Special thanks to the Gidday lab for their work in developing the RHP protocol, as well as the Neuro-Models Facility (UTSW) for their assistance in the tMCAo surgeries. This work was supported by grants from the American Heart Association (AMS), The Haggerty Center for Brain Injury and Repair (UTSW; AMS), and The Spastic Paralysis Research Foundation of the Illinois-Eastern Iowa District of Kiwanis International (JMG).

NOT: Bu protokol deneysel hayvan kullanımı için Sağlık (NIH) politikası için Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından riayet UT Güneybatı Tıp Merkezi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmıştır. 1. Tekrarlayan Hipoksik Önkoşullanma <ol><li> Özel tasarım dört gaz regülatörleri ile ilgili debimetreler ve (O 2) tankları bir giriş portu aracılığıyla odalarına akmasına oksijenden sıkıştırılmış gazın izin PVC borular standart 15 L indüksiyon odalarına ekleyin. Özel tasarım hakkında daha fazla bilgi için donatım ve Malzemeleri bakın. </li><li> 8 ve% 11,% O 2 poz almak Tekrarlanan Hipoksik Önkoşullanma (TÜSP) Grubu ve Kontrol Grubu, aynı zamanda% 21 O 2 (oda havası) için pozlama alırsınız: 2 gruba fareler bölün. Frekans varyasyonlarının Tablo 1&#39;e bakınız, yoğunluk (8 ve% 11 O2 ve% 21 O 2) ve ÜSP maruz kalma süresi (2 ya da 4 saat). &lt;/ Li&gt; <li> Kendi O 2 tanklarına bağlı olan odalar, sağlam yiyecek ve su şişeleri ile her kafesin üst filtre kapağını çıkarın ve kafes yerleştirin. Kapatın ve bölmenin kapağını sabitleyin. <ol><li> Tanklar için ana gaz vanasını açın ve pozlama ilk 5 dakika dakika (LPM) başına 2 L her indüksiyon odası için başlangıç ​​akış ayarlayın. Maruz kalanı için 1 LPM akış hızını azaltın. </li><li> Maruziyet sonunda, 0 LPM akışını azaltmak ve tankların gaz vanasını kapatın. </li><li> Kamara kapaklarını açın ve her kafeste filtre üst kapağını değiştirin. Bir sonraki hipoksi maruziyetinde kadar standart konut kafesleri yerleştirin. </li></ol></li><li> NPD (Steris) ya da her kullanımdan sonra eşdeğer bir dezenfektan / deodorant her indüksiyon odasını aşağı püskürtün. </li><li> Tablo 1 &#39;de tarif edildiği gibi, iki hafta boyunca her gün aynı zamanda 21 ve% ÜSP fareler hem Açığa. </li></ol> 2. GeçiciOrta Serebral Arter Tıkanıklığı (tMCAo) <ol><li> Nihai RHP maruz kaldıktan sonra inme zamanlaması hakkında daha fazla bilgi için tartışma bakın. </li><li> Aseptik cerrahi işyeri hazırlayın. % 70 Etanol veya eşdeğer dezenfektan ve tüm cerrahi aletler otoklav ile temizleyin çevredeki işyeri. <ol><li> Serebral kan akımı (CBF) göreceli değişiklikleri ölçmek için Laser Doppler Flowmetri (LDF) aleti ayarlayın. 37 ° C&#39;ye kadar ısıtma pedi açın. 34 ° C inkübatör açın. </li></ol></li><li> Küçük bir indüksiyon odasında% 4 izofluran /% 70 NO 30/2% O 2 karışımı kısa bir pozlama ile fareler anestezi. Hafifçe pençe kısma doğru anestezi onaylayın. Fare pençesini çekilirse, indüksiyon odasına fare dönmek ve izofluran pozlama devam edin. </li><li> Anestezi indüksiyon odasından fareler çıkarın ve hızlı bir şekilde burun konisi farenin burnunu yerleştirin. Anes akışını kapatarak, burun konisi gaz akışını açınhipestezi indüksiyon odası. <ol><li> % 70 No 2 /% 30 O 2 gaz karışımı değiştirmeden, prosedürün geri kalanı için idame dozu olarak% 1.8 izofluran sabitleyin. Nefes yavaş ve prosedür boyunca düzenli kalır ama nefes hızlı ve sığ olursa, izofluran dozu artırmak gerekir. Bakım dozlu bir deneyde kullanılan ekipman üretiminde ve hayvan arasında değişebilir. </li></ol></li><li> Bir microshaver kullanarak, göz ucuyla ve kulak yanı sıra boyun ventral orta hat arasındaki temporal bölgede saç tıraş. Fazla kürk çıkarın ve işlem sırasında kurumasını kornealar korumak için steril bir pamuklu çubukla göz kayganlaştırıcı uygulayın. Aseptik koşullarda sürdürmek için steril bir pamuklu çubukla alkol pedleri ve çubukla providon-iyot ile kesi bölgeyi silin. </li><li> Kemirgen cerrahi kurallarına göre analjezikler uygulayın. </li><li> Göz ve kulak arasındaki zamansal deri yoluyla bir kesi yapmak.Temporal kas Açığa. Cerrahi mikro makas kullanarak, beyaz kas çizgili alanı içinde zamansal sırtı zamansal kas ligament kesti. <ol><li> Yavaşça kafatası yoluyla orta serebral arter (MCA) görselleştirmek için forseps ile yanal kas toplu itin. Temporal kasın kesildikten sonra, bölge kan ile dolabilir. Yavaşça herhangi bir potansiyel kanama sadık bir pamuklu bir bez kullanın. </li><li> MCA alanına LDF prob ucunu hedefleyin. Bu alanda fareler arasında değişmektedir olarak seçilen gemi kaydedin. </li><li> Istikrarlı bir kırmızı kan hücresi akı okunana kadar kafatası ile yerde ve aynı hizada yer LDF tutun ve bazal CBF olarak bu değeri kaydediniz. Lazer Doppler flowmetri Ideal temel CBF&gt; 600 akı, ama bu üreticiye değişir. Bazal CBF ise &lt;400 akı, akım kayıt yakındaki bir ven veya hedef damarın üzerine sonda tamamlanmamış bir yerleştirme muhtemeldir. </li></ol></li><li> Taban CBF kurulduktan sonra repositiFare üzerinde böylece boyun maruz kalmaktadır. Başını Destek ve roket ucu konisi gelen sürekli anestezi altında fare tutmak. </li><li> Sadece klavikulaya mandibulanın altından ventral orta hat kesi olun. <ol><li> Forseps kullanarak, sol karotis arter (CCA) açığa çıkarmak için tüm yüzeysel fasya teşrih künt. Bağ dokusu ve vagus sinirinden CCA ayırın. </li><li> Kalıcı bir 6.0 ipek sütür ile CCA Arter. Filament yerleşim kapatılmasıy için yeterli oda izin mümkün olduğunca proksimaline kadar bağlanması dikiş yerleştirin. </li><li> Döngü ve gevşek massedici dikişine CCA distalinde etrafında ikinci bir ipek kravat 6.0 sütür. Massedici Filament sonradan karotis yoluyla dişli olacak gibi arteri tıkamak için dikkatli olun. </li><li> Gevşek bağlı ipek sütür ile CCA distal kelepçe 8 x 2 mm hafif mikro serrafine areterial kelepçe kullanın. Yavaşça forseps ile CCA kaldırın ve lige sütür olarak proksimal olarak, küçük bir boylamasına bir kesi yapmak3 mm Vannas mümkündür. </li><li> Arter lümen girmek için kesiden bir 12 mm silikon kaplı 6.0 gauge naylon massedici filament geçirin ve sonra bir kaç mm ilerlemek. Gevşek CCA dışına itmek filaman ve arteriyel kelepçesini kaldırmaz kan akışını sağlamak için kapatıcı filamanın ucu etrafında ikinci gevşek ipek sütür sıkın. </li><li> Internal karotis arter içine CCA (ICA) ve dış karotid arter (ECA) ilk ayrımında, 9 10.5 mm geçmiş için ICA.Advance massedici filamanın girmek için ilk çatallanma sağ dalı haline massedici filaman iplik Sol internal karotis arter (ICA) içine ikinci ipek sütür. </li><li> Kısa bir süre ICA girdikten sonra, ICA ve pterogopalantine arter (KİK) arasında ikinci çatallanma sol dal içine tıkayıcı filament ilerlemek. PPA Görselleştirme size massedici filamanın tam yerleştirme ile hafif bir direnç hissedene kadar yani devam olası değildir.Forseps ile ICA Kaldırma Filament ikinci birfurcation sol dalı haline daha kolay iplik yardımcı olabilir. İkinci ipek sütür sıkın. </li><li> MCA üzerinde kesi görünür böylece fareyi çevirin. LDF donanımları ile, CBF LDF okumaları aracılığıyla engellenmiş olduğunu onaylayın. Başarılı bir tıkanma temel CBF bir&gt;% 80 azalma olduğunu. </li><li> Doğru pozisyon elde edildiğinde tamamen çift düğüm fırsat massedici filamanın çevresine ikinci ipek sütür sıkın ve. Gerekirse, hafifçe itmek veya başarılı bir tıkanıklığı (bazal CBF örn&gt;% 80 azalma) için CBF kriterlerini ulaşmak için massedici filament çekin. </li><li> 6.0 naylon sütür ile boyun ve baş ağzını kapatınız. </li></ol></li><li> Tıkanma süresi için 34 ° C kuluçka makinesi içinde yer fareler. Oklüzyon Önerilen uzunluğu 60 dk, ancak bu yaş, gerilme bağımlı serebrovasküler anatomi, 25 farklılıklardan ve olduğa ölçüde için değişiry (hafif, orta, şiddetli) istenen. Hayvanlar anestezi kapalı geliyor dakika içinde bilincini yeniden emin olun. </li><li> Adım 2.3 açıklandığı gibi, izofluran ile hayvan yeniden uyutmak, 5 dk önceden tanımlanmış kapama süresinin bitiminden önce, kafa derisi kesi açıp MCA perfüzyon hala transkranial LDF okumaları kullanılarak azaltılır onaylayın. CBF yeterince (örneğin &lt;% 20 bazal BKA) azalır değilse, MCA oklüzyonu sırasında bir noktada reperfüzyon ve fare daha deney dışında tutulmalıdır. </li><li> Orta hat boyun kesi açın ve gevşek CCA çevresinde üçüncü bir ipek sütür kravat, CCA çatallanma ikinci ipek sütür ama proksimal distal filaman çıkarıldıktan sonra dış karotid arter (ECA) canlı kalmasını sağlamak için. <ol><li> Kes veya tıkayıcı iplik (yani ikinci ipek sütür) tutan düğümü çöz ve yavaş yavaş massedici filament çekilme. Çıkarıldı sonra, hızlı bir şekilde kapatmakCCA etrafında üçüncü ipek sütür ICA kan akmasını en aza indirmek için. Çift düğüm bu dikiş ve 6.0 naylon sütürler ile kesi kapatın. </li><li> Reperfüzyon 5 dakika sonra CBF seviyesini ölçmek için fare yerleştirin. Başarılı reperfüzyon genellikle tıkanıklığı akışı gibi, araştırmacılar kendi kriter kurabilir, bazal CBF&gt;% 50 BKA olarak tanımlanan, ancak. Hayvanlar taban% 50 altında bir CBF sergilemek ise, MCA &#39;kalıcı&#39; tıkalı olduğu muhtemeldir ve bu nedenle başka bir çalışma dışlama kriterini temsil eder. </li><li> 6.0 naylon sütür ile her iki kesiler kapatın. Kemirgen kurallarına göre tuz, anestezi (Lidokain) ve antibiyotik sağlayın. Bununla birlikte antibiyotik (minosiklin 3 mg / kg), bazı küçük dozlarda nöroprotektif şu felç olduğu tespit edilmiştir. 26 </li></ol></li><li> Temiz, steril bir kafes içinde ameliyat, yer farelerin aşağıdaki ısıtılmış inkübatör bilinç kazanmak sonra. Nemlendirilmiş foo sağlayınd veya beslenme hidrasyon diyet jel takviyeleri ve hayvanlar gibi su petri inme sonrası hareketlilik sınırlı olacaktır. Aşırı ameliyat sonrası ağrı ve ölüm kurtarma sırasında yakından hayvanları izleyin. </li></ol> 3. Evans Mavi (EB) Enjeksiyon <ol><li> Reperfüzyon sonrası EB 22 saat enjekte edilir ve kurban ve TTC boyama öncesinde 2 saat boyunca kan dolaşımında sirküle edilmelidir. </li><li> (Tuzlu su içinde% 2 EB) enjeksiyon için EB çözeltisi yapmak ve yavaşça oda sıcaklığında karıştırın. Filtre filtre kağıdı ile bir çözelti veya oda sıcaklığında, küçük çözünmemiş EB kaldırmak için şırınga ve saklamak için bağlanmış bir 0.2 mikron filtre içinden itmek. </li><li> Enjeksiyon için gerekli EB miktarı (4 ml / kg vücut ağırlığı) 29 ölçü bir iğne ile 0.3 cc insülin şırıngaya boya istenilen miktarda çizmek ve çözelti, oda sıcaklığında olduğundan emin olun hazırlanması <ol><li> Düz dipli koruyucularını kullanarak fare kısıtlamaktadır. Yanal damar upp böylece kuyruk tutermost. Yanal damarları kuyruk merkez çizgisinin her iki tarafında yer almaktadır. Enjeksiyon için sabit fare tutmak için kuyruk ucunu tutun. </li><li> Damarın perfore için dikkatli olmak, damar içine yaklaşık 3.5 mm iğne takın. İğne şırınga geri çekme ve kan izleri bakarak ven olduğunu doğrulayın. </li><li> 1 dakikalık bir süre boyunca, boyanın tüm enjekte edilir. Çözelti venine olacak, basınç şırıngaya uygulandığında çok az direnç olmalıdır. Fare kuyruğu, bacaklarda ve gözünde ani renk değişikliği ile EB başarılı sistemik venöz yönetimini onaylayın. </li><li> Kuyruk iğne çıkarın ve yavaşça kanamayı durdurmak amacıyla temiz gazlı bez ile basınç uygulayın. </li></ol></li><li> Farenin cilt mavi döndüğünde zamanlama başlayın. 2 saat zayıflamış BBB nüfuz için EB dolaşmaya izin verin. </li></ol> 4. 2,3,5 Triphenyltetrazolium Klorür (TTC) Boyama </p&gt; <ol><li> Perfüzyon ve TTC boyama reperfüzyon sonrası 24 saat meydana gelmelidir. </li><li> Kurban belirlenen süre öncesinde% 2 TTC çözeltisi hazırlayın. 0.01 M fosfat tamponlu tuz çözeltisi, 500 ml (PBS), pH 7.4 TTC tozu, 10 g ekleyin. Su banyosu içinde 37 ° C ısı çözeltisi TTK çözündürücü kolaylaştırmak için. DİKKAT: TTC toz ve çözelti deri, akciğer ve göz tahriş edici. Bu maddelerle çalışırken uygun kişisel koruyucu ekipman kullanın. <ol><li> Toz tamamen çözündükten sonra, hemen ardından 4 ° C &#39;de bir şişe kapağı folyo ve deposuna aktarımı. TTC ve TTC ile boyandı doku ışığa duyarlı bulunmaktadır. </li></ol></li><li> TMCAo sonra 24 saat ve EB uygulamasından sonra 2 saatte bir küçük indüksiyon odasında bir izofluran doz aşımı ile hayvan kurban. Perfüzyon ölümünün ardından oksijen yokluğunda başlar otolitik en aza indirmek için sacricice aşağıdaki derhal başlamalıdır. </li><li> Hızla hayvan sabitlemekpençeleri ile tutturulmuş önkol bir strafor platformunda. Sadece göğüs kafesi altında orta hat karın duvarından lateral kesi kesin. Dikkatle kalbi maruz diyaframdan kesti. <ol><li> 27 dil bilgisi kanatlı infüzyon iğne soğuk 0.01 M PBS, buz ile doldurulmuş ve birleştirilmiş bir 60 cc şırınga ile 5 ml / dk akış hızında perfüzyon Pompayı çalıştırın. Yaklaşık 0.5 cm kalbin sol ventrikül içine iğne ucu yerleştirin ve sağ atrium kesti. Venöz kan renksiz görünene kadar aşamalı sulandırılmış venöz kan perfüzyon sırasında atrium dışarı akması gerekir. Transkardiyal kalbinden 30 mi, 0.01 M fosfat tamponlu tuz (PBS) serpmek. </li></ol></li><li> Şeffaf 20 sintilasyon şişelerine TTC çözeltisi 5 ml. </li><li> Hemen hayvanların başını kesmek ve küçük makas ve bir spatula gerekirse kullanarak beynini teşrih, perfüzyon aşağıdaki. Subaraknoid hemorrha uygulanan hayvanların dışlamak için beyinleri inceleyindikiş yerleştirme sekonder Willis poligonu de ge. Fark EB sızıntı veya ödem olmaksızın, tıkalı MCA için yarımkürede kontralateral soluk göründüğünü kontrol edin. </li><li> Bir fare beyin 1.0 mm kalınlığında koronal kesitler hale getirmek için tasarlanmış bir akrilik beyin matrisine PBS dökün. Matris içine kadar beyin, dorsal yüzü koyun ve hemen beynin üzerinde PBS dökün. Nemli beyin tutun. <ol><li> Matrisin rostral tarafında ikinci yuvaya paslanmaz çelik 0.21 mm kalınlığında bıçak sokarak koku ampuller çıkarın. </li><li> Matrisin kaudal tarafında dördüncü yuvaya bir bıçak sokarak beyincik çıkarın. </li><li> Matriste kalan yuvaları orta yuvaya bıçağı yerleştirin. Eşit dilimleme sırasında dokuda en eşit dağılımını sağlamak için kalan doku bisecting kalan bıçakları takın. </li><li> Tüm bıçaklar takıldıktan sonra, onu nemlendirmek için beyne PBS 1 ila 2 damla ekleyin. </li><li> Bıçak kaldırrostral bölge ile başlayan matristen bir defada s biri. TMCAo sonra TTC analizi için ilk 7 dilim tutun. Dikkatle TTC-dolu bir şişeye bıçak dilim aktarmak için küçük bir spatula kullanın. </li></ol></li><li> Tüm bölümleri flakon olduktan sonra, kap ve bölümler pembe çevirene kadar ılık su banyosu yerleştirin. Düzensiz boyanma yol açabilecek bölüm örtüşmesini önlemek için gerekirse yavaşça banyosunda şişeyi çevirin. Sonra TTK imha ve TTC kimyasal reaksiyonu sonlandırmak için beyin bölümleri kapsayacak şekilde şişenin içine% 4 paraformaldehid çözüm dökün. </li><li> Hemen temiz bir 1 &quot;x 3&quot; cam slayt bölümleri düzenlemek ve rostral gelen kaudal Bölümleri yönlendirmek. <ol><li> Bölümler slaytta düzenlenir zaman standart bir tarayıcı kullanılarak slayt tarayın. Görüntü analizi için 600 dpi en az çözünürlük ayarlayın. Hayvanın adını ve taranan görüntüde bir metrik cetvel dahil ettiğinizden emin olun. </li><li> Slayt ters çevirinve toplanan tüm verileri sağlamak için arka tarafını tarar. </li></ol></li></ol> 5. Enfarktüs Hacim Ölçümü <ol><li> Standart bir görüntü analizi yazılımı (ör ImageJ) kullanarak, enfarktüs hacmini ölçmek. </li><li> Yeterli analizi için yüksek çözünürlüklü (örn 600 dpi) Tarama görüntüler. Bitki görüntüler. Taranan görüntüde yer alan metrik cetvel kullanarak tüm görüntüler için ölçek standart hale. </li><li> Aşağıdaki formül kullanılarak kontralateral yarımkürenin toplam hacmi hesaplayın. Ipsilateral yarımkürenin toplam hacmini hesaplamak için bu formülü tekrarlayın. Her dilim dilim kalınlığı x toplam kontralateral yarımkürede toplamı </li><li> Dolaylı infarkt hacmi hesaplayın. . Bir kontrol olarak sağlıklı, kontralateral yarımkürede kullanarak inme ipsilateral ödem Kontrol 27 dolaylı enfarktüs hacmini hesaplamak için aşağıdaki formülü kullanın: Kontralateral yarımkürenin Toplam hacim - (Toplam volumenfarktüs 3 ölçümün ipsilateral hemisfer e -Ortalama hacmi) </li></ol> 6. Kan beyin bariyeri (KBB) Bütünlük Niceleme <ol><li> EB ölçümü için hazırlık ilk 2,5 inç tekneler tartmak tartmak. Kilo kaydedin ve her bir hayvan için iki tartmak tekneler etiket: ipsilateral hemisferde diğeri kontralateral yarımkürede için bir. </li><li> TTC-lekeli bölümleri taradıktan sonra, ipsilateral ve kontralateral hemisfer içine atılan jilet ile her bölüm bisect. Bir tartmak teknede 7 kesimlerinden ipsilateral hemisferlerin yerleştirin ve ağırlığı kaydedin. Kontralateral yarımkürede için tekrarlayın. </li><li> Hemen 48 saat boyunca 56 ° C&#39;de bir fırın grubu ağırlıkça tekneler aktarın. </li><li> Kurutuldu bölümleri tartın. Ayrı 1.5 ml mikrosantrifüj tüpleri içine her iki yarımkürede aktarın. <ol><li> Her bir yarım küre için gerekli formamid miktarı (kuru doku 8 ml / g) hesaplayın ve bunların ilgili microcentrifug ekleE tüpleri. Formamid ışığa karşı hassastır ve ileriye bu noktadan itibaren folyo tüm formamit tedavi edilen örnekleri kapsamaktadır. </li><li> Başka bir 48 saat daha 56 ° C&#39;de ayarlanmış bir kuluçka mikrosantrifüj tüpleri aktarın. </li></ol></li><li> 48 saat sonra, etiketli mikrosantrifüj tüpler başka bir dizi içine mavi süpernatant dışarı pipetle. Ayıklanır süpernatant hacmi maksimize etmek tüpün dibine doku itin. Süpernatant tüpleri tutun ve tüm doku atmayın. </li><li> Standart eğri için formamid EB üstel seri dilüsyonları hazırlayın. Formamid EB 64 ug / ml ile 0.125 ila 1 boş (formamid sadece) ve daha sonra 10 üstel çözümler ug / ml ekleyin. <ol><li> Bir 96-yuvalı plaka içine, standart eğri için yapılan seyreltileri 300 ul Pipet. İlgili kuyulara süpernatant 300 ul pipetle. </li><li> 620 nm&#39;de bir spektrofotometrede absorbansı ölçülür. </li><li> Absorbans o ile EB dilüsyonlarının standart eğri karşılaştırınSüpernatan örnekleri f. optik yoğunluğu BBB bütünlüğü ile doğru orantılıdır. </li><li> Arka plan olarak kontralateral yarımkürede optik yoğunluğunu varsayalım ve katlık değişime belirlemek için formül (ipsilateral-kontralateral) / kontralateral kullanın. İstatistiksel analiz hakkında daha ayrıntılı bilgi için Martin ve ark bakın. 2010. 18 </li></ol></li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Sistemik hipoksi farelerde (yani, 2 saat% 11 O 2) Bir tek maruziyet &quot;geçici&quot; kısa ömürlü hipoksik ön hazırlık meydan epigenetik yanıtı anlam tMCAo, 29 beyni korur ve temel fenotip içinde geri günler. Hipoksik önkoşullama uyaranın Tekrarlanan sunumlar dramatik nöroprotektif fenotip süresini uzatmak. 6 Birçok çalışma tekrarlayan uyaran trenin sıklığı, büyüklüğü ve süresi bu yanıtın kritik belirleyicileri olduğunu göstermiştir. Örneği...

Yetişkin sakatlık ve ölüm dördüncü önde gelen nedeni önde gelen nedeni olarak, inme ABD yetişkin nüfusun karşı karşıya olduğu en zayıflatıcı hastalık devletlerinden biridir. Inme 1 hayvan modelleri iskemik yaralanma azaltarak yeni yöntemler ve deneysel araştırma için izin İnme sonrası kurtarma iyileştirilmesi. Böyle translasyonel araştırma için bir yeni cadde ön hazırlık olduğunu. Önkoşullanma takip eden ve daha ciddi yaralanma zararı azaltmak için olmayan bir zarar uyaran kasıtlı kullanımıdır. 2 Hipoksik önkoşullanma in vivo ve in vitro çalışmalar, hem de vuruş karşı koruma sağlayan beyinde pleiotropik değişikliklere gösterilmiştir . 3 Bununla birlikte, hipoksi bir tek maruziyet sadece erişkin farelerde iskemiye karşı toleransı az 72 saat uyaran, kısa vadeli nöro sunmaktadır. Lin ve ark hipobarik hipoksi 14 saat, günlük risklerin 4 Hatta dört hafta sonra. found o nöro sadece bir hafta. 5 Tekrarlanan hipoksik önkoşullama (TÜSP) için devam etti sıklığı, süresi ve hipoksik risklerin yoğunluk stokastik varyasyonlar ile karakterizedir. Tek bir önkoşullanma meydan aksine, TÜSP farelerde sekiz hafta kadar süren bir serebroprotektiftir fenotip oluşturmakta. 6 RHP son hipoksi maruz kaldıktan sonra hafta boyunca enfarktüs hacimleri, kan-beyin bariyeri (KBB) bozulması, damar iltihabı ve lökosit ROS azaltılmış . ÜSP özellikle işemik hemisferde B hücresi popülasyonlarının korurken, T hücresi, monosit ve makrofaj popülasyonlarının düşürülmesinde iskemik beyin iltihabı, indirgenmiş. 7 Aslında, ÜSP felç dahil olmak üzere, herhangi bir merkezi sinir sistemi hasarı önce farelerde bir bağışıklık bastırıcı fenotipi neden olmuştur. ÜSP ile tedavi edilen sağlıklı farelerden izole ÜSP ile muamele edilmiş B hücreleri, antijen sunumu ve antikor üretimi hem de bir baskılanması ile, özel bir anti-inflamatuar bir fenotip sergilemiştir.pro-enflamatuar adaptif immün mekanizmaları genel azalma sadece merkezi sinir sistemi özgü enflamatuar hastalıklar için endojen bağışıklık indükleme ÜSP mükemmel bir yöntem sağlar, aynı zamanda, bir ön-iltihabik nedenleri mevcuttur sistemik yaralanma ya da hastalık modelleri. TÜSP geçici orta serebral arter tıkanıklığı (tMCAo) Aşağıdaki infarkt hacmi ve BBB bozulma azaltır. Gibi yaygın olarak kullanılan tMCAo inme hayvan modelleri, çarpıcı bir şekilde inme olduğunun anlaşılması, yanı sıra, daha etkili nöroterapötik tasarımını geliştirmek. İlk Koizumi ve arkadaşları tarafından geliştirilen. 1986 yılında, 8 tMCAo prosedürü kemirgenlerde inme ve reperfüzyon aşağıdaki inflamasyon araştırmak için tercih edilen yöntemlerden birini uyaran bir yaygın olarak kullanılan bir yöntemdir. TMCAo yöntemleri geliştikçe, silikon kaplı filamentlerin daha yakın zamanda kullanım daha başka modeller 9,10 &lt;kıyasla subaraknoid kanama riskini azaltmak/ Sup&gt; maalesef tMCAo sık sık enfarktüs hacimleri geniş bir varyasyon üreten olsa ve güvenilirliğini artırmak. 11-13 Bu çalışmaların çoğu 2,3,5 trifeniltetrazolyum klorür (TTC) ile boyanarak koronal beyin kesitlerinde enfarktüsü bölgeleri belirginleştiren, kabul edilen bir enfarktüs ölçümü için altın standart o canlı, yinelenebilir sonuçlar üretmek için basit ve ucuz bir yoldur çünkü. TTC mitokondri içinde mevcut dehidrojenazın bir alt-tabaka olarak hizmet eder. Beyin dilimleri TTC çözeltisi maruz kaldıklarında formazan non çözünür indirgeme ürünü, uygun bir mitokondrilerinde koyu kırmızı bir renk çöktürülmesi burada TTC seçici canlı hücre alınır. Çünkü iskemik dokuda mitokondriyal disfonksiyon, bu doku hasarlı ve sağlıklı doku farklılaşması için izin beyaz kalır. 14 TÜSP ayrıca iskemik yarımkürede BBB bozulması azaltır. 6. Bu nedenle, BBB bütünlüğünün ikili miktarının aynı b içindeTTC-tabanlı infarkt hacmi olarak yağmurlar endojen koruma dolu etkinlik ile ilgili faydalı bilgiler ve tedavi edilmemiş ve tedavi edilen hayvanlarda BBB bozulması ve enfarktüs arasındaki potansiyel nedensel ilişkileri sağlayacak 15 tespitler. inme ikincil bir kesintiye BBB, aracılığıyla periferik kandan akını sonuçta iskemik inmeli hastalarda enfeksiyon ve ölüm oranlarının artırılması, iskemik yarımkürede lökosit popülasyonları, pro-inflamatuar sitokinler, oksidatif stres, vazojenik ödem ve hemorajik dönüşümünü artırır . 16,17 hayvan modellerinde BBB bozulması ölçülmesi için yaygın bir yöntem, beyin içine Evans mavisi (EB) boya sızıntı niceliğinin belirlenmesine dayandığı. 15,18-21 EB seçici albümin, bir küresel serum proteinine bağlanan (MW = 65 kDa) Bu yaralanmamış hayvanlarda BBB aşmaz. 22 iskemik inme sonrasında, EB beyin infiltratlar ve optik yoğunluk withi ölçümü için izin 620 nm&#39;de fluorescesn perfüze yaralı parankim. 22 optik yoğunluk EB transkardiyak perfüzyon ile otopsi kortikal damar yıkanıp olmuştur BBB geçirgenliği ile doğru orantılıdır. EB tatbikat hayvanlarda TTC-lekeli beyinleri hemen işleme ile, enfarktüs hacmi BBB bozulması hem etkin bir şekilde belirlenebilir. Bu nöronal yaralanma BBB bozulması inme sonrası beyinde eşlik işlemleri değildir Bununla birlikte, dikkat edilmesi gereken, 23,24 şekilde kurban süre seçimi, önemli bir husustur. Aşağıdaki protokol RHP yöntemi, geçici bir arter tıkanıklık uyarılması için tMCAo yöntemini detayları bu modellerin insan hastalarda orta serebral arter tıkanıklıkları ve nöral ve vasküler inme yaralanma bitiş noktaları belirlemek için ikili histolojik yöntemler. TTC genel bir enfarktüs hacim ölçümü sağlayan, hücre ölümü ve toplu doku hasarı büyüklüğüneume, EB BBB hasar hemisferik ölçümü için sağlarken.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="830">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:249px;">Material/ Equipment</td>
			<td style="width:171px;">Company</td>
			<td style="width:127px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:283px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="220">
			<td height="220" style="height:220px;width:249px;">Flowmeters, regulators</td>
			<td style="width:171px;">VetEquip, Inc</td>
			<td style="width:127px;">Specialty order</td>
			<td style="width:283px;">Four flowmeters are attached to 6.0 mm flexible PVC tubing which connects to the inlet port on each induction chamber with a plastic female connector. These flowmeters are bolted to a 6.5&#34; x 1&#34; x 1&#34; metal bar. This metal bar is bolted to a MI-246-P pressure gauge with a DISS outlet. This pressure gauge and flowmeter equipment can be attached to each new gas cylinder with a wrench.</td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:249px;">21% O2 tank</td>
			<td style="width:171px;">AirGas</td>
			<td style="width:127px;">OX USP200</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:249px;">11% O2 tank</td>
			<td style="width:171px;">AirGas</td>
			<td style="width:127px;">Specialty order</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="26">
			<td height="26" style="height:26px;width:249px;">8% O2 tank&#160;</td>
			<td style="width:171px;">AirGas</td>
			<td style="width:127px;">Specialty order</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:249px;">15L induction chambers</td>
			<td style="width:171px;">VetEquip</td>
			<td style="width:127px;">941454</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:249px;">Moor Laber Dopper Flow&#160;</td>
			<td style="width:171px;">Moor Instruments&#160;</td>
			<td style="width:127px;">moorVMS-LDF1-HP</td>
			<td style="width:283px;">0.8mm diameter probe&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:249px;">High Intensity Illuminator&#160;</td>
			<td style="width:171px;">Nikon</td>
			<td style="width:127px;">NI-150</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:249px;">Zoom Stereo Microscope&#160;</td>
			<td style="width:171px;">NIkon</td>
			<td style="width:127px;">SMZ800</td>
			<td style="width:283px;">Other surgical microscopes may be used.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="100">
			<td height="100" style="height:100px;width:249px;">Kent Scientific Right Temperature CODA</td>
			<td style="width:171px;">Kent Scientific Corporation</td>
			<td style="width:127px;">Discontinued</td>
			<td style="width:283px;">Recommended replacement is PhysioSuite with RightTemp Temperature Monitoring and Homeothermic Control (Kent Scientific, #PS-RT).</td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:249px;">Hovabator Incubator</td>
			<td style="width:171px;">Stromberg&#39;s</td>
			<td style="width:127px;">2362-E</td>
			<td style="width:283px;">Our model is the 2362N. 2362E is a later model and includes an electronic thermostat.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="120">
			<td height="120" style="height:120px;width:249px;">V010 Anesthesia system&#160;</td>
			<td style="width:171px;">VetEquip</td>
			<td style="width:127px;">901807</td>
			<td style="width:283px;">Includes: ten foot high-pressure oxygen hose, frame, flowmeter, oxygen flush assembly, vaporizer, breathing circuit, chamber, nosecones, waste gas evacuation tubing and two VapoGuard filters</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:249px;">250 mL isoflurane&#160;</td>
			<td style="width:171px;">Butler Schein</td>
			<td style="width:127px;">NDC-11695</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:249px;">D-6 Vet Trim Animal Cordless Trimmer&#160;</td>
			<td style="width:171px;">Andis&#160;</td>
			<td style="width:127px;">#23905</td>
			<td style="width:283px;">Replacement blades are available from Andis (#23995)</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:249px;">Betadine&#160;</td>
			<td style="width:171px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:127px;">19-898-867&#160;</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:249px;">Q-tips</td>
			<td style="width:171px;">Multiple sellers&#160;</td>
			<td style="width:127px;">Catalog number not available&#160;</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:249px;">Gauze Pads</td>
			<td style="width:171px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:127px;">67622</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:249px;">Surgical drape</td>
			<td style="width:171px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:127px;">GM300&#160;</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:249px;">Silk Sutures&#160;</td>
			<td style="width:171px;">Look/Div Surgical Specialties</td>
			<td style="width:127px;">SP115</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:249px;">Nylon Sutures</td>
			<td style="width:171px;">Look/Div Surgical Specialties</td>
			<td style="width:127px;">SP185</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:249px;">Durmont #5 forceps (2)&#160;</td>
			<td style="width:171px;">Fine Science Tools&#160;</td>
			<td style="width:127px;">11251-35</td>
			<td style="width:283px;">Angled 45&#176;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:249px;">Surgical Scissors</td>
			<td style="width:171px;">Fine Science Tools&#160;</td>
			<td style="width:127px;">14028-10</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:249px;">3mm Vannas</td>
			<td style="width:171px;">Kent Scientific Corporation</td>
			<td style="width:127px;">INS600177</td>
			<td style="width:283px;">Straight blade</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:249px;">Hartman Hemostats&#160;</td>
			<td style="width:171px;">Fine Scientific Tools</td>
			<td style="width:127px;">13002-10</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="60">
			<td height="60" style="height:60px;width:249px;">Occluding filaments</td>
			<td style="width:171px;">Washington University</td>
			<td style="width:127px;">Specialty order</td>
			<td style="width:283px;">Filaments are silicone coated at Washington Univeristy and provided to UTSW facilities for a fee.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:249px;">Evans Blue</td>
			<td style="width:171px;">Sigma Aldritch</td>
			<td style="width:127px;">E2129-10G</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:249px;">Filter Paper&#160;</td>
			<td style="width:171px;">Sigma Aldritch</td>
			<td style="width:127px;">WHA1001150</td>
			<td style="width:283px;">150 mm, circles, Grade 1&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:249px;">Weigh Boats</td>
			<td style="width:171px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:127px;">02-202-101</td>
			<td style="width:283px;">2.5&#34; diameter</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:249px;">0.9% Sodium Chloride Injection USP&#160;</td>
			<td style="width:171px;">Baxter Pharmaceutics&#160;</td>
			<td style="width:127px;">2B1321</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:249px;">0.3cc insulin syringe with 29 g needle</td>
			<td style="width:171px;">Becton Dickinson Labware</td>
			<td style="width:127px;">309301</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:249px;">Flat bottom restrainer&#160;</td>
			<td style="width:171px;">Braintree Scientific&#160;</td>
			<td style="width:127px;">FB&#160;M</td>
			<td style="width:283px;">2.0&#34; diameter</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:249px;">TTC</td>
			<td style="width:171px;">Sigma</td>
			<td style="width:127px;">T8877</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:249px;">10X PBS, pH 7.4</td>
			<td style="width:171px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:127px;">BP399-20</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="80">
			<td height="80" style="height:80px;width:249px;">Water Bath</td>
			<td style="width:171px;">Multiple sellers&#160;</td>
			<td style="width:127px;">Catalog number not available&#160;</td>
			<td style="width:283px;">Scintillation tubes with TTC may be manually held under running warm water as an alternative to the water bath.</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:249px;">Styrofoam board</td>
			<td style="width:171px;">Multiple sellers&#160;</td>
			<td style="width:127px;">Catalog number not available&#160;</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:249px;">Large Syringe Kit</td>
			<td style="width:171px;">PumpSystems Inc</td>
			<td style="width:127px;">P-SYRKIT-LG</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:249px;">Perfusion Pump</td>
			<td style="width:171px;">PumpSystems Inc</td>
			<td style="width:127px;">NE-300&#160;</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:249px;">60 cc syringe</td>
			<td style="width:171px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:127px;">NC9203256</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:249px;">27g winged infusion set</td>
			<td style="width:171px;">Kawasumi Laboratories, Inc</td>
			<td style="width:127px;">D3K1-25G 1</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:249px;">20 ml scintillation vial</td>
			<td style="width:171px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:127px;">50-367-126</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:249px;">Stainless steel spatula</td>
			<td style="width:171px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:127px;">14-373-25A</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:249px;">Alto acrylic 1.0 mm mouse brain, coronal</td>
			<td style="width:171px;">CellPoint Scientific&#160;</td>
			<td style="width:127px;">Catalog number not available&#160;</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:249px;">0.21 mm stainless steel blades, 25 pk</td>
			<td style="width:171px;">CellPoint Scientific&#160;</td>
			<td style="width:127px;">Catalog number not available&#160;</td>
			<td style="width:283px;">Reusable cryostat blades are an inexpensive alternative.</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:249px;">4% paraformaldehyde</td>
			<td style="width:171px;">Santa Cruz Biotechnology&#160;</td>
			<td style="width:127px;">SC-281692</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:249px;">Superfrost microscope slides&#160;</td>
			<td style="width:171px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:127px;">12-550-15</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:249px;">HP Scanjet G4050</td>
			<td style="width:171px;">Multiple sellers&#160;</td>
			<td style="width:127px;">Catalog number not available&#160;</td>
			<td style="width:283px;">Other commercial scanners are suitable for this step in the protocol.</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:249px;">ImageJ&#160;</td>
			<td style="width:171px;">National Institute of Health</td>
			<td style="width:127px;">Catalog number not available&#160;</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:249px;">Analytical Balance</td>
			<td style="width:171px;">Mettler Toledo&#160;</td>
			<td style="width:127px;">XSE 205U</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:249px;">Precision Compact Oven&#160;&#160;</td>
			<td style="width:171px;">Thermo Scientific&#160;</td>
			<td style="width:127px;">PR305225M</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:249px;">1.7 mL microcentrifuge tubes (Eppendorfs)</td>
			<td style="width:171px;">Denville Scientific&#160;</td>
			<td style="width:127px;">C2170</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:249px;">Formamide</td>
			<td style="width:171px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:127px;">BP228-100</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:249px;">96-well plates</td>
			<td style="width:171px;">Fisher Scientific</td>
			<td style="width:127px;">07-200-9</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:249px;">Epoch Microplate Spectrophotometer&#160;</td>
			<td style="width:171px;">BioTek&#160;</td>
			<td style="width:127px;">Catalog number not available&#160;</td>
			<td style="width:283px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

quantification of neurovascular protection following repetitive hypoxic preconditioning and transient middle cerebral artery occlusion in mice

Inme deneysel hayvan modelleri inme patoloji anlamak ve daha etkin tedavi stratejileri geliştirmek için paha biçilmez araçlardır. Tekrarlayan hipoksik önkoşullama (TÜSP) A 2 hafta protokol fokal iskemik inme bir fare modelinde merkezi sinir sistemi (MSS) yaralanmalara karşı uzun süreli koruma uyarır. ÜSP hem süresi (2 ya da 4 saat) ve yoğunluğu (% 8 ve% 11 O2) değişir hipoksiye 9 stokastik maruz oluşur. ÜSP endojen bir merkezi sinir sistemi koruyucu fenotipin uzun süreli indükleme gösteren, infarkt hacmi, kan-beyin bariyeri (BBB) ​​kesintileri ve hipoksi son maruz kaldıktan sonra hafta inme sonrası inflamatuar yanıtı azalır. infarkt hacmi BBB bozulması çift ölçümü için yöntem ÜSP ya da diğer olası nöro-koruyucu olan farelerde nörovasküler koruma değerlendirilmesinde etkindir. Yetişkin erkek Swiss Webster fareleri% 21 O kadar ÜSP veya süresi eşdeğer maruz kalma tarafından öngörülmekte edildi <sub&gt; 2 (yani oda havası). 60 dk geçici orta serebral arter tıkanıklığı (tMCAo) Son hipoksik maruziyet aşağıdaki 2 hafta oluşturuldu. Oklüzyon ve reperfüzyon Hem transkraniyal lazer Doppler flowmetre ile doğrulanmıştır. Reperfüzyondan sonra yirmi iki saat Evans Mavi (EB) damardan, bir kuyruk damarından enjeksiyon yoluyla uygulanmıştır. 2 saat sonra, hayvanlar izofluran doz aşımı ve beyin kesitleri ile kurban edilmiş 2,3,5-trifeniltetrazolyum klorür (TTC) ile boyandı. İnfarktlar hacimleri daha sonra sayıldı. Daha sonra, EB tMCAo sonra BBB bozulma belirlemek için 48 saat boyunca dokusundan ekstre edilmiştir. Özet olarak, ÜSP diğer merkezi sinir sistemi tabanlı ve sistemik pro-enflamatuar hastalık durumları için translasyon potansiyeli olan farelerde, felç yaralanması uzun vadeli endojen nörovasküler koruma indükleme, minimum maliyet, çoğaltılmış basit bir protokoldür.

Bu çalışma, 10 haftalık ÜSP içine rasgele başlangıcında (n = 10), 25 erkek Swiss Webster fareleri veya% 21 O 2 (n = 15) grupları dahildir. İki hafta son RHP maruz kaldıktan sonra, cerrahi işlemler kör gruplarla, yapıldı ve gün arasında denge. TMCAo ardından, 1 fare ameliyat sonrası iyileşme döneminde ölen ve reperfüzyon CBF kriterini karşılamak yoktu çünkü 1 fare çalışma dışı bırakıldı. Her ikisi de dışlanmış fareler% 21 O 2 grup vardı. Uyarınca kurallara...

Watch this Scientific Journal Video about Quantification of Neurovascular Protection Following Repetitive Hypoxic Preconditioning and Transient Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice at JoVE.com

Quantification of Neurovascular Protection Following Repetitive Hypoxic Preconditioning and Transient Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

This protocol describes repetitive hypoxic preconditioning, or brief exposures to systemic hypoxia that reduce infarct volumes and blood-brain barrier disruption following transient middle cerebral artery occlusion in mice. It also details dual quantification of infarct volume and blood-brain barrier disruption after stroke to assess the efficacy of neurovascular protection.

Farelerde Tekrarlanan Hipoksik Önkoşullanma ve Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ardından Nörovasküler Koruma Kantitasyonu

Experimental animal models of stroke are invaluable tools for understanding stroke pathology and developing more effective treatment strategies. A 2 week ...

quantification-neurovascular-protection-following-repetitive-hypoxic

Research

JoVE Journal

Medicine

13.6K Görüntüleme.  University of Texas Southwestern Medical Center. This protocol describes repetitive hypoxic preconditioning, or brief exposures to systemic hypoxia that reduce infarct volumes and blood-brain barrier disruption following transient middle cerebral artery occlusion in mice. It also details dual quantification of infarct volume and blood-brain barrier disruption after stroke to assess the efficacy of neurovascular protection.

Video: Quantification of Neurovascular Protection Following Repetitive Hypoxic Preconditioning and Transient Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are very limited. To meet the need for novel therapeutic approaches, experimental stroke research frequently employs rodent models of focal cerebral ischaemia. Most researchers use permanent or transient occlusion of the middle cerebral artery (MCA) in mice or rats.
Proximal occlusion of the middle cerebral artery (MCA) via the intraluminal suture technique (so called filament or suture model) is probably the most frequently used model in experimental stroke research. The intraluminal MCAO model offers the advantage of inducing reproducible transient or permanent ischaemia of the MCA territory in a relatively non-invasive manner. Intraluminal approaches interrupt the blood flow of the entire territory of this artery. Filament occlusion thus arrests flow proximal to the lenticulo-striate arteries, which supply the basal ganglia. Filament occlusion of the MCA results in reproducible lesions in the cortex and striatum and can be either permanent or transient. In contrast, models inducing distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA occlusion typically spare the striatum and primarily involve the neocortex. In addition these models do require craniectomy. In the model demonstrated in this article, a silicon coated filament is introduced into the common carotid artery and advanced along the internal carotid artery into the Circle of Willis, where it blocks the origin of the middle cerebral artery. In patients, occlusions of the middle cerebral artery are among the most common causes of ischaemic stroke. Since varying ischemic intervals can be chosen freely in this model depending on the time point of reperfusion, ischaemic lesions with varying degrees of severity can be produced. Reperfusion by removal of the occluding filament at least partially models the restoration of blood flow after spontaneous or therapeutic (tPA) lysis of a thromboembolic clot in humans.
In this video we will present the basic technique as well as the major pitfalls and confounders which may limit the predictive value of this model.

Filamentous occlusion of the Middle cerebral artery is a common model for studying ischemic stroke in mice.

Fare Modelleme İnme - Filament Model Orta Serebral Arter Tıkanıklığı

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Tıp

Mouse Model of Middle Cerebral Artery Occlusion

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the brain (ischemic stroke) 2. Since most ischemic strokes (~80%) occur in the territory of middle cerebral artery (MCA) 3, many animal stroke models that have been developed have focused on this artery. The intraluminal monofilament model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) involves the insertion of a surgical filament into the external carotid artery and threading it forward into the internal carotid artery (ICA) until the tip occludes the origin of the MCA, resulting in a cessation of blood flow and subsequent brain infarction in the MCA territory 4. The technique can be used to model permanent or transient occlusion 5. If the suture is removed after a certain interval (30 min, 1 h, or 2 h), reperfusion is achieved (transient MCAO); if the filament is left in place (24 h) the procedure is suitable as a model of permanent MCAO. This technique does not require craniectomy, a neurosurgical procedure to remove a portion of skull, which may affect intracranial pressure and temperature 6. It has become the most frequently used method to mimic permanent and transient focal cerebral ischemia in rats and mice 7,8. To evaluate the extent of cerebral infarction, we stain brain slices with 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to identify ischemic brain tissue 9. In this video, we demonstrate the MCAO method and the determination of infarct size by TTC staining.

We demonstrate in the video a method for producing a middle cerebral artery occlusion in adult mice using an intraluminal monofilament. We also show how to evaluate the extent of cerebral infarction by 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) staining.

Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fare Modeli

Stroke is the most common fatal neurological disease in the United States 1. The majority of strokes (88%) result from blockage of blood vessels in the ...

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United States in 20091,2. The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model was developed by Koizumi4 in 1986 to simulate this 
impactful human pathology in the rat. A modification of the MCAO method was later presented by Longa3. Both techniques have been widely used to identify 
molecular mechanisms of brain injury resulting from ischemic stroke and potential therapeutic modalities5. This relatively noninvasive method in rats has been 
extended to use in mice to take advantage of transgenic and knockout strains6,7. To model focal cerebral ischemia, an intraluminal suture is advanced via 
the internal carotid artery to occlude the base of the MCA. Retracting the suture after a specified period of time mimics spontaneous reperfusion, but the 
suture can also be permanently retained. This video will be demonstrating the two major approaches for performing intraluminal MCAO procedure in mice in a 
stepwise fashion, as well as providing insights for potential drawbacks and pitfalls. The ischemic brain tissue will subsequently be stained by 
2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to evaluate the extent of cerebral infarction8.

Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Mice

The intraluminal middle cerebral artery occlusion (MCAO) model is the most frequent used model among experimental ischemic stroke models. Here we will demonstrate the entire model in detail with the guide of Laser Doppler flowmetry, and its representative results.

Fare lazer Doppler flowmetre Rehberlik İskemik İnme intraluminal Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO) Model

Stroke is the third leading cause of death and the leading cause of disability in the world, with an estimated cost of near $70 billion 
in the United ...

Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion Model for Ischemic Stroke with Laser Doppler Flowmetry Guidance in Rat

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in 20091, 2. Several models of cerebral ischemia have been developed to mimic the human condition of stroke. It has been suggested that up to 80% of all strokes result from ischemic damage in the middle cerebral artery (MCA) area3. In the early 1990s, endothelin-1 (ET-1) 4 was used to induce ischemia by applying it directly adjacent to the surface of the MCA after craniotomy. Later, this model was modified 5 by using a stereotaxic injection of ET-1 adjacent to the MCA to produce focal cerebral ischemia. The main advantages of this model include the ability to perform the procedure quickly, the ability to control artery constriction by altering the dose of ET-1 delivered, no need to manipulate the extracranial vessels supplying blood to the brain as well as gradual reperfusion rates that more closely mimics the reperfusion in humans5-7. On the other hand, the ET-1 model has disadvantages that include the need for a craniotomy, as well as higher variability in stroke volume8. This variability can be reduced with the use of laser Doppler flowmetry (LDF) to verify cerebral ischemia during ET-1 infusion. Factors that affect stroke variability include precision of infusion and the batch of the ET-1 used6. Another important consideration is that although reperfusion is a common occurrence in human stroke, the duration of occlusion for ET-1 induced MCAO may not closely mimic that of human stroke where many patients have partial reperfusion over a period of hours to days following occlusion9, 10. This protocol will describe in detail the ET-1 induced MCAO model for ischemic stroke in rats. It will also draw attention to special considerations and potential drawbacks throughout the procedure.

Several animal models of cerebral ischemia have been developed to simulate the human condition of stroke. This protocol describes the endothelin-1 (ET-1) induced middle cerebral artery occlusion (MCAO) model for ischemic stroke in rats. In addition, important considerations, advantages, and shortcomings of this model are discussed.

Rat Lazer Doppler Flowmetri Rehberlik ile İskemik İnme için Endotelin-1 Bağlı Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Modeli

Stroke is the number one cause of disability and third leading cause of death in the world, costing an estimated $70 billion in the United States in ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be performed in many locations overlying the rat cerebrum, but is most easily carried out by creating a craniectomy over the readily accessible frontal or parietal bones. Most frequently, we have used this technique in combination with the endothelin-1 middle cerebral artery occlusion model of ischemic stroke to quantify the changes in middle cerebral artery vessel diameter that occur with injection of endothelin-1 into the brain parenchyma adjacent to the proximal MCA4, 5. In order to visualize the proximal portion of the MCA during endothelin -1 induced MCAO, we use a technique to create a cranial window through the temporal bone on the lateral aspect of the rat skull (Figure 1). Cerebral arteries can be visualized either with the dura intact or with the dura incised and retracted. Most commonly, we leave the dura intact during visualization since endothelin-1 induced MCAO involves delivery of the vasoconstricting peptide into the brain parenchyma. This bypasses the need to incise the dura directly over the visualized vessels for drug delivery. This protocol will describe how to create a cranial window to visualize cerebral arteries in a step-wise fashion, as well as how to avoid many of the potential pitfalls pertaining to this method.

This article describes a method for visualizing rat cerebral arteries through a cranial window using temporal craniectomy in order to view proximal portions of the middle cerebral artery (Figure 1). This versatile method can be combined with various techniques of drug delivery to measure cerebral artery reactivity in vivo.

Endotelin-1 Bağlı Orta Serebral Arter Tıkanıklığı sırasında Orta Serebral Arter görselleştirin bir Kranial Pencere kullanmak

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

Optimized System for Cerebral Perfusion Monitoring in the Rat Stroke Model of Intraluminal Middle Cerebral Artery Occlusion

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal models of acute ischemic stroke allows to confirm successful arterial occlusion and exclude subarachnoid hemorrhage. Cerebral perfusion monitoring can also be used to study intracranial collateral circulation, which is emerging as a powerful determinant of stroke outcome and a possible therapeutic target. Despite a recognized role of Laser Doppler perfusion monitoring as part of the current guidelines for experimental cerebral ischemia, a number of technical difficulties exist that limit its widespread use. One of the major issues is obtaining a secure and prolonged attachment of a deep-penetration Laser Doppler probe to the animal skull. In this video, we show our optimized system for cerebral perfusion monitoring during transient middle cerebral artery occlusion by intraluminal filament in the rat. We developed in-house a simple method to obtain a custom made holder for twin-fibre (deep-penetration) Laser Doppler probes, which allow multi-site monitoring if needed. A continuous and prolonged monitoring of cerebral perfusion could easily be obtained over the intact skull.

Cerebral perfusion monitoring has been demonstrated to improve accuracy in ischemic stroke models. Technical difficulties often limit the use of this essential tool for cerebrovascular research. In this video, an optimized system is shown to obtain a single or multi-site hemodynamic monitoring during intraluminal middle cerebral artery occlusion in rats.

Intraluminar Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Sıçan Strok Model Serebral Perfüzyon İzleme için Optimize Sistemi

The translational potential of pre-clinical stroke research depends on the accuracy of experimental modeling. Cerebral perfusion monitoring in animal ...

Modeling Stroke in Mice: Permanent Coagulation of the Distal Middle Cerebral Artery

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical options are available for a small proportion of stroke patients in the acute phase. Current research is intensively searching for novel therapeutic strategies and is increasingly focusing on the sub-acute and chronic phase after stroke because more patients might be eligible for therapeutic interventions in a prolonged time window. These delayed mechanisms include important pathophysiological pathways such as post-stroke inflammation, angiogenesis, neuronal plasticity and regeneration. In order to analyze these mechanisms and to subsequently evaluate novel drug targets, experimental stroke models with clinical relevance, low mortality and high reproducibility are sought after. Moreover, mice are the smallest mammals in which a focal stroke lesion can be induced and for which a broad spectrum of transgenic models are available. Therefore, we describe here the mouse model of transcranial, permanent coagulation of the middle cerebral artery via electrocoagulation distal of the lenticulostriatal arteries, the so-called &#8220;coagulation model&#8221;. The resulting infarct in this model is located mainly in the cortex; the relative infarct volume in relation to brain size corresponds to the majority of human strokes. Moreover, the model fulfills the above-mentioned criteria of reproducibility and low mortality. In this video we demonstrate the surgical methods of stroke induction in the &#8220;coagulation model&#8221; and report histological and functional analysis tools.

Various murine models of middle cerebral artery occlusion (MCAO) are widely used in experimental brain research. Here, we demonstrate the model of transcranial permanent distal MCAO which produces consistent cortical infarction of a size corresponding to damage imposed by the majority of human ischemic strokes.

Farelerde Modelleme İnme: Distal Orta Serebral Arter Daimi Pıhtılaşma

Stroke is the third most common cause of death and a main cause of acquired adult disability in developed countries. Only very limited therapeutical ...

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion (MCAO) for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic stroke. However, the use of tPA is limited by its narrow therapeutic window and by increased risk of hemorrhagic transformation. There is an urgent need to develop suitable stroke models to study new thrombolytic agents and strategies for treatment of ischemic stroke. At present, two major types of ischemic stroke models have been developed in rats and mice: intraluminal suture MCAO and embolic MCAO. Although MCAO models via the intraluminal suture technique have been widely used in mechanism-driven stroke research, these suture models do not mimic the clinical situation and are not suitable for thrombolytic studies. Among these models, the embolic MCAO model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical investigation of thrombolytic therapy. This embolic model was first developed in rats by Overgaard et al.1 in 1992 and further characterized by Zhang et al. in 19972. Although embolic MCAO has gained increasing attention, there are technical problems faced by many laboratories. To meet increasing needs for thrombolytic research, we present a highly reproducible model of embolic MCAO in the rat, which can develop a predictable infarct volume within the MCA territory. In brief, a modified PE-50 tube is gently advanced from the external carotid artery (ECA) into the lumen of the internal carotid artery (ICA) until the tip of the catheter reaches the origin of the MCA. Through the catheter, a single homologous blood clot is placed at the origin of the MCA. To identify the success of MCA occlusion, regional cerebral blood flow was monitored, neurological deficits and infarct volumes were measured. The techniques presented in this paper should help investigators to overcome technical problems for establishing this model for stroke research.

Embolic Middle Cerebral Artery Occlusion MCAO for Ischemic Stroke with Homologous Blood Clots in Rats

In this paper, we demonstrate a standard method for producing an embolic middle cerebral artery occlusion with homologous blood clots (fibrin-rich) in adult rat. This model closely mimics human ischemic stroke and is suitable for preclinical study of thrombolytic therapy for ischemic stroke.

Sıçanlar Homolog Kan pıhtısı ile İskemik İnme emboli Orta Serebral Arter Tıkanıklığı (MCAO)

Clinically, thrombolytic therapy with use of recombinant tissue plasminogen activator (tPA) remains the most effective treatment for acute ischemic ...

Surgical Approach for Middle Cerebral Artery Occlusion and Reperfusion Induced Stroke in Mice

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ischemic in origin and occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA). Currently the only Food and Drug Administration (FDA) approved drug for the treatment of this devastating disease is tissue plasminogen activator (tPA). However, tPA has a small therapeutic window for administration (3 - 6 hr), and is only effective in 4% of the patients who actually receive it. Current research focuses on understanding the pathophysiology of stroke in order to find potential therapeutic targets. Thus, reliable models are crucial, and the MCA occlusion (MCAo) model (also termed the intraluminal filament or suture model) is deemed to be the most clinically relevant surgical model of ischemic stroke, and is fairly non-invasive and easily reproducible. Typically the MCAo model is used with rodents, especially with mice due to all the genetic variations available for this species. Here we describe (and present in the video) how to successfully perform the MCAo model (with reperfusion) in mice to generate reliable and reproducible data.

In order to understand the pathophysiology of stroke, it is important to use reliable models. This paper will describe one of the most frequently used stroke models in mice, termed the middle cerebral artery occlusion (MCAo) model (also termed the intraluminal filament or suture model) with reperfusion.

Farelerde Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Reperfüzyon Kaynaklı İnme Cerrahi Yaklaşım

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ...

Transient Middle Cerebral Artery Occlusion Model of Neonatal Stroke in P10 Rats

A number of animal models have been used to study hypoxic-ischemic injury, traumatic injury, global hypoxia, or permanent ischemia in both the immature and mature brain. Stroke occurs commonly in the perinatal period in humans, and transient ischemia-reperfusion is the most common form of stroke in neonates. The reperfusion phase is a critical component of injury progression, which occurs over a period of days to weeks, and of the endogenous response to injury. This postnatal day 10 (p10) rat model of transient middle cerebral artery occlusion (tMCAO) creates a unilateral, non-hemorrhagic focal ischemia-reperfusion injury that can be utilized to study the mechanisms of focal injury and repair in the full-term-equivalent brain. The injury pattern that is produced by tMCAO is consistent and highly reproducible and can be confirmed with MRI or histological analyses. The severity of injury can be manipulated through changes in occlusion time and other methods that will be discussed.

Neonatal stroke is a significant cause of early brain injury requiring a translational model with consistent focal injury patterns and high reproducibility in order to enable study. This study describes the detailed surgical procedure for creating a non-hemorrhagic, unilateral focal ischemia-reperfusion injury in full-term-equivalent rodents.

P10 Sıçanlarda Yenidoğan İnme Geçici Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Modeli

A number of animal models have been used to study hypoxic-ischemic injury, traumatic injury, global hypoxia, or permanent ischemia in both the immature ...