Bu çalışma Klinik Araştırma Disiplinlerarası Merkezi (IZKF) Münster (TOHUM 12/3, SB) tarafından desteklenmiştir.

Fare Deneyleri 1. Genel Yorumlar <ol><li> Fareler kullanan tüm deneyler ilgili kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı komitesi kurallarına uygun olarak yapılmalıdır. </li><li> Patojen içermeyen koşullar altında farelerin Ol ve yiyecek ve su ad libitum erişmesini sağlayacak. Not: hastalığa yatkınlık, yaş ve cinsiyet ile değişebilir çünkü deney gruplarında yaş ve cinsiyet eşleştirilmiş fareler kullanmak önemlidir. </li><li> MOG 35-55 peptit antijen veya bir nonencephalitogenic peptitsiz şekilde PBS ile değiştirilmiş olduğu seçilmiş deneysel koşullara bağlı olarak, gerçek olmayan bağışıklık kazandırılmış kontrol grubu olarak kabul edilebilir. </li><li> (Ayrıca aşağıya bakınız) öncesinde başlangıç ​​deneyleri metodolojik yönlerini düşünün lütfen. Biz EAE puanlama için bir ya da iki kör gözlemci dahil öneririz. </li></ol> MOG 35-55 Emülsiyon 2. Hazırlanması <ol><li> MO bir 1:1 oranında, 200 ulG 35-55 peptit solüsyonu ve CFA her bir fareye enjekte edilmelidir. Hazırlanması ve enjekte ederken viskoz emülsiyon bazı kaybı vardır. Bu nedenle, gerekli olan miktarın 1,5-2x hazırlar. MOG 35-55 peptit solüsyonu ve CFA hem de ihtiyaç duyulan miktarlar için 2 ile emülsiyon ve bölünmenin toplam hacmi hesaplayın. </li><li> 2 mg / ml &#39;lik bir son konsantrasyona GKD 2 O liyofilize MOG 35-55 seyreltin. Biz genellikle 200 mikrogram MOG fare başına 35-55 peptid kullanın. Bu miktar, stok çözeltisi 100 ul içinde ihtiva edilmektedir. Peptid solüsyonu -20 ° C &#39;de muhafaza edilmelidir </li><li> Bir harç içine kurutulmuş Mycobacterium tuberculosis H37Ra (100 mg) 1 flakon içeriğini yerleştirin. <ol><li> Ince bir toz elde etmek için harç ve havan tokmağı ile zemin. </li><li> 4 ° C &#39;de muhafaza edilebilir, 10 mg / ml CFA stok çözelti elde etmek için eksik Freund yardımcı madde 10 ml ekleme </li><li> Bağışıklandırma öncesi, CFA stok solüsyon zekâ sulandırmak2 mg / ml &#39;lik bir son konsantrasyona h IFA. Parçacık malzemeyi tekrar süspansiyon ve deneysel hazırlıkları sırasında viskoz çözümün bazı hacim kaybını dikkate her kullanımdan önce iyice karıştırınız. </li><li> 1 mg nihai konsantrasyonu / ml elde edilinceye kadar MOG 35-55 peptit çözeltisi ile 1:1 oranında karıştırınız. DİKKAT: Isı ile öldürülmüş Mycobacterium tuberculosis doğuştan gelen bağışıklık tepkisini uyarır. Inhalasyon, yenmesi ve cilt ve gözlerle temastan kaçının. </li></ol></li><li> Buz üzerinde çözümleri önceden soğutmak. <ol><li> Iki adet 2 ml şırıngalar içine 1 2 mg / ml CFA ml ve 1 ml 2 mg / ml MOG 35-55 çözelti hazırlayın. Bağışıklık kazandırılmış hayvanların sayısına göre gerekli şırınga sayısını hesaplayın. DİKKAT: Kesinlikle bu granülomlara yol veya otoimmün reaksiyonlara neden olabilir gibi adjuvan hazırlanması sırasında dikiş kaçının. </li><li> MOG 35-55 çözüm ve CFA için bir 20 G kanül için bir 27 G kanül kullanın. Hava kabarcıklarını önlemek ve en hem şırınga bağlamakhree yollu vana. </li><li> Diğer bir şırıngadan emülsiyonu gönderme ve iyi emülsiyonlaştırma kritik bir adım olduğu için, en az 10 dakika boyunca iyice karıştırın. Emülsiyonlaşmasını desteklemek için üç yollu vana-yakın-kapatın. Çözelti, beyaz bir katı ve fazların Ayırmasız viskoz olmalıdır. </li><li> Emülsiyon aşılamadan önce birkaç gün süreyle saklanabilir. Bu kararlı olup olmadığını incelemek için emülsiyonları hazırlamak sonra en az 30 dakika bekleyin. Bağışıklandırma öncesi, iki şırınga birine çözüm çizin ve 27 G kanül bağlayın. </li></ol></li></ol> Pertussis Toksin 3. Hazırlanması <ol><li> Pertussis toksin farklı miktarlarda tatbikat yoldan (örneğin damar içine ya da periton boşluğu içine) bağlıdır literatürde bulunabilir. Bizim laboratuar intraperitoneal bağışıklama gününde PBS içinde 200 ul pertussis toksin 400 ng kullanır ve iki gün sonra. DİKKAT: Pertussis toksini birçok biyolojik etkileri vardır. Soluma, yutma, deri ve göz temasından kaçının. </li><li> 100 ug / ml stok çözeltisi için 500 ul GKD 2 O pertussis toksin 50 ug sulandırın. 4 ° C&#39;de saklayın </li><li> PBS ile 1:50 seyreltin. 200 ul PBS ile hemen 400 ng içerir. Şırınga gerekli miktarda hazırlayın ve her iğne hub için ~ 100 ul bir ek aşırı hacim düşünün. </li></ol> 4. Hayvan Bağışıklama <ol><li> Gerekli kısa vadeli ötenazi için belirli kriterler için kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı komitesi bakınız. Böyle ketamin / ksilizin enjeksiyon veya halotana gibi diğer protokoller de mümkün iken, bizim laboratuvar izofluran ile kısa uyuşturma kullanır. Anestezi için bekleyin ve anestezi düzeyini değerlendirmek için bir ön ayak ayak tutam kullanın. </li><li> Aşılama hayvanlar için stresi en aza indirmek ve en uygun bağışıklama sağlamak için, deneyimli bir kişi tarafından yapılır emin olun. </li><li> Anti enjekte 100 ulHer arka kanadında iki farklı sitelerin içine gen / CFA emülsiyonu deri altına. Deri altına, bir bombeli kütle form, deney boyunca devam gereken emin olun. </li><li> Intraperitoneal pertussis toksin 200 ul enjekte edilir. </li><li> Bireysel fareler kolayca kuyruk bazında renkli işaretler, örneğin, günlük değerlendirme için tespit edilebilir emin olun. </li><li> Aşılamadan sonra iki gün pertussis toksin ikinci bir doz yönetmek. </li></ol> 5.. EAE İzleme <ol><li> Ağırlık ve klinik skor günlük değerlendirilmelidir. EAE başlangıcı tipik olarak hastalık aktivitesinin bir göstergesi olarak kullanılabilir kilo kaybı ile ilişkilidir. Kurumsal hayvan bakımı bakın ve bireysel fareler deneyler dışına alınması gereken zaman kriterleri önceden için komite kullanın. Kilo kaybı 20 başlangıçtaki vücut ağırlığının% veya zaman ciddi klinik belirtiler (EAE 7 ya da kötü puan) meydana aştığında bu dikkate alınmalıdır. Yeniden başvurunİzin verilen maksimum puanları için ilgili kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı komitesi retrospektif kurallar. </li><li> Fareler EAE klinik belirtileri varsa, o su şişesi hala ulaşılabilir ve gıda kafes katta yer sağlamak için önemlidir. </li><li> Farklı skorlama semptomlar kullanılabilir. Laboratuvarımızda 0-10 ölçek kurulmuştur. </li></ol><table border="1"><tbody><tr><td> Sınıf </td><td> Klinik bulgu </td><td> Yorum </td></tr><tr><td> 0 </td><td> Hiçbir klinik belirtiler </td><td> Fare kuyruk üssünde tutulan eğer normal yürüyüş, kuyruk hareketleri ve yükseltilmiş olabilir, kuyruk yuvarlak bir nesnenin etrafına sarar </td></tr><tr><td> 1 </td><td> Kısmen gevşek kuyruk </td><td> Normal yürüme, kuyruğun ucu droops </td></tr><tr><td> 2 </td><td> Felç kuyruk </td><td> Normal yürüme, kuyruk droops </td></tr><tr><td> 3 </td><td> Arka bacakta parezi, koordinasyonsuzluk hareketi </td&gt; <td> Koordinasyonsuzluk yürüyüş, kuyruk limps, arka ayakları sıkıştığı cevap </td></tr><tr><td> 4 </td><td> Felçli bir arka bacak </td><td> Bir arka bacak sürükleyerek koordinasyonsuzluk yürüyüş, kuyruk limps, bir arka bacak çimdik yanıt vermiyor </td></tr><tr><td> 5 </td><td> Her iki arka ayakları felç </td><td> Sürükleyerek her iki arka uzuvları ile koordinasyonsuzluk yürüyüş, kuyruk limps, hem de arka ayakları çimdik yanıt vermez </td></tr><tr><td> 6 </td><td> Hind bacaklarda felç, ön bacaklarında zayıflık </td><td> Ön ayakları ile koordinasyonsuzluk yürüme sıkıştırdıktan sonra vücut, ön ayakları refleks çekmek için mücadele, kuyruk limps </td></tr><tr><td> 7 </td><td> Hind uzuvlar bir ön ayakları felç, felç </td><td> Fare hareket edemez, bir ön ayakları ile ayak tutam, kuyruk limps yanıt </td></tr><tr><td> 8 </td><td> Hind uzuvlar hem ön ayakları felç, felç </td><td> Fare hem ön ayakları ayak tutam yanıt vermez, hareket edemez, kuyruk limps </td></tr><tr><td> 9 </td&gt; <td> Can çekişen </td><td> Hiçbir hareket, değişmiş nefes </td></tr><tr><td> 10 </td><td> Ölüm </td><td></td></tr></tbody></table> Tablo 1. Klinik skorlama sistemi.

<ol>
	<li>McFarland, H. F., Martin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+sclerosis:+a+complicated+picture+of+autoimmunity.">Multiple sclerosis: a complicated picture of autoimmunity.</a> Nat. Immunol. 8, 913-919 (2007).</li><li>Wiendl, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroinflammation:+the+world+is+not+enough.">Neuroinflammation: the world is not enough.</a> Curr. Opin. Neurol. 25, 302-305 (2012).</li><li>vander Star, B. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+and+in+vivo+models+of+multiple+sclerosis.">In vitro and in vivo models of multiple sclerosis.</a> CNS Neurol. Disord. Drug Targets. 11, 570-588 (2012).</li><li>Pachner, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+models+of+multiple+sclerosis.">Experimental models of multiple sclerosis.</a> Curr. Opin. Neurol. 24, 291-299 (2011).</li><li>Bittner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+TASK1+channel+inhibitor+A293+shows+efficacy+in+a+mouse+model+of+multiple+sclerosis.">The TASK1 channel inhibitor A293 shows efficacy in a mouse model of multiple sclerosis.</a> Exp. Neurol. 238, 149-155 (2012).</li><li>Handel, A. E., Lincoln, M. R., Ramagopalan, S. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+and+men:+experimental+autoimmune+encephalitis+and+multiple+sclerosis.">Of mice and men: experimental autoimmune encephalitis and multiple sclerosis.</a> Eur. J. Clin. Invest. 41, 1254-1258 (2011).</li><li>Krishnamoorthy, G., Wekerle, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EAE:+an+immunologist's+magic+eye.">EAE: an immunologist's magic eye.</a> Eur. J. Immunol. 39, 2031-2035 (2009).</li><li>Stromnes, I. M., Goverman, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Active+induction+of+experimental+allergic+encephalomyelitis.">Active induction of experimental allergic encephalomyelitis.</a> Nat. Protoc. 1, 1810-1819 (2006).</li><li>Fletcher, J. M., Lalor, S. J., Sweeney, C. M., Tubridy, N., Mills, K. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cells+in+multiple+sclerosis+and+experimental+autoimmune+encephalomyelitis.">T cells in multiple sclerosis and experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Clin. Exp. Immunol. 162, 1-11 (2010).</li><li>Mendel, I., Kerlero de Rosbo, N., Ben-Nun, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+myelin+oligodendrocyte+glycoprotein+peptide+induces+typical+chronic+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+H-2b+mice:+fine+specificity+and+T+cell+receptor+V+beta+expression+of+encephalitogenic+T+cells.">A myelin oligodendrocyte glycoprotein peptide induces typical chronic experimental autoimmune encephalomyelitis in H-2b mice: fine specificity and T cell receptor V beta expression of encephalitogenic T cells.</a> Eur. J. Immunol. 25, 1951-1959 (1995).</li><li>Hofstetter, H. H., Shive, C. L., Forsthuber, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pertussis+toxin+modulates+the+immune+response+to+neuroantigens+injected+in+incomplete+Freund's+adjuvant:+induction+of+Th1+cells+and+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+the+presence+of+high+frequencies+of+Th2+cells.">Pertussis toxin modulates the immune response to neuroantigens injected in incomplete Freund's adjuvant: induction of Th1 cells and experimental autoimmune encephalomyelitis in the presence of high frequencies of Th2 cells.</a> J. Immunol. 169, 117-125 (2002).</li></ol>

Yazarlar herhangi bir mali çıkarlarını beyan.

Etkin bağışıklık kazandırma protokolleri ile farklı EAE modelleri bir çokluk, son on yıl içinde tarif edilmiştir. Sıçan modelleri yaygın olarak yakın zamana kadar kullanılmış olsa da, fareler şimdi EAE araştırma için en popüler model organizma vardır. Bu gelişme, mevcut transgenik farelerin, geniş ve artan repertuarına diğerleri arasında yer almaktadır. MOG 35-55 peptidi ile C57BL / 6 farelerinin immünizasyonu, en yaygın olarak dağıtılan EAE modelleri biridir ve güvenilir, yinelenebilir ve iyi kullanımlı bir hayvan modeli olarak kabul edilebilir. Diğer EAE modelleri daha spesifik deneysel sorular için kullanılır ise çok nöroimünolojik laboratuvarlarda, MOG 35-55 uyarılan EAE seçim modeli olarak kurulmuştur. Dikkate kritik bir nokta EAE deneyleri metodolojik doğru yapılmaktadır sağlamak için deneysel ayarları planlıyor. Iç geçerliği için, hastalık belirtileri kör puanlama şiddetle tavsiye edilir. Experimental grupları olmalıdır yaş, ağırlık-ve cinsiyet eşleştirilmiş ve fareler, tedavi gruplarına rastgele tahsis edilmelidir. Deneyler her zaman hayvan refahı düzenlemelere uygun olarak yapılmalıdır. EAE çalışmalar genellikle yeterince güçlü ve dikkate istatistiksel tip II hataları yapmayız. Bu nedenle, önceki deney için, örnek büyüklüğü hesaplamalar yapılmalıdır. Gerekli grup boyutları beklenen etkisi boyutuna bağlıdır. İstatistiksel analiz için bir uzman danışma EAE deneyler başlamadan önce düşünülebilir. Protokolün bazı sınırlamaları göz önünde tutulması gerekir. En önemlisi, a EAE verilerin yorumlanması immünolojik reaksiyonu hem de ek bir etkiye sahip katkı maddesi ve pertussis toksininin kullanımı ile bağışıklık modu tarafından ele almaktadır. Ayrıca MOG 35-55 EAE modeli esas olarak bağışıklık tepkisi tahrik edilen bir CD4 + T hücre gösterir dikkate alınmalıdır. CD8 + T hücreleri ve B hücreleri oynamakBu hücre tipleri ele alırken, daha az önemli rolü ve, alternatif protokoller düşünülmelidir. Beklenen hastalık seyri, akut monofazik ve kendi kendini sınırlar. Seçenek olarak ise, bir nüks-remisyon seyri de, alternatif EAE modellerinde elde edilebilir. Protokolün bir diğer önemli kısıtlılığı MS patofizyolojinin immünolojik bileşeni karşı belirli bir önyargı olduğunu. Son yıllarda, MS güçlü bir nörodejeneratif bileşeni olduğu giderek daha açık hale gelmiştir. Nörolojik açıklarının ilerici birikimi oligodentrositler ve nöronlar sonuçları ölümü. Bu EAE modeli tam otoimmun inflamasyonu nörodejeneratif mekanizmaları ile ilgili deney soruları için uygun olmayabilir dikkate alınmalıdır. CNS patoloji odaklanarak alternatif hayvan modeller düşünülebilir - çevresel bağışıklık sisteminin tutulumu olmaksızın toksik demiyelinizasyonu ödün cuprizone modeli örneğin. Açıklanan protokol, temel nöroimmünolojik deneysel model olarak ve diğer uygulamalar için modifiye edilebilir. Yukarıda tarif edilen deney prosedürü, kolayca değişen farenin suşlar diğer EAE protokoller uygulanabilir ya da türü ve miktarı, protein (örn., terapötik değerlendirilmesi için özellikle uygun olan bir nüks-remisyon EAE, hastalığın seyri için PLP 139-151 peptidi ve SJL mice kullanımı nükslerin üzerindeki etkileri). Açıklanan protokol, adoptif transfer deneyleri (pasif EAE) için kullanılabilir. Bu modelde, C57BL / 6 fareleri MOG 35-55 peptit ve yukarıda tarif edildiği gibi CFA ile bağışık hale getirilir. Bunun aksine, pertussis toksin gerekli değildir. 7-15 gün, dalak ve lenf düğümleri izole edilir ve bağışıklık hücreleri C57BL/6se farelerin yeni bir grup içine aktarmak için önce MOG 35-55 peptidi ve çeşitli sitokinler ile in vitro yeniden uyarılmıştır sonra. Bu alıcı fareler birkaç gün önce CLAS üzerine daha EAE geliştirmekSical aşılama. In vitro koşullarda, belirli immünolojik soru için (T H 1, H ya da T 17 hücrelerine, örneğin polarizasyon) değiştirilebilir. Bazen, düşük hastalık insidansı veya zayıf semptomlar deneysel bir meydan okuma olabilir. Sorun giderme için bazı öneriler şunlardır: - Hastalık şiddeti peptid / fare farklı miktarları ile çeşitlendirilebilir. - Optimal CFA konsantrasyon 1-5 mg / ml arasında değişebilir. Deneyler kurarken CFA titrasyonu düşünün. Gibi birçok düzenlemeler 2 mg / ml aşan CFA konsantrasyonlarını korusun izin CFA konsantrasyonları için ilgili kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı komitesi ilgili uyarılara dikkat ediniz. - Farklı yöntemler emülsiyonun hazırlanması için tarif edilmektedir. Zayıf emülsiyon possib olarak kabul edilir, örneğin 1 saat veya sonikasyon için girdap gibi alternatif yöntemler düşünülebilirle hata kaynağı. - Yaş, cinsiyet, yıl ve hayvan tesis içindeki çevre koşulları sezon EAE duyarlılığını etkileyen önemli faktörlerdir. Bu koşullar, bağımsız deneyler arasında karşılaştırılabilir olması sağlanmalıdır. Yukarıda tarif edildiği gibi, söz konusu protokol adoptif EAE deneyleri için başlangıç ​​noktası olarak kullanılabilir. Bu model, özellikle (vahşi tip alıcı farelere ensefalitojenik knockout hücre aktarımı ile) genetik bir fenotip periferik ve merkezi sinir sistemi etkileri ayırmak için ve aktarılan hücrelerin fenotipi iyice karakterize edilebilir gibi belirli immünolojik soru için uygundur. Son yıllarda EAE araştırma son gelişme T hücre reseptör transgenik fareler vardır. Bu fareler dış etki adjuvan aşılama sorunu engellemeyi olmadan kendiliğinden EAE belirtiler gelişir. Ancak, bu model breedi için hayvanların büyük miktarlarda gerektirirYeterli grup boyutları sağlamak ng. Knockout farelerde değerlendirilmesi önce a EAE aksine EAE deneyleri için melezleme gerektirir. Her bir fare, farklı bir günde hastalık semptomlarını geliştikçe, yeni maddelerin değerlendirilmesi oldukça karmaşık olabilir. Bu nedenle, nöroimünolojik için klasik EAE değeri tartışmasız kalır.

Multipl skleroz (MS), merkezi sinir sisteminin demiyelinizan kronik inflamatuar hastalık olduğu heterojen ve biriken klinik belirtilerde oligodendrositler ve nöronlar, sonuç yok. MS merkezi sinir sistemi (MSS) bir prototipi otoimmün bozukluk olarak kabul edilir ve hayvan modelleri karmaşık patogenezi aydınlatmak için geliştirilmiştir. Ayrıca, mevcut tedaviler sadece kısmen etkilidir ve nörodejeneratif bileşeni muhtemelen gelecekteki terapötik kullanımlar için önemli bir sorun ise esas olarak hastalığın enflamatuar aşamasını hedef 1,2 yaklaşır. Hastalığın kesin hastalık sebepleri henüz açık iken, CNS&#39;de aksonların miyelin kılıfının üzerinde bulunan epitoplara karşı bir otoimmün tepki, hastalığın başlangıcını kışkırtmak varsayılır. Bağışıklık sistemi, genetik yatkınlığın ve çevresel faktörler (örn. enfeksiyon, D vitamini) düzensizliği inanılmaktadırMS patofizyolojik mekanizmalarının etkisi merkezi yönleri. Hayvan modellerinde üç farklı tipi şu anda MS patolojik modellerinin araştırılması için kurulan: Theiler kemirgen encephalomyelitis virüsü (TMEV) gibi viral modelleri, cuprizone gibi toksik ajanlar tarafından uyarılan modelleri ve deneysel otoimmün ensefalomyelit (EAE) 3 nihayet farklı varyantları, 4. Hepsi MS özelliklerini taklit rağmen, adaptif bağışıklık sisteminin katılımı gibi temel patolojik özellikleri son derece farklıdır. Bu nöroenflamatuar yolları araştırmak için özellikle yararlıdır ve sık sık yeni tedavi stratejileri 5,6 etkinliği için bir &quot;kanıtı ilkesi&quot; bir model olarak hizmet olarak EAE en yaygın bir hayvan modelidir. EAE çok farklı hayvan (örneğin, fare, sıçan, miniswine, guinea domuz, tavuk veya primatlar) olarak indüklenebilir. Ancak, fareler, en azından kısmen nedeni, en yaygın kullanımı türler haline gelmiştirsofistike transgenik veya nakavt farelerin 7 repertuar genişleyen. EAE patofizyolojisi Beyin spesifik antijenlere karşı bağışıklık sisteminin reaksiyona dayanır. Bu reaksiyon karşılaştırılabilir nörolojik ve patolojik özellikleri ile sonuçlanır, bu antijeni taşıyan yapıların iltihabı ve yok uyarmaktadır MS hastalarında gözlenen. Üç farklı yaklaşımlar ayırt edilebilir: Aktif kaynaklı EAE (a EAE, aktif bağışıklık kazandırma), otoimmün çalışma sağlar ve daha yakın zamanda kendiliğinden EAE fare modelleri (SEAE) pasif olarak transfer EAE, (bir bağışıklık kazandırılmış hayvandan ensefalitojenik hücre transferi pEAE) Eksojen manipülasyon olmayan mekanizmaları. En kolay indüklenebilir modeli hızlı ve sağlam sonuçlar elde farelerde a EAE olduğunu. Bu model alanda 8 birçok araştırmacı tarafından nöroimünolojik hayvan modelleri &quot;altın standart&quot; olarak kabul edilir. A EAE indüksiyonu için, hayvanınSeçilen antijen içeren bir emülsiyon, bir deri altından enjeksiyon ile bağışıklı kılınmış ve aşılama gün ve iki gün sonra pertussis toksininin intraperitoneal bir enjeksiyonu ile birlikte Freund&#39;un yardımcı maddeler (CFA) tamamlanır. Sonuç olarak, miyelin spesifik T lenfositlerin periferde aktif ve kan-beyin bariyeri boyunca merkezi sinir sistemi içine nüfuz edilir. CNS girmesinden sonra, T hücreleri, monositler veya makrofajlar ve sonunda demiyelinasyon ve aksonal hücre ölümü 9&#39;daki gibi diğer inflamatuar hücrelerin daha sonraki kaskadlar katılımı ile sonuçlanan, yerel ve infiltre antijen sunan hücreler tarafından aktive edilir. Immünizasyon protokolü ve fare soyunun kombinasyonuna bağlı olarak (örneğin, C57BL / 6, SJL / J, Biozzi) ve antijen (örneğin miyelin oligodendrosit glikoprotein (MOG), miyelin bazik protein (MBP), miyelin proteolipid protein (PLP)) hastalık Tabii akut, kronik, ilerleyici ya da nükseden remitting hastalık ders alabilir. <p class= &quot;Jove_content&quot;&gt; C57BL / 6 fareleri transgenik farenin yapımı için en yaygın olarak kullanılan soy hale gelmiştir ve boşaltma ya da transjenik farelerin büyüyen bir sayıda kullanılabilir. Biz burada MOG yaklaşık 3-5 gün hastalık başlangıcı yavaş ve kısmi belirti kurtarma sonra 9-14 gün, hastalık sonrasında en fazla ilk belirtiler ile monofazik EAE sonuçları 35-55 peptid 10 ile C57BL / 6 farelerin bağışıklama için bir protokol açıklar önümüzdeki 10-20 gün içinde. Tek başına MOG 35-55 peptidin immünojenik potansiyel hastalık oluşturmak için yeterli olmadığı için, bu gibi CFA gibi yardımcı maddeler gereklidir. Bu CFA bileşenleri, bu moleküllerin fagositoz ve sitokinlerin salgılanmasını uyaran mononükleer fagositler aktive olduğu varsayılmaktadır. Bu antijenlerin mevcudiyeti ve lenfatik sistem, bu daha verimli bir taşıma uzaması ile sonuçlanır. EAE indüksiyon diğerleri arasında modüle etmek üzere önerilmiştir pertussis toksin (PT) uygulanması kolaylaştırılmıştırKan-beyin bariyeri ve immünolojik yanıt kendisi 11. Hastalık indüksiyonundan sonra, özel bir dikkat hastalık belirtileri için farelerin her gün değerlendirme için alınmalıdır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="707">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Female C57BL/6 mice, age 10-12 weeks, ~20 g weight</td>
			<td style="width:205px;">e.g. Jackson Laboratory, Charles River</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">MOG35-55 (MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK)</td>
			<td style="width:205px;">e.g. Pepceuticals Ltd</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Incomplete Freund&#8217;s adjuvant (IFA)</td>
			<td style="width:205px;">e.g. Sigma-Aldrich Co.</td>
			<td style="width:119px;">F5506</td>
			<td>Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Syringes, 1 ml with 26G3/8 needle&#160;</td>
			<td style="width:205px;">e.g. Becton Dickinson &#38; Co.</td>
			<td style="width:119px;">309625</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Syringes, 2 ml</td>
			<td style="width:205px;">e.g. B. Braun</td>
			<td style="width:119px;">7389</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Needles, 25G5/8 and 30G1/2&#160;</td>
			<td style="width:205px;">e.g. Becton Dickinson &#38; Co.,</td>
			<td style="width:119px;">305122, 305106</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Three way halve</td>
			<td style="width:205px;">e.g. B. Braun</td>
			<td style="width:119px;">16494 C</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Pertussis toxin, lyophilized in buffer</td>
			<td style="width:205px;">Enzo Life Sciences Inc.</td>
			<td style="width:119px;">BML-G100</td>
			<td>Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">M. tuberculosis H37 RA</td>
			<td style="width:205px;">BD Difco&#160;</td>
			<td style="width:119px;">231141</td>
			<td>Store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

myelin oligodendrocyte glycoprotein (mog35-55) induced experimental autoimmune encephalomyelitis (eae) in c57bl/6 mice

Multipl skleroz, güçlü bir nörodejeneratif bileşeni olan merkezi sinir sisteminin kronik nöroenflamatuar demiyelinizan bir hastalıktır. Hastalığın kesin hastalık sebepleri henüz açık olsa da, oto-reaktif T lenfositleri ile patofizyolojisinde merkezi bir rol oynadığı düşünülmektedir. MS tedavisi şimdiye kadar sadece kısmen etkili olduğunu ve araştırma çabaları hastalığın patofizyolojisi üzerine bilgimizi genişletmek ve yeni tedavi stratejileri geliştirmeye devam ediyoruz. Deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE), MS bir çok klinik ve patofizyolojik özelliklerini paylaşmak için en yaygın hayvan modelidir. Insan MS&#39;in farklı klinik immünolojik ve histolojik yönlerini yansıtan EAE modelleri geniş bir çeşitlilik vardır. Farelerde aktif kaynaklı EAE sağlam ve tekrarlanabilir sonuçlar ile kolay uyarılabilir modelidir. Özellikle otoimmün neuroi meydan transgenik fareler kullanılarak ilaçların ya da belirli genlerin etkilerini araştıran için uygundurnflammation. Bu nedenle, farenin merkezi sinir sistemi miyelin homojenatı veya proteinlerin peptidlerle immünize edilir. Nedeniyle, bu peptitlerin az imünojenik potansiyel, güçlü yardımcı maddeler kullanılmaktadır. EAE duyarlılık ve fenotip seçilen antijen ve kemirgen gerginlik bağlıdır. C57BL / 6 fareleri, transjenik fare yapımında yaygın olarak kullanılan gerilme ve miyelin oligodendrosit glikoprotein (MOG) diğerleri arasında yanıt verir. İmmünojenik epitop MOG 35-55 iki gün sonra aşılama gününde uygulanır ve tam Freund katkı maddesi (CFA) önceden bağışıklığın ve pertussis toksinine içinde süspanse edilmektedir. Fareler aşılamadan sonra 9-14 gün içinde gevşek felç artan bir &quot;klasik&quot; kendini sınırlayan monofazik EAE gelişir. Fareler 25-50 gün boyunca bir klinik skorlama sistemi kullanılarak günlük olarak değerlendirilmekte. Bakım EAE ile hayvan alma yanı sıra, bu modelin potansiyel uygulamalar ve sınırlamalar için özel hususlar ele alınmıştır.

Immünizasyondan sonra, fareler ağırlığı ve klinik semptomlar değişiklikler için günlük olarak değerlendirilmelidir. Hastalık başlangıcı tipik EAE belirtiler görülebilir 1-2 gün önce başlayabilir ağırlığının bir azalma ile ilişkilidir. EAE Klinik belirtiler genellikle günde 9 ve 14 sonrası bağışıklama arasında başlar. Ağırlıklı olarak C57BL / 6 farelerinde MOG-EAE de omurilik lokalize olduğundan, bunlar genellikle rostral desenine bir kaudal ağırlıklı olarak motorik semptomlar geliştirir. EAE semptomları olan bir bağışıklık kazandırılmış fare örnek bir görüntü (6 puan) Şekil 1A&#39;da gösterilmiştir. Bazı atipik EAE belirtiler aynı zamanda eksenel-döner şekilde haddeleme olarak ortaya çıkabilecek, klasik EAE içinde değil yansıtılır kambur bir görünüm veya aşırı duyarlılık Tablo 1&#39;de tasvir puanına. Motor belirtiler bu modelde temel özelliği olduğundan, bu skor bize veriyor hastalık şiddeti iyi bir göstergesidir. Farklı izleme sistemleri (örneğin 0 puan -Farklı açıkları değerlendirmek 5 veya 0-6) ve daha karmaşık kompozit puanları da yayınlanmıştır. Şiddetli semptomlar ilgili kurumsal hayvan bakımı ve kullanımı komitesi göre deney dışına alınmalıdır olan farelerde unutmayınız. Fareler önümüzdeki 10-20 gün içinde belirtiler genellikle kısmi iyileşme göstermektedir. Temsili bir seyri Şekil 1B tasvir edilmiştir. Sonuç parametreleri değerlendirmek için ilgi çekici olan EAE sırasında farklı zaman noktaları vardır. Genellikle bulunabilir Bazı tipik tahlilleri çok kısaca açıklanmıştır. Hastalık en azından, farenin, in vitro olarak MOG 35-55 peptidi (MOG geri çekme deneyi) ile izole edilmiş immün hücrelerin yeniden güdülenmesinden sonra sitokin üretimi ve proliferasyonu için değerlendirilebilir. Bağışıklık hücreleri, EAE semptomları olan beyin ve omurilik farelerden izole edilmesi ve daha fazla işleme, akış sitometrisi ile, örneğin olabilir. Spinal kord bölümleri histolojik analiz hastalığı m yapılabilirlezyon yükü ve demiyelinizasyon için free donanımı, daha sonraki bir zamanda nörobozulmalar ve nöronal hücre ölümü için işaretleri işaret ederken ilgi çekici olabilir. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/51275/51275fig1highres.jpg" src="/files/ftp_upload/51275/51275fig1.jpg" width="600px" /> Şekil 1. Örnek EAE sonuçlanır. 30 gün boyunca aşılamadan sonra EAE belirtileri olan bir bağışık C57BL / 6 fare A. Temsilcisi resim (EAE 6 puan). B. Örnek seyri. Veriler ortalama ve ortalamanın standart hatası olarak gösterilmiştir (n = 5). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/51275/51275fig1highres.jpg" target="_blank">resmi büyütmek için buraya tıklayın</a> .

Watch this Scientific Journal Video about Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE in C57BL/6 Mice at JoVE.com

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE in C57BL/6 Mice

Deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE), çoklu skleroz kurulmuş bir hayvan modelidir. C57BL / 6 fareleri, merkezi sinir sistemi otoreaktif bağışıklık hücreleri tarafından neden olduğu artan gevşek felce neden, miyelin oligodendrosit glikoprotein (MOG) peptit 35-55 (MOG 35-55) ile immünize edilir. Hastalığın başlama ve izleme için protokoller tartışılacaktır.

Miyelin Oligodendrosit Glikoprotein (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) C57BL / 6 Farelerde Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit (EAE) Bağlı

Multiple sclerosis is a chronic neuroinflammatory demyelinating disorder of the central nervous system with a strong neurodegenerative component. While ...

myelin-oligodendrocyte-glycoprotein-mog35-55-induced-experimental

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG35-55) Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) in C57BL/6 Mice

80.9K Görüntüleme.  University of Münster.  Deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE), çoklu skleroz kurulmuş bir hayvan modelidir. C57BL / 6 fareleri, merkezi sinir sistemi otoreaktif bağışıklık hücreleri tarafından neden olduğu artan gevşek felce neden, miyelin oligodendrosit glikoprotein (MOG) peptit 35-55 (MOG 35-55) ile immünize edilir. Hastalığın başlama ve izleme için protokoller tartışılacaktır. 

Video: Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE in C57BL/6 Mice

Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse models allow us to study how diseases unfold, often providing a good replica of the same processes occurring in humans. For some autoimmune diseases, like type 1A diabetes, there are models (the NOD mouse) that spontaneously develop a disease similar to the human counterpart. For many other autoimmune diseases, however, the model needs to be induced experimentally. A common approach in this regard is to inject the mouse with a dominant antigen derived from the organ being studied. For example, investigators interested in autoimmune thyroiditis inject mice with thyroglobulin2, and those interested in myasthenia gravis inject them with the acetylcholine receptor3. If the autoantigen for a particular autoimmune disease is not known, investigators inject a crude protein extract from the organ targeted by the autoimmune reaction. For autoimmune hypophysitis, the pathogenic autoantigen(s) remain to be identified4, and thus a crude pituitary protein preparation is used. In this video article we demonstrate how to induce experimental autoimmune hypophysitis in SJL mice.

This video shows how to induce autoimmune hypophysitis in SJL mice and how to assess its severity by histopathology.

SJL Farelerde Deneysel Otoimmün hipofizitis İndüksiyon

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS) and has been used as an animal model for study of the human demyelinating disease, multiple sclerosis (MS). EAE is characterized by pathologic infiltration of mononuclear cells into the CNS and by clinical manifestation of paralytic disease. Similar to MS, EAE is also under genetic control in that certain mouse strains are susceptible to disease induction while others are resistant. Typically, C57BL/6 (H-2b) mice immunized with myelin basic protein (MBP) fail to develop paralytic signs. This unresponsiveness is certainly not due to defects in antigen processing or antigen presentation of MBP, as an experimental protocol described here had been used to induce severe EAE in C57BL/6 mice as well as other reputed resistant mouse strains. In addition, encephalitogenic T cell clones from C57BL/6 and Balb/c mice reactive to MBP had been successfully isolated and propagated.
The experimental protocol involves using a cellular adoptive transfer system in which MBP-primed (200 &mu;g/mouse) C57BL/6 donor lymph node cells are isolated and cultured for five days with the antigen to expand the pool of MBP-specific T cells. At the end of the culture period, 50 million viable cells are transferred into naive syngeneic recipients through the tail vein. Recipient mice so treated normally do not develop EAE, thus reaffirming their resistant status, and they can remain normal indefinitely. Ten days post cell transfer, recipient mice are challenged with complete Freund adjuvant (CFA)-emulsified MBP in four sites in the flanks. Severe EAE starts to develop in these mice ten to fourteen days after challenge. Results showed that the induction of disease was antigenic specific as challenge with irrelevant antigens did not induce clinical signs of disease. Significantly, a titration of the antigen dose used to challenge the recipient mice showed that it could be as low as 5 &mu;g/mouse. In addition, a kinetic study of the timing of antigenic challenge showed that challenge to induce disease was effective as early as 5 days post antigenic challenge and as long as over 445 days post antigenic challenge. These data strongly point toward the involvement of a "long-lived" T cell population in maintaining unresponsiveness. The involvement of regulatory T cells (Tregs) in this system is not defined.

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Certain mouse strains are able to resist induction of experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) with myelin basic protein. Described here is a simple immunization protocol that reverses the unresponsiveness and induces paralytic disease in several typical EAE resistant mouse stains.

Kabul edilmiş Transfer ve antijenik Challenge Deneysel Otoimmün Encephalomyelitis (EAE) Dayanıklı Fare Suşlarında yanıtsızlık Aşmak

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an inflammatory disease of the central nervous system (CNS) and has been used as an animal model for ...

Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice and Evaluation of the Disease-dependent Distribution of Immune Cells in Various Tissues

Multiple sclerosis is presumed to be an inflammatory autoimmune disease, which is characterized by lesion formation in the central nervous system (CNS) resulting in cognitive and motor impairment. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a useful animal model of MS, because it is also characterized by lesion formation in the CNS, motor impairment and is also driven by autoimmune and inflammatory reactions. One of the EAE models is induced with a peptide derived from the myelin oligodendrocyte protein (MOG)35-55 in mice. The EAE mice develop a progressive disease course. This course is divided into three phases: the preclinical phase (day 0 - 9), the disease onset (day 10 - 11) and the acute phase (day 12 - 14). MS and EAE are induced by autoreactive T cells that infiltrate the CNS. These T cells secrete chemokines and cytokines which lead to the recruitment of further immune cells. Therefore, the immune cell distribution in the spinal cord during the three disease phases was investigated. To highlight the time point of the disease at which the activation/proliferation/accumulation of T cells, B cells and monocytes starts, the immune cell distribution in lymph nodes, spleen and blood was also assessed. Furthermore, the levels of several cytokines (IL-1&#946;, IL-6, IL-23, TNF&#945;, IFN&#947;) in the three disease phases were determined, to gain insight into the inflammatory processes of the disease. In conclusion, the data provide an overview of the functional profile of immune cells during EAE pathology.

This manuscript describes the methods for induction and scoring of the experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) model, together with the assessment of immune cell distribution and mRNA cytokine levels in lymph nodes, spleen, blood and spinal cord using flow cytometry and quantitative PCR, respectively, at various disease phases.

Çeşitli Dokularda Bağışıklık Hücreleri Hastalık bağımlı Dağıtım Fareler ve Değerlendirilmesi Deneysel Otoimmün Ensefalomyelitli indüksiyon

Multiple sclerosis is presumed to be an inflammatory autoimmune disease, which is characterized by lesion formation in the central nervous system (CNS) ...

Simple and Efficient Production and Purification of Mouse Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein for Experimental Autoimmune Encephalomyelitis Studies

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS), thought to occur as a result of autoimmune responses targeting myelin. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is the most common animal model of CNS autoimmune disease, and is typically induced via immunization with short peptides representing immunodominant CD4+ T cell epitopes of myelin proteins. However, B cells recognize unprocessed protein directly, and immunization with short peptide does not activate B cells that recognize the native protein. As recent clinical trials of B cell-depleting therapies in MS have suggested a role for B cells in driving disease in humans, there is an urgent need for animal models that incorporate B cell-recognition of autoantigen. To this end, we have generated a new fusion protein containing the extracellular domain of the mouse version of myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) as well as N-terminal fusions of a His-tag for purification purposes and the thioredoxin protein to improve solubility (MOGtag). A tobacco etch virus (TEV) protease cleavage site was incorporated to allow the removal of all tag sequences, leaving only the pure MOG1-125 extracellular domain. Here, we describe a simple protocol using only standard laboratory equipment to produce large quantities of pure MOGtag or MOG1-125. This protocol consistently generates over 200 mg of MOGtag protein. Immunization with either MOGtag or MOG1-125 generates an autoimmune response that includes pathogenic B cells that recognize the native mouse MOG.

We describe a simple protocol using only basic lab equipment to generate and purify large quantities of a fusion protein that contains mouse Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein. This protein can be used to induce experimental autoimmune encephalomyelitis driven by both T and B cells.

Deneysel Otoimmün ENSEFALOMYELİT Çalışmaları Basit ve Etkin Üretim ve Fare Miyelin oligodendrosit Glikoprotein saflaştırılması

Multiple sclerosis (MS) is a chronic inflammatory disease of the central nervous system (CNS), thought to occur as a result of autoimmune responses ...

Visualizing Impairment of the Endothelial and Glial Barriers of the Neurovascular Unit during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis In Vivo

The neurovascular unit (NVU) is composed of microvascular endothelial cells forming the blood-brain barrier (BBB), an endothelial basement membrane with embedded pericytes, and the glia limitans composed by the parenchymal basement membrane and astrocytic end-feed embracing the abluminal aspect of central nervous system (CNS) microvessels. In addition to maintaining CNS homeostasis the NVU controls immune cell trafficking into the CNS. During immunosurveillance of the CNS low numbers of activated lymphocytes can cross the endothelial barrier without causing BBB dysfunction or clinical disease. In contrast, during neuroinflammation such as in multiple sclerosis or its animal model experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) a large number of immune cells can cross the BBB and subsequently the glia limitans eventually reaching the CNS parenchyma leading to clinical disease. 
Immune cell migration into the CNS parenchyma is thus a two-step process that involves a sequential migration across the endothelial and glial barrier of the NVU employing distinct molecular mechanisms. If following their passage across the endothelial barrier, T cells encounter their cognate antigen on perivascular antigen-presenting cells their local reactivation will initiate subsequent mechanisms leading to the focal activation of gelatinases, which will enable the T cells to cross the glial barrier and enter the CNS parenchyma. Thus, assessing both, BBB permeability and MMP activity in spatial correlation to immune cell accumulation in the CNS during EAE allows to specify loss of integrity of the endothelial and glial barriers of the NVU. 
We here show how to induce EAE in C57BL/6 mice by active immunization and how to subsequently analyze BBB permeability in vivo using a combination of exogenous fluorescent tracers. We further show, how to visualize and localize gelatinase activity in EAE brains by in situ zymogaphy coupled to immunofluorescent stainings of BBB basement membranes and CD45+ invading immune cells.

Here, we present protocols to investigate impairment of the neurovascular unit during experimental autoimmune encephalomyelitis in vivo. We specifically address how to determine blood-brain barrier permeability and gelatinase activity involved in leukocyte migration across the glia limitans.&#160;

Nörovasküler biriminin endotel ve gliyal engelleri bozulma Vivo deneysel otoimmun ensefalomiyelit sırasında görüntülenmesi

The neurovascular unit (NVU) is composed of microvascular endothelial cells forming the blood-brain barrier (BBB), an endothelial basement membrane with ...

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase (G6PI)-Induced RA Mice

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T (iNKT) cells. Patients with active RA present fewer iNKT cells, defective cell function, and excessive polarization of Th1. In this study, an RA animal model was established using a mixture of hGPI325-339 and hGPI469-483 peptides. The iNKT cells were obtained by in vivo induction and in vitro purification, followed by infusion into RA mice for adoptive immunotherapy. The in vivo imaging system (IVIS) tracking revealed that iNKT cells were mainly distributed in the spleen and liver. On day 12 after cell therapy, the disease progression slowed down significantly, the clinical symptoms were alleviated, the abundance of iNKT cells in the thymus increased, the proportion of iNKT1 in the thymus decreased, and the levels of TNF-&#945;, IFN-&#947;, and IL-6 in the serum decreased. Adoptive immunotherapy of iNKT cells restored the balance of immune cells and corrected the excessive inflammation of the body.

Adoptive Immunotherapy of iNKT Cells in Glucose-6-Phosphate Isomerase G6PI-Induced RA Mice

This protocol uses G6PI mixed peptides to construct rheumatoid arthritis models that are closer to that of human rheumatoid arthritis in CD4+ T cells and cytokines. High purity invariant natural killer T cells (mainly iNKT2) with specific phenotypes and functions were obtained by in vivo induction and in vitro purification for adoptive immunotherapy.

Glukoz-6-Fosfat İzomazlarında (G6PI)-Indüklenen RA Farelerde iNKT Hücrelerinin Benimseyici İmmünoterapisi

Rheumatoid arthritis (RA) is a complex chronic inflammatory autoimmune disease. The pathogenesis of the disease is related to invariant natural killer T ...

Flow Cytometric Analysis of Lymphocyte Infiltration in Central Nervous System during Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune disease of the central nervous system (CNS) caused by the combination of environmental factors and susceptible genetic background. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a typical disease model of MS widely used for investigating the pathogenesis in which T lymphocytes specific for myelin antigens initiate an inflammatory reaction in CNS. It is very important to assess how lymphocytes in the CNS regulate the development of disease. However, the approach for measuring the quantity and quality of infiltrated lymphocytes in the CNS is very limited due to the difficulties in isolating and detecting infiltrated lymphocytes from the brain. This manuscript presents a protocol for that is useful for the isolation, identification, and characterization of infiltrated lymphocytes from the CNS and will be helpful for our understanding of how lymphocytes are involved in the development of the CNS autoimmune disease.

This manuscript presents a protocol to induce active experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) in mice. A method for the isolation and characterization of the infiltrated lymphocytes in the central nervous system (CNS) is also presented to show how lymphocytes are involved in the development of CNS autoimmune disease.

Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit Sırasında Merkezi Sinir Sisteminde Lenfosit Infiltrasyonunun Akış Sitometrik Analizi

Multiple sclerosis (MS) is an autoimmune disease of the central nervous system (CNS) caused by the combination of environmental factors and susceptible ...

Otoimmün Ensefalomiyelitte Mycobacterium paratuberculosis ile İmmünojenisite Artışı

Adjuvant Activity of Mycobacterium paratuberculosis in Enhancing the Immunogenicity of Autoantigens During Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) induced by myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) requires immunization by a MOG peptide emulsified in complete Freund&#39;s adjuvant (CFA) containing inactivated Mycobacterium tuberculosis. The antigenic components of the mycobacterium activate dendritic cells to stimulate T-cells to produce cytokines that promote the Th1 response via toll-like receptors. Therefore, the amount and species of mycobacteria present during the antigenic challenge are directly related to the development of EAE. This methods paper presents an alternative protocol to induce EAE in C57BL/6 mice using a modified incomplete Freund&#39;s adjuvant containing the heat-killed Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis strain K-10.
M. paratuberculosis, a member of the Mycobacterium avium complex, is the causative agent of Johne&#39;s disease in ruminants and has been identified as a risk factor for several human T-cell-mediated disorders, including multiple sclerosis. Overall, mice immunized with Mycobacterium paratuberculosis showed earlier onset and greater disease severity than mice immunized with CFA containing the strain of M. tuberculosis H37Ra at the same doses of 4 mg/mL. The antigenic determinants of Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis (MAP)&#160;strain K-10 were able to induce a strong Th1 cellular response during the effector phase, characterized by significantly higher numbers of T-lymphocytes (CD4+ CD27+), dendritic cells (CD11c+ I-A/I-E+), and monocytes (CD11b+ CD115+) in the spleen compared to mice immunized with CFA. Furthermore, the proliferative T-cell response to the MOG peptide appeared to be highest in M. paratuberculosis-immunized mice. The use of an encephalitogen (e.g., MOG35-55) emulsified in an adjuvant containing M. paratuberculosis in the formulation may be an alternative and validated method to activate dendritic cells for priming myelin epitope-specific CD4+ T-cells during the induction phase of EAE.

Yazar Spotlight: Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit Sırasında Otoantijenlerin İmmünojenisitesini Arttırmada Mycobacterium paratuberculosis'in Adjuvan Aktivitesi  

Here, we present an alternative protocol to actively induce experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice, using the immunogenic epitope myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG)35-55 suspended in incomplete Freund's adjuvant containing the heat-killed Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis.

Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit Sırasında Otoantijenlerin İmmünojenitesinin Arttırılmasında Mycobacterium Paratuberculosis'in Adjuvan Aktivitesi

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) induced by myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) requires immunization by a MOG peptide emulsified in ...