이 작품 Inserm, 몽펠리에 대학교, 망막 프랑스, 연합 국가 des Aveugles에 의해 지원 되었다 외 Déficients Visuels (UNADEV), 협회 증후군 데 볼 프 람, Fondation 부 라 검색 Médicale, Fondation 드 프랑스, 그리고 우수의 실험실 EpiGenMed 프로그램입니다.

실험 프로토콜 인 국립 드 라 건강에 의해 승인 되었다 동부 표준시 드 라 검색 médicale (Inserm; 몽펠리에, 프랑스), 유럽 지침과 일치 이며 ARVO 문을 안과 연구에 있는 동물의 사용에 대 한 준수. 랑 그 독 루시 옹 예 윤리 동물 실험 (CEEALR; nuCEEA-LR-12123)의 계약에 따라 실시 됐다.
 1. 장비 설치 및 사전 영상 준비 참고: 여기, 10 월 스펙트럼 도메인 (SD) 안과 이미징 시스템 ( 그림 1A)를 사용 하 여 마우스 망막에서 수행 되었다. SD-10 월 장치 설치류 맞춤 단계 (RAS) ( 그림 1B)는 기지와 동물 이미지 마운트 (AIM)의 구성 됩니다. 기본은 컴퓨터, OCT 엔진, SD 10 월 조사 및 마우스 전용 렌즈 포함 됩니다. 프로브는 Z-번역기를 포함 하는 목표에 거치 된다. RAS는 마우스와 X-및 Y-번역, 테이블 덕분에 올려지고, 회전 수 있는 카세트 위치와 이동식 물린 바 코 밴드와 함께 사용 됩니다. 비록 후자 또한 할 수 있습니다 오픈 소스 이미지 프로세싱 프로그램 제조업체에서 제공 하는 소프트웨어 수집 및 OCT 파일의 분석에 대 한 수 있습니다.
<ol><li>단단히 목표에 프로브를 배치.</li>
	<li>프로브를 연결 하는 마우스 전용 렌즈.</li>
	<li>특정 렌즈 (여기, 086에서 964에 위치)에 대 한 참조 팔 설정을 조정.</li>
	<li>만들기 있는지 마우스 전용 렌즈 충분히 먼에서 카세트, 카세트에 코 밴드와 함께 물린 바 첨부. 
	참고: 렌즈와 카세트 사이의 거리는 목표의 뒤에 위치한 Z 번역기 나사와 조정할 수 있다. 코 밴드 상용 탄성 밴드 이며 장력은 마우스의 크기에 따라 조정 되어야 합니다.</li>
	<li>전원 공급 장치 (손수레의 하단 오른쪽 모서리) 및 다음 컴퓨터를 켭니다.</li>
	<li>이미징 프로그램을 실행 하는 화면에서 해당 바로 가기를 두 번 클릭. 
	참고:이 렌즈; 종류에 따라 다릅니다. 여기, 마우스 망막.</li>
	<li>새로운 임상 연구 만들고 원하는 프로토콜을 추가 합니다. 그렇지 않으면, 기존 임상 연구 및 프로토콜을 사용 하 여.
	<ol><li>선택 하 여 새로운 연구를 추가 &#34; 연구 NameŔ &#34; IDŔ &#34; 치료 팔 사양 &#34; (여기, &#34; 분류 &#34;); 미리 정의 된 &#34; 검색 프로토콜 &#34;, 그들이 존재 하는 경우.</li>
	</ol></li> <li>선택 된 &#34; 심사 관 &#34;에 &#34; 임상 연구 &#34; 섹션. 
	참고:에 대 한 새로운 &#34; 심사 관 &#34;, 이동 &#34; 설치 심사 관 &#38; 의사 &#34; 그것을 정의 하려면</li>
	<li>추가 환자/시험에서 새로운 환자 섹션 추가 환자에 클릭 하 여, 입력은 &#34; ID &#34;, &#34; 이름 &#34;, &#34; 성 &#34;, &#34; 섹스 &#34;, 및 &#34; 생년월일 &#34; (선택 사항). 
	참고: 이렇게 각 마우스 테스트 직전 경우 더 편리 합니다. ID는 10 자 보다는 더 이상 다는 것을 확인 하십시오. 마우스를 두 눈에 대 한 굴절 과실은 0 축 길이 이며 23.0.</li>
	<li>클릭 &#34; 추가 시험 &#34; 원하는 선택 하 고 &#34; 프로토콜 &#34; 추가 하 여 &#34; 검사 미리 &#34; 먼저 측정 됩니다 눈 시작 (여기, 오른쪽 눈), 목록에서 또는 검사를 사용자 지정 하 여.</li>
	<li>검사를 사용자 지정 하는 기존 스캔의 템플릿으로 사용 및 편집, 하거나 통해 처음부터 그것을 만들는 &#34; 추가 사용자 정의 스캔 &#34; 옵션. 모든 검사를 목록에 추가한 후 사용 하 여 새 프로토콜 정의 &#34; 입력 &#34; 새로운 프로토콜 이름 &#34; 옵션 (OS: 쏟아지는 불길 한, 왼쪽 눈; OD: 쏟아지는 덱스터, 오른쪽 눈). 
	참고: 여기, 프로토콜 포함 3 검사: (i) 방사형 스캔, 1.4 m m 직경, 0 mm 수평 및 수직 오프셋, A-스캔/B-스캔, 100 B-스캔/볼륨, 1 프레임/B-스캔, 80 개의 비활성 A-검사/B-스캔, 그리고 1 볼륨; 1000 라인 (ii) 직사각형 스캔, 1.4 m m 길이 폭, 0 ° 각도, 0 mm 가로 및 세로 오프셋, A-스캔/B-스캔, 스캔-100 B, 1 프레임/B-스캔, 80 개의 비활성 A-검사/B-스캔, 그리고 1 볼륨; 1000 라인 그리고 (iii)는 환상 스캔, 0.4 m m 최소 및 0.6 m m 최대 직경, 0 mm 수평 및 수직 오프셋, A-스캔/B-스캔, 3 B-스캔/볼륨, 48 프레임/B-스캔, 80 개의 비활성 A-검사/B-스캔, 그리고 1 볼륨의 1000 라인.</li>
</ol> 2. 마우스 준비 <ol><li>눈 팽창 및 동원 정지 <ol><li>데이터 수집 전에 적어도 15 분 마우스 눈으로 10 %phenylephrine 안 약 한 방울 씩, 초과, 제거 하 고 0.5 %tropicamide 안 약 한 방울 씩. 
		참고: 첫 번째 팽창 세션에서 시험 될 것 이다 모든 쥐에 대 한 한 번에 할 수 있습니다. 실내 온도에 액체는 있는지 확인 하십시오.</li>
		<li>즉시 유도 전신 (2.2 단계), 0.4 %oxybuprocaine 염 산 염 점 안 액, 3에 대 한 장소에서 그들을 유지 관리 anesthetize 눈을 고정 하는 s. 나중에, 방울을 닦아 내 고 눈은 잘 열려진 확인 phenylephrine, 0.5 %tropicamide 10%의 문제를 반복. 
		참고: 실내 온도에 액체는 고 마우스는 oxybuprocaine 삼 키 지 하지 않습니다 있는지 확인 하십시오.</li>
	</ol></li> <li>전신 <ol><li>염 분에 케 타 민 (20 mg/mL) 및 xylazine (1.17 mg/mL)의 마 취 솔루션을 준비. 2 주 최대 4 ° C에서 저장소.</li>
		<li>테스트를 하기 전에 약 5 분 intraperitoneally 주사 마 취 솔루션 신체 질량, 나이 및 마우스의 크기에 따라 1 g 당 5-10 µ L. 
		참고: 영 또는 얇은 마우스 필요 덜 취, 적은 시간이 걸릴 anesthetize, 하지만 또한 빨리 각 성. 여기, 8 µ L/g (160 mg/kg의 케 타 민, xylazine의 9.33 mg/kg).</li>
		<li>필요에 따라 점 안 약 이나 각 막 건조를 피하기 위해 안과 젤으로 눈에 기름칠.</li>
	</ol></li></ol> 3. 마우스 위치 <ol><li>점성 글리콜 기반 눈으로 눈 각 막 수 화를 제공 하기 위해 상품 Lubricate. 
	참고: 보이는 경우에 눈 건조 시험 중,는 다시 적용 한다 눈 방울.</li>
	<li>외과 거 즈 그것을 따뜻하게의 시트에서 마우스를 포장.</li>
	<li>0.3 %hypromellose 각 눈에는 눈 젤의 얇은 층을 적용 스폰지 또는 목화 심지를 사용 하 여, 빛의 굴절을 최소화 하기 위해 불투명도와 안전한 각 막 수 화 피. 이렇게 하는 동안 속눈썹과 수염 옆으로 이동.</li>
	<li>머리 직선과 포인팅 앞으로 카세트에 마우스 위치.</li>
	<li>부드럽게 물린 바 클램프를 열고 입에 막대 배치; 코 밴드를 사용 하 여 보안 위치. 
	참고: 물린 바 카세트 중간 인지 확인.</li>
	<li>장소 오른쪽 (왼쪽된) 눈 테스트 하는 경우 (왼쪽된) 오른쪽 아래는 면 롤.</li>
	<li>마우스 전용 렌즈에 클립 목표로 팁을 유지 하면서가지고 그것은 눈으로 Z-번역기 나사를 시계 반대 방향으로 회전 하 여.</li>
	<li>회전 하 고 카세트를 회전 시키는 고 여 물린 바와 X-번역기 나사 미리 설정 마우스의 위치, 목표 오른쪽 눈 모양을 직접 렌즈에 그리고 이렇게 하는 눈과 렌즈의 광 축 정렬. 
	참고: 마우스 너무 높이 또는 너무 낮게 경우 Y 번역기 나사 사용 해야 먼저.</li>
	<li>선택에서 첫 번째 검사는 &#34; 시험 &#34;, 클릭 &#34; 목표로 시작 &#34;, 고 망막 화상 진 찰에 대 한 추가 수동 조정.
	<ol><li>왼쪽된 패널 ( 그림 2, 가로 B-스캔 정렬)에 맞추고, 가로 r에 수직으로 망막을 이동 Z-번역기 나사를 사용 하 여항공 패널 ( 그림 2, 수직 B-스캔 정렬).</li>
		<li>는 ONH 위나 아래로 이동 하 여 오른쪽 패널 중간 ONH 려 카세트 회전. 오른쪽 패널에 망막을 물린 바 나사를 사용 합니다. 회전 위치 왼쪽된 패널 중간 ONH 카세트.</li>
		<li>X 번역기 나사를 사용 하 여 왼쪽된 패널에 망막 수준. 더는 ONH 중앙 망막의 위치를 조정 각 변조기의 주요 기능을 명심. 
		참고: 필요한 경우 오른쪽 패널에는 ONH를 아래로 이동 하려면 Y-번역기 나사를 사용 합니다. 위치는 언제 든 지 검사 사이의 세련 된 수 있습니다.</li>
	</ol></li></ol> 4. SD-10 월 ONH 및 망막의 이미징 <ol><li>일단 조정 된 콘텐츠를 클릭 &#34; 스냅숏 시작 &#34; SD 10 월 스캔 시작.
	<ol><li>3D 이미징, 필요 없는 경우 OCU 옵션의 선택을 취소.</li>
	</ol></li> <li>스캔 및 보고서 저장.</li>
	<li>다음 스캔 진행.</li>
	<li>이미지 두 번째 눈, 렌즈를 제거 후 카세트 따라 바뀌고 반복 단계 3.6-4.3.</li>
</ol> 5. 수집 완료 <li>인수 완료 되 면 카세트에서 마우스를 제거, 각 눈을 0.3 %hypromellose 안과 젤을 적용 하 고 세를 난방 접시에 마우스</li> <ol>
	<li>마지막 인수 후 소프트웨어를 닫고 컴퓨터와 OCT 시스템 (전원 공급 장치 단추) 전환.</li>
	<li>청소 살 균 제 카세트.</li>
</ol> 6. 분석 <ol><li>망막 레이어 두께 측정에 대 한 제조 업체에서 제공 하는 자동된 분할 소프트웨어를 사용 하 여.
	<ol><li>클릭는 &#34; 환자 &#34;, 원하는 선택 &#34; 시험 &#34;에서 목록, 그리고 클릭은 &#34; 검토 시험 &#34; 옵션.</li>
		<li>원하는 스캔에서 폴더 아이콘을 마우스 오른쪽 단추로 클릭 하 여 10 월 소프트웨어에 원하는 10 월 데이터를 로드.</li>
		<li>오른쪽 클릭 B-스캔, 최대 10 캘리퍼스;를 측정 함으로써는 캘리퍼스를 구성 하 고, 그들의 이름, 각도, 색상을 입력.</li>
		<li>적절 하 게 배치 B-스캔;에 마우스 오른쪽 버튼으로 원하는 캘리퍼스를 선택 측정에 대 한 망막에. 
		참고: 검사는 ONH 중심으로 서로 등거리 그것의 각 측에 5 캘리퍼스를 설정 합니다. Peripapillary 분석은 캘리퍼스는 ONH에서 너무 멀리 배치 되지 않습니다 있는지 확인 합니다. 방사형 스캔, 스캔 당 10 월 소프트웨어에 의해 선택 되었다 10 사진을 분석. 그들의 숫자에서 찾을 수 있습니다는 &#34; 보고서 &#34; 폴더.</li>
		<li>B-스캔을 마우스 오른쪽 단추로 클릭 하 고 클릭 하 여 스프레드시트 소프트웨어 프로그램에서 분석 결과 저장 &#34; 결과 저장 &#34;. 
		참고: 결과 검색 데이터와 같은 폴더에 찾을 수 있습니다.</li>
	</ol></li> <li>또는 만든 캘리퍼스 매크로 사용 하 여 &#34; MRI 망막 도구 &#34;, 오픈 소스 이미지 처리 프로그램 개발 (재료의 표 참조).
	<ol><li>있는지 확인 하는 &#34; MRI 망막 도구 &#34;와 &#34; 다각형 섹션 도구 수정 &#34; 매크로 활성화. 이미지를 로드 합니다. 측정을 시작 하는 m 버튼을 클릭. 
		참고: 매크로 자동으로 생성 한 0.2 m m 긴 카세트는 ONH의 양쪽 모두를 측정. 각 카세트 캘리퍼스로 5 측정 포인트 기능을 포함합니다. 그들의 측면 위치 변경 가능 하 고 광선 검사에서 peripapilla에 대 한 사용자 지정. RNFL/GCL 두께 측정 하는 카세트의 수평 위치를 미리 정의 된 하지만 대신 GC 복잡 한 레이어를 측정 하기 위해 쉽게 수정 가능. 면 스캔 품질이 가난, 수평 위치 조정 될 필요가 또는 그림 분석에서 제외할 필요가.</li>
		<li>수평 조정에 대 한 e 버튼을 클릭. 새롭게 문을 연에서 &#34; ROI 관리자 &#34; 창 첫 번째 카세트를 선택 하십시오.</li>
		<li>블루 다각형을 클릭 버튼을 그림에서 측정 된 레이어의 테두리를 클릭 하 여 첫 번째 카세트의 위치를 조정.</li>
		<li>두 번째 반복에서 첫 번째 선택 하 여 카세트는 &#34; ROI 매니저 &#34; 창 고 적절 한 이미지에 클릭. 다시 측정 하기 위해 r 버튼 클릭 합니다. 보기에서 결과 &#34; 측정 &#34; 창. 
		참고: 결과 수 있습니다 복사 스프레드시트 소프트웨어 프로그램을 언제 든 지. 그들은 바로 카세트 (r), 왼쪽된 카세트 (l), 및 합계에 대 한 다음 값 포함: Intden-카세트; 내 통합된 밀도 위치: 측정, m m 2; Mm; 카세트 내 캘리퍼스의 Len: 길이 평균: 카세트; 내 신호의 강도 의미 그리고 성병: 신호의 평균 농도의 표준 오차.</li>
		<li>다음 이미지로 진행.</li>
		<li>추가 스프레드시트 소프트웨어 프로그램에서 데이터를 분석. 
		참고: 층의 평균 두께 찾으려면 걸릴 10 Len 값.</li>
	</ol>
	</li>
</ol>

<ol>
	<li>Drexler, W., Fujimoto, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=State-of-the-art+retinal+optical+coherence+tomography.">State-of-the-art retinal optical coherence tomography.</a> Prog Retin Eye Res. 27 (1), 45-88 (2008).</li><li>Grenier, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=WFS1+in+Optic+Neuropathies:+Mutation+Findings+in+Nonsyndromic+Optic+Atrophy+and+Assessment+of+Clinical+Severity.">WFS1 in Optic Neuropathies: Mutation Findings in Nonsyndromic Optic Atrophy and Assessment of Clinical Severity.</a> Ophthalmology. 123 (9), 1989-1998 (2016).</li><li>Zmyslowska, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+thinning+as+a+marker+of+disease+progression+in+patients+with+Wolfram+syndrome.">Retinal thinning as a marker of disease progression in patients with Wolfram syndrome.</a> Diabetes Care. 38 (3), e36-e37 (2015).</li><li>Fischer, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninvasive,+in+vivo+assessment+of+mouse+retinal+structure+using+optical+coherence+tomography.">Noninvasive, in vivo assessment of mouse retinal structure using optical coherence tomography.</a> PLoS One. 4 (10), e7507 (2009).</li><li>Grieve, K., Thouvenin, O., Sengupta, A., Borderie, V. M., Paques, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Appearance+of+the+Retina+With+Full-Field+Optical+Coherence+Tomography.">Appearance of the Retina With Full-Field Optical Coherence Tomography.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 57 (9), OCT96-OCT104 (2016).</li><li>Chang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Retinal+degeneration+mutants+in+the+mouse.">Retinal degeneration mutants in the mouse.</a> Vision Res. 42 (4), 517-525 (2002).</li><li>Mustafa, S., Pandit, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Approach+to+diagnosis+and+management+of+optic+neuropathy.">Approach to diagnosis and management of optic neuropathy.</a> Neurol India. 62 (6), 599-605 (2014).</li><li>Sarzi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+human+OPA1delTTAG+mutation+induces+premature+age-related+systemic+neurodegeneration+in+mouse.">The human OPA1delTTAG mutation induces premature age-related systemic neurodegeneration in mouse.</a> Brain. 135 (Pt 12), 3599-3613 (2012).</li><li>Sarzi, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+steroidogenesis+promotes+early-onset+and+severe+vision+loss+in+females+with+OPA1+dominant+optic+atrophy.">Increased steroidogenesis promotes early-onset and severe vision loss in females with OPA1 dominant optic atrophy.</a> Hum Mol Genet. 25 (12), 2539-2551 (2016).</li><li>Delettre-Cribaillet, C., Hamel, C. P., Lenaers, G., Pagon, R. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optic+Atrophy+Type+1.">Optic Atrophy Type 1.</a> Gene Reviews. 7 (2007), (2007).</li><li>Lenaers, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dominant+optic+atrophy.">Dominant optic atrophy.</a> Orphanet J Rare Dis. 7 (46), (2012).</li><li>Delettre, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+gene+OPA1,+encoding+a+mitochondrial+dynamin-related+protein,+is+mutated+in+dominant+optic+atrophy.">Nuclear gene OPA1, encoding a mitochondrial dynamin-related protein, is mutated in dominant optic atrophy.</a> Nat Genet. 26 (2), 207-210 (2000).</li><li>Liu, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+retinal+morphologic+and+functional+changes+in+mice+following+optic+nerve+crush.">Monitoring retinal morphologic and functional changes in mice following optic nerve crush.</a> Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (6), 3766-3774 (2014).</li></ol>

저자는 공개 없다.

OCT 시스템은 비-침략 적 vivo에서 이미징 방법, 고해상도 망막 교차 section 같은 검사를 제공 합니다. 따라서, 그것의 주요 이점은 정기적으로 마우스 모델에 인 간에 게 적용 하는 프로토콜을 바꾸어 좋은 기회와 상세한 분석을 위한 잠재력 이다.
Opa1delTTAG 돌연변이 생쥐의 예에서는 SD-10 월 DOA 이상9의 추가 탐사에 대 한 허용 되는 RNFL 및 GC...

10 월 망막 구조1, 시 신경 머리 (ONH) 등의 검사를 용이 하 게 하는 진단 도구입니다. 년 동안 인간2,3, 설치류4,5에서 뿐만 아니라 질병 진행의 신뢰할 수 있는 표시기 되고있다. 간섭계를 사용 하 여 2 µ m 축 해상도 망막 층의 단면 이미지를 만듭니다. 안쪽 층은 망막 신경 섬유 (RNFL), 포함 된 레이어 RGC 축 삭, 신경 절 세포 레이어 (GCL), 주로 RGC 시체를 포함 하 여 뒤. 다음은 내부 plexiform 계층 (IPL), RGC dendrites 바이 폴라, 수평, 그리고 amacrine 세포 축 삭을 만나는 곳입니다. 가로 셀, 함께이 형성 안 핵 층 (INL), 그리고 그들의 돌출 외부 plexiform 레이어 (OPL) 축 삭 포토 리셉터와 연결. 이 포토 리셉터 세포 기관과 외부 핵 층 (ONL), 뒤 및 외부 제한 막 (옴), 내부 세그먼트/외부 세그먼트 라고도 포토 리셉터 계층에서 분리 (IS / OS) 계층. 마지막으로, 마우스 망막에 마지막 관찰 레이어는 망막 안료 상피 (RPE) 및 맥락 막 (C). 혼자 RNFL은 일반적으로 너무 얇은 쥐;에서 측정 따라서, 낫4,5는 대신 RNFL/GCL을 분석입니다. 또 다른 가능성은 IPL 뿐만 아니라 후자 포함 된 GC 복잡 한 레이어, 두꺼운 고 따라서 더욱 쉽게 10 월 측정 스캔4. 따라서, 10 월에 OPNs와 같은 망막의 병 적인 상태에 대 한 통찰력을 제공할 수 있습니다.
또는, 마우스 망막의 두께 종종 사후 조직학으로 분석 했다. 그러나,이 기술은 얼굴 제한 관련 된 조직 수집, 고정, 절단, 얼룩, 장착, 등 그러므로, 미묘한 두께 변화 등 몇 가지 결함이 감지할 수 없습니다. 마지막으로, 같은 마우스 테스트할 수 없습니다에서 여러 시간 때문에 점, 당 동물의 수 공부 크게 증가와 달리 10 월. 모두 모두, 반복에 대 한 비 침해, 고해상도, 가능성, 시간 시간, 및 10 월 기술 사용의 용이성에 모니터링 할 선택의 방법 망막 질병 연구에.
마우스 모델은 유전자 결함을 식별 하 고 retinopathies6기본 분자 메커니즘을 명료 하 게 하는 데 사용 됩니다. OPN는 약 1.2 백만 RGC axons 이루어져 있다 (에), 망막 시 신경에 상당한 손상의 형태입니다. OPN ON에 집중 될 수 있다 또는 선도 시야 손실 후, 실명 아닌7또는 다른 장애, 선천적인된 보조 수 있습니다. OPN의 특성을 특성 RGC 손실 되며 손상에는 관찰 될 수 있다 인간 10 월에 RNFL와 GCL 숱이2,3. 한편, OPN의 이상, 아직도 제대로 이해 하 고 따라서 마우스 망막 테스트 필요가 남아 있다.
이 원고는 이미징 및 Opa1delTTAG 마우스 선8,9, 지배적인 광섬유 위축 (DOA)10모델의 예를 사용 하 여 망막 층 두께의 정량화를 설명 합니다. RGC 이상 평가, 방사형, 직사각형, 그리고 환상 검사 정량 했다. 이것은 10 월 소프트웨어에서 제공 하는 표준 캘리퍼스 또는 오픈 소스 이미지 처리 프로그램 개발 만든 매크로 이루어졌다. 만든 캘리퍼스는 사용 하기 쉬운, 재현, 그리고 더 정확 하 게 표준 캘리퍼스 조작 하기 어렵고 종종 RNFL/GCL, 보다 두꺼운 있습니다. 매크로 5 포인트에서와 peripapillary 지역에서 ONH의 양쪽에 고정된 위치에서 자동으로 검색 된 계층에 대 한 측정을 수행합니다. 제시 프로토콜의 목표 10 월 스캔 수집 RGCs에 초점을 맞춘 망막 위치 지정을 설명 하는입니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="1619">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:296px;">Mice</td>
			<td style="width:324px;"></td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td style="width:909px;"></td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;">Opa1delTTAG mouse</td>
			<td style="width:324px;">Institute for Neurosciences in Montpellier, INSERM UMR 1051, France</td>
			<td style="width:91px;">-</td>
			<td>Opa1 knock-in mice carrying&#160; OPA1 c.2708_2711delTTAG mutation on C57Bl6/J background</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:296px;">Name</td>
			<td style="width:324px;">Company</td>
			<td style="width:91px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Equipment</td>
			<td style="width:324px;"></td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:296px;">EnVisu R2200 SD-OCT Imaging System</td>
			<td style="width:324px;">Bioptigen, Leica Microsystems, Germany</td>
			<td style="width:91px;">-</td>
			<td>Spectral-Domain Optic Coherence Tomography system</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:296px;">EnVisu R2200 SD-OCT Imaging System Software</td>
			<td style="width:324px;">Bioptigen, Leica Microsystems, Germany</td>
			<td style="width:91px;">-</td>
			<td>Software for OCT acquisition and analysis</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:296px;">ImageJ 1.48v</td>
			<td style="width:324px;">Wayne Rasband, National Institutes of Health, USA</td>
			<td style="width:91px;">-</td>
			<td>Software for analysis, requires downloading and installing two hommade macros: http://dev.mri.cnrs.fr/projects/imagej-macros/wiki/Retina_Tool</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:296px;">Self-regulating heating plate</td>
			<td style="width:324px;">Bioseb, France</td>
			<td>BIO-062</td>
			<td>Protection against hypothermia</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:296px;">Name</td>
			<td style="width:324px;">Company</td>
			<td style="width:91px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Supplies</td>
			<td style="width:324px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Nose Band</td>
			<td style="width:324px;">-</td>
			<td style="width:91px;">-</td>
			<td>Elastic band</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:296px;">Gauze pads 3&#34;x3&#34;</td>
			<td style="width:324px;">Curad, USA</td>
			<td>CUR20434ERB</td>
			<td>Protection against hypothermia</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:296px;">Dual Ended Cotton tip applicator</td>
			<td style="width:324px;">Essence of Beauty, CVS Health Corporation, USA</td>
			<td style="width:91px;">-</td>
			<td>Gel application</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:296px;">Cotton Twists</td>
			<td style="width:324px;">CentraVet, France</td>
			<td style="width:91px;">T.7979C.CS</td>
			<td>Mouse positioning</td>
		</tr>
		<tr height="40">
			<td height="40" style="height:40px;width:296px;">Name</td>
			<td style="width:324px;">Company</td>
			<td style="width:91px;">Catalog Number</td>
			<td>Comments</td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">Reagents and Drugs</td>
			<td style="width:324px;"></td>
			<td style="width:91px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;width:296px;">N&#233;osyn&#233;phrine Faure 10%</td>
			<td style="width:324px;">Laboratoires Europhtha, Monaco</td>
			<td style="width:91px;">-</td>
			<td>Eye dilatation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:296px;">Mydriaticum 0.5%</td>
			<td style="width:324px;">Laboratoires Th&#233;a, France</td>
			<td style="width:91px;">3397908</td>
			<td>Eye dilatation</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:296px;">Cebesine 0.4%</td>
			<td style="width:324px;">Laboratoire Chauvin, Bausch&#38;Lomb, France</td>
			<td style="width:91px;">3192342</td>
			<td>Local anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:296px;">Imalgene 1000</td>
			<td style="width:324px;">Merial, France/CentraVet, France</td>
			<td style="width:91px;">IMA004</td>
			<td>General anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:296px;">Rompun</td>
			<td>Bayer Healthcare, Germany/CentraVet, France</td>
			<td style="width:91px;">ROM001</td>
			<td>General anesthesia, analgesia, muscle relaxation</td>
		</tr>
		<tr height="27">
			<td height="27" style="height:27px;width:296px;">NaCl 0,9%</td>
			<td style="width:324px;">Laboratoire Osalia, France&#160;</td>
			<td style="width:91px;">103697114</td>
			<td>Physiological serum</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:296px;">Systene Ultra</td>
			<td style="width:324px;">Alcon, Novartis, USA</td>
			<td style="width:91px;">-</td>
			<td>Hydration of eyes</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:296px;">GenTeal&#39;</td>
			<td style="width:324px;">Alcon, Novartis, USA</td>
			<td style="width:91px;">-</td>
			<td>Ophtalmic gel to minimize light refraction and opacities</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:296px;">Aniospray Surf 29</td>
			<td style="width:324px;">Laboratoires Anios, France</td>
			<td>59844</td>
			<td>Desinfectant</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

optical coherence tomography: imaging mouse retinal ganglion cells in vivo

망막에 구조 변경 안과 질병의 일반적인 발현 됩니다. 광학 일관성 단층 촬영 (OCT) 그들의 식별에서 비보에있습니다-빠르게, 반복적으로, 그리고 높은 해상도. 이 프로토콜 광섬유 neuropathies (OPN)를 공부 하는 강력한 도구로 마우스 망막에 10 월 영상을 설명 합니다. OCT 시스템은 일반적인 사후 조직학 분석을 간섭계 기반, 비-침략 적 대안 이다. 그것은 망막 엷게 또는 두껍게 등의 변경 내용을 추적 하는 가능성을 허용 하는 망막 두께의 신속 하 고 정확한 평가 제공 합니다. 선물이 Opa1delTTAG 마우스 라인의 예제와 이미징 프로세스 및 분석. 세 가지 유형의 스캔, 정량화 방법으로 두 제안: 표준 및 수 제 캘리퍼스. 후자는 peripapillary 망막에서 사용 하기 위해 최고의 동안 방사형 검사; 더 정확 하 게 되 고, 하는 것이 얇은 구조를 분석 하는 데 좋습니다. 여기에 설명 된 모든 접근 하지만 망막 신경 절 세포 (RGC) 설계는 다른 세포 인구에 쉽게 적응할 수 있다. 끝으로, 10 월 마우스 모델 형질에 효율적 이며 치료 개입의 신뢰할 수 있는 평가 위해 사용 될 가능성이 있다.

SD-10 월 기술 망막 상상 및 두께 조직학, 비교 하지만 빠른 분석과 더 자세한 (그림 3) 수 있습니다. 제시 wildtype C57Bl/6 마우스, 비록 SD 10 월 스캔의 품질 (그림 3A, 오른쪽)은 (그림 3A, 왼쪽) 망막 횡단면의 이미지의 좋은, 그것은 더 많은 레이어 (예: 옴)을 시각화. 또한, 그것은 일 또는 조직학 분석을 위...

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Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo

이 원고는 고해상도 스펙트럼 도메인 광학 일관성 단층 촬영 (SD-10 월)와 마우스 망막의 비보에 이미징에 대 한 프로토콜을 설명합니다. 그것은 몇 가지 검색 및 측정 방법 설명 peripapillary 지역에서 망막 신경 절 세포 (RGC)에 초점을 맞추고.

광학 일관성 단층 촬영: 마우스 망막 신경 절 세포에서 Vivo에서 화상 진 찰

Structural changes in the retina are common manifestations of ophthalmic diseases. Optical coherence tomography (OCT) enables their identification in ...

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Research

JoVE Journal

Neuroscience

Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo

19.1K 조회수.  INSERM U1051, Institut of Neurosciences of Montpellier. 이 원고는 고해상도 스펙트럼 도메인 광학 일관성 단층 촬영 (SD-10 월)와 마우스 망막의 비보에 이미징에 대 한 프로토콜을 설명합니다. 그것은 몇 가지 검색 및 측정 방법 설명 peripapillary 지역에서 망막 신경 절 세포 (RGC)에 초점을 맞추고.

비디오: Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo

An Isolated Retinal Preparation to Record Light Response from Genetically Labeled Retinal Ganglion Cells

The first steps in vertebrate vision take place when light stimulates the rod and cone photoreceptors of the retina 1. This information is then segregated into what are known as the ON and OFF pathways. The photoreceptors signal light information to the bipolar cells (BCs), which depolarize in response to increases (On BCs) or decreases (Off BCs) in light intensity. This segregation of light information is maintained at the level of the retinal ganglion cells (RGCs), which have dendrites stratifying in either the Off sublamina of the inner plexiform layer (IPL), where they receive direct excitatory input from Off BCs, or stratifying in the On sublamina of the IPL, where they receive direct excitatory input from On BCs. This segregation of information regarding increases or decreases in illumination (the On and Off pathways) is conserved and signaled to the brain in parallel.
The RGCs are the output cells of the retina, and are thus an important cell to study in order to understand how light information is signaled to visual nuclei in the brain. Advances in mouse genetics over recent decades have resulted in a variety of fluorescent reporter mouse lines where specific RGC populations are labeled with a fluorescent protein to allow for identification of RGC subtypes 2 3 4 and specific targeting for electrophysiological recording. Here, we present a method for recording light responses from fluorescently labeled ganglion cells in an intact, isolated retinal preparation. This isolated retinal preparation allows for recordings from RGCs where the dendritic arbor is intact and the inputs across the entire RGC dendritic arbor are preserved. This method is applicable across a variety of ganglion cell subtypes and is amenable to a wide variety of single-cell physiological techniques.

This article provides a description of how to dissect and record from the isolated retinal preparation in mouse. In particular, we describe how to record light responses from a fluorescently labeled ganglion cell population and subsequently identify and analyze its morphology.

유전적으로 망막 신경절 라벨 셀에서 라이트 응답을 기록하기 위해 절연 망막 준비

The first steps in vertebrate vision take place when light stimulates the rod and cone photoreceptors of the retina 1.  This information is then ...

연구

신경과학

Optical Imaging of Neurons in the Crab Stomatogastric Ganglion with Voltage-sensitive Dyes

Voltage-sensitive dye imaging of neurons is a key methodology for the understanding of how neuronal networks are organised and how the simultaneous activity of participating neurons leads to the emergence of the integral functionality of the network. Here we present the methodology of application of this technique to identified pattern generating neurons in the crab stomatogastric ganglion. We demonstrate the loading of these neurons with the fluorescent voltage-sensitive dye Di-8-ANEPPQ and we show how to image the activity of dye loaded neurons using the MiCAM02 high speed and high resolution CCD camera imaging system. We demonstrate the analysis of the recorded imaging data using the BVAna imaging software associated with the MiCAM02 imaging system. The simultaneous voltage-sensitive dye imaging of the detailed activity of multiple neurons in the crab stomatogastric ganglion applied together with traditional electrophysiology techniques (intracellular and extracellular recordings) opens radically new opportunities for the understanding of how central pattern generator neural networks work.

Here we present the methodology for fast and high resolution fluorescent voltage-sensitive dye imaging of detailed activity of neurons in the crab stomatogastric ganglion.

전압에 민감한 염료와 크랩 Stomatogastric 신경절에서 뉴런의 광학 이미징

Voltage-sensitive dye imaging of neurons is a key methodology for the understanding of how neuronal networks are organised and how the simultaneous ...

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural connectivity form during development. In mice, retinofugal projections are arranged in a topographic manner and form eye-specific layers in the Lateral Geniculate Nucleus (dLGN) of the thalamus and the Superior Colliculus (SC). The development of these precise patterns of retinofugal projections has typically been studied by labeling populations of RGCs with fluorescent dyes and tracers, such as horseradish peroxidase1-4. However, these methods are too coarse to provide insight into developmental changes in individual RGC axonal arbor morphology that are the basis of retinotopic map formation. They also do not allow for the genetic manipulation of RGCs.
Recently, electroporation has become an effective method for providing precise spatial and temporal control for delivery of charged molecules into the retina5-11. Current retinal electroporation protocols do not allow for genetic manipulation and tracing of retinofugal projections of a single or small cluster of RGCs in postnatal mice. It has been argued that postnatal in vivo electroporation is not a viable method for transfecting RGCs since the labeling efficiency is extremely low and hence requires targeting at embryonic ages when RGC progenitors are undergoing differentiation and proliferation6. 
In this video we describe an in vivo electroporation protocol for targeted delivery of genes, shRNA, and fluorescent dextrans to murine RGCs postnatally. This technique provides a cost effective, fast and relatively easy platform for efficient screening of candidate genes involved in several aspects of neural development including axon retraction, branching, lamination, regeneration and synapse formation at various stages of circuit development. In summary we describe here a valuable tool which will provide further insights into the molecular mechanisms underlying sensory map development.

Transfection of Mouse Retinal Ganglion Cells by in vivo Electroporation

We demonstrate an in vivo electroporation protocol for transfecting single or small clusters of retinal ganglion cells (RGCs) and other retinal cell types in postnatal mice over a wide range of ages. The ability to label and genetically manipulate postnatal RGCs in vivo is a powerful tool for developmental studies.

마우스 망막 신경절 세포 Transfection로 생체내에 Electroporation

The targeting and refinement of RGC projections to the midbrain is a popular and powerful model system for studying how precise patterns of neural ...

Thinned-skull Cortical Window Technique for In Vivo Optical Coherence Tomography Imaging

Optical coherence tomography (OCT) is a biomedical imaging technique with high spatial-temporal resolution. With its minimally invasive approach OCT has been used extensively in ophthalmology, dermatology, and gastroenterology1-3. Using a thinned-skull cortical window (TSCW), we employ spectral-domain OCT (SD-OCT) modality as a tool to image the cortex in vivo. Commonly, an opened-skull has been used for neuro-imaging as it provides more versatility, however, a TSCW approach is less invasive and is an effective mean for long term imaging in neuropathology studies. Here, we present a method of creating a TSCW in a mouse model for in vivo OCT imaging of the cerebral cortex.

Thinned-skull Cortical Window Technique for In Vivo Optical Coherence Tomography Imaging

We present a method of creating a thinned-skull cortical window (TSCW) in a mouse model for in vivo OCT imaging of the cerebral cortex.

에 얇게 - 두개골 두피 창 기술<em&gt; 생체 내</em&gt; 광 결맞음 단층 촬영 영상

Optical coherence tomography (OCT) is a biomedical imaging technique  with high spatial-temporal resolution. With its minimally invasive approach OCT  has ...

Implementing Dynamic Clamp with Synaptic and Artificial Conductances in Mouse Retinal Ganglion Cells

Ganglion cells are the output neurons of the retina and their activity reflects the integration of multiple synaptic inputs arising from specific neural circuits. Patch clamp techniques, in voltage clamp and current clamp configurations, are commonly used to study the physiological properties of neurons and to characterize their synaptic inputs. Although the application of these techniques is highly informative, they pose various limitations. For example, it is difficult to quantify how the precise interactions of excitatory and inhibitory inputs determine response output. To address this issue, we used a modified current clamp technique, dynamic clamp, also called conductance clamp 1, 2, 3 and examined the impact of excitatory and inhibitory synaptic inputs on neuronal excitability. This technique requires the injection of current into the cell and is dependent on the real-time feedback of its membrane potential at that time. The injected current is calculated from predetermined excitatory and inhibitory synaptic conductances, their reversal potentials and the cell's instantaneous membrane potential. Details on the experimental procedures, patch clamping cells to achieve a whole-cell configuration and employment of the dynamic clamp technique are illustrated in this video article. Here, we show the responses of mouse retinal ganglion cells to various conductance waveforms obtained from physiological experiments in control conditions or in the presence of drugs. Furthermore, we show the use of artificial excitatory and inhibitory conductances generated using alpha functions to investigate the responses of the cells.

This video article illustrates the set-up, the procedures to patch cell bodies and how to implement dynamic clamp recordings from ganglion cells in whole-mount mouse retinae. This technique allows the investigation of the precise contribution of excitatory and inhibitory synaptic inputs, and their relative magnitude and timing to neuronal spiking.

마우스 망막 신경절 세포의 시냅스와 인공 컨덕턴스와 동적 클램프 구현

Ganglion cells are the output neurons of the  retina and their activity reflects the integration of multiple synaptic inputs  arising from specific neural ...

Retrograde Labeling of Retinal Ganglion Cells in Adult Zebrafish with Fluorescent Dyes

As retrograde labeling retinal ganglion cells (RGCs) can isolate RGCs somata from dying sites, it has become the gold standard for counting RGCs in RGCs survival and regeneration experiments. Many studies have been performed in mammalian animals to research RGCs survival after optic nerve injury. However, retrograde labeling of RGCs in adult zebrafish has not yet been reported, though some alternative methods can count cell numbers in retinal ganglion cell layers (RGCL). Considering the small size of the adult zebrafish skull and the high risk of death after drilling on the skull, we open the skull with the help of acid-etching and seal the hole with a light curing bond, which could significantly improve the survival rate. After absorbing the dyes for 5 days, almost all the RGCs are labeled. As this method does not need to transect the optic nerve, it is irreplaceable in the research of RGCs survival after optic nerve crush in adult zebrafish. Here, we introduce this method step by step and provide representative results.

We introduce an efficient method to retrograde label retinal ganglion cells (RGCs) in adult zebrafish.

형광 염료와 성인 Zebrafish의 망막 신경절 세포의 퇴행성 라벨링

As retrograde labeling retinal ganglion cells (RGCs) can isolate RGCs somata from dying sites, it has become the gold standard for counting RGCs in RGCs ...

Single-cell RNA-Seq of Defined Subsets of Retinal Ganglion Cells

The discovery of cell type-specific markers can provide insight into cellular function and the origins of cellular heterogeneity. With a recent push for the improved understanding of neuronal diversity, it is important to identify genes whose expression defines various subpopulations of cells. The retina serves as an excellent model for the study of central nervous system diversity, as it is composed of multiple major cell types. The study of each major class of cells has yielded genetic markers that facilitate the identification of these populations. However, multiple subtypes of cells exist within each of these major retinal cell classes, and few of these subtypes have known genetic markers, although many have been characterized by morphology or function. A knowledge of genetic markers for individual retinal subtypes would allow for the study and mapping of brain targets related to specific visual functions and may also lend insight into the gene networks that maintain cellular diversity. Current avenues used to identify the genetic markers of subtypes possess drawbacks, such as the classification of cell types following sequencing. This presents a challenge for data analysis and requires rigorous validation methods to ensure that clusters contain cells of the same function. We propose a technique for identifying the morphology and functionality of a cell prior to isolation and sequencing, which will allow for the easier identification of subtype-specific markers. This technique may be extended to non-neuronal cell types, as well as to rare populations of cells with minor variations. This protocol yields excellent-quality data, as many of the libraries have provided read depths greater than 20 million reads for single cells. This methodology overcomes many of the hurdles presented by Single-cell RNA-Seq and may be suitable for researchers aiming to profile cell types in a straightforward and highly efficient manner.

Here, we present a combinatorial approach for classifying neuronal cell types prior to isolation and for the subsequent characterization of single-cell transcriptomes. This protocol optimizes the preparation of samples for successful RNA Sequencing (RNA-Seq) and describes a methodology designed specifically for the enhanced understanding of cellular diversity.

망막 신경절 세포의 정의 된 서브 세트의 단일 세포 RNA-Seq

The discovery of cell type-specific markers can provide insight into cellular function and the origins of cellular heterogeneity. With a recent push for ...

Using Optical Coherence Tomography and Optokinetic Response As Structural and Functional Visual System Readouts in Mice and Rats

Optical coherence tomography (OCT) is a fast, non-invasive, interferometric technique allowing high-resolution retinal imaging. It is an ideal tool for the investigation of processes of neurodegeneration, neuroprotection and neuro-repair involving the visual system, as these often correlate well with retinal changes. As a functional readout, visually evoked compensatory eye and head movements are commonly used in experimental models involving the visual function. Combining both techniques allows a quantitative in vivo investigation of structure and function, which can be used to investigate the pathological conditions or to evaluate the potential of novel therapeutics. A great benefit of the presented techniques is the possibility to perform longitudinal analyses allowing the investigation of dynamic processes, reducing variability and cuts down the number of animals needed for the experiments. The protocol described aims to provide a manual for acquisition and analysis of high quality retinal scans of mice and rats using a low cost customized holder with an option to deliver inhalational anesthesia. Additionally, the proposed guide is intended as an instructional manual for researchers using optokinetic response (OKR) analysis in rodents, which can be adapted to their specific needs and interests.

A detailed protocol for the assessment of structural and visual readouts in rodents by optical coherence tomography and optokinetic response is presented. The results provide valuable insights for ophthalmologic as well as neurologic research.

쥐와 쥐에 구조와 기능적 시각 시스템 판독으로 광학 일관성 단층 촬영 및 Optokinetic 응답을 사용 하 여

Optical coherence tomography (OCT) is a fast, non-invasive, interferometric technique allowing high-resolution retinal imaging. It is an ideal tool for ...

Retinal Vascular Reactivity as Assessed by Optical Coherence Tomography Angiography

The vascular supply to the retina has been shown to dynamically adapt through vasoconstriction and vasodilation to accommodate the metabolic demands of the retina. This process, referred to as retinal vascular reactivity (RVR), is mediated by neurovascular coupling, which is impaired very early in retinal vascular diseases such as diabetic retinopathy. Therefore, a clinically feasible method of assessing vascular function may be of significant interest in both research and clinical settings. Recently, in vivo imaging of the retinal vasculature at the capillary level has been made possible by the FDA approval of optical coherence tomography angiography (OCTA), a noninvasive, minimal risk and dyeless angiography method with capillary level resolution. Concurrently, physiological and pathological changes in RVR have been shown by several investigators. The method shown in this manuscript is designed to investigate RVR using OCTA with no need for alterations to the clinical imaging procedures or device. It demonstrates real time imaging of the retina and retinal vasculature during exposure to hypercapnic or hyperoxic conditions. The exam is easily performed with two personnel in under 30 min with minimal subject discomfort or risk. This method is adaptable to other ophthalmic imaging devices and the applications may vary based on the composition of the gas mixture and patient population. A strength of this method is that it allows for an investigation of retinal vascular function at the capillary level in human subjects in vivo. Limitations of this method are largely those of OCTA and other retinal imaging methods including imaging artifacts and a restricted dynamic range. The results obtained from the method are OCT and OCTA images of the retina. These images are amenable to any analysis that is possible on commercially available OCT or OCTA devices. The general method, however, can be adapted to any form of ophthalmic imaging.

This article describes a method for measuring retinal vasculature reactivity in vivo with human subjects using a gas breathing provocation technique to deliver vasoactive stimuli while acquiring retinal images.

광학 일관성 단층 조영술 혈관 조영술에 의해 평가된 망막 혈관 반응성

The vascular supply to the retina has been shown to dynamically adapt through vasoconstriction and vasodilation to accommodate the metabolic demands of ...

In vivo Calcium Imaging of Mouse Geniculate Ganglion Neuron Responses to Taste Stimuli

Within the last ten years, advances in genetically encoded calcium indicators (GECIs) have promoted a revolution in in vivo functional imaging. Using calcium as a proxy for neuronal activity, these techniques provide a way to monitor the responses of individual cells within large neuronal ensembles to a variety of stimuli in real time. We, and others, have applied these techniques to image the responses of individual geniculate ganglion neurons to taste stimuli applied to the tongues of live anesthetized mice. The geniculate ganglion is comprised of the cell bodies of gustatory neurons innervating the anterior tongue and palate as well as some somatosensory neurons innervating the pinna of the ear. Imaging the taste-evoked responses of individual geniculate ganglion neurons with GCaMP has provided important information about the tuning profiles of these neurons in wild-type mice as well as a way to detect peripheral taste miswiring phenotypes in genetically manipulated mice. Here we demonstrate the surgical procedure to expose the geniculate ganglion, GCaMP fluorescence image acquisition, initial steps for data analysis, and troubleshooting. This technique can be used with transgenically encoded GCaMP, or with AAV-mediated GCaMP expression, and can be modified to image particular genetic subsets of interest (i.e., Cre-mediated GCaMP expression). Overall, in vivo calcium imaging of geniculate ganglion neurons is a powerful technique for monitoring the activity of peripheral gustatory neurons and provides complementary information to more traditional whole-nerve chorda tympani recordings or taste behavior assays.

Here we present how to expose the geniculate ganglion of a live, anesthetized laboratory mouse and how to use calcium imaging to measure the responses of ensembles of these neurons to taste stimuli, allowing for multiple trials with different stimulants. This allows for in depth comparisons of which neurons respond to which tastants.

마우스 의 생체 칼슘 이미징에서 맛 자극에 신경절 신경 반응

Within the last ten years, advances in genetically encoded calcium indicators (GECIs) have promoted a revolution in in vivo functional imaging. Using ...