The authors have nothing to disclose.

Tüm prosedürler ve davranışsal test bakımı ve deney hayvanlarının kullanımı için Hayvan Bakım kurallarına için Kanadalı Konseyi ile uyumlu olduğunu protokol numarası 06-11-12 altında MacEwan Üniversitesi Hayvan Araştırmaları Etik Kurulu tarafından onaylanmıştır. 1. Doz Tankları, Çözümler ve Yönetim takvimi hazırlayın <ol><li> Hayvanlar aynı ortamda ve görsel uyaranlara zaman ya da itme düzeneğinin herhangi bir boşa önlemek için günün aynı süre içinde dozlanır şekilde bir uygulama program hazırlanması. </li><li> Grup boyutları sayısı için gerektiği kadar özdeş, 1.5 L, şeffaf polipropilen yumurtlama tankları edinin. Balık 2 grup sağlar tank başına 8 balık, kullanımı grupları prosedürü daha sonra günde test edilmesi (basamak 3). Bir tutma tankı ve grup başına bir dozlama tankı (grup 2x toplam sayısı) kullanın. <ol><li> Tüm tanklarında 400 mikron yumurtlama yerlefltirmede. Fhasta yaşam su veya doğru sıcaklıkta osmoz su ters ile tankları (Zebra balığı için, 25-28 ° C) sıcaklık balık ile tutarlı normalde yer alırlar. Not: bazı ilaçların ve tamponlanmış yaşam suyun kimyasal bileşenleri arasında istenmeyen kimyasal etkileşimler olabilir. Bu durumda, ters ilaç verilmesi için en az bir ya da akvaryum tuzları ile tamponlanmış ozmoz su, yanı sıra kontrol gruplar kullanılır. </li><li> Tanklar dozlama sırasında dış görsel uyaranlara klima balık önlemek için nötr ortamda olduğunuzdan emin olun. </li></ol></li><li> İlaç çözeltisi hazırlayın. Yumurtlama tanklarda yaşam su ile ilacın uygun miktarda karıştırın. Su 1497 ml olan yüksek seviyede dereceli etanol (% 95 denatüre edilmiş etanol) 3 ml birleştirerek% 0.2 etanol çözeltisi hazırlayın. Su 1479 ml etanol ve 21 ml birleştirerek% 1.4 etanol çözeltisi hazırlayın. </li></ol> 2. netleştirilmesine Balık ve Et-metanol Yönetimi Prosedürü <ol><li> Dikkatle net habitat tanklardan balık ve yumurtlama parçayı içeren uygun tutma tankına transferi. İdeal olarak, tamamen örgü ortadan kaldırmak için yumurtlama ekine balık ev. </li><li> Kendi tutma tanklardaki tüm balık, hafifçe yumurtlama tankından dışarı yerleştirin ve uygun ilaç solüsyon tankı (Şekil 1A) içine yerleştirin kaldırın. <ol><li> Gerektiği gibi dozaj zamanını kaydedin. Burada tarif edilen prosedüre için etanol çözeltisi içinde 30 dakika kullanın. </li><li> Mümkünse, asistanlar hassas dozlama süresi sağlamak için aynı anda ilaç çözüm tüm deney gruplarının transferi ile yardım var. Alternatif olarak, bir seferde bir grup transferi ve bireysel grupların dozaj kez (Şekil 1A) izlemenize. </li></ol></li><li> Gerekli dozaj lama dönemi sonunda, dikkatli bir şekilde yumurtlama inserti kaldırarak etanol çözeltisinden balık kaldırmailaç solüsyonu ve nazikçe geri tutma tankına yerleştirerek dışarı. </li><li> Tutma tankları balık ve sonraki zamanlanmış dozlama süresi kadar geri onların yaşam alanlarına yerleştirmek, ya da yumurtlama filelere ortadan kaldırmak için geri tutma tankına eklemek yerleştirin yavaşça net. </li><li> Hayvan barınma ekipman, ev tutma tankı olarak kullanılan aynı tankı ve yumurtlama astar içinde hayvanlar parametreleri içinde, daha önce, mümkünse de belirtildiği gibi. Bu uygulama prosedürü sırasında tamamen filelere ortadan kaldıracaktır. </li></ol> 3. Hareket Testleri <ol><li> Uzun 55 cm ve beyaz bir su geçirmez kat (Şekil 1B) ile derin 9.5 cm 9.5 cm genişliğinde bir aydınlık / karanlık arena edinin. Arenada beyaz kaplı ve yarı siyah kaplı yarısı, cırt kullanarak arena iç duvarları beyaz ve siyah su geçirmez yansıtıcı olmayan kağıt yapıştırmayın. 25-28 ° C arasındaki bir sıcaklıkta yaşam su ile 5 cm derinliğe kadar arena doldurun. BakımTest boyunca bu sıcaklık değilim. </li><li> Arena içinde yer alan için bir beyaz üç-taraflı muhafaza oluşturarak dış görsel uyaranlara minimalize. Test alanı su yüzeyinde yansımaları neden olmaz üstten ışıklandırma yaygın olan, henüz yeterince hareket izleme yazılımı, ya da yazı için parlak olduğundan emin olun video görüntüleri -hoc manuel sayısallaştırma. </li><li> Muhafazaya arena yerleştirin ve davranış izleme yazılımı kayıt ve hareket analiz parametrelerini ayarlamak. Araştırma sorusu bağlı olarak, 5-15 dakika için deneme süresini ayarlayın. NOT: Burada, biz 5 dakika kullanılır. </li><li> Balık grup yaşam tankında araştırma alanına test edilecek ulaşım ve arena muhafazanın dışında koyun. 10 dakika süre ile balık alıştırıldı. </li><li> Açık / koyu arena merkezinde uygun grup ve yerden yavaşça net bir balık, bu Avo için arena uzun eksenine paralel olduğunda balık açıklaması için emin olmakışık veya karanlık bölgeye balık kutuplama kimliği. </li><li> Hayvan yayımlandıktan hemen sonra kayıt davranışı başlar. Balık izleme veya balık atlama veya dondurulması için herhangi bir yazılım sorunları için izleyin. Konuların yarısı nedeniyle arena sonu muhafazanın açık ucuna doğru yönlendirilmiş olan kaynaklanan önyargıları herhangi boşa önlemek için test edildikten sonra, Arena 180 ° döndürün. </li><li> Deneme, hafifçe net sona erdi ve bir tanktan ya da yaşam tankına arenada balık çıkarın sonra. </li></ol> 4. Analiz <ol><li> Karanlık bölgelerde ışığa karşı harcanan zamanı inceleyin. Her yaş grubu ve her balık için, ışık ve karanlık bölgelerinde harcanan göreli bir zaman alması ve bir örnek t-testi kullanılarak analiz (veya Wilcoxon parametrik veriler için rank testi imzalı; fark, toplam deneme süresinin (yarım) 150 sn den) gruplar arasında anlamlı diğeri üzerinde bir bölgesini tercih olmadığını belirlemek için. </li><li> Bir prefe hesaplamak, tercihlerini karşılaştırmak içinkaranlık bölgede harcanan zaman ışık bölgesinde geçirdi ve gruplar arasındaki farklılıkları karşılaştırmak zaman çıkarılarak rekürensinden indeksi. t testleri iki grup karşılaştırmak için kullanılabilir. Tukey HSD post hoc testi kullanılarak varyans tek yönlü analizi ile birden fazla grubu karşılaştırmak gerektiğinde (Dunn çoklu karşılaştırma parametrik olmayan veriler için post hoc testi ile ya da Kruskal-Wallis testi). </li><li> Gruplar arasında hız, kıvrımlı bölge geçişler, sayısı ve hareketsizlik karşılaştırın. Tukey HSD post hoc testi kullanılarak varyansın tek-yönlü analizi kullanın gerektiğinde (Dunn çoklu karşılaştırma parametrik olmayan veriler için post hoc testi ile ya da Kruskal-Wallis testi). </li></ol>

<ol>
	<li>Spence, R., Gerlach, G., Lawrence, C., Smith, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+behaviour+and+ecology+of+the+zebrafish,+Danio+rerio.">The behaviour and ecology of the zebrafish, Danio rerio.</a> Biological Reviews. 83 (1), 13-34 (2008).</li><li>Langheinrich, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish:+A+new+model+on+the+pharmaceutical+catwalk.">Zebrafish: A new model on the pharmaceutical catwalk.</a> BioEssays. 25 (9), 904-912 (2003).</li><li>Santoriello, C., Zon, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hooked!+Modeling+human+disease+in+zebrafish.">Hooked! Modeling human disease in zebrafish.</a> Journal of Clinical Investigation. 122 (7), 2337-2343 (2012).</li><li>Miller, N., Greene, K., Dydinski, A., Gerlai, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+nicotine+and+alcohol+on+zebrafish+(+Danio+rerio)+shoaling.">Effects of nicotine and alcohol on zebrafish ( Danio rerio) shoaling.</a> Behavioural brain research. , (2012).</li><li>Bencan, Z., Sledge, D., Levin, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Buspirone,+chlordiazepoxide+and+diazepam+effects+in+a+zebrafish+model+of+anxiety.">Buspirone, chlordiazepoxide and diazepam effects in a zebrafish model of anxiety.</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. 94 (1), 75-80 (2009).</li><li>Holcombe, A., Howorko, A., Powell, R. A., Schalomon, M., Hamilton, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reversed+Scototaxis+during+Withdrawal+after+Daily-Moderate,+but+Not+Weekly-Binge+Administration+of+Ethanol+in+Zebrafish.">Reversed Scototaxis during Withdrawal after Daily-Moderate, but Not Weekly-Binge Administration of Ethanol in Zebrafish.</a> PLoS ONE. 8 (5), (2013).</li><li>Mathur, P., Guo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differences+of+acute+versus+chronic+ethanol+exposure+on+anxiety-like+behavioral+responses+in+zebrafish.">Differences of acute versus chronic ethanol exposure on anxiety-like behavioral responses in zebrafish.</a> Behavioural Brain Research. 219 (2), 234-239 (2011).</li><li>Dlugos, C., Rabin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ethanol+effects+on+three+strains+of+zebrafish:+model+system+for+genetic+investigations.">Ethanol effects on three strains of zebrafish: model system for genetic investigations.</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. , (2003).</li><li>Maximino, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scototaxis+as+anxiety-like+behavior+in+fish.">Scototaxis as anxiety-like behavior in fish.</a> Nature Protocols. 5 (2), 209-216 (2010).</li><li>Gerlai, R., Lee, V., Blaser, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+acute+and+chronic+ethanol+exposure+on+the+behavior+of+adult+zebrafish+(Danio+rerio).">Effects of acute and chronic ethanol exposure on the behavior of adult zebrafish (Danio rerio).</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. 85 (4), 752-761 (2006).</li><li>Egan, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Understanding+behavioral+and+physiological+phenotypes+of+stress+and+anxiety+in+zebrafish.">Understanding behavioral and physiological phenotypes of stress and anxiety in zebrafish.</a> Behavioural brain research. 205 (1), 38-44 (2009).</li><li>Gebauer, D. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+anxiolytics+in+zebrafish:+Similarities+and+differences+between+benzodiazepines,+buspirone+and+ethanol.">Effects of anxiolytics in zebrafish: Similarities and differences between benzodiazepines, buspirone and ethanol.</a> Pharmacology Biochemistry and Behavior. 99 (3), 480-486 (2011).</li><li>Serra, M. C., Mattioli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Natural+preference+of+zebrafish+(Danio+rerio)+for+a+dark+environment.">Natural preference of zebrafish (Danio rerio) for a dark environment.</a> Braz J Med Biol Res. 32 (12), 1551-1553 (1999).</li><li>Maximino, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Behavioral+and+neurochemical+changes+in+the+zebrafish+leopard+strain.">Behavioral and neurochemical changes in the zebrafish leopard strain.</a> Genes Brain Behav. 12 (5), 576-582 (2013).</li><li>Levin, E. D., Bencan, Z., Cerutti, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Anxiolytic+effects+of+nicotine+in+zebrafish.">Anxiolytic effects of nicotine in zebrafish.</a> Physiology &amp; Behavior. 90 (1), 54-58 (2007).</li><li>Gerlai, R., Chatterjee, D., Pereira, T., Sawashima, T., Krishnannair, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+and+chronic+alcohol+dose:+population+differences+in+behavior+and+neurochemistry+of+zebrafish.">Acute and chronic alcohol dose: population differences in behavior and neurochemistry of zebrafish.</a> Genes, Brain and Behavior. 8 (6), 586-599 (2009).</li><li>Mathur, P., Berberoglu, M. A., Guo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preference+for+ethanol+in+zebrafish+following+a+single+exposure.">Preference for ethanol in zebrafish following a single exposure.</a> Behavioural Brain Research. 217 (1), 128-133 (2011).</li><li>Renninger, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigating+the+genetics+of+visual+processing,+function+and+behaviour+in+zebrafish.">Investigating the genetics of visual processing, function and behaviour in zebrafish.</a> Neurogenetics. 12, 97-116 (2011).</li><li>Crawshaw, L. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tolerance+and+withdrawal+in+goldfish+exposed+to+ethanol.">Tolerance and withdrawal in goldfish exposed to ethanol.</a> Physiology &amp; Behaviour. 87 (3), 460-468 (2006).</li><li>Hamilton, T. J., Holcombe, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tresguerres,+M.CO2-induced+ocean+acidification+increases+anxiety+in+rockfish+via+alteration+of+GABAA+receptor+functioning.">Tresguerres, M.CO2-induced ocean acidification increases anxiety in rockfish via alteration of GABAA receptor functioning.</a> Proceedings of the Royal Society B. , (2014).</li><li>Ramsay, J. M., Feist, G. W., Varga, Z. M., Westerfield, M., Kent, M. L., Schreck, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Whole-body+cortisol+response+of+zebrafish+to+acute+net+handling+stress.">Whole-body cortisol response of zebrafish to acute net handling stress.</a> Aquaculture. 297 (1-4), 157-164 (2009).</li><li>Hamilton, T. J., Paz-Yepes, J., Morrison, R. A., Palenik, B., Tresguerres, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exposure+to+bloom-like+concentrations+of+two+marine+Synechococcus+cyanobacteria+(strains+CC9311+and+CC9902)+differentially+alters+fish+behaviour.">Exposure to bloom-like concentrations of two marine Synechococcus cyanobacteria (strains CC9311 and CC9902) differentially alters fish behaviour.</a> Conservation Physiology. 2 (1), (2014).</li></ol>

Yazarlar Şekil 1 için kullanılan onun fotoğraf ekipmanı kullanımı için Joshua Gallup kabul. Bu çalışma (TJH için) Doğal Bilimler ve Mühendislik Araştırma Konseyi (NSERC) Kanada Discovery hibe ile desteklenmiştir.

Zebra balığı ilaç verilmesini içeren önceki çalışmalarda sadece ilaç solüsyonu 12,16 içine kendi tankından onları taşımak için balık filelere dayanmıştır. Netleştirme her zaman tutarlı değildir ve genellikle nedeniyle önemli bireysel değişkenlik zebrabalıkları, bir kaçış tepkisi beklenenden daha uzun sürer. Geleneksel transfer yöntemleri, yararlı ise de, balık, su dışında geçirmek toplam süreyi azaltarak, hem de hayvanlar arasındaki aktarım süresi değişkenlik mikt...

Zebra balığı (Danio rerio) davranışsal 1 ve tıbbi araştırma 2,3 için yararlı bir model organizmadır Hindistan&#39;da menşeli küçük bir teleost türdür. Balığı, sık davranışı üzerindeki etkilerini karakterize etmek amacıyla, çeşitli farmakolojik maddeler test kullanılır. Çeşitli dozlarda ve ilaç programları gibi uyarıcılar 4, anksiyolotikler 5 ve etanol 6-8 gibi bileşiklerin uygulanmasından sonra zebrafish davranışlarını araştırmak için kullanılmıştır. Bizim laboratuvar da yaygın scototaxic deneyi olarak adlandırılan iyi valide açık / koyu tahlil 9, 20, zebrafish anksiyete ve lokomosyon etanol idarenin programları farklı etkilerini araştırmıştır. Etanol uygulama yeni bir yöntem uzun bir zaman periyodu (21 gün) üzerinde 6 tekrarlayan, günlük uygulama için verimliliğini artırmak için geliştirilmiştir </s&gt; kadar. Daha önce kullanılan yöntemler ancak, biz ilişkili zaman maliyetleri ile, örgü azaltılmış bir yöntem geliştirmek için çalıştı, ve balık çok sayıda ilgi ilacın eşzamanlı, tam zamanlı yönetimini izin, pratik. Geleneksel araştırma kullanılarak, etanol içindeki, zebra balığı halinde ve etanol ve su 12/10 ve uygun bir karışım ihtiva eden başka bir tanka aktarılır. Bu yöntem yaygın olarak kabul iken, Zebra balığı örgü tanıtmak ve ilaç çözeltisinden balık kaldırmak için alınan zaman içinde değişkenlik artabilir. Bu nedenle, söz konusu bileşik için tam maruz tekrarlanan doz içeren bir deney boyunca değişebilir. Taşıma zamanlarda değişkenlik kaynaklanan hata kaynaklarını azaltan bir yöntem arzu edilir. Bizim yöntemi ile her balık özdeş dozlama süresi sonuçlanan, aynı anda tüm balık hareket edebiliyoruz. (Burada anlatıldığı gibi), etanol maruz kalmasını takiben, zebra balığı bir numbe test edilebilirkaygıyı ölçmek de dahil olmak üzere davranışsal deneyleri, r. Yeni yöntemi kullanarak balık grupları dozaj doğru çoğaltmak ve balık grupları konular arasında ve genelinde dozlama standardize etmek yeteneği ötesinde pratik kullanımları vardır. Araştırmacılar kendi deneylerde tekrarlanabilirliği ve doğruluğunu sağlamak için yöntemler kullanabilir görebilirsiniz seferde birden fazla balık takibi için izin verir, yeni yazılım gelişi. Davranışsal sinirbilim için bir model organizma olarak zebrafish yaygın kullanımı göz önüne alındığında, bu yöntem gelecekte farmakolojik çalışmalarda verimlilik ve pratiklik artacak. Mevcut paradigmada, tekrarlanan doz çizelgesi yaklaşık insan içme programları yansıttığının istihdam edildi. Kontrolü, günlük-orta, ya da haftalık-alem: Balık rastgele bir üç gruba ayrıldı. Dozlama çizelgesi önemli ölçüde önceki çalışmalarda 7 pozlama süreleri aşması nedeniyle seçilmiş, süresi 21 gün idi. Kontrol balık sıfır Alco aldıhol, günlük-orta balık günde bir kez% 0.2 alkol aldı ve haftalık-tıkınırcasına balık haftada% 1.4 alkol kez aldı. Açık / koyu bir görev geri çekilmesinden 2 gün sonra anksiyete değerlendirmek için kullanıldı. Bu bir tarafta duvar beyaz ve diğer tarafta 9 karanlık olan bir dikdörtgen arena kullanan yönetmek için basit bir testtir. Yetişkin Zebra balığı sağlam kontrol koşulları 6,9,13 altında arena karanlık tarafını tercih ederim. Artan anksiyete operasyonel karanlık bölgede harcanan önemli ölçüde daha fazla zaman olarak tanımlanan ve balık ışık bölgesi harcanan nispeten daha fazla zaman harcıyor zaman anksiyete kabul edilebilir azalmıştır. Hareket-izleme yazılımı ile, diğer bilgilendirici değişkenler de ortalama hız, hareketsizlik, kıvrımlı dahildir, miktarı ve bölge 14 geçişler olabilir. Laboratuvarda geliştirilen dozajlama metodu suda çözünür bileşikler, bir veya daha fazla zebrafi için tatbik edilen herhangi bir araştırma için geçerli olabilirsh. Bu metodoloji yararlanabilecek diğer birçok farmakolojik ajanlar da zebrabalıkları test ediliyor. Genel olarak test bileşikleri, etanol benzer bir şekilde içinde çözülür nikotin, klordiazepoksid, buspiron ve skopolamin, yer alır; su içine kimyasal uygun bir miktarda karıştırarak. Bu nedenle, bu işlemin genel kapsamı çok daha geniş ve etanol ile sınırlı değildir. Ayrıca, birden fazla gün boyunca ilaç verilmesinden sonra, açık / koyu bir görev kullanılabilirdi birçok davranış testleri sadece bir tanesidir. İlaç uygulamasından sonra veya çekilme sırasında, kullanılabilir diğer popüler deneyler yeni tankı dalış testi 15 ve 16 shoaling gibi sosyal davranış testlerini kapsamaktadır. Aşağıdaki prosedür tekrar tekrar ilgi farmakolojik bileşiği içeren çözümler balık ya da bireysel balık gruplarının nakledilmesi etkili bir yöntem açıklayacağım. Buna ek olarak, ışık / karanlık testi ile test anksiyete süreciAlkol tatbikat uzun programları maruz bırakıldıktan sonra geri çekme olan balık gruplar olarak tarif edilecektir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Three Shelf benchtop housing system</td>
			<td>Aquatic Habitats</td>
			<td>N/A</td>
			<td><a href="http://aquatichabitats.com/research-systems/z-hab-system/">http://aquatichabitats.com/research-systems/z-hab-system/</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1.5L Spawning tank w/400 micron baffle</td>
			<td>Aquatic Habitats</td>
			<td>N/A</td>
			<td><a href="http://aquatichabitats.com/consumables/tanks-lids-and-baffles/info/nursery-tank-and-baffles/">http://aquatichabitats.com/consumables/tanks-lids-and-baffles/info/nursery-tank-and-baffles/</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pure Grain Ethanol</td>
			<td>Luxco, INC</td>
			<td>N/A</td>
			<td><a href="http://www.fishersci.com/ecomm/servlet/fsproductdetail?storeId=10652&amp;aid=3759149&amp;store=Scientific">http://www.luxco.com/public/brands/brands.asp?brandid=21</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethovision XT Motion tracking software</td>
			<td>Noldus Information Technology</td>
			<td></td>
			<td><a href="http://www.noldus.com/animal-behavior-research/products/ethovision-xt">http://www.noldus.com/animal-behavior-research/products/ethovision-xt</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette</td>
			<td>Eppendorf Canada</td>
			<td></td>
			<td><a href="http://www.eppendorf.ca/int/index.php?l=211&amp;pb=e396f9e705e754a3&amp;action=products&amp;contentid=1&amp;catalognode=9477.">http://www.eppendorf.ca/int/index.php?l=211&#38;pb=e396f9e705e754a3&#38;action=products&#38;contentid=1&#38;catalognode=9477.&#160;</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light/Dark Arena</td>
			<td>Custom</td>
			<td></td>
			<td>Construct as per procedure description. 9.5cm wide, 9.5cm deep, 55cm long</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a novel method of drug administration to multiple zebrafish (danio rerio) and the quantification of withdrawal

Anxiety testing in zebrafish is often studied in combination with the application of pharmacological substances. In these studies, fish are routinely netted and transported between home aquaria and dosing tanks. In order to enhance the ease of compound administration, a novel method for transferring fish between tanks for drug administration was developed. Inserts that are designed for spawning were used to transfer groups of fish into the drug solution, allowing accurate dosing of all fish in the group. This increases the precision and efficiency of dosing, which becomes very important in long schedules of repeated drug administration. We implemented this procedure for use in a study examining the behavior of zebrafish in the light/dark test after administering ethanol with differing 21 day schedules. In fish exposed to daily-moderate amounts of alcohol there was a significant difference in location preference after 2 days of withdrawal when compared to the control group. However, a significant difference in location preference in a group exposed to weekly-binge administration was not observed. 
This protocol can be generalized for use with all types of compounds that are water-soluble and may be used in any situation when the behavior of fish during or after long schedules of drug administration is being examined. The light/dark test is also a valuable method of assessing withdrawal-induced changes in anxiety.

Yukarıda tarif edildiği gibi sürekli olarak ve doğru bir zaman etanol tatbikat süresi önemlidir zebrabalıkları farmakolojik çalışmalarda doğruluk ve kontrolü sağlamak için. Bizim prosedür dozlama prosedürünün kolaylığı ve verimi artırabilir. Haftalık-aşırı ya da günlük orta derecede ya da zamanlama etanol yönetim kontrol grubu ile karşılaştırıldığında, aydınlık / karanlık testi ile ölçülen değiştirilmiş anksiyete, sonuçlandı. Iki gün son dozdan sonra test edildiğinde, (...

Watch this Scientific Journal Video about A Novel Method of Drug Administration to Multiple Zebrafish Danio rerio and the Quantification of Withdrawal at JoVE.com

A Novel Method of Drug Administration to Multiple Zebrafish Danio rerio and the Quantification of Withdrawal

A novel method for reducing variability when exposing fish to drugs is explained. Fish exposed to various patterns of ethanol exposure were found to have altered anxiety levels during withdrawal in a light/dark scototaxic assay.

Çoklu Zebra balığı için İlaç İdaresi Bir Roman Yöntemi (<em&gt; Danio rerio</em&gt;) Ve Çekilme Niceleme

Anxiety testing in zebrafish is often studied in combination with the application of pharmacological substances. In these studies, fish are routinely ...

a-novel-method-drug-administration-to-multiple-zebrafish-danio-rerio

Research

JoVE Journal

Neuroscience

A Novel Method of Drug Administration to Multiple Zebrafish (Danio rerio) and the Quantification of Withdrawal

12.0K Görüntüleme.  MacEwan University. A novel method for reducing variability when exposing fish to drugs is explained. Fish exposed to various patterns of ethanol exposure were found to have altered anxiety levels during withdrawal in a light/dark scototaxic assay.

Video: A Novel Method of Drug Administration to Multiple Zebrafish Danio rerio and the Quantification of Withdrawal

Novel Apparatus and Method for Drug Reinforcement

Animal models of reinforcement have proven to be useful for understanding the neurobiological mechanisms underlying drug addiction. Operant drug self-administration and conditioned place preference (CPP) procedures are expansively used in animal research to model various components of drug reinforcement, consumption, and addiction in humans. For this study, we used a novel approach to studying drug reinforcement in rats by combining traditional CPP and self-administration methodologies. We assembled an apparatus using two Med Associate operant chambers, sensory stimuli, and a Plexiglas-constructed neutral zone. These modifications allowed our experiments to encompass motivational aspects of drug intake through self-administration and drug-free assessment of drug/cue conditioning strength with the CPP test. In our experiments, rats self-administered cocaine (0.75 mg/kg/inj, i.v.) during either four (e.g., the "short-term") or eight (e.g., the "long-term") alternating-day sessions in an operant environment containing distinctive sensory cues (e.g., olfactory and visual). On the alternate days, in the other (differently-cued) operant environment, saline was available for self-infusion (0.1 ml, i.v.). Twenty-four hours after the last self-administration/cue-pairing session, a CPP test was conducted. Consistent with typical CPP findings, there was a significant preference for the chamber associated with cocaine self-administration. In addition, in animals undergoing the long-term experiment, a significant positive correlation between CPP magnitude and the number of cocaine-reinforced lever responses. In conclusion, this apparatus and approach is time and cost effective, can be used to examine a wide array of topics pertaining to drug abuse, and provides more flexibility in experimental design than CPP or self-administration methods alone.

Operant drug self-administration and conditioned place preference (CPP) procedures are expansively used in research to model various components of drug reinforcement, consumption, and addiction in humans. In this report, we combined traditional CPP and self-administration methods as a novel approach to studying drug reinforcement and addiction in rats.

İlaç Takviye için yeni cihaz ve Yöntem

Animal models of reinforcement have proven to be useful for understanding the neurobiological mechanisms underlying drug addiction.  Operant drug ...

Nörobilim

Assessment of Ultrasonic Vocalizations During Drug Self-administration in Rats

Drug self-administration procedures are commonly used to study behavioral and neurochemical changes associated with human drug abuse, addiction and relapse. Various types of behavioral activity are commonly utilized as measures of drug motivation in animals. However, a crucial component of drug abuse relapse in abstinent cocaine users is "drug craving", which is difficult to model in animals, as it often occurs in the absence of overt behaviors. Yet, it is possible that a class of ultrasonic vocalizations (USVs) in rats may be a useful marker for affective responses to drug administration, drug anticipation and even drug craving. Rats vocalize in ultrasonic frequencies that serve as a communicatory function and express subjective emotional states. Several studies have shown that different call frequency ranges are associated with negative and positive emotional states. For instance, high frequency calls ("50-kHz") are associated with positive affect, whereas low frequency calls ("22-kHz") represent a negative emotional state. This article describes a procedure to assess rat USVs associated with daily cocaine self-administration. For this procedure, we utilized standard single-lever operant chambers housed within sound-attenuating boxes for cocaine self-administration sessions and utilized ultrasonic microphones, multi-channel recording hardware and specialized software programs to detect and analyze USVs. USVs measurements reflect emotionality of rats before, during and after drug availability and can be correlated with commonly assessed drug self-administration behavioral data such lever responses, inter-response intervals and locomotor activity. Since USVs can be assessed during intervals prior to drug availability (e.g., anticipatory USVs) and during drug extinction trials, changes in affect associated with drug anticipation and drug abstinence can also be determined. In addition, determining USV changes over the course of short- and long-term drug exposure can provide a more detailed interpretation of drug exposure effects on affective functioning.

Drug self-administration and ultrasonic vocalizations (USV) are used as behavioral assessments in animal research, but rarely in combination. The purpose of this article is to describe the advantages of recording USVs during drug self-administration procedures to assess affective responses to drug experience.

Sıçanlar İlaç Öz-yönetim sırasında Ultrasonik seslenmelere Değerlendirilmesi

Drug self-administration procedures are commonly used to study behavioral and neurochemical changes associated with human drug abuse, addiction and ...

Microdialysis of Ethanol During Operant Ethanol Self-administration and Ethanol Determination by Gas Chromatography

Operant self-administration methods are commonly used to study the behavioral and pharmacological effects of many drugs of abuse, including ethanol. However, ethanol is typically self-administered orally, rather than intravenously like many other drugs of abuse. The pharmacokinetics of orally administered drugs are more complex than intravenously administered drugs. Because understanding the relationship between the pharmacological and behavioral effects of ethanol requires knowledge of the time course of ethanol reaching the brain during and after drinking, we use in vivo microdialysis and gas chromatography with flame ionization detection to monitor brain dialysate ethanol concentrations over time. 
Combined microdialysis-behavioral experiments involve the use of several techniques. In this article, stereotaxic surgery, behavioral training and microdialysis, which can be adapted to test a multitude of self-administration and neurochemical centered hypotheses, are included only to illustrate how they relate to the subsequent phases of sample collection and dialysate ethanol analysis. Dialysate ethanol concentration analysis via gas chromatography with flame-ionization detection, which is specific to ethanol studies, is described in detail. Data produced by these methods reveal the pattern of ethanol reaching the brain during the self-administration procedure, and when paired with neurochemical analysis of the same dialysate samples, allows conclusions to be made regarding the pharmacological and behavioral effects of ethanol.

A method to determine the time course of ethanol concentration in the brains of rats during operant ethanol self-administration is described. Gas chromatography with flame ionization detection is used to quantify ethanol in the dialysate samples, because it has the sensitivity required for the small volumes that are generated.

Gaz kromatografisi ile operant etanol kendi kendine uygulama ve etanol belirleme sırasında etanol mikrodivaliz

Operant self-administration methods are commonly used to study the behavioral and pharmacological effects of many drugs of abuse, including ethanol.  ...

Stab Wound Injury of the Zebrafish Adult Telencephalon: A Method to Investigate Vertebrate Brain Neurogenesis and Regeneration

Adult zebrafish have an amazing capacity to regenerate their central nervous system after injury. To investigate the cellular response and the molecular mechanisms involved in zebrafish adult central nervous system (CNS) regeneration and repair, we developed a zebrafish model of adult telencephalic injury.
In this approach, we manually generate an injury by pushing an insulin syringe needle into the zebrafish adult telencephalon. At different post injury days, fish are sacrificed, their brains are dissected out and stained by immunohistochemistry and/or in situ hybridization (ISH) with appropriate markers to observe cell proliferation, gliogenesis, and neurogenesis. The contralateral unlesioned hemisphere serves as an internal control. This method combined for example with RNA deep sequencing can help to screen for new genes with a role in zebrafish adult telencephalon neurogenesis, regeneration, and repair.

To shed light on the cellular and molecular mechanisms of zebrafish adult neurogenesis and regeneration, we developed a protocol for invasive surgery causing mechanical injuries in the zebrafish adult telencephalon and subsequent monitoring of changes in the stabbed hemisphere by immunohistochemistry or in situ hybridization.

Zebra balığı Yetişkin telencephalon stab Yara Yaralanma: Omurgalı Beyin nöron ve Rejenerasyon Soruşturma Bir Yöntem

Adult zebrafish have an amazing capacity to regenerate their central nervous system after injury. To investigate the cellular response and the molecular ...

Assessment of Neuronal Viability Using Fluorescein Diacetate-Propidium Iodide Double Staining in Cerebellar Granule Neuron Culture

Primary cultured Cerebellar Granule Neurons (CGNs) have been widely used as an in vitro model in neuroscience and neuropharmacology research. However, the co-existence of glial cells and neurons in CGN culture might lead to biases in the accurate assessment of neuronal viability. Fluorescein diacetate (FDA) and Propidium Iodide (PI) double staining has been used to measure cell viability by simultaneously evaluating the viable and dead cells. We used FDA-PI double staining to improve the sensitivities of the colorimetric assays and to evaluate neuronal viability in CGNs. Furthermore, we added blue fluorescent DNA stains (e.g., Hoechst) to improve the accuracy. This protocol describes how to improve the accuracy of assessment of neuronal viability by using these methods in CGN culture. Using this protocol, the number of glial cells can be excluded by using fluorescence microscopy. A similar strategy can be applied to distinguish the unwanted glial cells from neurons in various mixed cell cultures, such as primary cortical culture and hippocampal culture.

This protocol describes how to accurately measure neuronal viability using Fluorescein diacetate (FDA) and Propidium Iodide (PI) double staining in cultured cerebellar granule neurons, a primary neuronal culture used as an in vitro model in neuroscience and neuropharmacology research.

Serebellar Granül Nöron Kültüründe Floresan Diasetat-Propidyum İyodür Çift Boyama Kullanarak Nöronal Canlılığın Değerlendirilmesi

Primary cultured Cerebellar Granule Neurons (CGNs) have been widely used as an in vitro model in neuroscience and neuropharmacology research. However, the ...

A Novel Method to Model Chronic Traumatic Encephalopathy in Drosophila

Chronic Traumatic Encephalopathy (CTE) is an established neurodegenerative disease that is closely associated with exposure to repetitive mild Traumatic Brain Injury (mTBI). The mechanisms responsible for its complex pathological changes remain largely elusive, despite a recent consensus to define the neuropathological criteria. Here, we describe a novel method to develop a model of CTE in Drosophila melanogaster&#160;(Drosophila&#160;)&#160;in an attempt to identify the key genes and pathways that lead to the characteristic hyperphosphorylated tau accumulation and neuronal death in the brain. Adjustable-strength impacts to inflict mild closed injury are delivered directly to the fly head, subjecting the head to rapid acceleration and deceleration. Our method eliminates the potential problems inherent with other Drosophila mTBI models (e.g.,animal death might be induced by damage to other parts of the body or to internal organs). The less labor- and cost-intensive animal care, short life span, and extensive genetic tools make the fruit fly ideal to study CTE pathogenesis and make it possible to perform large-scale, genome-wide forward genetic and pharmacological screens. We anticipate that the ongoing characterization of the model will generate important mechanistic insights on disease prevention and therapeutic approaches.

A Novel Method to Model Chronic Traumatic Encephalopathy in Drosophila

Here, we describe a new approach to inflict closed-head traumatic brain injury in Drosophila melanogaster. Our method has the advantage of directly delivering repetitive impacts with adjustable strength to the head alone. Further exploration of the invertebrate system will help to illuminate the pathogenesis of chronic traumatic encephalopathy.

Kronik Travmatik Ensefalopatiyi Modelleyen Yeni Bir Yöntem<em&gt; Drosophila</em

Chronic Traumatic Encephalopathy (CTE) is an established neurodegenerative disease that is closely associated with exposure to repetitive mild Traumatic ...

Assay Development for High Content Quantification of Sod1 Mutant Protein Aggregate Formation in Living Cells

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disease that can be caused by inherited mutations in the gene encoding copper-zinc superoxide dismutase 1 (SOD1). The structural instability of SOD1 and the detection of SOD1-positive inclusions in familial-ALS patients supports a potential causal role for misfolded and/or aggregated SOD1 in ALS pathology. In this study, we describe the development of a cell-based assay designed to quantify the dynamics of SOD1 aggregation in living cells by high content screening approaches. Using lentiviral vectors, we generated stable cell lines expressing wild-type and mutant A4V SOD1 tagged with yellow fluorescent protein and found that both proteins were expressed in the cytosol without any sign of aggregation. Interestingly, only SOD1 A4V stably expressed in HEK-293, but not in U2OS or SH-SY5Y cell lines, formed aggregates upon proteasome inhibitor treatment. We show that it is possible to quantify aggregation based on dose-response analysis of various proteasome inhibitors, and to track aggregate-formation kinetics by time-lapse microscopy. Our approach introduces the possibility of quantifying the effect of ALS mutations on the role of SOD1 in aggregate formation as well as screening for small molecules that prevent SOD1 A4V aggregation.

We describe a method to quantify the aggregation of misfolded proteins. Our protocol details lentiviral induced stable cell line generation, automated confocal imaging, and image analysis of protein aggregates. As an illustrative application, we studied the effect of small molecules in promoting SOD1 aggregation in a time- and dose-dependent manner.

Yüksek içerik miktar Sod1 canlı hücreler Mutant Protein toplama oluşumu için tahlil geliştirme

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disease that can be caused by inherited mutations in the gene encoding copper-zinc ...

A Rat Model of Central Fatigue Using a Modified Multiple Platform Method

In this article, we introduced a rat model of central fatigue using the modified multiple platform method (MMPM). The Multiple Platform box was designed as a water tank with narrow platforms on the bottom. The model rats were put into the tank and stood on the platforms for 14 h (18:00 - 8:00) per day for a consecutive 21 days, with a blank control group set for contrast. At the end of modeling, rats in the model group showed an obvious fatigued appearance. To assess the model, we performed several behavioral tests, including the open field test (OFT), the elevated plus maze (EPM) test, and the exhaustive swimming (ES) test. The results showed that anxiety, spatial cognition impairment, poor muscle performance, and declined voluntary activity presented in model rats confirm the diagnosis of&#160;central fatigue. Changes of the central neurotransmitters also verified the result. In conclusion, the model successfully simulated central fatigue, and future study with the model may help reveal the pathological mechanism of the disease.

Here, we present a protocol to introduce a rat model of central fatigue using the modified multiple platform method (MMPM).

Bir fare modeli değiştirilmiş bir kullanarak merkezi yorgunluk birden çok Platform yöntemi

In this article, we introduced a rat model of central fatigue using the modified multiple platform method (MMPM). The Multiple Platform box was designed ...

A Volumetric Method for Quantification of Cerebral Vasospasm in a Murine Model of Subarachnoid Hemorrhage

Subarachnoid hemorrhage (SAH) is a subtype of hemorrhagic stroke. Cerebral vasospasm that occurs in the aftermath of the bleeding is an important factor determining patient outcome and is therefore frequently taken as a study endpoint. However, in small animal studies on SAH, quantification of cerebral vasospasm is a major challenge. Here, an ex vivo method is presented that allows quantification of volumes of entire vessel segments, which can be used as an objective measure to quantify cerebral vasospasm. In a first step, endovascular casting of the cerebral vasculature is performed using a radiopaque casting agent. Then, cross-sectional imaging data are acquired by micro computed tomography. The final step involves 3-dimensional reconstruction of the virtual vascular tree, followed by an algorithm to calculate center lines and volumes of the selected vessel segments. The method resulted in a highly accurate virtual reconstruction of the cerebrovascular tree shown by a diameter-based comparison of anatomical samples with their virtual reconstructions. Compared with vessel diameters alone, the vessel volumes highlight the differences between vasospastic and non-vasospastic vessels shown in a series of SAH and sham-operated mice.

The goal of this article is to present a method that allows a 3-dimensional reconstruction of the cerebrovascular tree in mice after micro computed tomography and determination of volumes of entire vessel segments that can be used to quantify cerebral vasospasm in murine models of subarachnoid hemorrhage.

Subaraknoid kanama, bir fare modeli serebral Vasospasm miktar hacimsel bir yöntemi

Subarachnoid hemorrhage (SAH) is a subtype of hemorrhagic stroke. Cerebral vasospasm that occurs in the aftermath of the bleeding is an important factor ...

Autoradiography as a Simple and Powerful Method for Visualization and Characterization of Pharmacological Targets

In vitro autoradiography aims to visualize the anatomical distribution of a protein of interest in tissue from experimental animals as well as humans. The method is based on the specific binding of a radioligand to its biological target. Therefore, frozen tissue sections are incubated with radioligand solution, and the binding to the target is subsequently localized by the detection of radioactive decay, for example, by using photosensitive film or phosphor imaging plates. Resulting digital autoradiograms display remarkable spatial resolution, which enables quantification and localization of radioligand binding in distinct anatomical structures. Moreover, quantification allows for the pharmacological characterization of ligand affinity by means of dissociation constants (Kd), inhibition constants (Ki) as well as the density of binding sites (Bmax) in selected tissues. Thus, the method provides information about both target localization and ligand selectivity. Here, the technique is exemplified with autoradiographic characterization of the high-affinity &#947;-hydroxybutyric acid (GHB) binding sites in mammalian brain tissue, with special emphasis on methodological considerations regarding the binding assay parameters, the choice of the radioligand and the detection method.

The method of autoradiography is routinely used to study binding of radioligands to tissue sections for determination of qualitative or quantitative pharmacology.

Görselleştirme ve farmakolojik hedefleri karakterizasyonu için basit ve güçlü yöntemi olarak autoradiography

In vitro autoradiography aims to visualize the anatomical distribution of a protein of interest in tissue from experimental animals as well as humans. The ...