The authors wish to thank Drs. David Calkins (Vanderbilt University) and James Morgan (Cardiff University) for sharing their expertise and for helpful advice towards developing this procedure. This study was supported by grants from the Canadian Institutes of Health Research (A.D.P.). Y.A.I. and N.B. are the recipients of postdoctoral fellowships from the Fonds de recherche du Qu&#233;bec-Sant&#233; (FRQS). N.B. was awarded a H.H. Jasper scholarship from the Groupe de Recherche sur le Syst&#232;me Nerveux Central (GRSNC). A.D.P. is a Chercheur Boursier National FRQS.

Aşağıdaki yordam Deney Hayvanlarının Kullanımı ve Görme ve Oftalmoloji (ARVO) Araştırma Derneği&#39;nden Oftalmik Hayvanların Kullanımı ve Görsel Araştırma Tablosu Hayvan Bakımı Kanada Konseyi kurallarına uygun olarak gerçekleştirilmiştir. Anterior İntrakameral Enjeksiyon için Mikroiğnenin 1. Hazırlık <ol><li> Bir çektirmesi ile bir borosilikat cam kapiller bir microneedle oluşturmak </li><li> Mikroskop altında, dikkatle Mikroiğnenin ucunda bir açılış oluşturmak için keskin bir bıçak kullanın. Elde edilen açıklık, sırasıyla, yaklaşık olarak 190 um ve 70 um arasında bir majör ve minör ekseni çapa sahip bir elips şeklinde olması gerekir. görüntü analiz yazılımı kullanılarak ölçümü takiben mikroskop altında yerleştirilen bir cetvel ile ilk satın görüntüleri hazırlanmış microneedle açılış alanını ölçün. </li><li> Mikropipet pah sisteminde, 20 Degre de microneedle yerleştirinağzı açma plakasına e açısı göreli microneedle açılış plaka dokunmadan böylece. Konik kenarları kadar yaklaşık 10 dk düz ve pürüzsüz için. sürecine yardımcı olmak için damıtılmış su bir kaç damla ekleyin. </li><li> ucu keskin kadar açıklığı çevreleyen iki kenarları konik microneedle döndürün. </li><li> bir aerosol silgi kullanarak microneedle ucu açıklığı Temiz tüm enkaz ve su. </li><li> Dikkatle mikroskop altında bitmiş microneedle inceleyin. kırıklı atın microneedles ameliyat sırasında microneedle kırılma riskini en aza indirmek için. </li><li> daha sonra steril dengelenmiş tuz çözeltisi (BSS) ile, etanol ile, birinci durulama ile mikroiğne sterilize edin. </li></ol> Manyetik microbead Çözüm 2. Hazırlık Not: Bu çalışmada kullanılan manyetik mikro-epoksi gruplar ile kaplanır. Bu tür boncuk topaklanma ve istenmeyen moleküler etkileşimler gibi herhangi bir olumsuz etkileri önlemek için, bu epoksi grupları gerekirİlk enjeksiyon cerrahi ile devam etmeden önce mikro-çıkarılmalıdır. <ol><li> Manyetik boncuklardan Epoksi grupların uzaklaştırılması <ol><li> 10x Tris tamponu 0.02 M sodyum hidroksit (NaOH, MW 39,997 g / mol) ihtiva eden bir çözelti (MW 121.14 g / mol) hazırlayın. </li><li> Yavaşça manyetik mikroboncuk çözeltisi stoku vorteks (4.5 mikron çapında, 4 x 10 8 boncuk / mi) boncuk eşit çözeltisi içinde süspansiyon haline kadar devam eder. </li><li> Hızlı bir şekilde 10 x Tris tamponu, 0.02 M NaOH, 50 ml manyetik boncuk çözeltisi 1 mL pipet. </li><li> boncuklardan epoksi gruplarını kaldırmak için oda sıcaklığında 24 saat boyunca döndürün. </li><li> tüpün dibine bir mıknatıs güvence boncuk toplayın. tüm boncuklar mıknatıs çekici olmasını sağlamak için yatay tüp yönlendirmek. Oda sıcaklığında ilave bir 4 saat çevirin. </li><li> Bir mikropipet ile dikkatlice boncuk pelet bozmadan süpernatant kaldırmak. </li><li> Yavaşça 10x T 50 ml pelet vorteksboncuklar iyi askıya alınır kadar ris tampon. </li><li> Tekrarlayın 2.1.6 için 2.1.4 adımları. </li></ol></li><li> Konsantrasyon ve steril Dengeli Tuz Çözeltisi içinde manyetik mikro boncuklar tabanda </li></ol> Not: 2.4 x 10 6 boncuklar ön odasına enjekte edilir, böylece 1.6 x 10 6 boncuk / ul nihai konsantrasyona ulaşmak için, steril dengelenmiş tuz çözeltisi (BSS) &#39;de manyetik boncuk çözeltisi stoku konsantre için gerekli olan küçük fare göz için uygun olan 1.5 ul, son hacmi. <ol><li> yavaşça, 2 dakika girdap oluşturarak ultra saf laboratuvar sınıfı 5 ml su boncuklar yıkayın. </li><li> Bir mıknatıs ile tüpün dibine onları çekerek boncuk toplayın. </li><li> Bir mikropipet ile dikkatlice boncuk pelet bozmadan su çıkarmak. </li><li> Tekrarlayın 2.2.1 2.2.3 için üç kez daha yineleyin. </li><li> bir laminar akış başlığı içinde, pipettin tarafından BSS 500 ul boncuk yıkayınyukarı ve aşağı g. Laminer akış başlığı içinde steril koşullar altında, bu bölümde kalan adımları. </li><li> Bir mıknatıs ile tüpün dibine onları çekerek boncuk toplayın. </li><li> Bir mikropipet ile dikkatlice boncuk pelet bozmadan BSS çıkarın. </li><li> Tekrarlayın 2.2.5 2.2.7 için üç kez daha yineleyin. </li><li> yukarı ve aşağı BSS 250 ul boncuk pipet ile tekrar süspansiyon. </li><li> boncuk çözüm de homojenize olduğundan emin olun. Daha sonra, hızlı bir şekilde, steril 0.5 ml&#39;lik tüplere süspansiyon 25 ul tablet. Hazır boncuk çözeltisi nihai konsantrasyon 1.6 x 10 6 boncuk / ml. </li><li> 4 ° C&#39;de saklayın. </li></ol> Oküler Hipertansiyon 3. İndüksiyon Not: Bölüm 3 iki kişilik bir işlemdir. Belirli bir işlem, belirli bir kişi tarafından yapılması gereken bir durumda, uygun bir kişi olarak tanımlanır. Kişi 2 r ise genel olarak, Kişi 1 mikroskop altında fare kollarımikroenjektör pompa işlenmesi için esponsible. cerrahi işlem toplam süresi en az 10 dakika olmalıdır (3.17 ile 3.9 adımlar). <ol><li> yetişkin C57BL / 6 farelerde prosedürleri uygulayın. Yiyecek ve su ad libitum erişimi olan standart bir ortamda Ev fareleri. Bu yazıda, yaş 3 ve 4.5 ay arasında dişi C57BL / 6 fareler kullanın. Bununla birlikte, bu protokol transgenik ve nakavt fareler de dahil olmak üzere erkek ve farklı yaşlardaki farelerde, hem de diğer fare suşları, adapte edilebilir. </li><li> kalibre toparlanma tonometresi kullanılarak önceden anestezi ve microbead enjeksiyon uyanık farelerde bazal göz içi basıncı ölçün. kornea üzerinde proparacaine hidroklorür bir damla uygulayın. <ol><li> Yavaşça kulak arasındaki deriyi tutarak fareyi dizginlemek. hayvan rahat ve gözleri erişilebilir, böylece benchtop fare yerleştirin. kornea yüzeyine dik tonometresi tutun ve bir elde etmek için göze başına on ardışık okumanın en az üç set çekmekGİB&#39;in ortalama. Uyanık farelerde GİB ölçüm GİB üzerine anesteziye bağlı etkileri atlamak için tercih edilir. Seçenek olarak ise, IOP adım 3.4 sonrası Narkoz farelerde ölçülebilir. </li></ol></li><li> 20 mg / ml ketamin, 2 mg / ml ksilazin ve 0.4 mg / ml asepromazin oluşan bir stok fare kokteyli anestezi karışım hazırlayın. </li><li> Kokteyl karışımı (vücut ağırlığının 1 ul / g) periton içine fare anestezi neden. Hayvan bir inhalasyon maskesi bağlı değil olarak fare kafasını işlerken bu esneklik sağlar, çünkü bir enjektabl anestezi kokteyl kullanımı (örneğin, izofluran) gaz anestezikler tercih edilir. Buna ek olarak, bir enjektabl anestezi ile gerekli uzun iyileşme dönemi microbeads ön kamaraya geri yerinden oynatmamaya olmadan iridokorneal açıda yerleşmek sağlar. </li><li> buprenorfin subkutan vücut ağırlığının her kilogramı için 0.05 mg yönetme. </li><li> Bir tropikamid ey ile göz tedavisie öğrenci dilatasyon ikna etmek için bırakın. Nedeniyle fare ön kamaraya küçük boyutu, öğrenci kolayca enjeksiyon sırasında Mikroiğnenin konumlandırma ve ilerleme görselleştirmek için dilate edilmelidir. </li><li> İşlem sırasında korneanın kurumasını önlemek için kontralateral göz (un-işletilen) topikal merhem sürün. </li><li> mikroenjektör pompa enjeksiyon düzeneğine temiz bir microneedle takın. Çapraz hayvan bulaşmayı önlemek için her operasyondan sonra microneedle değiştirin. </li><li> 1. Kişi: işletim platformu için anesteziye fare aktarın. Mikroskop altında, öğrenci tam dilate olduğu ve hiçbir göz hareketi olduğunu bu yüzden göz kaslar gevşer emin olun. göz hareketlerinin yokluğu enjeksiyonu sırasında kararlılığı sağlar. Yavaşça emici bezlerden kullanarak gözünden tropikamid göz damla silin. </li><li> Kişi 2: yukarı ve aşağı pipetleme manyetik microbead çözüm karıştırın. </li><li> mikroenjektör pompası kullanarak hemen MICR yükoneedle homojenize manyetik microbead solüsyonu (2.4 x 10 6 boncuk) 1.5 ul (bölüm 1 hazırlanan). Bu hava kabarcıkları Mikroiğnenin ucundaki yok olduğundan emin olun. Microneedle yüklendikten sonra, yürütmek manyetik microbead çözüm homojen bir süspansiyon içinde kalacak şekilde mümkün olduğunca hızlı 3.12 3.13 için yineleyin. </li><li> limbusa öne göreceli yerleştirilen bir 45 ° &#39;lik açıyla yüklenen microneedle, yerleştirin. 1. Kişi: plastik forseps kullanarak göz destekler. Mikroiğnenin ve plastik forseps arasındaki açı yaklaşık 90 ° olduğundan emin olun. </li><li> Kişi 2: Mikroiğnenin ucu ön odasına girer ve böylece yüklenen microneedle ile hafifçe kornea delinme. Yüklenen Microneedle ponksiyon sırasında limbus bir 45 ° açıda kalmasını sağlamak. lens veya iris ile herhangi bir temastan kaçının. Microneedle arka odasına girmediğinden emin olun. Kişi 1: göz desteklemeye devamplastik forseps kullanarak. </li><li> Kişi 1: Fare hareketli kafa olmaksızın, ön odacık içine manyetik boncuklar çekmek ve kornea iç yüzeyi ile tanelerin temas en aza indirmek için, karşı mikroiğne ucu, göz yanında mıknatıs yerleştirin. Kişi 2: mikroenjektör pompası kullanılarak, ön kamaraya manyetik boncuk çözeltisi 1.5 ul enjekte edilir. mikroboncuk çözelti, 15 ila 30 saniye arasında bir süre boyunca enjekte edilir. 1. Kişi: enjeksiyon tüm süresi boyunca microneedle ucu mıknatıs karşısında tutmaya devam edin. </li><li> Kişi 2: boncuk dolu hacmi enjekte edildikten sonra, yavaş yavaş gözden microneedle çıkarın. Kişi 1: mikro-geri akışını önlemek için, ek bir 30 ila 60 saniye boyunca aşağıdaki göz mıknatıs tutarak ön odanın karşı manyetik boncuklar çekmek için devam etmektedir. </li><li> Kişi 1: mıknatıs kullanarak iridokorneal açıya boncuklar çekmek. Boncuklar bir eşit olarak dağıtılmış bir halka oluşturur emin olunön kamara çevresi. Bu adım sırasında, bu temas üzerine korneanın iç yüzeyine yapışma eğilimi olarak korneada boncukların çeken önlemek. </li><li> enfeksiyon riskini en aza indirmek için bir antibiyotik göz damlası ile çalışan göz davranın. </li><li> Fare (~ 3-4 saat) tamamen uyanık kadar ısı pad üzerinde kurtarmak için izin verin. ameliyat göz yukarı bakacak şekilde fare yerleştirin. Bu konumlandırma çekimi korneanın iç yüzeyine enjekte tanelerin birikmesi önleyecektir. Buna ek olarak, bu konum ameliyat göz bir yatak ve / veya kafes içinde mevcut olabilecek diğer malzemeler ile temas olmayacak şekilde enfeksiyon potansiyelini azaltır. gerektiği gibi bir hayvan sıkıntı belirtisi gösteren durumunda, buprenorfin ek dozları yönetmek. </li><li> Fareler GİB ölçümü almadan önce en az 2 gün prosedürü kurtarmak için izin verin. 3.2 açıklandığı gibi göz içi basıncı ölçün. Monitor GİB&#39;in en az haftada bir kez ya da gerektiği gibi daha sık, ve günün aynı saatinde sirkadiyen ilgili dalgalanmaları en aza indirmek için. </li><li> GİB, bir iç kontrol olarak işletilen fare kontralateral göz kullanın. Alternatif olarak, bozulmamış, olmayan çalışan veya sahte çalışan fareler olarak naif kontrollerden ölçümleri kullanın. </li></ol> 4. Değerlendirme Retina Ganglion Hücre Soma ve Akson Survival <ol><li> Hemen buz soğukluğunda% 4 paraformaldehit (PFA), ardından 0.1 M fosfat tampon çözeltisi (PBS) intrakardiyak enjeksiyonu ile göz hipertansiyonu tabi fareler serpmek. </li><li> 4.1 anlatıldığı gibi sağlam olmayan çalışan fareler serpmek ve yaralanmamış kontroller olarak kullanın. Ameliyat farelerden kontralateral göz kullanımı yaralanmasını takiben kontralateral göz değişiklikler 15,16 bildirilmiştir ve veri yorumlanmasına neden olabilir, çünkü RGC yaşam değerlendirmek için tavsiye edilmez. Alternatif olarak, kullanım sham operasyonu gözleri 1 ile enjektekontrol grubu olarak BSS 0,5 ul. </li><li> microscissors kullanarak, dikkatli bir şekilde göz soketten izole etmek gözün çevresinde bağ dokusu kesti. optik sinir başının seviyesinde keserek göz optik sinir ayırın. </li><li> 30 G iğne kullanılarak göz içine fiksatif çözüm penetrasyonunu sağlamak için korneada bir delik açın. % 4 PFA göz yerleştirin ve ek tespit için 4 ° C sıcaklıkta 1 saat boyunca inkübe edilir. </li><li> (MW: 214 g / mol),% 2 PFA ve 0.1 M sodyum kakodilat içinde% 2.5 glutaraldehit ihtiva eden bir çözelti içinde, optik sinir yerleştirin ve ek tespit için 4 ° C&#39;de O / N inkübe edin. </li></ol> 5. RGC Soma Yoğunluk Niceleme Flat monte Retinaları . Aşağıdaki prosedür, Nadal-Nicolas ve ark 17 ile bir protokol uyarlanmıştır ve retina düz bağlar beyin ozel homeoboks / pou domain proteini 3A (Brn3a) karşı bir antikor kullanılarak RGCs miktarının özetlenmektedir: edin. alternatif metEtiketleme RGCs için ODS Fluorogold ya DII ile birden çok ekleme (RBPMS) ya da geriye doğru etiketi ile RNA bağlayıcı proteine ​​karşı bir antikor ile imünohistokimya dahil kullanılabilir. <ol><li> bir mikroskop altında, kornea kolayca ayrılana kadar tüm limbusta boyunca bir kesi yaparak gözün ön kısmını kaldırın. kornea ve lensi çıkarın. Dikkatle ora serrata ve optik sinir boyunca kesim yaparak göz retina ayırın. </li><li> açıkça dört retina kadran tanımlamak için optik sinir doğru retina çevresinden dört küçük eşit kesiler yaparak retina düz montaj hazırlayın. küçük bir fırça kullanarak, yavaşça retina kalan vitrözü çıkarın. mümkün olduğunca vitreus çıkarılması ve temiz bir güçlü bir immünohistokimyasal sinyal elde edilmesi için çok önemlidir. </li><li> Retina, böylece dikkatle PBS içinde% 0.5 Triton X-100 ihtiva eden bir 48-gözenekli düz tabanlı kültür plakasının retina aktarınserbest yüzen. ganglion hücre tabakası yukarı baktığından emin olun. </li><li> 15 dakika boyunca -70 ° C &#39;de kültür plakasına yerleştirin. PBS taze% 2 Triton X-100 içinde iki kez yıkanarak retina, daha geçirgenliği çözündükten sonra. </li><li> PBS,% 2 Triton X-100 ve% 2 normal eşek serumu içeren 0.5 ml ug / - 0.3 Brn3a antikor seyreltilir. yavaşça 4 ° C&#39;de O / N çalkalanarak Brn3a birincil antibodi çözeltisinin içine retina inkübe edin. retinalar her zaman tamamen çözelti 150 ile 200 ul içinde daldırılmalıdır. </li><li> PBS,% 2 Triton X-100 içeren ml 2 ug / eşek anti-keçi IgG sekonder antikor seyreltilir ve hafifçe çalkalanarak oda sıcaklığında 2 saat boyunca bu çözelti içinde retina inkübe edin. Retina tam olarak her zaman bir antikor çözeltisine batırılmış olmalıdır. photobleaching önlemek için kalan adımlar için alüminyum folyo ile kültür plaka örtün. </li><li> Doku pos gibi düz duracak şekilde bir fırça kullanarak, dikkatli bir slayt retina aktarmaksible. 10 dakika boyunca hava kuru. anti-solmaya montaj orta kullanarak monte edin. </li><li> Bir floresan mikroskop altında retina düz bağlar inceleyin. Açıklandığı gibi retina kadran başına üç örtüşmeyen alanlarda Brn3a pozitif RGCs sayısını ölçmek. 18 </li></ol> Optik Sinir Çapraz Bölümleri üzerinde RGC Aksonlar 6. sayısallaştırılması <ol><li> Aşama 4.5 optik disk toplamak ve 2 saat boyunca 2% ozmiyum tetroksit (OSO 4, MW 254,23 g / Mol) inkübe edilir. Dikkat: Yüksek toksisite nedeniyle, osmiyum tetroksit uygun laboratuvar kıyafetleri ile bir davlumbaz ele alınmalıdır. </li><li> Her biri 15 dakika için (% 50,% 70,% 90,% 95 ve% 100) etanol içinde artan konsantrasyonlarda batırılarak optik sinir kurutmak. </li><li> Aşağıdaki tarifi kullanarak epoksi reçine hazırlayın: 15.72 ml Sitene Ekle-812, süksinik anhidrit dodesenil 6.45 ml, 7.83 ml nadik metil anhidrit, 0.45 ml DMP-30. </li><li> Sıralı oluşan çözümlerde optik sinir inkübe0: 1, 1: 1, 0.75: 0.25 ve 1: Aşağıdaki propilen oksit, epoksi reçinesinin oranları (MW 58.08 g / mol) 0. Optik sinir bir O / N süreyle oda sıcaklığında, her çözelti içinde inkübe edilir. </li><li> Ek bir 48 saat boyunca 60 ° C&#39;de% 100 epoksi reçinesi (6.4 son safha) gömülü optik sinirler inkübe edin. </li><li> Bir mikrotom kullanılarak yarı-ince optik sinir kesitleri (0.75 mikron) oluşturun. </li><li> % 1 toluidin mavisi ile optik sinir kesitleri Leke. </li><li> Açıklanan 19 olarak her optik sinir bölümünün beş örtüşmeyen alanlarda RGC aksonlar ölçmek. </li></ol>

<ol>
	<li>Quigley, H. A., Broman, A. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+number+of+people+with+glaucoma+worldwide+in+2010+and+2020.">The number of people with glaucoma worldwide in 2010 and 2020.</a> Br J Ophthalmol. 90, 262-267 (2006).</li><li>Bouhenni, R. A., Dunmire, J., Sewell, A., Edward, D. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+glaucoma.">Animal models of glaucoma.</a> J Biomed Biotechnol. 2012, 692609 (2012).</li><li>Morrison, J. C., Cepurna Ying Guo, W. O., Johnson, E. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pathophysiology+of+human+glaucomatous+optic+nerve+damage:+insights+from+rodent+models+of+glaucoma.">Pathophysiology of human glaucomatous optic nerve damage: insights from rodent models of glaucoma.</a> Exp Eye Res. 93, 156-164 (2011).</li><li>Bunker, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+glaucoma+induced+by+ocular+injection+of+magnetic+microspheres.">Experimental glaucoma induced by ocular injection of magnetic microspheres.</a> J Vis Exp. , (2015).</li><li>Cone, F. E., Gelman, S. E., Son, J. L., Pease, M. E., Quigley, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+susceptibility+to+experimental+glaucoma+among+3+mouse+strains+using+bead+and+viscoelastic+injection.">Differential susceptibility to experimental glaucoma among 3 mouse strains using bead and viscoelastic injection.</a> Exp Eye Res. 91, 415-424 (2010).</li><li>Cone, F. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+anesthesia,+mouse+strain+and+age+on+intraocular+pressure+and+an+improved+murine+model+of+experimental+glaucoma.">The effects of anesthesia, mouse strain and age on intraocular pressure and an improved murine model of experimental glaucoma.</a> Exp Eye Res. 99, 27-35 (2012).</li><li>El-Danaf, R. N., Huberman, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristic+patterns+of+dendritic+remodeling+in+early-stage+glaucoma:+evidence+from+genetically+identified+retinal+ganglion+cell+types.">Characteristic patterns of dendritic remodeling in early-stage glaucoma: evidence from genetically identified retinal ganglion cell types.</a> Neuroscience. 35, 2329-2343 (2015).</li><li>Ngumah, Q. C., Buchthal, S. D., Dacheux, R. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Longitudinal+non-invasive+proton+NMR+spectroscopy+measurement+of+vitreous+lactate+in+a+rabbit+model+of+ocular+hypertension.">Longitudinal non-invasive proton NMR spectroscopy measurement of vitreous lactate in a rabbit model of ocular hypertension.</a> Exp Eye Res. 83, 390-400 (2006).</li><li>Samsel, P. A., Kisiswa, L., Erichsen, J. T., Cross, S. D., Morgan, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+method+for+the+induction+of+experimental+glaucoma+using+magnetic+microspheres.">A novel method for the induction of experimental glaucoma using magnetic microspheres.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 52, 1671-1675 (2011).</li><li>Sappington, R. M., Carlson, B. J., Crish, S. D., Calkins, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+microbead+occlusion+model:+a+paradigm+for+induced+ocular+hypertension+in+rats+and+mice.">The microbead occlusion model: a paradigm for induced ocular hypertension in rats and mice.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 51, 207-216 (2010).</li><li>Urcola, J. H., Hernandez, M., Vecino, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+experimental+glaucoma+models+in+rats:+comparison+of+the+effects+of+intraocular+pressure+elevation+on+retinal+ganglion+cell+size+and+death.">Three experimental glaucoma models in rats: comparison of the effects of intraocular pressure elevation on retinal ganglion cell size and death.</a> Exp Eye Res. 83, 429-437 (2006).</li><li>Weber, A. J., Zelenak, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+glaucoma+in+the+primate+induced+by+latex+microspheres.">Experimental glaucoma in the primate induced by latex microspheres.</a> J neuroscience meth. 111, 39-48 (2001).</li><li>Ho, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+assessment+of+aqueous+humor+dynamics+upon+chronic+ocular+hypertension+and+hypotensive+drug+treatment+using+gadolinium-enhanced+MRI.">In vivo assessment of aqueous humor dynamics upon chronic ocular hypertension and hypotensive drug treatment using gadolinium-enhanced MRI.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 55, 3747-3757 (2014).</li><li>Yang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microbead-induced+ocular+hypertensive+mouse+model+for+screening+and+testing+of+aqueous+production+suppressants+for+glaucoma.">Microbead-induced ocular hypertensive mouse model for screening and testing of aqueous production suppressants for glaucoma.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 53, 3733-3741 (2012).</li><li>Gallego, B. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IOP+induces+upregulation+of+GFAP+and+MHC-II+and+microglia+reactivity+in+mice+retina+contralateral+to+experimental+glaucoma.">IOP induces upregulation of GFAP and MHC-II and microglia reactivity in mice retina contralateral to experimental glaucoma.</a> J neuroinflammation. 9, 92 (2012).</li><li>Rojas, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microglia+in+mouse+retina+contralateral+to+experimental+glaucoma+exhibit+multiple+signs+of+activation+in+all+retinal+layers.">Microglia in mouse retina contralateral to experimental glaucoma exhibit multiple signs of activation in all retinal layers.</a> J neuroinflammation. 11, 133 (2014).</li><li>Nadal-Nicolas, F. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brn3a+as+a+marker+of+retinal+ganglion+cells:+qualitative+and+quantitative+time+course+studies+in+naive+and+optic+nerve-injured+retinas.">Brn3a as a marker of retinal ganglion cells: qualitative and quantitative time course studies in naive and optic nerve-injured retinas.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 50, 3860-3868 (2009).</li><li>Morquette, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=REDD2-mediated+inhibition+of+mTOR+promotes+dendrite+retraction+induced+by+axonal+injury.">REDD2-mediated inhibition of mTOR promotes dendrite retraction induced by axonal injury.</a> Cell Death Differ. 22, 612-625 (2015).</li><li>Almasieh, M., Zhou, Y., Kelly, M. E., Casanova, C., Di Polo, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structural+and+functional+neuroprotection+in+glaucoma:+role+of+galantamine-mediated+activation+of+muscarinic+acetylcholine+receptors.">Structural and functional neuroprotection in glaucoma: role of galantamine-mediated activation of muscarinic acetylcholine receptors.</a> Cell Death Dis. 1, 27 (2010).</li></ol>

The authors declare that they have no competing financial interests.

Burada sunulan video teknikler etkin ve üretken farelerde GİB yükselmesi ikna etmek için manyetik mikro-boncuk intrakamaral enjeksiyon nasıl gerçekleştirileceği hakkında ayrıntılı adım adım yönergeler sağlar. Ek enjeksiyon gerektirir ve oküler hipertansiyon induction.Elevated GİB ilk 3 hafta içinde saptanabilir RGC soma ve akson kaybı teşvik değil sürekli GİB&#39;in artış Bu prosedür sonuçları, insanlarda glokom gelişimi için önemli bir risk faktörüdür. Bu nedenle, bu geniş bir uygulama aralığı için bir potansiyele sahip değerli murin oküler hipertansiyon bağımlı glokom modelidir. ön odaya mikro-enjeksiyonu ile bağlantılı ortak bir dezavantajı iğnesi geri çekildiğinde, genellikle sulu bir çıkış ve artan değişkenlik ancak kısmen tıkanması ile sonuçlanan, enjeksiyon yeri üzerinden geri akış boncuk ile ilgilidir. Bu sorunu gidermek için, birçok önemli değişiklikler hayata geçirilmiştir. Firs<html> T, bir yontulmuş konik bir temiz ve keskin bir cam Mikroiğnenin dikkatli bir hazırlık mikroboncuk başarılı bir enjeksiyon için gereklidir. Bir düzgün hazırlanmış microneedle narin göz yüzeyine basınç minimal uygulama ile korneanın kontrollü ve düzgün penetrasyonunu sağlar. küçük korneal delinme mikro boncuklar geri akmasını önler. Buna ek olarak, ince microneedle olmayan hastalık ile ilgili inflamasyona neden olabilir örneğin iris ve lens olarak zarar yakındaki yapıların, riskini azaltır. İkincisi, sırasında ve enjeksiyondan sonra stratejik göz alanlarına el mıknatıs uygulaması bu tekniğin bir başka önemli yönüdür. Enjeksiyon sırasında, manyetik mikroiğne geri çekildiğinde mikroboncuk ön kamara önlenmesi geri akış manyetik mikro-boncuklar çekmek için kullanılır. Enjeksiyondan sonra, mıknatıs sonra sulu humor çıkışı engellemek için iridokorneal açıya mikroboncukları yönlendirmek için kullanılır. çadır &quot;&gt; genellikle microbead tıkanıklığı modellerinde karşılaşılan bir başka sorun, tekrarlanan boncuk enjeksiyonları genellikle GİB artışı 10,11. Bu ile zaman. iridokorneal açıdan bir el mıknatıs kombinasyonunu yerinden oynatmamaya mikro boncuklar sonucu olabilir sürekli başarmayı için gerekli olmasıdır yukarıda açıklanan ve fare konumlandırma sonrası operasyon büyük ölçüde sonucu artırır. esneklik uzun bir post-operatif iyileşme sürecini işlemi sırasında kafa taşımak ve ihtiyaç için izin enjektabl anestezik kullanımını olarak, tercih edilir. Yerleştirme ve ameliyat göz ameliyatından sonra birkaç saat için yukarı bakacak şekilde fare iridokorneal açıda mikro-çözümüne katkıda bulunur ve ön kamaraya geri yerinden oynatmamaya riskini azaltır. Enjekte boncuk sayısının nispeten tutarlı sağlanması arası hayvan varyasyonları en aza indirmek için bir başka önemli adımdır. mikroboncuklarının b yerleşmek beriottom borunun, tamamen mikroboncuk çözelti homojen hale getirmek ve zamanında mikroiğne, uygun hacim çekmek için gereklidir. ön kamaraya az boncuk Enjeksiyon kötü veya değişken GİB yol açması muhtemel olan sulu mizah drenaj yapılarının eksik tıkanma, neden olabilir. microbead enjeksiyon nihai amacı göz içi basıncını yükseltmek için olmasına rağmen uyanık farelerden alınan GİB ölçümleri bu çalışmada (~ 25 mmHg) bildirilen tepe değerlerinden daha yüksek olduğunda notun, dikkatli alınmalıdır. Son derece yüksek GİB iskemik hasar riskini arttırır ve aynı zamanda hayvana ağrıya neden olabilir. GİB yükselmesi cerrahinin başarısını değerlendirmek için birçok faktörlerden biri olarak kabul edilmelidir. Bu nedenle, işlemin sonucu GİB artışı, RGC soma ölüm ve akson kaybı dahil olmak üzere birçok parametrelere dayalı teraziye alınmalıdır. Burada açıklanan protokol çoğu microbeads başarılı sonuçlanır rağmenly açıda yerleşen, bu modelin bir potansiyel sınırlama ön kamarada yüzen kalır o boncuk kornea aracılığıyla canlı retina görüntüleme yanı sıra ışığın etkin geçişini gerektiren elektrofizyolojik veya davranışsal deneyleri etkileyebilir olmasıdır. Bu microbead tıkanıklığı modeli kullanan GİB artışı ve sonraki RGC dejenerasyon ölçüde işletilen fare [4] yaş ve genetik arka plan ile değişir olduğunda diğer önemli yönü dikkate. Bu nedenle, GİB yükselmesinin kapsamı ve RGC dejenerasyon zaman çizelgesi her spesifik transgenik fare hattı ve / veya yaş aralığı için tespit edilmesi gerekir. Bu modelin bir özelliği microbead enjeksiyonu ve önemli RGC ölümünden sonra ilk üç haftasında RGC ölüm kademeli kaybı yüksek GİB&#39;in sonuçları işlemden sonra 3 hafta tespit olmasıdır. Bu nedenle, bu model, bu D meydana erken ve / veya hafif değişiklikleri inceleme sağlarhastalığı bulunanlarda, önceki RGC soma ve akson kaybı ile belirgin. RGC ölüm önemli bir artış oküler hipertansiyon indüksiyondan sonra 3 ve 6 hafta arasında gözlenmemiştir. Başarılı rağmen 3 ila 6 hafta arasında% 25 ve bu zaman noktalarında GİB yükselmesi sürekli - Aslında, RGC soma ve akson kaybı ~ 22 sabit kaldı. Sürekli IOP daha uzun süre C57BL Diğer fare suşlarının göre RGC hasara karşı daha dayanıklı olduğu görülmektedir / 6 fareleri, oluşacak ek RGC kaybı için gerekli olabilir. 5 ek değişiklikler burada sunulan protokol, boncuk büyüklüğü ayarlama dahil olmak üzere ve ilave enjeksiyonlar, daha sonra zaman noktalarında RGC kaybı incelemek için gerekli olabilir. Bu nedenle, bizim protokol insan glokom başlangıcı ve erken ilerlemesi alakalı mütevazı RGC nörodejenerasyon ile ilişkili erken patofizyolojik değişikliklere odaklanan çalışmalar için idealdir.

Glokom 2020 1 dünya çapında tahminen 80 milyon insanı etkileyecek ilerici ve geri dönüşümsüz kör bir durumdur. Glokomlu hastalarda, görme kaybı, retina ganglion hücrelerinin (RGCs), görsel bilgi iletimi çıktı nöronları seçici ölüm nedeni beyne retina. Glokom en yaygın yüksek göziçi basıncı (GİB) olduğu birçok risk faktörüne sahip bir yaşa bağlı nörodejeneratif bir hastalıktır. glokom ve güncel tedaviler göz tansiyonu yönetmeye odaklanmak Gerçekten de, GİB&#39;in tek değiştirilebilir risk faktörüdür. Ancak, çoklu genetik hücresel ve çevresel faktörler bu hastalığın başlamasını ve ilerlemesini etkiler. Bu nedenle, nihai olarak, nöronal ölüme katkıda bulunan çeşitli mekanizmaların anlaşılması glokom için etkili bir tedavi geliştirmek için gereklidir. glokom Hayvan modelleri hastalık patofizyolojisini incelemek ve tespit ve test için gerekli olanumut verici terapötik. genetik olarak kodlanmış floresan izleyiciler taşıyan koşullu nakavt suşları ve fareler de dahil olmak üzere transgenik fare hatları artan kullanılabilirliği uyarılabilir fare glokom modelleri için ihtiyaç sürüklemiştir. Glokomun Birkaç kemirgen modelleri (2,3 gözden) yıl boyunca geliştirilmiştir. Bu modellerin birçoğunda, glokom IOP yükselme ile sonuçlanır, sulu humor dinamiklerini bozarak indüklenir. Mikro-ya da diğer maddeler, sulu bir boşalmayı bloke gözün ön odasına enjekte edildiği oklüzyon modelleri, kısmen IOP 4-14 geliştirmek için göreceli kolaylığı için son yıllarda popülerlik kazanmıştır. İlk primatlarda 12&#39;de gerçekleştirilen glokom microbead tıkanması modeli, tavşan 8 ve sıçanlar 4,9,11, farelerde 5,6,10 kullanım için adapte edilmiştir. Bu çalışmalarda, polistiren mikro-boncuk intrakameral enjeksiyon tek başına veyaviskoelastik malzeme ile birlikte, daha sonra RGC ölüm 6,10 giden IOP yükselmesi ile sonuçlanmıştır. Ancak, iğne iridokorneal açıdan mikro-boncuk göz ve çıkartılmasından çekilir geri akış işlemi sırasında ortaya çıkan ortak bir sorun vardır. Bu dezavantajları minimuma indirmek için, mıknatısların göz 4,9 arasında iridokorneal açısına manyetik mikro-boncuklar çekmek için kullanılmaktadır. Burada açıklanan protokol manyetik mikro-boncuklar ve fare göz için uyarlanmış bir el mıknatıs (Şekil 1) kullanan önceki çalışmalar 9,10 göre modifiye edilmiş bir işlemdir. Birkaç önemli değişiklikler farelerde etkili ve tekrarlanabilir GİB artışına sağlamak için protokol girmiştir. İlk olarak, mikro-enjeksiyon bir yontulmuş konik bir özenle hazırlanmış cam microneedle kullanılarak yapılır. Mikroiğnenin Elde edilen düzgün yüzeyler yanı sıra keskin ucu az hasar sağlaro korneayı deler olarak verdirdiler. Microneedle ucu böylece bu iris ve lens olarak zarar yakındaki yapıların riskini azaltır, ön kamara girdiğinde bu cam Mikroiğnenin kullanımı da artan kontrolü ile sonuçlanır. Buna ek olarak, küçük enjeksiyon lezyon kornea kendini onarım kolaylaştırır ve istenmeyen yaralanma ile ilgili etkilerini azaltır. İkinci olarak, manyetik mikro-enjeksiyon ve bir el mıknatıs kullanımı hassas kontrol küçük fare gözünde iridokorneal açıya boncuk çekmek için izin verir. Bu microbead boyutu hazırlanan microneedle açılış tıkayabilir ve önemlisi, bir kez enjekte etmedi çünkü çapı 4,5 mikron kullanılan manyetik mikroboncuklarının, bu microbeads etkin bir sulu mizah drenaj engelledi. Bu yaklaşım, sadece enjekte mikro-geri akışını azaltır, aynı zamanda mikro-maksimum sayısı etkin aköz hümör boşalmayı bloke hedef alan birikir sağlar. furthermore bu strateji aynı zamanda, arka kamara iris ve mercek ve önlenmesi kanalı gibi diğer yapılar ile temas kaçınarak ön kamara yüzen tanelerin sayısını azaltır. Toplu olarak, bu değişiklikler, mikroboncuk enjeksiyon cerrahi göreli kolaylıkla ve farelerde oküler hipertansiyon yüksek, yeniden üretilebilir, etkili ve sürekli bir indüksiyon ile sonuçlanan bir zamanında gerçekleştirilir olduğundan emin olun.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Puller</td>
			<td>Narishige</td>
			<td>PC-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thin Wall Glass Capillaries</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>TW150F-4</td>
			<td>Capillary has an outer diameter of 1.5 mm and inner diameter of 1.12 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereo Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>MZ9.5</td>
			<td>Zoom factor range of 2.5 to 6.0. Microscope used for needle-making and the micro-bead injection surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Footswitch</td>
			<td>Linemaster</td>
			<td>T-91-SE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Blade</td>
			<td>Feather</td>
			<td>No. 11</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microelectrode Beveler</td>
			<td>Science Products</td>
			<td>BV-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aerosol Duster</td>
			<td>Fisher</td>
			<td>23-022-523</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP359-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris Base</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP152-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-812</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dynabeads M-450 Epoxy</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>14011</td>
			<td>Magnetic beads are 4.5 &#181;m in diameter. Stock solution is at a concentration of 4 x 108 beads/mL. Store at 4&#176;C.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mini-Tube Rotators</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>05-450-127</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 Handheld Magnets</td>
			<td>Geomag</td>
			<td></td>
			<td>0.45 Tesla. Magnet used for microbead preparation and microbead injection surgery.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>25 mL serological pipet</td>
			<td>Costar</td>
			<td>4489</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipet</td>
			<td>Drummond</td>
			<td>4-000-101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biological Containment Hood</td>
			<td>Biostad</td>
			<td>377355</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balanced salt solution (BSS)</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>0065-0800-25</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P1000 Micropipet</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microtube 1.5 mL</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>72.690</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P200 Micropipet</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.2 mL PCR tube</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>72737.002</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Controlled substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylazine</td>
			<td>Bayer Healthcare</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acepromazine</td>
			<td>Vetoquinol</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>U-100 Insulin Syringe</td>
			<td>Becton Dickinson and Company</td>
			<td>329461</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Balance</td>
			<td>Ohaus</td>
			<td>CS 200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Buprenorphine</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Controlled substance</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tropicamide ophthalmic solution</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>0998-0355-15</td>
			<td>1% Mydriacyl</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manual Microsyringe Pump with Digital Display</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>DMP</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manual Micromanipulator</td>
			<td>World Precision Instruments</td>
			<td>M3301R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platform</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>14-673-52</td>
			<td>8 x 8 inch</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Absorbent swabs</td>
			<td>Kettenbach</td>
			<td>30601</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P20 Micropipet</td>
			<td>Gilson</td>
			<td>F123600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plastic forcep</td>
			<td>Euroband</td>
			<td>1001</td>
			<td>Ensure forcep is plastic and has a flat surface to avoid damaging the eye</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluoroquinolone ophthalmic solution</td>
			<td>Alcon</td>
			<td></td>
			<td>Vigamox</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heating pad</td>
			<td>Sunbeam</td>
			<td>E12107-834</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tonometer</td>
			<td>iCare</td>
			<td>TV02</td>
			<td>TONOLAB rebound tonometer&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde, Para</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>T353-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dissection tools</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small brush</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glutaraldehyde solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G7651</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Cacodylate, tryhydrate</td>
			<td>Canemco and Marivec</td>
			<td>124-65-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brn-3a antibody (C-20)</td>
			<td>Santa Cruz Biotechnology</td>
			<td>sc-31984</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue Culture Plate, 48 well</td>
			<td>Falcon</td>
			<td>353078</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triton X-100</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>BP151-500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey Serum</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D9663</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Donkey anti-Goat IgG (H+L) Secondary Antibody, Alexa Fluor 594 conjugate</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>A-11058</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Aluminum foil</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microscope Slides</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-550-15</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slow fade Gold antifade reagent</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>S36936</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover Glass</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>12-548-5E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Osmium tetroxide 2% aqueous solution</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>3294949</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embed-812</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>14900</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dodecenyl succinic anhydride</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>13710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nadic methyl anhydride</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>19000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMP-30</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>13600</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Propylene oxide</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>110205-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding mold-Dykstra</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>70907</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Porter-Blum ultra-microtome</td>
			<td>Sorvall</td>
			<td>MT-2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Toluidine blue O (Certified Biological Stain)</td>
			<td>Fisher-Scientific</td>
			<td>T161-25</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a magnetic microbead occlusion model to induce ocular hypertension-dependent glaucoma in mice

glokom kemirgen modellerinde kullanılması bu çok faktörlü nörodejeneratif hastalıkların patofizyolojisinin altında yatan moleküler mekanizmaları anlamak için gerekli olmuştur. çok sayıda transgenik fare hatları ile birlikte, oküler hipertansiyon uyanlabilir murin modellerinde artan bir ilgi vardır. Burada, bir yontulmuş konik olarak değiştirilmiş bir mikroiğne ile gözün ön odasına manyetik mikro boncuklar enjeksiyonu göre glokom bir tıkayıcı bir model sunmaktadır. Manyetik mikroboncuklarının ön kamaraya sulu mizah drenaj engellemek için bir el mıknatıs kullanarak iridokorneal açısına çekti. İnsan glokom hastalarında gözlendiği gibi sonradan, retina ganglion hücrelerinin kaybına yol açar göz içi basıncı, sürekli bir yükselme sulu dinamikleri sonuçlarında Bu bozulma. Bu yazıda sunulan microbead oklüzyon modeli aynı zamanda son derece diğer uyarılabilir glokomun modelleri ve basit karşılaştırıldığındaetkili ve yeniden üretilebilir. Önemlisi, burada sunulan değişiklikler genellikle tıkanıklığı modellerinde ortaya çıkan yaygın sorunları en aza indirmek. İlk olarak, kesik cam Mikroiğnenin kullanımı mikro-boncuk geri akışını engeller ve en az bir hasar, böylece yaralanmaya bağlı etkilerinin azaltılması, enjeksiyon sırasında korneaya oluşmasını temin eder. İkinci olarak, manyetik mikro boncuklar kullanımı etkili diğer yapılarla temas kaçınarak ön kamara yüzen boncuklar (örneğin., Iris, lens) sayısının azaltılması, iridokorneal açısı en boncuklar çekmek yeteneği sağlamaktadır. etkin bir şekilde, manyetik mikro-boncuklar yönlendirmek ve mikroiğne geri çekildiğinde göz mikro-küçük geri akış yok olduğundan emin olmak için küçük bir fare göz tutarken Son olarak, bir el mıknatıs kullanılması esneklik sağlar. Özetle, burada sunulan microbead tıkanıklığı fare modeli Glau başlangıcı ve ilerlemesi sırasında meydana gelen nörodejeneratif değişiklikleri incelemek için güçlü bir araştırmacı bir araçtırkoma.

Bu protokol açıklanan erişkin farelerin ön kamaraya manyetik mikro-enjeksiyon GİB sağlam ve tekrarlanabilir yükselmesi ile sonuçlanmıştır. *** P &lt;0.001; Bir hafta işleminden sonra, GİB&#39;in Student t-testi (hipertansif gözünde 19, 10 ± 0.6 mm Hg (ortalama ± SEM), kontralateral gözlerde ortalama başlangıç ​​GİB den ± 0.5 mm Hg artış n = 12, Tablo 1, Şekil 2). IOP bundan sonra kararlı ve en az 6 hafta, bu çalışmada incelenen en uzun zaman noktası için 20 mm Hg ortalama yüksek kaldı. ameliyat sonrası 2, 3 ve 6 hafta sonra mikroboncuk enjekte gözlerde ortalama zirve IOP 25 mm Hg. Tedavi edilen farelerin büyük çoğunluğu bu nedenle bu protokol mikro boncuklar bir ikinci enjeksiyon gerektirmez, sürekli yüksek göz içi basıncı geliştirdi. Bu modelde RGC kaybı zaman seyrini değerlendirmek için, RGC soma vardıİlk Brn3a, bir RGC özgü işaret 17 ile immün sayılabilir. Brn3a-pozitif hücre sayısı, oküler hipertansiyon indüksiyonundan sonra, 1, 2, 3 ve 6 hafta sonra, düz monte retina üzerinde nicelleştirilmiştir. Önemli bir GİB yükselmesi gibi erken 1 olarak hafta microbead enjeksiyonundan sonra tespit edildi rağmen, RGC soma anlamlı kaybı prosedürü (Şekil 3) ilk 2 hafta içinde gözlenmiştir. Önemli RGC ölümü (% 22), ancak, (ortalama 2,430 ± 67 RGCs / mm2 ortalama ± SEM, n = 12) 3 hafta açıktı ve 6 hafta (2.350 ± 74 RGCs / mm2, n = 10) sonrası un çalışan farelerin (3141 ± 49 RGCs / mm2, n = 23) (ANOVA, p &lt;0.001) bozulmamış kontrol gözlere kıyasla oküler hipertansiyon indüksiyon,. RGC akson disfonksiyon ve dejenerasyon glokom bir kardinal özelliğidir. Bu nedenle, aksonal kayıp mikroboncuk enjeksiyonla sonra 3. ve 6. haftalarda incelenmiştirtoluidin mavisi (Şekil 4) ile boyanmış, optik sinir kesitleri RGC akson ölçümü. RGC akson önemli bir zararı (% 25) 3 hafta gözlenmiştir (ortalama ± SEM 28.401 ± 702 aksonlar / sinir, s = 5) ve 6 hafta (29.426 ± 948 aksonlar / sinir, n = 6) mikro-enjekte edildikten sonra (39467 ± 137 akson / sinir n = 4) un çalışan gözlerden sağlam optik sinirlere oranla (ANOVA, p &lt;0.001). Topluca, bu veriler fare ön kamaraya manyetik mikro-enjeksiyon tekrarlanabilir yol açar ve RGC soma ve akson dejenerasyonu ile sonuçlanır GİB yükselmesi sürekli olduğunu göstermektedir. <table><tbody><tr><td colspan="2"> OHT ameliyat sonrası zaman </td><td> N </td><td colspan="3"> GİB&#39;in (mmHg) ortalama ± SEM </td><td colspan="2"> Pik GİB (mmHg) </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td> Karşı </td><td> glakom </td><td> difference </td><td> Karşı </td><td> glakom </td></tr><tr><td colspan="2"> 1 hafta </td><td> 12 </td><td> 10 ± 0.4 </td><td> 19 ± 0.5 </td><td> 9 ± 0.6 </td><td> 12 ± 0.4 </td><td> 22 ± 0.6 </td></tr><tr><td colspan="2"> 2 hafta </td><td> 13 </td><td> 11 ± 0.5 </td><td> 20 ± 0.8 </td><td> 9 ± 0.5 </td><td> 12 ± 0.9 </td><td> 25 ± 0.7 </td></tr><tr><td colspan="2"> 3 hafta </td><td> 10 </td><td> 11 ± 0.8 </td><td> 20 ± 0.7 </td><td> 10 ± 0.9 </td><td> 13 ± 0.2 </td><td> 25 ± 0.9 </td></tr><tr><td colspan="2"> 6 hafta </td><td> 12 </td><td> 12 ± 0.5 </td><td> 20 ± 0.6 </td><td> 9 ± 0.7 </td><td> 13 ± 0.5 </td><td> 24 ± 0.6 </td></tr></tbody></table> Fare Manyetik microbead Occlusi Göz İçi Basıncı Tablo 1. YükseklikModeli. uyanık Kadınlarda C57 BL / 6 fareler, GİB&#39;in kalibre toparlanma tonometresi kullanılarak ölçüldü. Kumandalı gözleri işlemden sonra en az altı hafta boyunca yüksek kaldı bir hafta sonrası cerrahi tespit GİB artış göstermiştir. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/53731/53731fig1.jpg" /> Glokom Fare Manyetik microbead Oklüzyon Modeli ilgilendim adımlar Şekil 1. İş Akışı. Öncesinde, sırasında gerçekleştirilen tüm prosedürlerin adım adım anahat ve ameliyat sonrası. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53731/53731fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/53731/53731fig2.jpg" /> Fare Manyetik microbead Oklüzyon Modeli Göz İçi Basıncı Şekil 2. artış. Uyanık olarakdişi C57 BL / 6 fareleri, IOP kalibre edilmiş TONOMETRENİN kullanılarak ölçülmüştür. microbead enjekte gözlerin GİB belirgin bir hafta sonrası cerrahi (ANOVA, p &lt;0.001) yüksek bulundu. IOP önemli ölçüde en az 6 hafta (ANOVA, p &lt;0.001) enjekte edilmiş farelerin diğer göz göreli yüksek kaldı. (Bozulmamış: n = 12; 1 hafta: n = 12, 2 hafta: n = 13, 3 hafta: n = 10, 6 hafta: n = 12). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53731/53731fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3," src="/files/ftp_upload/53731/53731fig3.jpg" /> Murin Manyetik microbead occlusion modelde. RGCs Şekil 3. retinal ganglion hücresi ölümü başlatmak için microbead enjeksiyon sonrası 3. ve 6. haftalarda tam kontrol retinaları (A) ve glokomatöz retinalarında Brn3a kullanarak düz monte retina immün ile görselleştirilmiştir(OHT) (B, C). Ölçek çubukları: 20 mikron. (D) Kantitatif analiz prosedürü kontrol gözlere kıyasla sonra microbead enjeksiyon 3 ve 6. haftalarda önemli RGC soma kaybına yol açtığını doğruladı. bozulmamış, glokom dışı C57 / BL6 farelerinde RGC soma yoğunluğu referans (beyaz barlar,% 100 hayatta kalma) olarak gösterilmiştir. 2 gün boyunca, n = 6: n = 6, 3 hafta: n = 12, 6 hafta, n = 10, ANOVA, *** p &lt;;: Değerler SEM (Bozulmamış ± ortalamasıdır 1 hafta, n = 23 0.001). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53731/53731fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 4," src="/files/ftp_upload/53731/53731fig4.jpg" /> Fare Manyetik microbead Oklüzyon Modeli. RGC akson Şekil 4. Aksonal Dejenerasyon toluidin mavisi ile optik sinir kesitleri boyanması ile görüntülendimikroboncuk enjeksiyon sonrası 3. ve 6. haftalarda tam kontrol (A) ve glokomatöz retinaları (OHT) (B, C) ​​ikna etmek için. Ölçek çubukları: 10 mikron. (D) Kantitatif analiz prosedürü kontrol gözlere kıyasla sonra microbead enjeksiyon 3 ve 6. haftalarda önemli RGC akson kaybı ile sonuçlanan doğruladı. bozulmamış, glokom dışı C57 / BL6 farelerinde RGC akson yoğunluğu referans (beyaz barlar,% 100 hayatta kalma) olarak gösterilmiştir. Değerler ortalama ± SEM olarak ifade edilir (Bozulmamış: n = 4; 3 hafta: n = 5, 6 hafta: n = 6, ANOVA, *** p &lt;0.001). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53731/53731fig4large.jpg" target="_blank">Tıklayınız Bu rakamın büyük bir versiyonunu görmek için .</a>

Watch this Scientific Journal Video about A Magnetic Microbead Occlusion Model to Induce Ocular Hypertension-Dependent Glaucoma in Mice at JoVE.com

A Magnetic Microbead Occlusion Model to Induce Ocular Hypertension-Dependent Glaucoma in Mice

Bir Manyetik microbead Oklüzyon Modeli Farelerde Glokom Oküler Hipertansiyon Bağımlı tetikleyebilecek

Burada, glokom görüldüğü gibi, retinal ganglion hücre kaybına neden murin göz oküler hipertansiyon uyarılması için bir protokol mevcut. Manyetik mikroboncuklarının ön kamaraya enjekte ve sulu mizah çıkışı engellemek için bir mıknatıs kullanarak iridokorneal açı çekti.

The use of rodent models of glaucoma has been essential to understand the molecular mechanisms that underlie the pathophysiology of this multifactorial ...

a-magnetic-microbead-occlusion-model-to-induce-ocular-hypertension

Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

19.2K Görüntüleme.  CRCHUM and University of Montreal.  Burada, glokom görüldüğü gibi, retinal ganglion hücre kaybına neden murin göz oküler hipertansiyon uyarılması için bir protokol mevcut. Manyetik mikroboncuklarının ön kamaraya enjekte ve sulu mizah çıkışı engellemek için bir mıknatıs kullanarak iridokorneal açı çekti. 

Video: A Magnetic Microbead Occlusion Model to Induce Ocular Hypertension-Dependent Glaucoma in Mice

Modeling Stroke in Mice - Middle Cerebral Artery Occlusion with the Filament Model

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are very limited. To meet the need for novel therapeutic approaches, experimental stroke research frequently employs rodent models of focal cerebral ischaemia. Most researchers use permanent or transient occlusion of the middle cerebral artery (MCA) in mice or rats.
Proximal occlusion of the middle cerebral artery (MCA) via the intraluminal suture technique (so called filament or suture model) is probably the most frequently used model in experimental stroke research. The intraluminal MCAO model offers the advantage of inducing reproducible transient or permanent ischaemia of the MCA territory in a relatively non-invasive manner. Intraluminal approaches interrupt the blood flow of the entire territory of this artery. Filament occlusion thus arrests flow proximal to the lenticulo-striate arteries, which supply the basal ganglia. Filament occlusion of the MCA results in reproducible lesions in the cortex and striatum and can be either permanent or transient. In contrast, models inducing distal (to the branching of the lenticulo-striate arteries) MCA occlusion typically spare the striatum and primarily involve the neocortex. In addition these models do require craniectomy. In the model demonstrated in this article, a silicon coated filament is introduced into the common carotid artery and advanced along the internal carotid artery into the Circle of Willis, where it blocks the origin of the middle cerebral artery. In patients, occlusions of the middle cerebral artery are among the most common causes of ischaemic stroke. Since varying ischemic intervals can be chosen freely in this model depending on the time point of reperfusion, ischaemic lesions with varying degrees of severity can be produced. Reperfusion by removal of the occluding filament at least partially models the restoration of blood flow after spontaneous or therapeutic (tPA) lysis of a thromboembolic clot in humans.
In this video we will present the basic technique as well as the major pitfalls and confounders which may limit the predictive value of this model.

Filamentous occlusion of the Middle cerebral artery is a common model for studying ischemic stroke in mice.

Fare Modelleme İnme - Filament Model Orta Serebral Arter Tıkanıklığı

Stroke is among the most frequent causes of death and adult disability, especially in highly developed countries. However, treatment options to date are ...

Tıp

Pressure Controlled Ventilation to Induce Acute Lung Injury in Mice

Murine models are extensively used to investigate acute injuries of different organs systems (1-34). Acute lung injury (ALI), which occurs with prolonged mechanical ventilation, contributes to morbidity and mortality of critical illness, and studies on novel genetic or pharmacological targets are areas of intense investigation (1-3, 5, 8, 26, 30, 33-36). ALI is defined by the acute onset of the disease, which leads to non-cardiac pulmonary edema and subsequent impairment of pulmonary gas exchange (36). We have developed a murine model of ALI by using a pressure-controlled ventilation to induce ventilator-induced lung injury (2). For this purpose, C57BL/6 mice are anesthetized and a tracheotomy is performed followed by induction of ALI via mechanical ventilation. Mice are ventilated in a pressure-controlled setting with an inspiratory peak pressure of 45 mbar over 1 - 3 hours. As outcome parameters, pulmonary edema (wet-to-dry ratio), bronchoalveolar fluid albumin content, bronchoalveolar fluid and pulmonary tissue myeloperoxidase content and pulmonary gas exchange are assessed (2). Using this technique we could show that it sufficiently induces acute lung inflammation and can distinguish between different treatment groups or genotypes (1-3, 5). Therefore this technique may be helpful for researchers who pursue molecular mechanisms involved in ALI using a genetic approach in mice with gene-targeted deletion.

A murine model for ventilator induced lung injury is an important tool to study an acute lung injury in vivo. Here, we report an easy applicable in situ model for acute lung injury using high-pressure mechanical ventilation to induce acute failure of the lung.

Farelerde Akut Akciğer Hasarı tetikleyebilecek Basınç Kontrollü Havalandırma

Murine models are extensively used to investigate acute injuries of different organs systems (1-34). Acute lung injury (ALI), which occurs with prolonged ...

Use of a Hanging Weight System for Coronary Artery Occlusion in Mice

Murine studies of acute injury are an area of intense investigation, as knockout mice for different genes are becoming increasingly available 1-38. Cardioprotection by ischemic preconditioning (IP) remains an area of intense investigation. To further elucidate its molecular basis, the use of knockout mouse studies is particularly important 7, 14, 30, 39. Despite the fact that previous studies have already successfully performed cardiac ischemia and reperfusion in mice, this model is technically very challenging. Particularly, visual identification of the coronary artery, placement of the suture around the vessel and coronary occlusion by tying off the vessel with a supported knot is technically difficult. In addition, re-opening the knot for intermittent reperfusion of the coronary artery during IP without causing surgical trauma adds additional challenge. Moreover, if the knot is not tied down strong enough, inadvertent reperfusion due to imperfect occlusion of the coronary may affect the results. In fact, this can easily occur due to the movement of the beating heart.
Based on potential problems associated with using a knotted coronary occlusion system, we adopted a previously published model of chronic cardiomyopathy based on a hanging weight system for intermittent coronary artery occlusion during IP 39. In fact, coronary artery occlusion can thus be achieved without having to occlude the coronary by a knot. Moreover, reperfusion of the vessel can be easily achieved by supporting the hanging weights which are in a remote localization from cardiac tissues.
We tested this system systematically, including variation of ischemia and reperfusion times, preconditioning regiments, body temperature and genetic backgrounds39. In addition to infarct staining, we tested cardiac troponin I (cTnI)
as a marker of myocardial infarction in this model. In fact, plasma levels of cTnI correlated with infarct sizes (R2=0.8). Finally, we could show in several studies that this technique yields highly reproducible infarct sizes during murine IP and myocardial infarction6, 8, 30, 40, 41. Therefore, this technique may be helpful for researchers who pursue molecular mechanisms involved in cardioprotection by IP using a genetic approach in mice with targeted gene deletion. Further studies on cardiac IP using transgenic mice may consider this technique.

A murine model for myocardial ischemia and ischemic preconditioning is an important tool study cardioprotective mechanisms in vivo. Here, we report an easy applicable in situ model for cardiac IP using a hanging-weight system for coronary artery occlusion.

Asma Ağırlık Sistemi Fare Koroner Arter Tıkanıklığı için kullanın

Murine studies of acute injury are an area of intense investigation, as knockout mice for different genes are becoming increasingly available 1-38. ...

The CYP2D6 Animal Model: How to Induce Autoimmune Hepatitis in Mice

Autoimmune hepatitis is a rare but life threatening autoimmune disease of the liver of unknown etiology1,2. In the past many attempts have been made to generate an animal model that reflects the characteristics of the human disease 3-5. However, in various models the induction of disease was rather complex and often hepatitis was only transient3-5. Therefore, we have developed a straightforward mouse model that uses the major human autoantigen in type 2 autoimmune hepatitis (AIH-2), namely hCYP2D6, as a trigger6. Type 1 liver-kidney microsomal antibodies (LKM-1) antibodies recognizing hCYP2D6 are the hallmark of AIH-27,8. Delivery of hCYP2D6 into wildtype FVB or C57BL/6 mice was by an Adenovirus construct (Ad-2D6) that ensures a direct delivery of the triggering antigen to the liver. Thus, the ensuing local inflammation generates a fertile field9 for the subsequent development of autoimmunity. A combination of intravenous and intraperitoneal injection of Ad-2D6 is the most effective route to induce a long-lasting autoimmune damage to the liver (section 1). Here we provide a detailed protocol on how autoimmune liver disease is induced in the CYP2D6 model and how the different aspects of liver damage can be assessed. First, the serum levels of markers indicating hepatocyte destruction, such as aminotransferases, as well as the titers of hCYP2D6 antibodies are determined by sampling blood retroorbitaly (section 2). Second, the hCYP2D6-specific T cell response is characterized by collecting lymphocytes from the spleen and the liver. In order to obtain pure liver lymphocytes, the livers are perfused by PBS via the portal vein (section 3), digested in collagen and purified over a Percoll gradient (section 4). The frequency of hCYP2D6-specific T cells is analyzed by stimulation with hCYP2D6 peptides and identification of IFN&gamma;-producing cells by flow cytometry (section 5). Third, cellular infiltration and fibrosis is determined by immunohistochemistry of liver sections (section 6). Such analysis regimen has to be conducted at several times after initiation of the disease in order to prove the chronic nature of the model. The magnitude of the immune response characterized by the frequency and activity of hCYP2D6-specific T and/or B cells and the degree of the liver damage and fibrosis have to be assessed for a subsequent evaluation of possible treatments to prevent, delay or abrogate the autodestructive process of the liver.

Infection of mice with an Adenovirus expressing the major human autoantigen cytochrome P450 2D6 (hCYP2D6) recognized by sera of patients suffering from type 2 autoimmune hepatitis results in a persistent form of autoimmune-mediated liver disease characterized by extensive hepatitis, fibrosis and generation of a CYP2D6-specific immune response.

CYP2D6 Hayvan Modeli:, Fare Otoimmün Hepatit indükleyin nasıl

Autoimmune hepatitis is a rare but life threatening autoimmune disease of the liver of unknown etiology1,2. In the past many attempts have been made to ...

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We have established bilateral common carotid artery occlusion as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance to transient focal cerebral ischemia in C57Bl6/J mice. In this video, we will demonstrate the methodology used for this study.

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning (PC) &#x2013; a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a subsequent damaging ischemic insult. We established bilateral common carotid artery occlusion (BCCAO) as a preconditioning stimulus to induce early ischemic tolerance (IT) to transient focal cerebral ischemia (induced by middle cerebral artery occlusion, MCAO) in C57Bl6/J mice.

Odak Serebral İskemi Erken İskemik Tolerans tetikleyebilecek bir Yeterli Önkoşullama Uyarıcı olarak bilateral Ortak Karotis Arter Tıkanıklığı

There is accumulating evidence, that ischemic preconditioning - a non-damaging ischemic challenge to the brain - confers a transient protection to a ...

Reproducable Paraplegia by Thoracic Aortic Occlusion in a Murine Model of Spinal Cord Ischemia-reperfusion

Background 
Lower extremity paralysis continues to complicate aortic interventions. The lack of understanding of the underlying pathology has hindered advancements to decrease the occurrence this injury.&#160;The current model demonstrates reproducible lower&#160;extremity paralysis following thoracic aortic occlusion.
Methods 
Adult male C57BL6 mice were anesthetized with isoflurane. Through a cervicosternal incision the aorta was exposed. The descending thoracic aorta and left subclavian arteries were identified without entrance into pleural space. Skeletonization of these arteries was followed by immediate closure (Sham) or occlusion for 4 min (moderate ischemia) or 8 min (prolonged ischemia). The sternotomy and skin were closed and the mouse was transferred to warming bed for recovery.&#160; Following recovery, functional analysis was obtained at 12 hr intervals until 48 hr.
Results 
Mice that underwent sham surgery showed no observable hind&#160;limb deficit. Mice subjected to moderate ischemia for 4 min had minimal functional deficit at 12 hr followed by progression to complete paralysis at 48 hr. Mice subjected to prolonged ischemia had an immediate paralysis with no observable hind-limb movement at any point in the postoperative period. There was no observed intraoperative or post&#160;operative mortality.
Conclusion 
Reproducible lower extremity paralysis whether immediate or delayed can be achieved in a murine model. Additionally, by using a median sternotomy and careful dissection, high survival rates, and reproducibility can be achieved.

The lack of mechanistic understanding of spinal cord ischemia-reperfusion injury has hindered further adjuncts to prevent paraplegia following high risk aortic operations. Thus, the development of animal models is imperative. This manuscript demonstrates reproducible lower extremity paralysis following thoracic aortic occlusion in a murine model.

Spinal Kord İskemi-reperfüzyon bir Mürin Modelinde Torasik Aort Tıkanıklığı tarafından tekrarlanabilir Parapleji

Background
Lower extremity paralysis continues to complicate aortic interventions. The lack of understanding of the underlying pathology has hindered ...

Experimental Glaucoma Induced by Ocular Injection of Magnetic Microspheres

Progress in understanding the pathophysiology, and providing novel treatments for glaucoma is dependent on good animal models of the disease. We present here a protocol for elevating intraocular pressure (IOP) in the rat, by injecting magnetic microspheres into the anterior chamber of the eye. The use of magnetic particles allows the user to manipulate the beads into the iridocorneal angle, thus providing a very effective blockade of fluid outflow from the trabecular meshwork. This leads to long-lasting IOP rises, and eventually neuronal death in the ganglion cell layer (GCL) as well as optic nerve pathology, as seen in patients with the disease. This method is simple to perform, as it does not require machinery, specialist surgical skills, or many hours of practice to perfect. Furthermore, the pressure elevations are very robust, and reinjection of the magnetic microspheres is not usually required unlike in some other models using plastic beads. Additionally, we believe this method is suitable for adaptation for the mouse eye.

We present a method for inducing elevated intraocular pressure (IOP), by injecting magnetic microspheres into the rat eye, to model glaucoma. This leads to strong pressure rises, and extensive neuronal death. This protocol is easy to perform, does not require repeat injections, and produces stable long-lasting IOP rises.

Deneysel Glokom Manyetik Mikrokürelerin Göz Enjeksiyon Bağlı

Progress in understanding the pathophysiology, and providing novel treatments for glaucoma is dependent on good animal models of the disease. We present ...

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Glaucoma is a disease of the central nervous system affecting retinal ganglion cells (RGCs). RGC axons making up the optic nerve carry visual input to the brain for visual perception. Damage to RGCs and their axons leads to vision loss and/or blindness. Although the specific cause of glaucoma is unknown, the primary risk factor for the disease is an elevated intraocular pressure. Glaucoma-inducing procedures in animal models are a valuable tool to researchers studying the mechanism of RGC death. Such information can lead to the development of effective neuroprotective treatments that could aid in the prevention of vision loss. The protocol in this paper describes a method of inducing glaucoma - like conditions in an in vivo rat model where 50 &#181;l of 2 M hypertonic saline is injected into the episcleral venous plexus. Blanching of the vessels indicates successful injection. This procedure causes loss of RGCs to simulate glaucoma. One month following injection, animals are sacrificed and eyes are removed. Next, the cornea, lens, and vitreous are removed to make an eyecup. The retina is then peeled from the back of the eye and pinned onto sylgard dishes using cactus needles. At this point, neurons in the retina can be stained for analysis. Results from this lab show that approximately 25% of RGCs are lost within one month of the procedure when compared to internal controls. This procedure allows for quantitative analysis of retinal ganglion cell death in an in vivo rat glaucoma model.

Glaucoma-inducing Procedure in an In Vivo Rat Model and Whole-mount Retina Preparation

Glaucoma is characterized by damage to retinal ganglion cells. Inducing glaucoma in animal models can provide insight into the study of this disease. Here, we outline a procedure that induces loss of RGCs in an in vivo rat model and demonstrates the preparation of whole-mount retinas for analysis.

Glokom uyaran bir de Prosedürü<em&gt; İn Vivo</em&gt; Rat Modeli ve Tüm montaj Retina Hazırlık

Glaucoma is a disease of the central nervous system affecting retinal ganglion cells (RGCs). RGC axons making up the optic nerve carry visual input to the ...

Surgical Approach for Middle Cerebral Artery Occlusion and Reperfusion Induced Stroke in Mice

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ischemic in origin and occur in the territory of the middle cerebral artery (MCA). Currently the only Food and Drug Administration (FDA) approved drug for the treatment of this devastating disease is tissue plasminogen activator (tPA). However, tPA has a small therapeutic window for administration (3 - 6 hr), and is only effective in 4% of the patients who actually receive it. Current research focuses on understanding the pathophysiology of stroke in order to find potential therapeutic targets. Thus, reliable models are crucial, and the MCA occlusion (MCAo) model (also termed the intraluminal filament or suture model) is deemed to be the most clinically relevant surgical model of ischemic stroke, and is fairly non-invasive and easily reproducible. Typically the MCAo model is used with rodents, especially with mice due to all the genetic variations available for this species. Here we describe (and present in the video) how to successfully perform the MCAo model (with reperfusion) in mice to generate reliable and reproducible data.

In order to understand the pathophysiology of stroke, it is important to use reliable models. This paper will describe one of the most frequently used stroke models in mice, termed the middle cerebral artery occlusion (MCAo) model (also termed the intraluminal filament or suture model) with reperfusion.

Farelerde Orta Serebral Arter Tıkanıklığı ve Reperfüzyon Kaynaklı İnme Cerrahi Yaklaşım

Stroke is a leading cause of death worldwide and continues to be one of the major causes of long-term adult disabilities. About 87% of strokes are ...

A Closed-chest Model to Induce Transverse Aortic Constriction in Mice

Research on cardiac hypertrophy and heart failure is frequently based on pressure overload mouse models induced by TAC. The standard procedure is to perform a partial thoracotomy to visualize the transverse aortic arch. However, the surgical trauma caused by the thoracotomy in open-chest models changes the respiratory physiology as the ribs are dissected and left unattached after chest closure. To prevent this, we established a minimally invasive, closed chest approach via lateral thoracotomy. Herein we approach the aortic arch via the 2nd intercostal space without entering the chest cavities, leaving the mouse with a less traumatic injury to recover from. We perform this operation using standard laboratory settings for open chest TAC procedures with equal survival rates. Apart from maintaining physiological breathing patterns due to the closed chest approach, the mice seem to benefit by showing rapid recovery, as the less invasive technique appears to facilitate a fast healing process and to reduce immune response after trauma.

Here, we present a protocol of Transverse Aortic constriction (TAC) via a lateral thoracotomy. This technique is a minimally invasive, closed chest surgical procedure aiming to simulate pressure overload and heart failure in mice utilizing standard TAC laboratory settings.

Transvers aort daralma farelerde ikna etmek için kapalı-göğüs manken

Research on cardiac hypertrophy and heart failure is frequently based on pressure overload mouse models induced by TAC. The standard procedure is to ...