Yazarlar, hayvanların taşınmasıyla ilgili yardımları için Bayan Tin Min Qi ve Dr. Veluchamy Amutha Barathi&#39;ye ve ekibine teşekkür etmek istiyorlar. Bu çalışma NHIC-I2D-1409007, SingHealth Vakfı SHF / FG586P / 2014 ve NMRC / CSA / 045/2012 tarafından desteklendi.

Hayvanlar, kurumsal kılavuz ilkelere ve Oftalmik ve Vizyon Araştırmalarında Hayvanların Kullanımı için ARVO Bildirisine göre ele alınmıştır. Çalışma protokolü, SingHealth&#39;in Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanım Komitesi tarafından onaylandı. 1. Lakrimal Bez Hulasası Hazırlanması NOT: Sıçanlar intraperitoneal ketamin (75 mg / kg) ve xylazine (10 mg / kg) enjeksiyonu ile anestezi altına alındı. Doğru anestezi tırnaklanma ve kuyruk sıkıştırması ile doğrulandı. Her prosedürden sonra kuruluğu önlemek için sıçan gözlerine oftalmik jel uygulandı. Anestezi edilmiş sıçanlar hayvanları tamamen iyileşene kadar sıcak tutmak için uzak kızılötesi ışıkların altına yerleştirildi. İşlemler ve iyileşme süresi boyunca, hayvanlar araştırmacılar tarafından yakından takip edildi. Tüm malzemeler ve cerrahi aletler kullanımdan önce sterildir. Deneyin sonunda sıçanlar intraperitoneal pentobarbital (80 mg / kg) enjeksiyonu ile ötenazi yapıldı.Tam ötanazi, göz kağıdına dokunmak suretiyle kardiyak nabız yokluğu ve göz kırpma refleksi olmadığı doğrulandı. Sıçanlar, standart koşullar altında muhafaza edildi: oda sıcaklığı, 21-23 ° C; Bağıl nem,% 30-70; Açık-karanlık döngüsü, 12 saat (7:00 - 7:00) arasında değişme. <ol><li> Ötenazi yapılmış dişi Sprague-Dawley sıçanlarını (8 haftadan 16 haftaya kadar yaş aralığı) masaya bir kulak ve diğeri yukarı bakacak şekilde düz duracak şekilde yerleştirin. Açığa vurulmuş kulağın altında, bir çift yay makasıyla, 10 mm&#39;lik bir kesi daha üstün bir şekilde yapın. Lakrimal bezin çevresindeki bağ dokusundan ve drenaj kanalından ayrılmasıyla çıkarın. <ol><li> Gerekli olana kadar bezleri -80 ° C&#39;de saklayın. Bezleri buz üzerinde çözdürün. Makaslı buzda olabildiğince ince kıymalayın. Lakrimal bez başına 1x proteaz inhibitörü ile 150 μL PBS ekleyin. </li></ol></li><li> Sonicatör 10 saniyede,% 10 genlikle 10 s kapalı olarak ayarlanarak 20 kHz&#39;de 5 dakika boyunca buz üzerinde örnekleri sonikasyon yapın. Oğlu santrifüjleyin13.000 xg&#39;de ve 4 ° C&#39;de 20 dakika bekletildi. </li><li> Süpernatanı pipetleyin ve yeni bir tüpe aktarın. Süpernatantı 1.5 mL tüplere bölün ve -80 ° C&#39;de saklayın. Protein konsantrasyonunu, üreticinin talimatlarına göre bir bicinchoninic acid assay 22 ile ölçün. </li></ol> 2. Emülsiyon ve Boğmaca Toksininin Hazırlanması <ol><li> Emülsiyon <ol><li> Isı ile öldürülen Mycobacterium tuberculosis H37Ra 40 mg&#39;ını, 1 mg / mL Mycobacterium tuberculosis H37Ra içeren 10 ml&#39;lik komple Freund&#39;un adjuvantına ilave edin ve iyice karıştırın . NOT: Nihai komple Freund adjuvanı, 5 mg / mL Mycobacterium tuberculosis H37Ra içerir. </li><li> Ovalbüminyum tartılır, PBS içinde çözülür ve 2 mg / mL ovalbümin ve 10 mg / mL gözyaşı bezi özütü içeren bir antijen karışımı hazırlanır. Her bir hayvan için 200 μL&#39;lik bir enjeksiyon hacmi elde etmeyi amaçlayan bir ana karışım hazırlamak bHayvan sayılarına göre. </li><li> Antijen karışımına adjuvan hacminin 1: 1 oranında olmasını sağlayarak, tamamlanmamış Freund&#39;un adjuvantını veya komple Freund&#39;un adjuvanını 50 mL&#39;lik bir tüpe aktarın. Sıçrama ile sonuçlanmayan en yüksek hızda vorteks yaparken antijen karışımını damla damla adjuvana ilave edin. Tüm antijen eklendikten sonra 5 dakika vorteks işlemine devam edin. </li><li> Emülsiyonu 5 mL&#39;lik şırıngaya aktarın ve şırınga konektöründen başka bir 5 mL&#39;lik şırıngaya bağlayın. Karıştırmak için emülsiyonu bir şırıngadan diğerine doğru itin. NOT: Suya konulduğunda tek bir damla bir küre olarak kalırsa emülsiyon hazırdır. Sadece yeni hazırlanmış emülsiyon veya emülsiyon, gece boyunca 4 ° C&#39;de saklanmalıdır. </li></ol></li><li> Boğmaca toksini <ol><li> 100 ng / μL&#39;lik bir nihai konsantrasyonu sağlamak için 500 μL suda 50 μg boğmaca toksini yeniden yapılandırın. Tondan 30 saniye süreyle kap koyun.Oksin tamamen çözülür. NOT: Filtrasyonla sterilize etmeyin, aksi takdirde malzeme kaybı olur. Donma. Bu çözüm, 4 ° C&#39;de en az 6 ay süreyle aktif kalır. </li><li> PBS kullanarak, 100 ng / μL boğmaca toksini 3 ng / μL&#39;ye seyreltin. Seyreltilmiş boğmız toksini 100 mcL&#39;yi, 27 G&#39;lik bir iğne ile 1 mL&#39;lik bir Luer-kilit enjeksiyon şırıngasına aktarın. </li></ol></li></ol> 3. Lewis Sıçanlarının Aşılanması <ol><li> 0 gününde, emülsiyon birkaç kez karıştırın. 1 μg lakrimal bez özü ve 200 μg ovalbümin içeren komple Freund adjuvanını içeren 200 μL emülsiyon, 27G iğneli 1 mL Luer-lock şırıngalara dağıtılmalıdır. Emülsiyonu, anestezi olmadan sıçan kuyruklarının tabanında subkutan yoldan enjekte edin. NOT: Kuyruk, enjeksiyondan önce önceden ısıtılması gerekmez. Her sıçan, 1 μg lakrimal bez özütü ve 200 μg ovalbümin ile komple Freund adjuvanı ile bağışıklanmıştırH 500 ug Mycobacterium tuberculosis H37Ra . </li><li> 14. günde, tamamlanmamış Freund&#39;s adjuvanında 1 mg gözyaşı bezi özü ve 200 μg ovalbümin içeren 200 uL emülsiyon, 0 gün ile aynı şekilde enjekte edin. 100 ul PBS içinde intraperitoneal olarak 300 ng boğmaca toksini enjekte edin Aynı gün sıçan başına. </li></ol> 4. Antijene Belli Bağışık Hücrelerin Alımı İçin Forniceal Subkonjonktiva ve Lakrimal Bandı içine Antijen Karışımının Enjekte Edilmesi ve Lokal İnflamasyona Neden Olarak <ol><li> Deneydeki sıçanların sayısına göre ovalbümin ve gözyaşı salgıları miktarını hesaplayın. İstenen miktarda ovalbümin tartılır ve 1 mg / mL ovalbümin ve 1 mg / mL gözyaşı bezi özütü içeren antijen solüsyonu hazırlanarak, 1. adımda hazırlanan çözülmüş lakrimal bez özütü ile birleştirilir. </li><li> Sıçanları, intraperitoneal enjeksiyon yoluyla ketamine (75 mg / kg) ve xylazine (10 mg / kg) ile anestezi altına alınız. To&#39;yu sıkıştırUygun anestezinin sağlandığından emin olmak için sıçanların hepsini ( yani, tutamdan sonra tepkisel hareket gözlemlenmemektedir). Gözün forniceal subkonjonktiva&#39;sına 5 μL antijen enjekte edin. Lakrimal bezin içine 20 uL antijen enjekte edin. </li></ol> 5. Kuru Göz Özelliklerinin Değerlendirilmesi NOT: Adım 5.1-5.3 için, anestezi uygulanmış sıçanlar, hareket etmemek için eldivenli bir elle düz bir yüzeye dik duran bir şekilde tutturmalıdır. <ol><li> Gözyaşı hacmini fenol kırmızısı ile ölçün. <ol><li> İpliği tutmak için bir çift forseps kullanın ve sıçanın alt göz kapağını çekmek için başka bir forseps kullanın. İpliği alt forniksin proksimal köşesine 1 dakika yerleştirin ve sonra ipliği çıkarın. NOT: Gözyaşları, ipliğin ıslanan kısmını kırmızı renkte yapar. </li><li> Cırtlıın yanındaki ipliğin ıslak kısmının uzunluğunun bir görüntüsünü milimetre işaretlerle alın. Onuncu oya kadar ıslak uzunluğu ölçünFa milimetre görüntü yazılımı ( örn., ImageJ) kullanarak. </li></ol></li><li> Kornea / gözyaşı yumuşaklığını ölçün. <ol><li> Fareyi bir halka aydınlatıcı ve bir kamera bulunan bir stereomikroskopun altına yerleştirin. Sıçan korneasına 5 uL tuzlu su uygulayın. Salin yaymak için üst ve alt göz kapaklarını eldivenli parmaklarla ~ 5 kez hareket ettirerek pasif olarak yanıp söner. </li><li> Koruyucu yüzeyinin ortasındaki halka aydınlatıcıyı 1.6x büyütme altında odaklayın. 10 saniyeden sonra fotoğraf görüntüleri elde edin. NOT: Halka aydınlatıcı, hayvanın kornealarındaki iki dairesel nokta görüntüsü çizgilerini yansıtmaktadır. Çarpık noktaların düzenli aralıklarla düzgün bir kornea / gözyaşı tabakası geldiğini düşündürüyor. </li></ol></li><li> Floresein boyaması ile kornea hasarını ölçün. <ol><li> Sıçan korneasına 2 μL% 0.2 floresein ekleyin. Göz yüzeyinde floresan boya yaymak için eldivenli bir parmakla üç kez parmak göz kapaklarını pasif olarak açın ve kapatın. </li><lI&gt; 1 dakika sonra, 3 mL&#39;lik şırıngayla (herhangi bir iğne ataşesi olmadan) 1 mL serum fizyolojik çozunur, şırıngayı korneaya yaklaşık 2-3 mm öne getirin ve hafifçe gözün üzerine tuzlu su salın. </li><li> Arka plan lambaları kapalı olarak oküler görüntüleme mikroskopunun kobalt mavisi filtresinin ( örn. ~ 400 nm) altında görüntüler elde edin. NOT: Daha sonra, görüntüler daha önceki yayımlarda değişiklik yapılmış bir derecelendirme sistemi ile analiz edilmiştir 23 . Görüntüler yeşil lekelerin sayı, alan ve yoğunluğunu 0 ile 2 arasında derecelendirerek analiz edildi; burada 0, yokluğunu, 1&#39;in 50 lekeden az nokta lekelenmesini, ve 2, 50 lekeden fazla nokta lekelenmeyi belirtir. </li></ol></li><li> Sıçanları pentobarbital (80 mg / kg) intraperitonal enjeksiyonu ile inhale edin. Makas kullanarak üst ve alt göz kapaklarını çıkarın. Forseps ile perioküler dokuları aşağı iterek gözbebekleri saptamak ve prolapsus. Dünyayı parçalayarak özgür bırakınEkstraoküler kaslar, optik sinir ve fornikal konjonktiva. </li><li> Sıçan göz küresinin konumunu forsepsle düzeltin ve ekvator boyunca çevresel bir kesi ile açın. Merceği ve vitrini çıkarın. Diseke edilmiş gözbebekleri buz üzerinde 1.5 mL tüplere koyun. </li><li> Adım 1.1&#39;de açıklandığı gibi gözyaşı bezlerini toplayın. Akış sitometrisi analizine hazırlanmak için derine dağıtılan göz kağıdı dokularını ve gözyaşı bezlerini laboratuara hemen aktarın. </li><li> Bağışıklık hücrelerini kollajenaz ve dispase II sindirim yöntemleriyle izole etmek 24 , 25 . Göz dokularındaki T hücresi alt popülasyonunu profillemek için akış sitometrisini kullanmaya devam edin 26 . NOT: Antikor paneli anti-CD45APC-Siyanin 7 (OX-1), anti-CD3 BV421 (1F4), anti-CD4 PE-Siyanin7 (OX-35), anti-CD45RC Alexa647 (OX-22) CD62 PE (HRLl), anti-CD44 FITC (OX-50) ve canlı hücre boyası 7-AAD. CD45 + CD3 arasında <sup&gt; + 7AD - T hücreleri, naif (CD3 + CD45RC + ), efektör bellek (T EM, CD3 + CD45RC - CD44 + CD62L - ) ve merkezi bellek (T CM, CD3 + CD45RC - CD44 + CD62L + ) T hücreleri kapatıldı . </li></ol>

<ol>
	<li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+definition+and+classification+of+dry+eye+disease:+report+of+the+Definition+and+Classification+Subcommittee+of+the+International+Dry+Eye+WorkShop+(2007).">The definition and classification of dry eye disease: report of the Definition and Classification Subcommittee of the International Dry Eye WorkShop (2007).</a> Ocul Surf. 5 (2), 75-92 (2007).</li><li>Gayton, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Etiology,+prevalence,+and+treatment+of+dry+eye+disease.">Etiology, prevalence, and treatment of dry eye disease.</a> Clin Ophthalmol. 3, 405-412 (2009).</li><li>Tong, L., Tan, J., Thumboo, J., Seow, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+dry+eye.">The dry eye.</a> Praxis (Bern 1994). 102 (13), 803-805 (2013).</li><li>Messmer, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathophysiology,+diagnosis,+and+treatment+of+dry+eye+disease.">The pathophysiology, diagnosis, and treatment of dry eye disease.</a> Dtsch Arztebl Int. 112 (5), 71-81 (2015).</li><li>Liu, K. C., Huynh, K., Grubbs, J., Davis, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoimmunity+in+the+pathogenesis+and+treatment+of+keratoconjunctivitis+sicca.">Autoimmunity in the pathogenesis and treatment of keratoconjunctivitis sicca.</a> Curr Allergy Asthma Rep. 14 (1), 403 (2014).</li><li>Stevenson, W., Chauhan, S. K., Dana, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dry+eye+disease:+an+immune-mediated+ocular+surface+disorder.">Dry eye disease: an immune-mediated ocular surface disorder.</a> Arch Ophthalmol. 130 (1), 90-100 (2012).</li><li>Tong, L., Thumboo, J., Tan, Y. K., Wong, T. Y., Albani, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+eye:+a+window+of+opportunity+in+rheumatoid+arthritis.">The eye: a window of opportunity in rheumatoid arthritis.</a> Nat Rev Rheumatol. 10 (9), 552-560 (2014).</li><li>Carnahan, M. C., Goldstein, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ocular+complications+of+topical,+peri-ocular,+and+systemic+corticosteroids.">Ocular complications of topical, peri-ocular, and systemic corticosteroids.</a> Curr Opin Ophthalmol. 11 (6), 478-483 (2000).</li><li>Johannsdottir, S., Jansook, P., Stefansson, E., Loftsson, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+cyclodextrin-based+aqueous+cyclosporin+A+eye+drop+formulations.">Development of a cyclodextrin-based aqueous cyclosporin A eye drop formulations.</a> Int J Pharm. 493 (1-2), 86-95 (2015).</li><li>Prabhasawat, P., Tesavibul, N., Karnchanachetanee, C., Kasemson, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Efficacy+of+cyclosporine+0.05%+eye+drops+in+Stevens+Johnson+syndrome+with+chronic+dry+eye.">Efficacy of cyclosporine 0.05% eye drops in Stevens Johnson syndrome with chronic dry eye.</a> J Ocul Pharmacol Ther. 29 (3), 372-377 (2013).</li><li>Ishimaru, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Severe+destructive+autoimmune+lesions+with+aging+in+murine+Sjogren's+syndrome+through+Fas-mediated+apoptosis.">Severe destructive autoimmune lesions with aging in murine Sjogren's syndrome through Fas-mediated apoptosis.</a> Am J Pathol. 156 (5), 1557-1564 (2000).</li><li>Jonsson, R., Tarkowski, A., Backman, K., Holmdahl, R., Klareskog, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sialadenitis+in+the+MRL-l+mouse:+morphological+and+immunohistochemical+characterization+of+resident+and+infiltrating+cells.">Sialadenitis in the MRL-l mouse: morphological and immunohistochemical characterization of resident and infiltrating cells.</a> Immunology. 60 (4), 611-616 (1987).</li><li>Jonsson, R., Tarkowski, A., Backman, K., Klareskog, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunohistochemical+characterization+of+sialadenitis+in+NZB+X+NZW+F1+mice.">Immunohistochemical characterization of sialadenitis in NZB X NZW F1 mice.</a> Clin Immunol Immunopathol. 42 (1), 93-101 (1987).</li><li>Li, H., Dai, M., Zhuang, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+T+cell+intrinsic+role+of+Id3+in+a+mouse+model+for+primary+Sjogren's+syndrome.">A T cell intrinsic role of Id3 in a mouse model for primary Sjogren's syndrome.</a> Immunity. 21 (4), 551-560 (2004).</li><li>Shull, M. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+disruption+of+the+mouse+transforming+growth+factor-beta+1+gene+results+in+multifocal+inflammatory+disease.">Targeted disruption of the mouse transforming growth factor-beta 1 gene results in multifocal inflammatory disease.</a> Nature. 359 (6397), 693-699 (1992).</li><li>Green, J. E., Hinrichs, S. H., Vogel, J., Jay, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Exocrinopathy+resembling+Sjogren's+syndrome+in+HTLV-1+tax+transgenic+mice.">Exocrinopathy resembling Sjogren's syndrome in HTLV-1 tax transgenic mice.</a> Nature. 341 (6237), 72-74 (1989).</li><li>Shen, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+autoimmunity+in+IL-14alpha-transgenic+mice.">Development of autoimmunity in IL-14alpha-transgenic mice.</a> J Immunol. 177 (8), 5676-5686 (2006).</li><li>Hayashi, Y., Hirokawa, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunopathology+of+experimental+autoallergic+sialadenitis+in+C3H/He+mice.">Immunopathology of experimental autoallergic sialadenitis in C3H/He mice.</a> Clin Exp Immunol. 75 (3), 471-476 (1989).</li><li>Liu, S. H., Zhou, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+autoimmune+dacryoadenitis:+purification+and+characterization+of+a+lacrimal+gland+antigen.">Experimental autoimmune dacryoadenitis: purification and characterization of a lacrimal gland antigen.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 33 (6), 2029-2036 (1992).</li><li>Liu, S. H., Prendergast, R. A., Silverstein, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+autoimmune+dacryoadenitis.+I.+Lacrimal+gland+disease+in+the+rat.">Experimental autoimmune dacryoadenitis. I. Lacrimal gland disease in the rat.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 28 (2), 270-275 (1987).</li><li>Jiang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+new+model+of+experimental+autoimmune+keratoconjunctivitis+sicca+(KCS)+induced+in+Lewis+rat+by+the+autoantigen+Klk1b22.">A new model of experimental autoimmune keratoconjunctivitis sicca (KCS) induced in Lewis rat by the autoantigen Klk1b22.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 50 (5), 2245-2254 (2009).</li><li>Walker, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+bicinchoninic+acid+(BCA)+assay+for+protein+quantitation.">The bicinchoninic acid (BCA) assay for protein quantitation.</a> Methods Mol Biol. 32, 5-8 (1994).</li><li>Lin, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+dry+eye+model+induced+by+topical+administration+of+benzalkonium+chloride.">A mouse dry eye model induced by topical administration of benzalkonium chloride.</a> Mol Vis. 17, 257-264 (2011).</li><li>Cousins, S. W., Streilein, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometric+detection+of+lymphocyte+proliferation+in+eyes+with+immunogenic+inflammation.">Flow cytometric detection of lymphocyte proliferation in eyes with immunogenic inflammation.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 31 (10), 2111-2122 (1990).</li><li>Yawata, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamic+change+in+natural+killer+cell+type+in+the+human+ocular+mucosa+in+situ+as+means+of+immune+evasion+by+adenovirus+infection.">Dynamic change in natural killer cell type in the human ocular mucosa in situ as means of immune evasion by adenovirus infection.</a> Mucosal Immunol. 9 (1), 159-170 (2016).</li><li>Chen, Y., Chauhan, S. K., Lee, H. S., Saban, D. R., Dana, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+dry+eye+disease+is+principally+mediated+by+effector+memory+Th17+cells.">Chronic dry eye disease is principally mediated by effector memory Th17 cells.</a> Mucosal Immunol. 7 (1), 38-45 (2014).</li><li>Goldmuntz, E. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+origin+of+the+autoimmune+disease-resistant+LER+rat:+an+outcross+between+the+buffalo+and+autoimmune+disease-prone+Lewis+inbred+rat+strains.">The origin of the autoimmune disease-resistant LER rat: an outcross between the buffalo and autoimmune disease-prone Lewis inbred rat strains.</a> J Neuroimmunol. 44 (2), 215-219 (1993).</li><li>Cahalan, M. D., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+functional+network+of+ion+channels+in+T+lymphocytes.">The functional network of ion channels in T lymphocytes.</a> Immunol Rev. 231 (1), 59-87 (2009).</li></ol>

Yazarların çıkar çatışması yoktur. LT, Alcon, Allergan, Santen, Bausch ve Lomb, Eyelens ve Eyedetec&#39;ten önceden fonlama ve / veya hediye aldı.

Bu protokolün kritik bir adımı, emülsiyonun homojenliğini sağlamaktır. İyi hazırlanmış emülsiyonlarda, antijenler yağ ile tamamen kaplanır, böylece enjekte edilen antijenin yavaş salınması sağlanır ve sürekli bağışıklık uyarımı yapılır. Bu protokolün bir diğer önemli özelliği de Lewis sıçanlarının kullanılmasıdır. Lewis sıçanları otoimmün hastalığın gelişimine diğer suşlardan daha duyarlıdır 27 . Bu protokol, ya önceden lakrimal bez özütü ya da rekombinant Klk1b22 20 , 21&#39;i kullanan önceden yayınlanmış iki protokolden değiştirildi. Mevcut protokolde ovalbümin artı lakrimal bez özütü antijen olarak kullanılır ve antijen spesifik bağışıklık hücreleri oküler yüzey ve lakrimal bezin içine çekilir ve böylece lokal doku hasarına neden olur. Kuru göz, yavaş yavaş gelişir ve ilk bağışıklamadan 48. gün sonra% 85&#39;e ulaşır. Antijenik meydan okumaGöz ve lakrimal bez 48. günde göz kurumasını artırır ve 70. güne kadar kronikleşmesini sağlar. Klk-indüklenen DED modelinde rekombinant Klk1b22 ile kıyaslandığında, mevcut modelde kullanılan lakrimal bez özütü ve ovalbümin daha ucuz ve daha kolay elde edilir. Lakrimal bez özütü, aynı zamanda, otoimmünitesi indirebilen, Klk haricindeki diğer proteinleri de ihtiva eder; bu nedenle, bu öz, teorik olarak DED&#39;i indüklemedeki Klk yönteminden daha etkilidir. Ayrıca fareleri sadece gözyaşı bezi özütü ile bağışıklamayı denedik; Bu aşılanmış sıçanlar DED geliştirmiş olsalar da, göz bezi dokularında efektör bellek T hücrelerinin kontrollerden daha fazla belirgin bir artış göstermedi. Bu tekniğin sınırlandırılması, modelin oluşturulması 70 gün sürmesidir. Efektör bellek T hücreleri normal sıçan gözündeki ana T hücre alt gruplarıdır. Bu modelde, otoimmün DED, göz küresinde CD3 + efektör bellek T hücrelerinde bir artışa neden olur. Bu uyuşturucu prefEtöre sahip hafızayı ertelemek için, Kv1.3 potasyum kanalının seçici inhibitörleri gibi T hücreleri, bu nedenle, otoimmün DED 28 üzerinde terapötik bir fayda sağlayabilir.

Kuru göz hastalığı (DED), göz yüzeyine zarar verebilecek rahatsızlık, görme bozukluğu ve gözyaşı filmi dengesizliği semptomlarına yol açan, gözyaşı ve oküler yüzeyin çok faktörlü bir hastalığıdır. Gözyaşı filminin osmolaritesi artar ve oküler yüzeyin inflamasyonu eşlik eder 1 . DED ile ilişkili semptomlar yanma, batma, gritlik, yabancı cisim hissi, yırtılma, göz yorgunluğu ve kuruluk 2 , 3&#39;tür . DED&#39;in iki temel nedeni, gözyaşı salgı bezi ve gözyaşı filminin aşırı buharlaşmasıyla gözyaşı üretiminin azaltılmasıdır. Sjogren sendromu, sistemik lupus eritematosusu ve romatoid artrit gibi otoimmün hastalıkları olan hastalarda, meibom bezlerine bağışıklık hasarı, gözyaşı kararlılığı için gerekli olan lipidlerin ifadesini azaltır. Ayrıca, göz yüzeyine bağışık hasar oluşması ürünü azaltırYüzey ıslanabilirliği için önemli olan müsinlerin açıklanması. Birlikte, bu işlemler kümülatif olarak kronik göz kurumasına neden olur 5 , 6 , 7 . Gözyaşı replasmanı ve anti-inflamatuar terapi tedavinin temel dayanak noktalarıdır. Bununla birlikte, DED ( yani, kortikosteroidler ve siklosporin) için güncel anti-inflamatuar terapiler , immünsüpresiftir ve ciddi yan etkilere yol açar 8 , 9 , 10 . Otoimmün göz kurumasını engellemek için yeni immünomodülatör ajanların test edilmesi için uygun bir hayvan modeline ihtiyaç duyulmaktadır. Spesifik genetik defekti olan fareler 11 , 12 , 13 , spesifik genlerden yoksun fareler 14 , 15 ve transjenik fareler aşırı ifade immüno-regülasyonOry genleri otoimmün kuru göz modelleri olarak kullanılmıştır 16,17. Antijen kaynaklı otoimmün hayvan modelleri de farelerde 18 , tavşanlarda 19 ve sıçanlarda 20 , 21 bildirilmiştir. Burada antijene bağlı kronik otoimmün göz kuruması modelini açıkladık. Bu model iki önceki modelin bir modifikasyonudur; Biri lakrimal bez özütleri kullandı ve ikincisi lakrimal bezlerden 20 , 21 bir otoantijeni ( örn., Klklb22) kullandı. Hastalık, ovalbümin, komple Freund adjuvanı ile 6-8 haftalık kadın Lewis sıçanlara ve Sprague-Dawley sıçanlarından gözyaşı bezi özütleri içeren emülsiyonun subkutanöz immünizasyonu ile indüklendi ( Şekil 1 ). Tamamlanmamış Freund&#39;s adjuvantında aynı antijen ile ikinci bir aşılama yapıldı.Iki hafta sonra uygulanır. Anti-spesifik bağışıklık hücrelerinin gözyaşı bezi ve oküler yüzeyine alınması için, göz kapağı bez özütü ve ovalbümin (1 mg / mL) karışımı 6. -7 . Haftada forniceal subkonjonktiva ve lakrimal bezlere enjekte edildi ( Şekil 1 ). Farelerin% 85&#39;inden fazlası ilk aşılamadan 70 gün sonra kuru gözün karakteristik özelliklerini geliştirdi. Bu özellikler azalmış gözyaşı üretimi ( Şekil 2 ), artmış korneal flöresein boyama ( Şekil 3 ) ve gözyaşı kararlılığını azaltmıştır ( Şekil 4 ). T hücrelerinin normal sıçanların gözbebeklerinde, akış sitometrisiyle immün profillemesi, CD3 + efektör bellek T hücrelerinin baskınlığını ortaya çıkarmaktadır ( Şekil 5 ve 6 ). Otoimmün DED&#39;li sıçanlar, CD3 + efektör bellek T hücrelerinde bir artış ve naif ve merkezi bellek T hücrelerinde buna karşılık gelen bir azalma göstermektedir ( Şekil 6 </strong&gt;).

<table><tbody><tr><td>&lt;strong&gt;Reagents&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Protease inhibitor cocktail</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P2714-1BTL</td><td></td></tr><tr><td>Pierce BCA Protein Assay Kit</td><td>Thermal Scientific</td><td>23227</td><td></td></tr><tr><td>Mycobacterium tuberculosis H37Ra&amp;nbsp;</td><td>Becton, Dickinson and company</td><td>231141</td><td></td></tr><tr><td>complete Freund&#039;s adjuvant</td><td>Becton, Dickinson and company</td><td>231131</td><td></td></tr><tr><td>ovalbumin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5503-10G</td><td></td></tr><tr><td>incomplete Freund&#039;s adjuvant&amp;nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F5506-6X10ML</td><td></td></tr><tr><td>pertussis toxin&amp;nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P7208-50UG</td><td></td></tr><tr><td>fluorescein sodium solution</td><td>Bausch &amp;amp; Lomb U.K Limited</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Name&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Company&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Catalog Number&lt;/strong&gt;</td><td>&lt;strong&gt;Comments&lt;/strong&gt;</td></tr><tr><td>&lt;strong&gt;Equipment&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sonicator</td><td>Sonics&amp;nbsp;</td><td>Vibra-Cell</td><td></td></tr><tr><td>phenol red thread</td><td>Tianjin Jingming New Technological development Co. LTD.</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Stereo microscope with ring light illuminator and camera</td><td>Carl Zeiss</td><td>NA</td><td></td></tr><tr><td>Micro IV microscope&amp;nbsp;</td><td>Phoenix Research Labs</td><td>NA</td><td></td></tr></tbody></table>

a chronic autoimmune dry eye rat model with increase in effector memory t cells in eyeball tissue

Kuru göz hastalığı morbiditeye ve sağlık yüküne neden olan ve yaşam kalitesini düşüren çok yaygın bir durumdur. Otoimmün kuru göz koşullarını tedavi etmek için yeni terapötik maddeleri test etmek için uygun bir kuru göz hayvan modeline ihtiyaç duyulmaktadır. Bu protokol, kronik otoimmün bir kuru göz sıçan modelini tanımlamaktadır. Lewis sıçanları lakrimal bez özütü, ovalbümin ve komple Freund adjuvanı içeren bir emülsiyonla aşılanmıştır. İki hafta sonra, tamamlanmamış Freund&#39;s adjuvantında aynı antijenlerle ikinci bir aşı oluşturuldu. Bu aşılar, kuyruk tabanında subkütan olarak uygulandı. Oküler yüzeydeki ve lakrimal bezlerdeki bağışıklık tepkisini artırmak için lakrimal bez özütü ve ovalbümin forniceal subkonjonktiva ve lakrimal bezlere ilk bağışıklamadan 6 hafta sonra enjekte edildi. Sıçanlar, gözyaşı üretiminde azalma, gözyaşı stabilitesinde azalma ve kornea hasarında artış gibi kuru göz özellikleri geliştirdi. Bağışıklık yanlısıAkış sitometrisi ile yapılan dosyalama, göz küresinde CD3 + efektör bellek T hücrelerinin baskınlığını gösterdi.

Şekil 1 deney tasarımını göstermektedir. Hem 48. günde hem de 70. günde, kuru göz klinik özellikleri aşılanmış sıçanlarda değerlendirilir. Gözyaşı hacmi, fenol kırmızısı ıslak kısmının uzunluğu ile temsil edilir. Şekil 2 , kontrol ve DED sıçanlarından fenol kırmızısı vasıtalarının temsili görüntülerini göstermektedir. DED grubundaki fenol kırmızının uzunluğu kontrol grubundan daha kısadır, bu da gözyaşı hacminin daha az olduğunu gösterir. Floresein hasarlı kornea epiteline bağlanır. Böylece, kornea hasarı kornea floresan boyaması ile ölçülür. DED sıçanlarının kornea yüzeyindeki floresein lekeleri 0 dan 2&#39;ye derecelendirildi ve kontrol fareleri ile karşılaştırıldı. DED&#39;li sıçanlar, kontrol farelerine göre daha fazla flöresein boyamaya sahiptir ( Şekil 3 ), bu kornea hasarını düşündürmektedir. Korneanın pürüzsüzlüğüDED ve kontrol farelerinde halka aydınlatıcısı tarafından değerlendirildi. Korneal yüzey pürüzsüz, yüksek yırtılma stabilitesi ile, göz yüzeyindeki aydınlatma halkasının görüntüsü yuvarlak ve mükemmeldir. Görüntünün bozulması korneanın düzgünlüğünün azalması ve dengesiz bir gözyaşı filmi olduğunu gösterir. Halkanın bozulma derecesi 0&#39;dan 2&#39;ye derecelendirildi. DED grubunda daha yüksek bir halka bozulma seviyesi kaydedildi ( Şekil 4 ), bu da daha az gözyaşı kararlılığı gösterdi. Kuru göz en az iki klinik özelliği anormal olduğunda fareler kuru gözlü olarak tanımlanır. Bağışıklanmış 24 sıçanın 21 sıçanında 48. günde DED gelişti. Sonuç 70. günde değerlendirildiğinde tutarlıydı. Akış sitometrisi analizi, normal sıçan göz bezindeki baskın T-hücresi alt grubunun efektör hafıza T hücreleri olduğunu göstermektedir ( Şekil 5 ). DED sıçanlarının gözbebeklerinde, CD3&#39;ün ~ 70% &#39;i+ T hücreleri efektör bellek T hücreleridir, kontrol farelerinde ise bu sayı ~% 50&#39;dir. DED sıçanlarının gözbebekleri, kontrol sıçanlara kıyasla efektör bellek T hücrelerini önemli ölçüde daha yüksektir ( Şekil 6 ). <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/55592/55592fig1.jpg" /> Şekil 1: Deneysel Tasarımın Şeması. LG: lakrimal bez; DED: kuru göz hastalığı; CFA: komple Freund adjuvanı; IFA: eksik Freund adjuvanı. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55592/55592fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.</a> <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/55592/55592fig2.jpg" /> Şekil 2: Fenol Kırmızı İplik, gözyaşı hacmini ölçer. Fenol kırmızı ipliği, her iki sıçan gözünün proksimal köşesine 1 dakika boyunca konur ve sonra çıkarılır. MümessilliFenol kırmızısının, cetvelle birlikte hem kontrol hem de DED gruplarından görüntüleri. ImageJ fenol kırmızının ıslak kısmının uzunluğunu ölçmek için kullanıldı. Ölçek çubuğu = 1 mm. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55592/55592fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/55592/55592fig3.jpg" /> Şekil 3: Floresein Boyaması ile Ölçülen Korneal Epitelyal Hasarın Temsil Edici Görüntüleri. Her fare korneası, 1 dakika% 0.2 floresein ile boyandı ve en az 1 mL salin ile yıkandı. Görüntüler, kobalt mavisi ile bir göz görüntüleme mikroskopu altında çekildi. İlk sütunda, kontrol kornealarının temsili görüntüleri gösterilir. İkinci sütunda, DED özellikli sıçanlardan alınan kornea boyanmasının temsili görüntüleri bulunur. Yeşil flüoresan lekeleri kornea epitelini gösterir<html> Ben zarar verdim. Tüm görüntüler aynı renk skalasında üretildi. Floresan boyamanın miktarı, yeşil lekelerin alanına ve yoğunluğuna göre gerçekleştirildi. Ölçek çubuğu = 1 mm. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55592/55592fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 4" src="/files/ftp_upload/55592/55592fig4.jpg" /> Şekil 4: Halka Işıklandırıcının Yansımasını Gösteren Temsilci Kornea Görüntüleri. Sıçan kornea / gözyaşı yumuşaklığı bir halka aydınlatıcısı ile ölçülmüştür. Yakalanan görüntülerde halkanın bozulma derecesi göreli gözyaşı kararlılığının bir ölçüsüdür. Sol sütunda, kontrol hayvanlarındaki temsili imgeler gösterilir ve sağ sütun kuru göz indüksiyonundan sonra temsili görüntüleri gösterir. Ölçek çubuğu = 1 mm.Ank &quot;&gt; Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız. <img alt="Şekil 5" src="/files/ftp_upload/55592/55592fig5.jpg" /> Şekil 5: Akış Sitometri Analizinden Elde Edilen Nokta Plotları. Göz küreleri dokularından izole edilen T hücreleri bir antikor paneli ile boyandı. CD45 + CD3 + 7AAD popülasyonunda, CD3 + 7-AAD - T hücreleri kapılandı. CD3 + 7-AAD - T hücreleri arasında naif, merkezi bellek ve efektör bellek T hücresi popülasyonları belirlendi. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55592/55592fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.</a> <img alt="Şekil 6" src="/files/ftp_upload/55592/55592fig6.jpg" /> Şekil 6: Göz Odasındaki T-Hücre Alt Popülasyon Profili. CD3 + CD45RC+ Naif T hücreleri, CD3 + CD45RC - CD44 + CD62L - efektör bellek T (T EM ) hücreleri ve CD3 + CD45RC - CD44 + CD62L + merkezi bellek T (T CM ) hücreleri CD3 + T hücrelerinin yüzdesi olarak sunulmuştur. Sonuçlar, 3 kontrol sıçanından ve 6 DED sıçandan elde edilmiştir. Benzer sonuçlar, izole lakrimal bezlerden T hücrelerinin analizinden elde edilmiştir (veriler gösterilmemiştir). İstatistiksel karşılaştırma için Eşleştirilmiş Öğrencinin t-testi kullanılmıştır. Hata çubukları SD&#39;yi temsil eder. * P &lt;0.05, ** p &lt;0.01. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/55592/55592fig6large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen tıklayınız.</a>

Watch this Scientific Journal Video about A Chronic Autoimmune Dry Eye Rat Model with Increase in Effector Memory T Cells in Eyeball Tissue at JoVE.com

A Chronic Autoimmune Dry Eye Rat Model with Increase in Effector Memory T Cells in Eyeball Tissue

Bu rapor, sıçan lakrimal bez özütü, ovalbümin ve komple Freund adjuvantının bir emülsiyonu ile bağışıklaştırma yoluyla Lewis sıçanlarında kronik deneysel otoimmün göz kurumasına neden olan bir yöntem ve bunu takiben göz kapağı yumrusu ekstraktı ve ovalbümin forniceal subkonjonktiva ve lakrimal bezlere enjekte edilir. Altı hafta sonra.

Eyeball Dokusunda Efektif Hafıza T Hücrelerini Artıran Kronik Otoimmün Kuru Göz Fare Modeli

Dry eye disease is a very common condition that causes morbidity and healthcare burden and decreases the quality of life. There is a need for a suitable ...

a-chronic-autoimmune-dry-eye-rat-model-with-increase-effector-memory

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

11.4K Görüntüleme.  Singapore Eye Research Insitute, A Member of SingHealth.  Bu rapor, sıçan lakrimal bez özütü, ovalbümin ve komple Freund adjuvantının bir emülsiyonu ile bağışıklaştırma yoluyla Lewis sıçanlarında kronik deneysel otoimmün göz kurumasına neden olan bir yöntem ve bunu takiben göz kapağı yumrusu ekstraktı ve ovalbümin forniceal subkonjonktiva ve lakrimal bezlere enjekte edilir. Altı hafta sonra. 

Video: A Chronic Autoimmune Dry Eye Rat Model with Increase in Effector Memory T Cells in Eyeball Tissue

Experimental Autoimmune Uveitis: An Intraocular Inflammatory Mouse Model

Experimental Autoimmune Uveitis (EAU) is driven by immune cells responding to self-antigens. Many features of this non-infectious, intraocular inflammatory disease model recapitulate the clinical phenotype of posterior uveitis affecting humans. EAU has been used reliably to study the efficacy of novel inflammatory therapeutics, their mode of action and to further investigate the mechanisms that underpin disease progression of intraocular disorders. Here, we provide a detailed protocol on EAU induction in the C57BL/6J mouse - the most widely used model organism with susceptibility to this disease. Clinical assessment of disease severity and progression will be demonstrated using fundoscopy, histological examination and fluorescein angiography. The induction procedure involves subcutaneous&#160;injection of an emulsion containing a peptide (IRBP1-20) from the ocular protein interphotoreceptor retinoid binding protein (also known as retinol binding protein 3), Complete Freund&#39;s Adjuvant (CFA) and supplemented with killed Mycobacterium tuberculosis. Injection of this viscous emulsion on the back of the neck is followed by a single intraperitoneal injection of Bordetella pertussis toxin. At the onset of symptoms (day 12-14) and under general anesthesia, fundoscopic images are taken to assess disease progression through clinical examination. These data can be directly compared with those at later timepoints and peak disease (day 20-22) with differences analyzed. At the same time, this protocol allows the investigator to assess potential differences in vessel permeability and damage using fluorescein angiography. EAU can be induced in other mouse strains - both wildtype or genetically modified - and combined with novel therapies offering flexibility for studying drug efficacy and/or disease mechanisms.

In this report we present a protocol that allows the investigator to generate a mouse model of intraocular uveitis. More commonly referred to as experimental autoimmune uveitis (EAU), this established model captures many aspects of human disease. Herein, we will describe how to induce and monitor disease progression using several readouts.

Deneysel Otoimmün Üveit: Göz İçi İnflamatuar Bir Fare Modeli

Experimental Autoimmune Uveitis (EAU) is driven by immune cells responding to self-antigens. Many features of this non-infectious, intraocular ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Induction of Ocular Surface Inflammation and Collection of Involved Tissues

Ocular surface diseases include a range of disorders that disturb the functions and structures of the cornea, conjunctiva, and the associated ocular surface gland network. Meibomian glands (MG) secrete lipids that create a covering layer that prevents the evaporation of the aqueous part of the tear film. Neutrophils and extracellular DNA traps populate MG and the ocular surface in a mouse model of allergic eye disease. Aggregated neutrophil extracellular traps (aggNETs) formulate a mesh-like matrix composed of extracellular chromatin that occludes MG outlets and conditions MG dysfunction. Here, a method for inducing ocular surface inflammation and MG dysfunction is presented. The procedures for collecting organs related to the ocular surface, such as the cornea, conjunctiva, and eyelids, are described in detail. Using established techniques for processing each organ, the major morphological and histopathological features of MG dysfunction are also shown. Ocular exudates offer the opportunity to assess the inflammatory state of the ocular surface. These procedures enable the investigation of topical and systemic anti-inflammatory interventions at the preclinical level.

Ocular surface inflammation harms the ocular surface tissues and compromises vital functions of the eye. The present protocol describes a method to induce ocular inflammation and collect compromised tissues in a mouse model of Meibomian gland dysfunction (MGD).

Oküler Yüzey Enflamasyonunun İndüklenmesi ve Tutulan Dokuların Toplanması

Ocular surface diseases include a range of disorders that disturb the functions and structures of the cornea, conjunctiva, and the associated ocular ...

A Rabbit Model of Aqueous-Deficient Dry Eye Disease Induced by Concanavalin A Injection into the Lacrimal Glands: Application to Drug Efficacy Studies

Dry eye disease (DED), a multifactorial inflammatory disease of the ocular surface, affects 1 in 6 humans worldwide with staggering implications for quality of life and health care costs. The lack of informative animal models that recapitulate its key features impedes the search for new therapeutic agents for DED. Available DED animal models have limited reproducibility and efficacy. A model is presented here in which DED is induced by injecting the mitogen concanavalin A (Con A) into the orbital lacrimal glands of rabbits. Innovative aspects of this model are the use of ultrasound (US) guidance to ensure optimal and reproducible injection of Con A into the inferior lacrimal gland; injection of Con A into all orbital lacrimal glands that limits compensatory production of tears; and use of periodic repeat injections of Con A that prolong the state of DED at will. DED and its response to test agents are monitored with a panel of parameters that assess tear production, the stability of the tear film, and the status of the corneal and conjunctival mucosa. They include tear osmolarity, tear break-up time, Schirmer&#39;s tear test, rose bengal staining, and tear lactoferrin levels. The induction of DED and the monitoring of its parameters are described in detail. This model is simple, robust, reproducible, and informative. This animal model is suitable for the study of tear physiology and of the pathophysiology of DED as well as for the assessment of the efficacy and safety of candidate agents for the treatment of DED.

This article describes the development of a method to induce acute or chronic dry eye disease in rabbits by injecting concanavalin A to all portions of the orbital lacrimal gland system. This method, superior to those already reported, generates a reproducible, stable model of dry eye suitable for the study of pharmacological agents.

Kıprimal Bezlere Concanavalin A Enjeksiyonu ile Indüklenen Sulu-Eksik Kuru Göz Hastalığının Tavşan Modeli: İlaç Etkinliği Çalışmalarına Uygulama

Dry eye disease (DED), a multifactorial inflammatory disease of the ocular surface, affects 1 in 6 humans worldwide with staggering implications for ...

Tıp

Establishment of a Severe Dry Eye Model Using Complete Dacryoadenectomy in Rabbits

Dry eye disease (DED) is a complex disease with multiple etiologies and variable symptoms, having ocular surface inflammation as its key pathophysiologic step. Despite advances in our understanding of DED, significant knowledge gaps remain. Advances are limited in part due to the lack of informative animal models. The authors recently reported on a method of DED induced by injecting all orbital lacrimal gland (LG) tissues with the lectin concanavalin A. Here, we report a novel model of aqueous-deficient DED based on the surgical resection of all orbital LG (dacryoadenectomy) tissues. Both methods use rabbits because of their similarity to human eyes in terms of the size and structure of the ocular surface. One week after removal of the nictitating membrane, the orbital superior LG was surgically removed under anesthesia, followed by removal of the palpebral superior LG, and finally removal of the inferior LG. Dacryoadenectomy induced severe DED, evidenced by a marked reduction in the tear break up time test and the Schirmer&#39;s tear test, and significantly increased tear osmolarity and rose bengal staining. Dacryoadenectomy-induced DED lasted at least eight weeks. There were no complications and animals tolerated the procedure well. The technique can be mastered relatively easily by those with adequate surgical experience and appreciation of the relevant rabbit anatomy. Since this model recapitulates the features of human aqueous-deficient DED, it is suitable for studies of ocular surface homeostasis, DED, and candidate therapeutics.

A novel approach is presented to induce chronic dry eye disease in rabbits by surgically removing all orbital lacrimal glands. This method, distinct from those previously reported, produces a stable, reproducible model of aqueous deficient dry eye well suited to study tear physiology and pathophysiology and ocular therapeutics.

Tavşanlarda Komple Dakriyoadenektomi Kullanarak Şiddetli Kuru Göz Modelinin Oluşturulması

Dry eye disease (DED) is a complex disease with multiple etiologies and variable symptoms, having ocular surface inflammation as its key pathophysiologic ...

Sıçanlarda Skopolaminin İndüklediği Lakrimal Bez Disfonksiyonu

A Rat Dry Eye Model with Lacrimal Gland Dysfunction Induced by Scopolamine

Aqueous-deficient dry eye (ADDE) is a type of dry eye disease that can result in the reduction of tear secretion quantity and quality. Prolonged abnormal tear production can lead to a disturbance in the ocular surface environment, including corneal damage and inflammation. In severe cases, ADDE can cause vision loss or even blindness. Currently, dry eye treatment is limited to eye drops or physical therapy, which can only alleviate eye discomfort symptoms and cannot fundamentally cure dry eye syndrome. To restore the function of the lacrimal gland in dry eye, we have created an animal model of lacrimal gland dysfunction in rats induced by scopolamine. Through the comprehensive evaluation of the lacrimal gland, corneas, conjunctivas, and other factors, we aim to provide a full understanding of the pathological changes of ADDE. Compared with the current dry eye mouse model, this ADDE animal model includes a functional evaluation of the lacrimal gland, providing a better platform for studying lacrimal gland dysfunction in ADDE.

Yazar Spotlight: Kuru Göz Hayvan Modelleri Geliştirmedeki Zorluklar ve Gelecekteki Araştırma Yönleri

Here, we establish a rat model of lacrimal gland dysfunction to provide a basis for the study of aqueous-deficient dry eye.

Skopolamin Kaynaklı Gözyaşı Bezi Disfonksiyonu Olan Bir Sıçan Kuru Göz Modeli

Aqueous-deficient dry eye (ADDE) is a type of dry eye disease that can result in the reduction of tear secretion quantity and quality. Prolonged abnormal ...

Establishment of A Mouse Model of Aqueous Deficiency Dry Eye

Dry eye disease is a prevalent condition affecting 5%-50% of the global population. Animal model investigations play a crucial role in understanding its underlying mechanisms. Therefore, we developed a mouse model of dry eye disease by surgically removing both the extraorbital lacrimal glands (ELG) and intraorbital lacrimal glands (ILG) to investigate the ocular surface pathology in the context of aqueous deficiency dry eye. Two weeks post operation, the mice exhibited severe dry eye manifestations, including reduced tear secretion, corneal epithelial irregularities, positive fluorescein sodium staining, and neovascularization. Histological examination via hematoxylin and eosin staining revealed inflammatory cell infiltration and corneal epithelium dysplasia. Immunofluorescence staining and quantitative reverse-transcription polymerase chain reaction revealed decreased expression of the normal corneal epithelial biomarkers K12 and Pax6 and increased expression of Sprr1b in the corneal epithelium. These ocular manifestations indicated abnormal corneal epithelial differentiation. Furthermore, immunofluorescence staining of Ki67 revealed the increasing cell proliferation. In conclusion, the ELG plus ILG excision model proved suitable for studying changes in the ocular surface and elucidating the mechanisms underlying aqueous deficiency dry eye.

Here, we present a method to establish a mouse model of aqueous-deficient dry eye by excising the extraorbital and infraorbital lacrimal glands and evaluate the changes in the ocular surface in aqueous deficiency dry eye.

Dry eye disease is a prevalent condition affecting 5%-50% of the global population. Animal model investigations play a crucial role in understanding its ...

Quantification of Tear Volume in an Autoimmune Dry Eye Rat Model using the Phenol Red Thread

Source: Hou, A. et al., <a href="https://app.jove.com/v/55592">A Chronic Autoimmune Dry Eye Rat Model with Increase in Effector Memory T Cells in Eyeball Tissue.</a> J. Vis. Exp. (2017)
This video demonstrates the phenol red thread test to determine tear volume in an autoimmune dry eye rat model. The pH-sensitive acidic phenol red thread changes color when it comes in contact with the alkaline tears. The shorter length of color change in the phenol red thread corresponds to reduced tear volume.

Fenol Kırmızı İplik Kullanılarak Otoimmün Kuru Göz Sıçan Modelinde Gözyaşı Hacminin Ölçülmesi

All procedures involving animal models have been reviewed by the local institutional animal care committee and the JoVE veterinary review board.
1. ...

JoVE Encyclopedia of Experiments

İmmünoloji

İmmünopatoloji

Tahlil ve Analiz

Assessment of Cornea and Tear Smoothness in an Autoimmune Dry Eye Rat Model

Source: Hou, A. et al., <a href="https://app.jove.com/v/55592">A Chronic Autoimmune Dry Eye Rat Model with Increase in Effector Memory T Cells in Eyeball Tissue.</a>&#160;J. Vis. Exp. (2017)
This video demonstrates a method for assessing corneal smoothness and tear film stability in an autoimmune rat model. It highlights the impact of gland dysfunction on tear film stability, crucial for understanding dry eye disease.

Eyeball Dokusunda Efektif Hafıza T Hücrelerini Artıran Kronik Otoimmün Kuru Göz Fare Modeli

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Deneysel Otoimmün Üveit: Göz İçi İnflamatuar Bir Fare Modeli

Oküler Yüzey Enflamasyonunun İndüklenmesi ve Tutulan Dokuların Toplanması

Kıprimal Bezlere Concanavalin A Enjeksiyonu ile Indüklenen Sulu-Eksik Kuru Göz Hastalığının Tavşan Modeli: İlaç Etkinliği Çalışmalarına Uygulama

Tavşanlarda Komple Dakriyoadenektomi Kullanarak Şiddetli Kuru Göz Modelinin Oluşturulması

Skopolamin Kaynaklı Gözyaşı Bezi Disfonksiyonu Olan Bir Sıçan Kuru Göz Modeli

Skopolamin Kaynaklı Gözyaşı Bezi Disfonksiyonu Olan Bir Sıçan Kuru Göz Modeli

Skopolamin Kaynaklı Gözyaşı Bezi Disfonksiyonu Olan Bir Sıçan Kuru Göz Modeli

Establishment of A Mouse Model of Aqueous Deficiency Dry Eye

Fenol Kırmızı İplik Kullanılarak Otoimmün Kuru Göz Sıçan Modelinde Gözyaşı Hacminin Ölçülmesi

Otoimmün Kuru Göz Sıçan Modelinde Kornea ve Gözyaşı Düzgünlüğünün Değerlendirilmesi