2008 ve 2010 (BVS), BONFOR / GEROK Burs O-137,0015 (BVS), BONFOR / GEROK Burs O-137,0019 (FT), Deutsche Forschungsgemeinschaft / DFG (BVS) STA 1135 / 2-1, Çince Rüdiger Vakfı hibe tarafından desteklenen Burs Konseyi sayılı 2008627116 (ZL) ve Geuder AG, Heidelberg (Şek. 2) tarafından sınırsız hibe. H. Skottman laboratuarında üyeleri, Tampere, Finlandiya Üniversitesi minnetle Şekil 2&#39;de görülen RPE türetilmiş hes sağlamak için kabul edilmiştir.

Oftalmik araştırmalarda hayvan elleçleme Etik: Biz Tıp Fakültesi, Bonn Üniversitesi Etik komitesi onayı alınan ve Vizyon Araştırma ve Oftalmoloji Derneği (ARVO) tarafından belirtilen kurallara uymak. Ayrıca, tüm işlemler Kuzey Ren-Vestfalya eyaleti düzenleyici otoriteler tarafından kabul edildi. Yiyecek ve su ücretsiz erişim ile standartlaştırılmış bireysel kafeslerde 20 ° C, normal gün ışığına maruz kalma, - Hayvanlar 18 arasındaki sıcaklıklarda ile klimalı bir odada özel bir tesiste kapalı gerçekleştirildi. Not: hayvanların ameliyat yakınlık sağlamak için, bir hayvan sağlığı puanı levha aşağıdaki kesin hayvan dışlama kriterleri içeren izlenir: kabulde ağırlığına oranla% 20 kilo kaybı; hayvan belirgin siyanoz; hayvan titreten, kramplar vardır ya da koordinasyon içinde hareket edemez; . ataksi / parestezi, örneğin, felç; ilgisizlik; Aşırı oto yaralama (cilt yaraları, kesik uzuvlar). &lt;/ P&gt; 1. Alet Sterilizasyon <ol><li> ultrasonik banyoda tekrar kullanılabilir aletleri yerleştirin. </li><li> 500 ml saf su ve alet dezenfektan 2 ml ekleyin. </li><li> 15 dakika boyunca süpürme fonksiyonunu kullanarak temiz araçlar. </li><li> ultrasonik banyo aletlerini çıkarın ve 5 dakika için damıtılmış su ile iyice yıkayın. </li><li> otoklavda aletleri takın ve (20 dakika süreyle 121 ºC altında araçların sterilizasyon) standart programını kullanın. </li></ol> 2. Enstrüman Hazırlık <ol><li> Kurmak ve cerrahi önlük, maske ve saç kapağı giyen, kapalı bir odada çalışarak, steril bir alan sağlamak. Steril cerrahi eldiven giymeden önce elleri dezenfekte ediniz. Detaylı ele 28 bkz. </li><li> steril bir örtü üzerine steril aletleri yerleştirin. </li><li> Enjeksiyon için 27 G iğne, denge tuz solüsyonu (BSS) 10 ml şırınga bağlı 40 mg triamsinolon ile dolu 1 ml şırınga ve bir 5 ml şırıngaya o yerleştirinasmak f yağlayıcı. </li><li> 3-0 ipek, 7-0 vicryl, göz sopa (sklera / konjunktival kanamayı durdurmak için) bir örtü üzerinde, kasırga gazlı bez sünger, yara kapama şeritleri (vitrektomi ucu boru sabitleşmek için), ve avize endoillumination elyaf teli yerleştirin. </li><li> 25 G avize endoilluminator paketini ve steril teknikler kullanılarak ışık makineye bağlanmak (adım 2.1). Steril teknikler kullanılarak vitrektomi makineye yüksek hızda vitrektörle ve Venturi kaset de dahil olmak üzere vitrektomi setini bağlayın (adım 2.1). </li><li> 500 ml BSS şişe açın ve üreticinin talimatlarına göre Venturi kaset çözüm bağlayın. </li></ol> Hayvan Anestezi ve Konumlandırma 3. hazırlanması <ol><li> Doğru ilaç dozu sağlamak için hayvan tartılır. </li><li> 27 G iğne başlama 0.35 mg / kg ketamin ve 0.25 mg / kg medetomidini içeren 1 şırınga kullanarak kas içi (IM) anestezi hazırlayın. karıştırmak için şırıngayı çevirin. </li><li> 1/3 t 2 şırınga hazırlayınO operasyon sırasında anestezi korumak için dozlar. </li><li> % 5 glukoz çözeltisi ve bir intravenöz infüzyon alternatif olarak deri altına enjeksiyon için 18 G iğne 20 ml ihtiva eden şırınga hazırlayın. </li><li> midriatik gözün 3 x 1 damla dilatasyon için vitrektomi öncesinde düşer verin. </li><li> battaniye ile kapak tavşan, anestezi enjeksiyonu öncesi sakin 30 saniye süreyle enjeksiyon yeri çevresinde arka bacak (gluteal kas) ve masaj enjekte etmek. Not: IM anestezi ilk atış yaklaşık 1 sürer - 2 saat. Tavşan büyüklüğü, ilaç toleransı, yağ tabakası, stres ve vücut sıcaklığına bağlı olarak. 45 dk - kayboluyor anestezi ilk işareti sonraki enjeksiyonlar son yaklaşık 30 (cerrah tarafından izlenmesi gerekir) bir nistagmus olduğunu. </li><li> hipnoz, hiporefleksi, analjezi ve hayvanın kas gevşemesi doğrulayarak, uygun anestezi onaylayın. </li><li> Tavşan bilinçsiz bir kez, boyun derisi kat subkutan enjeksiyon (Pt. 3.3) verin. </li><li> methylc eklemeellulose yağlayıcı her 5 - ameliyat gözde 10 dakika, sigara ameliyat gözde yağ ve teyp kapakları ekleyin. </li><li> Böyle bir optimal pozisyonda bir pamuk battaniye gibi bir örtü ile bol dökümlü cerrahi masaya kaplı tavşan yerleştirin (biraz battaniye bir kalıp içinden yükselmiş burun, bu nedenle göz yüzeyi ile aynı düzeye) Cerrahi mikroskop altında. objektif mikroskop dik göz hizalayın. </li><li> Rektal termometre (Normotermi 39 ± 1 ° C) 29 kullanılarak düzgün vücut çekirdek sıcaklığını sağlamak. </li><li> makas (bıçak bazı merhem) kullanılarak kesilmiş kirpik postoperatif enfeksiyonları azaltmak için. </li><li> topikal 1 dakika süreyle 0.1 g / ml Povidon-İyot 3 damla ve steril BSS ile durulayın - 2 kullanılarak göz dezenfekte edin. </li><li> göz için ortada önceden kesilmiş açılması ile steril örtü ile göz kapağı ve sonra (yapışkan) cerrahi kesi asmak 12 x 17 cm ile kaplayın. </li></ol> 4. Vitrektomi <ol><li> 3-0 ipek inv kullanarak Proptose ve güvenli bir gözerted kumpas ve bir konjonktiva kesi yaparlar. <ol><li> kan damarlarının yeterince limbus yakındır ama bir vannas makas (~ 1 mm mesafe) ile konjonktivayı İnsizyon. </li><li> &quot;T-cut&quot; oluşturarak konjonktivayı teşrih. 7 mm - İlk Limbus ve daha sonra yaklaşık 6 için &quot;T&quot; şeklinde dikey konjonktivayı kesilirken makas paralel kesi büyütmek. Dikkatle açıkça konjonktivayı ayırın. </li></ol></li><li> dikkatle optik sinir doğru yönde bıçak keskin ucu takarak sağ göz / OD (sol göz / OS üzerinde 04:00) 8 saat 23 G mikrovitreoretinal (MVR) bıçak kullanarak bir sklerotomi gerçekleştirin. Yavaşça aynı yönde bıçak geri çekin ve sklerotomi büyütme kaçının. </li><li> Yerleştirin ve dikiş özel yan port infüzyon kanülü 27 24 mmHg 7-0 ipek sütür ve set göz içi basıncı (göz içi basıncı) kullanarak. </li><li> OD (10 o &#39;2 saat 25 G düz kafa trokar ile sklerotomi gerçekleştirin; 4.2 adıma benzer OS üzerinde saat). </li><li> Yapışkan bant ile sabitlemek ve yaklaşık% 30 ışık kaynağı açmak, düz kafa trokar içine 25 G avize ışığı yerleştirin. </li><li> Gerekirse, daha iyi göz içi görüntülenmesi için bir 20. neşter kullanılarak ödemli kornea epiteli kaldırın. </li><li> OD 10 saat (OS 02:00), (ön) yer düğüm atarak olmadan sklerotomili etrafında 7-0 sütür şekilli U-ve eklemek vitrektomi kesici ucu da 4.2 adıma benzer bir sklerotomi gerçekleştirin. </li><li> Optik disk ve max küçük parçalar halinde vitreus mizah keserek yüksek hızda vitrektörle kullanarak fibrae medullares üzerinde devam, sonra giriş liman çevresinde vitrektomi 30 başlatın. 2000 - max aspire / dak 3.000 keser. Vitrektomi makinesinin belirtilen parametre kurulumu kullanarak 200 mmHg (Tablo 1) </li><li> arka kutup a üzerinde yüksek hızda vitrektörle tutarak retinadan vitreus mizah ayırarak Arka vitreus dekolmanı (PVD) gerçekleştirinnd (nazikçe mümkünse) disk 31 sadece max aspire ederken üstün. kesmeden 200 mmHg. </li><li> Intravitreal vitrektomi sırasında arka kutup ve midperiphery üzerinde yüzen vitreus kaldırılmasını görselleştirmek ve (toplam) yakınındaki kolaylaştırmak için yaklaşık 50 ul (20 mg) triamsinolon veya seyreltilmiş floresein (yaklaşık 0.1 mg / ml) enjekte edilir. mercek altında kapısı üzerinde kaçının. gaz tamponadı isteniyorsa bir (yetenekli) asistan tarafından periferik vitrözü tıraş girinti tavsiye edilir. </li><li> BSS infüzyon çözeltisi içine 0.001 mg / ml nihai konsantrasyona kadar 20 birim / ml heparin ve 0.5 mg epinefrin ekleme paralel veya adım 4.10 sonra. Not: heparin / epinefrin içi enjekte edilmez gibi etkileri infüzyon akış hızına bağlı olarak geciktirilir. </li></ol> 5. Yükleme Shooter Not: Burada açıklanan çalışma Helsinki Bildirgesi ilkelerine girmez; insan hasta dahil etmedi. Burada, staard RPE hücreleri cenin insan gözü, kültürlenmiş ve kaplanmamış 10-mikron kalınlığında polyester farklılaştırılmıştır (PET) daha önce yayınlanmış bir protokol 14&#39;e göre ekler izole edilmiştir. insan fetal malzeme ile çalışmak için bir izin Bonn Üniversitesi etik komitesi elde edilmiştir. Seçenek olarak ise, HES-RPE da Vaajasaari ve arkadaşları tarafından tarif edilen tekniğe uygun kültürlenmiştir Skottman laboratuar (. PREP Eser), sevk edilen 32.; Bu hücreler için bir izin R. Koch Enstitüsü&#39;nün, Berlin, Almanya elde edilmiştir. <ol><li> önce göz dereceli BSS ile implant 3x hazırlanmasına hücre kültürü durulayın. </li><li> 10 ml göz dereceli BSS ile standart hücre kültürü çanak (100 x 20 mm) doldurun. </li><li> BSS içine hücre kültürü insert ekleme ve ışık mikroskobu altında çanak merkezi. </li><li> Düz, fasulye şeklinde substratı elde etmek için bir künt, oval, ısmarlama bir iğne ile 2.4 x 1.1 mm implant dışarı Punchİki uzun kenarları ve iki yuvarlak kenarlı. </li><li> Yavaşça BSS dolu ısmarlama yükleme istasyonu (Şekil 1) içine implantı dışarı floş BSS ile ikinci bağlantı noktası üzerinden iğne sel. </li><li> İsteğe bağlı olarak, sadece, bir üçüncü kenar elde etmek için, implant (&lt;0.5 mm), bir yuvarlak ucu kesin. </li><li> İmplant tek tabakalı hücre taşıyıcı üzerinde yukarı yönlü olmasını sağlayarak doğru yönde olduğundan emin olun. dikkatlice iki neşter kullanmak konumlandırma değiştirmek için. </li><li> implantın tüm ucunun içinde emniyete kadar iğne tutucu kullanarak atıcı aracı haline yavaşça ve tamamen implant itin. piston geri kalmalıdır. </li><li> implantasyon anına kadar BSS altında yükleme istasyonu &quot;yüklü&quot; tetikçi ucu tutun. </li></ol> 6. İmplantasyon <ol><li> Bir gaz geçirmez şırınga bağlı uzatılabilen 41 G subretinal enjeksiyon iğnesi ile nöral retina Yaklaşımı (tüm hava kabarcıkları tahliye edildi emin olunborudan!). </li><li> subretinally (kalsiyum ve magnezyum / CM ile) BSS enjekte edilir ve böylece yaklaşık 2 kabarcık retina dekolmanı (BRD) oluşturmak - 3 disk çapına (GG). Göz başına iki BRD güvenle kaldırılabilir. </li><li> Dikey 23 G VR-makas ile 1,5 mm retinotomi büyütün. subretinal boşluk şimdi implantasyon veya daha fazla manevra için erişilebilir. </li><li> 20 G yaklaşımına bir 1.4 mm kesi bıçakla sklerotomi (tam) uzatın. </li><li> Yüklenen atıcı pürüzsüz, henüz rahat bir geçiş sağlamak için gerektiği gibi büyütmek, 20 G atıcı kukla kullanarak sklerotomili geçerek çalışıldı. </li><li> 24 mmHg ideal sklerotomili üzerinden yüklenen atıcı 27 geçirin. </li><li> kenar retinotomi Yaklaşım ve Epiretinal pozisyondan subretinally implantı çıkarmak. </li><li> makul uzakta retinotomi gelen retina- altında iyi konumlandırılmış olduğundan emin olmak için yarı kapalı 23 G makas, forseps veya 41 G iğne ile implantı ayarlayın. </li></ol> 7.İşlem biten <ol><li> 25 G avize ve infüzyon kanülü çıkarın. </li><li> Tüm sklerotomiden sütür. </li><li> (Önceki dikilmesi son sklerotomi kadar) 08:00 sklerotomili 25 ul (10 mg) triamsinolon enjekte edilir. </li><li> / Check palpasyonla göz içi basıncı ayarlayın ve gerekirse, 30 G iğne / şırıngayla BSS enjekte edilir. </li><li> 7-0 vikril ile sütür konjonktiva. </li><li> yavaş yavaş 3-0 ipek askı proptosing çıkarın (derin orbital venöz pleksus kaçının!). </li><li> Kapağın altında deksametazon / antibiyotik merhem ekleyin. </li><li> 1 saat pozisyon işletilen göz (hava / gaz) aşağı (gaz w / o) yukarı bakacak şekilde, ya da battaniye ile kaplı. </li><li> sternal recumbence korumak için yeterli bilinç kavuşur kadar sahipsiz hayvan bırakmayın. </li><li> Anestezi tamamen kaybolur önce tavşan taşımayın, bu verilen medetomidin&#39;den miktarına eşit ajan ters medetomidini enjekte edilerek hızlandırılabilir edilebilir. </li></ol> 8. Post-operatif Hayvan Bakımı <ol><li> tutmakUygun koşullarda (sıcaklık, ışık, gıda, su, uzay, vb.) ve özel bir tesiste yakın izlemedeki tavşan. </li><li> Bu hayvan iyi dinlenmiş, yani. Sağlayın, yiyecek veya su yoksunluk hiçbir genişletilmiş dönemleri. </li><li> Özellikle enjeksiyon sitelerinde, herhangi bir yara veya yaralanma olup olmadığına bakın. </li><li> enfeksiyonları önlemek için kuru yaralar tutun. enfeksiyon şüphesi olduğunda antibiyotik vermek: deksametazon 1 mg / g, neomisin sülfat 3,500 IU / g, 6,000 IU / g merhem göz yüzeyine 1 hafta postoperatif için günde iki kez uygulanan polimiksin B sülfat. </li><li> Daha iyi oküler yüzey yenilenme ve düşük ameliyat sonrası ağrı için günde iki kez sonraki 7 gün postoperatif için deksametazon / antibiyotik merhem ekleyin. </li><li> sistemik analjezikler Ver (Carprofene 4 mg / günde iki kez kg) ilk 48 saat boyunca. </li><li> sternal recumbence korumak için yeterli bilinci yerine kadar gözetimsiz bir hayvan bırakmayın. </li><li> bir hayvan iade etmeyin oTamamen iyileşene kadar diğer hayvanların şirkete ameliyat geçirmiş. </li><li> Gereksiz sıkıntı hayvanları maruz bırakmayın. </li></ol> 9. SLO / SD-OCT Rehberlik <ol><li> Hazırlayın ve 27 G iğne başlama 0.175 mg / kg ketamin ve 0.125 mg / kg medetomidini içeren 1 şırınga kullanarak kas içi (IM) anestezi enjekte. karıştırmak için şırıngayı çevirin. </li><li> net SD-OCT görüntüleme gözü nemlendiren ve korumak için en az her 5 dk bir yağlayıcı ekleyin isteğe bağlı özel bir kontakt lens kullanılabilir. </li><li> Gerekli pozisyonda hayvan stabilize başlığın bir çelik platformu takın. </li><li> prob dik gözü yerleştirerek, çelik platform üzerine tavşan yerleştirin. </li><li> trakea kaçınarak alt yanak kemiği (mandibula) den tavşan başını tutun. </li><li> kabaca 45º SD-OCT prob doğru ile tilt hayvanın kafası implant görüntüleme açısı optimize etmek. </li><li> 30 derecelik lens ve opt aşağıdaki parametreleri kullanınminimal- Ekim görüntüleme [HS]: Tek hat için 30 derece ayarları 100 (ortalama alma) ayarlanmış ART modu ve 15 set ART modu ile hacim taramaları için 20 x 20 derecelik ayarları ile tarar; yüksek çözünürlük modunda gerekli değildir. </li><li> İmplant (. Şekil 2A) odak düzlemi bulmak için SLO kızılötesi yansıma görüntüleme kullanın; Optimal odak implant kenarları 14 keskin olduğunda (tümü) ulaşılır. </li><li> Bittiğinde kapağın altında deksametazon 1 mg / g, neomisin sülfat 3,500 IU / g, polimiksin B sülfat 6,000 IU / g merhem ekleyin. </li></ol>

RB, BVS, ZL, NE ve Geuder AG atıcı bir Avrupa patent başvurusunda var. NB Geuder AG&#39;nin bir çalışanıdır. Bu video-makale için yayın ücretleri Geuder AG tarafından ödendi.

Bir tavşan modeli kullanarak, güvenli ve tekrarlanabilir bir yöntem özel tasarlanmış atıcı alet ile subretinal boşluğa hücre taşıyıcıları kültüre RPE transvitreal teslimat için sunulmuştur. o subretinal manevralar ile vitrektomi standart teknikler içerir olarak tanımlanan yöntem, kolay öğrenme için kısa / optimize cerrahi teknik sunmaktadır. Sonuç büyük ölçüde düşük GİB&#39;in de bleb retina dekolmanı (BRD) indükleyici retina ve kuruluk ile sklera hasar ve tavşan uygun konumlandırma önlenmesi, implantasyon sitesi üzerinden sıvı türbülansı önler temiz vitreoretinal arayüzü ve göz içi infüzyon ile kolaylaştırılır. Biz örneğin, implantasyon başarısı engelleyen, her zaman oluşabilecek çeşitli intra-operatif komplikasyonlar olarak, ancak dikkatli göz içi kanamalar, anestezi gibi implantasyon gibi hayati adımlar sırasında kapalı solmaya nedeniyle enstrüman manipülasyon ya da oküler hipotoni ile BRD çöken, rhipoksik beyin hasarı veya hipertermi neden uzun çalışma sırasında anestezi, düşük kan basıncı aşırı doz nedeniyle abbit ölüm. hızla ele ve cerrahi ekibin deneyimi artırarak çözümlenir henüz bu komplikasyonlar zamanla azalır. Bazı komplikasyonlar basit bir kaç ama önemli adımları izleyerek azaltılabilir. operasyon sırasında kornea, sklera ve konjonktiva zarar görmesini önlemek için, ve net bir göz içi medya, kurutulmuş olarak / kararmış sklera da oküler hipotoni ve neden yara ayrışmasına bir nedeni olabilir korumak için 10 dakika - yağlayıcı her 5 eklenmelidir / veya sklerotomisi gelen intraoperatif kaçak. Heparin özellikle subretinal implantasyon zorlu ve aynı zamanda epinefrin heparin 16 altında kanamayı azaltmak için ekleme yapan bir fibrin filmin oluşumunu önlemek için ilave edilmelidir. Çok uzun heparin / epinefrin maruz kalma süreleri (&gt; 1 saat) kornea EDE önlemek için kaçınılmalıdırendotel dekompanzasyon 33, hipertansif kriz veya intraoperatif ölüm ile ma. Titiz vitreus kaldırma retinal ve / veya koroid müfrezeleri önlemek için cihaz (giriş) bağlantı yapılmalıdır. Göziçi araçlar mercek dokunuş (iatrojenik katarakt oluşumuna yol açar) veya (giriş sitesi) retina zarar vermemek için arka kutupta doğru işaret edilmelidir. böylece kontrol edilemeyen retinotomi yırtılmasını ve brd çökmesini önlemek, implantasyon alanı çevresinde hava akımını azaltır gibi bir göz içi yan bağlantı infüzyon kanülü, kullanılmalıdır. BRD orta hatta indüksiyon (optik sinir dikey eksen) ya da optik medulla liflere yakın geniş iyatrojenik retina dekolmanı önlemek için kaçınılmalıdır. Son olarak, son ama en BRD bir retina hasarına yol açabilir aşırı akış oranları kullanılarak (örneğin., Germe) subretinal BSS enjeksiyon önlemek için, düşük GİB&#39;in de teşvik edilmelidir değil. hücre carrie gibi pek çok çalışma değişkenlerir varyantları, fetal, yetişkin ya da kök hücre elde edilen RPE hücre kaynakları, immünsüpresifler için seçimler, vb., 14,26,27,34 keşfedilebilir. Bu tür serum serbest RPE kültür yöntemleri, subretinal alanda xenoRPE karakterizasyonu, implant demirleme için konak RPE tabakasının 14 veya stratejilerin çıkarılması gibi daha da geliştirilmesi devam eden mevcut iş vardır. açıklanan teknikler chinchilla piç, Chinchilla piç / KBL melezleri, Yeni Zelanda Beyaz / Kırmızı Haç, Yeni Zelanda Beyaz (albino) ve Hollandalı kuşaklı olmak üzere 5 farklı tavşan suşları, kullanılan bugüne dek. erkek ve kadın tavşan Hem ameliyat edildi tavşanların en az 1,5 kg veya yaş 2 ay (türüne göre). 3 kg - En ameliyatları ağırlıkları 2,5 ile arası pigmentli tavşanlarda (chinchilla piç ya da chinchilla piç melezleri) idi. Biz çalışmak için fırsat oldu tavşan suşları Tüm bazı özellikleri var gibi görünüyor. exclus verilen2009-13 yılında Almanya&#39;da chinchilla piç suşu pigmentli tavşan ive kullanılabilirliği, biz bu hayvanların en deneyimi topladık. Ne yazık ki üreme durdurulan beri, artık mevcut değil, fakat ikincisi daha avantajlı kalın sklera ve daha büyük göz hacimleri hariç Yeni Zelanda Beyaz / Kırmızı Haç çok iyi karşılaştırır. Chinchilla pislik hibridleri önemli bir ameliyat fibrin oluşumunu başarılı ve retina altı manevralar sağlamak için, yukarıda belirtildiği gibi heparin / epinefrin kullanılmasını gerektirir. Bu protokol aynı zamanda, pigmente olmayan albino tavşanlarda (Yeni Zelanda Beyaz) yapılan, ancak özellikle brd oluşturma ve subretinal implantasyon azaltılmış kontrast takdir verilen daha zorlu olmuştur. Arka vitreus dekolmanı uyaran fizibilitesi bizim elimizde bağımlı tavşan gerginlik görünmüyordu. Transvitreal subretinal teslim çoğu comm olduğunu verilen büyük olasılıkla seçim gelecekte cerrahi strateji<html> güzergah üzerinde günümüzde klinik retina erişmek için. Taşıyıcı hayvan çalışmaları 11,15,23,35 destekler bir sonucu olarak birçok diğer gruplar kültür RPE için böyle teknikler sunduk. Aramant ve ark., 36 yerleştirir ziyade subretinal hedef siteye kendi hidrojel kapsüllü yumuşak implant iter bir enstrüman var. Thumann ark tasarımı. Akışkan enjeksiyonu 19 aracılığıyla kapalı yüzen taşıyıcı destekli grefti bültenleri bir oyuk spatula kullanmaktadır. Her ikisi de eski stratejiler bir epiretinally appositioned enstrümana göre bizim görüşümüze göre, komplikasyonlara daha eğilimli enstrüman, subretinal sokulmasını gerektirir. Montezuma ve ark., 22 domuzlar subretinal çip implantlar teslimi için subretinal yerleştirici enstrüman açıklanan ancak daha fazla çalışma bilgimiz bu yana yayınlanmıştır. Biz domuz bazı değişikliklerle açıklanan tekniği uzatmak mümkün olmuştur. jove_content &quot;&gt; Bizim tercih hücre taşıyıcıları 10 mikron kalınlığında polyester tereftalat (PET) membranlar bulunmaktadır. cerrahi açıdan bakıldığında, bu malzeme hücre kültürü deneyleri sırasında geniş yönlülük yanı sıra, olumlu sertlik ve elastikiyet parametreleri vardır. Biz genişletilmiş tetrafloroetilen ile benzer deneyimleri bulundu 37 veya nano membranlar PET, poli-laktik / capronolactic asit (PLCL) ya da poli electrospun (ePTFE) -. laktik-ko-glikolik asit (PLGA) gibi kompozit nano (PLGA ya da PET) ve ultra ince PET 26 zaman PET membranlar bizim metalik atıcı alet kullanılır, bunlar Ultrathin poliimid membranlar elimizde yukarıda özetlenen protokol ile subretinal alanda implante edilemedi 27. atıcı kendi ejeksiyon meydan elektrostatik yük, sergilemek için arada bir eğilim var mı ( lığa). Mermer ve ark. sistematik spontan reso okumuşiyatrojenik lokalize retina dekolmanı 38-41 subretinal sıvı rption. Hatta subretinal alanda manipülasyon sonrasında, bu olaysız ameliyatlarda ameliyat sonrası 4. günde tarafından emilir bulundu. Lazer retinopeksi retinotomi kenarlarını sabitlemek için yapılmaz. İnsan cerrahi ile karşılaştırıldığında beklenenin aksine zaman da, hava / gaz tampon gerekli değildir. Periferik vitreus titiz çıkarılması sağlanabilir sürece, özellikle üstün kadranda, bu aslında retinotomi kaynaklanan dev retinal yırtık neden olabilir. Sadece intraoperatif iatrojenik retina dekolmanı veya belirli bir implant pozisyonu güvenli gereken durumda kurtarma sonraki% 20 SF6 gaz tamponadı ile sıvı hava değişimini gerçekleştirmek için tavsiye edilir. Nöral retinanın mekanik kaynaklı ablasyon tavşanlarda 42,43 RPE ve fotoreseptör hasarına neden olabilir rağmen, kapsamı büyük ölçüde (hatta normal BSS ile) de değişirvb germe böylece uyarılan retina ile birlikte kullanıldığında GİB&#39;in, şırınga tipi, enjeksiyon hacmi, gibi faktörlere bekleyen. Ayrıca çoğu zaman önerilen Ca / Mg içermeyen BSS dekolmanı 42-44 kolaylaştırılmış test edilmiş, ancak bu (özellikle yüksek bir sıcaklıkta) ile ameliyat sırasında lensi kesafeti neden olur ve önemli ölçüde geciktirilir, hatta retina yeniden eki 27 bozar bulmuşlardır. 20 Yavaş subretinal enjeksiyonu - 100 ul şırınga ile düzenli BSS 30 ul hacminde bu nedenle tavsiye edilir; enjeksiyon iğne hareketleri etrafında retinotomi mühürler kadar az olması ve Bruch membranı zarar görmesini önlemek gerekir. Iatrojenik hasar Bazı RPE yara iyileşmesi tarafından çözüldü ve tekrar yerine yerleştirildikten sonra onl kalınlığı gözlenen göreli korunması, aynı zamanda başkaları 45 tarafından açıklandığı gibi RPE / fotoreseptör kompleksi, bu bozukluk tahammül düşündürmektedir olabilir. Hücre-temelli tedaviler veya retinal protez preklinik anima gerektirirl testi öncesinde düzenleyici onayına ve insan güvenliği çalışmalarının başlatılması. Eski ülkeden ülkeye değişir. Burada anlatılan tavşan modeli kurulması, hatta düzenleyici otoriteler tarafından tüm gereksinimleri yerine getirmek için bir maliyet-etkin ve daha az zorlayıcı bir platform olarak hizmet edebilir. Ayrıca, daha sonra nihai çok merkezli klinik çalışmalarda ya da yol boyunca tekniğin daha fazla ilerleme cerrahların eğitimi için hizmet edebilir.

o merkezi görme kaybına neden olur Yaşa bağlı makula dejenerasyonu (YBMD), endüstriyel gelişmiş ülkelerde 50 yaş ve üstü erişkinlerde görme bozukluğu en sık nedenidir. Bu hastaların yaklaşık olarak% 15&#39;i neovaskülarizasyon koroid kaynaklanan ve retina fonksiyonu 1 bozan olan hastalığın &quot;ıslak&quot; formu, muzdarip. Bu varyant anti-anjiyojenik ilaçlar 2 tekrarlanan içi vitreal enjeksiyonu ile oldukça etkili bir tedavi ile tedavi edilebilir. Ancak, hastaların (~% 85) büyük çoğunluğu retina pigment epiteli (RPE) kapsamında dışı mevduat (örneğin, druzen) ile karakterize edilir kuru halde, muzdarip. Bu birikintiler makulada retina atrofiye lider RPE fonksiyon bozukluğuna yol açmaktadır. herhangi bir iyileştirici tedavi seçeneklerinin eksikliği göz önüne alındığında, AMD birçok farklı iyileştirici tedavi yaklaşımları test ediliyor bir yoğun gelişmekte araştırma alanında, evrilmiştir. Cerrahi RPE yerine geçerbir çekici gelecek olasılık bu zayıflatıcı hastalık 3 yenmek için. Otolog subretinal RPE nakli makulada işlevsiz ya da kayıp RPE değiştirir ve onun fizyolojik fonksiyonu 4-9 geri potansiyeline sahiptir. Bu cerrahi teknik transplantasyon 10 bilim adamı RPE sınırsız hücre kaynağı vererek, insan embriyonik kök hücreleri (hESC) ve uyarılmış pluripotent kök hücreler (iPSC) den RPE farklılaşma protokolleri gelişmesiyle birlikte bir atılım vardı. RPE nakli artık kök hücre kaynaklı tedavi için cazip bir ilk giren insan bir uygulama olarak kabul edilmektedir. Göz in vivo izleme araçları 11-13 mükemmel cerrahi erişim ve sofistike sunmaktadır. RPE nakli için, tek yönlü bir minimal invaziv teslimat daha iyi RPE özellikleri ve nakli fonksiyonunu korumak için, alternatif olarak, suni taşıyıcı substr bir hücre süspansiyonu kullanılarak ileRPE değiştirilmesi için ates (iskeleleri) 4,14,15 kabul ediliyor. Büyük hayvan modelleri klinik öncesi doğrulama, henüz hayvan taşıma ve cerrahi teknik tarihine 16-23 eksik olduğu ile ilgili ayrıntılı bilgiler için gereklidir. O, güvenli kullanım sağlar tek tabakalı bütünlüğünü ve işlevselliğini korur gibi ve tersine 25 bazı kanıtlara rağmen, diğerleri 11,24, sert ama esnek taşıyıcı alt tabaka kullanımını önermektedir. Zamanla biz subretinal alan (SRS) içine hücre taşıyıcı desteklenen RPE nakli implantasyonu için birkaç özel tasarlanmış araçlar ve yardımcı teknikler test ettik. Biz implantasyon başarısı 14,26,27 değerlendirmek için spektral domain optik koherens tomografi (SLO / SD-OCT) ve histoloji ile birlikte in vivo tarayıcı lazer oftalmoskopide, intraoperatif video kayıtlarını kullanılmaktadır. Burada tavşanlarda subretinal RPE implantlar için mevcut tavsiye sağlamak,bu 150 prosedürlerde 5 farklı tavşan suşu, 7 hücre taşıyıcı malzemeler ve 4 RPE hücre kaynakları olarak test edildi.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>s30 ultrasonic cleaning unit</td>
			<td>Elmasonic</td>
			<td>100 4631</td>
			<td>2.75L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DE-23&#160; autoclave</td>
			<td>Systec</td>
			<td>C 2209</td>
			<td>23L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe&#160;</td>
			<td>BD&#160;</td>
			<td>300013 
			300995&#160; 
			301285 
			300294 
			300330&#160;</td>
			<td>1ml x3 
			2ml x3 
			5ml x1 
			10ml x1 
			20ml x1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle&#160;</td>
			<td>BD</td>
			<td>305196 
			305136</td>
			<td>18G x 1&#160; 
			27G x5</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Feather</td>
			<td>2975#20</td>
			<td>blade#20 x3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical drape</td>
			<td>HARTMANN 
			LOHMANN &#38; RAUSCHER</td>
			<td>277 502 
			25 440</td>
			<td>60x40 cm x2 
			12x17 cm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ocular sticks</td>
			<td>LOHMANN &#38; RAUSCHER</td>
			<td>16 516</td>
			<td>66x5 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Twister gauze sponges</td>
			<td>HARTMANN</td>
			<td>481 274</td>
			<td>x2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Closure strips</td>
			<td>HARTMANN</td>
			<td>540 686</td>
			<td>x4</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Opmi Visu CS Microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>N/a</td>
			<td>incl. fundus imaging system BIOM II</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chandelier endoillumination</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-S03503 + 
			G-S03504</td>
			<td>25G incl. trocar</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Light machine</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-26033</td>
			<td>Xenotron III</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrectomy machine</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-60000</td>
			<td>MegaTRON S4 S4/ HPS</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitrector</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-46301</td>
			<td>MACH2 vitreous cutter 23G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Venturi cassette&#160;</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-60700</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sideport-infusion cannula</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>custom&#160;</td>
			<td>1x23G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3-0 silk suture</td>
			<td>ETHICON</td>
			<td>V546G</td>
			<td>x1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Caliper</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-19135</td>
			<td>x2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vannas scissors</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-19777</td>
			<td>x1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sclerotomie blade</td>
			<td>Ziemer</td>
			<td>21-2301</td>
			<td>1x23G 
			1x20G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7-0 silk suture</td>
			<td>ETHICON</td>
			<td>EH6162H</td>
			<td>x1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle holder</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-32320</td>
			<td>x2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iris forceps</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-18910</td>
			<td>x1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Colibri forceps</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-18950</td>
			<td>x1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Extendible subretinal injection needle</td>
			<td>DORC</td>
			<td>1270.EXT</td>
			<td>41G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>VR scissor</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-36542</td>
			<td>25G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Grieshaber forceps holder</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>712.00.41</td>
			<td>23G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Curved scissor forceps tips</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>723.52</td>
			<td>23G</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Implant loading station</td>
			<td>Dow Corning</td>
			<td>3097358-1004</td>
			<td>SYLGARD 184 Silicone Elastomer Kit</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>blunt oval implant trephine&#160;</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>custom-made&#160;</td>
			<td>2.4 x 1.1 mm&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shooter dummy</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-32227</td>
			<td>x1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Shooter</td>
			<td>Geuder</td>
			<td>G-S03443</td>
			<td>x1</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Flute needle</td>
			<td>DORC</td>
			<td>1281.SD</td>
			<td>20G (Vacuum)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Manual microliter syringe</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>24535</td>
			<td>100&#181;l</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue culture plates</td>
			<td>Greiner bio-one</td>
			<td>&#160;664160</td>
			<td>100 x 20 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spectralis Multi-Modality 
			Imaging System</td>
			<td>Heidelberg 
			Engineering</td>
			<td>N/a</td>
			<td>Spectralis HRA 
			&#160;+ OCT</td>
		</tr>
		<tr>
			<td colspan="4">Drugs and solutions</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Name</td>
			<td>Company</td>
			<td>Active agent</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mucadont-IS</td>
			<td>Merz Hygiene</td>
			<td>virucidal instrument disinfectant&#160;</td>
			<td>2L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mucocit&#160;T</td>
			<td>Merz Hygiene</td>
			<td>Aldehyde-free instrument disinfectant</td>
			<td>2L</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ketamin 10%</td>
			<td>WDT</td>
			<td>Ketamine&#160;</td>
			<td>10ml (100mg/ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Domitor</td>
			<td>Orion Pharma</td>
			<td>Medetomidine hydrochloride</td>
			<td>10ml (1mg/ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Antisedan</td>
			<td>Orion Pharma</td>
			<td>Atipamezole hydrochloride</td>
			<td>10ml (5mg/ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neosynephrin POS 10%</td>
			<td>URSAPHARM</td>
			<td>Phenylephrine HCl</td>
			<td>10ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mydriacyl</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>Tropicamid</td>
			<td>10ml (5mg/ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methocel 2%</td>
			<td>Omni Vision</td>
			<td>hydroxypropyl methylcellulose</td>
			<td>10g</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PURI CLEAR</td>
			<td>ZEISS</td>
			<td>Balance salt solution (BSS)&#160;</td>
			<td>500ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose 5%&#160;&#160;</td>
			<td>B.Braun</td>
			<td>Glucose 5%&#160; solution</td>
			<td>100ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin-Natrium-25 000</td>
			<td>Ratiopharm</td>
			<td>Heparin</td>
			<td>5ml (2500 unit/ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Suprarenin</td>
			<td>SANOFI</td>
			<td>Epinephrine</td>
			<td>1ml (1mg/ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Triamcinolone</td>
			<td>University of Bonn pharmacy</td>
			<td>preservative-free Triamcinolone&#160;</td>
			<td>1ml (40mg/ml)&#160;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Isoptomax eye ointment</td>
			<td>Alcon</td>
			<td>dexamethasone 1 mg/g 
			neomycin sulfate 3,500 IU/g 
			polymyxin B sulfate 6,000 IU/g</td>
			<td>10ml</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Betaisodona</td>
			<td>Mundipharma</td>
			<td>Povidon-Iod</td>
			<td>30ml (1g/10ml)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Optive</td>
			<td>ALLERGAN</td>
			<td>sodium carboxymethylcellulose glycerol</td>
			<td>10ml</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a step by step protocol for subretinal surgery in rabbits

Yaşa bağlı makula dejenerasyonu (YBMD), retinitis pigmentosa ve diğer RPE bağlı hastalıklar endüstriyel gelişmiş ülkelerde erişkinlerde görme geri dönüşümsüz kaybı en sık nedenleridir. RPE transplantasyonu, işlevsiz RPE yerine fonksiyonunu ve böylece görme geri olabilir, umut verici bir tedavi olarak görünmektedir. Burada tavşanların subretinal alan (SRS) içine bir iskele üzerinde bir kültür RPE tek tabaka nakli için bir yöntem açıklanmaktadır. vitrektomi xenotransplants bir politetrafloroetilen (PTFE) kaplı piston ile 20 ayar metalik meme oluşan bir özel yapılmış tetikçi kullanarak SRS içine teslim edildikten sonra. Geçerli teknik 6 yılda 150&#39;den fazla tavşan ameliyatları gelişmiştir. Post-operatif takip gibi perfüzyon sabit histoloji ardından spektral domain optik koherens tomografi (SD-OCT) olarak in vivo görüntüleme non-invazif ve tekrarlayan kullanılarak elde edilebilir. the yöntemi kolay öğrenme ve yüksek başarı oranı için iyi tanımlanmış adımlar vardır. Tavşanlar klinik çeviri için klinik öncesi çalışmalarda yararlı bir büyük göz hayvan modeli olarak kabul edilir. Bu bağlamda tavşan diğer büyük göz hayvan modellerinde bir maliyet-etkin ve belki de uygun bir alternatiftir.

Retina çekirdek vitrektomi yapıldı zaman% 61 yaklaşık bir başarı oranı vardı ve arka vitreus dekolmanı oluşturuldu% 76 e yükseldi altında subretinal implantasyon için açıklanan yönteme sonuçları Tablo 2. Aşı gösterilmiştir. Bu rakamlar ya intraoperatif ya da ilk 3 ameliyat sonrası günlerde ölen hayvanların% 21 Takriben içerir. Bu teknik, aynı zamanda, bir gözü farklı retina alanlarda iki iskeleleri implante etmek için kullanılabilir. Tavşan Stanzel ve arkadaşları tarafından tarif edildiği gibi, in vivo olarak, postoperatif SD-OCT ve histolojik işlem kullanılarak takip yapıldı. 27 (Şekil 2). Şek. 2A komplikasyonsuz naklinden sonra polyester membran (PET) implante kültür RPE tarayıcı lazer oftalmoskop kızılötesi yansıma görüntü gösterir.implant çevresindeki halo atrofi fotoseptör karşılık gelir. Şek. Implanta komşu nöral retina normale yakın yansıma bantları gösterirken 2B, karşılık gelen SD-OCT, haber retina, özellikle dış nükleer tabaka (onl) incelme, implant üzeri SD-OCT üzerinde hiper yansıtıcı bant gösterir. Bu sonuçlar atravmatik teslimat göstermektedir. Şekil. 2C iyatrojenik manipülasyon sonucu olasıdır retinotomi çevresinde subretinal yara ve onl zayıflatır implantın Hematoxiline / Eosin (H / S) lekesini göstermektedir, PET üzerindeki bitişik yapılmamış düzensiz pigmentli katmanı. İmplant altında Bruch membranı da bitişik olduğu ortaya çıktı ve koryokapillaris bazı dağınık eritrositler içerir. Bu morfolojik sonucu SD-OCT karşılaştırılabilir ve atravmatik teslim tezini güçlendirmektedir. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/53927/53927fig1.jpg" /> incir<html> ure 1: PET Hücre Carrier İnsan iPSC-RPE kültüre ile yükleme Shooter. A) ölçüye göre iğne. B) hücre kültüründen kesilmiş Bean şeklinde implant kullanan bir implant yumrukluyor gösterir. Implantın C) Konumlandırma önce yükleme. D) implant atıcı Yükleniyor. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53927/53927fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için tıklayınız .</a> <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/53927/53927fig2.jpg" /> Şekil 2: Kültür İnsan embriyonik kök-RPE PET Hücre Taşıyıcı Tavşan Subretinal Uzayda 4 Hafta. A) yeşil çizgi Şek kesitini demarcates, SLO kızılötesi yansıma görüntüsünü gösterir. 2B. B) İlgili SD-OCT. C) H / E leke, ayrıntılar için metne ya da 26,27 bkz.ove.com/files/ftp_upload/53927/53927fig2large.jpg &quot;target =&quot; _ blank &quot;&gt; bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız. <table fo:keep-together.within-page="1"><colgroup><col /><col /></colgroup><tbody><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;width:97px;"> Parametre </td><td style="width:131px;"> Kullanılan ayarlar </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> vitrektomi </td><td> 6.000 kesim / dk </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> Vakum </td><td> 200 mmHg </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> Yükseliş zamanı </td><td> 1 saniye </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> Hava </td><td> 24 mmHg </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> Sulama </td><td> 24 cmH2O </td></tr><tr height="21"><td height="21" style="height:21px;"> Diathermy </td><td> % 30 </td></tr></tbody></table> Tablo 1: Vitrektomi Machine Parametre Ayarı. <table fo:keep-together.within-page="1"><tbody><tr><td> vitrektomi </td><td> implant </td><td> Tavşanlar ameliyat </td><td> başarılı implant </td><td> başarısız implant </td><td> Ölüm </td><td> Başarı oranı% </td></tr><tr><td> çekirdek vitrektomi </td><td> EVCİL HAYVAN </td><td> 30 </td><td> 19 </td><td> 4 </td><td> 7 </td><td> 63.33 </td></tr><tr><td></td><td> PET + RPE </td><td> 70 </td><td> 42 </td><td> 12 </td><td> 16 </td><td> 60 </td></tr><tr><td> PVD, / PPV w plazmin ± </td><td> EVCİL HAYVAN </td><td> 28 </td><td> 21 </td><td> 2 </td><td> 5 </td><td> 75 </td></tr><tr><td></td><td> PET + RPE </td><td> 22 </td><td> 17 </td><td> 2 </td><td> 3 </td><td> 77,27 </td></tr></tbody></table> Tablo 2: Yöntem ve İmplant Tipi dahil Son 150 Operasyon Özeti.

Watch this Scientific Journal Video about A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits at JoVE.com

A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits

Retina pigment epiteli (RPE) yedek stratejileri ve gen temelli tedavi birkaç retinal dejeneratif koşulları için kabul edilir. Klinik çeviri için, büyük göz hayvan modelleri hastalarda uygulanabilir cerrahi teknikleri incelemek gerekmektedir. Burada çok yönlü ve maliyet-etkin bir RPE transplantasyon, yönelikse subretinal cerrahi için bir tavşan modeli sunuyoruz.

Tavşanlarda Subretinal Cerrahi Adım Protokolle Bir Adım

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in ...

a-step-by-step-protocol-for-subretinal-surgery-in-rabbits

Research

JoVE Journal

Medicine

15.3K Görüntüleme.  University of Bonn.  Retina pigment epiteli (RPE) yedek stratejileri ve gen temelli tedavi birkaç retinal dejeneratif koşulları için kabul edilir. Klinik çeviri için, büyük göz hayvan modelleri hastalarda uygulanabilir cerrahi teknikleri incelemek gerekmektedir. Burada çok yönlü ve maliyet-etkin bir RPE transplantasyon, yönelikse subretinal cerrahi için bir tavşan modeli sunuyoruz. 

Video: A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits

Detection and Genogrouping of Noroviruses from Children's Stools By Taqman One-step RT-PCR

Noroviruses (NoVs) are the leading cause of outbreaks of sporadic acute gastroenteritis worldwide in humans of all ages. They are important cause of hospitalizations in children with a public health impact similar to that of Rotavirus. NoVs are RNA viruses of great genetic diversity and there is a continuous appearance of new strains. Five genogroups are recognized; GI and GII with their many genotypes and subtypes being the most important for human infection. However, the diagnosis of these two genotypes remains problematic, delaying diagnosis and treatment. 1, 2, 3
For RNA extraction from stool specimens the most commonly used method is the QIAmp Viral RNA commercial kit from Qiagen. This method combines the binding properties of a silica gel membrane, buffers that control RNases and provide optimum binding of the RNA to the column together with the speed of microspin. This method is simple, fast and reliable and is carried out in a few steps that are detailed in the description provided by the manufacturer. 
 Norovirus is second only to rotavirus as the most common cause of diarrhea. Norovirus diagnosis should be available in all studies on pathogenesis of diarrhea as well as in outbreaks or individual diarrhea cases. At present however norovirus diagnosis is restricted to only a few centers due to the lack of simple methods of diagnosis. This delays diagnosis and treatment 1, 2, 3. In addition, due to costs and regulated transportation of corrosive buffers within and between countries use of these manufactured kits poses logistical problems. As a result, in this protocol we describe an alternative, economic, in-house method which is based on the original Boom et al. method4 which uses the nucleic acid binding properties of silica particles together with the anti-nuclease properties of guanidinium thiocyanate.
For the detection and genogrouping (GI and GII) of NoVs isolates from stool specimens, several RT-PCR protocols utilizing different targets have been developed. The consensus is that an RT-PCR using TaqMan chemistry would be the best molecular technique for diagnosis, because it combines high sensitivity, specificity and reproducibility with high throughput and ease of use. Here we describe an assay targeting the open reading frame 1 (ORF1)-ORF2 junction region; the most conserved region of the NoV genome and hence most suitable for diagnosis. For further genetic analysis a conventional RT-PCR that targets the highly variable N-terminal-shell from the major protein of the capsid (Region C) using primers originally described by Kojima et al. 5 is detailed. Sequencing of the PCR product from the conventional PCR enables the differentiation of genotypes belonging to the GI and GII genogroups.

A One-Step RT-PCR assay for detection and genogroup identification of Norovirus isolates from children&#x2019;s stools, that utilizes primers and TaqMan probes specific to the open reading frame 1 (ORF1)-ORF2 junction region, the most conserved region of the Norovirus genome is described. A non-commercial, cost-effective RNA extraction method is detailed.

Taqman By Çocuk Tabureler gelen Noroviruses tespiti ve Genogrouping Tek aşamalı RT-PCR

Noroviruses (NoVs) are the leading cause of outbreaks of sporadic acute gastroenteritis worldwide in humans of all ages. They are important cause of ...

Tıp

How to Measure Cortical Folding from MR Images: a Step-by-Step Tutorial to Compute Local Gyrification Index

Cortical folding (gyrification) is determined during the first months of life, so that adverse events occurring during this period leave traces that will be identifiable at any age. As recently reviewed by Mangin and colleagues2, several methods exist to quantify different characteristics of gyrification. For instance, sulcal morphometry can be used to measure shape descriptors such as the depth, length or indices of inter-hemispheric asymmetry3. These geometrical properties have the advantage of being easy to interpret. However, sulcal morphometry tightly relies on the accurate identification of a given set of sulci and hence provides a fragmented description of gyrification. A more fine-grained quantification of gyrification can be achieved with curvature-based measurements, where smoothed absolute mean curvature is typically computed at thousands of points over the cortical surface4. The curvature is however not straightforward to comprehend, as it remains unclear if there is any direct relationship between the curvedness and a biologically meaningful correlate such as cortical volume or surface. To address the diverse issues raised by the measurement of cortical folding, we previously developed an algorithm to quantify local gyrification with an exquisite spatial resolution and of simple interpretation. Our method is inspired of the Gyrification Index5, a method originally used in comparative neuroanatomy to evaluate the cortical folding differences across species. In our implementation, which we name local Gyrification Index (lGI1), we measure the amount of cortex buried within the sulcal folds as compared with the amount of visible cortex in circular regions of interest. Given that the cortex grows primarily through radial expansion6, our method was specifically designed to identify early defects of cortical development.
In this article, we detail the computation of local Gyrification Index, which is now freely distributed as a part of the FreeSurfer Software (<a href="http://surfer.nmr.mgh.harvard.edu/">http://surfer.nmr.mgh.harvard.edu/</a>, Martinos Center for Biomedical Imaging, Massachusetts General Hospital). FreeSurfer provides a set of automated reconstruction tools of the brain's cortical surface from structural MRI data. The cortical surface extracted in the native space of the images with sub-millimeter accuracy is then further used for the creation of an outer surface, which will serve as a basis for the lGI calculation. A circular region of interest is then delineated on the outer surface, and its corresponding region of interest on the cortical surface is identified using a matching algorithm as described in our validation study1. This process is repeatedly iterated with largely overlapping regions of interest, resulting in cortical maps of gyrification for subsequent statistical comparisons (Fig. 1). Of note, another measurement of local gyrification with a similar inspiration was proposed by Toro and colleagues7, where the folding index at each point is computed as the ratio of the cortical area contained in a sphere divided by the area of a disc with the same radius. The two implementations differ in that the one by Toro et al. is based on Euclidian distances and thus considers discontinuous patches of cortical area, whereas ours uses a strict geodesic algorithm and include only the continuous patch of cortical area opening at the brain surface in a circular region of interest.

Measuring gyrification (cortical folding) at any age represents a window into early brain development. Hence, we previously developed an algorithm to measure local gyrification at thousands of points over the hemisphere1. In this paper, we detail the computation of this local gyrification index.

Yerel Gyrification Endeksi hesapla Adım Adım Öğretici: MR Görüntüleri Kortikal Katlama nasıl ölçülür

Cortical folding (gyrification) is determined during the first months of life, so that adverse events occurring during this period leave traces that will ...

Measuring Frailty in HIV-infected Individuals. Identification of Frail Patients is the First Step to Amelioration and Reversal of Frailty

A simple, validated protocol consisting of a battery of tests is available to identify elderly patients with frailty syndrome. This syndrome of decreased reserve and resistance to stressors increases in incidence with increasing age. In the elderly, frailty may pursue a step-wise loss of function from non-frail to pre-frail to frail. We studied frailty in HIV-infected patients and found that ~20% are frail using the Fried phenotype using stringent criteria developed for the elderly1,2. In HIV infection the syndrome occurs at a younger age.
HIV patients were checked for 1) unintentional weight loss; 2) slowness as determined by walking speed; 3) weakness as measured by a grip dynamometer; 4) exhaustion by responses to a depression scale; and 5) low physical activity was determined by assessing kilocalories expended in a week's time. Pre-frailty was present with any two of five criteria and frailty was present if any three of the five criteria were abnormal.
The tests take approximately 10-15 min to complete and they can be performed by medical assistants during routine clinic visits. Test results are scored by referring to standard tables. Understanding which of the five components contribute to frailty in an individual patient can allow the clinician to address relevant underlying problems, many of which are not evident in routine HIV clinic visits.

Frailty syndrome is commonly seen in the aged and reflects multi-system physiological change. However, with reduced functional reserve and resilience frailty is also known to be common in the HIV infected population. This study outlined an easily administered screening test to identify HIV patients with frailty. When significant components of frailty are identified, clinicians will be able to focus on amelioration of the problem and promote reversion to the pre-frail state.

HIV ile enfekte Bireylerde Frailty ölçüm. Narin Hastalar tanımlanması Islahı ve Frailty iptali için ilk adımdır

A simple, validated protocol consisting of a battery of tests is available to identify elderly patients with frailty syndrome. This syndrome of decreased ...

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the occurrence of subretinal hemorrhage can affect photoreceptor cell death in the detached retina. Hence, it is advantageous to create reproducible RDs without subretinal hemorrhage for evaluating photoreceptor cell death. We modified a previously reported method to create bullous and persistent RDs in a reproducible location with rare occurrence of subretinal hemorrhage. The critical step of this modified method is the creation of a self-sealing scleral incision, which can prevent leakage of sodium hyaluronate after injection into the subretinal space. To make the self-sealing scleral incision, a scleral tunnel is created, followed by scleral penetration into the choroid with a 30 G needle. Although choroidal hemorrhage may occur during this step, astriction with a surgical spear reduces the rate of choroidal hemorrhage. This method allows a more reproducible and reliable model of photoreceptor death in diseases that involve RD such as rhegmatogenous RD, retinopathy of prematurity, diabetic retinopathy, central serous chorioretinopathy, and age-related macular degeneration (AMD).

Creating experimental retinal detachments with a reproducible and sustained height of detachment, and without subretinal hemorrhage, is important for studying the pathophysiology of photoreceptor cell loss in retinal disease and evaluating potential therapeutic interventions. Here, we report such a method in detail.

Sodyum Hyaluronat subretinal Enjeksiyon Kemirgenler Retina Dekolmanı Modeli

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

Step By Step: Microsurgical training method combining two nonliving animal models

The learning of microsurgical techniques and the maintenance of microsurgical skills have been traditionally based on the use of living animals, mainly laboratory rats. This method although extremely valuable can be economically demanding both for the surgeon and the sponsoring institution; it also requires special training facilities that may not always be available or accessible. Furthermore ethical concerns can limit the use of living animals for training purposes. Alternative training methods, such as inert tubes and gloves have not gained popularity among surgeons since they do not offer an experience similar to that of a clinical situation. Non-living animal models include the use of chicken thighs and wings; they offer a practice experience that resembles a clinical situation to a considerable extent. This type of training is relatively cheap and easily available. The microscope and instruments required can be acquired over the internet, and the chicken pieces can be bought at the local supermarket.
This approach allows a motivated trainee to rehearse different types of surgical techniques several times at a reasonable expense, helping to develop or maintain his surgical expertise if more complex facilities are not available. On the current manuscript we describe how to setup a small practice station, how to dissect the specimens, and how to practice both with the chicken thighs and with the chicken wings in a progressive fashion. This approach takes advantage on the versatility of the chicken thigh model and the small size of the chicken wing Brachial artery.

Here we describe how to set up a small microsurgical practice station and a simple and inexpensive method for the training of microsurgery with non-living animal models.

Adım Adım: İki cansız hayvan modelleri birleştirerek Mikrocerrahi eğitim yöntemi

The learning of microsurgical techniques and the maintenance of microsurgical skills have been traditionally based on the use of living animals, mainly ...

Heterotopic Renal Autotransplantation in a Porcine Model: A Step-by-Step Protocol

Kidney transplantation is the treatment of choice for patients suffering from end-stage renal disease. It offers better life expectancy and higher quality of life when compared to dialysis. Although the last few decades have seen major improvements in patient outcomes following kidney transplantation, the increasing shortage of available organs represents a severe problem worldwide. To expand the donor pool, marginal kidney grafts recovered from extended criteria donors (ECD) or donated after circulatory death (DCD) are now accepted for transplantation. To further improve the postoperative outcome of these marginal grafts, research must focus on new therapeutic approaches such as alternative preservation techniques, immunomodulation, gene transfer, and stem cell administration.
Experimental studies in animal models are the final step before newly developed techniques can be translated into clinical practice. Porcine kidney transplantation is an excellent model of human transplantation and allows investigation of novel approaches. The major advantage of the porcine model is its anatomical and physiological similarity to the human body, which facilitates the rapid translation of new findings to clinical trials. This article offers a surgical step-by-step protocol for an autotransplantation model and highlights key factors to ensure experimental success. Adequate pre- and postoperative housing, attentive anesthesia, and consistent surgical techniques result in favorable postoperative outcomes. Resection of the contralateral native kidney provides the opportunity to assess post-transplant graft function. The placement of venous and urinary catheters and the use of metabolic cages allow further detailed evaluation. For long-term follow-up studies and investigation of alternative graft preservation techniques, autotransplantation models are superior to allotransplantation models, as they avoid the confounding bias posed by rejection and immunosuppressive medication.

Porcine models of organ transplantation provide an important platform to study mechanisms of organ preservation. This article describes a heterotopic porcine renal autotransplantation model, which allows investigating new approaches to improve the outcome of transplantation using marginal kidney grafts.

Bir Domuz Modeli heterotopik Böbrek Ototransplantasyon: Bir Adım-Adım Protokolü

Kidney transplantation is the treatment of choice for patients suffering from end-stage renal disease. It offers better life expectancy and higher quality ...

Taking the Next Step: a Neural Coaptation Orthotopic Hind Limb Transplant Model to Maximize Functional Recovery in Rat

Limb transplant in particular and vascularized composite allotransplant (VCA) in general have wide therapeutic promise that have been stymied by current limitations in immunosuppression and functional neuromotor recovery. Many animal models have been developed for studying unique features of VCA, but here we present a robust reproducible model of orthotopic hind limb transplant in rats designed to simultaneously investigate both aspects of current VCA limitation: immunosuppression strategies and functional neuromotor recovery. At the core of the model rests a commitment to meticulous, time-tested microsurgical techniques such as hand sewn vascular anastomoses and hand sewn neural coaptation of the femoral nerve and the sciatic nerve. This approach yields durable limb reconstructions that allow for longer lived animals capable of rehabilitation, resumption of daily activities, and functional testing. With short-term treatment of conventional immunosuppressive agents, allotransplanted animals survived up to 70 days post-transplant, and isotransplanted animals provide long lived controls beyond 200 days post-operatively. Evidence of neurologic functional recovery is present by 30 days post operatively. This model not only provides a useful platform for interrogating immunological questions unique to VCA and nerve regeneration, but also allows for in vivo testing of new therapeutic strategies specifically tailored for VCA.

This protocol presents a robust, reproducible model of vascularized composite allotransplant (VCA) geared toward simultaneous study of immunology and functional recovery. The time invested in meticulous technique in a right mid-thigh hind limb orthotopic transplant with hand sewn vascular anastomoses and neural coaptation yields the ability to study functional recovery.

Sonraki Adım Taking: Bir Nöral Coaptation Ortotopic Hind Limb Transplant Modeli Sıçan Fonksiyonel Kurtarma Maksimize etmek

Limb transplant in particular and vascularized composite allotransplant (VCA) in general have wide therapeutic promise that have been stymied by current ...

Using a Chemical Biopsy for Graft Quality Assessment

Kidney transplantation is a life-saving treatment for a large number of people with end-stage renal dysfunction worldwide. The procedure is associated with an increased survival rate and greater quality of patient&#8217;s life when compared to conventional dialysis. Regrettably, transplantology suffers from a lack of reliable methods for organ quality assessment. Standard diagnostic techniques are limited to macroscopic appearance inspection or invasive tissue biopsy, which do not provide comprehensive information about the graft. The proposed protocol aims to introduce solid phase microextraction (SPME) as an ideal analytical method for comprehensive metabolomics and lipidomic analysis of all low molecular compounds present in kidneys allocated for transplantation. The small size of the SPME probe enables performance of a chemical biopsy, which enables extraction of metabolites directly from the organ without any tissue collection. The minimum invasiveness of the method permits execution of multiple analyses over time: directly after organ harvesting, during its preservation, and immediately after revascularization at the recipient&#8217;s body. It is hypothesized that the combination of this novel sampling method with a high-resolution mass spectrometer will allow for discrimination of a set of characteristic compounds that could serve as biological markers of graft quality and indicators of possible development of organ dysfunction.

The protocol presents utilization of the chemical biopsy approach followed by comprehensive metabolomic and lipidomic analysis for quality assessment of kidney grafts allocated for transplantation.

Greft Kalite Değerlendirmesi için Kimyasal Biyopsi Kullanımı

Kidney transplantation is a life-saving treatment for a large number of people with end-stage renal dysfunction worldwide. The procedure is associated ...

Step-by-Step Stapedotomy through Transcanal Exclusive Endoscopic Approach

In recent years there has been an increasing trend in the use of the endoscope to treat a variety of middle ear pathologies, including otosclerosis. Several studies comparing traditional microscopic and endoscopic stapes surgery have reported similar hearing results and an overall low rate of complications. The endoscope has unraveled its full potential in demanding settings of stapes surgery, such as unfavorable anatomy of the oval window niche or revision cases. Reduced manipulation of the chorda tympani and low rate of post-operative dysgeusia are further benefits to mention for endoscopic stapes surgery.
Being a one-handed technique, management of bleeding, positioning, and crimping of the prosthesis may be challenging for novice endoscopic surgeons, so some training in endoscopic ear surgery is recommended before performing endoscopic stapedotomy. The problem of sharing the surgical field between the endoscope and the operating instruments could be easily overcome if proper instruments positioning is understood. One-handed bleeding control in the narrow space of the ear canal may represent an issue during the elevation of the tympano-meatal flap, possibly discouraging the surgeon since the preliminary steps of surgery. Following appropriate technique to raise the flap and the collaboration with the anesthesiology team in keeping the blood pressure low guarantee an adequate bleeding control in most cases.
The aim of this article is to describe the entire surgical procedure of a transcanal exclusive endoscopic stapedotomy, from operating room set up and patient positioning to post-operative care. A step-by-step description of the surgical maneuvers with technical hints is reported, to guide the surgeon across the procedure and allow any ear surgeon to perform stapes surgery endoscopically.

The aim of this article is to provide a step-by-step method for endoscopic stapes surgery from operating room setting and patient positioning to post-operative care. This work would represent a guide for any otologic surgeon who is willing to treat otosclerosis with endoscopic transcanal technique.

Transkanal Özel Endoskopik Yaklaşım ile Adım Adım Stapedotomi

In recent years there has been an increasing trend in the use of the endoscope to treat a variety of middle ear pathologies, including otosclerosis. ...

A Two-Step Method for Percutaneous Transhepatic Choledochoscopic Lithotomy

Intrahepatic and extrahepatic choledocholithiasis is a challenge in the field of biliary surgery. We present our experience using a two-step percutaneous transhepatic choledochoscopic lithotomy (PTCSL) procedure to treat challenging biliary stones. We retrospectively reviewed 81 patients with intrahepatic and extrahepatic choledocholithiasis treated using this two-step PTCSL from January 2013 to January 2020, including 40 males and 41 females, with an average age of 66 years. In contrast to traditional percutaneous transhepatic cholangioscopy (PTCS), a channel was established directly through a 16F Amplatz sheath, and the stone in the channel was removed with the aid of a nephroscope. The clinical efficacy and complications of all patients were analyzed. Eighty-one patients (81/81, 100%) had their biliary stones successfully removed; 62/81 patients (76.5%) had biliary stones completely removed after the first operation; 17/81 patients (21%) underwent a second operation; 2/81 patients (2.5%) needed a third operation to completely remove the stones. The incidence of severe bleeding during the operation was 0%, and there were no deaths. The use of the two-step PTCSL method is safe and efficacious, and contributes to a better prognosis of intrahepatic and extrahepatic choledocholithiasis.

This "two-step method" significantly improved the success rate of percutaneous transhepatic choledochoscopy and achieved a better prognosis of intrahepatic and extrahepatic choledocholithiasis.

Perkütan Transhepatik Koledokoskopik Litotomi İçin İki Adımlı Bir Yöntem

Intrahepatic and extrahepatic choledocholithiasis is a challenge in the field of biliary surgery. We present our experience using a two-step percutaneous ...