The authors have nothing to disclose.

Tüm prosedürler ve davranışsal test bakımı ve deney hayvanlarının kullanımı için Hayvan Bakım kurallarına için Kanadalı Konseyi ile uyumlu olduğunu protokol numarası 06-11-12 altında MacEwan Üniversitesi Hayvan Araştırmaları Etik Kurulu tarafından onaylanmıştır. 1. Doz Tankları, Çözümler ve Yönetim takvimi hazırlayın <ol><li> Hayvanlar aynı ortamda ve görsel uyaranlara zaman ya da itme düzeneğinin herhangi bir boşa önlemek için günün aynı süre içinde dozlanır şekilde bir uygulama program hazırlanması. </li><li> Grup boyutları sayısı için gerektiği kadar özdeş, 1.5 L, şeffaf polipropilen yumurtlama tankları edinin. Balık 2 grup sağlar tank başına 8 balık, kullanımı grupları prosedürü daha sonra günde test edilmesi (basamak 3). Bir tutma tankı ve grup başına bir dozlama tankı (grup 2x toplam sayısı) kullanın. <ol><li> Tüm tanklarında 400 mikron yumurtlama yerlefltirmede. Fhasta yaşam su veya doğru sıcaklıkta osmoz su ters ile tankları (Zebra balığı için, 25-28 ° C) sıcaklık balık ile tutarlı normalde yer alırlar. Not: bazı ilaçların ve tamponlanmış yaşam suyun kimyasal bileşenleri arasında istenmeyen kimyasal etkileşimler olabilir. Bu durumda, ters ilaç verilmesi için en az bir ya da akvaryum tuzları ile tamponlanmış ozmoz su, yanı sıra kontrol gruplar kullanılır. </li><li> Tanklar dozlama sırasında dış görsel uyaranlara klima balık önlemek için nötr ortamda olduğunuzdan emin olun. </li></ol></li><li> İlaç çözeltisi hazırlayın. Yumurtlama tanklarda yaşam su ile ilacın uygun miktarda karıştırın. Su 1497 ml olan yüksek seviyede dereceli etanol (% 95 denatüre edilmiş etanol) 3 ml birleştirerek% 0.2 etanol çözeltisi hazırlayın. Su 1479 ml etanol ve 21 ml birleştirerek% 1.4 etanol çözeltisi hazırlayın. </li></ol> 2. netleştirilmesine Balık ve Et-metanol Yönetimi Prosedürü <ol><li> Dikkatle net habitat tanklardan balık ve yumurtlama parçayı içeren uygun tutma tankına transferi. İdeal olarak, tamamen örgü ortadan kaldırmak için yumurtlama ekine balık ev. </li><li> Kendi tutma tanklardaki tüm balık, hafifçe yumurtlama tankından dışarı yerleştirin ve uygun ilaç solüsyon tankı (Şekil 1A) içine yerleştirin kaldırın. <ol><li> Gerektiği gibi dozaj zamanını kaydedin. Burada tarif edilen prosedüre için etanol çözeltisi içinde 30 dakika kullanın. </li><li> Mümkünse, asistanlar hassas dozlama süresi sağlamak için aynı anda ilaç çözüm tüm deney gruplarının transferi ile yardım var. Alternatif olarak, bir seferde bir grup transferi ve bireysel grupların dozaj kez (Şekil 1A) izlemenize. </li></ol></li><li> Gerekli dozaj lama dönemi sonunda, dikkatli bir şekilde yumurtlama inserti kaldırarak etanol çözeltisinden balık kaldırmailaç solüsyonu ve nazikçe geri tutma tankına yerleştirerek dışarı. </li><li> Tutma tankları balık ve sonraki zamanlanmış dozlama süresi kadar geri onların yaşam alanlarına yerleştirmek, ya da yumurtlama filelere ortadan kaldırmak için geri tutma tankına eklemek yerleştirin yavaşça net. </li><li> Hayvan barınma ekipman, ev tutma tankı olarak kullanılan aynı tankı ve yumurtlama astar içinde hayvanlar parametreleri içinde, daha önce, mümkünse de belirtildiği gibi. Bu uygulama prosedürü sırasında tamamen filelere ortadan kaldıracaktır. </li></ol> 3. Hareket Testleri <ol><li> Uzun 55 cm ve beyaz bir su geçirmez kat (Şekil 1B) ile derin 9.5 cm 9.5 cm genişliğinde bir aydınlık / karanlık arena edinin. Arenada beyaz kaplı ve yarı siyah kaplı yarısı, cırt kullanarak arena iç duvarları beyaz ve siyah su geçirmez yansıtıcı olmayan kağıt yapıştırmayın. 25-28 ° C arasındaki bir sıcaklıkta yaşam su ile 5 cm derinliğe kadar arena doldurun. BakımTest boyunca bu sıcaklık değilim. </li><li> Arena içinde yer alan için bir beyaz üç-taraflı muhafaza oluşturarak dış görsel uyaranlara minimalize. Test alanı su yüzeyinde yansımaları neden olmaz üstten ışıklandırma yaygın olan, henüz yeterince hareket izleme yazılımı, ya da yazı için parlak olduğundan emin olun video görüntüleri -hoc manuel sayısallaştırma. </li><li> Muhafazaya arena yerleştirin ve davranış izleme yazılımı kayıt ve hareket analiz parametrelerini ayarlamak. Araştırma sorusu bağlı olarak, 5-15 dakika için deneme süresini ayarlayın. NOT: Burada, biz 5 dakika kullanılır. </li><li> Balık grup yaşam tankında araştırma alanına test edilecek ulaşım ve arena muhafazanın dışında koyun. 10 dakika süre ile balık alıştırıldı. </li><li> Açık / koyu arena merkezinde uygun grup ve yerden yavaşça net bir balık, bu Avo için arena uzun eksenine paralel olduğunda balık açıklaması için emin olmakışık veya karanlık bölgeye balık kutuplama kimliği. </li><li> Hayvan yayımlandıktan hemen sonra kayıt davranışı başlar. Balık izleme veya balık atlama veya dondurulması için herhangi bir yazılım sorunları için izleyin. Konuların yarısı nedeniyle arena sonu muhafazanın açık ucuna doğru yönlendirilmiş olan kaynaklanan önyargıları herhangi boşa önlemek için test edildikten sonra, Arena 180 ° döndürün. </li><li> Deneme, hafifçe net sona erdi ve bir tanktan ya da yaşam tankına arenada balık çıkarın sonra. </li></ol> 4. Analiz <ol><li> Karanlık bölgelerde ışığa karşı harcanan zamanı inceleyin. Her yaş grubu ve her balık için, ışık ve karanlık bölgelerinde harcanan göreli bir zaman alması ve bir örnek t-testi kullanılarak analiz (veya Wilcoxon parametrik veriler için rank testi imzalı; fark, toplam deneme süresinin (yarım) 150 sn den) gruplar arasında anlamlı diğeri üzerinde bir bölgesini tercih olmadığını belirlemek için. </li><li> Bir prefe hesaplamak, tercihlerini karşılaştırmak içinkaranlık bölgede harcanan zaman ışık bölgesinde geçirdi ve gruplar arasındaki farklılıkları karşılaştırmak zaman çıkarılarak rekürensinden indeksi. t testleri iki grup karşılaştırmak için kullanılabilir. Tukey HSD post hoc testi kullanılarak varyans tek yönlü analizi ile birden fazla grubu karşılaştırmak gerektiğinde (Dunn çoklu karşılaştırma parametrik olmayan veriler için post hoc testi ile ya da Kruskal-Wallis testi). </li><li> Gruplar arasında hız, kıvrımlı bölge geçişler, sayısı ve hareketsizlik karşılaştırın. Tukey HSD post hoc testi kullanılarak varyansın tek-yönlü analizi kullanın gerektiğinde (Dunn çoklu karşılaştırma parametrik olmayan veriler için post hoc testi ile ya da Kruskal-Wallis testi). </li></ol>

<ol>
	<li>Spence, R., Gerlach, G., Lawrence, C., Smith, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+behaviour+and+ecology+of+the+zebrafish,+Danio+rerio.">The behaviour and ecology of the zebrafish, Danio rerio.</a> Biological Reviews. 83 (1), 13-34 (2008).</li><li>Langheinrich, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish:+A+new+model+on+the+pharmaceutical+catwalk.">Zebrafish: A new model on the pharmaceutical catwalk.</a> BioEssays. 25 (9), 904-912 (2003).</li><li>Santoriello, C., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hooked!+Modeling+human+disease+in+zebrafish.">Hooked! Modeling human disease in zebrafish.</a> Journal of Clinical Investigation. 122 (7), 2337-2343 (2012).</li><li>Miller, N., Greene, K., Dydinski, A., Gerlai, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+nicotine+and+alcohol+on+zebrafish+(+Danio+rerio)+shoaling.">Effects of nicotine and alcohol on zebrafish ( Danio rerio) shoaling.</a> Behavioural brain research. , (2012).</li><li>Bencan, Z., Sledge, D., Levin, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Buspirone,+chlordiazepoxide+and+diazepam+effects+in+a+zebrafish+model+of+anxiety.">Buspirone, chlordiazepoxide and diazepam effects in a zebrafish model of anxiety.</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. 94 (1), 75-80 (2009).</li><li>Holcombe, A., Howorko, A., Powell, R. A., Schalomon, M., Hamilton, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversed+Scototaxis+during+Withdrawal+after+Daily-Moderate,+but+Not+Weekly-Binge+Administration+of+Ethanol+in+Zebrafish.">Reversed Scototaxis during Withdrawal after Daily-Moderate, but Not Weekly-Binge Administration of Ethanol in Zebrafish.</a> PLoS ONE. 8 (5), (2013).</li><li>Mathur, P., Guo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+of+acute+versus+chronic+ethanol+exposure+on+anxiety-like+behavioral+responses+in+zebrafish.">Differences of acute versus chronic ethanol exposure on anxiety-like behavioral responses in zebrafish.</a> Behavioural Brain Research. 219 (2), 234-239 (2011).</li><li>Dlugos, C., Rabin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethanol+effects+on+three+strains+of+zebrafish:+model+system+for+genetic+investigations.">Ethanol effects on three strains of zebrafish: model system for genetic investigations.</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. , (2003).</li><li>Maximino, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scototaxis+as+anxiety-like+behavior+in+fish.">Scototaxis as anxiety-like behavior in fish.</a> Nature Protocols. 5 (2), 209-216 (2010).</li><li>Gerlai, R., Lee, V., Blaser, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+acute+and+chronic+ethanol+exposure+on+the+behavior+of+adult+zebrafish+(Danio+rerio).">Effects of acute and chronic ethanol exposure on the behavior of adult zebrafish (Danio rerio).</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. 85 (4), 752-761 (2006).</li><li>Egan, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+behavioral+and+physiological+phenotypes+of+stress+and+anxiety+in+zebrafish.">Understanding behavioral and physiological phenotypes of stress and anxiety in zebrafish.</a> Behavioural brain research. 205 (1), 38-44 (2009).</li><li>Gebauer, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+anxiolytics+in+zebrafish:+Similarities+and+differences+between+benzodiazepines,+buspirone+and+ethanol.">Effects of anxiolytics in zebrafish: Similarities and differences between benzodiazepines, buspirone and ethanol.</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. 99 (3), 480-486 (2011).</li><li>Serra, M. C., Mattioli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+preference+of+zebrafish+(Danio+rerio)+for+a+dark+environment.">Natural preference of zebrafish (Danio rerio) for a dark environment.</a> Braz J Med Biol Res. 32 (12), 1551-1553 (1999).</li><li>Maximino, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+and+neurochemical+changes+in+the+zebrafish+leopard+strain.">Behavioral and neurochemical changes in the zebrafish leopard strain.</a> Genes Brain Behav. 12 (5), 576-582 (2013).</li><li>Levin, E. D., Bencan, Z., Cerutti, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anxiolytic+effects+of+nicotine+in+zebrafish.">Anxiolytic effects of nicotine in zebrafish.</a> Physiology &amp; Behavior. 90 (1), 54-58 (2007).</li><li>Gerlai, R., Chatterjee, D., Pereira, T., Sawashima, T., Krishnannair, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+and+chronic+alcohol+dose:+population+differences+in+behavior+and+neurochemistry+of+zebrafish.">Acute and chronic alcohol dose: population differences in behavior and neurochemistry of zebrafish.</a> Genes, Brain and Behavior. 8 (6), 586-599 (2009).</li><li>Mathur, P., Berberoglu, M. A., Guo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preference+for+ethanol+in+zebrafish+following+a+single+exposure.">Preference for ethanol in zebrafish following a single exposure.</a> Behavioural Brain Research. 217 (1), 128-133 (2011).</li><li>Renninger, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+the+genetics+of+visual+processing,+function+and+behaviour+in+zebrafish.">Investigating the genetics of visual processing, function and behaviour in zebrafish.</a> Neurogenetics. 12, 97-116 (2011).</li><li>Crawshaw, L. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerance+and+withdrawal+in+goldfish+exposed+to+ethanol.">Tolerance and withdrawal in goldfish exposed to ethanol.</a> Physiology &amp; Behaviour. 87 (3), 460-468 (2006).</li><li>Hamilton, T. J., Holcombe, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tresguerres,+M.CO2-induced+ocean+acidification+increases+anxiety+in+rockfish+via+alteration+of+GABAA+receptor+functioning.">Tresguerres, M.CO2-induced ocean acidification increases anxiety in rockfish via alteration of GABAA receptor functioning.</a> Proceedings of the Royal Society B. , (2014).</li><li>Ramsay, J. M., Feist, G. W., Varga, Z. M., Westerfield, M., Kent, M. L., Schreck, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-body+cortisol+response+of+zebrafish+to+acute+net+handling+stress.">Whole-body cortisol response of zebrafish to acute net handling stress.</a> Aquaculture. 297 (1-4), 157-164 (2009).</li><li>Hamilton, T. J., Paz-Yepes, J., Morrison, R. A., Palenik, B., Tresguerres, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exposure+to+bloom-like+concentrations+of+two+marine+Synechococcus+cyanobacteria+(strains+CC9311+and+CC9902)+differentially+alters+fish+behaviour.">Exposure to bloom-like concentrations of two marine Synechococcus cyanobacteria (strains CC9311 and CC9902) differentially alters fish behaviour.</a> Conservation Physiology. 2 (1), (2014).</li></ol>

Yazarlar Şekil 1 için kullanılan onun fotoğraf ekipmanı kullanımı için Joshua Gallup kabul. Bu çalışma (TJH için) Doğal Bilimler ve Mühendislik Araştırma Konseyi (NSERC) Kanada Discovery hibe ile desteklenmiştir.

Zebra balığı ilaç verilmesini içeren önceki çalışmalarda sadece ilaç solüsyonu 12,16 içine kendi tankından onları taşımak için balık filelere dayanmıştır. Netleştirme her zaman tutarlı değildir ve genellikle nedeniyle önemli bireysel değişkenlik zebrabalıkları, bir kaçış tepkisi beklenenden daha uzun sürer. Geleneksel transfer yöntemleri, yararlı ise de, balık, su dışında geçirmek toplam süreyi azaltarak, hem de hayvanlar arasındaki aktarım süresi değişkenlik mikt...

Zebra balığı (Danio rerio) davranışsal 1 ve tıbbi araştırma 2,3 için yararlı bir model organizmadır Hindistan&#39;da menşeli küçük bir teleost türdür. Balığı, sık davranışı üzerindeki etkilerini karakterize etmek amacıyla, çeşitli farmakolojik maddeler test kullanılır. Çeşitli dozlarda ve ilaç programları gibi uyarıcılar 4, anksiyolotikler 5 ve etanol 6-8 gibi bileşiklerin uygulanmasından sonra zebrafish davranışlarını araştırmak için kullanılmıştır. Bizim laboratuvar da yaygın scototaxic deneyi olarak adlandırılan iyi valide açık / koyu tahlil 9, 20, zebrafish anksiyete ve lokomosyon etanol idarenin programları farklı etkilerini araştırmıştır. Etanol uygulama yeni bir yöntem uzun bir zaman periyodu (21 gün) üzerinde 6 tekrarlayan, günlük uygulama için verimliliğini artırmak için geliştirilmiştir </s&gt; kadar. Daha önce kullanılan yöntemler ancak, biz ilişkili zaman maliyetleri ile, örgü azaltılmış bir yöntem geliştirmek için çalıştı, ve balık çok sayıda ilgi ilacın eşzamanlı, tam zamanlı yönetimini izin, pratik. Geleneksel araştırma kullanılarak, etanol içindeki, zebra balığı halinde ve etanol ve su 12/10 ve uygun bir karışım ihtiva eden başka bir tanka aktarılır. Bu yöntem yaygın olarak kabul iken, Zebra balığı örgü tanıtmak ve ilaç çözeltisinden balık kaldırmak için alınan zaman içinde değişkenlik artabilir. Bu nedenle, söz konusu bileşik için tam maruz tekrarlanan doz içeren bir deney boyunca değişebilir. Taşıma zamanlarda değişkenlik kaynaklanan hata kaynaklarını azaltan bir yöntem arzu edilir. Bizim yöntemi ile her balık özdeş dozlama süresi sonuçlanan, aynı anda tüm balık hareket edebiliyoruz. (Burada anlatıldığı gibi), etanol maruz kalmasını takiben, zebra balığı bir numbe test edilebilirkaygıyı ölçmek de dahil olmak üzere davranışsal deneyleri, r. Yeni yöntemi kullanarak balık grupları dozaj doğru çoğaltmak ve balık grupları konular arasında ve genelinde dozlama standardize etmek yeteneği ötesinde pratik kullanımları vardır. Araştırmacılar kendi deneylerde tekrarlanabilirliği ve doğruluğunu sağlamak için yöntemler kullanabilir görebilirsiniz seferde birden fazla balık takibi için izin verir, yeni yazılım gelişi. Davranışsal sinirbilim için bir model organizma olarak zebrafish yaygın kullanımı göz önüne alındığında, bu yöntem gelecekte farmakolojik çalışmalarda verimlilik ve pratiklik artacak. Mevcut paradigmada, tekrarlanan doz çizelgesi yaklaşık insan içme programları yansıttığının istihdam edildi. Kontrolü, günlük-orta, ya da haftalık-alem: Balık rastgele bir üç gruba ayrıldı. Dozlama çizelgesi önemli ölçüde önceki çalışmalarda 7 pozlama süreleri aşması nedeniyle seçilmiş, süresi 21 gün idi. Kontrol balık sıfır Alco aldıhol, günlük-orta balık günde bir kez% 0.2 alkol aldı ve haftalık-tıkınırcasına balık haftada% 1.4 alkol kez aldı. Açık / koyu bir görev geri çekilmesinden 2 gün sonra anksiyete değerlendirmek için kullanıldı. Bu bir tarafta duvar beyaz ve diğer tarafta 9 karanlık olan bir dikdörtgen arena kullanan yönetmek için basit bir testtir. Yetişkin Zebra balığı sağlam kontrol koşulları 6,9,13 altında arena karanlık tarafını tercih ederim. Artan anksiyete operasyonel karanlık bölgede harcanan önemli ölçüde daha fazla zaman olarak tanımlanan ve balık ışık bölgesi harcanan nispeten daha fazla zaman harcıyor zaman anksiyete kabul edilebilir azalmıştır. Hareket-izleme yazılımı ile, diğer bilgilendirici değişkenler de ortalama hız, hareketsizlik, kıvrımlı dahildir, miktarı ve bölge 14 geçişler olabilir. Laboratuvarda geliştirilen dozajlama metodu suda çözünür bileşikler, bir veya daha fazla zebrafi için tatbik edilen herhangi bir araştırma için geçerli olabilirsh. Bu metodoloji yararlanabilecek diğer birçok farmakolojik ajanlar da zebrabalıkları test ediliyor. Genel olarak test bileşikleri, etanol benzer bir şekilde içinde çözülür nikotin, klordiazepoksid, buspiron ve skopolamin, yer alır; su içine kimyasal uygun bir miktarda karıştırarak. Bu nedenle, bu işlemin genel kapsamı çok daha geniş ve etanol ile sınırlı değildir. Ayrıca, birden fazla gün boyunca ilaç verilmesinden sonra, açık / koyu bir görev kullanılabilirdi birçok davranış testleri sadece bir tanesidir. İlaç uygulamasından sonra veya çekilme sırasında, kullanılabilir diğer popüler deneyler yeni tankı dalış testi 15 ve 16 shoaling gibi sosyal davranış testlerini kapsamaktadır. Aşağıdaki prosedür tekrar tekrar ilgi farmakolojik bileşiği içeren çözümler balık ya da bireysel balık gruplarının nakledilmesi etkili bir yöntem açıklayacağım. Buna ek olarak, ışık / karanlık testi ile test anksiyete süreciAlkol tatbikat uzun programları maruz bırakıldıktan sonra geri çekme olan balık gruplar olarak tarif edilecektir.

<table><tbody><tr><td>Three shelf benchtop housing system</td><td><a href="http://aquatichabitats.com/research-systems/z-hab-system/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Aquatic Habitats</a></td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>1.5 L Spawning tank w/400 &amp;mu;m baffle</td><td><a href="http://aquatichabitats.com/consumables/tanks-lids-and-baffles/info/nursery-tank-and-baffles/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Aquatic Habitats</a></td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Pure Grain Ethanol</td><td><a href="http://www.luxco.com/brands/vodka-neutral-spirits-neutral-spirits-everclear" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Luxco, INC</a></td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Ethovision XT Motion tracking software</td><td><a href="http://www.noldus.com/animal-behavior-research/products/ethovision-xt" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Noldus Information Technology</a></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipette</td><td><a href="http://eshop.eppendorf.ca/categories/1" target="_blank"><img src="/img/new_window.png" /> Eppendorf Canada</a></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Light/Dark Arena</td><td>Custom</td><td></td><td>Construct as per procedure description. 9.5 cm wide, 9.5 cm deep, 55 cm long.</td></tr></tbody></table>

a novel method of drug administration to multiple zebrafish (danio rerio) and the quantification of withdrawal

Anxiety testing in zebrafish is often studied in combination with the application of pharmacological substances. In these studies, fish are routinely netted and transported between home aquaria and dosing tanks. In order to enhance the ease of compound administration, a novel method for transferring fish between tanks for drug administration was developed. Inserts that are designed for spawning were used to transfer groups of fish into the drug solution, allowing accurate dosing of all fish in the group. This increases the precision and efficiency of dosing, which becomes very important in long schedules of repeated drug administration. We implemented this procedure for use in a study examining the behavior of zebrafish in the light/dark test after administering ethanol with differing 21 day schedules. In fish exposed to daily-moderate amounts of alcohol there was a significant difference in location preference after 2 days of withdrawal when compared to the control group. However, a significant difference in location preference in a group exposed to weekly-binge administration was not observed. 
This protocol can be generalized for use with all types of compounds that are water-soluble and may be used in any situation when the behavior of fish during or after long schedules of drug administration is being examined. The light/dark test is also a valuable method of assessing withdrawal-induced changes in anxiety.

Yukarıda tarif edildiği gibi sürekli olarak ve doğru bir zaman etanol tatbikat süresi önemlidir zebrabalıkları farmakolojik çalışmalarda doğruluk ve kontrolü sağlamak için. Bizim prosedür dozlama prosedürünün kolaylığı ve verimi artırabilir. Haftalık-aşırı ya da günlük orta derecede ya da zamanlama etanol yönetim kontrol grubu ile karşılaştırıldığında, aydınlık / karanlık testi ile ölçülen değiştirilmiş anksiyete, sonuçlandı. Iki gün son dozdan sonra test edildiğinde, (...

Watch this Scientific Journal Video about A Novel Method of Drug Administration to Multiple Zebrafish Danio rerio and the Quantification of Withdrawal at JoVE.com

A Novel Method of Drug Administration to Multiple Zebrafish Danio rerio and the Quantification of Withdrawal

A novel method for reducing variability when exposing fish to drugs is explained. Fish exposed to various patterns of ethanol exposure were found to have altered anxiety levels during withdrawal in a light/dark scototaxic assay.

Çoklu Zebra balığı için İlaç İdaresi Bir Roman Yöntemi (<em&gt; Danio rerio</em&gt;) Ve Çekilme Niceleme

Anxiety testing in zebrafish is often studied in combination with the application of pharmacological substances. In these studies, fish are routinely ...

a-novel-method-drug-administration-to-multiple-zebrafish-danio-rerio

Research

JoVE Journal

Neuroscience

A Novel Method of Drug Administration to Multiple Zebrafish (Danio rerio) and the Quantification of Withdrawal

12.1K Görüntüleme.  MacEwan University. A novel method for reducing variability when exposing fish to drugs is explained. Fish exposed to various patterns of ethanol exposure were found to have altered anxiety levels during withdrawal in a light/dark scototaxic assay.

Video: A Novel Method of Drug Administration to Multiple Zebrafish Danio rerio and the Quantification of Withdrawal

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the standard in the field, but zebrafish have emerged as an alternative model with several advantages, including the ability for high-throughput and low-cost drug screening. Zebrafish also allow for in vivo drug screening with large replicate numbers that were previously only obtainable with in vitro systems. The ability to rapidly perform large scale drug screens may open up the possibility for personalized medicine with rapid translation of results back to clinic. Zebrafish xenograft models could also be used to rapidly screen for actionable mutations based on tumor response to targeted therapies or to identify new anti-cancer compounds from large libraries. The current major limitation in the field has been quantifying and automating the process so that drug screens can be done on a larger scale and be less labor-intensive. We have developed a workflow for xenografting primary patient samples into zebrafish larvae and performing large scale drug screens using a fluorescence microscope equipped imaging unit and automated sampler unit. This method allows for standardization and quantification of engrafted tumor area and response to drug treatment across large numbers of zebrafish larvae. Overall, this method is advantageous over traditional cell culture drug screening as it allows for growth of tumor cells in an in vivo environment throughout drug treatment, and is more practical and cost-effective than mice for large scale in vivo drug screens.

Zebrafish xenograft models allow for high-throughput drug screening and fluorescent imaging of human cancer cells in an in vivo microenvironment. We developed a workflow for large scale, automated drug screening on patient-derived leukemia samples in zebrafish using an automated fluorescence microscope equipped imaging unit.

Zebrabalığında Primer Hasta Kaynaklı Tümör Xenograftların İlaç Taraması

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...

Kanser Araştırmaları

Behavioral Approaches to Studying Innate Stress in Zebrafish

Responding appropriately to stressful stimuli is essential for survival of an organism. Extensive research has been done on a wide spectrum of stress-related diseases and psychiatric disorders, yet further studies into the genetic and neuronal regulation of stress are still required to develop better therapeutics. The zebrafish provides a powerful genetic model to investigate the neural underpinnings of stress, as there exists a large collection of mutant and transgenic lines. Moreover, pharmacology can easily be applied to zebrafish, as most drugs can be added directly to water. We describe here the use of the 'novel tank test' as a method to study innate stress responses in zebrafish, and demonstrate how potential anxiolytic drugs can be validated using the assay. The method can easily be coupled with zebrafish lines harboring genetic mutations, or those in which transgenic approaches for manipulating precise neural circuits are used. The assay can also be used in other fish models. Together, the described protocol should facilitate the adoption of this simple assay to other laboratories.

This manuscript describes a simple method to measure stress behaviorally in adult zebrafish. The approach takes advantage of the innate tendency that zebrafish prefer the bottom half of a tank when in a stressful state. We also describe methods for coupling the assay with pharmacology.

Zebrafish içinde doğuştan stres eğitimi için davranışsal yaklaşımlar

Responding appropriately to stressful stimuli is essential for survival of an organism. Extensive research has been done on a wide spectrum of ...

Davranış

Automated High-throughput Behavioral Analyses in Zebrafish Larvae

We have created a novel high-throughput imaging system for the analysis of behavior in 7-day-old zebrafish larvae in multi-lane plates. This system measures spontaneous behaviors and the response to an aversive stimulus, which is shown to the larvae via a PowerPoint presentation. The recorded images are analyzed with an ImageJ macro, which automatically splits the color channels, subtracts the background, and applies a threshold to identify individual larvae placement in the lanes. We can then import the coordinates into an Excel sheet to quantify swim speed, preference for edge or side of the lane, resting behavior, thigmotaxis, distance between larvae, and avoidance behavior. Subtle changes in behavior are easily detected using our system, making it useful for behavioral analyses after exposure to environmental toxicants or pharmaceuticals.

Our laboratory developed a novel high-throughput automated imaging system that is useful for the detection of several different behaviors in 7-day-old zebrafish larvae. The system can be used for detecting subtle changes in behavior after the larvae have been exposed to environmental toxicants or pharmaceuticals.

Zebra balığı Larva otomatik Yüksek verim Davranış Analizleri

We have created a novel high-throughput imaging system for the analysis of behavior in 7-day-old zebrafish larvae in multi-lane plates. This system ...

Nörobilim

Optimized Intravenous Injection in Adult Zebrafish

Intravenous (IV) injection is widely recognized as the most effective and commonly utilized method for achieving systemic delivery of substances in mammalian research models. However, its application in adult zebrafish for drug delivery, stem cell transplantation, and regenerative and cancer studies has been limited due to the challenges posed by their small body size and intricate blood vessels. To overcome these limitations, alternative injection techniques such as intracardiac and retro-orbital (RO) injection have been explored in the past for stem cell transplantation in adult zebrafish. However, these techniques have their drawbacks, including the need for meticulous injection techniques or increased risk of mortality.
In this study, we have developed a refined and optimized IV injection procedure specifically tailored to adult zebrafish, addressing the challenges associated with their unique anatomy. To demonstrate the effectiveness of this technique, we performed successful IV injections of whole kidney marrow cells from Tg(mpo: EGFP) fish and FITC-dextran dye into adult Casper fish. The subsequent visualization of injected cells and dyes using a fluorescence microscope confirmed their successful delivery and engraftment within the zebrafish. Furthermore, we demonstrated that compared with the intracardiac and RO injections, the IV injection resulted in improved survival rates and engraftment efficiency in treated zebrafish. This approach enables precise delivery and localization of substances and holds great potential for large-scale drug and chemical screening using adult zebrafish. Additionally, the ability to visually track the injected cells and dyes provides invaluable insights into their engraftment, migration, and interactions with host tissues, enabling a more comprehensive evaluation of therapeutic effects and biological processes in zebrafish models.

Here, we present an optimized and effective protocol for the intravenous injection of cells or pharmacological agents into adult zebrafish, resulting in enhanced cell engraftment and increased survival rates of the treated zebrafish.

Yetişkin Zebra Balıklarında Optimize Edilmiş İntravenöz Enjeksiyon

Intravenous (IV) injection is widely recognized as the most effective and commonly utilized method for achieving systemic delivery of substances in ...

Gavaging Adult Zebrafish

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or agents in solutions for scientific research. Current methods for administering compounds orally to adult zebrafish are inaccurate due to variability in voluntary consumption by the fish. A gavage procedure was developed to deliver precise quantities of infectious agents to zebrafish for study in biomedical research. Adult zebrafish over 6 months of age were anesthetized with 150 mg/L of buffered MS-222 and gavaged with 5 &mu;l of solution using flexible catheter implantation tubing attached to a cut 22-G needle tip. The flexible tubing was lowered into the oral cavity of the zebrafish until the tip of the tubing extended past the gills (approximately 1 cm). The solution was then injected slowly into the intestinal tract. This method was effective 88% of the time, with fish recovering uneventfully. This procedure is also efficient as one person can gavage 20-30 fish in one hour. This method can be used to precisely administer agents for infectious diseases studies, or studies of other compounds in adult zebrafish.

The increasing use of zebrafish as an animal model requires the development of effective methods for the delivery of known quantities of compounds and solutions. The gavage procedure described below allows for the oral delivery of precise volumes of solution reliably, safely and efficiently to adult zebrafish.

Yetişkin Zebra balığı Gavaging

The zebrafish has become an important in vivo model in biomedical research. Effective methods must be developed and utilized to deliver compounds or ...

Biyoloji

Rapid Evaluation of Toxicity of Chemical Compounds Using Zebrafish Embryos

The zebrafish is a widely used vertebrate model organism for the disease and phenotype-based drug discovery. The zebrafish generates many offspring, has transparent embryos and rapid external development. Zebrafish embryos can, therefore, also be used for the rapid evaluation of toxicity of the drugs that are precious and available in small quantities. In the present article, a method for the efficient screening of the toxicity of chemical compounds using 1-5-day post fertilization embryos is described. The embryos are monitored by stereomicroscope to investigate the phenotypic defects caused by the exposure to different concentrations of compounds. Half-maximal lethal concentrations (LC50) of the compounds are also determined. The present study required 3-6 mg of an inhibitor compound, and the whole experiment takes about 8-10 h to be completed by an individual in a laboratory having basic facilities. The current protocol is suitable for testing any compound to identify intolerable toxic or off-target effects of the compound in the early phase of drug discovery and to detect subtle toxic effects that may be missed in the cell culture or other animal models. The method reduces procedural delays and costs of drug development.

Zebrafish embryos are used for evaluating the toxicity of chemical compounds. They develop externally and are sensitive to chemicals, allowing detection of subtle phenotypic changes. The experiment only requires a small amount of compound, which is directly added to the plate containing embryos, making the testing system efficient and cost-effective.

Zebrabalığı Embriyoları Kullanılarak Kimyasal Bileşiklerin Toksisitesinin Hızlı Değerlendirilmesi

The zebrafish is a widely used vertebrate model organism for the disease and phenotype-based drug discovery. The zebrafish generates many offspring, has ...

Tıp

High-throughput Measurement of Gut Transit Time Using Larval Zebrafish

Zebrafish are used as alternative model organisms for drug safety testing. The gastrointestinal (GI) tract of zebrafish has genetic, neuronal, and pharmacological similarities to that of the mammals. GI intolerance during clinical testing of drug candidates is common and may pose a serious threat to human health. Testing for GI toxicity in preclinical mammalian models can be expensive in terms of time, test compound, and labor. The high-throughput method presented here may be used to predict GI safety issues. Compared to mammalian models, this method allows for more expedient assessment of test compound effects on GI transit while using low quantities of compound. In this method, larval zebrafish (7 days post fertilization) are fed food containing a fluorescent label. After feeding, each larval fish is placed into a well of a 96-conical-bottom-well plate and dosed with test compound (dissolved in water) or the vehicle. As gut transit occurs, fecal matter accumulates on the bottom of the wells, and the rate at which this happens is monitored by measuring fluorescence from the bottom of the well repeatedly over time using a plate spectrophotometer. The fluorescence from larvae in a given treatment group are averaged and these values are graphed along with standard error, for each measurement time, yielding a curve representing average transit of food over time. Effects on gut transit time are identified by comparing the area under the curve for each treatment group to that of the vehicle-treated group. This method detected changes in zebrafish GI transit time induced by drugs with known clinical GI effects; it can be employed to interrogate dozens of treatments for GI effects per day. As such, safer compounds can be quickly prioritized for mammalian testing, which expedites discovery and proffers 3Rs advancement.

The goal of this protocol is to measure the transit time of fluorescently labeled food through the gut of larval zebrafish in a high throughput fashion.

Yüksek işlem hacmi ölçüm larva zebra balığı kullanarak Gut Transit süre

Zebrafish are used as alternative model organisms for drug safety testing. The gastrointestinal (GI) tract of zebrafish has genetic, neuronal, and ...

Yetişkin zebra balıklarında bileşik uygulama için optimize edilmiş intraperitoneal enjeksiyon

An Intraperitoneal Injection Technique in Adult Zebrafish that Minimizes Body Damage and Associated Mortality

The adult zebrafish (Danio rerio), which is genetically accessible, is being employed as a valuable vertebrate model to study human disorders such as cardiomyopathy. Intraperitoneal (IP) injection is an important method that delivers compounds to the body for either testing therapeutic effects or generating disease models such as doxorubicin-induced cardiomyopathy (DIC). Currently, there are two methods of IP injection. Both&#160;methods have limitations when handling toxic compounds such as doxorubicin, which result in side effects manifesting as severe damage to the body shape and fish death. While these shortcomings could be overcome by extensive investigator training, a new IP injection method that has minimal side effects is desirable. Here, a unique IP injection method that is able to handle toxic compounds is reported. Consistently reduced cardiac function can result without incurring significant fish death. The technique can be easily mastered by researchers who have minimal experience with adult zebrafish.

Yazar Spotlight: Zebra Balığı Kardiyotoksisite Modelleri için Yeni İntraperitoneal Enjeksiyon Yöntemi

A new intraperitoneal (IP) injection method in adult zebrafish is described. When handling toxic compounds such as doxorubicin, this procedure is more effective than the two previously reported IP methods. The technique is designed to be easily adopted by researchers with limited experience in the zebrafish model.

Yetişkin Zebra Balıklarında Vücut Hasarını ve İlişkili Mortaliteyi En Aza İndiren Bir İntraperitoneal Enjeksiyon Tekniği

The adult zebrafish (Danio rerio), which is genetically accessible, is being employed as a valuable vertebrate model to study human disorders such as ...

Çoklu Zebra balığı için İlaç İdaresi Bir Roman Yöntemi (

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Zebrabalığında Primer Hasta Kaynaklı Tümör Xenograftların İlaç Taraması

Zebrafish içinde doğuştan stres eğitimi için davranışsal yaklaşımlar

Zebra balığı Larva otomatik Yüksek verim Davranış Analizleri

Yetişkin Zebra Balıklarında Optimize Edilmiş İntravenöz Enjeksiyon

Yetişkin Zebra balığı Gavaging

Zebrabalığı Embriyoları Kullanılarak Kimyasal Bileşiklerin Toksisitesinin Hızlı Değerlendirilmesi

Yüksek işlem hacmi ölçüm larva zebra balığı kullanarak Gut Transit süre

Yetişkin Zebra Balıklarında Vücut Hasarını ve İlişkili Mortaliteyi En Aza İndiren Bir İntraperitoneal Enjeksiyon Tekniği

Yetişkin Zebra Balıklarında Vücut Hasarını ve İlişkili Mortaliteyi En Aza İndiren Bir İntraperitoneal Enjeksiyon Tekniği

Yetişkin Zebra Balıklarında Vücut Hasarını ve İlişkili Mortaliteyi En Aza İndiren Bir İntraperitoneal Enjeksiyon Tekniği