עבודה זו מומנה על ידי המקבץ המצוינות של קרן המחקר הגרמנית &quot;אשכול מינכן למערכות נוירולוגיה (סינרגיה)&quot; ועל ידי קרן דיימלר בנץ לAL

שמירה על האתיקה הניסויים שדווחו בסרטון זה נערכו בהתאם להנחיות לאומיים לשימוש בחיות ניסוי והפרוטוקולים אושרו על ידי הוועדות הממשלתיות הגרמנית (Regierung פון Oberbayern, מינכן, גרמניה). עכברי C57BL/6J 10 שבוע ישן, זכר נמצאים בשימוש במחקר זה. בעלי החיים שוכנו תחת טמפרטורה מבוקרת (22 ± 2 מעלות צלזיוס), עם תקופת 12 שעות אור בחושך מחזור וגישה למזון pelleted וכרצונך מים. שיכוך כאבים והרגעת פרוטוקולים מתוארים כפי שאושרו על ידי הוועדה הממשלתית המקומית, אך עשוי להיות שונה מפרוטוקולים המשמשים במעבדות אחרות. 1. הכנת החומר ומכשירים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר את שמיכת החום על מנת לשמור על אזור הפעולה החם ולשמור על טמפרטורת הגוף של העכבר במהלך ההרדמה (37 מעלות צלזיוס). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מספריים להכין autoclaved, מלקחיים וכותנה, dexpanthמשחה enol העין וחומר תפר. הכן את מזרק עם תמיסת מלח (בלי מחט) כדי לשמור על אזור פעולת התייבשות. הכן את גז ההרדמה (N 70% 2 O + 30% O 2 + isoflurane). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להזריק משככי כאבים intraperitoneally: Metamizol 200 מ&quot;ג / קילוגרם, Carprofen 4 מ&quot;ג / קילוגרם ו0.1 מ&quot;ג / קילוגרם Buprenorphin. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את העכבר בתא האינדוקציה עם קצב זרימת isoflurane של 4% כדי להרדים אותו עד שתנועה ספונטנית של גוף וvibrissae מפסיק. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> העבר את העכבר בעמדה לרוחב עם האף שלה לתוך מסכת ההרדמה ולשמור על ריכוז isoflurane ב 4% לכ עוד דקה, ולאחר מכן להפחית וזה ב% approx.1.5 כדי לשמור על הרדמה מתאימה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החל המשחה העין dexpanthenol בשני העיניים. </li></ol> 2. דגם MCAO דיסטלי <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך בעור 1 סנטימטר בין העין לאוזן באמצעות מספריים פעולה מעט לאחר הכנת aseptical של מנצלים אתר כירורגיתחיטוי עור גרם. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הפרד את העור ומתאים את השרירים זמניים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר במחולל התדר הגבוה תפקוד הקרישה, מצב דו קוטבי, בחר W 12 ולחבר את המלקחיים electrocoagulation עם הכבלים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הוסף טיפה של תמיסת מלח ולהשתמש במלקחיים כדי לנתק את השרירים זמניים מהגולגולת בחלק apical ועל גב שלה, ובכך, מה שהופך את דש שרירים ללא לחלוטין הסרת השריר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> זהה את MCA מתחת לגולגולת השקופה, בחלקו מקורי של האזור הזמני, הגבה לסינוס רטרו מסלולית (איור 2 א). אם הסתעפות MCA אינה גלויה (עקב וריאציה נורמלית אנטומיים) לזהות את הכלי מקורי ביותר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להוסיף קצת מלח על הגולגולת ולדלל את העצם עם המקדחה ממש מעל סניף MCA עד יש לו מרקם דק ושקוף (איור 2). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לסגת בזהירות את העצם מעל העורק עם דקים מאוד מלקחיים. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בחר במצב דו קוטבי in גנרטור בתדירות הגבוה ב7 וו להקריש את העורק עם electrocoagulation מלקחיים הפרוקסימלית ומ דיסטלי להסתעפות (איור 2 ג). כאשר הסתעפות אינה גלויה בשל גרסה אנטומיים, להקריש הסניף זיהה בצורה הנכונה MCA (ראה לעיל) בשני אתרים של כ. מרחק 1 מ&quot;מ. אין צורך לתפוס את העורק עם המלקחיים לקרישה, נוגע בעורק בזהירות עם המלקחיים משני הצדדים מלמעלה מספיק וגורם פחות נזק מכאני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חכה 30 שניות ולגעת בעדינות בעורק עם מלקחיים קהים כדי לבדוק את כל זרימת דם עקב recanalization הספונטנית. במקרה של recanalization לחזור electrocoagulation פעם אחת. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מיקום מחדש של השרירים זמניים לעמדתה, המכסה את החור בר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תפר את הפצע והמקום חי בתיבת סיעוד ב32 ° C להתאושש מהרדמה ולהחזיר אותו לכלוב. באופן כללי זה לוקח 5-10 דק &#39;לבעלי החיים להתאושש מanesthesia. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הזרק שיכוך כאבים לאחר ניתוח (IP) לאחר 24 שעות ולאחר מכן מדי יום עד ליום שלאחר הניתוח החמישי: Carprofen 4 מ&quot;ג / קילוגרם. </li></ol> 3. שאם מבצע לבצע את כל הנהלים באופן זהה לפעולה שתוארה לעיל - כוללים דילול של הגולגולת וההסרה שלה - למעט לא נקרש העורק החשוף. 4. מבחן צילינדר 13 <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את החיה בגליל שקוף אקריליק זכוכית (קוטר: 8 סנטימטר, גובה: 25 סנטימטר) מול שתי מראות וקלטת וידאו במשך 5 דקות. כוון את המצלמה באופן מרכזי מול שתי המראות והגליל להשיג (איור 3 א) וידאו אופטימלי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להערכה של שימוש forelimb עצמאי, ציון (1) קשר של קיר הגליל עם forelimb אחת במהלך אחורי מלא ו (2) נחיתה רק עם אחד forelimb על רצפה אחרי אחורי מלא. לספור לפחות 20 קשר לforelimb אחד באמצעות הילוך איטי או מסגרת לפי frפונקצית ame של לקוח הווידאו Lan (VLC) תוכנה חופשית <a href="http://www.videolan.org/vlc">(http://www.videolan.org/vlc).</a> </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לניתוח בסיסי לפני ניתוח: לבצע את הבדיקה פעמיים בעכבר, עם הפסקת 1 שעות בין ניסויים. שימוש forelimb מבוטא כיחס שימוש forelimb ימין / שמאל צדדי, בלתי תלוי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאחר קרישת MCA: לבצע את הבדיקה שוב פעמיים בעכבר, עם הפסקת 1 שעות בין ניסויים כפי שצוין לעיל. </li></ol> 5. זלוף <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לטשטש את בעלי החיים (למשל, על ידי קטמין ו xylazine 120/16 מ&quot;ג / קילוגרם משקל גוף, בהתאמה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> תקן את החיה במצב שכיבה ולפתוח את חלל הבטן עם חתך החציוני. הסר את הקרעים ועצם החזה. לעשות חתך קטן בעלייה הימנית. הכנס צינורית זלוף בחדר השמאלי ותנקב באיטיות עם 20 מיליליטר של תמיסת מלח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לערוף את החיה, לפתוח את מכסה הגולגולת ובעדינות לנתק את המוח מבסיס הגולגולת. </li><li&gt; להקפיא את המוח בisopentane הקר C ° -40 10 דקות. לאחר מכן להסיר את המוח מisopentane ולאחסן עד לניתוח נוסף ב -80 ° C. </li></ol> 6. האוטם volumetry <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> Cryosectioning: חותכים את המוח באופן סדרתי בcryostat 20 מיקרומטר חלקים עבים מדי 400 מיקרומטר בשקופיות ולאחסן את השקופיות ב -20 ° C. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סגול cresyl מכתים (CV): <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכן את הפתרון מכתים: מערבבים 0.5 גרם של אצטט את קורות חיים ב500 מיליליטר H 2 O. מערבבים וחום (C ° 60) עד גבישים מומסים. תן הפתרון מגניב ולאחסן בבקבוק כהה. לחמם 60 מעלות צלזיוס ומסנן לפני כל שימוש. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ייבש את השקופיות ב RT למשך 30 דקות. הנח אותם ב95% אתנול ל15 דקות ולאחר מכן ב70% אתנול דקות 1 ולאחר מכן ב50% אתנול דקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את השקופיות במים מזוקקים למשך 2 דקות, לרענן מים מזוקקים ולמקם אותם בדקות 1. לאחר מכן מניח את השקופיות בפתרון מכתים f (60 ° C)או 10 דקות ולשטוף אותם פעמיים במים מזוקקים דקות 1. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> מניחים את השקופיות ב95% אתנול למשך 2 דקות. ואז למקם אותם לתוך אתנול 100% למשך 5 דקות, לרענן את 100% אתנול ולמקם אותם בדקות 2. לאחר מכן לכסות את השקופיות עם הרכבה בינונית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> ניתוח: סרוק את השקופיות ולנתח עקיף אוטם הנפח בשיטת סוונסון 14 לתקן לבצקת: (אזור איסכמי) = (אזור Cortex של צד נגדי) - (אזור קליפת המוח ללא איסכמי של צד ipsilateral) (איור 4 א). </li></ol></li></ol>

<ol>
	<li>Donnan, G. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stroke.">Stroke.</a> Lancet. 371, 1612-1623 (2008).</li><li>Di Carlo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Frequency+of+stroke+in+Europe:+A+collaborative+study+of+population-based+cohorts.+ILSA+Working+Group+and+the+Neurologic+Diseases+in+the+Elderly+Research+Group.+Italian+Longitudinal+Study+on+Aging.">Frequency of stroke in Europe: A collaborative study of population-based cohorts. ILSA Working Group and the Neurologic Diseases in the Elderly Research Group. Italian Longitudinal Study on Aging.</a> Neurology. 54, 28-33 (2000).</li><li>Hacke, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Thrombolysis+with+alteplase+3+to+4.5+hours+after+acute+ischemic+stroke.">Thrombolysis with alteplase 3 to 4.5 hours after acute ischemic stroke.</a> N. Engl. J. Med. 359, 1317-1329 (2008).</li><li>Jauch, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+early+management+of+patients+with+acute+ischemic+stroke:+a+guideline+for+healthcare+professionals+from+the+American+Heart+Association/American+Stroke+Association.">Guidelines for the early management of patients with acute ischemic stroke: a guideline for healthcare professionals from the American Heart Association/American Stroke Association.</a> Stroke. 44, 870-947 (2013).</li><li>Longa, E. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversible+middle+cerebral+artery+occlusion+without+craniectomy+in+rats.">Reversible middle cerebral artery occlusion without craniectomy in rats.</a> Stroke. 20, 84-91 (1989).</li><li>Engel, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+stroke+in+mice+-+middle+cerebral+artery+occlusion+with+the+filament+model.">Modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model.</a> J. Vis. Exp. (47), e2423 (2011).</li><li>Zhang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+rat+model+of+thrombotic+focal+cerebral+ischemia.">A new rat model of thrombotic focal cerebral ischemia.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 17, 123-135 (1997).</li><li>Tamura, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Focal+cerebral+ischaemia+in+the+rat:+1.+Description+of+technique+and+early+neuropathological+consequences+following+middle+cerebral+artery+occlusion.">Focal cerebral ischaemia in the rat: 1. Description of technique and early neuropathological consequences following middle cerebral artery occlusion.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 1, 53-60 (1981).</li><li>Chen, S. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+of+focal+ischemic+stroke+in+the+rat:+reproducible+extensive+cortical+infarction.">A model of focal ischemic stroke in the rat: reproducible extensive cortical infarction.</a> Stroke. 17, 738-743 (1986).</li><li>Tureyen, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infarct+volume+quantification+in+mouse+focal+cerebral+ischemia:+a+comparison+of+triphenyltetrazolium+chloride+and+cresyl+violet+staining+techniques.">Infarct volume quantification in mouse focal cerebral ischemia: a comparison of triphenyltetrazolium chloride and cresyl violet staining techniques.</a> J. Neurosci. Methods. 139, 203-207 (2004).</li><li>Carmichael, S. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rodent+models+of+focal+stroke:+size,+mechanism,+and+purpose.">Rodent models of focal stroke: size, mechanism, and purpose.</a> NeuroRx. 2, 396-409 (2005).</li><li>Howells, D. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+strokes+for+different+folks:+the+rich+diversity+of+animal+models+of+focal+cerebral+ischemia.">Different strokes for different folks: the rich diversity of animal models of focal cerebral ischemia.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 30, 1412-1431 (2010).</li><li>Schallert, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CNS+plasticity+and+assessment+of+forelimb+sensorimotor+outcome+in+unilateral+rat+models+of+stroke,+cortical+ablation,+parkinsonism+and+spinal+cord+injury.">CNS plasticity and assessment of forelimb sensorimotor outcome in unilateral rat models of stroke, cortical ablation, parkinsonism and spinal cord injury.</a> Neuropharmacology. 39, 777-787 (2000).</li><li>Swanson, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+semiautomated+method+for+measuring+brain+infarct+volume.">A semiautomated method for measuring brain infarct volume.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 10, 290-293 (1990).</li><li>Kitano, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhalational+anesthetics+as+neuroprotectants+or+chemical+preconditioning+agents+in+ischemic+brain.">Inhalational anesthetics as neuroprotectants or chemical preconditioning agents in ischemic brain.</a> J. Cereb. Blood Flow Metab. 27, 1108-1128 (2007).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+intravenous+recombinant+tissue+plasminogen+activator+on+ischemic+stroke+lesion+size+measured+by+computed+tomography.+NINDS;+The+National+Institute+of+Neurological+Disorders+and+Stroke+(NINDS)+rt-PA+Stroke+Study+Group.">Effect of intravenous recombinant tissue plasminogen activator on ischemic stroke lesion size measured by computed tomography. NINDS; The National Institute of Neurological Disorders and Stroke (NINDS) rt-PA Stroke Study Group.</a> Stroke. 31, 2912-2919 (2000).</li><li>Sowell, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mapping+cortical+change+across+the+human+life+span.">Mapping cortical change across the human life span.</a> Nat. Neurosci. 6, 309-315 (2003).</li><li>Brott, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurements+of+acute+cerebral+infarction:+lesion+size+by+computed+tomography.">Measurements of acute cerebral infarction: lesion size by computed tomography.</a> Stroke. 20, 871-875 (1989).</li><li>Hacke, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malignant'+middle+cerebral+artery+territory+infarction:+clinical+course+and+prognostic+signs.">Malignant' middle cerebral artery territory infarction: clinical course and prognostic signs.</a> Arch. Neurol. 53, 309-315 (1996).</li><li>Majid, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+in+vulnerability+to+permanent+focal+cerebral+ischemia+among+3+common+mouse+strains.">Differences in vulnerability to permanent focal cerebral ischemia among 3 common mouse strains.</a> Stroke. 31, 2707-2714 (2000).</li><li>Liesz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Boosting+regulatory+T+cells+limits+neuroinflammation+in+permanent+cortical+stroke.">Boosting regulatory T cells limits neuroinflammation in permanent cortical stroke.</a> J. Neurosci. 33 (44), 17350-17362 (2013).</li><li>Liesz, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+lymphocyte+trafficking+shields+the+brain+against+deleterious+neuroinflammation+after+stroke.">Inhibition of lymphocyte trafficking shields the brain against deleterious neuroinflammation after stroke.</a> Brain. 134, 704-720 (2011).</li><li>Jones, B. J., Roberts, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+rotarod+suitable+for+quantitative+measurements+of+motor+incoordination+in+naive+mice.">A rotarod suitable for quantitative measurements of motor incoordination in naive mice.</a> Naunyn Schmiedebergs Arch. Exp. Pathol. Pharmakol. 259, 211 (1968).</li><li>Bouet, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+adhesive+removal+test:+a+sensitive+method+to+assess+sensorimotor+deficits+in+mice.">The adhesive removal test: a sensitive method to assess sensorimotor deficits in mice.</a> Nat. Protoc. 4, 1560-1564 (2009).</li><li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+test+for+detecting+long-term+sensorimotor+dysfunction+in+the+mouse+after+focal+cerebral+ischemia.">A test for detecting long-term sensorimotor dysfunction in the mouse after focal cerebral ischemia.</a> J. Neurosci. Methods. 117, 207-214 (2002).</li><li>Orset, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+model+of+in+situ+thromboembolic+stroke+and+reperfusion.">Mouse model of in situ thromboembolic stroke and reperfusion.</a> Stroke. 38, 2771-2778 (2007).</li><li>Farr, T. D., Whishaw, I. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+and+qualitative+impairments+in+skilled+reaching+in+the+mouse+(Mus+musculus)+after+a+focal+motor+cortex+stroke.">Quantitative and qualitative impairments in skilled reaching in the mouse (Mus musculus) after a focal motor cortex stroke.</a> Stroke. 33, 1869-1875 (2002).</li><li>Kassem-Moussa, H., Graffagnino, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nonocclusion+and+spontaneous+recanalization+rates+in+acute+ischemic+stroke:+a+review+of+cerebral+angiography+studies.">Nonocclusion and spontaneous recanalization rates in acute ischemic stroke: a review of cerebral angiography studies.</a> Arch. Neurol. 59, 1870-1873 (2002).</li></ol>

יש המחברים אין אינטרסים מתחרים לחשוף.

הפרוטוקול הנוכחי מתאר את המודל הניסיוני של שבץ דיסטלי MCAO, הקבוע על ידי electrocoagulation transcranial - מה שנקרא &quot;מודל הקרישה&quot;. מודל זה בינתיים הפך לאחד המודלים של בעלי החיים הנפוצים ביותר בשימוש במחקר שבץ ניסיוני 12. לעומת דגמי איסכמיה המוחית המוקדים אחרים, מודל הקרישה כפי שהוצג בסרטון הזה יש את היתרון של זמן פעולה קצר מאוד של כ 10 דקות כאשר היא מבוצעת על ידי מדען מאומן. לפיכך, יכולות להיות מושגת פעמים הרדמה קצרות במודל זה, אשר הוא תכונה חיובית של מודל שבץ ניסיוני בגלל ההשפעה של חומרי הרדמה על תוצאת neuroprotection ושבץ ידועה 15. יתר על כן, כפי שתואר בעבר על ידי קרמייקל ואח&#39;. 11, אנו מאשרים כי כתוצאה אוטם הנפח והלוקליזציה לאחר קרישת MCA הקבועה דיסטלי מתאים לנגעים במוח איסכמי ברוב המכריע של בני אדםמשיכות באופן יחסי לגודל מוח. השבץ המוחי אנושי הוא בעיקר בגודל קטן עם נגעים של כ 5-15% מהאונה, המבוסס על מחקרי אוכלוסייה קודמים וניסויים הדמיה קליניים 16-18, בניגוד לנגעי שבץ נרחבים עם בצקת במוח דחיסה אשר מתרחשים בפחות מ 10% קליני מלטף 19. ובכך, נגעי שבץ בשטח MCA של כ 12% מאונת מושגת על ידי המודל שהוצג יכולים להיחשב רלוונטי translationally נפח פעימה. עם זאת, יש לו שיש לקחת בחשבון שזנים שונים עכבר או פרוטוקולי הרדמה בשימוש עשויים להשפיע על תוצאת נגע 20 הנפח. תמותה במהלך תקופת המעקב אחרי גיוס שבץ במודל זה היא נעדר כמעט. התמותה הכוללת של פחות מ 5% כוללת בעיקר מקרי מוות במהלך המבצע בגלל סיבוכים או הקרבה anesthesiological כי לכת של קריטריוני הכללה. על מנת להצדיק את v הנמוךariability של מודל זה ואת שחזור שלה מעולה, אנו מציעים קריטריוני ההדרה הבאים: 1) כל דימום תת עכבישי במהלך המבצע. 2) בזמן מבצע זמן רב יותר מאשר 15 דקות. 3) recanalization של MCA לאחר שני ניסיונות לelectrocoagulation עם MCAO החולף בלבד. יתר על כן, בעלי חיים, יש לבחון מדי יום לאחר MCAO (התנהגות פיזיולוגית בסיסית, מראה פרווה ומשקל גוף) כדי לשלוט בכאב, אי נוחות או מחלה התנהגות. מספר צעדים יכולים להיות מיושמים לצורך הניתוח של תוצאות שבץ כמו מדידת רבב לייזר, דימות תהודה מגנטית, בדיקות התנהגותיות או ניתוח היסטולוגית. בפרוטוקול זה אנו מספקים שיטות למופת לניתוח התנהגות וניתוח אוטם נפח. כמה מבחן לניתוח התנהגותי לאחר איסכמיה מוחית מוקד פותחו ומשמש במחקר שבץ ניסיוני. בדיקות מתאימות לתפקוד חושי השתמש בעבר על ידי הקבוצה שלנו באנו 21,22 מודל שבץ זהמחדש את מבחן Rotarod 23, בדיקת תווית דביקה 24, מבחן הפינה 25 ובדיקת הצילינדר 13, אשר באה לידי ביטוי בסרט הזה. בדיקת הצילינדר מתארת ​​באופן עקבי סימטריה מוטורית בשלב האקוטי לאחר MCAO קבע דיסטלי וגם מזהה להחזיר רצוף של תפקוד מוטורי. למרות היתרונות ברורים, כמה מגבלות של מודל שבץ זה צריכה להילקח בחשבון. ראשית, בקידוח של הגולגולת נדרש כדי להקריש את העורק, ובכך לייצר גישת פוטנציאל לפרי מבצעי זיהומים של המוח, אם כי זיהומים חיידקיים של פצע הניתוח, שרירים זמניים או המוח עצמו מעולם לא אותרו על ידי עצמנו או שתועד על ידי אחרים באמצעות מודל זה. יתר על כן, נזק מכאני לקליפת המוח במהלך הכנה וקרישה לא ניתן לשלול, אבל יכול להיות מוגבל על ידי קידוח זהיר וההסרה של הגולגולת, humidification המתמיד של האתר כירורגית וne המינימלי<html> electrocoagulation cessary (ראה קריטריוני הדרה). אמנם במהלך MCA כמתואר באיור 2 נמצא ברוב המכריע של C57Bl / 6 עכברים, אנו מתארים בפרוטוקול כיצד להמשיך בוריאציות נורמליות של קורס הכלי כדי למזער את השתנות מודל. יתר על כן, אנו ממליצים על השימוש במספר רב (3 במקרה של הסתעפות; 2 ללא הסתעפות של MCA) אתרי חסימה כדי למזער את הסיכון של recanalization החלקית של MCA, אשר בניסיון שלנו הוא גורם חשוב להשתנות של מודל זה. במונחים של בדיקות התנהגותיות, יכולים להתגלות רק גירעונות התנהגותיים קלים בבדיקות התנהגותיות הנ&quot;ל והתחדשות תפקודית ניתן לצפות בתוך השבוע לאחר אירוע מוחי הראשון. לכן, מערכות בדיקה מתקדמות יותר ברגישות ובפרמטרי בדיקה איכותיות כמו מבחן לכת המיומן 27 גבוהים יותר עשויות להיות מתאימות יותר כדי לזהות תוצאה תפקודית לטווח ארוך במודל זה. ontent &quot;&gt; לבסוף, בשל הקרישה הקבועה של MCA ניתן להשיג שום reperfusion, אשר הוא תכונה שנצפתה באחוז ניכר של חולי שבץ בשל תמוגה קריש הספונטנית או טיפול 28. עם זאת, מודל שבץ תרומבואמבוליים שתואר קודם לכן 26 מספק האפשרות למודל שבץ חינם עם reperfusion של איסכמיה המוחית בקליפת המוח. יחדיו, שחזור הגבוה, התצפית ארוך הטווח האפשרי בשל מינימאלית תמותה ולהשוות אוטם ביחס הנפח והלוקליזציה בגין ללטף אדם להבחין &quot;מודל הקרישה&quot; כמודל יקר ערך למחקר שבץ בסיסי וtranslational.

שבץ הוא הגורם השלישי הנפוץ ביותר למוות ואחד הסיבות העיקריות למוגבלות מבוגרים שנרכשו במדינות מפותחות 1. כ 80% ממחלות נוירולוגיות אקוטיות זה נגרם על ידי איסכמיה המוחית כתוצאה מחסימה של זרימת דם במוח בזמן ש-15% נגרמים על ידי דימום תוך מוחי 2. למרות מחקר מתמשך, עירוי לוריד של activator plasminogen רקמות הוא הטיפול התרופתי המאושר רק לשבץ איסכמי עד כה, וזמין רק למיעוט של חולי שבץ בשל חלון הזמן שאושר הקצר של 4.5 שעות לאחר שבץ תחילת 3,4. מכיוון שאין מודלים חוץ גופית ב, שיכול מודל כראוי את יחסי הגומלין המורכבים שבין המוח, כלי הדם ומנגנוני pathophysiological מערכתיים במהלך שבץ, מודלים של בעלי החיים הם חיוניים למחקר שבץ פרה. לכן, מספר דגמי שבץ איסכמי פותחו בVariאתי של מינים. אחד דגמי השבץ הנפוצים ביותר הוא &quot;מודל נימה&quot; שבו נימה תפר הוא הציג transiently לתוך עורק התרדמה הפנימי ומועבר עד הקצה חוסם את מקורו של עורק המוח האמצעי (MCA), וכתוצאה מעצירה של זרימת דם והאוטם מוחי הבא של גם אזורים בקליפת המוח קורטיקליים ובמקרה של חסימה ממושכת 5,6. בדגמי photothrombotic של שבץ איסכמי, חסימת פוטו של כלי השיט בקליפת המוח המוקרן מושגת לאחר ההזרקה של פוטוסנסיטייזר וכתוצאה מנגעים קטנים, מוגבלים באופן מקומי 7. חסימה הקבועה של דיסטלי MCA של עורקי lenticulostriatal יכולה להיות מושגת על ידי קשירה של העורק, הדחיסה חולפת שלה או על ידי 8,9 קרישה הקבוע. האוטם וכתוצאה מהמודל זה בעיקר משפיע על קליפת המוח 10 בגלל חסימה של MCA במודל זה היא דיסטלי lenticעורקי ulostriatal, המספקים את הגרעינים הבזליים. מאחר שרוב נגעי שבץ אדם נמצאים בטריטוריה של עורק המוח האמצעי, כל דגמי השבץ הנפוצים דומה חסימות של MCA או אחד מענפיו 11. MCA הוא אחד העורקים הראשיים המספק את אספקת דם למוח; זה נובע מעורק התרדמה הפנימי, המסלולים לאורך מענית לרוחב שבו לאחר מכן סניפים ופרויקטים לגרעיני בסיס והמשטחים לרוחב של חזיתי, הקודקודית ואונה הטמפורלית, כולל את המנוע העיקרי וחושית קליפת המוח. ימין ושמאל MCA מחובר לעורקי המוח הקדמי והאחורי תקשורת עורקים, אשר מתחברים לעורקי המוח האחוריים, יוצר מעגל של ויליס (איור 1). כפי שדווח בעבר על ידי קרמייקל ואח&#39;. 11, אוטמים דגם ידי המוח האמצעי Ar דיסטלימודל טרי ספיגה (MCAO) בעכברים להקיף כ 10-15% מחץ הכדור, ובכך מחקה את רוב נגעי שבץ אדם הנמצאים בשטח MCA קליפת המוח 11,12. ב -1981 Tamura et al. תאר מודל קבוע, transcranial MCAO קרישה בחולדות 8. עם זאת, המודל שתואר על ידי Tamura מעורב חסימה הפרוקסימלי של MCA על מנת לעקוף את הסתעפות דיסטלי יותר של העורק. לפיכך, &quot;מודל Tamura&quot; המקורי גורם לנגעים בקליפת המוח, אלא גם של הסטריאטום לא רק, בדומה לנגעים שהושגו על ידי &quot;מודל נימה&quot; 6. כאן, אנו מתארים את מודל MCAO דיסטלי הקבוע על ידי electrocoagulation transcranial בעכברים. בנוסף, אנו מדווחים היסטולוגית קשורים ושיטות פונקציונליות כדי לנתח את תוצאות השבץ המוחי במודל זה. כל השיטות מבוססות על נהלי הפעלה סטנדרטיים שפותחו ושימוש במעבדות שלנו.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="948">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Camera Canon Eos 500D</td>
			<td style="width:224px;">Canon</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:324px;">optics: 18-55 mm; 30 fps; 640x480 video function</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Mirror</td>
			<td style="width:224px;">Kristallform</td>
			<td style="width:119px;">2677089</td>
			<td>30x30 cm&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Transparent acrylic glass cylinder</td>
			<td style="width:224px;">H&#38;S Kunststofftechnik</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>diameter: 8 cm,&#160; height: 25 cm</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Heating blanket</td>
			<td>FHC DC Temperature Controller</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Fine Scissors</td>
			<td style="width:224px;">FST</td>
			<td>15000-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Mayor Scissors</td>
			<td style="width:224px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">1410-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Forceps</td>
			<td style="width:224px;">FST</td>
			<td style="width:119px;">11616-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Cotons</td>
			<td style="width:224px;">NOBA Verbondmitel Danz</td>
			<td style="width:119px;">974116</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Saline solution</td>
			<td style="width:224px;">Braun</td>
			<td style="width:119px;">131321</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Bepanthen pomade</td>
			<td style="width:224px;">Bayer</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Isoflurane</td>
			<td style="width:224px;">Abbot</td>
			<td style="width:119px;">B506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Anesthesia system for isoflurane</td>
			<td>Drager</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Stereomikroskop&#160;</td>
			<td style="width:224px;">Zeiss</td>
			<td>Stemi DV4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Electrosurgical device</td>
			<td colspan="2">ERBETOM ICC 80/50 HF-Chirurgieger&#228;t</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Drill</td>
			<td style="width:224px;">Proxxon&#160;</td>
			<td style="width:119px;">D-34343</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Ketamine</td>
			<td style="width:224px;">Inresa Arzneimittel GmbH</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Xylacine</td>
			<td style="width:224px;">Albrecht</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">5ml Syringe&#160;</td>
			<td style="width:224px;">Braun</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Phosphate Buffered Saline PH: 7,4</td>
			<td>Apotheke Innestadt Uni Munchen</td>
			<td style="width:119px;">P32799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Isopentane</td>
			<td style="width:224px;">Fluka</td>
			<td style="width:119px;">59070</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Cryostat</td>
			<td>Thermo Scientific CryoStarNX70</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Superfrost Plus Slides</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">J1800AMNZ</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Cresyl violet</td>
			<td>Sigma Life Science&#160;</td>
			<td>C5042-10G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Acetic Acid</td>
			<td>Sigma Life Science&#160;</td>
			<td>695092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Ethanol 70%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td>521005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Ethanol 96%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td>522078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Ethanol 99%</td>
			<td>CLN Chemikalien Laborbedorf</td>
			<td style="width:119px;">ETO-5000-99-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">Roti-Histokit mounting medium</td>
			<td style="width:224px;">Roth</td>
			<td style="width:119px;">6638.1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:281px;">C57Bl/6J mice</td>
			<td style="width:224px;">Charles River</td>
			<td style="width:119px;">000664</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

modeling stroke in mice: permanent coagulation of the distal middle cerebral artery

שבץ הוא הגורם השלישי הנפוץ ביותר למוות וגורם עיקרי למוגבלות מבוגרים שנרכשו במדינות מפותחות. אפשרויות טיפוליות מוגבלות בלבד זמינות עבור חלק קטן של חולי שבץ מוחי בשלב האקוטי. מחקר הנוכחי הוא באינטנסיביות בחיפוש אחר אסטרטגיות טיפוליות חדשניות ומתמקד יותר ויותר, כי יותר חולים עשויים להיות זכאים להתערבויות טיפוליות בחלון זמן ממושך בשלב תת אקוטי וכרוני לאחר שבץ. מנגנונים עכבו אלה כוללים מסלולי pathophysiological חשובים כגון דלקת לאחר השבץ, אנגיוגנזה, פלסטיות עצבית והתחדשות. על מנת לנתח את המנגנונים הללו ולהעריך לאחר מכן מטרות תרופה חדשניות, מודלים שבץ ניסיוניים עם הרלוונטיות קלינית, תמותה נמוכה ושחזור גבוה הם חיפשו אחרי. יתר על כן, עכברים הם היונקים הקטנים ביותר שבו יכולה להיגרם פגיעה שבץ מוקד ועבורו קשת רחבה של מודלים מהונדסים הןזמין. לכן, אנו מתארים כאן מודל העכבר של transcranial, קרישה קבועה של עורק המוח האמצעי באמצעות דיסטלי electrocoagulation של עורקי lenticulostriatal, מה שנקרא &quot;מודל הקרישה&quot;. האוטם וכתוצאה מהמודל זה נמצא בעיקר בקליפה; ביחס אוטם הנפח ביחס לגודל המוח תואם את רוב משיכות אנושיות. יתר על כן, המודל עומד בקריטריונים הנ&quot;ל של שחזור ותמותה נמוכה. בסרטון הזה אנחנו מדגימים את השיטות הניתוחיות של אינדוקציה שבץ ב&quot; מודל הקרישה &quot;ולדווח על כלי ניתוח היסטולוגית ופונקציונליים.

בשל הנזק המוחי הקצר ההרדמה זמן ומתון, כ 10 דקות לאחר העברה לכלובים שלהם את כל החיות היו ערה, נעו באופן חופשי בכלוב ואינטראקציה עם המלטה. התמותה במהלך ניתוח MCAO הייתה פחות מ -5%, בעיקר כתוצאה מדימום תת עכבישי בשוגג או הרדמה שגויה. תמותה בזמן תצפית 7 יום אחרי גיוס השבץ מתרחשת רק לעתים נדירות מאוד בכ 1-2% מבעלי החיים. בסדרת הפעולה של 10 חיות לדו&quot;ח זה את כל החיות ששרדו את הניתוח ותקופת המעקב של 7 ימים, אף אחד מהם הייתי צריך להיות שלילי בשל קריטריוני הדרה. גירעונות התנהגות לאחר קרישת MCA הוערכו על ידי בדיקת צילינדר הסימטריה שימוש בכפו 13 ניתוח. בבדיקה זו, היחס בין השימוש בכפו ימני ושמאלי עצמאי נמדד בנקודות זמן המצוינות אחרי גיוס שבץ בהשוואה לערכי בסיס שהושגו 24שעה לפני MCAO (איור 3 ב). בעלי החיים הציגו שינוי משמעותי באסימטריה שימוש איבר לקיר חיפושים בשילוב בשעתי צילינדר מבחן 24 (1.72 ± 0.326; p &lt;0.05) ו -3 ימים (1.36 ± 0.17; p &lt;0.05) לאחר MCAO. למרות שהיחס השתפר במהלך זמן תצפית 1 שבוע, הסימטריה מוטורית עדיין הייתה משמעותית 7 ימים לאחר MCAO (1.35 ± 0.29; p &lt;0.05) בהשוואה לערכי בסיס. ביצענו volumetry אוטם באמצעות סגול cresyl מוכתם חלקים במוח העטרה סידוריים 7 ימים לאחר האינדוקציה שבץ (איור 4). אומר אוטם נפח היה 15.4 מ&quot;מ 3, ובכך מייצג 12% מאונת מוח אחד (איור 4C). ההשתנות של מודל שבץ זה היא נמוך במיוחד עם סטיית תקן של כ 10%. אזור הנגע מקיף החושית והקורטקס מוטורי בחיבה קלה בלבד של מבנים קורטיקליים. יתר על כן, לוקליזציה של האוטםהאזור הוא צפוי מאוד רק עם השתנות מינימאלית כפי שמוצג בתרשים ההפצה סכמטית (איור 4D). <img alt="איור 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51729/51729fig1highres.jpg" width="500" /> איור 1. ייצוג סכמטי של המעגל של ויליס. מעגל העורקים של וויליס נוצר על ידי עורקי המוח האמצעיים (MCA) ועורקי המוח הקדמי (ACA) שענף מעורק התרדמה הפנימי (הרשפ&quot;ת), כמו גם על ידי עורקי מוח אחורי (PCA) ואחורי תקשורת עורקים (PComA). MCA רץ לתוך מענית לרוחב שבו סניפים לקליפת המוח. הסניף הדומיננטי MCA אספקת החלק העיקרי של הקורטקס המוטורי וחלק מהקליפה החושית הוא האפיל באופן קבוע על ידי המודל הפגין (עורק תקשורת Acoma = קדמי; תואר ראשון = עורק basilar; סוכה = cerebel Superior<html> עורק LAR). <img alt="איור 2" fo:content-width="3in" src="/files/ftp_upload/51729/51729fig2highres.jpg" width="400" /> איור 2. תצוגת Transcranial לאחר הסרת השריר הזמני והתצוגה סכמטית של חסימת MCA. (א) לאחר הסרת השריר הזמני ניתן לראות את העורקים בקליפת המוח דרך הגולגולת השקופה באופן חלקי בעכבר (בעכברי 8-12 בן שבוע). סניף MCA הדומיננטי ניתן לזהות בחלק מקורי של התצוגה הזמנית, כמו גם עורקי קליפת המוח נוספים מסתעפים מן MCA וPCA בחלק הזנב. תצוגה (B) סכמטי על ענף MCA הדומיננטי בווריאציה הבולטת שלה עם הסתעפות בקליפת המוח הטמפורלית לרוחב לאחר קידוח חור בר והסרת הגולגולת. (C) ריבועים שחורים מייצגים את אתרי קרישת MCA בצדדים הפרוקסימלית ומ דיסטלי של הסתעפות. = &quot;תמיד&quot;&gt; בעמודים <img alt="איור 3" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/51729/51729fig3highres.jpg" width="500" /> איור 3. ניתוח של גירעונות התנהגותיים. (א) בדיקת צילינדר ההגדרה: העכבר ממוקמת לגליל אנכי ומראות ממוקמות מאחורי כדי לרשום את כל התנועות באמצעות מצלמת וידאו (ב) סימטריה שימוש Forelimb נותחה באמצעות מבחן הצילינדר.. יחסי שמאל / ימין שימוש forelimb העצמאי חושבו 24 שעות לפני MCAO ובנקודתי זמן המצוין אחרי גיוס שבץ. N = 10, * p &lt;0.05 בין נקודת זמן המצוינת ובסיס ערך (שליטה). <img alt="איור 4" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/51729/51729fig4highres.jpg" width="500" /> איור 4. נפחית ניתוח אוטם ותוצאת אוטם לאחר MCAO דיסטלי. (א) תמונה מייצגת של חזיית העטרה מוכתמת סגולה cresylבסעיף 7 ימים לאחר MCAO. הקו הצהוב הוא מעיד על בחירה של קליפת המוח הנגדי (מימין) והקו האדום הוא בחירת הקליפה הלא infarcted (מוכתם) של מוח ipsilateral. האזור החיוור באונה השמאלית מתאר את אזור רקמת infarcted. (ב &#39;) ניתוח אוטם נפח 10 המוח (כל נקודה מייצגת מוח אחד בודד) 24 שעות, 3 ימים ו -7 ימים לאחר קרישת MCA דיסטלי. הקו האדום האופקי מייצג את הממוצע, ברים שגיאה מציינים סטיית תקן. (C) סגול cresyl נציג סעיפים מוכתמים העטרה מוח כל 400 מיקרומטר ב7 ימים לאחר קרישת MCA. הפצה סכמטי של רקמת מוח infarcted 7 ימים לאחר MCAO (ד &#39;). כל שקופית מתארת ​​את המידע שנצבר מהפצה אוטם (צבע מקודד כפי שצוין) בסעיף ניתנו ביחס לגבחת (תמונה שונה מ:. Liesz ואח&#39;, מוח, 2011; על ידי רשות של הוצאת אוניברסיטת אוקספורד). &lt;target = &quot;_blank&quot; href = &quot;https://www.jove.com/files/ftp_upload/51729/51729fig4highres.jpg&quot;&gt; לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

Watch this Scientific Journal Video about Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery at JoVE.com

Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

מודלים עכבריים שונים של חסימת עורק המוח אמצעית (MCAO) נמצאים בשימוש נרחב בחקר המוח ניסיוני. הנה, אנחנו מדגימים את המודל של MCAO דיסטלי הקבוע transcranial אשר מייצר אוטם קליפת המוח עקבי של גודל המתאים לנזק שהוטל על ידי הרוב המכריע של מקרי שבץ איסכמי אנושיים.

דוגמנות שבץ בעכברים: קרישה קבועה של עורקי דיסטלי התיכון מוחין

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical ...

modeling-stroke-mice-permanent-coagulation-distal-middle-cerebral

Research

JoVE Journal

Medicine

36.6K Views.  University Hospital Munich.  מודלים עכבריים שונים של חסימת עורק המוח אמצעית (MCAO) נמצאים בשימוש נרחב בחקר המוח ניסיוני. הנה, אנחנו מדגימים את המודל של MCAO דיסטלי הקבוע transcranial אשר מייצר אוטם קליפת המוח עקבי של גודל המתאים לנזק שהוטל על ידי הרוב המכריע של מקרי שבץ איסכמי אנ?...

Video: Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are very limited. To meet the need for novel therapeutic approaches, experimental stroke research frequently employs rodent models of focal cerebral ischaemia. Most researchers use permanent or transient occlusion of the middle cerebral artery (MCA) in mice or rats.
Proximal occlusion of the middle cerebral artery (MCA) via the intraluminal suture technique (so called filament or suture model) is probably the most frequently used model in experimental stroke research. The intraluminal MCAO model offers the advantage of inducing reproducible transient or permanent ischaemia of the MCA territory in a relatively non-invasive manner. Intraluminal approaches interrupt the blood flow of the entire territory of this artery. Filament occlusion thus arrests flow proximal to the lenticulo-striate arteries, which supply the basal ganglia. Filament occlusion of the MCA results in reproducible lesions in the cortex and striatum and can be either permanent or transient. In contrast, models inducing distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA occlusion typically spare the striatum and primarily involve the neocortex. In addition these models do require craniectomy. In the model demonstrated in this article, a silicon coated filament is introduced into the common carotid artery and advanced along the internal carotid artery into the Circle of Willis, where it blocks the origin of the middle cerebral artery. In patients, occlusions of the middle cerebral artery are among the most common causes of ischaemic stroke. Since varying ischemic intervals can be chosen freely in this model depending on the time point of reperfusion, ischaemic lesions with varying degrees of severity can be produced. Reperfusion by removal of the occluding filament at least partially models the restoration of blood flow after spontaneous or therapeutic (tPA) lysis of a thromboembolic clot in humans.
In this video we will present the basic technique as well as the major pitfalls and confounders which may limit the predictive value of this model.

Filamentous occlusion of the Middle cerebral artery is a common model for studying ischemic stroke in mice.

דוגמנות שבץ בעכברים - העורקים התיכון ספיגה מוחין עם דגם נימה

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

עכבר דגם ספיגה התיכון עורק מוחי

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United States in 20091,2. The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model was developed by Koizumi4 in 1986 to simulate this 
impactful human pathology in the rat. A modification of the MCAO method was later presented by Longa3. Both techniques have been widely used to identify 
molecular mechanisms of brain injury resulting from ischemic stroke and potential therapeutic modalities5. This relatively noninvasive method in rats has been 
extended to use in mice to take advantage of transgenic and knockout strains6,7. To model focal cerebral ischemia, an intraluminal suture is advanced via 
the internal carotid artery to occlude the base of the MCA. Retracting the suture after a specified period of time mimics spontaneous reperfusion, but the 
suture can also be permanently retained. This video will be demonstrating the two major approaches for performing intraluminal MCAO procedure in mice in a 
stepwise fashion, as well as providing insights for potential drawbacks and pitfalls. The ischemic brain tissue will subsequently be stained by 
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to evaluate the extent of cerebral infarction8.

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is the most frequent used model among experimental ischemic stroke models. Here we will demonstrate the entire model in detail with the guide of Laser Doppler flowmetry, and its representative results.

Intraluminal העורקים התיכון מוחין ספיגה (MCAO) מודל שבץ איסכמי עם הדרכה דופלר Flowmetry לייזר עכברים

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to develop suitable animal models to study the events that unfold during ischemic insult. These techniques include transient or permanent, focal or global ischemia models using many different animal models, with the most common being rodents.
The permanent MCA ligation method which is also referred as pMCAo in the literature is used extensively as a focal ischemia model in rodents 1-6. This method was originally described for rats by Tamura et al. in 1981 7. In this protocol a craniotomy was used to access the MCA and the proximal regions were occluded by electrocoagulation. The infarcts involve mostly cortical and sometimes striatal regions depending on the location of the occlusion. This technique is now well established and used in many laboratories 8-13. Early use of this technique led to the definition and description of &#x201C;infarct core&#x201D; and &#x201C;penumbra&#x201D; 14-16, and it is often used to evaluate potential neuroprotective compounds 10, 12, 13, 17. Although the initial studies were performed in rats, permanent MCA ligation has been used successfully in mice with slight modifications 18-20 .
This model yields reproducible infarcts and increased post-survival rates. Approximately 80% of the ischemic strokes in humans happen in the MCA area 21 and thus this is a very relevant model for stroke studies. Currently, there is a paucity of effective treatments available to stroke patients, and thus there is a need for good models to test potential pharmacological compounds and evaluate physiological outcomes. This method can also be used for studying intracellular hypoxia response mechanisms in vivo. 
Here, we present the MCA ligation surgery in a C57/BL6 mouse. We describe the pre-surgical preparation, MCA ligation surgery and 2,3,5 Triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining for quantification of infarct volumes.

Middle cerebral artery (MCA) ligation is a technique to study focal cerebral ischemia in animal models. In this method, the middle cerebral artery is exposed by craniotomy and ligated by cauterization. This method gives highly reproducible infarct volumes and increased post-operative survival rates compared to other methods available.

היישום של קשירת העורקים התיכון הקבע מוחין העכבר

Focal cerebral ischemia is among the most common type of stroke seen in patients. Due to the clinical significance there has been a prolonged effort to ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in 20091, 2. Several models of cerebral ischemia have been developed to mimic the human condition of stroke. It has been suggested that up to 80% of all strokes result from ischemic damage in the middle cerebral artery (MCA) area3. In the early 1990s, endothelin-1 (ET-1) 4 was used to induce ischemia by applying it directly adjacent to the surface of the MCA after craniotomy. Later, this model was modified 5 by using a stereotaxic injection of ET-1 adjacent to the MCA to produce focal cerebral ischemia. The main advantages of this model include the ability to perform the procedure quickly, the ability to control artery constriction by altering the dose of ET-1 delivered, no need to manipulate the extracranial vessels supplying blood to the brain as well as gradual reperfusion rates that more closely mimics the reperfusion in humans5-7. On the other hand, the ET-1 model has disadvantages that include the need for a craniotomy, as well as higher variability in stroke volume8. This variability can be reduced with the use of laser Doppler flowmetry (LDF) to verify cerebral ischemia during ET-1 infusion. Factors that affect stroke variability include precision of infusion and the batch of the ET-1 used6. Another important consideration is that although reperfusion is a common occurrence in human stroke, the duration of occlusion for ET-1 induced MCAO may not closely mimic that of human stroke where many patients have partial reperfusion over a period of hours to days following occlusion9, 10. This protocol will describe in detail the ET-1 induced MCAO model for ischemic stroke in rats. It will also draw attention to special considerations and potential drawbacks throughout the procedure.

Several animal models of cerebral ischemia have been developed to simulate the human condition of stroke. This protocol describes the endothelin-1 (ET-1) induced middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke in rats. In addition, important considerations, advantages, and shortcomings of this model are discussed.

אנדותלין-1 דגם מושרה מזרח מוחות עורקים ספיגים לשבץ איסכמי עם הדרכת Flowmetry ליזר דופלר בעכברוש

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be performed in many locations overlying the rat cerebrum, but is most easily carried out by creating a craniectomy over the readily accessible frontal or parietal bones. Most frequently, we have used this technique in combination with the endothelin-1 middle cerebral artery occlusion model of ischemic stroke to quantify the changes in middle cerebral artery vessel diameter that occur with injection of endothelin-1 into the brain parenchyma adjacent to the proximal MCA4, 5. In order to visualize the proximal portion of the MCA during endothelin -1 induced MCAO, we use a technique to create a cranial window through the temporal bone on the lateral aspect of the rat skull (Figure 1). Cerebral arteries can be visualized either with the dura intact or with the dura incised and retracted. Most commonly, we leave the dura intact during visualization since endothelin-1 induced MCAO involves delivery of the vasoconstricting peptide into the brain parenchyma. This bypasses the need to incise the dura directly over the visualized vessels for drug delivery. This protocol will describe how to create a cranial window to visualize cerebral arteries in a step-wise fashion, as well as how to avoid many of the potential pitfalls pertaining to this method.

This article describes a method for visualizing rat cerebral arteries through a cranial window using temporal craniectomy in order to view proximal portions of the middle cerebral artery (Figure 1). This versatile method can be combined with various techniques of drug delivery to measure cerebral artery reactivity in vivo.

ניצול חלון גולגולת לדמיין עורק המוח האמצעי במהלך ספיג אנדותלין-1 מושרה מזרח מוחות עורקים

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal models of acute ischemic stroke allows to confirm successful arterial occlusion and exclude subarachnoid hemorrhage. Cerebral perfusion monitoring can also be used to study intracranial collateral circulation, which is emerging as a powerful determinant of stroke outcome and a possible therapeutic target. Despite a recognized role of Laser Doppler perfusion monitoring as part of the current guidelines for experimental cerebral ischemia, a number of technical difficulties exist that limit its widespread use. One of the major issues is obtaining a secure and prolonged attachment of a deep-penetration Laser Doppler probe to the animal skull. In this video, we show our optimized system for cerebral perfusion monitoring during transient middle cerebral artery occlusion by intraluminal filament in the rat. We developed in-house a simple method to obtain a custom made holder for twin-fibre (deep-penetration) Laser Doppler probes, which allow multi-site monitoring if needed. A continuous and prolonged monitoring of cerebral perfusion could easily be obtained over the intact skull.

Cerebral perfusion monitoring has been demonstrated to improve accuracy in ischemic stroke models. Technical difficulties often limit the use of this essential tool for cerebrovascular research. In this video, an optimized system is shown to obtain a single or multi-site hemodynamic monitoring during intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.

מערכת אופטימלית לניטור זלוף מוחות במודל שבץ העכברוש של חסימת עורק מוח האמצעית intraluminal

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic stroke. However, the use of tPA is limited by its narrow therapeutic window and by increased risk of hemorrhagic transformation. There is an urgent need to develop suitable stroke models to study new thrombolytic agents and strategies for treatment of ischemic stroke. At present, two major types of ischemic stroke models have been developed in rats and mice: intraluminal suture MCAO and embolic MCAO. Although MCAO models via the intraluminal suture technique have been widely used in mechanism-driven stroke research, these suture models do not mimic the clinical situation and are not suitable for thrombolytic studies. Among these models, the embolic MCAO model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical investigation of thrombolytic therapy. This embolic model was first developed in rats by Overgaard et al.1 in 1992 and further characterized by Zhang et al. in 19972. Although embolic MCAO has gained increasing attention, there are technical problems faced by many laboratories. To meet increasing needs for thrombolytic research, we present a highly reproducible model of embolic MCAO in the rat, which can develop a predictable infarct volume within the MCA territory. In brief, a modified PE-50 tube is gently advanced from the external carotid artery (ECA) into the lumen of the internal carotid artery (ICA) until the tip of the catheter reaches the origin of the MCA. Through the catheter, a single homologous blood clot is placed at the origin of the MCA. To identify the success of MCA occlusion, regional cerebral blood flow was monitored, neurological deficits and infarct volumes were measured. The techniques presented in this paper should help investigators to overcome technical problems for establishing this model for stroke research.

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.

עורקי תסחיפים התיכון מוחין ספיגה (MCAO) לשבץ איסכמי עם קרישי דם הומולוגיים בחולדות

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Quantification of Neurovascular Protection Following Repetitive Hypoxic Preconditioning and Transient Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week protocol for repetitive hypoxic preconditioning (RHP) induces long-term protection against central nervous system (CNS) injury in a mouse model of focal ischemic stroke. RHP consists of 9 stochastic exposures to hypoxia that vary in both duration (2 or 4 hr) and intensity (8% and 11% O2). RHP reduces infarct volumes, blood-brain barrier (BBB) disruption, and the post-stroke inflammatory response for weeks following the last exposure to hypoxia, suggesting a long-term induction of an endogenous CNS-protective phenotype. The methodology for the dual quantification of infarct volume and BBB disruption is effective in assessing neurovascular protection in mice with RHP or other putative neuroprotectants. Adult male Swiss Webster mice were preconditioned by RHP or duration-equivalent exposures to 21% O2 (i.e. room air). A 60 min transient middle cerebral artery occlusion (tMCAo) was induced 2 weeks following the last hypoxic exposure. Both the occlusion and reperfusion were confirmed by transcranial laser Doppler flowmetry. Twenty-two hr after reperfusion, Evans Blue (EB) was intravenously administered through a tail vein injection. 2 hr later, animals were sacrificed by isoflurane overdose and brain sections were stained with 2,3,5- triphenyltetrazolium chloride (TTC). Infarcts volumes were then quantified. Next, EB was extracted from the tissue over 48 hr to determine BBB disruption after tMCAo. In summary, RHP is a simple protocol that can be replicated, with minimal cost, to induce long-term endogenous neurovascular protection from stroke injury in mice, with the translational potential for other CNS-based and systemic pro-inflammatory disease states.

This protocol describes repetitive hypoxic preconditioning, or brief exposures to systemic hypoxia that reduce infarct volumes and blood-brain barrier disruption following transient middle cerebral artery occlusion in mice. It also details dual quantification of infarct volume and blood-brain barrier disruption after stroke to assess the efficacy of neurovascular protection.

כימות של הגנת עצבים וכלי דם בעקבות חסימת עורק חוזר חוסר חמצן אכשור קד וחלוף התיכון מוחין של עכברים

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week ...

Performing Permanent Distal Middle Cerebral with Common Carotid Artery Occlusion in Aged Rats to Study Cortical Ischemia with Sustained Disability

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, obesity and diabetes. Accordingly, when evaluating therapies for stroke in animals, it is important to select a model with excellent face validity. Ischemic stroke accounts for 80% of all strokes, and the majority of these occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA), often inducing infarcts that affect the sensorimotor cortex, causing persistent plegia or paresis on the contralateral side of the body. We demonstrate in this video a method for producing ischemic stroke in elderly rats, which causes sustained sensorimotor disability and substantial cortical infarcts. Specifically, we induce permanent distal middle cerebral artery occlusion (MCAO) in elderly female rats by using diathermy forceps to occlude a short segment of this artery. The carotid artery on the ipsilateral side to the lesion was then permanently occluded and the contralateral carotid artery was transiently occluded for 60 min. We measure the infarct size using structural T2-weighted magnetic resonance imaging (MRI) at 24 hr and 8 weeks after stroke. In this study, the mean infarct volume was 4.5% &#177; 2.0% (standard deviation) of the ipsilateral hemisphere at 24 hr (corrected for brain swelling using Gerriet&#8217;s equation, n = 5). This model is feasible and clinically relevant as it permits the induction of sustained sensorimotor deficits, which is important for the elucidation of pathophysiological mechanisms and novel treatments.

Here we present a protocol to produce permanent distal middle cerebral artery occlusion in elderly female rats with simultaneous occlusion of the carotid arteries to generate large cortical infarcts and sustained deficits. We show confirmation of the lesion size using structural MRI at 24 hr and 8 weeks after stroke.

Performing מוחות תיכונים דיסטלי קבוע עם ספיגה עורקת Common הראש אצל חולדות בנים לחקר קורטיקלי איסכמיה עם נכות קבועה זה

Stroke typically occurs in elderly people with a range of comorbidities including carotid (or other arterial) atherosclerosis, high blood pressure, ...