Bu eser desteklenen INSERM, Université Montpellier, Retina Fransa, sendika National des Aveugles et Déficients Visuels (UNADEV), dernek Sendromu de Wolfram, Fondation pour la Recherche Médicale, Fondation de France ve mükemmellik laboratuvar EpiGenMed programı.

deneysel protokol Institut national de la santé tarafından kabul edildi et de la recherche médicale (INSERM; Montpellier, Fransa), Avrupa direktifleri ile tutarlıdır ve ARVO deyimiyle oftalmik araştırma hayvanlarda kullanım için uygundur. Etik Languedoc Roussillon nezaket içinde hayvan deneme (CEEALR; nuCEEA-LR-12123) sözleşme uyarınca gerçekleştirilmiştir.
 1. ekipman kurulumu ve öncesi görüntüleme hazırlık Not: Burada, OCT spektral etki alanı (SD) oftalmik görüntüleme sistemi ( şekil 1A) kullanarak fare retina üzerinde gerçekleştirildi. SD-Ekim aparatı bir üs ve bir hayvan görüntüleme Dağı (AIM) olan bir kemirgen hizalama sahne (RAS) ( şekil 1B) oluşur. Bankası bilgisayar OCT motoru, SD-Ekim sonda ve fare özgü lens içerir. Sonda Z-çevirmen içerir amacı monte edilir. RAS fare ile X - ve Y-çevirmen, tablo sayesinde döndürülmüş ve swiveled, kaset konumlandırma ve burun bandı olan çıkarılabilir ısırık çubuk için kullanılır. İkincisi de bir açık kaynak görüntü işleme programı ile yapılabilir, ancak üreticisi tarafından sağlanan yazılımı toplama ve analizi OCT dosyaların için sağlar.
<ol><li>Sıkıca sonda AIM yerleştirin.</li>
	<li>Fare özgü lens için sonda bağlayın.</li>
	<li>Belirli objektifi (burada, 086 güç ve 964 konumunda) başvuru kol ayarlarını.</li>
	<li>Yapma fare özel lens emin yeterince uzak kaset, burun bandı kaset üzerine olan ısırık çubuk eklemek. 
	Not: Objektif ve kaset arasındaki mesafe amaç arka tarafında bulunan Z-çevirmen vida ile ayarlanabilir. Piyasada bulunan bir elastik bant burun grubudur ve onun gerginlik fare boyutuna bağlı olarak ayarlanması gereken.</li>
	<li>Güç kaynağı (sağ alt köşesinde sepeti) ve sonra bilgisayarı açın.</li>
	Görüntüleme programını başlatmak için <li>çift tıklatın üstünde üstünde belgili tanımlık perde uygun kısa. 
	Not: Bu objektif türüne bağlıdır; Burada, fare Retina.</li>
	<li>Yeni bir klinik çalışma oluşturun ve istenen iletişim kuralları ekleyin. Aksi takdirde, mevcut klinik çalışma ve/veya iletişim kuralları kullanın.
	<ol><li>Seçerek yeni bir çalışma eklemek &#34; eğitim NameŔ &#34; IDŔ &#34; tedavi kol özellikleri &#34; (burada, &#34; Uncategorized &#34;); ve önceden tanımlanmış &#34; protokolleri tarama &#34;, varsa.</li>
	</ol></li> <li>Seç bir &#34; adli &#34; içinde &#34; klinik çalışmada &#34; bölüm. 
	Not: için yeni bir &#34; sınav &#34; gidin, &#34; Kur sınav &#38; doktorlar &#34; onu tanımlamak için</li>
	<li>Ekle yeni bir hasta hasta/sınav içinde bölüm yanında tıkırtı üstünde eklemek hasta; girme &#34; numarası &#34;, &#34; adı &#34;, &#34; soyadı &#34;, &#34; seks &#34;, ve &#34; Doğum tarihi &#34; (isteğe bağlı). 
	Not: sadece her fare test etmeden önce daha uygun, bunu. Kimliği 10 karakter uzunluğunda olduğundan emin olun. Fare için her iki gözde için refraktif hata 0, Aksiyel uzunluğu 23.0.</li>
	<li>Tıklayın &#34; eklemek sınavı &#34; ve istenen seçin &#34; protokol &#34; ekleyerek &#34; önceden inceden inceye gözden geçirmek &#34; listesi (burada, sağ gözü) ilk ölçülecektir göz ile başlayan veya taramalar özelleştirerek.</li>
	<li>Bir tarama özelleştirmek için bir şablon olarak varolan bir tarama kullanmak ve düzenlemek veya sıfırdan oluşturmak &#34; özel tarama Ekle &#34; seçeneği. Tüm taramalar listesine ekledikten sonra yeni bir iletişim kuralını kullanarak tanımlamak &#34; Enter &#34; yeni iletişim kuralı adı &#34; seçeneği (OS: yuvarlak pencere uğursuz, sol göz; OD: yuvarlak pencere dexter, değil göz). 
	Not: Burada, protokol üç tarar içerir.: (i) bir Radyal inceden inceye gözden geçirmek, 1.4 mm çapında, 0 mm yatay ve düşey uzaklıklar, 1.000 satırlık A-taramalar/B-Tara, B-taramalar/hacim 100, 1 kare/B-Tara, etkin olmayan A-taramalar/B-tarama 80 satır ve 1 birim; (ii) bir dikdörtgen tarama, 1.4 mm Uzunluk ve genişlik, 0° açı, 0 mm yatay ve düşey uzaklıklar, A-taramalar/B-Tara, 100 B-inceden inceye gözden geçirmek, 1 kare/B-Tara, etkin olmayan A-taramalar/B-tarama 80 satır ve 1 birim 1.000 satırlık; ve (iii) bir annüler inceden inceye gözden geçirmek, 0,4 mm minimum ve 0,6 mm maksimum çapı, 0 mm yatay ve düşey uzaklıklar, A-taramalar/B-Tara, B-taramalar/Cilt 3, 48 çerçeveler/B-Tara, etkin olmayan A-taramalar/B-tarama 80 satır ve 1 birim 1.000 satırlık.</li>
</ol> 2. Fare hazırlık <ol><li>göz dilatasyon ve immobilizasyon <ol><li>en az 15 dk önce veri toplama, fare gözlerinin içine % 10 phenylephrine göz damlası aşılamak, aşırı kaldırmak ve % 0.5 tropicamide göz damlası aşılamak. 
		Not: İlk dilatasyon aynı anda oturum sırasında test tüm fareler için yapılabilir. Sıvı oda sıcaklığında olduğundan emin olun.</li>
		<li>Hemen sonra ikna genel anestezi (Adım 2.2), %0,4 oxybuprocaine hidroklorid göz damlası, 3 için yerinde tutarak yönetmek anestezi ve gözleri hareketsiz için s. Daha sonra damla silin ve gözleri de genişlemiş tespit etmek için %10 phenylephrine ve % 0.5 tropicamide korumak yineleyin. 
		Not: sıvıların oda sıcaklığında ve fare oxybuprocaine yutmak değil emin olun.</li>
	</ol></li> <li>Genel anestezi <ol><li>ketamin (20 mg/mL) ve xylazine (1.17 mg/mL) anestezik bir çözüm salin hazır olun. En fazla 2 hafta 4 ° C'de mağaza.</li>
		<li>Test önce yaklaşık 5 dk intraperitoneally enjekte anestezik çözüm vücut kitle, yaş ve fare boyutunu bağlı olarak 1 gram başına 5-10 µL. 
		Not: Genç ve/veya ince fareler ihtiyacı daha az anestezik, çekim daha az zaman anestezi, ama aynı zamanda daha hızlı uyandırmak için. Burada, 8 µL/g (160 mg/kg ketamin bas, xylazine 9.33 mg/kg).</li>
		<li>İsteğe bağlı olarak, yapışkan göz damlası veya kornea kuruluğu önlemek için oftalmik bir jel gözlerle yağlamak.</li>
	</ol></li></ol> 3. Fare konumlandırmasını <ol><li>viskoz glikol tabanlı göz gözlerle damla kornea hidrasyon sağlamak için Lubricate. 
	Not: gözleri sınav sırasında kuru görünüyorsa, göz damlası yeniden uygulamak.</li>
	<li>Fare sabıkası sıcak tutmak için cerrahi gazlı bez sarın.</li>
	<li>Bir sünger veya pamuk fitil kullanmak oftalmik bir jel ile % 0.3 mellose her gözün üzerine ince bir tabaka uygulanır, ışık kırılma en aza indirmek için kaçının opaklıklar ve güvenli kornea hidrasyon. Bunu yaparken de, kirpik ve bıyık çekil.</li>
	<li>Fareyi kasete, kafa düz ve işaretleme ileri ile konumlandırma.</li>
	<li>Yavaşça ısırık bar kelepçe açın ve bar ağzına yerleştirin; sabitleyin için burun bandı kullanın. 
	Not: ısırık bar kaset ortasında olduğundan emin olun.</li>
	<li>Bir pamuk rulo doğru () sol altında sağ (sol) gözü test yer.</li>
	<li>Klip hedefleyen ucunu fare özgü lens üzerinde tutarak, bu doğru göz Z-çevirmen vida saat yönünün tersine çevirerek getir.</li>
	<li>Döndürme ve kaset yedirdikten ve çevirerek ısırık bar ve X-çevirmen vidalar, önceden belirlenen farenin konumunu; sağ gözü göz doğrudan objektif ve böylece için için hedeftir gözleri ve objektifin optik eksenleri Hizala. 
	Not: fare çok yüksek veya çok düşük ise, Y-çevirmen vida ilk kullanılmalıdır.</li>
	<li>İlk taramada seçin &#34; sınav &#34;, tıklayın &#34; başlatmak amaçlayan &#34; ve retina görüntüleme için daha fazla el ile ayarlamaları yapın.
	<ol><li>Z-çevirmen vidayı kullanarak hareket retina dikey olarak sol panelindeki ( 2 rakam, yatay B-tarama hizalama) ve yatay olarak rsağ panel ( 2 rakam, dikey B-tarama hizalama).</li>
		<li>ONH yukarı veya aşağı hareket ettirerek doğru kapı aynası ortasında ONH getirmek için kaset döndürün. Isırık bar vidalı sağ panosunda retina düzeltmek için kullanın. ONH sol panelin ortasında konumlandırmak için kaset dönebilen.</li>
		<li>X-çevirmen vida sol panelde retina düzeyi için kullanın. Her modülatör büyük fonksiyonu göz önünde bulundurarak daha da retina ONH merkezileştirmek için konumunu ayarlamak. 
		Not: gerekirse, ONH yukarı ve aşağı sağ panelde taşımak için Y-çevirmen vida kullanın. Pozisyon taramalar arasında herhangi bir zamanda rafine olabilir.</li>
	</ol></li></ol> 4. SD-Ekim Imaging Retina ve ONH <ol><li>ayarlamaları ile içerik sonra tıklayın &#34; başlatmak anlık görüntü &#34; SD-Ekim Taramaya başlamak için.
	<ol><li>Bir 3D görüntüleme gerekli değilse, Öcü seçeneğinin işaretini kaldırın.</li>
	</ol></li> <li>Tarama ve raporu kaydetmek.</li>
	<li>Sonraki taramaları ile ilerle.</li>
	<li>İkinci göz görüntü için objektif geri çeker sonra kaset buna göre ve adımları 3.6-4.3 tekrarlayın.</li>
</ol> 5. Satın alma tamamlama <ol><li>ne zaman satın alma tamamlandıktan, kaset fareden kaldırmak, oftalmik jel ile % 0.3 mellose her göz için geçerlidir ve yukarı uyandırmak ısıtma yüzeyi üzerinde fareyi getirin</li>
	<li>Son satın alma sonra yazılımı kapatın ve bilgisayarı veya OCT Makinası (güç kaynağı button) kapatma.</li>
	<li>Dezenfektan ile kaset temiz.</li>
</ol> 6. Analiz <ol><li>retina tabakası kalınlığı ölçümü için üretici tarafından sağlanan otomatik bölümleme yazılımı kullanın.
	<ol><li>Tıklayın &#34; hasta &#34;, istenen seçin &#34; sınav &#34; dan sonra liste ve tıkırtı üstünde &#34; bir daha gözden geçirme sınav &#34; seçenek.</li>
		<li>İstenen tarama klasör simgesini sağ tıklatarak istediğiniz OCT verileri OCT yazılım üzerine yüklemek.</li>
		<li>Hemen üzerinde B-Tara'yı tıklatın; Kumpasları Çap pergeli; ölçme 10 etkinleştirerek yapılandırmak ve onların adları, açılar ve renkleri girin.</li>
		<li>İstenen gövde üzerinde B tarama; sağ tıklatarak seçtiğiniz yer o buna göre ölçüm için retina üzerine. 
		Not: Bu, birbirlerinden eşit uzaklıkta her tarafında 5 Çap pergeli ONH üzerinde ortalanmış taramalar için ayarlayın. Peripapillary analiz için kumpas çok ileri ONH yerleştirilmedi emin olun. Radyal taramak için OCT yazılım tarafından seçilen 10 fotoğraf oranı analiz. Sayıları bulunabilir &#34; raporları &#34; klasörü.</li>
		<li>Kaydetmek sonuçları analiz için bir elektronik tablo yazılım programında B Ultrasonda sağ tıklatıp'i tıklatarak &#34; sağlamaları &#34;. 
		Not: Sonuçları tarama veri ile aynı klasörde bulunabilir.</li>
	</ol></li> <li>Alternatif olarak, ev yapımı Kaliper makroyu kullanmak &#34; Mr Retina aracı &#34;, bir açık kaynak görüntü işleme programı için Gelişmiş (malzemeleri tablo görmek).
	<ol><li>Emin olun &#34; Mr Retina aracı &#34; ve &#34; çokgen bölüm aracı değiştirmek &#34; makroları etkin. Resim yükleyin. Ölçüm başlatmak için m düğmesini tıklayın. 
		Not: Makroyu otomatik olarak bir 0.2 mm uzunluğundaki oluşturur kaset ONH her iki tarafında ölçme. Her kaset 5 ölçüm noktaları Kumpasları bu işlevi içerir. Yanal konumlarını değiştirilemez ve peripapilla Radyal taramaları için özelleştirilmiş. Kasetleri yatay konumunu RNFL/un kalınlığını ölçmek için önceden, ancak bunun yerine GC karmaşık katman ölçmek için kolayca değiştirilebilir. Tarama kalitesi kötüdür, yatay konumu ayarlanması gerekiyor veya resmi analizinden dışlanmaları gerekir.</li>
		<li>Yatay ayarlama için e butonuna tıklayın. Yeni açılan &#34; ROI Yöneticisi &#34; pencere, ilk kaset seçin.</li>
		<li>'I tıklatın mavi çokgen düğmesini tıklatın ve resim ölçülen katman sınırları tıklayarak ilk kaset konumunu ayarlamak.</li>
		İlk içinde seçerek <li>tekrar için ikinci kaset &#34; ROI Yöneticisi &#34; pencere ve o zaman tıkırtı üstünde uygun imge. R çubuğunda yeniden ölçmek için. Sonuçlarda görüntülemek &#34; ölçümleri &#34; penceresi. 
		Not: Sonuçları herhangi bir zamanda bir elektronik yazılım programı kopyalanabilir. Onlar doğru kaset (r), sol kaset (l) ve toplam için aşağıdaki değerleri içerir: Intden - entegre yoğunluk içinde kaset; : Alanı mm 2 ölçü; Len: kasete mm içinde gövde uzunluğu; Anlamına: demek kaset içinde sinyal yoğunluğu; ve Std: sinyalin ortalama yoğunluğunun standart hata.</li>
		<li>Sonraki görüntü ile ilerle.</li>
		<li>Daha fazla analiz verileri bir elektronik yazılım programı. 
		Not: katman ortalama kalınlığı bulmak için on Len değerler alır.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol>
	<li>Drexler, W., Fujimoto, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=State-of-the-art+retinal+optical+coherence+tomography.">State-of-the-art retinal optical coherence tomography.</a> Prog Retin Eye Res. 27 (1), 45-88 (2008).</li><li>Grenier, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WFS1+in+Optic+Neuropathies:+Mutation+Findings+in+Nonsyndromic+Optic+Atrophy+and+Assessment+of+Clinical+Severity.">WFS1 in Optic Neuropathies: Mutation Findings in Nonsyndromic Optic Atrophy and Assessment of Clinical Severity.</a> Ophthalmology. 123 (9), 1989-1998 (2016).</li><li>Zmyslowska, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+thinning+as+a+marker+of+disease+progression+in+patients+with+Wolfram+syndrome.">Retinal thinning as a marker of disease progression in patients with Wolfram syndrome.</a> Diabetes Care. 38 (3), e36-e37 (2015).</li><li>Fischer, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive,+in+vivo+assessment+of+mouse+retinal+structure+using+optical+coherence+tomography.">Noninvasive, in vivo assessment of mouse retinal structure using optical coherence tomography.</a> PLoS One. 4 (10), e7507 (2009).</li><li>Grieve, K., Thouvenin, O., Sengupta, A., Borderie, V. M., Paques, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Appearance+of+the+Retina+With+Full-Field+Optical+Coherence+Tomography.">Appearance of the Retina With Full-Field Optical Coherence Tomography.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 57 (9), OCT96-OCT104 (2016).</li><li>Chang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+degeneration+mutants+in+the+mouse.">Retinal degeneration mutants in the mouse.</a> Vision Res. 42 (4), 517-525 (2002).</li><li>Mustafa, S., Pandit, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Approach+to+diagnosis+and+management+of+optic+neuropathy.">Approach to diagnosis and management of optic neuropathy.</a> Neurol India. 62 (6), 599-605 (2014).</li><li>Sarzi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+OPA1delTTAG+mutation+induces+premature+age-related+systemic+neurodegeneration+in+mouse.">The human OPA1delTTAG mutation induces premature age-related systemic neurodegeneration in mouse.</a> Brain. 135 (Pt 12), 3599-3613 (2012).</li><li>Sarzi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+steroidogenesis+promotes+early-onset+and+severe+vision+loss+in+females+with+OPA1+dominant+optic+atrophy.">Increased steroidogenesis promotes early-onset and severe vision loss in females with OPA1 dominant optic atrophy.</a> Hum Mol Genet. 25 (12), 2539-2551 (2016).</li><li>Delettre-Cribaillet, C., Hamel, C. P., Lenaers, G., Pagon, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optic+Atrophy+Type+1.">Optic Atrophy Type 1.</a> Gene Reviews. 7 (2007), (2007).</li><li>Lenaers, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dominant+optic+atrophy.">Dominant optic atrophy.</a> Orphanet J Rare Dis. 7 (46), (2012).</li><li>Delettre, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+gene+OPA1,+encoding+a+mitochondrial+dynamin-related+protein,+is+mutated+in+dominant+optic+atrophy.">Nuclear gene OPA1, encoding a mitochondrial dynamin-related protein, is mutated in dominant optic atrophy.</a> Nat Genet. 26 (2), 207-210 (2000).</li><li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+retinal+morphologic+and+functional+changes+in+mice+following+optic+nerve+crush.">Monitoring retinal morphologic and functional changes in mice following optic nerve crush.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (6), 3766-3774 (2014).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

OCT sistemi, görüntüleme yöntemi, bir non-invaziv vivo içinde yüksek çözünürlüklü retina çapraz section gibi tarama sağlar. Böylece, başlıca avantajı insanlar fare modelleri için rutin olarak uygulanan protokoller aktarılması için harika bir fırsat ile detaylı analiz için potansiyel var.
Örneğin Opa1delTTAG mutasyona uğramış fareler, SD-Ekim DOA patofizyolojisi9yeni keşifler için izin RNFL ve GC karmaşık tab...

OCT retina yapıları1optik sinir başı (ONH) de dahil olmak üzere, incelenmesi kolaylaştıran bir tanı aracıdır. Yıllar boyunca bu hastalık progresyon insanlar2,3, hem de kemirgen4,5güvenilir bir göstergesi haline gelmiştir. 2-µm Aksiyel çözünürlükte retina katmanları kesitsel görüntüler oluşturmak için Interferometry kullanır. Çoğunlukla RGC organları içeren ganglion hücre katmanı tarafından (un), takip RGC akson, içeren retina Sinir lifi Katmanı (RNFL), en içteki katmanıdır. Sonraki iç Pleksiform tabaka (IPL), RGC dendrites İki kutuplu, yatay ve amacrine hücre aksonlar buluştuğu olduğunu. Bunlar, yatay hücresi ile birlikte iç nükleer tabaka (INL) formu, ve onların çıkıntılar photoreceptor akson dış Pleksiform tabaka (OPL) içinde bağlantı. Bu photoreceptor hücre organları ile dış nükleer tabaka (yalnız), arkasından ve photoreceptor katmandan iç segment/dış kesimi olarak da adlandırılan dış sınırlayıcı membran tarafından (OLM), ayrılmış (IS / OS) katmanı. Son olarak, son gözlemlenebilir katmanlar halinde fare retina retina pigment epiteli (RPE) ve (C) koroid vardır. Yalnız RNFL normal farelerde ölçülecek çok ince; Böylece, RNFL/un analiz yerine tercih4,5' tir. Başka bir olasılık ikinci IPL ek olarak içeren GC karmaşık katmanı, kalın ve böylece daha kolay hale OCT üzerinde ölçmek için4tarar. Sonuç olarak, OCT içinde OPNs gibi retina, patolojik durumunu içgörü sağlayabilir.
Alternatif olarak, fare retina kalınlığı genellikle post mortem Histoloji ile analiz edilir. Ancak, bu tekniği yüzler sınırlamalar doku koleksiyonu, fiksasyon, kesme, Boyama, montaj, vb dolayısıyla, ince kalınlık değişiklikler gibi bazı kusurları ile ilgili tespit edilemez. Son olarak, çünkü aynı fare, birkaç zaman sınanamıyor puan, hayvan sayısı büyük ölçüde artar, aksine OCT için çalışma. Sonuçta, yineleme için invasiveness olmayan, yüksek çözünürlüklü, olasılık, zaman zaman ve rahatlık-in kullanma OCT teknoloji izleme yapmak yönteminin seçimi retina hastalığı çalışmalarda.
Fare modelleri gen hataları tanımlamak ve moleküler mekanizmaları retinopathies6temel aydınlatmak için kullanılır. OPN bir Optik siniri önemli hasar ile retinopati (açık), yaklaşık 1.2 milyon RGC akson yapıldığı şeklidir. OPN ON odaklı veya görme alanı kaybı ve daha sonra körlük önde gelen diğer bozuklukları, doğuştan veya değil7, ikincil olabilir. RGC kaybı OPN karakteristik özellikleri vardır ve hasar, hangi insan Ekim RNFL ve2,3inceltme un görülebilir. Bu arada, OPN Patofizyoloji hala kötü anlaşılmaktadır ve dolayısıyla fare retina test gerek kalır.
Bu el yazması görüntüleme ve retina tabakası kalınlığı, Opa1delTTAG fare çizgi8,9, baskın optik Atrofi (DOA)10modeli örneği kullanarak miktar açıklanmaktadır. RGC patofizyolojisi değerlendirmek için Radyal, dikdörtgen ve Anüler taramalar sayısal. Bu standart kaliperler OCT yazılım tarafından sağlanan veya bir açık kaynak görüntü işleme programı için geliştirilmiş bir ev yapımı makro ile yapıldı. Standart Çap pergeli işlemek zor ve kez daha kalın RNFL/un, daha kolay, tekrarlanabilir ve daha kesin ev yapımı Kumpasları iken. Makroyu otomatik olarak algılanan bir katman, 5 puan ve peripapillary bölgesinde ONH her iki tarafında sabit pozisyonlarda için bir ölçüm yapar. OCT tarama edinme retina konumlandırma RGCs odaklanarak belirtmek için açıklamak için sunulan Protokolü hedefidir.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1619">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:296px;">Mice</td>
			<td style="width:324px;"></td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:909px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Opa1delTTAG mouse</td>
			<td style="width:324px;">Institute for Neurosciences in Montpellier, INSERM UMR 1051, France</td>
			<td style="width:91px;">-</td>
			<td>Opa1 knock-in mice carrying&#160; OPA1 c.2708_2711delTTAG mutation on C57Bl6/J background</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:296px;">Name</td>
			<td style="width:324px;">Company</td>
			<td style="width:91px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Equipment</td>
			<td style="width:324px;"></td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:296px;">EnVisu R2200 SD-OCT Imaging System</td>
			<td style="width:324px;">Bioptigen, Leica Microsystems, Germany</td>
			<td style="width:91px;">-</td>
			<td>Spectral-Domain Optic Coherence Tomography system</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:296px;">EnVisu R2200 SD-OCT Imaging System Software</td>
			<td style="width:324px;">Bioptigen, Leica Microsystems, Germany</td>
			<td style="width:91px;">-</td>
			<td>Software for OCT acquisition and analysis</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:296px;">ImageJ 1.48v</td>
			<td style="width:324px;">Wayne Rasband, National Institutes of Health, USA</td>
			<td style="width:91px;">-</td>
			<td>Software for analysis, requires downloading and installing two hommade macros: http://dev.mri.cnrs.fr/projects/imagej-macros/wiki/Retina_Tool</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:296px;">Self-regulating heating plate</td>
			<td style="width:324px;">Bioseb, France</td>
			<td>BIO-062</td>
			<td>Protection against hypothermia</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:296px;">Name</td>
			<td style="width:324px;">Company</td>
			<td style="width:91px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Supplies</td>
			<td style="width:324px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Nose Band</td>
			<td style="width:324px;">-</td>
			<td style="width:91px;">-</td>
			<td>Elastic band</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:296px;">Gauze pads 3&#34;x3&#34;</td>
			<td style="width:324px;">Curad, USA</td>
			<td>CUR20434ERB</td>
			<td>Protection against hypothermia</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:296px;">Dual Ended Cotton tip applicator</td>
			<td style="width:324px;">Essence of Beauty, CVS Health Corporation, USA</td>
			<td style="width:91px;">-</td>
			<td>Gel application</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:296px;">Cotton Twists</td>
			<td style="width:324px;">CentraVet, France</td>
			<td style="width:91px;">T.7979C.CS</td>
			<td>Mouse positioning</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:296px;">Name</td>
			<td style="width:324px;">Company</td>
			<td style="width:91px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Reagents and Drugs</td>
			<td style="width:324px;"></td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:296px;">N&#233;osyn&#233;phrine Faure 10%</td>
			<td style="width:324px;">Laboratoires Europhtha, Monaco</td>
			<td style="width:91px;">-</td>
			<td>Eye dilatation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:296px;">Mydriaticum 0.5%</td>
			<td style="width:324px;">Laboratoires Th&#233;a, France</td>
			<td style="width:91px;">3397908</td>
			<td>Eye dilatation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:296px;">Cebesine 0.4%</td>
			<td style="width:324px;">Laboratoire Chauvin, Bausch&#38;Lomb, France</td>
			<td style="width:91px;">3192342</td>
			<td>Local anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:296px;">Imalgene 1000</td>
			<td style="width:324px;">Merial, France/CentraVet, France</td>
			<td style="width:91px;">IMA004</td>
			<td>General anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:296px;">Rompun</td>
			<td>Bayer Healthcare, Germany/CentraVet, France</td>
			<td style="width:91px;">ROM001</td>
			<td>General anesthesia, analgesia, muscle relaxation</td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:296px;">NaCl 0,9%</td>
			<td style="width:324px;">Laboratoire Osalia, France&#160;</td>
			<td style="width:91px;">103697114</td>
			<td>Physiological serum</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:296px;">Systene Ultra</td>
			<td style="width:324px;">Alcon, Novartis, USA</td>
			<td style="width:91px;">-</td>
			<td>Hydration of eyes</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:296px;">GenTeal&#39;</td>
			<td style="width:324px;">Alcon, Novartis, USA</td>
			<td style="width:91px;">-</td>
			<td>Ophtalmic gel to minimize light refraction and opacities</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:296px;">Aniospray Surf 29</td>
			<td style="width:324px;">Laboratoires Anios, France</td>
			<td>59844</td>
			<td>Desinfectant</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

optical coherence tomography: imaging mouse retinal ganglion cells in vivo

Yapısal değişiklikler retina göz hastalıkları ortak belirtileri vardır. Optik Koherens tomografi (OCT) sağlar onların kimlik vivo içinde— hızlı, sürekli ve yüksek çözünürlükte. Bu iletişim kuralı fare retina OCT görüntülemede optik neuropathies (OPN) eğitim için güçlü bir araç olarak açıklar. OCT sistem ortak post mortem histolojik deneyleri Interferometry tabanlı, non-invaziv bir alternatiftir. Retina kalınlığı, retina incelme veya kalınlaşma gibi değişiklikleri, izleme imkanı sağlayan hızlı ve doğru bir değerlendirmesini sağlar. Biz Opa1delTTAG fare çizgi örnekle görüntüleme işlemi ve analiz mevcut. İnceden inceye gözden geçirmek üç tür önerilen, iki miktar yöntemi ile: Standart ve ev yapımı Çap pergeli. İkinci Radyal taramalar sırasında peripapillary retina üzerinde kullanım için en iyisidir; daha kesin olarak, ince yapıları analiz etmek için tercih edilir. Burada açıklanan tüm yaklaşımlar retina ganglion hücrelerinin (RGC) için tasarlanmış ama diğer hücre popülasyonlarının kolayca uyarlanabilir. Sonuç olarak, OCT fare modeli fenotipleme etkilidir ve tedavi müdahaleler güvenilir değerlendirme için kullanılacak potansiyeline sahiptir.

SD-Ekim teknoloji retina hayal ve histoloji için benzer, ancak daha hızlı kalınlığı analizi ve daha ayrıntılı (şekil 3) sağlar. Wildtype C57Bl/6 fare ile düz-se bile bir SD-Ekim tarama kalitesini sunulan (şekil 3A, sağ) iyi olarak retina enine kesit (şekil 3A, sol) bir görüntü değil, daha fazla katman (Örneğin, OLM) görüntüler. Ayrıca, bu sadece yaklaşık 40 gün v...

Watch this Scientific Journal Video about Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo at JoVE.com

Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo

Bu el yazması ile yüksek çözünürlüklü spektral etki alanı optik Koherens tomografi (SD-Ekim) fare retinanın vivo içinde görüntüleme için bir protokol açıklar. Retina ganglion hücrelerinin (RGC) peripapillary bölgede çeşitli tarama ve açıklanan yaklaşımlar miktarının üzerinde duruluyor.

Optik Koherens tomografi: Fare retina Ganglion hücreleri Vivo içinde görüntüleme

Structural changes in the retina are common manifestations of ophthalmic diseases. Optical coherence tomography (OCT) enables their identification in ...

optical-coherence-tomography-imaging-mouse-retinal-ganglion-cells

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo

19.1K Görüntüleme.  INSERM U1051, Institut of Neurosciences of Montpellier. Bu el yazması ile yüksek çözünürlüklü spektral etki alanı optik Koherens tomografi (SD-Ekim) fare retinanın vivo içinde görüntüleme için bir protokol açıklar. Retina ganglion hücrelerinin (RGC) peripapillary bölgede çeşitli tarama ve açıklanan yaklaşımlar miktarının üzerinde duruluyor.

Video: Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo

An Isolated Retinal Preparation to Record Light Response from Genetically Labeled Retinal Ganglion Cells

The first steps in vertebrate vision take place when light stimulates the rod and cone photoreceptors of the retina 1. This information is then segregated into what are known as the ON and OFF pathways. The photoreceptors signal light information to the bipolar cells (BCs), which depolarize in response to increases (On BCs) or decreases (Off BCs) in light intensity. This segregation of light information is maintained at the level of the retinal ganglion cells (RGCs), which have dendrites stratifying in either the Off sublamina of the inner plexiform layer (IPL), where they receive direct excitatory input from Off BCs, or stratifying in the On sublamina of the IPL, where they receive direct excitatory input from On BCs. This segregation of information regarding increases or decreases in illumination (the On and Off pathways) is conserved and signaled to the brain in parallel.
The RGCs are the output cells of the retina, and are thus an important cell to study in order to understand how light information is signaled to visual nuclei in the brain. Advances in mouse genetics over recent decades have resulted in a variety of fluorescent reporter mouse lines where specific RGC populations are labeled with a fluorescent protein to allow for identification of RGC subtypes 2 3 4 and specific targeting for electrophysiological recording. Here, we present a method for recording light responses from fluorescently labeled ganglion cells in an intact, isolated retinal preparation. This isolated retinal preparation allows for recordings from RGCs where the dendritic arbor is intact and the inputs across the entire RGC dendritic arbor are preserved. This method is applicable across a variety of ganglion cell subtypes and is amenable to a wide variety of single-cell physiological techniques.

This article provides a description of how to dissect and record from the isolated retinal preparation in mouse. In particular, we describe how to record light responses from a fluorescently labeled ganglion cell population and subsequently identify and analyze its morphology.

Genetik Etiketli Retina Ganglion Hücreleri Işık Tepkisi Record İzole Retina Hazırlık

The first steps in vertebrate vision take place when light stimulates the rod and cone photoreceptors of the retina 1.  This information is then ...

Nörobilim

Optical Imaging of Neurons in the Crab Stomatogastric Ganglion with Voltage-sensitive Dyes

Voltage-sensitive dye imaging of neurons is a key methodology for the understanding of how neuronal networks are organised and how the simultaneous activity of participating neurons leads to the emergence of the integral functionality of the network. Here we present the methodology of application of this technique to identified pattern generating neurons in the crab stomatogastric ganglion. We demonstrate the loading of these neurons with the fluorescent voltage-sensitive dye Di-8-ANEPPQ and we show how to image the activity of dye loaded neurons using the MiCAM02 high speed and high resolution CCD camera imaging system. We demonstrate the analysis of the recorded imaging data using the BVAna imaging software associated with the MiCAM02 imaging system. The simultaneous voltage-sensitive dye imaging of the detailed activity of multiple neurons in the crab stomatogastric ganglion applied together with traditional electrophysiology techniques (intracellular and extracellular recordings) opens radically new opportunities for the understanding of how central pattern generator neural networks work.

Here we present the methodology for fast and high resolution fluorescent voltage-sensitive dye imaging of detailed activity of neurons in the crab stomatogastric ganglion.

Gerilim duyarlı Boyalar ile Yengeç Stomatogastric Ganglion Nöronlar Optik Görüntüleme

Voltage-sensitive dye imaging of neurons is a key methodology for the understanding of how neuronal networks are organised and how the simultaneous ...

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural connectivity form during development. In mice, retinofugal projections are arranged in a topographic manner and form eye-specific layers in the Lateral Geniculate Nucleus (dLGN) of the thalamus and the Superior Colliculus (SC). The development of these precise patterns of retinofugal projections has typically been studied by labeling populations of RGCs with fluorescent dyes and tracers, such as horseradish peroxidase1-4. However, these methods are too coarse to provide insight into developmental changes in individual RGC axonal arbor morphology that are the basis of retinotopic map formation. They also do not allow for the genetic manipulation of RGCs.
Recently, electroporation has become an effective method for providing precise spatial and temporal control for delivery of charged molecules into the retina5-11. Current retinal electroporation protocols do not allow for genetic manipulation and tracing of retinofugal projections of a single or small cluster of RGCs in postnatal mice. It has been argued that postnatal in vivo electroporation is not a viable method for transfecting RGCs since the labeling efficiency is extremely low and hence requires targeting at embryonic ages when RGC progenitors are undergoing differentiation and proliferation6. 
In this video we describe an in vivo electroporation protocol for targeted delivery of genes, shRNA, and fluorescent dextrans to murine RGCs postnatally. This technique provides a cost effective, fast and relatively easy platform for efficient screening of candidate genes involved in several aspects of neural development including axon retraction, branching, lamination, regeneration and synapse formation at various stages of circuit development. In summary we describe here a valuable tool which will provide further insights into the molecular mechanisms underlying sensory map development.

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

We demonstrate an in vivo electroporation protocol for transfecting single or small clusters of retinal ganglion cells (RGCs) and other retinal cell types in postnatal mice over a wide range of ages. The ability to label and genetically manipulate postnatal RGCs in vivo is a powerful tool for developmental studies.

Fare Retina Ganglion Hücreleri Transfeksiyon tarafından In vivo Elektroporasyon

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

Thinned-skull Cortical Window Technique for In Vivo Optical Coherence Tomography Imaging

Optical coherence tomography (OCT) is a biomedical imaging technique with high spatial-temporal resolution. With its minimally invasive approach OCT has been used extensively in ophthalmology, dermatology, and gastroenterology1-3. Using a thinned-skull cortical window (TSCW), we employ spectral-domain OCT (SD-OCT) modality as a tool to image the cortex in vivo. Commonly, an opened-skull has been used for neuro-imaging as it provides more versatility, however, a TSCW approach is less invasive and is an effective mean for long term imaging in neuropathology studies. Here, we present a method of creating a TSCW in a mouse model for in vivo OCT imaging of the cerebral cortex.

Thinned-skull Cortical Window Technique for In Vivo Optical Coherence Tomography Imaging

We present a method of creating a thinned-skull cortical window (TSCW) in a mouse model for in vivo OCT imaging of the cerebral cortex.

Için inceltilmiş-kafatası Kortikal Pencere Tekniği<em&gt; In Vivo</em&gt; Optik Koherens Tomografi Görüntüleme

Optical coherence tomography (OCT) is a biomedical imaging technique  with high spatial-temporal resolution. With its minimally invasive approach OCT  has ...

Implementing Dynamic Clamp with Synaptic and Artificial Conductances in Mouse Retinal Ganglion Cells

Ganglion cells are the output neurons of the retina and their activity reflects the integration of multiple synaptic inputs arising from specific neural circuits. Patch clamp techniques, in voltage clamp and current clamp configurations, are commonly used to study the physiological properties of neurons and to characterize their synaptic inputs. Although the application of these techniques is highly informative, they pose various limitations. For example, it is difficult to quantify how the precise interactions of excitatory and inhibitory inputs determine response output. To address this issue, we used a modified current clamp technique, dynamic clamp, also called conductance clamp 1, 2, 3 and examined the impact of excitatory and inhibitory synaptic inputs on neuronal excitability. This technique requires the injection of current into the cell and is dependent on the real-time feedback of its membrane potential at that time. The injected current is calculated from predetermined excitatory and inhibitory synaptic conductances, their reversal potentials and the cell's instantaneous membrane potential. Details on the experimental procedures, patch clamping cells to achieve a whole-cell configuration and employment of the dynamic clamp technique are illustrated in this video article. Here, we show the responses of mouse retinal ganglion cells to various conductance waveforms obtained from physiological experiments in control conditions or in the presence of drugs. Furthermore, we show the use of artificial excitatory and inhibitory conductances generated using alpha functions to investigate the responses of the cells.

This video article illustrates the set-up, the procedures to patch cell bodies and how to implement dynamic clamp recordings from ganglion cells in whole-mount mouse retinae. This technique allows the investigation of the precise contribution of excitatory and inhibitory synaptic inputs, and their relative magnitude and timing to neuronal spiking.

Fare Retina Ganglion Hücreleri Synaptic ve Yapay iletkenlikleri Dinamik Kelepçe Uygulama

Ganglion cells are the output neurons of the  retina and their activity reflects the integration of multiple synaptic inputs  arising from specific neural ...

Retrograde Labeling of Retinal Ganglion Cells in Adult Zebrafish with Fluorescent Dyes

As retrograde labeling retinal ganglion cells (RGCs) can isolate RGCs somata from dying sites, it has become the gold standard for counting RGCs in RGCs survival and regeneration experiments. Many studies have been performed in mammalian animals to research RGCs survival after optic nerve injury. However, retrograde labeling of RGCs in adult zebrafish has not yet been reported, though some alternative methods can count cell numbers in retinal ganglion cell layers (RGCL). Considering the small size of the adult zebrafish skull and the high risk of death after drilling on the skull, we open the skull with the help of acid-etching and seal the hole with a light curing bond, which could significantly improve the survival rate. After absorbing the dyes for 5 days, almost all the RGCs are labeled. As this method does not need to transect the optic nerve, it is irreplaceable in the research of RGCs survival after optic nerve crush in adult zebrafish. Here, we introduce this method step by step and provide representative results.

We introduce an efficient method to retrograde label retinal ganglion cells (RGCs) in adult zebrafish.

Floresan Boyalar Yetişkin Zebra balığı Retina Ganglion Hücreleri retrograd Etiketleme

As retrograde labeling retinal ganglion cells (RGCs) can isolate RGCs somata from dying sites, it has become the gold standard for counting RGCs in RGCs ...

Single-cell RNA-Seq of Defined Subsets of Retinal Ganglion Cells

The discovery of cell type-specific markers can provide insight into cellular function and the origins of cellular heterogeneity. With a recent push for the improved understanding of neuronal diversity, it is important to identify genes whose expression defines various subpopulations of cells. The retina serves as an excellent model for the study of central nervous system diversity, as it is composed of multiple major cell types. The study of each major class of cells has yielded genetic markers that facilitate the identification of these populations. However, multiple subtypes of cells exist within each of these major retinal cell classes, and few of these subtypes have known genetic markers, although many have been characterized by morphology or function. A knowledge of genetic markers for individual retinal subtypes would allow for the study and mapping of brain targets related to specific visual functions and may also lend insight into the gene networks that maintain cellular diversity. Current avenues used to identify the genetic markers of subtypes possess drawbacks, such as the classification of cell types following sequencing. This presents a challenge for data analysis and requires rigorous validation methods to ensure that clusters contain cells of the same function. We propose a technique for identifying the morphology and functionality of a cell prior to isolation and sequencing, which will allow for the easier identification of subtype-specific markers. This technique may be extended to non-neuronal cell types, as well as to rare populations of cells with minor variations. This protocol yields excellent-quality data, as many of the libraries have provided read depths greater than 20 million reads for single cells. This methodology overcomes many of the hurdles presented by Single-cell RNA-Seq and may be suitable for researchers aiming to profile cell types in a straightforward and highly efficient manner.

Here, we present a combinatorial approach for classifying neuronal cell types prior to isolation and for the subsequent characterization of single-cell transcriptomes. This protocol optimizes the preparation of samples for successful RNA Sequencing (RNA-Seq) and describes a methodology designed specifically for the enhanced understanding of cellular diversity.

Retinal Ganglion Hücrelerinin Tanımlanmış Alt Kümelerinin Tek Hücreli RNA-Seqi

The discovery of cell type-specific markers can provide insight into cellular function and the origins of cellular heterogeneity. With a recent push for ...

Using Optical Coherence Tomography and Optokinetic Response As Structural and Functional Visual System Readouts in Mice and Rats

Optical coherence tomography (OCT) is a fast, non-invasive, interferometric technique allowing high-resolution retinal imaging. It is an ideal tool for the investigation of processes of neurodegeneration, neuroprotection and neuro-repair involving the visual system, as these often correlate well with retinal changes. As a functional readout, visually evoked compensatory eye and head movements are commonly used in experimental models involving the visual function. Combining both techniques allows a quantitative in vivo investigation of structure and function, which can be used to investigate the pathological conditions or to evaluate the potential of novel therapeutics. A great benefit of the presented techniques is the possibility to perform longitudinal analyses allowing the investigation of dynamic processes, reducing variability and cuts down the number of animals needed for the experiments. The protocol described aims to provide a manual for acquisition and analysis of high quality retinal scans of mice and rats using a low cost customized holder with an option to deliver inhalational anesthesia. Additionally, the proposed guide is intended as an instructional manual for researchers using optokinetic response (OKR) analysis in rodents, which can be adapted to their specific needs and interests.

A detailed protocol for the assessment of structural and visual readouts in rodents by optical coherence tomography and optokinetic response is presented. The results provide valuable insights for ophthalmologic as well as neurologic research.

Optik koherens tomografi ve Optokinetic yanıt yapısal ve işlevsel görsel sistemin çıktıları fareler ve sıçanlar olarak kullanma

Optical coherence tomography (OCT) is a fast, non-invasive, interferometric technique allowing high-resolution retinal imaging. It is an ideal tool for ...

Retinal Vascular Reactivity as Assessed by Optical Coherence Tomography Angiography

The vascular supply to the retina has been shown to dynamically adapt through vasoconstriction and vasodilation to accommodate the metabolic demands of the retina. This process, referred to as retinal vascular reactivity (RVR), is mediated by neurovascular coupling, which is impaired very early in retinal vascular diseases such as diabetic retinopathy. Therefore, a clinically feasible method of assessing vascular function may be of significant interest in both research and clinical settings. Recently, in vivo imaging of the retinal vasculature at the capillary level has been made possible by the FDA approval of optical coherence tomography angiography (OCTA), a noninvasive, minimal risk and dyeless angiography method with capillary level resolution. Concurrently, physiological and pathological changes in RVR have been shown by several investigators. The method shown in this manuscript is designed to investigate RVR using OCTA with no need for alterations to the clinical imaging procedures or device. It demonstrates real time imaging of the retina and retinal vasculature during exposure to hypercapnic or hyperoxic conditions. The exam is easily performed with two personnel in under 30 min with minimal subject discomfort or risk. This method is adaptable to other ophthalmic imaging devices and the applications may vary based on the composition of the gas mixture and patient population. A strength of this method is that it allows for an investigation of retinal vascular function at the capillary level in human subjects in vivo. Limitations of this method are largely those of OCTA and other retinal imaging methods including imaging artifacts and a restricted dynamic range. The results obtained from the method are OCT and OCTA images of the retina. These images are amenable to any analysis that is possible on commercially available OCT or OCTA devices. The general method, however, can be adapted to any form of ophthalmic imaging.

This article describes a method for measuring retinal vasculature reactivity in vivo with human subjects using a gas breathing provocation technique to deliver vasoactive stimuli while acquiring retinal images.

Optik Koherens Tomografi Anjiyografi ile Değerlendirilen Retinal Vasküler Reaktivite

The vascular supply to the retina has been shown to dynamically adapt through vasoconstriction and vasodilation to accommodate the metabolic demands of ...

In vivo Calcium Imaging of Mouse Geniculate Ganglion Neuron Responses to Taste Stimuli

Within the last ten years, advances in genetically encoded calcium indicators (GECIs) have promoted a revolution in in vivo functional imaging. Using calcium as a proxy for neuronal activity, these techniques provide a way to monitor the responses of individual cells within large neuronal ensembles to a variety of stimuli in real time. We, and others, have applied these techniques to image the responses of individual geniculate ganglion neurons to taste stimuli applied to the tongues of live anesthetized mice. The geniculate ganglion is comprised of the cell bodies of gustatory neurons innervating the anterior tongue and palate as well as some somatosensory neurons innervating the pinna of the ear. Imaging the taste-evoked responses of individual geniculate ganglion neurons with GCaMP has provided important information about the tuning profiles of these neurons in wild-type mice as well as a way to detect peripheral taste miswiring phenotypes in genetically manipulated mice. Here we demonstrate the surgical procedure to expose the geniculate ganglion, GCaMP fluorescence image acquisition, initial steps for data analysis, and troubleshooting. This technique can be used with transgenically encoded GCaMP, or with AAV-mediated GCaMP expression, and can be modified to image particular genetic subsets of interest (i.e., Cre-mediated GCaMP expression). Overall, in vivo calcium imaging of geniculate ganglion neurons is a powerful technique for monitoring the activity of peripheral gustatory neurons and provides complementary information to more traditional whole-nerve chorda tympani recordings or taste behavior assays.

Here we present how to expose the geniculate ganglion of a live, anesthetized laboratory mouse and how to use calcium imaging to measure the responses of ensembles of these neurons to taste stimuli, allowing for multiple trials with different stimulants. This allows for in depth comparisons of which neurons respond to which tastants.

Tadı Uyaranlara Fare Genikül Ganglion Nöron Yanıtlarının In vivo Kalsiyum Görüntülemesi

Within the last ten years, advances in genetically encoded calcium indicators (GECIs) have promoted a revolution in in vivo functional imaging. Using ...