Bu pankreas kanalı infüzyon prosedürünün genel amacı, pankreasta soy izleme, gen girişi ve hücre hattına özgü hedeflemeyi etkinleştirmektir. Bu yöntem, kronik pankreatit, diyabet ve pankreas kanseri de dahil olmak üzere pankreası etkileyen hastalıklarla ilgili önemli soruları yanıtlamaya yardımcı olabilir. Başlamak için, uyuşturulmuş bir fareyi, karnı görüş alanının ortasına yerleştirilmek üzere bir diseksiyon mikroskobun altına yerleştirin.
Hayvanı cerrahi bir bantla hareketsiz hale koyun ve daha sonra kurumasını önlemek için gözlerine oftalmik bir merhem uygulayın. Daha sonra, farenin karnını kalın bir epilasyon kremi tabakası ile örtün. Ve yaklaşık üç dakika sonra, tüm saçları çıkarmak için kremayı% 70 etanol içine batırılmış gazlı bezle hafifçe silin.
Son olarak, cildi% 70 etanol ile silin, ardından herhangi bir kirleticiyi çıkarmak ve cildi dezenfekte etmek için% 10 povidone iyot çözeltisi. Ameliyata başlamak için, neşterle xiphoid işleminden umbilicus'a uzanan orta çizgili bir cilt kesisi oluşturun. Daha sonra Adson tokmalarını kullanarak peritonları kaldırın ve makasla küçük bir orta hat deliği yapın.
Peritonun orta çizgisi boyunca kesimi genişletin, böylece uzunluğu cilt kesisinin uzunluğuna eşit olacaktır. Daha sonra, karaciğeri yukarı çekmek için künt retraktörler kullanın ve ortak safra kanalını açığa çıkardıktan sonra kavisli bir bulldog vasküler kelepçe ile kelepçeleyin. Duodenumu tanımlayın ve Arruga toparlamaları ile, duodenumun ikinci bölümünün ön yüzeyinde beyaz bir nokta olarak görünen papillayı görüntülemek için kaudally dışarı çekin.
Pankreas kanalını tanımlamak için duodenumu kaudally olarak çekin, ardından duodenuma teğetsel olarak 30-1/5 kalibrelik bir iğne yerleştirin ve duvarında papillanın tam karşısında bir delinme yapın. Çözeltiyi demlendirmek için, oluşturulan duodenotomi yoluyla bir infüzyon pompasına bağlı kateteri tanıtın ve damar içinde görünene kadar kanal boyunca kaydırın, ancak küçük düktal kolları atlamaktan kaçınmak için bir santimetreden fazla değildir. Kateteri ikinci bir kavisli bulldog vasküler kelepçe ile sıkıştırarak hareketsiz hale alın.
Daha sonra çözeltinin 150 mikrolitresinin kanala infüzyonunu başlatmak için pompayı açın. Daha sonra, aşılanmış hacim kaybını önlemek için farenin peritonlarına yaklaşık 1,5 mililitre salin enjekte edin ve ardından kurumaya karşı korumak için açıkta kalan bağırsağı nemlendirilmiş bir gazlı bezle örtün. İnfüzyon tamamlandıktan sonra, hareketsiz kateteri serbest bırakın ve bulldog kelepçesini kullanarak pankreas kanalından hafifçe çıkarın.
Daha sonra kelepçeyi ortak safra kanalından serbest bırakın. Periton ve cildi sürekli olarak tek bir tabaka halinde dikerek kapatın ve ikincisi ertesi gün verilecek olan iki doz analjezik dozdan ilkini uygulayın. Daha sonra fareyi bir ısı lambası altında yerleştirilmiş bir kafese geri döndürün ve hayvana yiyecek ve su reklam libitumunu sağlayın.
Sternal reumbency'de kendini gösteren yeterli bilince kavuşana kadar fareyi gözlemleyin. Ameliyattan yedi gün sonra, ötanazi hayvan pankreasının yanı sıra dalak, karaciğer ve duodenumdan tüketim kontrol görevi eder. İzole edilmiş dokuların tamamını %4 paraformaldehit çözeltisine daldırın ve bir gecede dört santigrat derecede sabitlayın.
Dokular sabitlendikten sonra, kriyo numuneleri bir gecede dört santigrat derecede% 30 sakkaroz çözeltisine batırarak korur. Bir gecede kriyo korumasından sonra, numuneleri sıvı nitrojende dondurun ve bir mikrotom kullanarak doku bölümlerini altı mikrometrede kesin. Son olarak, bölümleri floresan mikroskop altında görüntüleyin.
Burada, sahte ameliyattan yedi gün sonra farelerden çıkarılan pankreas bölümlerinin mikroskobik görüntüleri ve GFP genini taşıyan AAV8'in pankreas kanalı infüzyonu sunulmaktadır. Karaciğer, dalak ve duodenum AAV8 ile aşılanan fareden izole herhangi bir GFP sinyali göstermezken, pankreas belirgin GFP ekspresyonu ortaya koydu ve pankreas kanalı infüzyonunu takiben virüsün pankreasa özgü doğumunu doğruladı. Ustalaştıktan sonra, bu teknik düzgün yapıldığında 10 dakika içinde yapılabilir.
Bu işlemi gerçekleştirirken, dikkatli diseksiyon yapmak ve kateterin tanıtımı için mümkün olan en küçük duodenotomiyi yapmak çok önemlidir. Gelişiminden sonra, teknik pankreası inceleyen araştırmacıların hem kemirgen hem de daha büyük hayvan modellerinde kronik pankreatit, diyabet ve pankreas kanseri de dahil olmak üzere organı etkileyen bir dizi patolojiyi araştırmalarının yolunu açtı. Bu videoyu izledikten sonra, pankreas kanalını hem etkili hem de seçici olarak nasıl demleyebileceğinizi çok iyi anlamalısınız.
