Glokom geri dönüşümsüz körlük önde gelen nedenidir, retinal ganglion hücre ölümü ve opto-nörodejenerasyon ile karakterize. Göz içi basıncının yükselmesi, ayrıca oküler hipertansiyon denir, glokom için en tanınmış risk faktörüdür. Fareler gibi deneysel hayvanlarda basit ama etkili bir oküler hipertansiyon modeli nörodejenerasyon glaucometers araştırmak ve nörokoruma için tedavi test etmek için önemlidir.
Bu nedenle, sonuçlarla, insan hastalarda gözlenen sekonder glokomu yakından taklit eden bir fare oküler hipertansiyon modeli geliştiriyoruz. Bu model sadakatle pupilar engelleme için silikon yağı kaynaklı neden ikincil glokom çoğaltmak. İşlem basit IOP yüksekliği istikrarlı, ve göz hipertansiyonu ile ilişkili nörodejenerasyon fare gözlerinde şiddetli ise, daha da önemlisi, silikon yağı kolayca fare gözlerinden kaldırılabilir çünkü oküler hipertansiyon geri dönüşümlüdür.
Prosedürü gösteren Dr.Fang Fang, benim laboratuvarımdan ameliyat sonrası bir adam. Başlamak için, bir pipet çekmece ile bir cam kılcal çekerek intracameral silikon yağ enjeksiyonu için bir cam mikropipet olun. Mikropipetin ucundaki bir açıklığı kesin ve 35 ila 40 derecelik bir bükülme yapmak için bir mikro-öğütücü beveling makinesi kullanarak ucu keskinleştirin.
Lehçe bevel kenarları ve tüm enkaz kaldırmak için su ile yıkayın. Kullanmadan önce mikropipetok. Kornea girişi için paracentesis iğne hazırlamak için, bir yem kilidi üzerinde beş mililitrelik şırınga bir 32 gauge iğne takın ve daha bant ile güvenli.
İğne ucubük, yüz-up, 30 derece. Silikon yağ enjektörü hazırlamak için, 10 mililitrelik bir şırınga üzerine 18 gauge iğneyi takın ve sabitlayın. Sonra bir ucunda 18 gauge iğne ile plastik bir tüp takın ve diğer ucundan gerektiği gibi silikon yağı ile doldurun.
Dokuz ila 10 haftalık C57 siyah 6J fare anestezi sonra, bıyık veya kuyruk hareket eksikliği ile parmak çimdik yanıt eksikliği olup olmadığını kontrol edin. Fareyi cerrahi platformda yanal bir konuma yerleştirin. İşlem sırasında hassasiyetini azaltmak için enjeksiyondan önce korneaya %5 proparacaine hidroklorür damlatın.
Limbus yaklaşık 5 milimetre süper temporal kadranda bir giriş kesi yapmak için 32 gauge paracentesis iğne kullanın. Ön odaya piercing önce yaklaşık 3 milimetre kornea katmanları ile Tünel, lens veya iris dokunmamaya dikkat ediyor. Tünel den ön odasından sulu mizah yaklaşık bir ila iki mikrolitre serbest bırakmak için yavaş yavaş iğne çekin ve göz içi basıncını azaltmak için yaklaşık sekiz dakika bekleyin.
Basıncı belirlemek için kontralateral kontrol gözünü ölçün. Silikon yağı ile önceden yüklenmiş cam mikropipeti kornea tünelinden ön odaya yerleştirin ve dik lik iris yüzeyine bakacak şekilde. Yağ damlacığı yaklaşık 2,3 ila 2,4 milimetre çapında, iris yüzeyinin çoğunu kaplayana kadar ön hazneye silikon yağı enjekte etmek için şırınga pistonlu yavaş yavaş itin.
Mikropipeti yavaşça çekmeden önce 10 saniye daha ön haznede bırakın. Silikon yağ sızıntısını en aza indirmek için üst göz kapağını kornea kesisini kapatmak için yavaşça itin. Sonra da göz yüzeyine antibiyotik merhem uygulayın.
Anestezi tamamen iyileşene kadar fareyi ısıtma yastığında tutun. Ön hazneden silikon yağı çıkarmak için, fareyi anestezik ve sonra anestezik gücü ve bıyık veya kuyruk hareket eksikliği belirlemek için parmak çimdik yanıt eksikliği olup olmadığını kontrol edin. Fareyi bir ameliyat platformuna yerleştirin ve bantla yanal pozisyonda sabitleyin.
Hassasiyetini azaltmak için korneaya %5 proparacaine hidroklorür damlatın. Önceden yapılmış 32 gauge paracentesis iğne kullanarak, silikon yağ damlacık kenarında yaklaşık iki ve beş arasında korneanın temporal çeyreğinde iki kesiler yapmak. Maksimum hızda bir kornea kesisi ile sulama çözeltisine bağlı 33 gauge sulama iğnesi takın.
Başka bir 33 gauge drenaj iğnesi diğer kornea kesi ile bir piston olmadan şırınga bağlı eklemek silikon yağ damlacık sulama çözeltisi ile sulama sırasında ön oda çıkmak için izin vermek. Drenaj iğnesini sonra sulama iğnesini geri çekin. Normal derinliğini korumak ve kornea kesisini kapatmak için basın ön odasına bir hava kabarcığı enjekte etmek için bir Hamilton şırınga bağlı bir cam mikropipet kullanın.
Her iki göze de antibiyotik merhem uygulayın ve fareyi anesteziden tamamen iyileşene kadar ısıtma kurtarma yastığında tutun. Fareyi bir indüksiyon odasına yerleştirin. El yazmasında açıklandığı gibi anestezi ve işlem boyunca yapay gözyaşı uygulayarak korneasını nemli tutun.
Göz bebeğinin tam olarak dilate izin vermek için yaklaşık 15 dakika bekleyin. Ürün talimatlarına göre bir tonometre kullanarak her iki gözün IOP'sini ölçün. Fare gözünün yanına tonometre getirin, yaklaşık üç ila dört milimetre de fare kornea için sonda ucundan mesafetin.
Bir okuma oluşturmak ve ortalama IOP'yi elde etmek için her gözden makine tarafından oluşturulan üç okuma elde etmek için ölçüm düğmesine altı kez basın. Optik sinir yarı ince kesitleri sayma ve silikon yağ enjeksiyonundan sekiz hafta sonra kurban hayvanlar üzerinde hayatta kalan aksonlar sayısallaştırma tüm montaj retina retinal ganglia hücre immünohistokimya gerçekleştirin. Fare gözlerinin 1.6 milimetreden daha büyük silikon yağ damlacıkları ile göz içi basıncı, tek bir silikon yağı enjeksiyonundan sonra sekiz hafta boyunca haftada bir kez ölçüldü.
Yağı alan gözün basıncı yüksek kaldı, çoğunlukla etkili göz bebeği engelleme gösteren kontralateral kontrol gözünün basıncı iki katına. Farelerin başka bir grubunda, silikon yağı enjeksiyondan iki hafta sonra ön hazneden temizlenir. Korneanın iyileşmesi için bir hafta bekledikten sonra göz içi basıncı kontrol gözüyle aynı şekilde normale döndü.
Retinagangli ler üzerinde silikon yağ kaynaklı oküler hipotansiyonun etkilerini belirlemek için, retinal tüm bağlar periferik bölgelerde kalan somata silikon yağ enjeksiyonu sonrası dramatik retina ganglion hücre ölümü gösteren RBPMS boyama ile nicel olarak ölçüldü. Optik sinir yarı ince kesitlerinde kalan aksonlar enjeksiyondan sekiz hafta sonra PBD boyama ile ölçüldü. Silikon yağa bağlı oküler hipertansiyonda büyük bir akson dejenerasyonu vardı.
Hayvanlar retinadaki değişimi belirlemek için SLOOCT ile görüntülenebilir. Hayvanların görsel işlevi desen ERG ve OKR tarafından da titretilebilir. Bu oküler hipertansiyon modeli yüksek IOP indüklenen glokomcular nörodejenerasyon araştırma kolaylaştıracaktır.
Ayrıca preklinik umut verici nöroprotektif tedavileri test etmek için kullanılabilir.
