug delivery.</a> Nanomed. 3, 247-265 (2008).</li><li>Inoue, S., Patil, R., Portilla-Arias, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+nanobioconjugate+inhibiting+EGFR+expression+in+triple+negative+breast+cancer.">Novel nanobioconjugate inhibiting EGFR expression in triple negative breast cancer.</a> PLoS One. 7, 1-9 (2012).</li><li>Patil, R., Portilla-Arias, J., Ding, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+Delivery+of+Doxorubicin+via+pH-Controlled+Hydrazone+Linkage+Using+Multifunctional+Nano+Vehicle+Based+on+Poly(&#946;-L-malic+Acid).">Cellular Delivery of Doxorubicin via pH-Controlled Hydrazone Linkage Using Multifunctional Nano Vehicle Based on Poly(&#946;-L-malic Acid).</a> Int. J. Mol. Sci. 13, 11681-11693 (2012).</li><li>Patil, R., Portilla-Arias, J., Ding, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Temozolomide+delivery+to+tumor+cells+by+a+multifunctional+nano+vehicle+based+on+poly(&#946;-L-malic+acid).">Temozolomide delivery to tumor cells by a multifunctional nano vehicle based on poly(&#946;-L-malic acid).</a> Pharm. Res. 27, 2317-2329 (2010).</li><li>Ljubimova, J. Y., Portilla-Arias, J., Patil, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicity+and+efficacy+evaluation+of+multiple+targeted+polymalic+acid+conjugates+for+triple-negative+breast+cancer+treatment.">Toxicity and efficacy evaluation of multiple targeted polymalic acid conjugates for triple-negative breast cancer treatment.</a> J. Drug Target. 21, 956-967 (2013).</li></ol>

Yazarlar Julia Y. Ljubimova, Keith L. Siyah ve Eggehard Holler Arrogene Technology Inc hissedarları

Biyolojik olarak parçalanabilir bir doğal polimer nano ilaçların hazırlanması için deney yol kişiselleştirilmiş tıp sentezinde kullanılabilecek sunulmuştur. Açıklama nano ilaç sentezi için bir çok yönlü bir platformdur polymalic asit, kontrollü üretimi ve saflaştırılması ile başlar. Tekrarlanabilir teknikleri kullanarak, polimer, yüksek moleküler ağırlığa sahip ve ilaç sentezler için uygun aşırı saflıkta elde edilir. Sentez, verimli bir şekilde HER2-pozitif göğüs kanseri tedavisinde gösterilen bir nano ilaç için tarif edilmektedir. Açıklama kanser tedavisi için diğer birçok nano ilaçların sentezleri tercüme edilebilir. Hedefleme örneğin HER2 proteini ya da etkili bir şekilde içselleştirilir başka bir tümör markeri olarak bir tümör-spesifik antijeni bağlayan örneğin Herceptin gibi antikorlar içerir. Nano ilaç etkin bir tre altında kanser büyümesini inhibe edecek antisens oligonükleotitlerin ve kemoterapi bir seçim sunannuları ailenizle konuşmak. Bu örnekte, Herceptin HER2 ile spesifik antisens oligonükleotid tavlama bağlanabilen HER2-kodlama mRNA HER2-sinyalizasyon ve HER2-pozitif göğüs kanserinin şiddetli azalma sürekli engellenmesi ile sonuçlanmıştır. Tümör hedefleme ve antisens oligonükleotidler ile gen sentezlenmesinin engellenmesi için temel ilkesine dayanarak güncel birçok nano ilaçlar ve başarılı bir şekilde inhibe klinik öncesi insan glioblastoma ve üç negatif meme kanseri 11,14-18 sentezledik. Sentetik çalışma Physarum polycephalum (&quot;balçık kalıp&quot; familyasından bir tür) bir kültür süpernatanından polymalic asit olduğu yüksek düzeyde saflaştırılmış nano ilaç platformunun hazırlanması ile başlar. Preparat çok antikorlar, peptidler, oligonükleotidler ve aktif ilaç dağıtım ve tümör büyümesinin önlenmesi işleyen diğer moleküllerin ataşmanına imkân veren, ilke olarak, polimerin yüksek molekül ağırlıklarına vurgulamaktadır. Followikontrol kültürlenmesini ve arıtma ng, tahmin edilebilir verimlerde polimer tekrarlanabilir kalitede imal edilmiştir. Polimer herhangi bir zaman için uygun koşullar altında depolanır. Polimer-kolye karboksilatlar kimyasal aktivasyonu ile başlayan PMLA nano konjugatlarının sentezi birkaç sentetik aşamalarda gerçekleştirilir. Adımlar arasında, sentez ara ürün, isteğe göre keyfi miktarda hazırlanmasını sağlayan beklemeye yerleştirilebilir ve böylece ölçek büyütme kullanılabilir. Sentezin ilerlemesi TLC ve sec-HPLC ile takip edilir, ve nano ilacın bileşimi ve etkinliği hem de grup spesifik kantitatif kimyasal tahliller, ELISA ve fiziksel ölçümler, çeşitli tarafından kontrol edilir. Deneyimlerimiz bu sentezler mükemmel verim ve saflık ile sorunsuz ve tekrarlanabilir ilerledi edilmiş olmasıdır. Pe gerektiği gibi antikor ve anti-duyarlı oligonükleotitlerin özgünlüğünü seçerek nano ilaç herhangi bir varyantı olumlu sentezlenirtıp rsonalized. Insan HER2-pozitif göğüs kanserinin başarılı tedavi modaliteleri fare kanser modelleri hazırlanması, nano ilaçlar, görüntüleme ve tümör büyümesinin analizin uygulanması için geçerlidir temsilcileridir. In vitro canlılığı testlerin sonuçları hücre hattı ve hayvan deneyinde kullanılacak öncü ilaç seçimi faydalıdır. In vivo görüntüleme Xenogen nano ilaç gerçekten tümör içine teslim olduğunu doğrular. Western blot sonuçları bazı proteinlerin düzeyi kanser tedavisi sırasında öngörülen moda yanıt olmadığını ortaya koymaktadır. Tümör boyutunun ölçülmesi, yani önlenmesi, durgunluk veya gerileme ile ilgili tedavinin başarısı hakkında bilgilendirir. Tarif edilen örnek öngörülebilirlik, tekrarlanabilirlik ve kayda değer toksisite yokluğu yüksek derecede gösteren diğer polymalic asit bazlı nano ilaçlar ile deneyim yansıtır. Toksisite ve birden t etkinliği üzerinde son sonuçlarüçlü-negatif meme kanseri tedavisi için argeted polymalic asit konjugelerin kavramı 18 güçlü desteği vardır. Tümör interstisyum içine ekstravazasyonun tarafından endotel bariyer, endozom alımı ile tümör hücre zarı ve lösin ethylester veya trileucine grupların eylem tarafından endozom zar bozulma: Bir önemli özelliği bizim nano ilaç biyo-engelleri nüfuz edebilir olmasıdır. Ekstravazasyonu ve endozom alımı güvenilir bir nano ilaca bağlı özel antikorlar ile gerçekleştirilir. Anti-fare transferrin reseptör antikoru, reseptör en tümör damar sistemi üzerinde aşırı eksprese olduğu muhtemelen, transsitoz ile tümör içine etkili akışını aracılık eder. Farklı bir antikor, spesifik olarak tümör alıcı hücre içine nano ilaç yönlendirilmesinde aynı nano eşlenik molekülü fonksiyonları üzerinde eklenmiş. Her bir antikor varlığı, transsitoz için bir ve endozom alımı için, diğeri, optimum çalışması için gereklidir. M Kantitatif analizalic asit ve antikor yüksek nano ilacın optimum bileşimi kontrol etmek için önerilmektedir. Son olarak, her-bir kovalent nano ilaç alıcı tümör hücresi içine ana damar içinden geçirmek en kimyasal olarak bağlı formda bir ilaç sunar unutulmamalıdır. Onlar hedeflenen yerinde nano eşlenik platformdan bölünme ile ücretsiz ilaçlar olarak yeniden kadar kimyasal eki (ön ilaçlar) en ilaçların inaktif hale getirir. Reaktivasyon yöntemi teslimat ve zararlı yan etkileri uyandırmak için bir asgari şans sırasında güvenlik yüksek derecede sağlar, çünkü bu önemlidir. Çok yönlülük, etkililik ve güvenlilik iyi kişiselleştirilmiş tıp vazgeçilmez özellikleridir.

Kanser genomları (Biyoteknoloji ve Kanser Genom Atlası için Ulusal Merkezi) sökülmüş edildiğinde post-genomik dönemde kanser gelecekteki tedavi genellikle aynı tümörün 1-4 içindeki tümörlerin genetik çeşitliliği için hesap verecek. Biyoinformatik ve pahalı, hızlı değil DNA dizileme sağlayan bir kişisel düzeyde 2,4,5 malign genler / mutasyonların edinimi. Genler tespit edildikten sonra, hasta malign genlerin 6 kendi ifadesini değiştirmek veya susturmak için kişiselleştirilmiş tıp ile tedavi edilecektir. Kanser hücrelerini hedeflemek ve bu hücrelere ilaçlar sağlamak için ihtiyaç işlevli verme sistemleri gerektirir. Açıkçası, nano ilaçlar bu gereksinimi 7. karşılayabilir. Keşifler kabaran dalgası olarak nanopartiküller kemoterapötik ilaçlar, proteinler ve / veya kanser hücrelerinin genetik olarak aktif madde yükleri getirmek için uygun olduğu kanıtlanmıştır. Ancak, yan etkiler reklam olmaya devamgiyinmiş. Biyodegradasyon yokluğunda ilişkin Bunlardan biri hastalıkları kışkırtmak için bir olasılıkla, sağlıklı doku ve organlarda malzeme birikimi neden olabilir. Birikmesini en aza indirmek için, non-toksik ve non-imünojenik polymalic mikrobiyal kökenli olan asit ve H2O ve CO2 ile 8 biyolojik tanıtıldı. Biz nano ilacın bir all-in-one kovalent tipi sentezlemek için polimer kullanın. Bu tür temozolomid, doksorubisin, veya antisens oligonükleotit ve ekstravazasyonu, doku hedefleme endosomolitik teslim veren fonksiyonel gruplar kimyasal olarak bağlı, kemoterapi içerir. Bu sayede tam farmasötik aktivitesi yenileyici, hedeflenen tümör hücresinde geldi ilaçlar özünde nano platformdan ayrılmaktadır. Biz, polimer nano platformun mikrobiyal üretim yöntemi, onun arıtma ve kanser için Trastuzumab (Herceptin) içeren nano ilacın kimyasal sentezini tarifHER2 aşırı engellenmesi için hedefleme ve bir antisens oligonükleotid. Çıplak fareler üzerinde ksenogenik insan Her2-pozitif göğüs kanseri için nano ilaç uygulama olarak, kanser tedavisi, yüksek verimlilik sergilemektedirler. Polymalic asit nano ilaçlar için burada sunulan tümör hedefleme ve gen susturma ilkeleri diğer kanser vakalarının tedavisinde uygulanabilir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="935">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Name of Reagent/Material</td>
			<td style="width:263px;">Company</td>
			<td style="width:187px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:79px;">Comments</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">2-Mercapto-1-ethylamine (Cysteamine (2MEA)</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">30078-25G</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">4&#8217;,6-Diamidino-2-phenylindole (DAPI)</td>
			<td colspan="2">Vector Laboratories, Burlingame, CA</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">90-Day release 17&#946;-estradiol pellet&#160;</td>
			<td>Innovative Research of America</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Alexa Fluor 680 C2 maleimide</td>
			<td style="width:263px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:187px;">A20344</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Amberlite IR 120H</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">6428</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Antifoam Y-30 Emulsion</td>
			<td style="width:263px;">Sigam-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">A5758</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Anti-laminin-411 chain mAbs</td>
			<td style="width:263px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:187px;">SC-59980</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Anti-pAkt mAb</td>
			<td style="width:263px;">Cell Signalling</td>
			<td style="width:187px;">9271S</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Anti-PARB mAb</td>
			<td style="width:263px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:187px;">556494</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anti-von Willebrand Factor antibody&#160;</td>
			<td>Abcam</td>
			<td style="width:187px;">AB6994</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Bacto Yeast Extract</td>
			<td style="width:263px;">Bacto, Dickinson/Sparks, MD</td>
			<td style="width:187px;">212720</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Beta-actin</td>
			<td style="width:263px;">Cell Signalling</td>
			<td style="width:187px;">3700</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">BT-474&#160;</td>
			<td style="width:263px;">ATCC</td>
			<td style="width:187px;">HTB-20</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Calcium Carbonate</td>
			<td style="width:263px;">Alfa Aesar</td>
			<td style="width:187px;">36337</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell Proliferation Assay kit</td>
			<td>Promega, Madison, WI, USA</td>
			<td>PR-G3580</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Centriplus 100&#160;</td>
			<td>Millipore</td>
			<td style="width:187px;">4414</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dicyclohexylcarbodimide</td>
			<td style="width:263px;">Fluka</td>
			<td style="width:187px;">36650</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">D5796</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Eosin</td>
			<td style="width:263px;">Cardinal Health</td>
			<td style="width:187px;">S7439-4</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Galardin (MMP-inhibitors)&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Santa Cruz</td>
			<td style="width:187px;">SC-994</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">GAPDH</td>
			<td style="width:263px;">Cell Signalling&#160;</td>
			<td style="width:187px;">2118</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hematoxilin</td>
			<td style="width:263px;">Cardinal Health</td>
			<td style="width:187px;">S7439-3</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Hemin from porcine</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">51280</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Herceptin</td>
			<td style="width:263px;">Genentech</td>
			<td style="width:187px;">15534</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Herceptin (Western blotting)</td>
			<td style="width:263px;">Cell Signalling</td>
			<td style="width:187px;">2165S</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">IgG2a-kappa murine malignoma</td>
			<td style="width:263px;">Sigma</td>
			<td style="width:187px;">M77695X5m</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Immun-Star AP Substrate Pack</td>
			<td style="width:263px;">Biorad</td>
			<td style="width:187px;">170-5012</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Immun-StarTM AP Substrate Pack&#160;</td>
			<td>Biorad</td>
			<td>170-5012</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">LAL Reagent water&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Lonza, MD</td>
			<td style="width:187px;">W50-1000</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Laminin-411 mAbs</td>
			<td style="width:263px;">Abcam</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Leucine ethyl ester (LOEt)</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">61850-10G-F</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Limulus Amebocyte Lysate (LAL) PYROGENT-5000 tests</td>
			<td style="width:263px;">Cambrex BioScience</td>
			<td style="width:187px;">N384</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Lissamin-Morpholino AON</td>
			<td style="width:263px;">Gene Tools</td>
			<td style="width:187px;">Custom made</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-malic acid&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">M6413</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Malate dehydrogenase&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">M2634</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mal-PEG-Mal</td>
			<td style="width:263px;">Laysan</td>
			<td style="width:187px;">mal-PEG-mal-3400</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Matrigel</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td style="width:187px;">354248</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Milk, nonfat powdered&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Proteomics</td>
			<td>M203-10G</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Morpholino oligonucleotides&#160;</td>
			<td style="width:263px;">GeneTools</td>
			<td style="width:187px;">custom made</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">mPEG5000</td>
			<td style="width:263px;">Lysan</td>
			<td style="width:187px;">mPEG-NH2-5000</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">N-hydroxysuccinimde (NHS)&#160;</td>
			<td style="width:263px;">ACROS Organics</td>
			<td style="width:187px;">15727100</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">Ninhydrin</td>
			<td style="width:263px;">Merck</td>
			<td style="width:187px;">1.06762.0100</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nitrocellulose Membrane Filter Paper Sandwich</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>LC2001</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Nitrocellulose Membrane Filter Paper Sandwich, 0.45 &#181;m&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:187px;">LC2001</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Novex &#174; Tris-Glycine Transfer Buffer (25X)&#160;</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>LC3675</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Nude Mice [Tac:Cr:(MCr)-Foxnnm]&#160;</td>
			<td>Taconic</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">PBS pH 7.2 10x</td>
			<td style="width:263px;">Gibco</td>
			<td style="width:187px;">10010-49</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:407px;">PBS pH 7.2 1x</td>
			<td style="width:263px;">Gibco</td>
			<td style="width:187px;">70013</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">PD-10 desalting columns</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0851</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Physarum polycephalum M3CVII</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>204388</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pierce BCA protein assay&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:187px;">23225</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Protease inhibitor cocktail</td>
			<td style="width:263px;">Roche</td>
			<td style="width:187px;">1.18362E+11</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Protein Detector ELISA Kit</td>
			<td style="width:263px;">KPL</td>
			<td style="width:187px;">54-62-18</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sephadex G-25 superfine</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0031</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sephadex G-75&#160;</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0050</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Sephadex-LH20&#160;</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0090</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SKBR-3&#160;</td>
			<td style="width:263px;">ATCC</td>
			<td style="width:187px;">HTB-30</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">SPDP</td>
			<td style="width:263px;">Proteochem&#160;</td>
			<td style="width:187px;">C1116</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Streamline-DEAE</td>
			<td style="width:263px;">GE Healthcare</td>
			<td style="width:187px;">17-0994</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Styryl Red FM 1-43&#160;</td>
			<td>Life Technologies&#160;</td>
			<td style="width:187px;">T-3163</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TBS 10x</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>170-6435</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TCEP</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">C4706-2G</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TLC, silica coated aluminia sheets</td>
			<td style="width:263px;">Merck, Darmstadt, DE</td>
			<td style="width:187px;">60F254</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Trileucine (LLL)</td>
			<td style="width:263px;">Bachem</td>
			<td style="width:187px;">H-3915</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Triton X-114&#160;</td>
			<td style="width:263px;">Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:187px;">X114</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Tween&#174;20&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>P1379</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:263px;"></td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Vivaspin 20&#160;</td>
			<td style="width:263px;">VWR</td>
			<td style="width:187px;">14005-302</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:407px;">DAPI</td>
			<td style="width:263px;">Vector Laboratories, Burlingame, CA</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Dexmedetomidine</td>
			<td style="width:263px;">Pfizer</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Atipamezole</td>
			<td style="width:263px;">Pfizer</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Carprofen</td>
			<td style="width:263px;">Pfizer</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Betadine</td>
			<td style="width:263px;">Foster and Smith, Wisconsin</td>
			<td style="width:187px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

polymalic acid-based nano biopolymers for targeting of multiple tumor markers: an opportunity for personalized medicine?

Tumors with similar grade and morphology often respond differently to the same treatment because of variations in molecular profiling. To account for this diversity, personalized medicine is developed for silencing malignancy associated genes. Nano drugs fit these needs by targeting tumor and delivering antisense oligonucleotides for silencing of genes. As drugs for the treatment are often administered repeatedly, absence of toxicity and negligible immune response are desirable. In the example presented here, a nano medicine is synthesized from the biodegradable, non-toxic and non-immunogenic platform polymalic acid by controlled chemical ligation of antisense oligonucleotides and tumor targeting molecules. The synthesis and treatment is exemplified for human Her2-positive breast cancer using an experimental mouse model. The case can be translated towards synthesis and treatment of other tumors.

HER2 reseptör ifadesini susturma ve HER2-12, sinyal bloke insan HER2-pozitif meme kanserinin engellenmesi Strateji Insan göğüs kanseri farklı biçimleri arasında, HER2-pozitif tümör kötü klinik sonuçları vardır. Biz, çıplak fare modelinde insan HER2-fazla sentezleyen meme kanserinin başarılı bir şekilde tedavi sunar. Bu strateji, reseptörün HER2-mRNA bağımlı sentezi (Şekil 1) bloke edilmesi için Herceptin ve HER2 özgü AON kullanılarak HER2 sinyal yolunun hemen susturulması hem de aktif olan nano ilaç içerir. Herceptin ve anti-HER2 AON talebi içeren nano konjugatı birlikte Herceptin veya AON&#39;in ya yoksun olan iki kontrol grubu ile, Şekil 3 &#39;de gösterilmiştir. Kurşun bileşik bir uçtan bir uca transsitoz aktif ekstravazasyonunu ulaşmak için anti-MsTfRmAb içeriyorduöf tümör damarlarının TfR endotelyal hücre. Tümör içine çok daha az alım antikorun yokluğunda not edildi ve tümör etkisine bağlı EPR 13 atfedilmiştir. Alexa Fluor 680 ihtiva eden nano konjugatların Floresan versiyonları görüntüleme çalışmaları için sentezlendi. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/50668/50668fig1highres.jpg" width="500" /> . HER2-pozitif meme kanseri hücrelerine AON teslimat ve tümör büyümesi inhibisyonu Şekil 1 mekanizması sol üst köşe:. Nano konjuge Şekil 3 uyarlanmıştır. Sol alt köşesi: yüzeyinde TDH ifade Fare tümör damarları. Nano ilaç reseptörüne bağlanan ve transsitoz ile tümör girer. Buna ek olarak, tümör erişimin bir dereceye tümöründe bağımlı gelişmiş alımını ve retenti katılma düzensiz endotel katmanları ile mümkündür(EPR) 13. Daha sonra, nanodrug insan kanser hücreleri üzerinde ifade HER2 bağlanan ve erken endozomlar içine içselleştiren. Bağlama da bloklar HER2 sinyal yolu. Endozomların olgunlaşması ve asitleştirildikten sonra, nano ilacın endozom kaçış mekanizması devreye girer. Nanodrug sitoplazmasına giren disülfid ara parçasının redüktif klivajı ile nano platformu salınır ve HER2-sentezini bloke HER2-mRNA&#39;ya bağlanan edilir. Sentezinin bloke edilmesi HER2-sinyal bloke uzanır ve tümör büyümesi inhibisyonu neden olur. Polymalic asit platformun mikrobiyal üretimi Nano eşlenik platformu polymalic asit (PMLA), kültürlenmiş Physarum polycephalum arasında microplasmodia ve Protokol tarif edilen ve Şekil 2&#39;de gösterildiği gibi, sıvı kültür ortamından saflaştırılır üretildi. Üretim ve arıtma için düzgün ve tekrarlanabilir. Bu Devam için önemli olduğunu<html> rol zaman, pH ve polimer kendiliğinden bölünmesini önlemek için sıcaklık. Dikkatli yıkama ve DEAE-sütun elüsyon DNA, karbonhidrat, toksinler ve renkli malzemenin çıkarılması için tavsiye edilmektedir. Aşırı saflık, susuz aseton içinde eritilmesi ve çözünmeyen malzemenin ayrılması sonra elde edildi. Üretilen PMLA toplam tutarı kampanya başına 5 ± 1 g idi. 1.5 ± 0.5 g miktarları çok 10 L biyoreaktör kullanılıyorsa 80,000-100,000 tekrarlanabilir elde edilmiştir w M PMPLA arıtıldı. Sec-HPLC elüsyon profilleri simetrik idi. Sayısal dağılımının göre dinamik ışık saçılı analizi 8 ± 1 nm&#39;lik bir hidrodinamik çapına karşılık gelen bir tek tepe ve PDI polidispersite endeksi = 0.10 ± 0.02, kabul küresel parçacıklar için alet kullanılarak hesaplanır gösterilir. Zeta-potansiyeli olduğunu -22 ± 2 mV (pH 7.5). / 50668/50668fig2highres.jpg &quot;width =&quot; 500 &quot;/&gt; Şekil 2,. Üretimi ve (Lee et al. 9 uyarlanmıştır) Physarum polycephalum içinde kültürlenmiş mikro plasmodium ikinci polymalic asidin saflaştırılması. Polymalic asit (PMLA) bir biyoreaktör içinde Physarum polycephalum arasında plasmodium üretilen ve anyon değiştirici (DEAE) bağlayıcı ile kültür süpernatanından toplanır. Yıkama sıvısı kalsiyum tuzu olarak etanol-çökeltilir. Kalsiyum tuzu çözeltileri Sephadex-G25 fazla Mw-fraksiyonlanır. PMLA ihtiva eden fraksiyonlar Amberlite IR-120H + fazla asit içine Ca-tuzuna dönüştürülür. Serbest PMLA son olarak kuru beyaz bir toz elde etmek üzere liyofilize edilir. Kurşun nano konjügatın kimyasal sentezi P / mPEG 5.000 (% 5) / LOEt (% 40) / AON (% 2.5) / Herceptin (% 0,2) / a<html> nti-MsTfRmAb (% 0,2) Kurşun nano ilacın ve iki ön-madde nano konjugatlarının şematik yapısı Şekil ure 3 &#39;de gösterilmiştir. Ön AON HER2 veya Herceptin antikor ya da eksikliği için tasarlanmış iken kurşun, tüm bileşenleri içerir. AON&#39;in mAbs ve yanı sıra, bileşikler, plazma proteinlerine bağlanma en aza indirmek için, polietilen glikol, bir mPEG&#39;in 5000 içeren, enzimatik bölünme ile retikülo-endotelial sisteme (RES) ve bozulma ile çekme. Antisens dizisi 5&#39;-CAT-GGT-GCT-CAC-TGC-GGC-TCC-GGC-3 &#39;Her2 mRNA&#39;ya tamamlayıcı olan ve dikkatli bir şekilde HER2 bloke karşı yüksek özgüllük elde etmek için çeşitli HER2-ifade eden hücre hatlarında in vitro olarak test edilmiştir sentez ve off-hedef etkilerini gösteren değil. 8/50668fig3highres.jpg &quot;width =&quot; 500 &quot;/&gt; Şekil 3.. Nano insan HER2-pozitif meme kanseri tedavisinde eşleştirilmelerin. Lider nano ilaç (üst yapı) iki ilaç (Herceptin, HER2 AON) içerir. Versiyonlar 2 ve 3, ilaçların sadece birini içerebilir. Insan HER2-aşırı ifade eden tümör hücrelerine 1 ve 2&#39;nin Uptake Herceptin bağlanma tarafından yönetilmektedir. Herceptin içermeyen Nano eşlenik 3, insan hücreleri tarafından endozom alımı için anti-HuTfRmAb aldı. Alexa Fluor 680 ile birleşme görüntüleme amaçları için isteğe bağlı oldu. Kırmızı çubuk nano konjugat platformu PMLA / LOEt (% 40) temsil eder. % Belirtilen ligand (nanodrug =% 100 malik asit kalıntılarının toplam miktarı) bağlanmasını tüketilen malik asit kalıntılarının bir kısmını gösterir. <img alt="Şekil 4," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/50668/50668fig4highres.jpg" width="500" /> Şekil 4. Nano kimyasal sentezikonjugatlan P / LOEt / AON HER2 / anti-MsTfR/Herceptin yukarıdan aşağıya doğru:. kolye karboksilatlardan (kimyasal aktivasyon) arasında PMLA-N-hidroksi succinimidyl ester (PMLA-NHS) sentezi. 2-merkapto-1-aminoethan (2-MEA) ile amid formasyonu NHS değiştirilmesi, metil-PEG 5000-amin (5.000 mPEG-NH2), trileucine (LLL) ya da lösin etilester (LOEt). Bu, &quot;preconjugate&quot; bölünebilir disülfid bağlarının oluşumu ile tioeter oluşumu ve AON&#39;in ile mAb-Mal-PEG-Mal vermektedir. Kalan 2-MEA amidoetil-ditio-propiyonik asit oluşturan sınırlıdır. Tek mAb&#39;nin sadece bağlanma gösterilmiştir. Çoklu ekleri mAb&#39;lerin karışımları kullanılarak yönetilir. Yüzde% çeşitli ligandlar (serbest PMLA için% 100) bağlanmıştır karboksilatlar fraksiyonlarını gösterir. Şekil ure 4&#39;te belirtildiği gibi nano konjugatlar sentezlendi. Kurşun hesaplanan molekül ağırlığıeşlenik 719,000 idi. Sentezin genel verim malik asit içeriği ile ilgili olarak 45 ±% 5 idi. 100 kDa PMLA platformun 862 malyl birimi (=% 100), ortalama olarak,% 40 LOEt,% 5, MPEG,% 2 AON% 2,% 0.2 ve% 0.2 arasında Herceptin anti-MsTfR mAb gerçekleştirilir. Her bir antikor miktarı PMLA platformun molekülü başına 1.7 moleküllerinin ortalama karşılık geldi. % Tasarlanmış ve grup analizi ile doğrulanmıştır% ±% 5 dahilinde aynıydı. Bir örnek tasarım içeriği ile karşılaştırılmasını göstermektedir malik asit, AON, mAb ve mPEG 5000 ve Tablo 2&#39;de deneysel içeriğinin hesaplanması için Tablo 1 &#39;de verilen bir durumdur. Bölüm 3 altında kriterlere göre yüksek saflıkta yüksek reaksiyon verimleri ve boyut dışlama ile etkin bir biçimde ayrılması (örneğin, mAb ve mAb serbest-nanoconjugate sec-HPLC üzerinde, 1 dakika ile ayrılır) ve çözücüler içerisinde seçici çözünürlük bazında elde edilmiştir. Monoklonal antikorların etkinliği oldu<html> nano ilaç sentez boyunca muhafaza edilmesi gösterilmiştir ve bu antikorların bu iki çeşit aynı polimer platformu üzerine monte edilmiş olduğu doğrulandı. Atipik ELISA deneyinin sonuçları Şekil ure 5&#39;te gösterilmiştir. Genel olarak, malik asit, AON, protein, PEG için kantitatif grup analizi için ve ELISA tahlilleri için bildirilen sentezi durumunda, sadece farklı personel ve enstrümantasyon tarafından gerçekleştirilen zaman yeniden üretilebilir sonuçlar elde edilmiştir, sağlam, ama aynı zamanda analiz için kullanıldığında Diğer sentezlenen nanoconjugates arasında. <img alt="Tablo 1" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/50668/50668table1.jpg" width="600" /> Malik asit içeriği referansla nanodrug bileşimin Tablo 1.. Hesaplanması. 668table2.jpg &quot;width =&quot; 600 &quot;/&gt; Tasarlanan bileşim ile deneysel nano ilaç bileşimi Tablo 2.. Karşılaştırması. <img alt="Şekil 5," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/50668/50668fig5highres.jpg" width="500" /> Şekil 5,. ELISA kimyasal sentez sonra ve farklı antikor çoklu bağlama gösterilmesi için antikor afinite ölçümü için. Nano ilaç antikor, mAb, sırasıyla A ve B antijenleri, karşı (A) ve antikor mAb (B) içerir. ELISA plakaları antijen (A) ile kaplanır. Free mAb (A), serbest mAb (B), ve nano ilaç ELISA plakalarına uygulanır. Yalnızca mAb (A) antijen (A) bağlı ise yıkamadan sonra, antikorlar, mAb (A) veya mAb (B) her biri için belirli bir ikincil peroksidaz bağlanmış antikorlar ile test edilir. Bu, serbest ve nano ilaç mAb (A) ile konjüge edilmiş ve dolaylı olarak, nano ilaç molekülünün mAb (B) konjüge edilmiş, ancak serbest mAb (B) değil görülmektedir, Plaka üzerinde muhafaza edilir. Konsantrasyon bağımlılığı kimyasal eşleştirme antikorun bağlanma etkinliğini etkilememiştir belirten, serbest ve konjuge mAb (A) için benzer bağlanma çekim güçlerini göstermektedir. Ayrıca, aynı fiziksel bir varlık (nano platform) mAb antikoru (B) tespiti sonuçları üzerinde mAb (A) ile mAb (B) &#39;nin birlikte ligasyon. Burada gösterilen deney sonuçları, anti-insan TfRmAb (A) ve anti-fare TfRmAb (B) bakın. Benzer sonuçlar, anti-MsTfR mAb ve anti-HER2 mAb (Herceptin) ve test edilen diğer antikor çiftler için gösterilmiştir. Fiziksel ve araştırma hidrodinamik çapı belirtilmedikçe 22.1 ± P / mPEG (% 5) / LOEt (% 40) / AON (% 2) / Herceptin (% 0,2) / anti-MsTfRmAb (% 0.2) (kurşun, iki 2.3 nm ilaç versiyonu), 20.1 ± P / mPEG (% 5) / LOEt (% 40) / AON (% 2) / anti-MsTfRmAb (% 0.2) / anti-HuTfRmAb (% 0.2) (AON ilaç sürüm) 2,4 nm ve 15.1 ± P / mPEG&#39;e (% 5) / LOEt (% 40) / Herceptin (% 0.2) (Herceptin ilaç sürüm) için 1.2 nm. PH 7 Zeta-potansiyeli.5 Bu sipariş -5.2 ± 0.4 mV, -5.7 ± 0.6 mV, ve -4.1 ± 0.4 mV idi. Bu nano konjugatların ölçülen hidrodinamik çapı serbest bileşenler için ölçülen çaplar toplamsallık takip ki söz edilmelidir. Tümör hücre zarından nano ilaç teslimi ve 0 saat ve 3 saat sonra, r sitoplazma içine serbest Endozom alımı ile hücre zarından nano ilacın teslimat ure Şekil 6&#39;da gösterilmiştir 0 saat ve 3 saat sonra. Flüoresan etiketler (yeşil Alexa Fluor 680) nano ilaç platforma ve (kırmızı Lissamine,) AON&#39;in bağlıdır. Bunların üst üste D &amp; L ve panellerin G ve O. etiketlenmesine endozomlar (mavi) floresans ile panelinde gösterilmektedir Pearson korelasyon katsayıları (R (r) platformu / endozomların eş-lokalizasyonu, AON / endozomlar, 0 saat ve 3 saat için bir platform / AON. T ilişkin görüntüleri hesaplandıo 3 saat görüntü sitoplazmada glutation-bağımlı bölünmeye disülfid ile nano ilaçtan AON&#39;in sitoplazma ve ayrışma içine endozomlardan salınmasını göstermektedir. <img alt="Şekil 6," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/50668/50668fig6highres.jpg" width="500" /> Şekil 6,. (Ding ve diğ. 11 uyarlanmıştır) hedef hücreler tarafından alımı için nano eşlenik Konfokal mikroskopi. Hücreler, iki polimer platformu ve Lisamin AON&#39;in bağlı (kırmızı) ile Alexa Fluor 680 (yeşil) ile etiketlenmiş olan nano ilaçla 37 ° C&#39;de 30 dakika inkübe edildi. Buna ek olarak, endozomlar FM1-43 (mavi) ile boyandı. Lokalizasyon 0 saat (A) ve 3 saat (B) inkübasyon sonrasında gösterilmektedir. Paneller A, ab, ve B, yalnız nano konjuge floroforlar tarafından ij gösterisi boyama, veA, cd &amp; B, kl kendi co-lokalizasyon. Buna ek olarak, endozomların boyama panel A, e ve B, m ve nano birleşmiş ve endosomesin paneller A, ko gösterilir fg ve B, no. Panellerin paneller A, H &amp; B, p gösteri faz kontrast. (C) Pearson korelasyon platform Endozomlar, AON-Endozomlar, 0 saat ve 3 saat için hesaplanan platform AON ko için R (r) katsayıları. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50668/50668fig6large.jpg" target="_blank">tıklayınız Burada bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için.</a> In vitro ve in vivo insan meme kanserinin engellenmesi Com HER2 aşırı ifade eden hücre soyu BT-474 in vitro büyüme inhibisyonuDüşük sentezleyen hücre soyu MDA-MB-231 ile parison ure Şekil 7 &#39;de gösterilmiştir. Inhibisyon derecesi kurşun nano konjugat P / MPEG / LOEt / AON HER2 / Herceptin / anti-MsTfRmAb sırasıyla% 50 ve% 30, olduğunu. Diğer bileşikler ile engellenmesi MDA-MB-231 hücreleri için daha BT-474 için daha az, ancak daha yüksektir. BT-474 hücre hattı, ksenojenik fare meme kanseri tedavisi için seçildi. <img alt="Şekil 7" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/50668/50668fig7highres.jpg" width="500" /> Şekil 7,. HER2 BT-474 göğüs kanseri hücrelerinin aşırı ifade eden ve düşük HER2 BT-474 göğüs kanseri hücre hattı aşırı ifade eden büyüme inhibisyonu. Karşılaştırılması (Inoue et al. 12 uyarlanmıştır) MDA-MB-231 hücrelerinin (eksprese In vitro büyüme inhibisyonu sol) ve HER2 ifade eden düşük meme kanseri hücre soyu MDA-MB-231 (sağ). TfR (ler) anti-MsTfRm gösterirAb ve TfR (Hu / Ms), anti-HuTfRmAb ve anti-MsTfRmAb gösterir. Kurşun nano ilaç, P / MPEG / LOEt / AON HER2 / Herceptin / TfR (Ms) ve Herceptin veya AON HER2&#39;nin ya yoksun nano ilaçlar PBS, Herceptin ve AON HER2 ile karşılaştırılmıştır. Herceptin yokluğunda, anti-MsTfRmAb tümör hücreleri tarafından alınmasını sağlamak endozom konjüge edildi. Konsantrasyonlar antikorlar AON HER2, 4 uM endoporter (AON&#39;in uygulama) ile ilgili olarak 4 uM ile ilgili olarak 40 ug / ml idi. Önemi * ile gösterilen, p &lt;0.05: ** P &lt;0.02: *** P &lt;0.003, PBS ile karşılaştırıldı. Şekil 8 &#39;de in vivo tedavi sonuçları, insan meme kanseri aşırı ifade eden BT-474 Her2&#39;yi taşıyan fareler için sunulmuştur. Büyüme sadece PBS (Şekil ure 8) ile tedavi edilen kontrollere kıyasla Herceptin ve HER2 özgü AON içeren kurşun nanodrug ile&gt;% 95 inhibe edilmiştir. Engellemeyalnız Herceptin, P / MPEG / LOEt / Herceptin veya P / MPEG / LOEt / AON / anti-MsTfRmAb / anti-HuTfRmAb ile% 60 ya da daha az oldu. Tümör ekstrelerinin Western blot analizi, HER2 sentez ve Akt fosforilasyonunun hem inhibisyonunu gösterdi, ancak toplam Akt değişikliği ve temizlik enzim yok GAPDH. PARP apoptoz artan seviyesi ile uygun olarak ayrılır. Tedavisi ve tümör gerilemesini gösteren H &amp; E ile boyandı doku bölümleri sonra tümör Resimlerde Şekil ure 9&#39;da gösterilmiştir. <img alt="Şekil 8," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/50668/50668fig8highres.jpg" width="500" /> (Inoue et al. 12 uyarlanmıştır) talebi ve ön-madde ilaçlar ile nano tedavi sırasında Şekil 8,. Tümör boyutu ve proteinler. Çeşitli tedaviler (Günlük 42, toplam 8 enjeksiyonları gün 21) için. Tümör boyutu. Barlar standardını göstermektedirortalamadan sapma. Anti-Her2 AON&#39;in ve Herceptin ile konjuge talebi tek başına Herceptin veya tek bir ilaç ihtiva eden nano konjugatlarının. B ya da daha üstündür. HER2, fosforile Akt, toplam Akt&#39;nin, Parb ifadesi üzerine çeşitli tedavilerin etkisi, yarılır Parb ve GAPDH western blot ile gösterilmektedir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50668/50668fig8large.jpg" target="_blank">, bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 9," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/50668/50668fig9highres.jpg" width="500" /> Çıplak fareler üzerinde HER2-pozitif BT-474 insan göğüs kanseri Şekil 9. Tedavisi (Ionue et al. 12 uyarlanmıştır) doku kesitlerinde. Tümör nekroz regresyon ve / apoptoz. Üst: tümör (kırmızı oklar) Çekme. Tümör büyümesini (mavi ok) desteklemek için östrojen pelet göstergesidir. Lower: Tümör bölme hematoksilin ve Eosine (H &amp; E) boyama. Çoğalan tümör tümör hücrelerinin yoğun bir ambalaj ile gösterilmiştir. Nekrotik doku tümör hücrelerinin elimine edilmiş yerlerde görülür. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/50668/50668fig9large.jpg" target="_blank">, bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Polymalic Acid-based Nano Biopolymers for Targeting of Multiple Tumor Markers: An Opportunity for Personalized Medicine? at JoVE.com

Polymalic Acid-based Nano Biopolymers for Targeting of Multiple Tumor Markers: An Opportunity for Personalized Medicine?

Polymalic asit bazlı bir nano ilacın bir örnek kanser için de geçerlidir kişiye tıp rasyonel tasarım karşı sunulmuştur. Bu, bir çıplak fare Her2-pozitif insan meme kanseri tedavisi için bir nano ilacın sentezini tarif eder.

Çoklu Tümör Belirteçleri Hedefleme için Polymalic Asit bazlı Nano Biopolymers: Kişiselleştirilmiş Tıp için Bir Fırsat?

Tumors with similar grade and morphology often respond differently to the same treatment because of variations in molecular profiling. To account for this ...

polymalic-acid-based-nano-biopolymers-for-targeting-multiple-tumor

Research

JoVE Journal

Chemistry

16.5K Görüntüleme.  Cedars-Sinai Medical Center.  Polymalic asit bazlı bir nano ilacın bir örnek kanser için de geçerlidir kişiye tıp rasyonel tasarım karşı sunulmuştur. Bu, bir çıplak fare Her2-pozitif insan meme kanseri tedavisi için bir nano ilacın sentezini tarif eder. 

Video: Polymalic Acid-based Nano Biopolymers for Targeting of Multiple Tumor Markers: An Opportunity for Personalized Medicine?

Glycan Node Analysis: A Bottom-up Approach to Glycomics

Synthesized in a non-template-driven process by enzymes called glycosyltransferases, glycans are key players in various significant intra- and extracellular events. Many pathological conditions, notably cancer, affect gene expression, which can in turn deregulate the relative abundance and activity levels of glycoside hydrolase and glycosyltransferase enzymes. Unique aberrant whole glycans resulting from deregulated glycosyltransferase(s) are often present in trace quantities within complex biofluids, making their detection difficult and sometimes stochastic. However, with proper sample preparation, one of the oldest forms of mass spectrometry (gas chromatography-mass spectrometry, GC-MS) can routinely detect the collection of branch-point and linkage-specific monosaccharides ("glycan nodes") present in complex biofluids. Complementary to traditional top-down glycomics techniques, the approach discussed herein involves the collection and condensation of each constituent glycan node in a sample into a single independent analytical signal, which provides detailed structural and quantitative information about changes to the glycome as a whole and reveals potentially deregulated glycosyltransferases. Improvements to the permethylation and subsequent liquid/liquid extraction stages provided herein enhance reproducibility and overall yield by facilitating minimal exposure of permethylated glycans to alkaline aqueous conditions. Modifications to the acetylation stage further increase the extent of reaction and overall yield. Despite their reproducibility, the overall yields of N-acetylhexosamine (HexNAc) partially permethylated alditol acetates (PMAAs) are shown to be inherently lower than their expected theoretical value relative to hexose PMAAs. Calculating the ratio of the area under the extracted ion chromatogram (XIC) for each individual hexose PMAA (or HexNAc PMAA) to the sum of such XIC areas for all hexoses (or HexNAcs) provides a new normalization method that facilitates relative quantification of individual glycan nodes in a sample. Although presently constrained in terms of its absolute limits of detection, this method expedites the analysis of clinical biofluids and shows considerable promise as a complementary approach to traditional top-down glycomics.

This article presents an enhanced form of a novel bottom-up glycomics technique designed to analyze the pooled compositional profile of glycans in unfractionated biofluids through the chemical breakdown of glycans into their constituent linkage-specific monosaccharides for detection by GC-MS. Potential applications include early detection of cancer and other glycan-affective disorders.

Glycan Düğüm Analizi: Glikomik A Aşağıdan yukarı Yaklaşım

Synthesized in a non-template-driven process by enzymes called glycosyltransferases, glycans are key players in various significant intra- and ...

Kimya

Highly Stable, Functional Hairy Nanoparticles and Biopolymers from Wood Fibers: Towards Sustainable Nanotechnology

Nanoparticles, as one of the key materials in nanotechnology and nanomedicine, have gained significant importance during the past decade. While metal-based nanoparticles are associated with synthetic and environmental hassles, cellulose introduces a green, sustainable alternative for nanoparticle synthesis. Here, we present the chemical synthesis and separation procedures to produce new classes of hairy nanoparticles (bearing both amorphous and crystalline regions) and biopolymers based on wood fibers. Through periodate oxidation of soft wood pulp, the glucose ring of cellulose is opened at the C2-C3 bond to form 2,3-dialdehyde groups. Further heating of the partially oxidized fibers (e.g., T = 80 &#176;C) results in three products, namely fibrous oxidized cellulose, sterically stabilized nanocrystalline cellulose (SNCC), and dissolved dialdehyde modified cellulose (DAMC), which are well separated by intermittent centrifugation and co-solvent addition. The partially oxidized fibers (without heating) were used as a highly reactive intermediate to react with chlorite for converting almost all aldehyde to carboxyl groups. Co-solvent precipitation and centrifugation resulted in electrosterically stabilized nanocrystalline cellulose (ENCC) and dicarboxylated cellulose (DCC). The aldehyde content of SNCC and consequently surface charge of ENCC (carboxyl content) were precisely controlled by controlling the periodate oxidation reaction time, resulting in highly stable nanoparticles bearing more than 7 mmol functional groups per gram of nanoparticles (e.g., as compared to conventional NCC bearing &#60;&#60; 1 mmol functional group/g). Atomic force microscopy (AFM), transmission electron microscopy (TEM), and scanning electron microscopy (SEM) attested to the rod-like morphology. Conductometric titration, Fourier transform infrared spectroscopy (FTIR), nuclear magnetic resonance (NMR), dynamic light scattering (DLS), electrokinetic-sonic-amplitude (ESA) and acoustic attenuation spectroscopy shed light on the superior properties of these nanomaterials.

Synthesis schemes to prepare highly stable wood fiber-based hairy nanoparticles and functional cellulose-based biopolymers have been detailed.

Son derece kararlı, Fonksiyonel Tüylü Nanoparçacıklar ve Ahşap Elyaf Biyopolimerler: Sürdürülebilir Nanoteknoloji Doğru

Nanoparticles, as one of the key materials in nanotechnology and nanomedicine, have gained significant importance during the past decade. While ...

Synthesis of Protein Bioconjugates via Cysteine-maleimide Chemistry

The chemical linking or bioconjugation of proteins to fluorescent dyes, drugs, polymers and other proteins has a broad range of applications, such as the development of antibody drug conjugates (ADCs) and nanomedicine, fluorescent microscopy and systems chemistry. For many of these applications, specificity of the bioconjugation method used is of prime concern. The Michael addition of maleimides with cysteine(s) on the target proteins is highly selective and proceeds rapidly under mild conditions, making it one of the most popular methods for protein bioconjugation.
We demonstrate here the modification of the only surface-accessible cysteine residue on yeast cytochrome c with a ruthenium(II) bisterpyridine maleimide. The protein bioconjugation is verified by gel electrophoresis and purified by aqueous-based fast protein liquid chromatography in 27% yield of isolated protein material. Structural characterization with MALDI-TOF MS and UV-Vis is then used to verify that the bioconjugation is successful. The protocol shown here is easily applicable to other cysteine - maleimide coupling of proteins to other proteins, dyes, drugs or polymers.

Synthesis of Protein Bioconjugates via Cysteine-maleimide Chemistry

This protocol details the important steps required for the bioconjugation of a cysteine containing protein to a maleimide, including reagent purification, reaction conditions, bioconjugate purification and bioconjugate characterization.

Protein Bioconjugatlar sentezi<em&gt; yoluyla</em&gt; Sistein-maleimid Kimya

The chemical linking or bioconjugation of proteins to fluorescent dyes, drugs, polymers and other proteins has a broad range of applications, such as the ...

Low-energy Cathodoluminescence for (Oxy)Nitride Phosphors

Nitride and oxynitride (Sialon) phosphors are good candidates for the ultraviolet and visible emission applications. High performance, good stability and flexibility of their emission properties can be achieved by controlling their composition and dopants. However, a lot of work is still required to improve their properties and to reduce the production cost. A possible approach is to correlate the luminescence properties of the Sialon particles with their local structural and chemical environment in order to optimize their growth parameters and find novel phosphors. For such a purpose, the low-voltage cathodoluminescence (CL) microscopy is a powerful technique. The use of electron as an excitation source allows detecting most of the luminescence centers, revealing their luminescence distribution spatially and in depth, directly comparing CL results with the other electron-based techniques, and investigating the stability of their luminescence properties under stress. Such advantages for phosphors characterization will be highlighted through examples of investigation on several Sialon phosphors by low-energy CL.

Low-energy Cathodoluminescence for OxyNitride Phosphors

An excellent chemical and luminescence stabilities of (oxy)nitride phosphors present it as an promising alternative to currently used sulfide and oxide phosphors. In this paper, we present the way to investigate its local luminescence properties using low-energy cathodoluminescence (CL).

(Oxy) Nitrit Fosforilazın için düşük enerji Katodolüminesans

Nitride and oxynitride (Sialon) phosphors are good candidates for the ultraviolet and visible emission applications. High performance, good stability and ...

Preparation and Evaluation of 99mTc-labeled Tridentate Chelates for Pre-targeting Using Bioorthogonal Chemistry

Pre-targeting combined with bioorthogonal chemistry is emerging as an effective way to create new radiopharmaceuticals. Of the methods available, the inverse electron demand Diels-Alder (IEDDA) cycloaddition between a radiolabeled tetrazines and trans-cyclooctene (TCO) linked to a biomolecule has proven to be a highly effective bioorthogonal approach to imaging specific biological targets. Despite the fact that technetium-99m remains the most widely used isotope in diagnostic nuclear medicine, there is a scarcity of methods for preparing 99mTc-labeled tetrazines. Herein we report the preparation of a family of tridentate-chelate-tetrazine derivatives and their Tc(I) complexes. These hitherto unknown compounds were radiolabeled with 99mTc using a microwave-assisted method in 31% to 83% radiochemical yield. The products are stable in saline and PBS and react rapidly with TCO derivatives in vitro. Their in vivo pre-targeting abilities were demonstrated using a TCO-bisphosphonate (TCO-BP) derivative that localizes to regions of active bone metabolism or injury. In murine studies, the 99mTc-tetrazines showed high activity concentrations in knees and shoulder joints, which was not observed when experiments were performed in the absence of TCO-BP. The overall uptake in non-target organs and pharmacokinetics varied greatly depending on the nature of the linker and polarity of the chelate.

Preparation and Evaluation of 99mTc-labeled Tridentate Chelates for Pre-targeting Using Bioorthogonal Chemistry

Here, we describe a protocol for radiolabeling and in vivo testing of tridentate 99mTc(I) chelate-tetrazine derivatives for pre-targeting and bioorthogonal chemistry.

Hazırlama ve Değerlendirilmesi<sup&gt; 99m</sup&gt; Bioorthogonal Kimya Kullanarak Öncesi hedeflemek için üç dişli Şelatlar Tc-etiketli

Pre-targeting combined with bioorthogonal chemistry is emerging as an effective way to create new radiopharmaceuticals. Of the methods available, the ...

An Aptamer-based Sensor for Unchelated Gadolinium(III)

A method for determining the presence of unchelated trivalent gadolinium ion (Gd3+) in aqueous solution is demonstrated. Gd3+ is often present in samples of gadolinium-based contrast agents as a result of incomplete reactions between the ligand and the ion, or as a dissociation product. Since the ion is toxic, its detection is of critical importance. Herein, the design and usage of an aptamer-based sensor (Gd-sensor) for Gd3+ are described. The sensor produces a fluorescence change in response to increasing concentrations of the ion, and has a limit of detection in the nanomolar range (~100 nM with a signal-to-noise ratio of 3). The assay may be run in an aqueous buffer at ambient pH (~7 - 7.4) in a 384-well microplate. The sensor is relatively unreactive toward other physiologically relevant metal ions such as sodium, potassium, and calcium ions, although it is not specific for Gd3+ over other trivalent lanthanides such as europium(III) and terbium(III). Nevertheless, the lanthanides are not commonly found in contrast agents or the biological systems, and the sensor may therefore be used to selectively determine unchelated Gd3+ in aqueous conditions.

An Aptamer-based Sensor for Unchelated GadoliniumIII

The use of polydeoxynucleotide (44-mer aptamer) molecules for sensing unchelated gadolinium(III) ion in an aqueous solution is described. The presence of the ion is detected via an increase in the fluorescence emission of the sensor.

Unchelated Gadolinium için bir Aptamer tabanlı Sensörü (III)

A method for determining the presence of unchelated trivalent gadolinium ion (Gd3+) in aqueous solution is demonstrated. Gd3+ is often present in samples ...

An Engineered Split-TET2 Enzyme for Chemical-inducible DNA Hydroxymethylation and Epigenetic Remodeling

DNA methylation is a stable and heritable epigenetic modification in the mammalian genome and is involved in regulating gene expression to control cellular functions. The reversal of DNA methylation, or DNA demethylation, is mediated by the ten-eleven translocation (TET) protein family of dioxygenases. Although it has been widely reported that aberrant DNA methylation and demethylation are associated with developmental defects and cancer, how these epigenetic changes directly contribute to the subsequent alteration in gene expression or disease progression remains unclear, largely owing to the lack of reliable tools to accurately add or remove DNA modifications in the genome at defined temporal and spatial resolution. To overcome this hurdle, we designed a split-TET2 enzyme to enable temporal control of 5-methylcytosine (5mC) oxidation and subsequent remodeling of epigenetic states in mammalian cells by simply adding chemicals. Here, we describe methods for introducing a chemical-inducible epigenome remodeling tool (CiDER), based on an engineered split-TET2 enzyme, into mammalian cells and quantifying the chemical inducible production of 5-hydroxymethylcytosine (5hmC) with immunostaining, flow cytometry or a dot-blot assay. This chemical-inducible epigenome remodeling tool will find broad use in interrogating cellular systems without altering the genetic code, as well as in probing the epigenotype&#8722;phenotype relations in various biological systems.

Detailed protocols for introducing an engineered split-TET2 enzyme (CiDER) into mammalian cells for chemical inducible DNA hydroxymethylation and epigenetic remodeling are presented.

Kimyasal-indüklenebilir DNA Hydroxymethylation ve epigenetik Remodeling için bir mühendislik Split-TET2 enzim

DNA methylation is a stable and heritable epigenetic modification in the mammalian genome and is involved in regulating gene expression to control ...

Co-expression of Multiple Chimeric Fluorescent Fusion Proteins in an Efficient Way in Plants

Information about the spatiotemporal subcellular localization(s) of a protein is critical to understand its physiological functions in cells. Fluorescent proteins and generation of fluorescent fusion proteins have been wildly used as an effective tool to directly visualize the protein localization and dynamics in cells. It is especially useful to compare them with well-known organelle markers after co-expression with the protein of interest. Nevertheless, classical approaches for protein co-expression in plants usually involve multiple independent expression plasmids, and therefore have drawbacks that include low co-expression efficiency, expression-level variation, and high time expenditure in genetic crossing and screening. In this study, we describe a robust and novel method for co-expression of multiple chimeric fluorescent proteins in plants. It overcomes the limitations of the conventional methods by using a single expression vector that is composed of multiple semi-independent expressing cassettes. Each protein expression cassette contains its own functional protein expression elements, and therefore it can be flexibly adjusted to meet diverse expression demand. Also, it is easy and convenient to perform the assembly and manipulation of DNA fragments in the expression plasmid by using an optimized one-step reaction without additional digestion and ligation steps. Furthermore, it is fully compatible with current fluorescent protein derived bio-imaging technologies and applications, such as FRET and BiFC. As a validation of the method, we employed this new system to co-express fluorescently fused vacuolar sorting receptor and secretory carrier membrane proteins. The results show that their perspective subcellular localizations are the same as in previous studies by both transient expression and genetic transformation in plants.

We have developed a novel method for co-expressing multiple chimeric fluorescent fusion proteins in plants to overcome the difficulties of conventional methods. It takes advantage of using a single expression plasmid that contains multiple functionally independent protein expressing cassettes to achieve protein co-expression.

Bitkilerde etkin bir şekilde birden fazla Chimeric floresan Fusion proteinlerin ortak ifade

Information about the spatiotemporal subcellular localization(s) of a protein is critical to understand its physiological functions in cells. Fluorescent ...

Iron Nanowire Fabrication by Nano-Porous Anodized Aluminum and its Characterization

Magnetic nanowires possess unique properties that have attracted the interest of different fields of research, including basic physics, biomedicine, and data storage. We demonstrate a fabrication method for iron (Fe) nanowires&#160;via electrochemical deposition into anodic&#160;alumina oxide (AAO) templates. The templates are fabricated by anodization of aluminum (Al) discs, and the pore length and diameter are controlled by changing the anodizing conditions. Pores with an average diameter of around 120 nm are created using oxalic acid as the electrolyte. Using this method, cylindrical nanowires are synthesized, which are released by dissolving the alumina using a selective chemical etchant.

In this work, we describe a&#160;protocol to fabricate iron nanowires, including the formation of the porous alumina membrane that is used as the template, electrodeposition into templates using electrolyte solution, and the release of the nanowires into the solution.

Nano-Gözenekli Anodize Alüminyum ve Karakterizasyonu ile Demir Nanowire İmalatı

Magnetic nanowires possess unique properties that have attracted the interest of different fields of research, including basic physics, biomedicine, and ...

Organic Structure-directing Agent-free Synthesis for *BEA-type Zeolite Membrane

Membrane separation has drawn attention as a novel-energy saving separation process. Zeolite membranes have great potential for hydrocarbon separation in petroleum and petrochemical fields because of their high thermal, chemical, and mechanical strength. A *BEA-type zeolite is an interesting membrane material because of its large pore size and wide Si/Al range. This manuscript presents a protocol for *BEA membrane preparation by a secondary growth method that does not use an organic structure-directing agent (OSDA). The preparation protocol consists of four steps: pretreatment of support, seed preparation, dip-coating, and membrane crystallization. First, the *BEA seed crystal is prepared by conventional hydrothermal synthesis using OSDA. The synthesized seed crystal is loaded on the outer surface of a 3 cm long tubular &#945;-Al2O3 support by a dip-coating method. The loaded seed layer is prepared with the secondary growth method using a hydrothermal treatment at 393 K for 7 days without using OSDA. A *BEA membrane having very few defects is successfully obtained. The seed preparation and dip-coating steps strongly affect the membrane quality.

A *BEA seed crystal was loaded on a porous &#945;-Al2O3 support by the dip-coating method, and hydrothermally grown without using an organic structure-directing agent. A *BEA-type zeolite membrane having very few defects was successfully prepared by the secondary growth method.

*BEA tipi Zeolit Membranı için Organik Yapı Yönelimli Ajansız Sentez

Membrane separation has drawn attention as a novel-energy saving separation process. Zeolite membranes have great potential for hydrocarbon separation in ...