Bu yöntem kemik iliği mikro-çevre nin rolü ve engrafted miyelom tümörlerinin sağkalımı ile ilgili anahtar soruları cevaplamak için kullanılabilir. Bu işlemin en büyük avantajı, uzunlamasına anti-ilaç çalışmalarına uygulanabilmekte ve birden fazla biyokimyasal yolu invaziv olmayan bir şekilde tarayıp kullanabilmektedir. Deney günü ilk 8226 Luciferase transfacted hücreleri üç kez buz gibi PBS 200 RCF beş dakika için santimetreve taze buz soğuk PBS içinde pelet resuspend on beş kez altı hücreleri fare başına 200 mikrolitre buz soğuk PBS başına altıncı hücrelere.
Sonraki anestezi keşide dört ila altı haftalık NOG fare ayak çimdik yanıt eksikliği onaylamak ve hayvanın gözlerine oftalmik merhem uygulayın. Hücreleri 26 ölçü iğnesi ile donatılmış bir mililitrelik insülin şırıngasına yükleyin. Fareyi kafesine geri döndürmeden önce, tüm hücre hacmini hayvanın kuyruk damarına enjekte edin ve tamamen iyileşene kadar izleyin.
On ila yirmi gün sonrası meydan okuma, steril tuzlu intraperitonealy in vivo grade D-luciferin substrat 200 mikrolitre ile her engrafted hayvan enjekte. Anestezili hayvanları enjeksiyondan sonraki 5 ila 10 dakika içinde küçük bir hayvan görüntüleme sistemine yerleştirin. İlgili görüntüleme yazılımı içinde seçilen ilgi bölgelerindeki ortalama parlaklığı ölçün.
8226 Luciferase tümörlerinin hedefli tedavisi için, her hayvanda az önce gösterildiği gibi temel biyolüminesans ölçültükten sonra, hayvanları tedavi gruplarına rastgele dönüştürün ve her fareyi 200 mikrolitrelik TEMsirolimus veya tuzlu kontrol serisi ile tedavi edin. Luciferase aktivitesini haftada iki kez ölçün ve zaman içinde biyolüminesanstaki değişiklikleri planlayın. Tümör metabolizmasındaki değişiklikleri ölçmek için, öncelikle aşırı nonspesifik radyoetiketli Fludeoxyglucose alımını önlemek için 24 saat boyunca farelerin ev kafesinden gıda kaldırın.
Ertesi gün seyreltmek 500 için 100 mikrocuries 18 Flor radyoetiketli Fludeoxyglucose prob steril tuzlu fare başına 100 mikrolitre son hacmine ve bir doz kalibratör ile probların zaman ve aktivite kaydedin. Sondalar hazır olduğunda, ilk anestezili hayvanı, kafası uzağa bakacak şekilde Bir ısıtma yastığına yerleştirin ve 26 gauge iğneyle donatılmış bir mililitrelik insülin şırıngasını kullanarak sondanın 100 mikrolitresini kuyruk damarına enjekte edin. İğne ve şırıngadaki artık radyoaktiviteyi doz kalibratörü ile ölçün ve aktivite ve zamana dikkat edin.
Daha sonra küçük bir hayvan PET CT görüntüleme sisteminde engrafted tümörlere karşılık ilgi seçilen bölgelerde radyoetiketli Fludeoxyglucose aktivitesini ölçmek. Başarılı bir kemik iliği tümörü engraftment gösterildiği gibi biyolüminesans görüntüleme ile teyit edilebilir. Kemik iliği engrafted multipl miyelom tümörlerinin dağılımını görselleştirmek için birden fazla hayvanın seri görüntülemesi kullanılabilir.
Ayrıca optik görüntüleme x-ışını analizi, fare iskeleti içindeki multipl miyelom tümörlerinin tam yerinin ve dağılımının hızlı ve non-invaziv bir belirlenmesini göstermektedir. Bu engrafted tümör hücreleri tarafından üretilen biyolüminesans tümör büyüme değişiklikleri değerlendirmek için seri ve noninvaziv ölçülebilir. Ayrıca, mTOR inhibitörü Temsirolimus ile tedavi edilen farelerin sağkalımları izlenebilir ve tümör radyoetiketli Fludeoxyglucose alımı için pozitron emisyonu ve bilgisayarlı tomografi analizi glukoz metabolizmasında Temsirolimus aracılı değişiklikleri göstermek için kullanılabilir.
Bu işlemi gerçekleştirirken IEV hücrelerini enjekte etmek önemlidir. Hücrelerin damara enjekte edilememesi, enjeksiyon bölgesiyakınlarında ilik dışı engrafted tümör hücrelerinin oluşmasına neden oldu. Bu prosedürü takiben, immünohistokimya ve mikro-BT gibi diğer yöntemler kemik mimarisi ve kemik içi ortamının tümör dışı hücresel ve moleküler bileşenleri üzerindeki tümörlerin etkisi ile ilgili soruları ele almak için kullanılabilir.
