Saremco Dental Switzerland and Olympus Microsystems France Companies are gratefully acknowledged for their financial support. Saremco Dental is also acknowledged for the generous donation of the dental composites ELS extra low shrinkage. The authors also wish to express their appreciation to Dr Simon Banks from the department of Chemistry (University College London) for his assistance with English revision.

Protokol, üç ana adımdan oluşur: ilk adım kültür ortamı kompozit özü hazırlanmasını içerir; İkincisi ise birincil GF&#39;lerinin (HGF), hücre kültürü, kompozit özleri ve hücre boyama ile hücreler temas; Üçüncü adım konfokal görüntüleme ve flüoresan sinyal analiz oluşur. Dişeti dokuları almak için, protokol Fransız mevzuatında, aydınlatılmış onam ve yerel etik kurul uygun kabul edildi. 1. Kompozit ayıklar Hazırlık Elüsyon maddesi olarak Dulbecco&#39;nun modifiye edilmiş Eagle ortamında (DMEM) kullanın. Örneklerinin yüzey alanı ve ekstraksiyon ortamının hacmi arasındaki oran, ISO 10993/12 gereksinimleri en düşük seviyede olduğundan emin olun. Prosedür son 11 tarif ve aşağıda kısaca özetlenmiştir: <ol><li> Bir ısmarlama tutun kullanarak sertleşmemiş diş kompozit küresel numunelerini oluşturmaker. Tutucu boyutu oral klinik tedavisinde genel olarak tavsiye sertleştirme derinliğine bağlı olarak bir yarıçapı 2 mm.&#39;dir. </li><li> Plaka kuyuları hazırlayın,% 5 penisilin / streptomisin ve amfoterisin karışımı% 1 ile cenin sığır serumu (FBS) olmayan bir kültür ortamı, her biri 1 mi (DMEM). </li><li> 40 saniye için 1.070 mW cm-2 yoğunluğunun (λ = 465-475 nm), bir LED ışık lambası kullanılarak de ihtiva eden DMEM ortamı içinde tedavi örnekleri. Sertleştirme ucu ve numuneler arasındaki mesafe 0.5 mm aralığı içinde olduğundan emin olun. Diş ve iyileşmemişken diş kompozit arasındaki geçici temas simüle etmek için bu kür modu kullanın. Onar bileşik ve ağız boşluğuna yerleştirildiği zaman, klinik durumda, temas halinde. </li><li> Hava içinde% 5 CO2 ile nemlendirilmiş bir atmosfer altında 37 ° C&#39;de örnekleri (DMEM ortamında kompozit numuneler) inkübe edin. Aynı koşullarda kontrol hücreleri için (bileşik örnekleri olmadan) DMEM ortamı inkübe edin. </li></ol> 2. HGF Hücre Kültürü, Kompozit ayıklar Test ve Hücreler Boyama <ol><li> Büyüme ve hücre kültürlerinin bakımı Rutin ortodontik çekimi sırasında çekilen hastaların sağlıklı dişeti doku biyopsileri insan dişeti fibroblastlar izole. <ol><li> % 10 FBS varlığında DMEM GF&#39;lerinin yetiştirmek, 5% I Penisilin / Streptomisin ve% 1 amfoterisin B hava içinde% 5 CO2 gibi nemli bir atmosfer altında bir inkübatörde 37 ° C&#39;de hücreler koruyun. </li><li> Değişen ortam 3 günde, ve geçit hücreleri her 5 gün. Tripsinizasyonla konfluense, hasat hücreleri ulaştıktan sonra. </li><li> 5 dakika boyunca 90 x g&#39;de santrifüjleyin hücreler, kültür ortamı içine yeniden askıya. Bir asa el otomatik hücre sayıcı ile hücre sayın. </li><li> Bir bölme kaydırma sisteminde, 2.5 x 10 4 hücre / ml&#39;lik bir hücre yoğunluğunda, tohum hücre süspansiyonu. % 5 atmosferinde, gece boyunca 37 ° C&#39;de hücre inkübasyon izin verin. </li></ol></li><li> Kültür içindeki hücrelere bileşik ekstrelerinin ilavesi <ol><li> (Kuluçkadan 24 saat sonra), test edilen bileşik özlerinin 1 ml slaytı iki kuyu ortamı değiştirin. </li><li> Aynı koşullar altında kalan iki kuyu (kontrol hücreleri) koruyun. </li><li> Hava içinde% 5 CO2 &#39;nin nemlendirilmiş bir atmosferi altında, bir inkübatörde 37 ° C&#39;de dört kuyu içeren odanın slayt inkübe edin. </li></ol></li><li> Florasanla lekelenmesi Üreticinin talimatlarına uygun olarak ökaryotik hücreler için Canlı / Ölü sitotoksiklik leke kullanın. Not: kitin, plazma zan bütünlüğü ve esteraz etkinliği dayalı bir popülasyonda hücrelerin yaşama kabiliyetinin saptanması için hızlı bir iki-renkli floresan deneyi sağlar. Leke membranın hücre içi esteraz aktivitesi ve kırmızı-floresan Ethidium homodimeri-1 (EthD-1) belirtmek için kaybını göstermek için aynı anda yeşil floresan Kalsein-AM ile etiketleyerek hasarlı hücrelerin canlı ayırte bütünlüğü. <ol><li> Kalsein AM 2 uM ve 4 uM EthD-1 (fıbroblast boyanması için, uygun olduğu rapor nihai konsantrasyon) içeren iki leke reaktif bir çalışma çözeltisi hazırlayın. Seçilen bileşik ekstratlarının varlığında ya da yokluğunda kültürlenmiş yapışık hücrelere leke ekleyin. </li><li> Boyandıktan sonra ve zaman atlamalı görüntüleme yoluyla en az 15 dakika sonra, doğrudan ve hızlı bir şekilde boyanan hücre popülasyonları dikkate alınmalıdır. Değil santrifüj yapın ve lekeli hücrelerin fixe yok. </li></ol></li></ol> 3. Konfokal Time Lapse Görüntüleme ve Sinyal Analizi Kullanılan sistem, dört diyot lazer birimleri ve her bir numune için en fazla dört flüoresan boyalar için bir çok-lekeli bir görüntü ile donatılmıştır. Sistem bir faiz (600X büyütme) bir bölge gözlemlemek için taşıyabilirsiniz hangi test örneği bir bakış sağlayan bir haritalama görüntüsü (10X büyütme) gerçekleştirebilirsiniz. <ol><li> Zaman atlamalı görüntüleme <ol><li> S yerleştirinpecimens konfokal entegre kuluçka karanlık oda (bölme slayt lekeli örnekleri içeren) (37 C, CO 2 ve nemli bir atmosfer içinde% 5). </li><li> İlgili lazerler seçin. Kalsein ve EthD-1 heyecanlandırmak için iki lazer kaynaklarla 473 nm (15 mW) ve 559 nm (18 mW) kullanın. </li><li> Iki kullanılan floresan boya ile görüntülemede karışma olmadan hat dizileri yoluyla görüntü elde etmek için bir iki sıralı modunu kullanın. </li><li> Otomatik tarama biriminde floresan boya ile uygun olarak, şartların oluşturulması için yeni geliştirilmiş bir spektruma sahip bir detektör kullanır. </li><li> Maksimum her bir kanal için, tespit edilen floresan bant genişliği optimize. Tutanak tüm satın almalar sıralı potansiyel çapraz konuşmayı önlemek için. </li><li> Tedarik yazılımı kullanılarak floresan boya seçimine dayalı en uygun görüntüleme koşullarını seçin. </li><li> Otomatik olarak spiral bir desen merkezinde oluşturulan bir haritada bir görüntü elde edinilgi alanı ile kolayca yakından incelenmesi için seçilir. </li><li> Seç gözlem modu. Time-lapse, Z-yığını, ve gerektiği gibi çoklu alanı dahil olmak üzere gözlem modları beş türlerine kadar seçin. Bu çalışmada Z-yığını ve time-lapse modları bir arada kullanın ve hızla görüntü yakalama tamamlamak, </li><li> Değiştirin ve floresan boya geçmek. Alternatif olarak, floresan ve birbirleri ile hafif kontrast görüntüleri bindirmek. Sol alt harita ekranında seçilen noktasını kullanarak canlı görüntü gözlemleyebilirsiniz. </li><li> Çerçeveleme kullanan ve fonksiyonlarını yakınlaştırma tarafından görüntüleme alanını belirler. İsteğe bağlı olarak, floresan boya her tür ekranlar arasında geçiş. NOT: Bu protokolde kullanılan mikroskop kompakt bir tasarımda yüksek bir geleneksel confocal aynı işlevselliğe sahiptir. Mikroskop optimal olarak basitleştirilmiş bir dahili inkübatör canlı hücrelerinin kararlı zaman atlamalı görüntüleme için uygun olan ters çevrilmiş su daldırma hedefleri ile donatılmıştır. </li&gt; </ol></li><li> Sinyal analizi ve ölçümü <ol><li> Floresan sinyalini ölçmek için görüntüleme yazılımı kullanın. Her iki test örneği ve hücre kontrolü için 10X amacı ile beş harita görüntüleri edinin. </li><li> 0.231 mikron × 0,231 mikron piksel boyutu ile, 1024 × 1024 piksel düzenli görüntüleri elde edildi. Sinyal analizi için Olympus Image Format (OIF) olarak mağaza görüntüler. Bu biçim birlikte çeşitli parametre ayarlarını ve görüntüleri depolamak sağlar. Farklı analiz araçları (yoğunluk profilinin ölçümü, iki kullanılan kanallar arasında yoğunluk oranı) kullanın. </li><li> 12 bit / piksel TIFF dosyaları olarak maksimum projeksiyon görüntüleri saklayın. </li><li> R komutanı yazılımını kullanarak istatistiksel analizler preform. Bir tekrar testi yapılan varyans analizi (ANOVA) Tek yönlü analizi kullanılarak farklılıkları analiz edin. Raporu (± SD) olarak ortalama, standart sapma ve p &lt;0.05 değeri istatistiksel olarak anlamlı olur. </li></ol></li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests, they have nothing to disclose.

Biyouyumluluk malzeme davranışı tıbbi kullanımdan önce değerlendirilecek en önkoşul parametredir. Uluslararası standartlar tıbbi cihazlar ISO 10993 33 ve özellikle diş malzemeleri ISO 7405 34 kapsayacak. Çevreleyen hücrelere toksik etkilerin olmaması gibi malzemelerin biyouyumluluk değerlendirilmesinde anahtar norm. 37 - sitotoksisite testi diş malzeme biyouyumluluk 35 değerlendirilmesinde böyle bir öneme sahip nedeni budur. ISO test yöntemleri metabolik aktivite veya membran bütünlüğü temelinde olabilir önerdi. Seçilen uç noktalar zaman ve değerlendirme testlerinin maliyetini en aza indirmek için bir test malzeme ile uyarılan olumsuz etkilere sıralaması için belirli koşulları takip edilmelidir. Soruşturmanın akım yöntemi (3D konfokal time lapse görüntüleme) esaslı membran bütünlüğü olduğunu. Bu uç aracılığı ile sitotoksisite değerlendirilmesi hücre, biyolojik uyumluluğu değerli bir belirteç olarak görülmektedirTest edilen malzeme ve bunun ile sürülenlerden aynı zamanda ISO son nokta onaylanmıştır. İn vitro testler, bir malzeme örneği, özel bir hücre tipi nasıl etki ettiğinin saptanması için tasarlanmıştır. Kolorimetrik MTT deneyi ilk olarak in vitro ve hücre proliferasyonunun ölçülmesi için yararlı bir yöntem olarak (1983) Mossman tarafından tarif edilmiştir. MTT testi mitokondriyal aktivite belirlenerek aktif hücrelerin formazan kristalleri içine tetrazolyum tuzunun dönüştürülmesi, dayanmaktadır. Bu canlılığı oranı 38 ile tercüme edilebilir. Gupta ve işbirlikçileri MTT testi kompozit reçine sitotoksikligini ölçmek için en yaygın kullanılan yöntem olduğunu bildirdi. Süksinik dehidrojenaz ve alkalin fosfataz tepkileri ayrıca aynı amaç 39 kullanılmıştır. MTT deneyi her ölçüm zamanında hücreleri öldürerek gerektirmektedir Bununla birlikte, kaderin hücre, takip edilemez. Mevcut çalışmada daha yakından boyanmış hücrelerin davranışını izlemek için, DiCanlı hücrelerin rect gözlem, kısa protokol boyama, otomatik görüntü analizi ve floresan sinyal ölçümü ile kombine time lapse CLSM görüntüleme sayesinde gerçekleştirildi. Diş kompozitler oral dokular, özellikle dişeti ve pulpa hücreleri ile yakın temas. 41 - Fibroblast&#39;lar Bu restoratif kompozit 40 serbest bileşenlerin hedef olacaktır. Ayrıca birkaç çalışma, ölümsüzleştirilmiş hücreler ve birincil hücreler biyomalzeme ile temas içinde değişik hücresel tepkiler sahip olduğu belirtilmektedir. Birincil hücreler biyomaddeleri etkileri 42 değerlendirmek için daha uygun olduğu saptanmıştır. Bu, bu çalışmada test edilen diş kompozitin sitotoksisite değerlendirmesi için hücre modeli olarak primer insan diş eti fibroblast hücrelerinin kullanımını açıklar. 44 - Diş kompozit salınan maddelerin toksisitesi potansiyel geniş 43 incelenmiştir. T değerlendirmek içinUygun malzeme potansiyelini sitotoksik, iki temas modeli hücre gerçekleştirilebilir. Dolaylı temas sistemindeki hücreler, biyolojik ortamda elute olur temas eden hedef ise doğrudan temas modeli sisteminde malzeme doğrudan hedef hücreler ile yerleştirilir. Klinik uygulamada ve restoratif prosedürler için, diş kompozit diş eti dokuları ile dolaylı olarak temas edecek şekilde yerleştirilir. Bu nedenle, mevcut deneysel protokol (test kompozit özleri varlığında hücreler) GF&#39;lerinin ile dolaylı temas sistemi üzerinde duruldu. Daha önce Dahl ve işbirlikçileri tarafından bildirildiği gibi, sitotoksisite yanıtları için faaliyet göreceli dayalı &lt;(% 90), (30% orta (% 30-60), hafif (% 60-90) veya non-sitotoksik)&gt; ciddi olarak sıralanır edildi değerleri kontrol 45 elde edildi. Bu nedenle, elde edilen sonuçların ışığında (Tablo 1) Bu sıralama ve uygun, kompozit ELS ekstra düşük büzülme ver olarak sıralanır olabiliry hafifçe sitotoksik ve tüm zaman atlamalı dönemde hücreleri kontrol karşılaştırılabilir davranış gösterdi. Tam aynı araştırma yöntemi kullanarak, bu çalışmanın sonuçları yakın zamanda yayımlanan bir çalışmada kıyasla olabilir. ELS ekstra düşük büzülme kompozit doğrudan restorasyon 11, aynı klinik uygulama için kullanılan iki önce test kompozitlerle karşılaştırıldığında üstün bir biyouyumluluk göstermiştir. Daha ileri çalışmalar daha da tam bir karşılaştırma oluşturmak için gereklidir. Belirli bir son nokta değerlendirme için onaylamak için hangi sitotoksisite deneyi karar verirken, bu avantaj ve her testin sınırlarını anlamak önemlidir. Konfokal görüntüleme temel amacı, hücre ya da organların bir 3-D Mimari elde etmektir. Teknik Numunenin yüzeyine değil, aynı zamanda onun yeraltını sadece ortaya yapabiliyor. Burada açıklanan protokol, bir sensi olarak, 3D CLSM time lapse konfokal görüntüleme kullanımını altını çizentif yöntem, bir diş bileşik in vitro olarak biyolojik uyum davranışını değerlendirmek. Bununla birlikte, bu çalışmada karşılaşılan sınırlamalar önlemek amacıyla, titreşim önleyici iş istasyonları daha istikrarlı ve daha uzun bir zaman aralığı görüntülenmesine olanak sağlamak için kullanılabilir; masa laboratuvarda titreşimler neden olabilir zararlı etkilerinden kullanılan confocal sistemini izole olabilir. Ayrıca, malzeme ideal olarak diş eti dokulara zararsız olmalıdır, ağız boşluğunda kullanılmak üzere, sistemik toksisiteye neden olabilir hiçbir madde içermelidir. Kullanılan metodolojiye göre ve mevcut çalışmadan elde edilen sonuçlarda bu test kompozit (ELS ekstra düşük büzülme) Bu deneysel koşullarda sitotoksik olmadığı sonucuna varılabilir. CLSM yöntem, hassas bir canlı hücrelerinin ilk oran vermek üzere, diğer olasılıklar daha fazla bitiş noktası değerlendirmek için öngörülebilir. Özellikle, son zamanlarda rapor edilmiştir kompozit monomerleri thr hücrelerini etkileyenough reaktif oksijen türleri (ROS) 46- 48, daha fazla araştırma sitotoksisite arasında herhangi ağları ve ROS üretimini sinyalizasyon eğer ilişkiyi değerlendirmek için gereklidir. Gelecekteki protokolü aynı anda ROS üretimini değerlendirmek için (H 2 O 2 ve / veya O 2 - boyama) dizayn edilebilir ve zaman atlamalı CLSM görüntüleme kullanılarak sitotoksisite oranı (Canlı / ölü boyama).

Biyouyumluluk tanımlamak için ISO önerileri kote önemli ölçütlerden biri, hücrelere malzeme toksisite olmaması. Reçine tabanlı diş kompozitler zaman 1-4 üzerinde ve / ya da geç bozunma süreçleri kısmi polimerizasyon başlangıçta nedeniyle olabilir reçineli matrisi bileşenleri, bırakabilir. Bu serbest bileşenler ağız dokuları ile temas ve ürtikeryal ve mukozal reaksiyonlar 5 hastada 6 alerji ve aşırı duyarlılık reaksiyonları geliştirilmesi, mitojene üzerinde tipine dişeti fibroblastlar morfolojisi ve azaltılması modifikasyonları I kollajen protein 7, immünosüpresyonun veya immünostimülasyon gibi çeşitli sakıncaları olabilir genotoksik potansiyel 9 altını saflaştırılmış T-lenfositler ve dalak hücreleri 8 ve primer GF&#39;lerinin DNA hasarı -sürümlü çoğalması. Birçok parametreler gibi c gölge gibi diş kompozit toksisitesini etkileyebiliromposite, ışıkla sertleşen reçine monomer kimyasal bileşim olup, dolgu maddesi ve dönüşüm 10- 13 derecesine bağlıdır. Malzemelerin in vitro toksik potansiyel vivo durumlarda tahmin ve bazı ilgili son noktaların çalışmada klinik durumlara göre olabilir çünkü. Diş bileşikler ve bunların bileşenleri sitotoksisitesi yaygın olarak hücre kültür sistemleri 14- 16 ile değerlendirilmiştir. Bu in vitro sistemler vadede diş kompozit biyolojik uyumu değerlendirmek için geliştirilmiştir: hücre büyümesi ve hücre apoptozu, hücreler 17 gibi, THP-1monocytes kullanılarak GF&#39;lerinin 18 sitotoksisite, HaCaT&#39;ta inflammatuar potensiyelleri hücreler 2, hücre fonksiyonu gibi keratinositler odontoblast- MDPC-23 hücreleri 19 toplam RNA seviyelerinin azaltılması ve insan dişeti apoptoz indüklenmesinde önemli bir artış gibi keratinositler, 20 veDişeti ve posa fibroblast hücreleri 21 DNA hasarı. Farklı yöntemler diş kompozit biyouyumluluk araştırmak için önerilmektedir. Belirli bir renklendirici ve hafif tutma ölçümleri gibi kolorimetrik tahlilleri, nedeniyle göreli olarak basit ve düşük maliyetli 22 ila 26, en yaygın olarak kullanılan kalır. Işık aksine mikroskopisi analizi sık sık daha fazla zaman harcar ve yüksek maliyetler doğurur. Ancak, bu mikroskopi teknikleri bazı önemli avantajları var. Hücre yapısının gözlem, böylece daha ilgili ve hassas veriler sağlayan, deneyimli toksik etkileri hakkında genişletilmiş bilgi verir. Özellikle, konfokal mikroskopi 27 giriş, geleneksel geniş alan görüntüleme floresan mikroskopları ile karşılaştırıldığında eksenel çözünürlüğünü artırılması ile biyolojik yapıların gözlem için izin verdi. Dolayısıyla, konfokal görüntüleme farklı alanlarında güçlü bir araştırma aracı haline gelmiştirtıbbi ve bilimsel araştırmalar. Elektronik mikroskopi teknikleri farklı olarak, tarama, konfokal mikroskopi özel flüoresan işaretler dahil edilmesi ile hücrelerin ayrı bileşenleri görselleştirmek için olanağı sunar. Bu özel izleyici çoğu klinik kullanım alanı ve ayrıca laboratuar araştırma çalışmaları sağlayan, bir sulu ortam içinde kararlı makul ölçülebilir, ucuz ve 28 toksik olmayan. Ayrıca, geleneksel bir elektronik mikroskopi analizi için gerekli olan numune kurutma ve fikse zaman atlamalı konfokal görüntüleme için gerekli değildir, ve böylece zaman bağımlı alıcı numuneleri üzerinde de mümkündür. İki-boyutlu görüntü ile karşılaştırıldığında, konfokal görüntüleme maddenin, örnek altı görselleştirme ve farklı edilen derinlik görüntüleri üç-boyutlu yapı, yeniden sağlar; ile sonuçlanan, daha hassas ve daha fazla sayıda yapısal detayları 29, 30. Mevcut Video Çalışma üç boyutlu Hızlandırılmış C kullanımının bir örneğiyenilikçi bir yöntem olarak Dead / Canlı floresan etiketleme ve sinyal ölçümü ile kombine onfocal Lazer Tarama Mikroskobu (3D-CLSM). Bu çalışmada sunulan teknik değerlendirilen hücre yapısını değiştirmeden canlı hücreleri hassas değerlendirilmesi ve time-lapse görüntüleme avantajına sahiptir. Hiçbir hazırlık adımları confocal analizden önce gereklidir. Daha önce, aynı boyama kültürlenmiş süngerimsi kemik çekirdek 31 uygunluğu değerlendirmek için, ancak şu konfokal hızlandırılmış kullanılmıştır. Benzer şekilde, aynı time-lapse konfokal prosedürü / belirli bir bakteri yaşıyor ölü boyama kullanarak kendi Gram türüne 32&#39;ye göre aktif çamur bakterilerde eritromisin zaman öldürmek aktivitesini değerlendirmek için kullanıldı. Bu yöntemler, son uyarlanmıştır ve metakrilat monomerlere 11 göre diş kompozit toksisitesini karşılaştırmak için kullanılmıştır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Olympus Fluoview FV10i&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Olympus</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Confocal microscope</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">O2/Co2 Incubator</td>
			<td style="width:71px;">Pnasonic</td>
			<td style="width:119px;">MCO 5M</td>
			<td>Cell incubation</td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Live/Dead&#174; Kit</td>
			<td>Invitrogen&#160;</td>
			<td style="width:119px;">MP 03224</td>
			<td>Stain&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">ELS extra low shrinkage&#174;&#160;</td>
			<td style="width:71px;">Saremco&#160;</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Dental composite</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">DMEM medium</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">D 6046</td>
			<td>Culture medium</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Trypsin</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">T1426</td>
			<td>harvesting cells</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">chamber slide system&#160;&#160;</td>
			<td style="width:71px;">PAA</td>
			<td style="width:119px;">14220040X</td>
			<td>Culture chamber</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">penicillin/streptomycin&#160;</td>
			<td style="width:71px;">PAA</td>
			<td style="width:119px;">P11-010</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Amphotericin B</td>
			<td style="width:71px;">PAA</td>
			<td style="width:119px;">P11-001</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Foetal bovine serum&#160;</td>
			<td style="width:71px;">PAA</td>
			<td style="width:119px;">A11-101</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Cell Counter</td>
			<td>Merck Millipore</td>
			<td style="width:119px;">00110230TP1</td>
			<td>Cell counting&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

confocal time lapse imaging as an efficient method for the cytocompatibility evaluation of dental composites

Bu genel olarak in vitro hücre malzemesi etkileşimi diş malzemesi biyouyumluluk değerlendirilmesinde yararlı bir kriter olduğu kabul edilmektedir. Bu çalışmanın amacı, diş kompozitlerin in vitro biyolojik uyumluluğunun değerlendirmek için 3 boyutlu CLSM zaman atlamalı confocal görüntüleme kullanmaktı. Bu yöntem, diş bileşik özleri ile temas içinde canlı hücre oranının doğru ve hassas bir göstergesi sağlar. ELS ekstra düşük büzülme, doğrudan restorasyonu için kullanılan bir diş kompozit, örnek olarak alınmıştır. In vitro değerlendirme Live / Dead boyası kullanılarak kültüre birincil insan dişeti fibroblast hücreleri üzerinde gerçekleştirildi. Görüntüler FV10i confocal biyolojik ters sistemi ile elde ve FV10-ASW 3.1 Yazılımı ile analiz edildi. Görüntü analizi süreye 5 saat sonra, test edilen bileşiğin varlığında, çok hafif bir sitotoksisite göstermiştir. Hücre canlılığı hafif bir azalma, test edilen bileşik özütler karş ile temas halinde gösterilmiştired hücreleri kontrol etmek. Bulgular niteliksel ve niceliksel olarak diş kompozit biyouyumluluk davranışlarını değerlendirmek için hassas bir yöntem olarak 3D CLSM time lapse görüntüleme vurguluyor.

Şekil 1 kontrol ve test kompozit ekstrelerin (ELS ekstra düşük büzülme) maruz kalan hücreleri için elde edilen haritalama görüntüleri (10X objektif) olarak Canlı / Ölü lekeli hücrelerin bir bakış gösterdi. Hücrelerin, üç boyutlu yapı, büyütme 600x de gözlemlenebildi. Kontrol odasındaki ve test edilen bileşik ekstrelerinin mevcudiyetinde oda içinde toplanan hücrelerin toplanması hücre Görselleştirme Şekil 2&#39;de sunulmuştur. Maksimum çıkıntı (amacı, 60X) süreye başlangıcında için seçilen hücre popülasyonlarının kaderi göstermektedir (15 dakikada) ve bir zaman aralığı süresinin sonunda (5 saat sonra). Görüntülerin Elli yedi yığınlarının (xyzt mod tarama, yığınlarının başına 39 görüntüler, voxel derinlik 1.00 mikron) bu dönemde elde edilmiştir. Kırmızı floresan bir yeşil flüoresan sinyalinde hafif bir azalma ve çok küçük bir değişime maruz bırakılan hücrelerde elde edilmiştir. Önemli bir varyasyon kontrolü için gözlendihücreler. Kompozit özler maruz hücreler kontrol etmek için benzer mil morfoloji üstlendi; morfolojisi (yeşil sinyal azalması ve test edilen bileşiğin varlığında, kırmızı sinyal artmasına rağmen) bu deney koşullarında değişmemiştir. Görüntü analizi, yeşil ve kırmızı sinyal için negatif kontrol hücreleri ile karşılaştırıldığında, test edilen bileşik için elde edilen görüntü ile ilgili farklı hücre birikmeye tekabül eden beş seçilen farklı görüntü yığınlarının üzerinde gerçekleştirildi. Lekeli hücrelerin yoğunluğu profili, Şekil 3&#39;te gösterilmiştir; Test edilen bileşik ile temas halinde olan hücre, yeşil ve kırmızı sinyal gelişimi kontrol hücreleri ile karşılaştırılabilir olmuştur. Kalsein ve EthD-1 floresan emisyon yoğunlukları, kontrol hücreleri ve kompozit maruz kalan hücreler üzerinde ölçülmüştür. Ölçüm en fazla beş saat için, bir saatlik aralıklarla yapıldı. Yeşil 495-515 nm entegre edilmiş yoğunluklarının ve kırmızı 620-650 nm sinyallerine dayanan kırmızı / yeşil flüoresans oranı () Time-lapse dönemde hesaplanmıştır. ELS İlave düşük çekme ekstrelere yaşayabilirliği kontrol oranları ve maruz kalan hücreler, 1 mümkün T de gösterilmiştir. Test edilen bileşiğin varlığında, canlı hücre yüzdesi, 1 saat sonra% 93.9 kadar% 100 biraz azalttığı bulunmuştur iletişim. Önemli fark, belirtilen zaman atlamalı süresinin 5 saat sonra, test bileşimi ve (herhangi bir bileşik ekstreler olmayan hücre), negatif kontrol arasında gözlenmiştir. <img alt="Şekil 1," src="/files/ftp_upload/51949/51949fig1highres.jpg" /> Şekil 1: haritalama görüntünün Bakış zaman atlamalı dönemi (t = 15 dk) başında kompozit özleri (ELS ekstra düşük büzülme) varlığında objektif 10X, (A) kontrol hücreleri ve (B) hücreleri hücrelere lekeli gösterdi. Yeşil alanlar, canlı hücreler vardır ve kırmızı alanlar hasarlı hücrelerdir. Bu daDeney koşulları, (yeşil ve kırmızı floresans) hiç değişim, negatif kontrol hücreleri ile karşılaştırıldığında kompozit maruz bırakılan hücrelerde gözlenmiştir. <img alt="Şekil 2," src="/files/ftp_upload/51949/51949fig2highres.jpg" /> Şekil 2 (A), kumanda odasının ve başlangıçta (B) birleşik ekstreler bölmesi ve maruz kalma süresi hızlandırılmış döneminin sonunda bir hücre popülasyonunun amacı 60X en CLSM resim (I: 15 dakika ve II, sırasıyla: 5 saat, ). Yeşil alanlar, canlı hücreler vardır ve kırmızı alanlar hasarlı hücrelerdir. Görüntülerin paneli yoğunluğu sinyalde hafif bir değişiklik (yeşil sinyalde hafif bir azalma ve kırmızı birinde çok hafif bir artış) göstermiştir. Hiçbir hücre morfolojisi değişiklikleri kompozit ekstratlarının varlığında gözlendi; kontrol hücreleri olarak mil şekilli ve fibroblastik morfolojisi muhafaza hücreler maruz kalmaktadır. Şekil 3: zaman atlamalı mikroskopi gözlenen hücre hattı profili, 15 dakika ve 5 saat sonra (II), (A) Kontrol hücreleri (B) Bileşik özütler maruz kalan hücreleri (I) &#39;.. Ne olursa olsun test edilen bileşiğin varlığında, yeşil sinyal evriminde Görünür bir değişiklik zamanlı iletişim. Ancak, kırmızı sinyal hafif bir artış temas 5 saat sonra bileşik varlığında gözlenmiştir. <table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0"><tbody><tr><td rowspan="2"> İletişim süresi (saat) </td><td colspan="5"> Hücre canlılığı, (%) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 4 </td><td> 5 </td></tr><tr><td> Kontrol hücreleri </td><td> 100 </td><td> 100 </td><td> 100 &lt;/ Td&gt; <td> 100 </td><td> 100 </td></tr><tr><td> ELS ekstra düşük büzülme ® </td><td> 93.9 ± 7 </td><td> 91.3 ± 5 * </td><td> 89.5 ± 3 * </td><td> 87.6 ± 2 * </td><td> 87.7 ± 3 * </td></tr></tbody></table> Tablo 1:. Kompozit ekstraktlar Hücre canlılığı temas 1, 2, 3, 4 ve 5 saat sonra canlı, HGF hücreler evrim Oranı / Canlı Ölü sitotoksisite kiti kullanılarak lekeleme ile analiz edilmiştir. Beş görüntülerin SD analizini yığınlarının ± Veriler ortalama değerleri göstermektedir. Değerler p &lt;0.05 kontrol hücrelerinden önemli ölçüde farklıdır.

Watch this Scientific Journal Video about Confocal Time Lapse Imaging as an Efficient Method for the Cytocompatibility Evaluation of Dental Composites at JoVE.com

Confocal Time Lapse Imaging as an Efficient Method for the Cytocompatibility Evaluation of Dental Composites

Diş kompozit biyouyumluluk en çok çalışılan yönü floresan sinyal ölçümü ile birlikte kendi sitotoksisite 3D CLSM time lapse görüntüleme zamanla hücre kaderinin duyarlı değerlendirilmesine olanak olduğunu. Bu yöntemi kullanan diş kompozit cytocompatibility değerlendirmek için etkili bir araç olabilir.

Diş Kompozit Cytocompatibility Değerlendirme Verimli Yöntemi olarak Confocal Time Lapse Görüntüleme

It is generally accepted that in vitro cell material interaction is a useful criterion in the evaluation of dental material biocompatibility. The ...

confocal-time-lapse-imaging-as-an-efficient-method-for

Research

JoVE Journal

Medicine

13.4K Görüntüleme.  UMR CNRS 5615, Université Lyon1.  Diş kompozit biyouyumluluk en çok çalışılan yönü floresan sinyal ölçümü ile birlikte kendi sitotoksisite 3D CLSM time lapse görüntüleme zamanla hücre kaderinin duyarlı değerlendirilmesine olanak olduğunu. Bu yöntemi kullanan diş kompozit cytocompatibility değerlendirmek için etkili bir araç olabilir. 

Video: Confocal Time Lapse Imaging as an Efficient Method for the Cytocompatibility Evaluation of Dental Composites

Evaluation of Nanoparticle Uptake in Tumors in Real Time Using Intravital Imaging

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle uptake in tumors at the microscopic level1,2,3, highlighting the utility of a suitable xenograft model in which to perform detailed uptake analyses. Here, we use high-resolution intravital imaging to evaluate nanoparticle uptake in human tumor xenografts in a modified, shell-less chicken embryo model. The chicken embryo model is particularly well-suited for these in vivo analyses because it supports the growth of human tumors, is relatively inexpensive and does not require anesthetization or surgery 4,5. Tumor cells form fully vascularized xenografts within 7 days when implanted into the chorioallantoic membrane (CAM) 6. The resulting tumors are visualized by non-invasive real-time, high-resolution imaging that can be maintained for up to 72 hours with little impact on either the host or tumor systems. Nanoparticles with a wide range of sizes and formulations administered distal to the tumor can be visualized and quantified as they flow through the bloodstream, extravasate from leaky tumor vasculature, and accumulate at the tumor site. We describe here the analysis of nanoparticles derived from Cowpea mosaic virus (CPMV) decorated with near-infrared fluorescent dyes and/or polyethylene glycol polymers (PEG) 7, 8, 9,10,11. Upon intravenous administration, these viral nanoparticles are rapidly internalized by endothelial cells, resulting in global labeling of the vasculature both outside and within the tumor7,12. PEGylation of the viral nanoparticles increases their plasma half-life, extends their time in the circulation, and ultimately enhances their accumulation in tumors via the enhanced permeability and retention (EPR) effect 7, 10,11. The rate and extent of accumulation of nanoparticles in a tumor is measured over time using image analysis software. This technique provides a method to both visualize and quantify nanoparticle dynamics in human tumors.

We present a novel approach to quantify nanoparticle localization in the vasculature of human xenografted tumors using dynamic, real-time intravital imaging in an avian embryo model.

Intravital Görüntüleme Gerçek Zamanlı tümörler Nanopartikül Alımı Değerlendirme

Current technologies for tumor imaging, such as ultrasound, MRI, PET and CT, are unable to yield high-resolution images for the assessment of nanoparticle ...

Tıp

Time-lapse Imaging of Primary Preneoplastic Mammary Epithelial Cells Derived from Genetically Engineered Mouse Models of Breast Cancer

Time-lapse imaging can be used to compare behavior of cultured primary preneoplastic mammary epithelial cells derived from different genetically engineered mouse models of breast cancer. For example, time between cell divisions (cell lifetimes), apoptotic cell numbers, evolution of morphological changes, and mechanism of colony formation can be quantified and compared in cells carrying specific genetic lesions. Primary mammary epithelial cell cultures are generated from mammary glands without palpable tumor. Glands are carefully resected with clear separation from adjacent muscle, lymph nodes are removed, and single-cell suspensions of enriched mammary epithelial cells are generated by mincing mammary tissue followed by enzymatic dissociation and filtration. Single-cell suspensions are plated and placed directly under a microscope within an incubator chamber for live-cell imaging. Sixteen 650 &mu;m x 700 &mu;m fields in a 4x4 configuration from each well of a 6-well plate are imaged every 15 min for 5 days. Time-lapse images are examined directly to measure cellular behaviors that can include mechanism and frequency of cell colony formation within the first 24 hr of plating the cells (aggregation versus cell proliferation), incidence of apoptosis, and phasing of morphological changes. Single-cell tracking is used to generate cell fate maps for measurement of individual cell lifetimes and investigation of cell division patterns. Quantitative data are statistically analyzed to assess for significant differences in behavior correlated with specific genetic lesions.

Time-lapse imaging is used to assess behavior of primary preneoplastic mammary epithelial cells derived from genetically engineered mouse models of breast cancer risk to determine if there are correlations between specific behavioral parameters and distinct genetic lesions.

Birincil Preneoplastic Meme Epitel Hücrelerinin Time-lapse görüntüleme Meme Kanseri Genetik Fare Modelleri türetilen

Time-lapse  imaging can be used to compare behavior of cultured primary preneoplastic  mammary epithelial cells derived from different genetically ...

The In Ovo Chick Chorioallantoic Membrane (CAM) Assay as an Efficient Xenograft Model of Hepatocellular Carcinoma

The chick chorioallantoic membrane (CAM) begins to develop by day 7 after fertilization and matures by day 12. The CAM is naturally immunodeficient and highly vascularized, making it an ideal system for tumor implantation. Furthermore, the CAM contains extracellular matrix proteins such as fibronectin, laminin, collagen, integrin alpha(v)beta3, and MMP-2, making it an attractive model to study tumor invasion and metastasis. Scientists have long taken advantage of the physiology of the CAM by using it as a model of angiogenesis. More recently, the CAM assay has been modified to work as an in vivo xenograft model system for various cancers that bridges the gap between basic in vitro work and more complex animal cancer models. The CAM assay allows for the study of tumor growth, anti-tumor therapies, and pro-tumor molecular pathways in a biologically relevant system that is both cost- and time-effective. Here, we describe the development of CAM xenograft model of hepatocellular carcinoma (HCC) with embryonic survival rates of up to 93% and reliable tumor take leading to growth of three-dimensional, vascularized tumors.

The In Ovo Chick Chorioallantoic Membrane CAM Assay as an Efficient Xenograft Model of Hepatocellular Carcinoma

The chick chorioallantoic membrane (CAM) is immunodeficient and highly vascularized, making it a natural in vivo model of tumor growth and angiogenesis. In this protocol, we describe a reliable method of growing three-dimensional, vascularized hepatocellular carcinoma (HCC) tumors using the CAM assay.

<em&gt; Ovo</emHepatosellüler karsinom Verimli Xenograftlarında Modeli olarak&gt; Piliç Chorioallantoic Membran (CAM) Deneyi

The chick chorioallantoic membrane (CAM) begins to develop by day 7 after fertilization and matures by day 12. The CAM is naturally immunodeficient and ...

An Improved Method for Rapid Intubation of the Trachea in Mice

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity is a commonly used model to study both acute lung injury and fibrosis, and multiple methods have been developed for administering bleomycin (and other toxic agents) into the lungs. However, many of these approaches, such as transtracheal instillation, have inherent drawbacks, including the need for strong anesthetics and survival surgery. This paper reports a quick, reproducible method of intratracheal intubation that involves mild inhaled anesthesia, visualization of the trachea, and the use of a surrogate spirometer to confirm exposure. As a proof of concept, 8-12 week old C57BL/6 mice were administered either 2.0 U/kg of bleomycin or an equivalent volume of PBS, and both damage and fibrotic endpoints were measured post-exposure. This procedure allows researchers to treat a large cohort of mice in a relatively short period with little expense and minimal post-procedure care.

This article presents a rapid and simple method for administering bleomycin directly into the mouse trachea via intubation. Key advantages of this method are that it is highly reproducible, easy to master, and does not require specialized equipment or lengthy recovery times.

Farelerde Trakea hızlı intübasyon için geliştirilmiş bir yöntem

Despite some anatomical and physiological differences, mouse models continue to be an essential tool for studying human lung disease. Bleomycin toxicity ...

Extended Time-lapse Intravital Imaging of Real-time Multicellular Dynamics in the Tumor Microenvironment

In the tumor microenvironment, host stromal cells interact with tumor cells to promote tumor progression, angiogenesis, tumor cell dissemination and metastasis. Multicellular interactions in the tumor microenvironment can lead to transient events including directional tumor cell motility and vascular permeability. Quantification of tumor vascular permeability has frequently used end-point experiments to measure extravasation of vascular dyes. However, due to the transient nature of multicellular interactions and vascular permeability, the kinetics of these dynamic events cannot be discerned. By labeling cells and vasculature with injectable dyes or fluorescent proteins, high-resolution time-lapse intravital microscopy has allowed the direct, real-time visualization of transient events in the tumor microenvironment. Here we describe a method for using multiphoton microscopy to perform extended intravital imaging in live mice to directly visualize multicellular dynamics in the tumor microenvironment. This method details cellular labeling strategies, the surgical preparation of a mammary skin flap, the administration of injectable dyes or proteins by tail vein catheter and the acquisition of time-lapse images. The time-lapse sequences obtained from this method facilitate the visualization and quantitation of the kinetics of cellular events of motility and vascular permeability in the tumor microenvironment.

This protocol describes the use of multiphoton microscopy to perform extended time-lapse imaging of multicellular interactions in real time, in vivo at single cell resolution.

Tümör mikroçevresinde Gerçek zamanlı Multisellüler Dynamics Genişletilmiş Time-lapse intravital Görüntüleme

In the tumor microenvironment, host stromal cells interact with tumor cells to promote tumor progression, angiogenesis, tumor cell dissemination and ...

An Anesthesia, Surgery, and Harvest Method for the Evaluation of Transpedicular Screws Using an In Vivo Porcine Lumbar Spine Model

Pedicle screw fixation is the gold standard for the treatment of spinal diseases. However, many studies have reported the issue of loosening pedicle screws after spinal surgery, which is a serious concern. To address this problem, diverse types of pedicle screws have been examined to identify those with good fixation strength and osseointegration in spine bone. The porcine spine is a good alternative for the human spine in the evaluation of pedicle screws due to the anatomical size, mechanical characteristics, and cost. Although several studies have reported that pedicle screws are efficient in the porcine model, no study has described detailed protocols for the evaluation of a pedicle screw using the porcine model. Here, we describe a detailed method for evaluating transpedicular screws using an in vivo porcine lumbar spine model. The technical details for anesthesia, spine surgery, and harvest provided here will facilitate with the evaluation of the transpedicular screw fixation model.

An Anesthesia, Surgery, and Harvest Method for the Evaluation of Transpedicular Screws Using an In Vivo Porcine Lumbar Spine Model

Here, we introduce a method to evaluate transpedicular screws by using an in vivo porcine lumbar spine model.

Transpediküler Vidaların Değerlendirilmesinde Anestezi, Cerrahi ve Hasat Yöntemi<emIn vivo</em&gt; Domuz Kemik Omurgası Modeli

Pedicle screw fixation is the gold standard for the treatment of spinal diseases. However, many studies have reported the issue of loosening pedicle ...

Second Harmonic Generation Signals in Rabbit Sclera As a Tool for Evaluation of Therapeutic Tissue Cross-linking (TXL) for Myopia

Methods to strengthen tissue by introducing chemical bonds (non-enzymatic cross-linking) into structural proteins (fibrillar collagens) for therapy include photochemical cross-linking and tissue cross-linking (TXL) methods. Such methods for inducing mechanical tissue property changes are being employed to the cornea in corneal thinning (mechanically weakened) disorders such as keratoconus as well as the sclera in progressive myopia, where thinning and weakening of the posterior sclera occurs and likely contributes to axial elongation. The primary target proteins for such tissue strengthening are fibrillar collagens which constitute the great majority of dry weight proteins in the cornea and sclera. Fortuitously, fibrillar collagens are the main source of second harmonic generation signals in the tissue extracellular space. Therefore, modifications of the collagen proteins, such as those induced through cross-linking therapies, could potentially be detected and quantitated through the use of second harmonic generation microscopy (SHGM). Monitoring SHGM signals through the use of a laser scanning microscopy system coupled with an infrared excitation light source is an exciting modern imaging method that is enjoying widespread usage in the biomedical sciences. Thus, the present study was undertaken in order to evaluate the use of SHGM microscopy as a means to measure induced cross-linking effects in ex vivo rabbit sclera, following an injection of a chemical cross-linking agent into the sub-Tenon&#39;s space (sT), an injection approach that is standard practice for causing ocular anesthesia during ophthalmologic clinical procedures. The chemical cross-linking agent, sodium hydroxymethylglycinate (SMG), is from a class of cosmetic preservatives known as formaldehyde releasing agents (FARs). Scleral changes following reaction with SMG resulted in increases in SHG signals and correlated with shifts in thermal denaturation temperature, a standard method for evaluating induced tissue cross-linking effects.

Second Harmonic Generation Signals in Rabbit Sclera As a Tool for Evaluation of Therapeutic Tissue Cross-linking TXL for Myopia

This protocol describes techniques for evaluating chemical cross-linking of the rabbit sclera using&#160;second harmonic generation imaging and differential scanning calorimetry.

Tavşan sklera bir araç olarak ikinci harmonik üretimi sinyalleri tedavi doku (TXL) için miyopi Cross-linking değerlendirilmesi için

Methods to strengthen tissue by introducing chemical bonds (non-enzymatic cross-linking) into structural proteins (fibrillar collagens) for therapy ...

Subclavian Vein Puncture As an Alternative Method of Blood Sample Collection in Rats

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful compared to other more aggressive methods such as retro-orbital plexus sample collection. However, this blood collection method is sometimes limited by an unsatisfactory success rate. Here, we introduce a method for blood collection through the subclavian vein puncture. The subclavian vein is located just under the clavicle and this vein is large enough to fulfill the volume requirements of blood collection. Our results show that this method is safe and applicable for blood collection sampling with the required blood volume. Blood collection through the subclavian vein puncture could serve as an alternative blood collection method in case of failed tail vein blood sampling in rats.

Here, we present a protocol to collect blood samples from the rat subclavian vein.

Subklaviyan ven ponksiyon kan örnek fareleri koleksiyonunda alternatif bir yöntem olarak

Blood collection with enough blood volume is essential in animal experiments. Blood collection from the tail vein of rats is popular and less stressful ...

In vitro Time-lapse Live-Cell Imaging to Explore Cell Migration toward the Organ of Corti

To study the effects of mesenchymal stem cells (MSCs) on cell regeneration and treatment, this method tracks MSC migration and morphological changes after co-culture with cochlear epithelium. The organ of Corti was immobilized on a plastic coverslip by pressing a portion of the Reissner's membrane generated during the dissection. MSCs confined by a glass cylinder migrated toward cochlear epithelium when the cylinder was removed. Their predominant localization was observed in the modiolus of the organ of Corti, aligned in a direction similarly to that of the nerve fibers. However, some MSCs were localized in the limbus area and showed a horizontally elongated shape. In addition, migration into the hair cell area was increased, and the morphology of the MSCs changed to various forms after kanamycin treatment. In conclusion, the results of this study indicate that the coculture of MSCs with cochlear epithelium will be useful for the development of therapeutics via cell transplantation and for studies of cell regeneration that can examine various conditions and factors.

In this study, we present a real-time imaging method using confocal microscopy to observe cells moving toward damaged tissue by ex vivo incubation with the cochlear epithelium containing the organ of Corti.

Corti Organına Doğru Hücre Göçünü Keşfetmek için Tüp Bebek Zaman Atlamalı Canlı Hücre Görüntüleme

To study the effects of mesenchymal stem cells (MSCs) on cell regeneration and treatment, this method tracks MSC migration and morphological changes after ...

Guided Endodontics: Three-Dimensional Planning and Template-Aided Preparation of Endodontic Access Cavities

Pulp canal obliterations (PCO) are often a consequence of dental trauma, such as luxation injuries. Even though dentin apposition is a sign of vital pulp, pulpitis or apical periodontitis may develop in the long term. Root canal treatment of teeth with severe PCO and pulpal or periapical pathosis is challenging for general practitioners and even for well-equipped endodontic specialists. To ensure detection of the calcified root canal and avoid excessive loss of tooth structure or root perforation, static navigation using templates ("Guided Endodontics") was introduced a few years ago. The general workflow includes three-dimensional imaging using cone-beam computed tomography (CBCT), a digital surface scan, and superimposition of both in a planning software. This is followed by virtual planning of the access cavity and the design of a template that will guide the drill to the desired target point. To do this, a true-to-scale virtual image of the drill must be placed in a way that the tip of the drill reaches the orifice of the calcified root canal. Once the template has been fabricated using computer-aided design and computer-aided manufacturing (CAD/CAM) or a 3D printer, guided preparation of the access cavity can be performed clinically. For research purposes, a postoperative CBCT image can be used to quantify the accuracy of the access cavity performed. This work aims to present the technique of static guided endodontics from imaging to clinical implementation.

Guided endodontics describes a template-aided approach for access cavity preparation. The procedure requires cone-beam computed tomography and a surface scan to produce a template. An incorporated sleeve guides the drill to the target point. This allows the preparation of minimally invasive endodontic access cavities in calcified teeth.

Rehberli Endodonti: Üç Boyutlu Planlama ve Endodontik Erişim Boşluklarının Şablon Destekli Hazırlanması

Pulp canal obliterations (PCO) are often a consequence of dental trauma, such as luxation injuries. Even though dentin apposition is a sign of vital pulp, ...