Bu çalışma Alman Araştırma Vakfı &quot;Sistemler Nöroloji Münih Cluster (sinerji)&quot; mükemmelliği küme tarafından ve AL Daimler-Benz vakıf tarafından finanse edildi

Etik beyanı Bu video bildirilen deneyler deney hayvanlarında ve protokollerin kullanımı için ulusal kurallar Alman hükümet komiteleri (Regierung von Oberbayern, Münih, Almanya) tarafından onaylanmıştır uyarınca yapılmıştır. 10 haftalık, erkek C57BL/6J fareler, bu çalışmada kullanılmıştır. Hayvanlar 12 saat ışık-karanlık döngüsü dönemi ve yerel hükümet komitesi tarafından onaylanmış. Analjezi ve sedasyon protokolleri açıklanmıştır topaklandı yiyecek ve su ad libitum erişim kontrollü sıcaklığında (22 ± 2 ° C) altında yer alan, ancak farklı olabilir Diğer laboratuvarlarda kullanılan protokollerden. 1.. Malzeme ve Araçlar hazırlanması <ol><li> Sıcak çalışma alanını korumak ve anestezi sırasında fare vücut sıcaklığına (37 ° C) sağlamak amacıyla, ısı battaniye bağlayın. </li><li> Hazırlayın otoklava makas, forseps ve pamuk, dexpanthenol göz merhemi ve dikiş malzemesi. Sulu çalışma alanı muhafaza etmek (iğne olmadan) tuzlu su çözeltisi olan bir şırınga hazırlayın. Anestezi gazı (% 70 N 2 O +% 30 O 2 + izofluran) hazırlayın. </li><li> Periton boşluğu içine enjekte analjezikler: Metamizol 200 mg / kg, Carprofen 4 mg / kg ve Buprenorphin 0.1 mg / kg. </li><li> Vücudun kendiliğinden hareketi kadar onu uyutmak için% 4 izofluran akış hızı ile indüksiyon odasına fare yerleştirin ve burun kılı durur. </li><li> Anestezi maskesi içine burun ile yanal pozisyonda fare aktarın ve azaltmak sonra, yaklaşık bir dakika boyunca% 4 izofluran konsantrasyonu korumak ve onu Yaklaşık 1,5% olarak uygun anestezi korumak. </li><li> Her iki gözde deskpantenol göz merhemi sürün. </li></ol> 2.. Distal MCAO Model <ol><li> Cerrahi alan istimal aseptik hazırlanmasından sonra küçük operasyon makas kullanarak kulak ve göz arasındaki 1 cm&#39;lik cilt kesisi olung cilt dezenfektan. </li><li> Cilt ayırın ve temporal kas lokalize. </li><li> Yüksek frekans jeneratör pıhtılaşma işlevini, bipolar modunu seçin, 12 W seçin ve kablo ile elektrokoagülasyon forseps bağlayın. </li><li> Tuzlu bir damla ekleyin ve tamamen kas çıkarmadan bir kas flep yapma, böylece, apikal ve dorsal bölümünde kafatası temporal kas ayırmak için forseps kullanabilir. </li><li> Temporal bölgenin rostral kısmında, retro-orbital sinüs (Şekil 2A) için dorsal, saydam kafatası aşağıdaki MCA belirlenmesi. MCA bifurkasyon (nedeniyle bir anatomik, normal varyasyon) görünmüyorsa en rostral gemiyi tespit. </li><li> Bir ince ve saydam bir doku (Şekil 2B) sahip olana kadar sağ MCA kolu üzerinde matkap ile kemik dışarı kafatası ve ince bazı tuzlu su ekleyin. </li><li> Dikkatlice çok ince forseps ile arterin yukarıdaki kemik çekilme. </li><li> Bipolar modunu seçin in 7 W. topaklaĢan de yüksek frekans jeneratörü elektrokoagülasyon ile arter proksimal ve çatallanma (Şekil 2C) distal forseps. Çatallanma nedeniyle bir anatomik varyant görünmez olduğunda, yaklaşık iki sitelerde doğru bir şekilde tespit MCA dalı (yukarıya bakınız) koyulaştırmak. 1mm mesafe. Bu, yukarıdan her iki tarafta forseps ile dikkatlice arter dokunarak, koagülasyon için forseps ile arter kavramak için gerekli değildir yeterli olan ve daha az mekanik hasara neden olur. </li><li> 30 saniye bekleyin ve yavaşça nedeniyle spontan rekanalizasyonu herhangi bir kan akışı kontrol etmek için Köreldiğini forseps ile arter dokunun. Rekanalizasyonda durumda bir kez elektro tekrarlayın. </li><li> Çapak delik kapsayan, kendi konumuna zamansal kas yerini değiştirin. </li><li> Yara dikin ve anesteziden uyanması ve kafesine geri dönmek için 32 ° C &#39;de bir bakım kutusuna hayvan. Genel olarak anesth kurtarmak için hayvan için 5-10 dk sürerÇSED. </li><li> Postoperatif beşinci güne kadar sonra, günde 24 saat sonra postoperatif analjezi (ip) enjekte edilir ve: Carprofen 4 mg / kg. </li></ol> 3.. Sham Operasyonu Maruz arteri koagule değil hariç - kafatası ve kaldırma incelmesi dahil - yukarıda açıklanan operasyona aynı tüm prosedürleri yerine. 4. Silindir Testi 13 <ol><li> Şeffaf akrilik cam silindir hayvan koyun (çap: 8 cm, yükseklik: 25 cm) 5 dakika boyunca iki ayna ve video kaset önünde. Bir uygun video (Şekil 3A) elde etmek üzere, iki ayna önünde ve silindirin merkezi olarak kamera ayarlayın. </li><li> Bağımsız ön ayakları kullanım değerlendirilmesi için, tam arka sırasında bir ön ayakları ile silindir duvarı puan (1) temas ve tam arkasındaki sonra katta tek bir ön ayakları ile (2) iniş. Yavaş hareket veya kare-fr kullanılarak bir ön ayakları için en az 20 kişi saymakVideo Lan Client ame fonksiyonu (VLC) ücretsiz yazılım ( <a href="http://www.videolan.org/vlc">http://www.videolan.org/vlc</a> ). </li><li> Ameliyattan önce temel analiz için: denemeler arasında 1 saat ara ile, fare başına iki testi. Ön ayakları kullanımı sol-taraflı / sağ, bağımsız ön ayakları kullanım oranı olarak ifade edilir. </li><li> MCA koagülasyon sonra: Yukarıda belirtildiği gibi denemeler arasında 1 saat ara ile, fare başına iki kez tekrar testi. </li></ol> 5. Perfüzyon <ol><li> (Ketamin ve ksilazin sırasıyla 120/16 mg / kg vücut ağırlığı ile, örneğin,) hayvanlar anestezi uygulayın. </li><li> Sırtüstü pozisyonda hayvan düzeltmek ve medyan kesim ile karın boşluğu açmak. Girdap ve sternum çıkarın. Sağ atrium küçük bir kesi yapmak. Sol ventrikülde bir perfüzyon kanül yerleştirin ve yavaş yavaş 20 ml tuz ile serpmek. </li><li> , Hayvan başını kesmek calvaria açın ve yavaşça kafatası tabanından beyin ayırmak. </li><li&gt; 10 dakika boyunca -40 ° C soğuk beyin izopentan içinde dondurulur. Daha sonra -80 ° C&#39;de daha fazla analiz kadar isopentane ve mağaza beyinleri kaldırmak </li></ol> 6.. Enfarktüs Volumetri <ol><li> Cryosectioning: slaytlar üzerinde 20 mikron kalınlığında kesitler için bir kriostat üzerinde seri her 400 mikron beyinleri kesin ve -20 ° C&#39;de slaytlar saklayın </li><li> Cresyl menekşe (CV) boyama: <ol><li> Lekeleme solüsyonu hazırlayın: 500 ml H2O içinde CV asetat ve 0.5 g karıştırın Kristaller çözülene kadar (60 ° C) karıştırılır ve ısı. Çözüm serin edelim ve karanlık bir şişede saklayın. Her kullanımdan önce 60 ° C ve filtre ısıtın. </li><li> 30 dakika boyunca oda sıcaklığında slaytlar kurutun. Daha sonra, 1 dakika boyunca% 50 etanol içinde daha sonra 1 dakika boyunca% 70 etanolde, daha sonra 15 dakika boyunca% 95 etanol içinde ve koyun. </li><li> Damıtılmış su yenileme ve 1 dakika boyunca, onları yerleştirmek, 2 dakika için damıtılmış su içinde slaytlar yerleştirin. Daha sonra (60 ° C) f boyama çözeltisi içindeki koyun slaytlarya da 10 dakika ve 1 dakika için damıtılmış su içinde iki kez yıkayın. </li><li> 2 dakika boyunca% 95 etanol içinde slaytlar yerleştirin. Daha sonra% 100 etanol yenileme ve 2 dakika boyunca, onları yerleştirmek, 5 dakika boyunca% 100 etanol içine yerleştirin. Daha sonra montaj ortamı ile slaytlar kapsamaktadır. </li><li> Analiz: Slaytları taramak ve ödem düzeltmek için Swanson yöntemiyle 14 ile dolaylı enfarktüs hacmini analiz: (İskemik bölge) = (karşı taraftaki yan Cortex bölge) - (aynı tarafta olmayan iskemik korteks bölge) (Şekil 4A). </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Donnan, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stroke.">Stroke.</a> Lancet. 371, 1612-1623 (2008).</li><li>Di Carlo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Frequency+of+stroke+in+Europe:+A+collaborative+study+of+population-based+cohorts.+ILSA+Working+Group+and+the+Neurologic+Diseases+in+the+Elderly+Research+Group.+Italian+Longitudinal+Study+on+Aging.">Frequency of stroke in Europe: A collaborative study of population-based cohorts. ILSA Working Group and the Neurologic Diseases in the Elderly Research Group. Italian Longitudinal Study on Aging.</a> Neurology. 54, 28-33 (2000).</li><li>Hacke, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombolysis+with+alteplase+3+to+4.5+hours+after+acute+ischemic+stroke.">Thrombolysis with alteplase 3 to 4.5 hours after acute ischemic stroke.</a> N. Engl. J. Med. 359, 1317-1329 (2008).</li><li>Jauch, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+early+management+of+patients+with+acute+ischemic+stroke:+a+guideline+for+healthcare+professionals+from+the+American+Heart+Association/American+Stroke+Association.">Guidelines for the early management of patients with acute ischemic stroke: a guideline for healthcare professionals from the American Heart Association/American Stroke Association.</a> Stroke. 44, 870-947 (2013).</li><li>Longa, E. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20, 84-91 (1989).</li><li>Engel, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+stroke+in+mice+-+middle+cerebral+artery+occlusion+with+the+filament+model.">Modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model.</a> J. Vis. Exp. (47), e2423 (2011).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+rat+model+of+thrombotic+focal+cerebral+ischemia.">A new rat model of thrombotic focal cerebral ischemia.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 17, 123-135 (1997).</li><li>Tamura, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+cerebral+ischaemia+in+the+rat:+1.+Description+of+technique+and+early+neuropathological+consequences+following+middle+cerebral+artery+occlusion.">Focal cerebral ischaemia in the rat: 1. Description of technique and early neuropathological consequences following middle cerebral artery occlusion.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 1, 53-60 (1981).</li><li>Chen, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+focal+ischemic+stroke+in+the+rat:+reproducible+extensive+cortical+infarction.">A model of focal ischemic stroke in the rat: reproducible extensive cortical infarction.</a> Stroke. 17, 738-743 (1986).</li><li>Tureyen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infarct+volume+quantification+in+mouse+focal+cerebral+ischemia:+a+comparison+of+triphenyltetrazolium+chloride+and+cresyl+violet+staining+techniques.">Infarct volume quantification in mouse focal cerebral ischemia: a comparison of triphenyltetrazolium chloride and cresyl violet staining techniques.</a> J. Neurosci. Methods. 139, 203-207 (2004).</li><li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+focal+stroke:+size,+mechanism,+and+purpose.">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx. 2, 396-409 (2005).</li><li>Howells, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+strokes+for+different+folks:+the+rich+diversity+of+animal+models+of+focal+cerebral+ischemia.">Different strokes for different folks: the rich diversity of animal models of focal cerebral ischemia.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 30, 1412-1431 (2010).</li><li>Schallert, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CNS+plasticity+and+assessment+of+forelimb+sensorimotor+outcome+in+unilateral+rat+models+of+stroke,+cortical+ablation,+parkinsonism+and+spinal+cord+injury.">CNS plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury.</a> Neuropharmacology. 39, 777-787 (2000).</li><li>Swanson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+semiautomated+method+for+measuring+brain+infarct+volume.">A semiautomated method for measuring brain infarct volume.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 10, 290-293 (1990).</li><li>Kitano, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhalational+anesthetics+as+neuroprotectants+or+chemical+preconditioning+agents+in+ischemic+brain.">Inhalational anesthetics as neuroprotectants or chemical preconditioning agents in ischemic brain.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 27, 1108-1128 (2007).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+intravenous+recombinant+tissue+plasminogen+activator+on+ischemic+stroke+lesion+size+measured+by+computed+tomography.+NINDS;+The+National+Institute+of+Neurological+Disorders+and+Stroke+(NINDS)+rt-PA+Stroke+Study+Group.">Effect of intravenous recombinant tissue plasminogen activator on ischemic stroke lesion size measured by computed tomography. NINDS; The National Institute of Neurological Disorders and Stroke (NINDS) rt-PA Stroke Study Group.</a> Stroke. 31, 2912-2919 (2000).</li><li>Sowell, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+cortical+change+across+the+human+life+span.">Mapping cortical change across the human life span.</a> Nat. Neurosci. 6, 309-315 (2003).</li><li>Brott, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurements+of+acute+cerebral+infarction:+lesion+size+by+computed+tomography.">Measurements of acute cerebral infarction: lesion size by computed tomography.</a> Stroke. 20, 871-875 (1989).</li><li>Hacke, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant'+middle+cerebral+artery+territory+infarction:+clinical+course+and+prognostic+signs.">Malignant' middle cerebral artery territory infarction: clinical course and prognostic signs.</a> Arch. Neurol. 53, 309-315 (1996).</li><li>Majid, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+vulnerability+to+permanent+focal+cerebral+ischemia+among+3+common+mouse+strains.">Differences in vulnerability to permanent focal cerebral ischemia among 3 common mouse strains.</a> Stroke. 31, 2707-2714 (2000).</li><li>Liesz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Boosting+regulatory+T+cells+limits+neuroinflammation+in+permanent+cortical+stroke.">Boosting regulatory T cells limits neuroinflammation in permanent cortical stroke.</a> J. Neurosci. 33 (44), 17350-17362 (2013).</li><li>Liesz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+lymphocyte+trafficking+shields+the+brain+against+deleterious+neuroinflammation+after+stroke.">Inhibition of lymphocyte trafficking shields the brain against deleterious neuroinflammation after stroke.</a> Brain. 134, 704-720 (2011).</li><li>Jones, B. J., Roberts, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rotarod+suitable+for+quantitative+measurements+of+motor+incoordination+in+naive+mice.">A rotarod suitable for quantitative measurements of motor incoordination in naive mice.</a> Naunyn Schmiedebergs Arch. Exp. Pathol. Pharmakol. 259, 211 (1968).</li><li>Bouet, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adhesive+removal+test:+a+sensitive+method+to+assess+sensorimotor+deficits+in+mice.">The adhesive removal test: a sensitive method to assess sensorimotor deficits in mice.</a> Nat. Protoc. 4, 1560-1564 (2009).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+test+for+detecting+long-term+sensorimotor+dysfunction+in+the+mouse+after+focal+cerebral+ischemia.">A test for detecting long-term sensorimotor dysfunction in the mouse after focal cerebral ischemia.</a> J. Neurosci. Methods. 117, 207-214 (2002).</li><li>Orset, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+in+situ+thromboembolic+stroke+and+reperfusion.">Mouse model of in situ thromboembolic stroke and reperfusion.</a> Stroke. 38, 2771-2778 (2007).</li><li>Farr, T. D., Whishaw, I. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+and+qualitative+impairments+in+skilled+reaching+in+the+mouse+(Mus+musculus)+after+a+focal+motor+cortex+stroke.">Quantitative and qualitative impairments in skilled reaching in the mouse (Mus musculus) after a focal motor cortex stroke.</a> Stroke. 33, 1869-1875 (2002).</li><li>Kassem-Moussa, H., Graffagnino, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonocclusion+and+spontaneous+recanalization+rates+in+acute+ischemic+stroke:+a+review+of+cerebral+angiography+studies.">Nonocclusion and spontaneous recanalization rates in acute ischemic stroke: a review of cerebral angiography studies.</a> Arch. Neurol. 59, 1870-1873 (2002).</li></ol>

Yazarlar ifşa etmek hiçbir rakip çıkarları var.

Sözde &quot;pıhtılaşma model&quot; - Mevcut protokol transkraniyel Elektrokoagulasyon distal, kalıcı MCAO&#39;dan deneysel inme modeli açıklar. Bu model, bu arada deneysel araştırma inme 12 en sık kullanılan bir hayvan modellerinden biri haline gelmiştir. Diğer odak beyin iskemi modelleri ile karşılaştırıldığında, bu video gösterildiği gibi pıhtılaşma modeli eğitimli bir bilim adamı tarafından gerçekleştirilir, yaklaşık 10 dakika içinde çok kısa bir işlem süresi gibi bir avantajı vardır. Bu nedenle, kısaca anestezi kez nöro-korumanın ve inme sonuca anestezik etki 15 tanınmış olduğu için deneysel inme modelinde olumlu bir özelliktir, bu modelde de elde edilebilir. Ayrıca, daha önce Carmichael et al. 11 tarafından tarif edildiği gibi, distal sürekli MCA pıhtılaşma sonrasında elde edilen enfarktüs hacmi ve yerelleştirme insan büyük çoğunluğunda, iskemik beyin lezyonları karşılık geldiğini teyitbeyin büyüklüğü ile orantılı vuruş. İnsan inme önceki popülasyon çalışmaları ve klinik denemeler görüntüleme 16-18 dayalı olarak, hemisfer yaklaşık olarak% 5-15 arasında lezyonu olan boyutu ağırlıklı olarak küçük olan, daha az% 10 sıkışma meydana beyin ödemi ile geniş bir inme lezyonları aksine Klinik 19 okşar. Böylece, sunulan modelin elde yarımkürede yaklaşık% 12 MCA topraklarında inme lezyonlar bir translationally ilgili atım hacmi olarak kabul edilebilir. Bununla birlikte, farklı fare suşları veya kullanılan protokoller anestezi edilen lezyon hacmini 20 etkileyebilecek dikkate alınmalıdır. Bu modelde inme indüksiyon sonrasında gözlem döneminde mortalite hemen hemen yoktur. Dışlama kriterleri ulaşan Çünkü az% 5 genel mortalite nedeniyle anestezi komplikasyonları ya da kurban çalışması sırasında ölümlerin başlıca oluşur. Düşük v garanti etmek içinoperasyon sırasında 1) Herhangi bir subaraknoid kanama: Bu modelin ve mükemmel tekrarlanabilirlik ariability, biz şu dışlama kriterleri öneririz. 2) Çalışma süresi fazla 15 dakika. Sadece geçici MCAO&#39;dan ile Elektrokoagulasyon iki denemeden sonra MCA 3) rekanalizasyon. Ayrıca, hayvanların acı, rahatsızlık ya da hastalık davranışı kontrol etmek için MCAO (temel fizyolojik davranış, kürk görünümü ve vücut ağırlığı) sonrası günlük incelenmesi gerekir. Çeşitli önlemler lazer benek ölçümü, manyetik rezonans görüntüleme, davranış testleri ya da histolojik analiz gibi inme sonuç analizi için uygulanan olabilir. Bu protokolde davranış analizi ve enfarktüs hacmi analiz için örnek yöntemler sağlar. Fokal iskemi sonrası beyin davranış analizi için çok sayıda deney geliştirilmiş ve deneysel inme araştırmalarda kullanılmıştır. Daha önce bu vuruş modeli 21,22 biz bizim grup tarafından kullanılan Sensorimotor disfonksiyon için uygun testlerRotarod testinde 23 re, Sabit etiket testi 24, Köşe testi 25 ve bu video gösterilmiştir Silindir testi 13,. Silindir testi sürekli uzak kalıcı MCAO&#39;dan sonra akut faz motor asimetri gösteriyor ve aynı zamanda ardışık motor fonksiyon yeniden algılar. Belirgin avantajları olmasına rağmen, bu inme modelinde bazı sınırlamaları dikkate alınması gerekir. İlk olarak, bir kafatası trepanasyon cerrahi yaranın temporal kas veya beyin kendisi bakteriyel enfeksiyonları kendimizi tarafından tespit edilmiştir, böylece her ne kadar hiçbir zaman, beynin peri-işletme enfeksiyonlar için potansiyel bir erişim üreten, arter pıhtılaştırmak için gerekli olan veya bu modeli kullanarak başkaları tarafından belgelenmiştir. Ayrıca, hazırlık ve koagülasyon sırasında korteks mekanik hasar ardı edilemez ama dikkatli sondaj ve çıkarma kafatasının, cerrahi sitenin sürekli nemlendirme ve minimal NE ile sınırlı olabilir<html> cessary elektrokoagülasyon (dışlama kriterleri). Şekil 2&#39;de gösterildiği gibi MCA ders C57BL / 6 farelerinin çoğunda bulunan, ancak biz modeli değişkenliği en aza indirmek için, normal damar tabii varyasyonları devam etmek için nasıl protokol açıklar. Ayrıca, çoklu kullanımını önermek (çatallanma durumunda 3; MCA çatallanma olmadan 2) tıkanması sitelerinde deneyimlerimiz bu modelin değişkenliği için önemli bir faktör olan MCA, kısmi rekanalizasyonda riskini en aza indirmek için. Davranış testleri açısından, sadece küçük davranış problemleri yukarıda belirtilen davranış testleri de tespit edilebilir ve fonksiyonel yenilenmesi inme sonraki ilk hafta içinde gözlenebilir. Böylece, yüksek hassasiyet ve yetenekli ulaşan testinde 27 gibi kalitatif test parametreleri ile daha gelişmiş test sistemleri, bu modelde uzun dönem fonksiyonel sonuçları tespit etmek daha uygun olabilir. ontent &quot;&gt; Nihayet, nedeniyle kendiliğinden pıhtı yok edilmesi ya da tedavisi için 28 inme hastaların önemli bir yüzdesinde görülen bir özelliktir no reperfüzyon elde edilebilir MCA, kalıcı pıhtılaşmasına. Bununla birlikte, daha önce tarif edildiği tromboembolik strok modeli 26 içerir kortikal beyin iskemi reperfüzyon ile ücretsiz inme model için seçenek. Birlikte ele alındığında, yüksek uyarlık nedeniyle minimal mortalite ve insan inme açısından karşılaştırılabilir göreli infarkt hacmi ve yerelleştirme için olası uzun süreli gözlem &quot;pıhtılaşma modeli&quot; ayırt Temel ve dönüşümsel inme araştırma için değerli bir model olarak.

Inme ölüm üçüncü en sık nedenidir ve gelişmiş ülkelerde 1 edinilen yetişkin bir engellilik ana nedenidir. Yaklaşık% 15, bir içi kanama 2 neden olur, bu ise akut nörolojik hastalığın yaklaşık% 80 beyin kan akışının engellenmesinden ortaya çıkan beyin iskemisi neden olur. Devam eden araştırmalara rağmen, doku plazminojen aktivatörü intravenöz şimdiye kadar ve sadece inme hastalarının bir azınlık nedeniyle 3,4 başlangıçlı inme sonrası 4.5 saat kısa onaylanmış zaman penceresine iskemik inme için sadece onaylı farmakolojik tedavidir. Düzgün beyin, damar ve inme sırasında sistemik patofizyolojik mekanizmaları arasındaki karmaşık etkileşimi modellemede hiçbir in vitro modeller, olduğu gibi, hayvan modelleri preklinik inme araştırma için gereklidir. Bu nedenle, birkaç iskemik inme modelleri vari geliştirilmiştirtürlerinin ety. En yaygın olarak kullanılan inme modellerinden biri, bir ameliyat dikiş ipliği fılamenti geçici iç karotis arteri içine yerleştirilir ve ucu kan akımının bir stop ile sonuçlanan, orta serebral arter (MCA) kökenini tıkar kadar iletilir &quot;filament model&quot; bir ve subkortikal ve uzun süreli tıkanıklığı durumunda da kortikal bölgelerde 5,6 müteakip beyin enfarktüsü. Iskemik inme Fototrombotik modellerinde, ışınlanmış kortikal kabın bir fotokimyasal tıkanması, küçük lokal sınırlı 7 lezyonlar ile sonuçlanan bir photosensitizer enjeksiyonundan sonra elde edilir. Lenticulostriatal arterlerin MCA distalinde kalıcı tıkanması, arter, kendi sıkıştırma geçici bir ligasyon ile ya da sürekli pıhtılaşma 8,9 ile elde edilebilir. Bu modelde MCA oklüzyon durgun için uzak olduğu için, bu modelde elde enfarktüs ağırlıklı olarak neokorteks 10 etkilemektedirbazal ganglionlar kaynağı ulostriatal arterler. Insan inme lezyonların çoğunluğu orta serebral arter topraklarında bulunan olduğundan, ortak inme modellerin tüm MCA oklüzyonları veya dallarının 11 birine benzeyebilir. MCA beyne kan akımını sağlayan en önemli damar biridir; Bu lateral sulcus boyunca internal karotis arter, yolları doğar nereye sonra bazal ganglionlar ve frontal, parietal ve primer motor ve duyusal korteks de dahil olmak üzere temporal lob, yanal yüzeylerine dalları ve projeler. Sağ ve sol MCA anterior serebral arterlere bağlı ve posterior Willis Circle (Şekil 1) oluştururken, posterior serebral arterler bağlanmak arterleri, iletişim. Daha önce Carmichael ve ark. 11 tarafından bildirilen, distal Orta Serebral Ar modellenmiştir enfarktüsleridirfarelerde ışırken Tıkanıklığı (MCAO) modeli böylece kortikal MCA 11,12 bulunan insan inme lezyonlarının çoğunluğu taklit yarımkürede yaklaşık% 10-15 kapsayacak. 1981 yılında, Tamura et al. Sıçanlarda 8&#39;de kalıcı, transkraniyal MCAO pıhtılaşma modeli tarif. Bununla birlikte, Tamura açıklanan model arterin daha uzak çatallanma aşmak için yakın bir MCA oklüzyon içeriyordu. Bu nedenle, orijinal &quot;Tamura model&quot; 6 &quot;filament modeli&quot; ile elde edilen benzer lezyonların sadece değil, aynı zamanda kortikal striatal lezyon, neden olur. Burada, farelerde transkranial elektrokoagülasyon ile kalıcı distal MCAO modeli açıklamak. Bunlara ek olarak, bu modelde, inme sonucu analiz ile ilgili histolojik ve fonksiyonel yöntem sunulmaktadır. Tüm yöntemler geliştirdik ve laboratuvarlarda kullanılan standart operasyon prosedürlerine dayanmaktadır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="948">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Camera Canon Eos 500D</td>
			<td style="width:224px;">Canon</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:324px;">optics: 18-55 mm; 30 fps; 640x480 video function</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Mirror</td>
			<td style="width:224px;">Kristallform</td>
			<td style="width:119px;">2677089</td>
			<td>30x30 cm&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Transparent acrylic glass cylinder</td>
			<td style="width:224px;">H&#38;S Kunststofftechnik</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>diameter: 8 cm,&#160; height: 25 cm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Heating blanket</td>
			<td>FHC DC Temperature Controller</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Fine Scissors</td>
			<td style="width:224px;">FST</td>
			<td>15000-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Mayor Scissors</td>
			<td style="width:224px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">1410-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Forceps</td>
			<td style="width:224px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">11616-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Cotons</td>
			<td style="width:224px;">NOBA Verbondmitel Danz</td>
			<td style="width:119px;">974116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Saline solution</td>
			<td style="width:224px;">Braun</td>
			<td style="width:119px;">131321</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Bepanthen pomade</td>
			<td style="width:224px;">Bayer</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:224px;">Abbot</td>
			<td style="width:119px;">B506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anesthesia system for isoflurane</td>
			<td>Drager</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Stereomikroskop&#160;</td>
			<td style="width:224px;">Zeiss</td>
			<td>Stemi DV4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Electrosurgical device</td>
			<td colspan="2">ERBETOM ICC 80/50 HF-Chirurgieger&#228;t</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Drill</td>
			<td style="width:224px;">Proxxon&#160;</td>
			<td style="width:119px;">D-34343</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Ketamine</td>
			<td style="width:224px;">Inresa Arzneimittel GmbH</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Xylacine</td>
			<td style="width:224px;">Albrecht</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5ml Syringe&#160;</td>
			<td style="width:224px;">Braun</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Phosphate Buffered Saline PH: 7,4</td>
			<td>Apotheke Innestadt Uni Munchen</td>
			<td style="width:119px;">P32799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Isopentane</td>
			<td style="width:224px;">Fluka</td>
			<td style="width:119px;">59070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Cryostat</td>
			<td>Thermo Scientific CryoStarNX70</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Superfrost Plus Slides</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">J1800AMNZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Cresyl violet</td>
			<td>Sigma Life Science&#160;</td>
			<td>C5042-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Acetic Acid</td>
			<td>Sigma Life Science&#160;</td>
			<td>695092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Ethanol 70%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td>521005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Ethanol 96%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td>522078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol 99%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td style="width:119px;">ETO-5000-99-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Roti-Histokit mounting medium</td>
			<td style="width:224px;">Roth</td>
			<td style="width:119px;">6638.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">C57Bl/6J mice</td>
			<td style="width:224px;">Charles River</td>
			<td style="width:119px;">000664</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling stroke in mice: permanent coagulation of the distal middle cerebral artery

Inme ölüm üçüncü en sık nedenidir ve gelişmiş ülkelerde edinilen yetişkin sakatlık ana nedenidir. Sadece çok sınırlı tedavi seçenekleri akut fazda inme hastalarının küçük bir kısmı için mevcuttur. Mevcut araştırma yoğun yeni tedavi stratejilerinin arıyor ve daha fazla hastanın uzun bir zaman penceresinde terapötik müdahaleler için uygun olabilir, çünkü giderek inme sonrası sub-akut ve kronik faz üzerinde duruluyor. Bu gecikmiş mekanizmalar gibi inme sonrası inflamasyon, anjiyogenez, nöronal plastisite ve yenilenmesi gibi önemli patofizyolojiyi içerir. Bu mekanizmaları analiz etmek ve daha sonra yeni ilaç hedefleri değerlendirmek amacıyla, klinik önemi, düşük mortalite ve yüksek tekrarlanabilirlik ile deneysel inme modelleri aranır. Dahası, farenin bir fokal inme lezyon indüklenebilir olan ve transjenik modelleri geniş bir yelpazede olan en küçük memelilerkullanılabilir. Bu nedenle, burada kafa içi bölgesinin fare modeli, lenticulostriatal arter, sözde &quot;pıhtılaşma modeli&quot; elektro distalinde ile orta serebral arterin sürekli pıhtılaşma açıklar. Bu modelde elde edilen enfarktüs esas olarak korteks bulunur; beyin boyutuna göre görece enfarktüs hacmi, insan strok çoğunluğu karşılık gelir. Ayrıca, model tekrarlanabilirlik ve düşük mortalite yukarıda sözü edilen kriterleri yerine getirir. Bu videoda &quot;pıhtılaşma modeli&quot; inme indüksiyon cerrahi yöntemlerini göstermek ve histolojik ve fonksiyonel analiz araçları rapor.

Nedeniyle kısa süre anestezi ve orta beyin hasarı, yaklaşık 10 dakika kendi kafeslerine transferinden sonra, tüm hayvanların serbestçe kafeste hareketli ve littermates ile etkileşim, uyanık idi. MCAO ameliyat sırasında ölüm oranı esas olarak kazara subaraknoid kanama veya yanlış anestezi bir sonucu olarak, en az% 5 idi. Inme indüksiyon sonrasında 7 günlük gözlem süresi boyunca mortalite hayvanların yaklaşık% 1-2 çok nadiren oluşur. Bu rapor için 10 hayvanların operasyon serisinin tüm hayvanların hiçbiri nedeniyle dışlama kriterleri hariç gerekiyordu, operasyon ve 7 günlük gözlem dönemi atlattı. MCA pıhtılaşma sonrasında davranışsal açıkları silindir testi 13 analiz forepaw kullanımı asimetri tarafından değerlendirildi. Bu testte, bağımsız sol ve sağ forepaw kullanım oranı, inme indüksiyondan sonra, belirtilen zaman noktalarında ölçülmüştür ve 24, elde edilen başlangıç ​​değerleri ile karşılaştırılırMCAO&#39;dan (Şekil 3B) önce saat. Hayvanlar silindir testi, 24 saat içinde bir araya duvar keşif için uzuv kullanım asimetri önemli bir değişiklik sunulmuştur (1.72 ± 0.326, p &lt;0.05) ve 3 gün (1.36 ± 0.17, p &lt;0.05), MCAO&#39;dan sonra. Oranı 1 haftalık gözlem süresi boyunca geliştirilmiş olsa da, motorlu asimetri 7 gün MCAO&#39;dan sonra hala anlamlı idi (1.35 ± 0.29, p &lt;0.05), başlangıç ​​değerlerine göre. Biz, kresil menekşe 7 gün inme indüksiyonu (Şekil 4B) sonra seri koronal beyin bölümleri ile boyanmış enfarktüs volumetrik gerçekleştirilir. Ortalama enfarktüs hacmi, böylece beynin bir yarı küresi (Şekil 4C)% 12 temsil eden, 15.4 mm3 idi. Bu inme modelin değişkenliği yaklaşık% 10 düzeyinde bir standart sapma ile son derece düşüktür. Lezyon alanı subkortikal yapıların sadece küçük sevgi ile somatosensorial ve motor korteksi kapsar. Ayrıca, enfarktüs lokalizasyonuŞematik dağıtım şeması (Şekil 4D) &#39;de gösterildiği gibi alan sadece minimal değişkenlik ile son derece tahmin edilebilir. <img alt="Şekil 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51729/51729fig1highres.jpg" width="500" /> Şekil 1. Willis Circle şematik. Willis arteriyel Çember internal karotid arter (ICA) dan dal yanı sıra tarafından orta serebral arter (MCA) ve anterior serebral arter (ACA) tarafından oluşturulmaktadır serebral arterler (PCA) ve arterler iletişim posterior (PComA) posterior. MCA serebral kortekse bu dalları lateral sulcus geçmektedir. Motor korteks ve somatosensoriyel korteks bölümünün büyük bir kısmını besleyen baskın MCA dal kalıcı gösterdi modeli (Acoma = Anterior iletişim arter tarafından kapatılan; BA = Basilar arter; Suca Superior serebellar =lar arter). <img alt="Şekil 2," fo:content-width="3in" src="/files/ftp_upload/51729/51729fig2highres.jpg" width="400" /> Şekil 2,. Temporal kas ve MCA oklüzyon şematik görünümü çıkarıldıktan sonra Transkraniyal görünüşüdür. (A) Temporal kas çıkardıktan sonra kortikal arterler (8-12 haftalık farelerde) kısmen saydam fare kafatası yoluyla izlenebilir. Baskın MCA dal temporal görünümünün rostral bir parçası olarak hem de kuyruk kısmında MCA ve PCA dallanma daha fazla kortikal arterlerde tespit edilebilir. Bir çatallanma ile baskın varyasyonda baskın MCA dal (B) şematik görünüşüdür lateral temporal korteks üzerinde bir çapak delik delme ve kafatası alınmasından sonra çekilmesi. (C) siyah kareler çatallanma yakın ve uzak taraflardaki MCA pıhtılaşma siteleri temsil eder. Davranışsal açıklarının Şekil 3.. Analizi. (A) Silindir testi set-up: fare dikey bir silindir içine yerleştirilir ve aynalar bir video kamera kullanarak hareketleri tüm kayıt için arkasına konur (B) ön ayakları kullanımı asimetri silindir testi kullanılarak analiz edildi.. Bağımsız ön ayakları kullanım sağ / sol oranları MCAO&#39;dan öncesi ve inme indüksiyon sonra belirtilen zaman noktalarında 24 saat hesaplanmıştır. = 10 N, * p &lt;belirtilen zaman noktası ve başlangıç ​​(kontrol) değeri arasında 0.05. <img alt="Şekil 4," fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51729/51729fig4highres.jpg" width="500" /> Şekil 4,. Uzak MCAO ardından kriz analizi ve enfarktüs sonuç Volumetrik. Bir cresyl mor lekeli koronal sutyen (A) Temsili resim7 gün sonra, MCAO bölümünde. Sarı çizgi taraftaki (sağ) korteksin seçimi gösteren ve kırmızı çizgi ipsilateral beynin olmayan enfarkte (lekeli) korteksi seçmektir. Sol hemisfer soluk alan enfarkte doku alanını göstermektedir. (B), enfarktüs hacmi 10 beyinlerinin analizi (her biri tek tek beyni temsil eden nokta) 24 saat, 3 gün ve distal MCA koagülasyon 7 gün sonra. Yatay kırmızı çizgi. Ortalama hata çubukları, standart sapmayı temsil etmektedir göstermektedir (C) Örnek kresil menekşe her 400 um ile 7 gün MCA pıhtılaşma sonrasında boyanan koronal beyin kesitleri. (D) 7 gün sonra, MCAO&#39;dan enfarktüslü beyin dokusunun şematik dağılımı. Her slayt bregmaya ilgili verilen bölümde (.:; Oxford University Press izniyle Liesz A ve ark, Beyin, 2011 değiştirilmiş görüntü itibaren) infarct dağıtım birikmiş bilgi (belirtildiği gibi renk kodlu) göstermektedir. &lt;a href = &quot;https://www.jove.com/files/ftp_upload/51729/51729fig4highres.jpg&quot; target = &quot;_blank&quot;&gt; bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için buraya tıklayınız.

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery at JoVE.com

Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

Orta serebral arter oklüzyonu (MCAO) çeşitli kemirgen modelleri yaygın deneysel beyin araştırmalarda kullanılır. Burada, insan iskemik strok çoğunluğu tarafından uygulanan zarar tekabül eden bir boyutta tutarlı bir kortikal enfarktüs üreten transkraniyal sürekli uzak MCAO modelini göstermektedir.

Farelerde Modelleme İnme: Distal Orta Serebral Arter Daimi Pıhtılaşma

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical ...

modeling-stroke-mice-permanent-coagulation-distal-middle-cerebral

Research

JoVE Journal

Medicine

36.6K Görüntüleme.  University Hospital Munich.  Orta serebral arter oklüzyonu (MCAO) çeşitli kemirgen modelleri yaygın deneysel beyin araştırmalarda kullanılır. Burada, insan iskemik strok çoğunluğu tarafından uygulanan zarar tekabül eden bir boyutta tutarlı bir kortikal enfarktüs üreten transkraniyal sürekli uzak MCAO modelini göstermektedir. 

Video: Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are very limited. To meet the need for novel therapeutic approaches, experimental stroke research frequently employs rodent models of focal cerebral ischaemia. Most researchers use permanent or transient occlusion of the middle cerebral artery (MCA) in mice or rats.
Proximal occlusion of the middle cerebral artery (MCA) via the intraluminal suture technique (so called filament or suture model) is probably the most frequently used model in experimental stroke research. The intraluminal MCAO model offers the advantage of inducing reproducible transient or permanent ischaemia of the MCA territory in a relatively non-invasive manner. Intraluminal approaches interrupt the blood flow of the entire territory of this artery. Filament occlusion thus arrests flow proximal to the lenticulo-striate arteries, which supply the basal ganglia. Filament occlusion of the MCA results in reproducible lesions in the cortex and striatum and can be either permanent or transient. In contrast, models inducing distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA occlusion typically spare the striatum and primarily involve the neocortex. In addition these models do require craniectomy. In the model demonstrated in this article, a silicon coated filament is introduced into the common carotid artery and advanced along the internal carotid artery into the Circle of Willis, where it blocks the origin of the middle cerebral artery. In patients, occlusions of the middle cerebral artery are among the most common causes of ischaemic stroke. Since varying ischemic intervals can be chosen freely in this model depending on the time point of reperfusion, ischaemic lesions with varying degrees of severity can be produced. Reperfusion by removal of the occluding filament at least partially models the restoration of blood flow after spontaneous or therapeutic (tPA) lysis of a thromboembolic clot in humans.
In this video we will present the basic technique as well as the major pitfalls and confounders which may limit the predictive value of this model.

Filamentous occlusion of the Middle cerebral artery is a common model for studying ischemic stroke in mice.

Fare Modelleme İnme - Filament Model Orta Serebral Arter Tıkanıklığı

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Tıp

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fare Modeli

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United States in 20091,2. The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model was developed by Koizumi4 in 1986 to simulate this 
impactful human pathology in the rat. A modification of the MCAO method was later presented by Longa3. Both techniques have been widely used to identify 
molecular mechanisms of brain injury resulting from ischemic stroke and potential therapeutic modalities5. This relatively noninvasive method in rats has been 
extended to use in mice to take advantage of transgenic and knockout strains6,7. To model focal cerebral ischemia, an intraluminal suture is advanced via 
the internal carotid artery to occlude the base of the MCA. Retracting the suture after a specified period of time mimics spontaneous reperfusion, but the 
suture can also be permanently retained. This video will be demonstrating the two major approaches for performing intraluminal MCAO procedure in mice in a 
stepwise fashion, as well as providing insights for potential drawbacks and pitfalls. The ischemic brain tissue will subsequently be stained by 
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to evaluate the extent of cerebral infarction8.

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is the most frequent used model among experimental ischemic stroke models. Here we will demonstrate the entire model in detail with the guide of Laser Doppler flowmetry, and its representative results.

Fare lazer Doppler flowmetre Rehberlik İskemik İnme intraluminal Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO) Model

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to develop suitable animal models to study the events that unfold during ischemic insult. These techniques include transient or permanent, focal or global ischemia models using many different animal models, with the most common being rodents.
The permanent MCA ligation method which is also referred as pMCAo in the literature is used extensively as a focal ischemia model in rodents 1-6. This method was originally described for rats by Tamura et al. in 1981 7. In this protocol a craniotomy was used to access the MCA and the proximal regions were occluded by electrocoagulation. The infarcts involve mostly cortical and sometimes striatal regions depending on the location of the occlusion. This technique is now well established and used in many laboratories 8-13. Early use of this technique led to the definition and description of &#x201C;infarct core&#x201D; and &#x201C;penumbra&#x201D; 14-16, and it is often used to evaluate potential neuroprotective compounds 10, 12, 13, 17. Although the initial studies were performed in rats, permanent MCA ligation has been used successfully in mice with slight modifications 18-20 .
This model yields reproducible infarcts and increased post-survival rates. Approximately 80% of the ischemic strokes in humans happen in the MCA area 21 and thus this is a very relevant model for stroke studies. Currently, there is a paucity of effective treatments available to stroke patients, and thus there is a need for good models to test potential pharmacological compounds and evaluate physiological outcomes. This method can also be used for studying intracellular hypoxia response mechanisms in vivo. 
Here, we present the MCA ligation surgery in a C57/BL6 mouse. We describe the pre-surgical preparation, MCA ligation surgery and 2,3,5 Triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining for quantification of infarct volumes.

Middle cerebral artery (MCA) ligation is a technique to study focal cerebral ischemia in animal models. In this method, the middle cerebral artery is exposed by craniotomy and ligated by cauterization. This method gives highly reproducible infarct volumes and increased post-operative survival rates compared to other methods available.

Fare Daimi Orta Serebral Arter ligasyon Of Uygulama

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in 20091, 2. Several models of cerebral ischemia have been developed to mimic the human condition of stroke. It has been suggested that up to 80% of all strokes result from ischemic damage in the middle cerebral artery (MCA) area3. In the early 1990s, endothelin-1 (ET-1) 4 was used to induce ischemia by applying it directly adjacent to the surface of the MCA after craniotomy. Later, this model was modified 5 by using a stereotaxic injection of ET-1 adjacent to the MCA to produce focal cerebral ischemia. The main advantages of this model include the ability to perform the procedure quickly, the ability to control artery constriction by altering the dose of ET-1 delivered, no need to manipulate the extracranial vessels supplying blood to the brain as well as gradual reperfusion rates that more closely mimics the reperfusion in humans5-7. On the other hand, the ET-1 model has disadvantages that include the need for a craniotomy, as well as higher variability in stroke volume8. This variability can be reduced with the use of laser Doppler flowmetry (LDF) to verify cerebral ischemia during ET-1 infusion. Factors that affect stroke variability include precision of infusion and the batch of the ET-1 used6. Another important consideration is that although reperfusion is a common occurrence in human stroke, the duration of occlusion for ET-1 induced MCAO may not closely mimic that of human stroke where many patients have partial reperfusion over a period of hours to days following occlusion9, 10. This protocol will describe in detail the ET-1 induced MCAO model for ischemic stroke in rats. It will also draw attention to special considerations and potential drawbacks throughout the procedure.

Several animal models of cerebral ischemia have been developed to simulate the human condition of stroke. This protocol describes the endothelin-1 (ET-1) induced middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke in rats. In addition, important considerations, advantages, and shortcomings of this model are discussed.

Rat Lazer Doppler Flowmetri Rehberlik ile İskemik İnme için Endotelin-1 Bağlı Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Modeli

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be performed in many locations overlying the rat cerebrum, but is most easily carried out by creating a craniectomy over the readily accessible frontal or parietal bones. Most frequently, we have used this technique in combination with the endothelin-1 middle cerebral artery occlusion model of ischemic stroke to quantify the changes in middle cerebral artery vessel diameter that occur with injection of endothelin-1 into the brain parenchyma adjacent to the proximal MCA4, 5. In order to visualize the proximal portion of the MCA during endothelin -1 induced MCAO, we use a technique to create a cranial window through the temporal bone on the lateral aspect of the rat skull (Figure 1). Cerebral arteries can be visualized either with the dura intact or with the dura incised and retracted. Most commonly, we leave the dura intact during visualization since endothelin-1 induced MCAO involves delivery of the vasoconstricting peptide into the brain parenchyma. This bypasses the need to incise the dura directly over the visualized vessels for drug delivery. This protocol will describe how to create a cranial window to visualize cerebral arteries in a step-wise fashion, as well as how to avoid many of the potential pitfalls pertaining to this method.

This article describes a method for visualizing rat cerebral arteries through a cranial window using temporal craniectomy in order to view proximal portions of the middle cerebral artery (Figure 1). This versatile method can be combined with various techniques of drug delivery to measure cerebral artery reactivity in vivo.

Endotelin-1 Bağlı Orta Serebral Arter Tıkanıklığı sırasında Orta Serebral Arter görselleştirin bir Kranial Pencere kullanmak

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal models of acute ischemic stroke allows to confirm successful arterial occlusion and exclude subarachnoid hemorrhage. Cerebral perfusion monitoring can also be used to study intracranial collateral circulation, which is emerging as a powerful determinant of stroke outcome and a possible therapeutic target. Despite a recognized role of Laser Doppler perfusion monitoring as part of the current guidelines for experimental cerebral ischemia, a number of technical difficulties exist that limit its widespread use. One of the major issues is obtaining a secure and prolonged attachment of a deep-penetration Laser Doppler probe to the animal skull. In this video, we show our optimized system for cerebral perfusion monitoring during transient middle cerebral artery occlusion by intraluminal filament in the rat. We developed in-house a simple method to obtain a custom made holder for twin-fibre (deep-penetration) Laser Doppler probes, which allow multi-site monitoring if needed. A continuous and prolonged monitoring of cerebral perfusion could easily be obtained over the intact skull.

Cerebral perfusion monitoring has been demonstrated to improve accuracy in ischemic stroke models. Technical difficulties often limit the use of this essential tool for cerebrovascular research. In this video, an optimized system is shown to obtain a single or multi-site hemodynamic monitoring during intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.

Intraluminar Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Sıçan Strok Model Serebral Perfüzyon İzleme için Optimize Sistemi

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic stroke. However, the use of tPA is limited by its narrow therapeutic window and by increased risk of hemorrhagic transformation. There is an urgent need to develop suitable stroke models to study new thrombolytic agents and strategies for treatment of ischemic stroke. At present, two major types of ischemic stroke models have been developed in rats and mice: intraluminal suture MCAO and embolic MCAO. Although MCAO models via the intraluminal suture technique have been widely used in mechanism-driven stroke research, these suture models do not mimic the clinical situation and are not suitable for thrombolytic studies. Among these models, the embolic MCAO model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical investigation of thrombolytic therapy. This embolic model was first developed in rats by Overgaard et al.1 in 1992 and further characterized by Zhang et al. in 19972. Although embolic MCAO has gained increasing attention, there are technical problems faced by many laboratories. To meet increasing needs for thrombolytic research, we present a highly reproducible model of embolic MCAO in the rat, which can develop a predictable infarct volume within the MCA territory. In brief, a modified PE-50 tube is gently advanced from the external carotid artery (ECA) into the lumen of the internal carotid artery (ICA) until the tip of the catheter reaches the origin of the MCA. Through the catheter, a single homologous blood clot is placed at the origin of the MCA. To identify the success of MCA occlusion, regional cerebral blood flow was monitored, neurological deficits and infarct volumes were measured. The techniques presented in this paper should help investigators to overcome technical problems for establishing this model for stroke research.

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.

Sıçanlar Homolog Kan pıhtısı ile İskemik İnme emboli Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO)

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Quantification of Neurovascular Protection Following Repetitive Hypoxic Preconditioning and Transient Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week protocol for repetitive hypoxic preconditioning (RHP) induces long-term protection against central nervous system (CNS) injury in a mouse model of focal ischemic stroke. RHP consists of 9 stochastic exposures to hypoxia that vary in both duration (2 or 4 hr) and intensity (8% and 11% O2). RHP reduces infarct volumes, blood-brain barrier (BBB) disruption, and the post-stroke inflammatory response for weeks following the last exposure to hypoxia, suggesting a long-term induction of an endogenous CNS-protective phenotype. The methodology for the dual quantification of infarct volume and BBB disruption is effective in assessing neurovascular protection in mice with RHP or other putative neuroprotectants. Adult male Swiss Webster mice were preconditioned by RHP or duration-equivalent exposures to 21% O2 (i.e. room air). A 60 min transient middle cerebral artery occlusion (tMCAo) was induced 2 weeks following the last hypoxic exposure. Both the occlusion and reperfusion were confirmed by transcranial laser Doppler flowmetry. Twenty-two hr after reperfusion, Evans Blue (EB) was intravenously administered through a tail vein injection. 2 hr later, animals were sacrificed by isoflurane overdose and brain sections were stained with 2,3,5- triphenyltetrazolium chloride (TTC). Infarcts volumes were then quantified. Next, EB was extracted from the tissue over 48 hr to determine BBB disruption after tMCAo. In summary, RHP is a simple protocol that can be replicated, with minimal cost, to induce long-term endogenous neurovascular protection from stroke injury in mice, with the translational potential for other CNS-based and systemic pro-inflammatory disease states.

This protocol describes repetitive hypoxic preconditioning, or brief exposures to systemic hypoxia that reduce infarct volumes and blood-brain barrier disruption following transient middle cerebral artery occlusion in mice. It also details dual quantification of infarct volume and blood-brain barrier disruption after stroke to assess the efficacy of neurovascular protection.

Farelerde Tekrarlanan Hipoksik Önkoşullanma ve Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ardından Nörovasküler Koruma Kantitasyonu

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week ...

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, obesity and diabetes. Accordingly, when evaluating therapies for stroke in animals, it is important to select a model with excellent face validity. Ischemic stroke accounts for 80% of all strokes, and the majority of these occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA), often inducing infarcts that affect the sensorimotor cortex, causing persistent plegia or paresis on the contralateral side of the body. We demonstrate in this video a method for producing ischemic stroke in elderly rats, which causes sustained sensorimotor disability and substantial cortical infarcts. Specifically, we induce permanent distal middle cerebral artery occlusion (MCAO) in elderly female rats by using diathermy forceps to occlude a short segment of this artery. The carotid artery on the ipsilateral side to the lesion was then permanently occluded and the contralateral carotid artery was transiently occluded for 60 min. We measure the infarct size using structural T2-weighted magnetic resonance imaging (MRI) at 24 hr and 8 weeks after stroke. In this study, the mean infarct volume was 4.5% &#177; 2.0% (standard deviation) of the ipsilateral hemisphere at 24 hr (corrected for brain swelling using Gerriet&#8217;s equation, n = 5). This model is feasible and clinically relevant as it permits the induction of sustained sensorimotor deficits, which is important for the elucidation of pathophysiological mechanisms and novel treatments.

Here we present a protocol to produce permanent distal middle cerebral artery occlusion in elderly female rats with simultaneous occlusion of the carotid arteries to generate large cortical infarcts and sustained deficits. We show confirmation of the lesion size using structural MRI at 24 hr and 8 weeks after stroke.

Yaşlı Sıçanlarda Ortak Karotis Arter Tıkanıklığı ile Kalıcı Distal Orta Serebral Sahne Kortikal İskemi Sürekli Engelli Eğitim için

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...