Bu araştırma INSERM, Aix-Marseille Üniversitesi ve CL Forestier ile elde edilen HFSPO bir Kariyer Geliştirme Ödülü tarafından desteklenmiştir.

Etik bildirimi: Tüm hayvan çalışmaları Aix-Marseille Université, Fransa Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından kabul edildi kurallar ve protokoller doğrultusunda yapıldı. 8 dişi C57BL / 6 fareler - eski 10 hafta ticari tarihli kararnamede N ° 8 87-848, 19 Ekim 1987, Paris kurallarına göre elde edilmiş ve ele alınmıştır. L. kullanan tüm deneyler donovani LD1S parazitler Fransız ve Avrupa Birliği mevzuatı gelen biyogüvenlik düzenlemelerine uygun olarak yapılmıştır. L. ile 1. Fare Enfeksiyon donovani promastigot Parazitler <ol><li> L., in vitro kültür bakım ortamı hazırlayın donovani promastigot parazitler, LD1S (MHOM / SD / 62 / 1S-CL2D). <ol><li> M199 ortamı kullanın. (30 dakika boyunca 56 ° C&#39;de ısı ile inaktive edilmiş),% 10 fetal dana serumu ile M199 ortamı Ek, 25 mM HEPES pH 6.9, 12 mM NaHCO 3, 1 mM gluhistamin RPMI 16040 vitamin karışımı, 10 mM folik asit, 100 mM adenozin, 7.6 mM hemin, 50 U / ml penisilin ve 50 mg / ml streptomisin. </li></ol></li><li> Kültür 25 cm 2 havalandırılmış kap içinde 26 ° C de tam bir M199 medyumu 10 ml parazitleri LD1S. </li><li> Ardışık diferansiyel santrifüj adımları kullanarak, metacyclic formlarda zenginleştirilmiş promastigot parazitlerin nüfusu hazırlamak. <ol><li> Bir orta-log faz parazit kültürü hasat. Bir hemocytomer güvenin. Tam M199 medyumu 10 ml 5 x 10 5 parazit / ml yeniden süspanse edin. Onlar (yaklaşık 5-6 gün) geç sabit faz ulaşana kadar anaerobik koşullarda parazit kültürü büyütün. </li><li> Olmayan metacyclic parazitleri topak süpernatantı kurtarmak ve 10 dakika boyunca 26 ° C &#39;de 2500 xg&#39;de tekrar dönmeye 26 ° C&#39;de 10 dakika boyunca 1200 x g&#39;de LD1S kültürü dönerler. Not: Bu son derece pelet metacyclic promastigot parazitleri zenginleştirilmiştir. </li><li> 1 pelet yeniden süspansePBS 00 ul. V ve hemasitometre kullanarak parazitleri saymak:% 25 glutaraldehit ile 1/100 v sabitleme için küçük bir kısım çıkarın. </li></ol></li><li> PBS içinde 1 x 10 7/100 ul zenginleştirilmiş-metacyclic parazit nüfusu sulandırmak. Anestezi altında farenin kuyruk venine parazit süspansiyonu enjekte bir 30 G iğne ile bir 1 ml şırınga ile (aşağı bakınız). Kontrol hayvanları için, kuyruk venine 100 ul PBS enjekte edilir. </li></ol> 2. Cerrahi İşlemleri <ol><li> 30 dakika boyunca% 70 etanol ile biyosidal dezenfektan sprey ile çalışma alanı ve tüm cerrahi aletler dezenfekte edin. </li><li> 125 mg / kg ketamin ve 12.5 mg / PBS içinde seyreltilmiş ksilazin kg ihtiva eden hayvanın ağırlığına göre, bir anestetik çözelti hazırlayın. </li><li> Fareyi tartılır ve intraperitoneal 30 G iğne ile 1 ml şırınga kullanarak anestezik uygun dozu enjekte. </li><li> Sıcak fare tutun ve fare tamamen anesthe olup olmadığını kontrolDevam etmeden önce ayak pedi kısma tized. Fare her 60 dk içinde anestezik solüsyonun yarım doz yeniden enjekte edilir. </li><li> Farenin karın Tıraş ve Vetedine ile temizleyin. Karnın sol tarafında göğüs kafesinin altında deri ve kas içinde küçük bir kesi yapmak. </li><li> Sadece açılan alanının altındaki karın nemli gazlı bez parçası koyun. Karaciğer Açığa ve gazlı bez üzerine yerleştirin. Karaciğer yukarıda nemli gazlı bez başka bir parça yatıyordu. </li><li> Yeri 24 x 60 mm 2-150 mikron kalınlığında lamel, siyanoakrilat-bağlı bir mikroskop altında görünüm için karaciğer, metal bir çerçeveye. </li><li> Islak bir gazlı bez ile fare gözleri koruyun. </li><li> Görüntüleme seansından sonra, servikal dislokasyon anestezi hayvan euthanize. </li></ol> Karaciğer Mimarlık 3. intravital Mikroskopi Görüntüleme <ol><li> At ile donatılmış bir ters konfokal mikroskop intravital mikroskopi deneyler yürütmekhermostatic odasını, bir apochromatic 63X petrol gliserol daldırma hedefi (NA 1.4), Argon (488 nm) ve HeNe (543 nm, 633 nm) lazerler ve mavi diyot (405 nm) kontrol edilir. </li><li> Objektif karaciğer yüzü aşağı kaplayan lamel ile mikroskop sahnede fare yerleştirin. 29 ° C odasının sıcaklığı ayarlayın. Sinüzoidler görselleştirilmesi için izin vermek için karaciğer otofloresans kullanarak odağı ayarlayın. </li><li> Damar görselleştirmek için, her bir fare için 100 ul PBS içinde seyreltilmiş 500 ug BSA-Alexa 647 içeren bir çözelti hazırlamak. Bir 30 G iğne ile bir 1 ml şırınga ile anestezi uygulanmış fare kuyruk venine intravenöz, bu çözelti enjekte edilir. </li><li> Karaciğer hücre çekirdekleri görselleştirmek için, PBS içinde Hoechst 33342 içeren bir çözelti hazırlayın. Intraperitonal, bir 30 G iğne ile bir 1 ml şırınga ile bir fare 8 mg / kg, bu çözelti enjekte edilir. </li><li> Görüntünün hepatik 400 Hz normal sıralı mod, 63X daldırma objektif ve tarayıcıyı kullanınHücre çekirdekleri ve karaciğer damarsal. Hoechst uyarım için 405 nm mavi diyot ve BSA-Alexa 647 uyarma için 633 nm lazer açın. Argon 488 nm lazer açın ve karaciğer otofloresans görselleştirmek için büyük bir kazanım bandı tanımlar. </li></ol> Kan Akışı Hız Ölçüm Karaciğer 4. intravital Mikroskopi Görüntüleme <ol><li> Mikroskobu (LAS-AF görüntüleyici Sürüm 3.1.0 build 8587) LAS yazılımını açın. Mikroskop yazılımını açarken rezonans tarayıcı modunu seçin. </li><li> Donanım ayarlamak için yapılandırma sekmesine tıklayın. Lazer tıklayın ve HeNe 633 lazer seçin. Ayarlarına tıklayın ve 12 bit çözünürlüğü seçin. </li><li> Iktisap menüsüne tıklayın. Işın yolu ayarları penceresinde, objektif 63x seçin ve% 100 633 lazer gücü kurdu. Sinyal kazancı ve PM1-3 açılan menüden Alexa-633 seçerek parametrelerini ayarlamak kapalı etkinleştirin. </li><li> Acquire sekmesinde, &#39;XYT&#39; edinilmesini seçinmodu. 1024 x 1,024 Set biçim genişliği. 8.000 Hz hızını seçin. 3 Havadar birimlerinin iğne deliği seçin. İki yönlü modunu seçmeyin 3. yakınlaştırma faktörünü seçin. </li></ol> RBC Hızının 5. Kantitatif Analiz XYT Görüntüleri Kullanma (Yöntem 1) <ol><li> Canlı modu kan akışını görselleştirmek için &#39;Canlı&#39; simgesini tıklayın. Ilgi alanını seçin ve analiz için özel bir kan damarı seçin. USB kontrol panelindeki &#39;X&#39;, &#39;Y&#39; ve tarama alan rotasyon koordinatlarını ayarlayarak yatay konuma ilgi gemi ayarlayın. </li><li> Ilgi damar ayarlandıktan sonra &#39;Live&#39; modunu durdurun. Seçeneğini, pencere, çizgi ortalama = 1, çerçeve ortalama = 1 ayarını edinim modunda 1024 x 256 formatında set genişliğini değiştirme görüntüler elde etmek için &#39;start&#39; üzerinde 150 tıklayınız &quot;yığınlarının&quot;. </li><li> Kullanarak RBC hızının kantitatif analiz için &quot;XYT&quot; görüntüleri ImageJ yazılımı açın. &#39;Dosya&#39; SeçImageJ sekmesini, ardından faiz dosyayı seçin &quot;Aç&quot; düğmesini tıklatın. </li><li> ImageJ &quot;eklentisi&quot; menüsüne gidin, LOCI ve Bio-biçimleri seçeneklerini ithal belirleyin. Bu pencerede, &#39;hyperstack&#39; gibi parametreleri görüntüleme yığını seçin. &quot;Xyzct&quot;: yığın sırası seçeneğinde, seçeneği seçin. Not: Bu satın almalar, tüm serisi ile bir pencere açar. </li><li> ImageJ menüsünde &#39;Eklentiler&#39; tıklayın ve MTrackJ seçeneği seçin. Küçük pencerede &#39;eklenti&#39; ikonuna tıklayın ve izlemek için RBC tıklayın. Her aşağıdaki çerçeve içinde aynı RBC tıklayın ve hızını ölçmek için &#39;tedbir&#39; simgesine tıklayın. Not: .exl formatında kaydedilebilir oluşturulan dosyayı. </li><li> Kap başına beş eritrositlerde az izlemek ve aynı büyüklükte üç ayrı kapların en az analiz eder. </li></ol> Xt Hattı Görüntüleri Kullanma RBC Hızının 6. Kantitatif Analiz (Yöntem 2) <ol><li> Kan f görselleştirmek için &#39;Canlı&#39; tıklayınCanlı modda düşük. Analizi için, belirli bir kan damarı seçin. Yatay konuma ilgi gemi ayarlayın. Ilgi damar ayarlandıktan sonra &#39;Live&#39; modunu durdurun. </li><li> &#39;Xt&#39; tarama modunu seçin ve satır tarama boyunca seçilen teknenin merkez lümeni ayarlayın. Set biçimi genişliği 1024 x 512, hız = 8,000Hz, satır ortalama = 32, &#39;başlangıç&#39; ve xt hattı görüntü elde zamanı = 512 Click. </li><li> .lif Dosyasını açarak ve ilgi xt hattı görüntüsünü açarak RBC hızının kantitatif analiz için çizgiler oluşturun. LAS-AF yazılımında, &quot;deneyleri&quot; seçeneğini .lif açın ve görüntü seçin. Not: otomatik kymograph açılacaktır. </li><li> Bu kymograph üzerine (X ekseninde elde edilen d) belirli bir mesafe seyahat (koyu yansımasını gösteren) bir parçacık çizgi için gerekli (t, Y ekseninde elde edilir) zamanı ölçün. Aracı &quot;çizgi çizmek&quot; ve çizgi yatay bir çizgi çizin seçin. Uzaklığı Notum ve görüntünün altındaki sonucu sekmesinde oluşturulan saniye zaman. </li><li> Kymograph elde edilen değerleri kullanarak V = mesafe / zaman olarak hız hesaplayın. </li><li> Xt görüntü başına beş parçacık çizgiler bir minimum ve aynı büyüklükte üç ayrı kapların en az ölçmek. </li></ol>

<ol>
	<li>Vollmar, B., Menger, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+hepatic+microcirculation:+mechanistic+contributions+and+therapeutic+targets+in+liver+injury+and+repair.">The hepatic microcirculation: mechanistic contributions and therapeutic targets in liver injury and repair.</a> Physiol. Rev. 89, 1269-1339 (2009).</li><li>Srinivasan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Absolute+blood+flow+measured+by+optical+methods.">Absolute blood flow measured by optical methods.</a> SPIE Newsroom. , (2011).</li><li>Seifalian, A. M., Stansby, G. P., Hobbs, K. E., Hawkes, D. J., Colchester, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measurement+of+liver+blood+flow:+a+review.">Measurement of liver blood flow: a review.</a> HPB. Surg. 4, 171-186 (1991).</li><li>Engwerda, C. R., Ato, M., Kaye, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophages,+pathology+and+parasite+persistence+in+experimental+visceral+leishmaniasis.">Macrophages, pathology and parasite persistence in experimental visceral leishmaniasis.</a> Trends Parasitol. 20, 524-530 (2004).</li><li>Beattie, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+imaging+of+experimental+Leishmania+donovani-induced+hepatic+granulomas+detects+Kupffer+cell-restricted+antigen+presentation+to+antigen-specific+CD8+T+cells.">Dynamic imaging of experimental Leishmania donovani-induced hepatic granulomas detects Kupffer cell-restricted antigen presentation to antigen-specific CD8 T cells.</a> PLoS Pathog. 6, e1000805 (2010).</li><li>Lee, W. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+intravascular+immune+response+to+Borrelia+burgdorferi+involves+Kupffer+cells+and+iNKT+cells.">An intravascular immune response to Borrelia burgdorferi involves Kupffer cells and iNKT cells.</a> Nat. Immunol. 11, 295-302 (2010).</li><li>Geissmann, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravascular+immune+surveillance+by+CXCR6++NKT+cells+patrolling+liver+sinusoids.">Intravascular immune surveillance by CXCR6+ NKT cells patrolling liver sinusoids.</a> PLoS Biol. 3, e113 (2005).</li><li>Marques, P. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+liver+biology+in+vivo+using+conventional+confocal+microscopy.">Imaging liver biology in vivo using conventional confocal microscopy.</a> Nat. protocols. 10, 258-268 (2015).</li><li>Thiberge, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+imaging+of+malaria+parasites+in+the+murine+liver.">In vivo imaging of malaria parasites in the murine liver.</a> Nat. protocols. 2, 1811-1818 (2007).</li><li>Vacchina, P., Morales, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+screening+test+using+Leishmania+promastigotes+stably+expressing+mCherry+protein.">In vitro screening test using Leishmania promastigotes stably expressing mCherry protein.</a> Antimicrob. Agents Chemother. 58, 1825-1828 (2014).</li><li>Ferrer, M., Martin-Jaular, L., Calvo, M., del Portillo, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intravital+microscopy+of+the+spleen:+quantitative+analysis+of+parasite+mobility+and+blood.">Intravital microscopy of the spleen: quantitative analysis of parasite mobility and blood.</a> J. Vis. Exp. , (2012).</li><li>Kamoun, W. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Simultaneous+measurement+of+RBC+velocity,+flux,+hematocrit+and+shear+rate+in+vascular+networks.">Simultaneous measurement of RBC velocity, flux, hematocrit and shear rate in vascular networks.</a> Nat. Methods. 7, 655-660 (2010).</li><li>MacPhee, P. J., Schmidt, E. E., Groom, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intermittence+of+blood+flow+in+liver+sinusoids,+studied+by+high-resolution+in+vivo+microscopy.">Intermittence of blood flow in liver sinusoids, studied by high-resolution in vivo microscopy.</a> Am. J. Phys. 269, G692-G698 (1995).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Fare karaciğer intravital mikroskopi son gelişme in vivo ve gerçek zamanlı 5,9,10 enfeksiyona fizyolojik yanıtın araştırılması için yeni olanaklar açar. Organ kan akışı, genellikle pek çok hastalıkta değiştirilmiş bir kritik fizyolojik bir parametredir. Ancak, fizyolojik ve enfeksiyon koşullar altında karaciğer hemodinamiklerin durumu kötü keşfedilmeyi alan kalır. Bu çalışmada, daha önce dalak ve tümör damar sisteminin çalışması için adapte edilmiştir IVM-bazlı...

Organ spesifik hemodinamik herhangi bir memeli organı önemli fizyolojik özellikleri vardır. Kan akımı anormallikler inflamasyon sonucu ve organ disfonksiyonu 1 bir işareti olabilir. Böylece, kan akışı organizasyonu, yapısı ve fonksiyonları fizyolojik ve patolojik koşullar altında analiz gibi kritik parametreleri görünür. genel olarak, belirli bir organa kan akışını analiz etmek için kullanılmıştır teknikleri tekniğin kendi çözünürlük sınırını da dahil olmak üzere çeşitli sınırlamalara içeren (örneğin, kan akışının Doppler görüntüleme), her kan sadece (hacim mutlak kan akışının ölçülmesi için kapasite bir organ) (örn optik koherens tomografi) ve kan damarlarının 2,3 geniş ve heterojen nüfus hız ortalama değişikliklerin ölçümü hizmet birimi. karaciğerin dolaşım sistemi kendi büyüklüğü, yapısı ve işlevi heterojen farklı damar alt tiplerini bağlar. IçindeBu çalışmada, intravital mikroskobu (IVM) görüntüleme teknolojisi, yüksek çözünürlükte, gerçek zamanlı, in vivo karaciğer hemodinamiği değerlendirmek için uygulanır ve paralel olarak karaciğer organı oluşturan bireysel kan damarlarının özelliklerini ortaya çıkarmak için. Bu güçlü optik görüntüleme tekniğinin son gelişmeler araştırmacı, yüksek uzaysal ve zamansal çözünürlükte yaşayan hayvanlar dinamik veri toplamak için izin verir. Doğrudan görselleştirme ve in vivo spesifik ve hızlı biyolojik süreçlerin gerçek zamanlı izleme izin vererek, IVM görüntü bireysel kan damarlarının araştırmacıya eşsiz bir fırsat sunuyor ve ölçmek ve özellikle seçilmiş olan tek kırmızı kan hücrelerinin hızını (RBC) ölçmek hepatik damar. Bu çalışmada, karaciğer hemodinami hepatotropik Leishmania parazitinin fare enfeksiyon etkisini araştırmak için fare karaciğerinde IVM tekniği hayata geçirdik. L. donovaniviseral leishmaniasis akut-on-kronik inflamatuar tepkileri ile karakterize bir hastalıktır ve dalak ve karaciğer dahil olmak üzere, birden fazla organ, içinde mevcut olan bir patolojiden sorumlu maddedir. Visseral leishmaniasis deneysel fare modelinde, karaciğer enfeksiyonu kendiliğinden çözülmesi dalak enfeksiyonu 4 ilerici ise olduğunu. Hala tam olarak anlaşılamamıştır bireysel organlara göre Leishmania enfeksiyonunun Bu sonuçlar. Patolojik koşullar altında karaciğer ve dalak hemodinaminin incelenmesi konak-parazit etkileşimleri ve hastalık patogenezi üzerine yeni bir ışık tutacaktır. Bizim deneysel model sistemi maruz bırakılması ve hepatik intravasculature etiketlenmesi için belirli bir floresan boyalar damardan enjekte edildi, bir anestezi uygulanmış fare karaciğer görüntüleme dayanır. Karaciğer içi hayati mikroskopi için olumlu bir organdır. Küçük bir incisio yapıldıktan sonran karın bölgesinde, karaciğer hafifçe dışa ve daha sonra kalp atışı ve solunum nedeniyle herhangi bir hareket eserler azaltılması amacı ile bir lamel, ıslak gazlı bez yerleştirilir. Karaciğer sonra bir mikroskop lenslerin görüş içine yerleştirilmiştir. IVM çalışmaları için, iki foton mikroskopi kullanılmasını gerektirir, dalak ve lenf düğümü ile karşılaştırıldığında, karaciğer avantajı maksimum nüfuz etme derinliği, bilinen bir konfokal mikroskop kullanımı için izin veren homojen bir 3D mimarisi / anatomi yatmaktadır Yaklaşık 50 mikron, intravital mikroskopi görüntüleme 5-8 için. Bu çalışma, bireysel kan damarlarında RBC hız ve kan akış hızının kantitatif ölçümü için iki bağımsız görüntüleme yöntemleri açıklanır. İlk yöntemde, karaciğer kan akımı zaman içinde xy iki boyutlu bir modu kullanılarak elde edilir. Elde edilen veriler XYT! Tek takibi sağlayan ücretsiz ImageJ yazılımı MtrackJ eklentisi kullanılarak analiz edilirzamanla ual RBCs. İkinci yöntemde ise, tek bir kan damarı seçilir ve karşılık gelen kan akımı konfokal lazer tarama mikroskobu çizgi taraması, hızlı edinim durumuna kullanılarak analiz edilir. ilgi kabı bir eksen hattı boyunca orta ekseni boyunca yüksek frekansta taranır. Kan akış hızı daha sonra, etiketlenmemiş koyu eritrositler ve floresan etiketli plazma arasındaki aksine farka dayanarak ölçülür. çizgi tarama boyunca alınan eritrositler ve plazmanın floresan yoğunlukları çizgiler elde edilmesi için, zamana karşı çizilen, açıları bağımsız bir RBC hızları ile orantılıdır. Bu makalenin amacı karaciğer bireysel kan damarları içinde görüntüleme için basit ve tekrarlanabilir bir yöntem ve ölçüm kan akış hızı sağlamak ve fare cerrahisi, IVM ve hızının kantitatif analizleri başarılı bir performans için temel araçları kullanılabilir hale getirmektir Bireysel RBCs. TOnun yaklaşımı araştırmacılar patolojik koşullarda kan hızı yeni bakış açıları kazanmak için izin verir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Hoechst 33342</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>B2261</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BSA-Alexa 647</td>
			<td>lifetechnologies</td>
			<td>A34785</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dextran-FITC 500 mol wt</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>46947</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td>PanPharma</td>
			<td>20434</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Bayer</td>
			<td>KP07KEU</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vetedine</td>
			<td>Pharma Animal</td>
			<td>6869029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cyanoacrylate liquid</td>
			<td>Cyanolit</td>
			<td>5833300005</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslip frame: Membrane slide for microdissection part N&#176;: 5013</td>
			<td>Molecular machines</td>
			<td>50103</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslip DiaPath 24x60 ep: 1.6 mm</td>
			<td>DiaPath</td>
			<td>61061</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal laser scanning microscope</td>
			<td>Leica&#160;</td>
			<td>TCS-SP5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LAS-AF viewer&#160;</td>
			<td>Leica software</td>
			<td>Version 3.1.0 buid 8587</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

intravital microscopy imaging of the liver following leishmania infection: an assessment of hepatic hemodynamics

Intravital mikroskopi (IVM) gerçek zamanlı ve canlı hayvan, çeşitli biyolojik olayların görselleştirme, izleme ve miktarının mümkün kıldı güçlü optik görüntüleme tekniğidir. Bu teknoloji çok fizyolojik süreçler ve belirli organlarda patojen-aracılı olayların anlayışımızı ilerlemiştir. Bu çalışmada, IVM fare karaciğer uygulanır ve protokoller tasarlanmış görüntü, in vivo olarak karaciğer dolaşım sistemi ve tek tek hepatik damarlarda kırmızı kan hücresi (RBC) hızını ölçmek. Hepatik organı karakterize Farklı damar alt tiplerini görselleştirmek ve kan akış hızının ölçümlerini gerçekleştirmek için, C57BL / 6 fareleri, damar, karaciğer ile ilişkili damar etiket bir floresan plazma reaktifi ile enjekte edilir. IVM ilgi belirli bir kap içinde vivo, gerçek zamanlı, RBC hızının ölçümünde sağlar. Bu metodoloji kurulması mümkün hale getirecekfizyolojik ve patolojik koşullar altında karaciğer hemodinamik araştırmak. Sonuçta, bu görüntüleme bazlı metodoloji L. etkisini incelemek için önemli olacaktır Karaciğer hemodinami üzerine donovani enfeksiyonu. Bu yöntem, diğer enfeksiyöz modelleri ve fare organ uygulanabilir ve daha fazla kan akışı üzerindeki etkisinin nicelenmesiyle enflamasyon ile ilgili bir ilacın etkisinin test klinik öncesi da kapsayacak şekilde genişletilebilir.

Karaciğerde sinüzoidler özgü mimari organizasyon görüntülendi bu organın (Şekil 1, panel B ve C, yeşil), hepatosit çekirdeğinin etiketleme için Hoechst intraperitoneal enjeksiyonu ve autofluorescent özelliğine dayalı olabilir (Şekil 1B, mavi) ve hepatik kan dolaşımı sistemi (Şekil 1C, kırmızı) boyama için floresan BSA intravenöz enjeksiyonu. çapı 40-700 mikron 2 (D), 300 um 2 üzerinde 2 um ve büyük damarlar...

Watch this Scientific Journal Video about Intravital Microscopy Imaging of the Liver following Leishmania Infection: An Assessment of Hepatic Hemodynamics at JoVE.com

Intravital Microscopy Imaging of the Liver following Leishmania Infection: An Assessment of Hepatic Hemodynamics

This article reports on a detailed method for the dynamic measurement and quantification of blood flow velocity within individual blood vessels of the mouse liver vasculature using intravital microscopy imaging in combination with a specific methodology for image acquisition and analysis.

Aşağıdaki Karaciğer intravital Mikroskopi Görüntüleme<em&gt; Leishmania</em&gt; Enfeksiyon: Karaciğer Hemodinami Üzerine Bir Değerlendirme

Intravital microscopy (IVM) is a powerful optical imaging technique that has made possible the visualization, monitoring and quantification of various ...

intravital-microscopy-imaging-liver-following-leishmania-infection-an

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Intravital Microscopy Imaging of the Liver following Leishmania Infection: An Assessment of Hepatic Hemodynamics

11.4K Görüntüleme.  University of Aix-Marseille. This article reports on a detailed method for the dynamic measurement and quantification of blood flow velocity within individual blood vessels of the mouse liver vasculature using intravital microscopy imaging in combination with a specific methodology for image acquisition and analysis.

Video: Intravital Microscopy Imaging of the Liver following Leishmania Infection: An Assessment of Hepatic Hemodynamics

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

Distinct species of Leishmania, a protozoan parasite of the family Trypanosomatidae, typically cause different human disease manifestations. The most common forms of disease are visceral leishmaniasis (VL) and cutaneous leishmaniasis (CL). Mouse models of leishmaniasis are widely used, but quantification of parasite burdens during murine disease requires mice to be euthanized at various times after infection. Parasite loads are then measured either by microscopy, limiting dilution assay, or qPCR amplification of parasite DNA. The in vivo imaging system (IVIS) has an integrated software package that allows the detection of a bioluminescent signal associated with cells in living organisms. Both to minimize animal usage and to follow infection longitudinally in individuals, in vivo models for imaging Leishmania spp. causing VL or CL were established. Parasites were engineered to express luciferase, and these were introduced into mice either intradermally or intravenously. Quantitative measurements of the luciferase driving bioluminescence of the transgenic Leishmania parasites within the mouse were made using IVIS. Individual mice can be imaged multiple times during longitudinal studies, allowing us to assess the inter-animal variation in the initial experimental parasite inocula, and to assess the multiplication of parasites in mouse tissues. Parasites are detected with high sensitivity in cutaneous locations. Although it is very likely that the signal (photons/second/parasite) is lower in deeper visceral organs than the skin, but quantitative comparisons of signals in superficial versus deep sites have not been done. It is possible that parasite numbers between body sites cannot be directly compared, although parasite loads in the same tissues can be compared between mice. Examples of one visceralizing species (L. infantum chagasi) and one species causing cutaneous leishmaniasis (L. mexicana) are shown. The IVIS procedure can be used for monitoring and analyzing small animal models of a wide variety of Leishmania species causing the different forms of human leishmaniasis.

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

An in vivo imaging system is used to generate quantitative measurements of murine infection with the Trypanosomatid protozoan Leishmania. This is a non-invasive and non-lethal method for detecting parasites expressing luciferase within many tissues throughout the course of chronic Leishmania spp. infection.

Canlı bir Host Transgenik Leishmania Parazitlerinin in vivo Imaging

Distinct species of Leishmania, a protozoan parasite of the family Trypanosomatidae, typically cause different human disease manifestations. The most ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Intravital Microscopy of the Inguinal Lymph Node

Lymph nodes (LN's), located throughout the body, are an integral component of the immune system. They serve as a site for induction of adaptive immune response and therefore, the development of effector cells. As such, LNs are key to fighting invading pathogens and maintaining health. The choice of LN to study is dictated by accessibility and the desired model; the inguinal lymph node is well situated and easily supports studies of biologically relevant models of skin and genital mucosal infection.
The inguinal LN, like all LNs, has an extensive microvascular network supplying it with blood. In general, this microvascular network includes the main feed arteriole of the LN that subsequently branches and feeds high endothelial venules (HEVs). HEVs are specialized for facilitating the trafficking of immune cells into the LN during both homeostasis and infection. How HEVs regulate trafficking into the LN under both of these circumstances is an area of intense exploration. The LN feed arteriole, has direct upstream influence on the HEVs and is the main supply of nutrients and cell rich blood into the LN. Furthermore, changes in the feed arteriole are implicated in facilitating induction of adaptive immune response. The LN microvasculature has obvious importance in maintaining an optimal blood supply to the LN and regulating immune cell influx into the LN, which are crucial elements in proper LN function and subsequently immune response. 
The ability to study the LN microvasculature in vivo is key to elucidating how the immune system and the microvasculature interact and influence one another within the LN. Here, we present a method for in vivo imaging of the inguinal lymph node. We focus on imaging of the microvasculature of the LN, paying particular attention to methods that ensure the study of healthy vessels, the ability to maintain imaging of viable vessels over a number of hours, and quantification of vessel magnitude. Methods for perfusion of the microvasculature with vasoactive drugs as well as the potential to trace and quantify cellular traffic are also presented. 
Intravital microscopy of the inguinal LN allows direct evaluation of microvascular functionality and real-time interface of the direct interface between immune cells, the LN, and the microcirculation. This technique potential to be combined with many immunological techniques and fluorescent cell labelling as well as manipulated to study vasculature of other LNs.

A technique for performing intravital microscopy of the inguinal lymph node (LN) is outlined. Such technique allows for real-time, in vivo study of the lymph node microvasculature and structure both during homeostasis and infection. This technique can be adapted to cell trafficking studies and to other lymph node sites.

Kasık lenf düğüm intravital Mikroskopi

Lymph nodes (LN's), located throughout the body, are an integral component of the immune system. They serve as a site for induction of adaptive immune ...

Intravital Imaging of the Mouse Thymus using 2-Photon Microscopy

Two-photon Microscopy (TPM) provides image acquisition in deep areas inside tissues and organs. In combination with the development of new stereotactic tools and surgical procedures, TPM becomes a powerful technique to identify "niches" inside organs and to document cellular "behaviors" in live animals. While intravital imaging provides information that best resembles the real cellular behavior inside the organ, it is both more laborious and technically demanding in terms of required equipment/procedures than alternative ex vivo imaging acquisition. Thus, we describe a surgical procedure and novel "stereotactic" organ holder that allows us to follow the movements of Foxp3+ cells within the thymus.
Foxp3 is the master regulator for the generation of regulatory T cells (Tregs). Moreover, these cells can be classified according to their origin: ie. thymus-differentiated Tregs are called "naturally-occurring Tregs" (nTregs), as opposed to peripherally-converted Tregs (pTregs). Although significant amount of research has been reported in the literature concerning the phenotype and physiology of these T cells, very little is known about their in vivo interactions with other cells. This deficiency may be due to the absence of techniques that would permit such observations. The protocol described in this paper provides a remedy for this situation.
Our protocol consists of using nude mice that lack an endogenous thymus since they have a punctual mutation in the DNA sequence that compromises the differentiation of some epithelial cells, including thymic epithelial cells. Nude mice were gamma-irradiated and reconstituted with bone marrows (BM) from Foxp3-KIgfp/gfp mice. After BM recovery (6 weeks), each animal received embryonic thymus transplantation inside the kidney capsule. After thymus acceptance (6 weeks), the animals were anesthetized; the kidney containing the transplanted thymus was exposed, fixed in our organ holder, and kept under physiological conditions for in vivo imaging by TPM. We have been using this approach to study the influence of drugs in the generation of regulatory T cells.

We have developed novel laboratory tools and protocols for intravital imaging acquisition of the thymus. Our technique should help in the identification of &#x201C;niches&#x201D; within the thymus where T cell development occurs.

2-Foton Mikroskopi kullanarak Fare Thymus intravital Görüntüleme

Two-photon Microscopy (TPM) provides image acquisition in deep areas inside tissues and organs. In combination with the development of new stereotactic ...

Intravital Microscopy of the Spleen: Quantitative Analysis of Parasite Mobility and Blood Flow

The advent of intravital microscopy in experimental rodent malaria models has allowed major advances to the knowledge of parasite-host interactions 1,2. Thus, in vivo imaging of malaria parasites during pre-erythrocytic stages have revealed the active entrance of parasites into skin lymph nodes 3, the complete development of the parasite in the skin 4, and the formation of a hepatocyte-derived merosome to assure migration and release of merozoites into the blood stream 5. Moreover, the development of individual parasites in erythrocytes has been recently documented using 4D imaging and challenged our current view on protein export in malaria 6. Thus, intravital imaging has radically changed our view on key events in Plasmodium development. Unfortunately, studies of the dynamic passage of malaria parasites through the spleen, a major lymphoid organ exquisitely adapted to clear infected red blood cells are lacking due to technical constraints.
Using the murine model of malaria Plasmodium yoelii in Balb/c mice, we have implemented intravital imaging of the spleen and reported a differential remodeling of it and adherence of parasitized red blood cells (pRBCs) to barrier cells of fibroblastic origin in the red pulp during infection with the non-lethal parasite line P.yoelii 17X as opposed to infections with the P.yoelii 17XL lethal parasite line 7. To reach these conclusions, a specific methodology using ImageJ free software was developed to enable characterization of the fast three-dimensional movement of single-pRBCs. Results obtained with this protocol allow determining velocity, directionality and residence time of parasites in the spleen, all parameters addressing adherence in vivo. In addition, we report the methodology for blood flow quantification using intravital microscopy and the use of different colouring agents to gain insight into the complex microcirculatory structure of the spleen. 
Ethics statement
All the animal studies were performed at the animal facilities of University of Barcelona in accordance with guidelines and protocols approved by the Ethics Committee for Animal Experimentation of the University of Barcelona CEEA-UB (Protocol No DMAH: 5429). Female Balb/c mice of 6-8 weeks of age were obtained from Charles River Laboratories.

We show the method for performing intravital microscopy of the spleen using GFP transgenic malaria parasites and the quantification of parasite mobility and blood flow within this organ.

Dalak intravital Mikroskopi: Parazit Mobilite ve Kan Akımının Kantitatif Analiz

The advent of intravital microscopy in experimental rodent malaria models has allowed major advances to the knowledge of parasite-host interactions 1,2. ...

Intravital Imaging of the Mouse Popliteal Lymph Node

Lymph nodes (LNs) are secondary lymphoid organs, which are strategically located throughout the body to allow for trapping and presentation of foreign antigens from peripheral tissues to prime the adaptive immune response. Juxtaposed between innate and adaptive immune responses, the LN is an ideal site to study immune cell interactions1,2. Lymphocytes (T cells, B cells and NK cells), dendritic cells (DCs), and macrophages comprise the bulk of bone marrow-derived cellular elements of the LN. These cells are strategically positioned in the LN to allow efficient surveillance of self antigens and potential foreign antigens3-5. The process by which lymphocytes successfully encounter cognate antigens is a subject of intense investigation in recent years, and involves an integration of molecular contacts including antigen receptors, adhesion molecules, chemokines, and stromal structures such as the fibro-reticular network2,6-12. 
Prior to the development of high-resolution real-time fluorescent in vivo imaging, investigators relied on static imaging, which only offers answers regarding morphology, position, and architecture. While these questions are fundamental in our understanding of immune cell behavior, the limitations intrinsic with this technique does not permit analysis to decipher lymphocyte trafficking and environmental clues that affect dynamic cell behavior. Recently, the development of intravital two-photon laser scanning microscopy (2P-LSM) has allowed investigators to view the dynamic movements and interactions of individual cells within live LNs in situ12-16. In particular, we and others have applied this technique to image cellular behavior and interactions within the popliteal LN, where its compact, dense nature offers the advantage of multiplex data acquisition over a large tissue area with diverse tissue sub-structures11,17-18. It is important to note that this technique offers added benefits over explanted tissue imaging techniques, which require disruption of blood, lymph flow, and ultimately the cellular dynamics of the system. Additionally, explanted tissues have a very limited window of time in which the tissue remains viable for imaging after explant. With proper hydration and monitoring of the animal's environmental conditions, the imaging time can be significantly extended with this intravital technique. Here, we present a detailed method of preparing mouse popliteal LN for the purpose of performing intravital imaging.

Recent advances in 2-photon microscopy have enabled real-time in situ imaging of live tissues in animal models, thereby enhancing our ability to investigate cellular behavior in both physiologic and pathologic conditions. Here, we outline the preparations required to perform intravital imaging of the mouse popliteal lymph node.

Intravital Görüntüleme Fare Popliteal Lenf Nodu

Lymph nodes (LNs) are secondary lymphoid organs, which are strategically located throughout the body to allow for trapping and presentation of foreign ...

Highly Resolved Intravital Striped-illumination Microscopy of Germinal Centers

Monitoring cellular communication by intravital deep-tissue multi-photon microscopy is the key for understanding the fate of immune cells within thick tissue samples and organs in health and disease. By controlling the scanning pattern in multi-photon microscopy and applying appropriate numerical algorithms, we developed a striped-illumination approach, which enabled us to achieve 3-fold better axial resolution and improved signal-to-noise ratio, i.e. contrast, in more than 100 &#181;m tissue depth within highly scattering tissue of lymphoid organs as compared to standard multi-photon microscopy. The acquisition speed as well as photobleaching and photodamage effects were similar to standard photo-multiplier-based technique, whereas the imaging depth was slightly lower due to the use of field detectors. By using the striped-illumination approach, we are able to observe the dynamics of immune complex deposits on secondary follicular dendritic cells &#8211; on the level of a few protein molecules in germinal centers.

High-resolution intravital imaging with enhanced contrast up to 120 &#181;m depth in lymph nodes of adult mice is achieved by spatially modulating the excitation pattern of a multi-focal two-photon microscope. In 100 &#181;m depth we measured resolutions of 487 nm (lateral) and 551 nm (axial), thus circumventing scattering and diffraction limits.

Germinal Merkezleri derece Çözülmüş Intravital Çizgili-aydınlatma Mikroskopi

Monitoring cellular communication by intravital deep-tissue multi-photon microscopy is the key for understanding the fate of immune cells within thick ...

A Flow Adhesion Assay to Study Leucocyte Recruitment to Human Hepatic Sinusoidal Endothelium Under Conditions of Shear Stress

Leucocyte infiltration into human liver tissue is a common process in all adult inflammatory liver diseases. Chronic infiltration can drive the development of fibrosis and progression to cirrhosis. Understanding the molecular mechanisms that mediate leucocyte recruitment to the liver could identify important therapeutic targets for liver disease. The key interaction during leucocyte recruitment is that of inflammatory cells with endothelium under conditions of shear stress. Recruitment to the liver occurs within the low shear channels of the hepatic sinusoids which are lined by hepatic sinusoidal endothelial cells (HSEC). The conditions within the hepatic sinusoids can be recapitulated by perfusing leucocytes through channels lined by human HSEC monolayers at specific flow rates. In these conditions leucocytes undergo a brief tethering step followed by activation and firm adhesion, followed by a crawling step and subsequent transmigration across the endothelial layer. Using phase contrast microscopy, each step of this &#39;adhesion cascade&#39; can be visualized and recorded followed by offline analysis. Endothelial cells or leucocytes can be pretreated with inhibitors to determine the role of specific molecules during this process.

Leucocyte recruitment to the liver occurs within the specialized channels of the hepatic sinusoids which are lined by unique hepatic sinusoidal endothelial cells. Phase contrast microscopy of leucocyte recruitment across human hepatic sinusoidal endothelium under conditions of physiological shear stress can facilitate the elucidation of the molecular mechanisms which underlie this process.

Kayma Stres İnsan Karaciğer Sinüzoidal Endoteline altında Koşullarına Lökositer İşe Alım Eğitim için Bir Akış Adezyon Deneyi

Leucocyte infiltration into human liver tissue is a common process in all adult inflammatory liver diseases. Chronic infiltration can drive the ...

Long Term Intravital Multiphoton Microscopy Imaging of Immune Cells in Healthy and Diseased Liver Using CXCR6.Gfp Reporter Mice

Liver inflammation as a response to injury is a highly dynamic process involving the infiltration of distinct subtypes of leukocytes including monocytes, neutrophils, T cell subsets, B cells, natural killer (NK) and NKT cells. Intravital microscopy of the liver for monitoring immune cell migration is particularly challenging due to the high requirements regarding sample preparation and fixation, optical resolution and long-term animal survival. Yet, the dynamics of inflammatory processes as well as cellular interaction studies could provide critical information to better understand the initiation, progression and regression of inflammatory liver disease. Therefore, a highly sensitive and reliable method was established to study migration and cell-cell-interactions of different immune cells in mouse liver over long periods (about 6 hr) by intravital two-photon laser scanning microscopy (TPLSM) in combination with intensive care monitoring.
The method provided includes a gentle preparation and stable fixation of the liver with minimal perturbation of the organ; long term intravital imaging using multicolor multiphoton microscopy with virtually no photobleaching or phototoxic effects over a time period of up to 6 hr, allowing tracking of specific leukocyte subsets; and stable imaging conditions due to extensive monitoring of mouse vital parameters and stabilization of circulation, temperature and gas exchange.
To investigate lymphocyte migration upon liver inflammation CXCR6.gfp knock-in mice were subjected to intravital liver imaging under baseline conditions and after acute and chronic liver damage induced by intraperitoneal injection(s) of carbon tetrachloride (CCl4).
CXCR6 is a chemokine receptor expressed on lymphocytes, mainly on Natural Killer T (NKT)-, Natural Killer (NK)- and subsets of T lymphocytes such as CD4 T cells but also mucosal associated invariant (MAIT) T cells1. Following the migratory pattern and positioning of CXCR6.gfp+ immune cells allowed a detailed insight into their altered behavior upon liver injury and therefore their potential involvement in disease progression.

Stable intravital high-resolution imaging of immune cells in the liver is challenging. Here we provide a highly sensitive and reliable method to study migration and cell-cell-interactions of immune cells in mouse liver over long periods (about 6 hours) by intravital multiphoton laser scanning microscopy in combination with intensive care monitoring.

CXCR6.Gfp Muhabir Fare kullanma Sağlıklı ve hastalıklı Karaciğer Bağışıklık Hücreleri Uzun Vadeli intravital multiphoton Mikroskopi Görüntüleme

Liver inflammation as a response to injury is a highly dynamic process involving the infiltration of distinct subtypes of leukocytes including monocytes, ...

Two-photon Intravital Imaging of Leukocytes During the Immune Response in Lipopolysaccharide-treated Mouse Liver

Sepsis is a type of severe infection that can cause organ failure and tissue damage. Although the mortality and morbidity rates associated with sepsis are extremely high, no direct treatment or organ-related mechanism has been examined in detail in real time. The liver is the key organ that manages toxins and infections in the human body. Herein, we aimed to perform intravital imaging of mouse liver after induction of endotoxemia in order to track the motility of immune cells, such as neutrophils and liver capsular macrophages (LCMs). Accordingly, we designed a novel surgical method for exposure of the liver with minimally invasive surgery. Mice were intraperitoneally injected with lipopolysaccharide (LPS), a common endotoxin. Using our novel surgical approach for exposure and intravital imaging of the mouse liver, we found that neutrophil recruitment in LPS-treated LysM-green fluorescent protein (GFP) mouse liver was increased compared with that in phosphate-buffered saline-treated liver. After LPS treatment, the number of neutrophils increased significantly with time. Additionally, using CX3Cr1-GFP mice, we successfully visualized liver resident macrophages called LCMs. Therefore, to investigate the efficacy of new reagents to control immune mobility in vivo, determining the motility and morphology of neutrophils and LCMs in the liver may allow us to identify therapeutic effect in organ failure and tissue damage caused by leukocytes activation in sepsis.

We established a novel surgical protocol for two-photon imaging of live mice liver with minimal invasion. With this technique, we identified the detailed structure of the liver during lipopolysaccharide-induced endotoxemia. We anticipate that this method may be utilized to determine the effectiveness of various reagents treatment to hepatic leukocyte migration.

İki fotonlu Lipopolysaccharide tedavi fare karaciğer bağışıklık yanıtında sırasında lökositlerin Intravital görüntüleme

Sepsis is a type of severe infection that can cause organ failure and tissue damage. Although the mortality and morbidity rates associated with sepsis are ...

Imaging Cell Interaction in Tracheal Mucosa During Influenza Virus Infection Using Two-photon Intravital Microscopy

The analysis of cell-cell or cell-pathogen interaction in vivo is an important tool to understand the dynamics of the immune response to infection. Two-photon intravital microscopy (2P-IVM) allows the observation of cell interactions in deep tissue in living animals, while minimizing the photobleaching generated during image acquisition. To date, different models for 2P-IVM of lymphoid and non-lymphoid organs have been described. However, imaging of respiratory organs remains a challenge due to the movement associated with the breathing cycle of the animal.
Here, we describe a protocol to visualize in vivo immune cell interactions in the trachea of mice infected with influenza virus using 2P-IVM. To this purpose, we developed a custom imaging platform, which included the surgical exposure and intubation of the trachea, followed by the acquisition of dynamic images of neutrophils and dendritic cells (DC) in the mucosal epithelium. Additionally, we detailed the steps needed to perform influenza intranasal infection and flow cytometric analysis of immune cells in the trachea. Finally, we analyzed neutrophil and DC motility as well as their interactions during the course of a movie. This protocol allows for the generation of stable and bright 4D images necessary for the assessment of cell-cell interactions in the trachea.

In this study, we present a protocol to perform two-photon intravital imaging and cell interaction analysis in the murine tracheal mucosa after infection with influenza virus. This protocol will be relevant for researchers studying immune cell dynamics during respiratory infections.

İki fotonlu Intravital mikroskobu kullanılarak grip virüsü enfeksiyonu sırasında trakeal mukozasında görüntüleme hücre etkileşimi

The analysis of cell-cell or cell-pathogen interaction in vivo is an important tool to understand the dynamics of the immune response to infection. ...