Name: transduction-transplantation mouse model of myeloproliferative neoplasm
Uploaded: 2016-12-22T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 12 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Transduction-Transplantation Mouse Model of Myeloproliferative Neoplasm at JoVE.com

This work is supported by the V Foundation Scholar (AGF) and the MPN Research Foundation (AGF).

Bu çalışma onaylanmış ve California, Irvine Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından önerileri doğrultusunda gerçekleştirilmiştir. Tüm işlemler izofluran anestezi altında yapılan ve tüm çabaları acı en aza indirmek için yapılmıştır. Ekotropik retrovirüs 1. Üretim <ol><li> ticari bir maksi-hazırlık kiti ve sezyum klorür arıtma kullanarak en az 1 ug / ml bir konsantrasyonda yüksek kaliteli plazmidler hazırlayın. Not: Bu, bir MSCV omurgası (CALR 7,8 bu durumda) ilgili geni kodlayan vektör ve (vs GFP, Neo) seçim işaretleyici olarak ekotropik bir paketleme plazmiti kodlayan gag-pol-env içerir (de ifade burada plazmid gibi). </li><li> DMEM çözülme ve genişletme düşük geçiş 293T hücreleri, penisilin / streptomisin (D10) ile,% 10 FBS ve L-glutamin ile takviye edilmiştir. Nemlendirilmiş bir 10 cm doku kültürü ile muamele edilmiş çanak levha 5 x 10 6 hücredoku kültürü, 37 ° C&#39;de kuluçka% 5 CO2. </li><li> kültür içinde, 293T hücreleri genişletmek. Transfeksiyondan bir gün önce, bir vakum şişesi içine, 1 ml PBS ve aspirat süpernatan ilave edilerek hücrelerin yıkanması. </li><li> Hücreleri tripsinize edin için, 2 mi% 0.05 tripsin ekleyip inkübe yemekler 2 nemlendirilmiş bir doku kültürü kuluçka makinesi içinde - 3 dakika 37 ° C&#39;de ve% 5 CO2. </li><li> , Trypsinization durdurmak 15 ml konik tüp çanak 3 ml D10 ve transfer hücreleri ekleyin. 10 dakika boyunca 400 xg&#39;de hücreleri dönerler. </li><li> 2 ml D10 bir termos ve tekrar süspansiyon hücre pelet haline Süpernatant aspire. </li><li> hemasitometre kullanarak tripan mavi dışlama hücreleri saymak. </li><li> Tohum oluşturulan virüs başına üç 10 cm doku kültürü ile tedavi edilen yemeklerin içine çanak başına 2 x 10 6 hücre. NOT: En iyi sonuçlar için, hücreler 30 aşmasına izin vermez - transfeksiyon veya kötü virüs verim elde edilebilir anda% 50 izdiham. </li><li> Transfeksiyondan hemen önceve bir termos içine aspire medya 5 ml taze D10 ile değiştirin. </li><li> Her 10 cm Petri kabı bağımsız bir 1.5 mL steril mikrosantrfuj tüp hazırlanması transfekte edilmesi. </li><li> Pipet her mikrosantrifüj tüpe düşük serum ortamında 760 ul, daha sonra dikkatlice doğrudan ortama transfeksiyon reaktif 40 ul ekleyin. 5 dakika boyunca oda sıcaklığında doku kültürü kaputu inkübe edin. </li><li> ilgili gen (boş vektör kullanılarak 15 ug varsa) olarak her bir ilgili tüp plazmid 5 ug MSCV vektörünün 30 ug ekleyin ve aşağı yukarı pipetleme yavaşça karıştırın. ilave bir 15 dakika boyunca doku kültürü kaputu oda sıcaklığında inkübe edin. NOT: Daha küçük vektörler yüksek viral verim sahip olma eğilimindedir. </li><li> Dikkatle damla damla, ilgili 10 cm Petri kabı içine her reaksiyon (yaklaşık 800 ul) toplam hacmi ekleyin ve hafifçe karıştırın yanlara doğru çanak eğin. nemlendirilmiş doku cu hücreleri dönünlture inkübatör. </li><li> doku kültürü kuluçka makinesi içinde bir 8 saat veya bir gece inkübe edildikten sonra, yavaşça aspire bir vakum şişesi içine ortam ve taze D10, 10 ml ile değiştirin. </li><li> 48 saat sonra, transfeksiyondan &#39;de 35 ml şırınganın içine süpernatan toplamak ve hücre debrisini uzaklaştırmak için 0.45 um&#39;lik bir membrandan filtre. </li><li> İSTEĞE BAĞLI: 293T hücreleri ve ek virüs yerleştirin 10 ml taze D10 geri 72 saat sonrası transfeksiyon hasat edilebilir. </li><li> Hiçbir ek virüs tahsil edildiğinde biyolojik tehlike atık 293T hücrelerinin imha edin. </li><li> (Örneğin virüs titresi 1 ml veya BM enfeksiyonu için 6.5 ml için) tek kullanımlık birimlere kısım viral süpernatant. -80 ° C&#39;de, sıvı azot ve mağaza virüsü ile flaş dondurma virüsü. NOT: onlar büyük ölçüde virüs titresi azaltmak olarak tekrarlanan donma / çözülme döngüleri kaçının. </li></ol> 2. Sitometrisi ile Bağıl Viral titresi belirlemek <ol><li> 3T3 hücreleri çözülme ve D10 korumak. 10 cm Kültür hücreleridoku kültürü CO2, 37 ° C&#39;de, nemlendirilmiş bir doku kültürü inkübatörü içinde çanak muamele edilmiş ve% 5. </li><li> üç kopya halinde viral titresi gerçekleştirin. vakum balona 1 ml PBS ve aspirat süpernatant ekleyerek hücreleri yıkayın, hücreler hazırlamak. </li><li> Hücreleri tripsinize edin için, 2 mi% 0.05 tripsin ekleyip inkübe yemekler nemlendirilmiş bir doku kültürü inkübatörü içinde, 37 ° C&#39;de ve% 5 CO2. </li><li> , Trypsinization durdurmak 15 ml konik tüp çanak 3 ml D10 ve transfer hücreleri ekleyin. 10 dakika boyunca 400 xg&#39;de hücreleri dönerler. </li><li> 2 ml D10 bir termos ve tekrar süspansiyon hücre pelet haline Süpernatant aspire. </li><li> hemasitometre kullanarak tripan mavi dışlama hücreleri saymak. </li><li> Tohum 3T3 beş 60 mm doku kültürü ile muamele edilmiş kaplarına 1 x 10 5 hücre yoğunluğunda hücreler ve gece boyunca inkübe edilir. </li><li> 3, 1:10 1:30, ve 1: 1 ml toplam D10 kullanılarak çözündürüldü viral süpernatanın 100 dilüsyonları 1 sağlayın. Ayrıca virüssüz kontrolünü içerir. </li><li> beni aspirebir vakum şişesi içine 3T3 hücrelerinden çap ve D10, 4 ml ile değiştirin. </li><li> Viral süpernatan seyreltileri ile 3T3 hücreleri Yerleşimi ve her bir çanak 8 ug / ml bir son konsantrasyona kadar polibren ekleyin. 37 ° C&#39;de doku kültürü kuluçka makinesi içinde 48 saat ve% 5 CO2 inkübe edin. </li><li> flow sitometri ile göreli viral titresi belirlemek: <ol><li> Hücreleri yıkamak için, bir vakum balona medya aspire ve 5 ml PBS ekleyin. </li><li> vakum şişe içine PBS aspire. 1 mi% 0.05 tripsin ilave edin ve 2 37 ° C de inkübe - 5 dakika çanak hücreleri ayırmak için. </li><li> plaka kalan hücreleri ayırmak için aşağı 3 ml D10 ekleyin ve yukarı pipet ve. 10 dakika boyunca 400 xg&#39;de FACS tüp ve santrifüj hücreleri aktarın. </li><li> süpernatant süzün ve 3 ml PBS ile yıkama hücreleri. 10 dakika ve decant süpernatant 400 x g&#39;de santrifüj. 200 ul PBS içinde süspanse. </li><li> 9 bir akış sitometre üzerinde çalıştırın hücreler. t içinde 30.000 olayları - 20.000 arasında toplayıno (SSC vs FSC tarafından belirlenen) hücre kapısı yaşamak ve GFP + ve GFP yüzdesini hesaplamak - hücreler. Not: bir viral titresi olarak kabul edilebilir olarak kabul edilir zaman viral süpernatan verim, en az% 50, GFP + 3T3 hücrelerinin 1:30 seyreltme. Eğer en az% 50, GFP + hücreleri, bu seyreltme sonuçlar daha sonra optimal iletim sonuçlar elde edilebilir. Viral titresini belirlemek için hesaplama Limon ve ark uyarlanmıştır. , Blood (1997) 9. </li><li> Virüs titresi = parçacık oluşturan birimler (PFU) / ml = [(GFP + hücrelerin frekansı x 3T3 hücre sayısı) yardımıyla yüzücünün (mi) / hacim] x seyreltme faktörü: göreli virüs titresini belirlemek için denklem kullanır. </li></ol></li></ol> 3. transduce Donör Kemik İliği Hücreleri <ol><li> kemik iliği için donör fareler hazırlamak için (BM) hasat önce% 5 Birleştirilen tamamlayıcı olan bir akış oranı ile izofluran buharlaştırıcı ile fareler anestezi/ Dakika, 1 L oksijen. reaksiyonunu değerlendirmek için ayak sıkıştırın. NOT: (az 8 haftalık) Donör fareler (8 gün önce transplantasyon) 5 gün önce kemik iliği hasat hazırlanmalıdır. Bir donör fareler en az 2 alıcılar için yeterli hücre sağlar. </li><li> Enjekte 150 mg / kg, 27 G x ½ &quot;iğne kullanılarak, anestezi uygulanmış farelerde retroorbital enjeksiyon yoluyla 5-fluorourasil (5-FU). DİKKAT! 5-FU, bir anti-kanser kemoterapötik madde. Her zaman yetkili bir kimyasal bir davlumbaz veya kanallı biyogüvenlik kabini içinde 5-FU anlaştım. 5-FU ile tedavi edilen farelerin uygun etiketleme belirlemek için kurumun laboratuvar ve hayvan güvenliği komitesi danışın. <ol><li> yan anestezi fare getirin ve göz kafası biraz çıkıntı şekilde başparmak ve işaret parmağı hem de kullanılarak dizginlemek. </li><li> medial canthus ve yukarı bakacak şekilde eğim ile iğne yanal ile başlayarak, bir 45 ° iğneyimedial yönde açısı ° ve iğne yarım takıldığında durdurun. Yavaşça hücreleri enjekte ve dikkatlice iğneyi kaldır. NOT: Bu teknik doğru yapılırsa, göz hafifçe geri çekilmelidir ve hiçbir direnç iğne sokulması üzerine keçe edilmelidir. </li><li> Böyle şişme veya kanama gibi yaralanma herhangi bir işaret için fareyi inceleyin. </li></ol></li><li> Hasat kemik iliği 5 gün (transplantasyonundan 3 gün önce), 5-FU tedavisi sonrası. <ol><li> / Dakika, 1 L% 5 Birleştirilen ilave oksijen akış hızı ile izofluran buharlaştırıcı ile fareler anestezi. reaksiyonunu değerlendirmek için ayak sıkıştırın. </li><li> servikal dislokasyon ile fare Kurban. kürk ıslak hale gelinceye kadar% 70 EtOH ile cömertçe püskürtülerek fare sterilize edin. </li><li> diseksiyon makas kullanarak, deride bir kesi yapmak ve uzak bacak kaslarından fasya teşrih. Sonra, kalça femur ve ayak bileğinde tibia kesilmesinin fare uzak bacak teşrih. </li><li> virajBir &quot;L&quot; şeklinde bacak ve diseksiyon makas ile diz eklemi keserek her bacak kemiği ayırın. </li><li> her bacak kemiğin distal uçlarında kıkırdak kaldırmak için, kıkırdak devre kadar yavaşça bacak kemik bir uca doğru kas kazımak için kesme makasları kullanın. </li><li> 27 x g ½ inç iğne ile bir şırınga kullanılarak, PBS ile yıkayın, her bacak kemiği 50 ml konik bir tüp içinde 100 uM bir naylon membran üzerinde% 2 FBS ile takviye edilmiştir. Kemik kadar yıkayın kemik hasat hücrelerin sayısını arttırmak için beyaz olur. </li><li> tek bir hücre süspansiyonu elde etmek için 50 mL konik tüp içine naylon membran aracılığı ile hücreler arasında püre bir şırınga pistonu kullanın. diğer fare bacak ile tekrarlayın. </li></ol></li><li> 4 ° C&#39;de santrifüje hücreler 400 x g&#39;de 10 dakika ve süpernatan atılır. Süspanse BM 5 mi amonyum klorit, potasyum (ACK) tampon içinde, kırmızı kan hücreleri lize etmek için. 10 dakika boyunca buz üzerinde inkübe hücreleri. </li><li> hücre parçalama durdurmak için PBS ile tüp doldurun. Centri4 ° C&#39;de fuge hücreler 400 x g&#39;de 10 dakika ve süpernatan atılır. BM pelet kırmızı rengi varsa parçalama adımı yineleyin. </li><li> 5 ml PBS içinde süspanse ve hemasitometre kullanarak tripan mavi dışlama hücreleri saymak. </li><li> DMEM% 20 FBS, L-glutamin, penisilin / streptomisin ile takviye içeren 2x ön-Stim kokteyl m başına 2 x 10 6 hücre yeniden süspanse hücre, IL-3, (14 ng / ml), IL-6 (24 ng / mi) ve SCF (112 ng / ml). Plaka 6 yuvalı plakalar içinde oyuk başına 2 mi. </li><li> 37 ° C&#39;de gece boyunca inkübe hücreleri ve% 5 CO2. </li><li> içeren her BM hücrelerinin viral süpernatan 2 ml ilave edilir ve polybrene (ug / ml 8 mg) ekleyin. 1,500 x g&#39;de 90 dakika boyunca 30 ° C &#39;de dönel Plakalar daha sonra gece boyunca bir doku kültürü kuluçka makinesine plaka dönüş. </li><li> Pipet hücresi konik tüpler içine süspansiyonu ve 400 x g&#39;de 10 dakika boyunca 4 ° C&#39;de santrifüj plaka atın yoktur. 2 ml yeniden süspanse hücreleri taze 2x öncesi stim kuyu başına kokteyl ve özgün kuyulara geri dönün. </li&gt; <li> Adımları 3,7-3,9 yineleyerek bir 2. spinoculation gerçekleştirin. </li></ol> Alıcı Fare içine 4. Nakli Donör Hücreleri <ol><li> 24 saat önce BM hücrelerinin enjeksiyonu için ölümcül doz, toplam vücut ışınlaması ile &lt;nakli için singeneik alıcı fareler hazırlayın. NOT: BALB / c farelerde için ölümcül doz ışınlama tipik 800-900 cGy ve C57B / 6 10 1,000-1,200 cGy olduğunu. doz tipik olarak, en azından 3-4 saat aralıklı ışınlama iki oturum ayrılmıştır. </li><li> yavaşça konik tüpler içine süpernatant pipetleme 6 kuyucuğu aşama 3.11, hasat transdüksiyona donör hücrelerinden devam etti. Kalıntı hücreleri toplamak ve 50 ml konik tüp eklemek 1 ml PBS ile iyice her yıkama. </li><li> oyuklara% 0.05 tripsin 0.5 ml ilave edilir ve 5 dakika boyunca doku kültür inkübatörü içinde 37 ° C&#39;de inkübe edin. </li><li> kuyulara 1 ml D10 ekleyin ve yumuşak pipetleme kalan hücreleri ayırmak. ilgili tüp hücreleri ekleme400 x g&#39;de 10 dakika boyunca 4 ° C&#39;de santrifüj ile adım 4.2 ve pelet s. </li><li> 400 x g&#39;de 10 dakika boyunca 4 ° C&#39;de PBS ve santrifüj ile hücreler yıkanır. tripan mavi dışlama hemasitometre kullanarak 5 ml PBS içinde süspanse ve saymak hücreleri. Not: vektör, bir GFP etiketi vardır, o zaman, bir akış sitometresiyle GFP pozitif hücrelerin yüzdesi miktarı belirlenir. </li><li> Farelere enjeksiyon için 100 ul PBS - 50, 2 x 10 6 hücre - 5 x 10 5 süspanse edin. </li><li> steril bir 27 G x ½ &quot;iğne kullanılarak anestezi farelere retroorbital enjeksiyon yoluyla hücreleri enjekte edilir. NOT: Diğer enjeksiyon teknikleri kuyruk ven, dalak, ya da femoral içerir. <ol><li> reaksiyonunu değerlendirmek için izofluran ve tutam ayak kullanarak fare anestezisi. </li><li> yan fare yerleştirin ve göz kafası biraz çıkıntı şekilde başparmak ve işaret parmağı hem de kullanılarak dizginlemek. </li><li> konik yukarı bakacak şekilde, n eklemek45 ° açıyla medial canthus lateral eedle. NOT: Bu teknik doğru yapılırsa, göz hafifçe geri çekilmelidir ve hiçbir direnç iğne sokulması üzerine keçe edilmelidir. </li><li> Böyle şişme veya kanama gibi yaralanma herhangi bir işaret için fareyi inceleyin. NOT: Aşağıdaki nakli fareler birkaç hafta için düşük kan sayımı var ve bu yüzden enfeksiyona duyarlı olacaktır. antibiyotikler veya asitleştirilmiş su kullanımı ile profilaksisi kullanılabilmektedir. </li></ol></li><li> Nakil sonrası bir ay flow sitometri engrafted donör hücreleri bir göstergesi olarak periferik kanda% GFP ölçün. NOT: Tek başına GFP hücrelerinin engraftman başarısını belirleyemiyor. Viral iletimi başarısız olmuş olabilir ama engraftmınt meydana gelmiş olabilir. Bu durumda, hiçbir GFP + hücreler tespit ama nakledilen hücrelerin melezleşmesi başarılı olacaktır. <ol><li> periferik kan b 10 ul alıny 21 G x 1 ½ &quot;şırınga ile safen bacak ven delinmesiyle ve pıhtılaşmasını önlemek için PBS içinde 100 mM EDTA ekleyin. </li><li> 10 dakika boyunca buz üzerinde, kan ve eritmek için 1 mi ACK ekleyin. 10 dakika boyunca 400 x g&#39;de santrifüj ile pelet hücreleri. </li><li> Aspire bir vakum şişesi içinde yüzer ve 1 ml PBS ilave lizis durdurmak için% 2 FBS ile takviye edilmiştir. 10 dakika boyunca 400 x g&#39;de santrifüj ile pelet hücreleri. </li><li> 100 ul PBS içinde bir vakum şişe ve tekrar süspansiyon pelet aspire süpernatan% 2 FBS ile takviye edilmiştir. </li><li> Bir akış sitometresinde örnekleri çalıştırın ve (SSC vs FSC tarafından belirlenir) canlı hücre kapısının içinde 300.000 olayları toplamak ve GFP + ve GFP yüzdesini hesaplamak - hücrelerinden 9. </li></ol></li><li> Ayrıca 1 ay nakil sonrası da, hastalığın ilerlemesini izlemek için otomatik bir veteriner hematoloji analizörü 18 kullanılarak tam kan sayımı (CBC) gerçekleştirin. NOT:% oranında hastalığı izlemeye devam edinAylık periferik kan ve CBC GFP. </li><li> Denemeyi sonlandırmak için, yanıt değerlendirmek için izofluran ve tutam ayak kullanarak fare uyutmak. histopatoloji için servikal dislokasyon ve hasat dalak ve kemik iliği tarafından fare Kurban. NOT: Deneyin uzunluğu öznel ve bitiş tarihi beklenen hastalık fenotipi dayalı değerlendirilmelidir. </li></ol>

<ol>
	<li>Daley, G. Q., Van Etten, R. A., Baltimore, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+chronic+myelogenous+leukemia+in+mice+by+the+P210bcr/abl+gene+of+the+Philadelphia+chromosome.">Induction of chronic myelogenous leukemia in mice by the P210bcr/abl gene of the Philadelphia chromosome.</a> Science(New York, N.Y.). 247 (4944), 824-830 (1990).</li><li>Wernig, G., Mercher, T., Okabe, R., Levine, R. L., Lee, B. H., Gilliland, D. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+Jak2V617F+causes+a+polycythemia+vera-like+disease+with+associated+myelofibrosis+in+a+murine+bone+marrow+transplant+model.">Expression of Jak2V617F causes a polycythemia vera-like disease with associated myelofibrosis in a murine bone marrow transplant model.</a> Blood. 107 (11), 4274-4281 (2006).</li><li>Lacout, C., Pisani, D. F., Tulliez, M., Gachelin, F. M., Vainchenker, W., Villeval, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=JAK2V617F+expression+in+murine+hematopoietic+cells+leads+to+MPD+mimicking+human+PV+with+secondary+myelofibrosis.">JAK2V617F expression in murine hematopoietic cells leads to MPD mimicking human PV with secondary myelofibrosis.</a> Blood. 108 (5), 1652-1660 (2006).</li><li>Zaleskas, V. M., Krause, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+pathogenesis+and+therapy+of+polycythemia+induced+in+mice+by+JAK2+V617F.">Molecular pathogenesis and therapy of polycythemia induced in mice by JAK2 V617F.</a> PloS One. 1, e18 (2006).</li><li>Bumm, T. G. P., Elsea, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+murine+JAK2V617F-positive+myeloproliferative+disease.">Characterization of murine JAK2V617F-positive myeloproliferative disease.</a> Cancer Res. 66 (23), 11156-11165 (2006).</li><li>Marty, C., Pecquet, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Calreticulin mutants in mice induce an MPL-dependent thrombocytosis with frequent progression to myelofibrosis. , (2015).</li><li>Klampfl, T., Gisslinger, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Somatic+mutations+of+calreticulin+in+myeloproliferative+neoplasms.">Somatic mutations of calreticulin in myeloproliferative neoplasms.</a> N. Engl. J. Med. 369 (25), 2379-2390 (2013).</li><li>Araki, M., Yang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+the+thrombopoietin+receptor+by+mutant+calreticulin+in+CALR-mutant+myeloproliferative+neoplasms.">Activation of the thrombopoietin receptor by mutant calreticulin in CALR-mutant myeloproliferative neoplasms.</a> Blood. , (2016).</li><li>Lim&#243;n, A., Briones, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-Titer+Retroviral+Vectors+Containing+the+Enhanced+Green+Fluorescent+Protein+Gene+for+Efficient+Expression+in+Hematopoietic+Cells.">High-Titer Retroviral Vectors Containing the Enhanced Green Fluorescent Protein Gene for Efficient Expression in Hematopoietic Cells.</a> Blood. 90 (9), 3316-3321 (1997).</li><li>Duran-Struuck, R., Dysko, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Principles+of+bone+marrow+transplantation+(BMT):+providing+optimal+veterinary+and+husbandry+care+to+irradiated+mice+in+BMT+studies.">Principles of bone marrow transplantation (BMT): providing optimal veterinary and husbandry care to irradiated mice in BMT studies.</a> J. Am. Assoc. Lab. Anim. Sci. 48 (1), 11-22 (2009).</li><li>Gavrilescu, L. C., Van Etten, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+Replication-Defective+Retrovirus+by+Transient+Transfection+of+293T+cells.">Production of Replication-Defective Retrovirus by Transient Transfection of 293T cells.</a> J. Vis. Exp. (10), (2007).</li><li>Challen, G. A., Boles, N., Lin, K. K., Goodell, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+Hematopoietic+Stem+Cell+Identification+And+Analysis.">Mouse Hematopoietic Stem Cell Identification And Analysis.</a> Cytometry A. 75 (1), 14-24 (2009).</li><li>Ergen, A. V., Jeong, M., Lin, K. K., Challen, G. A., Goodell, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+mouse+side+population+cells.">Isolation and characterization of mouse side population cells.</a> Methods Mol. Bio. (Clifton, N.J.). 946, 151-162 (2013).</li><li>Weksberg, D. C., Chambers, S. M., Boles, N. C., Goodell, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD150-+side+population+cells+represent+a+functionally+distinct+population+of+long-term+hematopoietic+stem+cells.">CD150- side population cells represent a functionally distinct population of long-term hematopoietic stem cells.</a> Blood. 111 (4), 2444-2451 (2008).</li><li>Oguro, H., Ding, L., Morrison, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SLAM+family+markers+resolve+functionally+distinct+subpopulations+of+hematopoietic+stem+cells+and+multipotent+progenitors.">SLAM family markers resolve functionally distinct subpopulations of hematopoietic stem cells and multipotent progenitors.</a> Cell Stem Cell. 13 (1), 102-116 (2013).</li><li>Li, J., Kent, D. G., Chen, E., Green, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+of+myeloproliferative+neoplasms:+JAK+of+all+grades.">Mouse models of myeloproliferative neoplasms: JAK of all grades.</a> Dis. Model. Mech. 4 (3), 311-317 (2011).</li><li>Mullally, A., Lane, S. W., Brumme, K., Ebert, B. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Myeloproliferative+neoplasm+animal+models.">Myeloproliferative neoplasm animal models.</a> Hematol. Oncol. Clin. North Am. 26 (5), 1065-1081 (2012).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

Bu protokol, hastalığın şoförü olarak CALRdel52 mutasyonu myelofibrotik doğru ilerledikçe bir esansiyel trombositemi gibi hastalık özetlemek için farelerde kemik iliği nakli nasıl gerçekleştirileceği ayrıntılı bir açıklamasını sağlar. artan trombositler, megakaryositler genişlemesi ve kemik iliği fibrozis CALRdel52 sonuçlarını ifade eden hücrelerin başarılı nakli. Kemik iliği nakli çok aşamalı bir süreçtir gibi, teknik bir hata çıkar, hatta fare ölüm geni eksprese eden hücrele...

İletimi transplantasyon farelerde hematolojik maligniteler modellemek için yararlı bir yöntemdir. Bu teknik geri BCR-ABL1 ektopik ifadesi sadakatle farelerde 1 kronik miyeloid lösemi özetlemek olabilir ilk gösteriye kadar uzanan miyeloid malignitelerini çalışmak için özellikle değerli olmuştur. Bu teknik daha sonra miyeloproliferatif neoplazmı (MPN) mutasyona uğramış JAK2 V617F ve MPL W515K / L yoğun çalışma kolaylaştırmıştır. MPN olgun miyeloid hücreleri ve kemik iliği fibrozisi aşırı ile karakterize hematolojik kanserlerde bir grup. Bu hastalıklar, genel olarak, JAK2, MPL veya CALR ya somatik mutasyon kazanmış bir hematopoietik kök hücrenin klonal büyümesi ortaya çıkar. İletimi-transplantasyon JAK2 V617F ve MPL W515K / L modelleri sergi polisitemi vera ve miyelofibrozisin 2 klinik özellikleri - 5 &lt;/ Sup&gt;. Son zamanlarda, kalretikülin mutasyonlu MPN bir fare modeli de transdüksiyon transplantasyon yöntem 6 oluşturuldu. Bu fareler artmış trombositler, megakaryositler sayısının artması, ve kemik iliği fibrozisi olan bir esansiyel trombositemi benzeri hastalığı gelişebilir. Birlikte, bu modeller MPN moleküler patogenezi içgörü kazanmak için fırsat değil, aynı zamanda geliştirmek ve klinik öncesi ortamda terapötiklerin çalışma kapasitesi sağlamıştır sadece. Bu yazının CALRdel52 mutasyon odaklanarak iletim-transplantasyon metodolojisi ayrıntılı bir açıklamasını sağlar. Bu teknik, bir mutant ışınlanmış singeneik alıcı farelere yapısını ifade eden retroviral kalıt kemik iliği hücrelerinin nakli kapsar.

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;Cell Lines&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Corning</td><td>MT-10-013-CV</td><td></td></tr><tr><td>293T cells</td><td>ATCC</td><td>CRL-11268</td><td></td></tr><tr><td>3T3 cells</td><td>ATCC</td><td>CRL-1658</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Plasmids&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>EcoPak, also known as pCL-Eco</td><td>Addgene</td><td>12371</td><td>Retroviral packaging cell lines, such as EcoPack 2-293, may be used in place of the EcoPak plasmid and standard 293T cells. Additional &amp;gamma;-retrovirus envelope and packaging plasmids are available from Addgene and others.</td></tr><tr><td>MSCV-IRES-GFP (MIG)</td><td>Addgene</td><td>20672</td><td>Additional &amp;gamma;-retroviral transfer plasmids are available from Addgene and others.</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Consumables&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>27 G x 1/2&quot; needles</td><td>BD</td><td>305620</td><td></td></tr><tr><td>Fetal bovine serum</td><td>Corning</td><td>MT-35-010-CV</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin/streptomycin/L-glutamine</td><td>Corning</td><td>MT-30-009-CI</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0.05%)</td><td>Corning</td><td>MT-25-052-CI</td><td>Can be homemade</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Corning</td><td>MT-21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>10 cm dishes</td><td>Fisher</td><td>172931</td><td></td></tr><tr><td>15 ml conical tubes</td><td>Fisher</td><td>12565268</td><td></td></tr><tr><td>60 mm dishes</td><td>Fisher</td><td>150288</td><td></td></tr><tr><td>Polybrene</td><td>Fisher</td><td>NC9840454</td><td></td></tr><tr><td>5-FU</td><td>Fisher</td><td>A13456-06</td><td></td></tr><tr><td>100 &amp;#181;m cell strainers</td><td>Fisher</td><td>22363549</td><td></td></tr><tr><td>50 ml conical tubes</td><td>Fisher</td><td>12565270</td><td></td></tr><tr><td>6-well plate</td><td>Fisher</td><td>130184</td><td></td></tr><tr><td>FACS tubes</td><td>Fisher</td><td>14-959-5</td><td></td></tr><tr><td>0.45 &amp;mu;m syringe filters</td><td>Fisher</td><td>0974061B</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM</td><td>Gibco</td><td>31985-070</td><td></td></tr><tr><td>ACK buffer</td><td>Lonza</td><td>10-548E</td><td>Can be homemade</td></tr><tr><td>Recombinant murine IL-3</td><td>Peprotech</td><td>213-13</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant murine IL-6</td><td>Peprotech</td><td>216-16</td><td></td></tr><tr><td>Recombinant murine SCF</td><td>Peprotech</td><td>250-03</td><td></td></tr><tr><td>X-tremeGENE 9</td><td>Roche</td><td>6365809001</td><td>Transfection reagent</td></tr><tr><td>1.5 ml centrifuge tubes</td><td>USA Scientific</td><td>1615-5500</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Equipment&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>BD Accuri C6</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>X-ray irradiator</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

transduction-transplantation mouse model of myeloproliferative neoplasm

Transduction-transplantation is a quick and efficient way to model human hematologic malignancies in mice. This technique results in expression of the gene of interest in hematopoietic cells and can be used to study the gene's role in normal and/or malignant hematopoiesis. This protocol provides a detailed description on how to perform transduction-transplantation using calreticulin (CALR) mutations recently identified in myeloproliferative neoplasm (MPN) as an example. In this protocol whole bone marrow cells from 5-flurouracil (5-FU) treated donor mice are transduced with a retrovirus encoding mutant CALR and transplanted into lethally irradiated syngeneic hosts. Donor cells expressing mutant CALR are marked with green fluorescent protein (GFP). Transplanted mice develop an MPN phenotype including elevated platelets in the peripheral blood, expansion of megakaryocytes in the bone marrow, and bone marrow fibrosis. We provide a step-by-step account of how to generate retrovirus, calculate viral titer, transduce whole bone marrow cells, and transplant into irradiated recipient mice.

transdüksiyon Nakil tekniği hücreler, ilgilenilen geni eksprese eden alıcı farelerin hematopoietik sulandırma ile sonuçlanır. Şekil 1 MPN mutasyona uğramış kalretikulin transdüksiyon-transplantasyon fare modelinin bir özetini göstermektedir. Kısaca, CALRwt ya CALRdel52 eksprese retrovirüs bir C57B / 6 verici fare BM hücrelerini enfekte etmek için kullanılır. Transduced hücreler ilk ay sonrası nakli sırasında meydana ışınlanmış C57B / 6 alıc...

Watch this Scientific Journal Video about Transduction-Transplantation Mouse Model of Myeloproliferative Neoplasm at JoVE.com

Transduction-Transplantation Mouse Model of Myeloproliferative Neoplasm

This manuscript provides a description of the methodology used to establish transduction-transplantation mouse models. A detailed account is given of technical errors to avoid when performing bone marrow transplants. A clear understanding should be gained of the importance of high viral titer, transfection/transduction, and irradiation.

Myeloproliferatif tümörün İletimi-Transplantasyon Fare Modeli

Transduction-transplantation is a quick and efficient way to model human hematologic malignancies in mice. This technique results in expression of the ...

transduction-transplantation-mouse-model-myeloproliferative

Research

JoVE Journal

Cancer Research

11.8K Görüntüleme.  University of California, Irvine. This manuscript provides a description of the methodology used to establish transduction-transplantation mouse models. A detailed account is given of technical errors to avoid when performing bone marrow transplants. A clear understanding should be gained of the importance of high viral titer, transfection/transduction, and irradiation. 

Video: Transduction-Transplantation Mouse Model of Myeloproliferative Neoplasm

Multimodal Bioluminescent and Positronic-emission Tomography/Computational Tomography Imaging of Multiple Myeloma Bone Marrow Xenografts in NOG Mice

Multiple myeloma (MM) tumors engraft in the bone marrow (BM) and their survival and progression are dependent upon complex molecular and cellular interactions that exist within this microenvironment. Yet the BM microenvironment cannot be easily replicated in vitro, which potentially limits the physiologic relevance of many in vitro and ex vivo experimental models. These issues can be overcome by utilizing a xenograft model in which luciferase (LUC)-transfected 8226 MM cells will specifically engraft in the mouse skeleton. When these mice are given the appropriate substrate, D-luciferin, the effects of therapy on tumor growth and survival can be analyzed by measuring changes in the bioluminescent images (BLI) produced by the tumors in vivo. This BLI data combined with positronic-emission tomography/computational tomography (PET/CT) analysis using the metabolic marker 2-deoxy-2-(18F)fluoro-D-glucose (18F-FDG) is used to monitor changes in tumor metabolism over time. These imaging platforms allow for multiple noninvasive measurements within the tumor/BM microenvironment.

Here we use bioluminescent, X-ray, and positron-emission tomography/computed tomography imaging to study how inhibiting mTOR activity impacts bone marrow-engrafted myeloma tumors in a xenograft model. This allows for physiologically relevant, non-invasive, and multimodal analyses of the anti-myeloma effect of therapies targeting bone marrow-engrafted myeloma tumors in vivo.

Multipl Miyelom kemik iliği Xenografts NOG farelerde Multimodal kollarındaki ve pozitronik emisyon tomografi/Hesaplamalı tomografi görüntüleme

Multiple myeloma (MM) tumors engraft in the bone marrow (BM) and their survival and progression are dependent upon complex molecular and cellular ...

Kanser Araştırmaları

Intra-Peritoneal Transplantation for Generating Acute Myeloid Leukemia in Mice

There is an unmet need for novel therapies to treat acute myeloid leukemia (AML) and the associated relapse that involves persistent leukemia stem cells (LSCs). An experimental AML rodent model to test therapies based on successfully transplanting these cells via retro-orbital injections in recipient mice is fraught with challenges. The aim of this study was to develop an easy, reliable, and consistent method to generate a robust murine model of AML using an intra-peritoneal route. In the present protocol, bone marrow cells were transduced with a retrovirus expressing human MLL-AF9 fusion oncoprotein. The efficiency of lineage negative (Lin-) and Lin-Sca-1+c-Kit+ (LSK) populations as donor LSCs in the development of primary AML was tested, and intra-peritoneal injection was adopted as a new method to generate AML. Comparison between intra-peritoneal and retro-orbital injections was done in serial transplantations to compare and contrast the two methods. Both Lin- and LSK&#160;cells transduced with human MLL-AF9 virus engrafted well in the bone marrow and spleen of recipients, leading to a full-blown AML. The intra-peritoneal injection of donor cells established AML in recipients upon serial transplantation, and the infiltration of AML cells was detected in the blood, bone marrow, spleen, and liver of recipients by flow cytometry, qPCR, and histological analyses. Thus, intra-peritoneal injection is an efficient method of AML induction using serial transplantation of donor leukemic cells.

Here, intra-peritoneal injection of leukemia cells is utilized to establish and propagate acute myeloid leukemia (AML) in mice. This new method is effective in the serial transplantation of AML cells and can serve as an alternative for those who may experience difficulties and inconsistencies with intravenous injection in mice.

Farelerde akut miyeloid lösemi üretmek için intra-peritoneal transplantasyon

There is an unmet need for novel therapies to treat acute myeloid leukemia (AML) and the associated relapse that involves persistent leukemia stem cells ...

Co-Culture and Transduction of Murine Thymocytes on Delta-Like 4-Expressing Stromal Cells to Study Oncogenes in T-Cell Leukemia

Transduced mouse immature thymocytes can be differentiated into T cells&#160;in vitro&#160;using the delta-like 4-expressing bone marrow stromal cell line co-culture system (OP9-DL4). As retroviral transduction requires dividing cells for transgene integration, OP9-DL4 provides a suitable in vitro environment for cultivating hematopoietic progenitor cells. This is particularly advantageous when studying the effects of the expression of a specific gene during normal T cell development and leukemogenesis, as it allows researchers to circumvent the time-consuming process of generating transgenic mice. To achieve successful outcomes, a series of coordinated steps involving the simultaneous manipulation of different types of cells must be carefully performed. Although these are very well-established procedures, the lack of a common source in the literature often means a series of optimizations are required, which can be time-consuming. This protocol has been shown to be efficient in transducing primary thymocytes followed by differentiation on OP9-DL4 cells. Detailed here is a protocol that can serve as a quick and optimized guide for the co-culture of retrovirally transduced thymocytes on OP9-DL4 stromal cells.

This protocol describes the isolation of double-negative thymocytes from the mouse thymus followed by retroviral transduction and co-culture on the delta-like 4-expressing bone marrow stromal cell line co-culture system (OP9-DL4) for further functional analysis.

T Hücreli Lösemide Onkogenleri İncelemek için Delta Benzeri 4 Eksprese Eden Stromal Hücreler Üzerinde Murin Timositlerinin Ko-Kültürü ve Transdüksiyonu

Transduced mouse immature thymocytes can be differentiated into T cells&#160;in vitro&#160;using the delta-like 4-expressing bone marrow stromal cell line ...

Retroviral Transduction of Bone Marrow Progenitor Cells to Generate T-cell Receptor Retrogenic Mice

T cell receptor (TCR) signaling is essential in the development and differentiation of T cells in the thymus and periphery, respectively. The vast array of TCRs proves studying a specific antigenic response difficult. Therefore, TCR transgenic mice were made to study positive and negative selection in the thymus as well as peripheral T cell activation, proliferation and tolerance. However, relatively few TCR transgenic mice have been generated specific to any given antigen. Thus, studies involving TCRs of varying affinities for the same antigenic peptide have been lacking. The generation of a new TCR transgenic line can take six or more months. Additionally, any specific backcrosses can take an additional six months. In order to allow faster generation and screening of multiple TCRs, a protocol for retroviral transduction of bone marrow was established with stoichiometric expression of the TCR&#945; and TCR&#946; chains and the generation of retrogenic mice. Each retrogenic mouse is essentially a founder, virtually negating a founder effect, while the length of time to generate a TCR retrogenic is cut from six months to approximately six weeks. Here we present a rapid and flexible alternative to TCR transgenic mice that can be expressed on any chosen background with any particular TCR.

We present a rapid and flexible protocol for a single T cell receptor (TCR) retroviral-based in vivo expression system. Retroviral vectors are used to transduce bone marrow progenitor cells to study T cell development and function of a single TCR in vivo as an alternative to TCR transgenic mice.

Kemik iliği projenitör hücrelerinin retroviral İletimi T-hücre reseptör Retrogenic fareler üretmek için

T cell receptor (TCR) signaling is essential in the development and differentiation of T cells in the thymus and periphery, respectively.  The vast array ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

<meta charset="utf8"></head><body>Spinal Kord Gliomu için Verimli ve Hassas Fare Modeli Geliştirme

Surgical Transplantation of Tumor Cells into the Spinal Cord of Mice

Spinal cord gliomas are commonly malignant tumors of the spinal cord, leading to a high rate of disability. However, uniform treatment guidelines and comprehensive data on spinal cord gliomas remain limited due to the lack of suitable preclinical animal models. Developing a simple and reproducible animal model has become essential for advancing basic and translational research. A murine model is ideal, as the murine spinal cord shares structural similarities with the human spinal cord. This protocol describes the generation of a reproducible murine model of spinal cord glioma by directly injecting tumor cells into the intervertebral space using the spinous process of the seventh cervical vertebra as a guide. Compared to other methods, this approach is more effective and convenient, involving a smaller incision, reduced invasiveness and blood loss, faster recovery, and more stable tumor formation. This model is expected to advance the understanding of disease mechanisms, optimize surgical strategies, and support the development of therapeutic drugs for spinal cord gliomas.

<meta charset="utf8"></head><body>Tümör Hücrelerinin Farelerin Omuriliğine Cerrahi Nakli

The present protocol describes the development of a reproducible murine model of spinal cord glioma by injecting tumor cells into the intervertebral space, offering a more effective and less invasive approach for research and therapeutic development.

Tümör Hücrelerinin Farelerin Omuriliğine Cerrahi Nakli

Spinal cord gliomas are commonly malignant tumors of the spinal cord, leading to a high rate of disability. However, uniform treatment guidelines and ...

Bone Marrow Transplantation Platform to Investigate the Role of Dendritic Cells in Graft-versus-Host Disease

Allogeneic bone marrow transplantation (BMT) is an effective therapy for hematological malignancies due to the graft-versus-leukemia (GVL) effect to eradicate tumors. However, its application is limited by the development of graft-versus-host disease (GVHD), a major complication of BMT. GVHD is evoked when T-cells in the donor grafts recognizealloantigen expressed by recipient cells and mount unwanted immunological attacks against recipient healthy tissues. Thus, traditional therapies are designed to suppress donor T-cell alloreactivity. However, these approaches substantially impair the GVL effect so that the recipient&#39;s survival is not improved. Understanding the effects of therapeutic approaches on BMT, GVL, and GVHD, is thus essential. Due to the antigen-presenting and cytokine-secreting capacities to stimulate donor T-cells, recipient dendritic cells (DCs) play a significant role in the induction of GVHD. Therefore, targeting recipient DCs becomes a potential approach for controlling GVHD. This work provides a description of a novel BMT platform to investigate how host DCs regulate GVH and GVL responses after transplantation. Also presented is an effective BMT model to study the biology of GVHD and GVL after transplantation.

Graft-versus-host disease is a major complication after allogeneic bone marrow transplantation. Dendritic cells play a critical role in the pathogenesis of graft-versus-host disease. The current article describes a novel bone marrow transplantation platform to investigate the role of dendritic cells in the development of graft-versus-host disease and the graft-versus-leukemia effect.

Kemik İliği Transplantasyon Platformu Greft-versus-Host Hastalığında Dendritik Hücrelerin Rolünü Araştırmak Için

Allogeneic bone marrow transplantation (BMT) is an effective therapy for hematological malignancies due to the graft-versus-leukemia (GVL) effect to ...

Bone Marrow Transplantation Procedures in Mice to Study Clonal Hematopoiesis

Clonal hematopoiesis is a prevalent age-associated condition that results from the accumulation of somatic mutations in hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs). Mutations in driver genes, that confer cellular fitness, can lead to the development of expanding HSPC clones that increasingly give rise to progeny leukocytes harboring the somatic mutation. Because clonal hematopoiesis has been associated with heart disease, stroke, and mortality, the development of experimental systems that model these processes is key to understanding the mechanisms that underly this new risk factor. Bone marrow transplantation procedures involving myeloablative conditioning in mice, such as total-body irradiation (TBI), are commonly employed to study the role of immune cells in cardiovascular diseases. However, simultaneous damage to the bone marrow niche and other sites of interest, such as the heart and brain, is unavoidable with these procedures. Thus, our lab has developed two alternative methods to minimize or avoid possible side effects caused by TBI: 1) bone marrow transplantation with irradiation shielding and 2) adoptive BMT to non-conditioned mice. In shielded organs, the local environment is preserved allowing for the analysis of clonal hematopoiesis while the function of resident immune cells is unperturbed. In contrast, the adoptive BMT to non-conditioned mice has the additional advantage that both the local environments of the organs and the hematopoietic niche are preserved. Here, we compare three different hematopoietic cell reconstitution approaches and discuss their strengths and limitations for studies of clonal hematopoiesis in cardiovascular disease.

We describe three methods of bone marrow transplantation (BMT): BMT with total-body irradiation, BMT with shielded irradiation, and BMT method with no pre-conditioning (adoptive BMT) for the study of clonal hematopoiesis in mouse models.

Klonal Hematopoez Çalışması İçin Farelerde Kemik İliği Nakli İşlemleri

Clonal hematopoiesis is a prevalent age-associated condition that results from the accumulation of somatic mutations in hematopoietic stem and progenitor ...

Production of Humanized Mouse via Thymic Renal Capsule Grafting, CD34+ Cells Injection, and Cytokine Delivery

Animal models provide a vital translation between in vitro and in vivo biomedical research. Humanized mouse models provide a bridge in the representation of human systems, thereby allowing for a more accurate study of pathogenesis, biomarkers, and many other scientific queries. In this method described, immune-deficient NOD-scid IL2R&#947;null (NSG) mice are implanted with autologous thymus, injected with liver-derived CD34+ cells followed by a series of injected cytokine deliveries. In contrast to other models of a similar nature, the model described here promotes an improved reconstitution of immune cells by delivering cytokines and growth factors via transgenes encoded in AAV8 or pMV101 DNA-based vectors. Moreover, it offers long-term stability with reconstituted mice having an average lifespan of 30 weeks after CD34+ injections. Through this model, we hope to provide a stable and impactful method of studying immunotherapy and human disease in a murine model, thus demonstrating the need for predictive preclinical models.

Production of Humanized Mouse via Thymic Renal Capsule Grafting, CD34+ Cells Injection, and Cytokine Delivery

Humanized mouse models provide a more accurate representation of the human immune microenvironment. This manuscript describes the process in which these models are created through a renal graft of human thymus, injection of human CD34+ cells, and the targeted delivery of human cytokine transgenes to promote CD34+ cell proliferation and differentiation.

Animal models provide a vital translation between in vitro and in vivo biomedical research. Humanized mouse models provide a bridge in the representation ...

Myeloproliferatif tümörün İletimi-Transplantasyon Fare Modeli

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Multipl Miyelom kemik iliği Xenografts NOG farelerde Multimodal kollarındaki ve pozitronik emisyon tomografi/Hesaplamalı tomografi görüntüleme

Farelerde akut miyeloid lösemi üretmek için intra-peritoneal transplantasyon

T Hücreli Lösemide Onkogenleri İncelemek için Delta Benzeri 4 Eksprese Eden Stromal Hücreler Üzerinde Murin Timositlerinin Ko-Kültürü ve Transdüksiyonu

Kemik iliği projenitör hücrelerinin retroviral İletimi T-hücre reseptör Retrogenic fareler üretmek için

Tümör Hücrelerinin Farelerin Omuriliğine Cerrahi Nakli

Tümör Hücrelerinin Farelerin Omuriliğine Cerrahi Nakli

Tümör Hücrelerinin Farelerin Omuriliğine Cerrahi Nakli

Kemik İliği Transplantasyon Platformu Greft-versus-Host Hastalığında Dendritik Hücrelerin Rolünü Araştırmak Için

Klonal Hematopoez Çalışması İçin Farelerde Kemik İliği Nakli İşlemleri

Production of Humanized Mouse via Thymic Renal Capsule Grafting, CD34⁺ Cells Injection, and Cytokine Delivery