J. Chua, N.A. Fisher, ö. DeShazer ve sabah Friedlander el yazması açıklanan yordamları tasarlanmıştır. J. Chua, N.A. Fisher, S.D. Falcinelli ve D. DeShazer deneyler yapılır. J. Chua el yazması yazdı.
Yazarlar Joshua J. W. Roan, Nora D. Doyle, Nicholas R. Carter ve Steven A. Tobery mükemmel teknik destek için ve David P. Fetterer ve Steven J. Kern istatistiksel analiz için teşekkür ederiz.
İş tarafından savunma tehdit azaltma ajansı önerisi #CBCALL12-THRB1-1-0270 A.M.F ve #CBS destek verdi. MEDBIO.02.10.Rd.034 D.D. için
Görüşleri, Yorumlar, sonuç ve öneriler yazarlar vardır ve mutlaka ABD Ordusu tarafından onaylanan değil.
Bu yayın içeriğini sayısı veya Savunma Bakanlığı politikaları yansıtmayabilir ne ticari adlarını, ticari ürünler, söz etmez veya kuruluşların ABD hükümeti tarafından onaylandığı anlamına.

1. Tıslayan hamamböceği koloni korumak için hazırlıklar
<ol><li>Tıslayan hamamböceği yaşamak için kümesler hazırlayın. İç duvarları kafes kafes dışına tırmanma ve kaçan Tıslayan hamamböceği önlemek için en yakın çevresi için vazelin, yaklaşık 20 ila 30 mm genişliğinde, ince bir tabaka uygulayın. Not: hamamböceği tıslama büyük bir yer var, yeterli yüksekliğini ve kapaklarını kapsayıcılar çeşitli barındırılıyor olabilir. Fare kafesleri kullanın (~ 43 cm x 23 cm x 20 cm). 37 ° C için mukadder kafesleri için vazelin geçerli değildir.</li>
	<li>Baş aşağı doğal utangaç böcekler için saklanacak bir yer sağlamak için kafesin içine yerleştirilen bir karton yumurta kartonu içerir. Karton yumurta kartonu polistren köpük plastik sindirim önlemek için yapılmış bir ile yerine değil.</li>
	<li>Odada mevcut yataklar kullanılıyorsa daha kolay temizlik için ve yeni taranmış perileri görünürlüğünü artırmak için sağlamaz.</li>
	<li>~ % 20 ham protein bileşimi içeren kuru köpek maması edinin. Kalitesiz köpek maması blender veya mutfak robotu ile eziyet ve 4 ° C'de depolayın</li>
	<li>Birkaç sığ yemekler ve akvaryum taş veya bir sünger yiyecek ve su elde etmek. Not: Custome Petri yemekler vardır.</li>
</ol>2. Tıslayan hamamböceği bakım ve yetiştirme
<ol><li>Hamam böcekleri (~ 5 cm)--dan a ticari doğurmak tıslama outbred Madagaskar elde edilir. Bu protokol için kullanılan Gromphadorhina laevigatatürdür. Tıslayan hamamböceği aldıktan hemen sonra içeren nakliye kutusunu açmak.</li>
	<li>Hayvanlar alınmasında kişisel koruyucu ekipman kullanım için uygun kurumsal yönergeleri izleyin. Not: kalın tek kullanımlık eldiven Tıslayan hamamböceği tarsal pençeleri keskin olduğu gibi Hamam böcekleri işlemek için kullanın.</li>
	<li>İlâ 75 büyük Tıslayan hamamböceği transfer (> 3 cm) büyük kafes başına. Yeni taranmış ve daha küçük perileri transfer (< 3 cm) için ayrı bir kafes. Not: önemli ölçüde daha fazla 75 büyük tutmak tıslama hamamböceği fare kafesi başına sağlık koloninin bozulan için neden olabilir ve ayrıca ölümle sonuçlanabilir.</li>
	<li>Kirli beyaz renkli, yavaşça olan yeni molted Hamam böceği, idare ve sıkma kaçının. Alternatif olarak, exoskeleton karartmak ve tutmadan önce sertleşmesine izin verir. Not: Akarlar, Gromphadorholaelaps schaeferi, sık sık--dan doğurmak aldıktan sonra Tıslayan hamamböceği eşlik kaldırmak için gerekli değildir. Faydalı akarları Tıslayan hamamböceği temiz tutmak ve insanlar için zararsızdır.</li>
	<li>Tıslayan hamamböceği ile zemin kuru köpek maması sığ bir tabak içinde bir veya iki kez bir hafta ver. Tıslayan hamamböceği yeterli gıda sonraki besleme kadar olması için köpek besin içerir. Islak ve küflü olmuştur herhangi bir gıda atmak.</li>
	<li>Köpek maması ek olarak kesilmiş meyve ve sebzeler, elma, patates veya marul, sığ bir tabak gibi sağlar. Küflü veya çürümüş gıda atmak.</li>
	<li>İçme suyu sığ bir tabak içinde bir veya iki kez bir hafta sağlar ancak yemek içinde belgili tanımlık kafes dökülmeyi önlemek için fazla değil. Küçük akvaryum taş veya bir sünger bir iniş pisti için küçük perileri sağlamak için çanak yerleştirin. Ters Ozmos su, varsa kullanır.</li>
	<li>Sıcaklık 21 ° C 30 ° C'ye kadar karanlıkta hamamböceği tıslama tutmak Deneme daha düşük sıcaklıkta (~ 21 ° C) ~ 2 ay ıslah ve gebelik azaltmak hedef alan büyük Tıslayan hamamböceği tutun. Buna ek olarak, perileri (28 ° C ile 30 ° C) daha yüksek sıcaklıklarda büyüme hızlandırmak için devam edin. Not: kafes, karanlık oda sıcaklığında (21 ° C) kabine tutun.</li>
	<li>Nem bir kuluçka makinesine hamamböceği tutulur tıslama Eğer ayrı bir tavada su ekleyerek sağlar.</li>
	<li>Kafes düzenli olarak veya aktarma tarafından 2-3 haftada bir temiz kafes Hamamböceklerine tıslama kuru dışkı scooping tarafından temiz. Kafesin dibinde kuru tutun. Aşırı su birikir ve kafesin dibinde dışkı ile karıştırın izni varsa kafes hemen temizle.</li>
</ol>3. Hamam böceği hazırlık deneme için
<ol><li>Bir kafeste Tıslayan hamamböceği uygun sayıda 37 ° C oksijen kuluçka 1 ila 3 hafta önce deney calıştıkları aktarın. Enjeksiyon için denetim grubu içerir. Bu calıştıkları dönem deneme sırasında sıcaklık şok kaçınmak için önemlidir.</li>
	<li>Vazelin jöle daha yüksek sıcaklık erir çünkü 37 ° C için mukadder kafesleri için geçerli değildir.</li>
	<li>Tıslayan hamamböceği her 1-2 gün gıda ve su yerine ve kafes temizlemek için kontrol edin.</li>
	<li>Açık tek kullanımlık plastik saklama kapları Tıslayan hamamböceği deneme sırasında gruplandırma için kapakları ile elde edilir. Havalandırma için kapağı veya kapsayıcı bir çivi ile tarafında delikler ve çekiç. Not: Kullanım vidalı kapak konteyner üzerinde ek Biyogüvenlik seviye 3 ayarı kaplarda kap. Snap kap kapsayıcılar kasetle, gerekirse takviye.</li>
	<li>Enjeksiyon gününde, 6-12 acclimatized Tıslayan hamamböceği konteyner, başına seks tarafından eşit dağıtım sağlanması gruplara dağıtabilir ve kitle vücut.</li>
	<li>Bireysel Tıslayan hamamböceği cinsiyetini belirlemek. Erkek ve kadın bunların eksikliği bulunan boynuzları çıkıntı tarafından seks belirler.</li>
	<li>Bireysel Tıslayan hamamböceği tartın. Tıslayan hamamböceği denge üzerinde ağırlığında kolaylaştırmak için şeytan iki tartmak tekne içinde alın. Not: deneyler arasında tutarlılık sağlamak için 4-8 g ağırlığıyla Tıslayan hamamböceği kullanın. Ancak, enfeksiyon sonra hayatta kalma hiçbir fark bulundu (1,5-2 g) küçük ve büyük (6-8 g) Tıslayan hamamböceği arasında. İlaç araştırmaları için Tıslayan hamamböceği ~ 5 g bir ağırlık ile vücut başına daha tutarlı bir ilaç konsantrasyonu elde etmek için kullanmak kitle.</li>
	<li>Bir su yemek yerine, yüksek su içeriği meyve veya bir dilim elma ya da patates gibi sebzeler içerir. Çürük yiyecek atmak. Konteyner kuru tutmak için ek su sağlar.</li>
	<li>Tıslayan hamamböceği 37 ° C'ye kadar enjeksiyonları dönün.</li>
</ol>4. bakteri kültürü ve hazırlıkları
Not: Bu protokol için kullanılan bakteriyel türdür B. mallei, B. pseudomallei ve B. thailandensis. Sınıf III biyolojik Emanet dolapları bir biyogüvenlik düzeyi (BSL) yer alan 3 laboratuvar veya B. mallei ve B. pseudomallei ile tüm manipülasyonlar sınıf II içinde gerçekleştirilmesi gerekir. Uygulamaları gerçekleştirin B. thailandensis benzer biyolojik güvenlik ile dolapları ya BSL2 ya da BSL3 laboratuar bulunmaktadır. BSL3 iş için kurumsal standart işletim prosedürü izleyin. Bakteri işlerken kişisel koruyucu ekipman kullanım için kurumsal yönergeleri izleyin.
<ol><li>En az 3 gün önce enfeksiyon Burkholderia ana bir tabak hazırla. Luria-Bertani (Lennox) (LB) kullanın agar B. pseudomallei veya B. thailandensis ve kullanım LB agar B. malleiiçin % 4 gliserol ile desteklenmiştir. -80 ° C'de depolanan bir % 25 gliserol hisse senedi bakterilerden çizgi Not: Her zaman doğrudan donmuş gliserol stoktan ana plaka çizgi; bakteri seri geçişini önlemek dan plaka için plaka bu azaltılmış virülans neden olabilir gibi.</li>
	<li>10-20 mL LB suyu B. thailandensis B. pseudomallei ve sömürgeler ana plaka ile aşılamak. Benzer şekilde B. malleiiçin % 4 gliserol ile desteklenmiş LB suyu aşılamak.</li>
	<li>175-250 devirde 37 ° c ~ 18 h için suyu kültür sallamak.</li>
	<li>2-3 mL 5000 x g 10 dk de kültürünün santrifüj kapasitesi.</li>
	<li>Süpernatant atın ve bakteriyel Pelet steril fosfat tamponlu tuz (PBS, 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2PO4, 1.8 mM KH2PO4, pH 7,4) resuspend.</li>
	<li>Ölçü vasıl 600 bir Absorbans 0,5, optik bir yoğunluğu (OD) sağlamak için PBS ile bakteri seyreltik bir Spektrofotometre nm.</li>
	<li>Seri olarak bakteri panolarında içinde PBS üzerinden başlangıç OD 0,5 oranında seyreltin. Bu süspansiyonlar enfeksiyon için kullanın.</li>
	<li>Birim inoculum (CFU) tarafından seri seyreltme şekillendirme ve 100 µL aliquots agar medya, kaplama koloni belirlemek. Plakalar için 24-48 h 37 ° C'de kuluçkaya.</li>
</ol>5. uyuşturucu hazırlıkları
<ol><li>Uyuşturucu vücut verilecek uygun miktarını belirlemek kitle. Tıslayan hamamböceği verilen CLQ doz 50 mg/kg olan standart doz memeliler, dayanıyordu/gün.</li>
	<li>Resuspend veya araç ilgi uyuşturucu oranında seyreltin. Örneğin, PBS CLQ 12 mg/mL konsantrasyonu oranında seyreltin. Bu konsantrasyon ilaç cilt 25 µL hamamböceği enjekte tıslama ~ 6 g için 300 µg sağlar.</li>
	<li>Gerekirse, uyuşturucu çözüm 0,22 µm şırınga filtreden geçirilerek sterilize.</li>
	<li>4 ° C'de uyuşturucu çözüm kullanmak kadar saklamak. Uyuşturucu çözüm en az 21 ° c (oda sıcaklığında) enjeksiyonları önce sıcak.</li>
</ol>6. enjektör montajı
<ol><li>İşaretçiyi istediğiniz birime (25 µL) ayarı vida tekrarlayan bir pipet üzerinde döndürerek ayarlayın.</li>
	<li>Tekrarlayan pipet yayın bar içe doğru itin ve itici dışa doğru çekin. Tekrarlayan pipet şimdi dolu bir şırınga karşılamak hazırdır. Not: bir denge üzerinde atılır su miktarını ölçerek tekrarlayan pipet tarafından atılır birim kalibre.</li>
	<li>1 mL şırınga ya bakteri ya da uyuşturucu içeren süspansiyon ile doldurun.</li>
	<li>Şırınga steril bir 26 veya 27 G ½ inç x (veya daha kısa) iğne ekleyin.</li>
	<li>Hava kabarcıkları üst şamandıra ve % 10 çamaşır suyu ile dolu bir kap içine baloncuklar ve bazı süspansiyon çıkarmak için şırınga dokunun.</li>
	<li>Yukarı dönük olacak şekilde iğne eğim ile şırınga tekrarlayan pipet şırınga klibin üzerine oturtun.</li>
	<li>Yayın çubuğunu dışa doğru çekin ve sıkıca şırınga pistonu itici karşı gelene kadar % 10 çamaşır suyu ile dolu bir kap içine boş enjeksiyonları gerçekleştirmek için dağıtıcı düğmesine basın.</li>
	<li>Sıvı şırınga dışarı atılır sağlamak için 1 veya 2 ek boş enjeksiyonları gerçekleştirin. Tekrarlayan pipet enjeksiyonlar için hazırdır.</li>
</ol>7. Hamam böceği enjeksiyonları
<ol><li>Sınıf II ve sınıf III biyolojik Emanet bir BSL2 kabin tüm hamamböceği enjeksiyonları gerçekleştirmek veya BSL3 ayarı kurumsal kullanarak kişisel koruyucu ekipman önerilir.</li>
	<li>Tıslayan hamamböceği ile temas gelebilir temiz çalışma yüzeyleri kabin emniyet. % 10 çamaşır suyu % 70 etanol tarafından takip artık çamaşır suyu kaldırmak için kullanın. Hava yüzey kuru izin.</li>
	<li>Bir elinizle Tıslayan hamamböceği onun yanında tut. Öyle ki enjeksiyon sırasında geri tepme değiştiremiyor Tıslayan hamamböceği hareketsiz. Böylece karın terga arasında Kutanöz membranlar maruz Tıslayan hamamböceği biraz kır.</li>
	<li>İğne bir 0 ° 30 ° açı Tıslayan hamamböceği dorso-ventral orta hat öyle ki diğer elini de tekrarlayan pipet tutun. Kutanöz membran 3rd, 4thveya 5inci tergum posterior ucundan yanındaki delik. Not: Giriş belirtilen açıda Tıslayan hamamböceği içine iğne iğne geçmesi değil ve Tıslayan hamamböceği dışarı çıkmak sağlar. Enjeksiyon yeri çkarlyor malzeme hemolymph ile dolu karın boşluğu içinde bulunur sağlar. Tıslayan hamamböceği holding ve girişim iğneleri canlı bakteri ya da ilaç ile önce su ile enjekte uygulama.</li>
	<li>Sıkıca birimi enjekte için besleme butonuna basın. Yavaşça olarak kullanılan aynı açıda iğne giriş için geri alıyorum.</li>
	<li>Değil henüz enjekte etmiş Tıslayan hamamböceği ayırmak için bir yer ayrı bir kapta enjekte Tıslayan hamamböceği. Dışarı enjeksiyon sitesinden oozed herhangi bir hemolymph yok etmek.</li>
	<li>Aynı şırınga ve iğne kullanarak bir grup içindeki diğer Tıslayan hamamböceği enjekte devam edin. Şırınga pistonu eksik son enjeksiyon dozaj önlemek için varil dibinde ulaşmadan önce enjekte durdurmak.</li>
	<li>Bakteri ve uyuşturucu, olanlar gibi tek bir Tıslayan hamamböceği içinde birden çok enjeksiyonlar için farklı bir tergum Tıslayan hamamböceği dorsal tarafta kenarlarında enjekte. Alternatif olarak, birden çok enjeksiyonları farklı terga (3rd 5inciiçin) adlı enjekte edilerek gerçekleştirin.</li>
	<li>Konteyner kapağı güvenli bir şekilde sabitlenmiş emin olun. Teyp, kapaklı gerekirse güçlendirmek.</li>
	<li>Hamamböceği oksijen 37 ° C kuluçka tıslama kuluçkaya.</li>
</ol>8. kayıt hamamböceği morbidite ve mortalite tıslama
<ol><li>Tüm Tıslayan hamamböceği sınavları sınıf II ve sınıf III biyolojik güvenlik ile kurumsal kabin kişisel koruyucu ekipman önerilen gerçekleştirin. Emniyet dolap yüzeyleri % 70 etanol tarafından takip % 10 çamaşır suyu ile temizleyin. Hava için çalışma alanını kuru izin.</li>
	<li>Tıslayan hamamböceği bir veya iki kez 1-2 hafta tablo (Tablo 1) puanlama morbidite kullanarak günlük bir süre içinde puan.</li>
	<li>Ölü Tıslayan hamamböceği kapsayıcıdan kaldır ve ölüm kaydedin.</li>
	<li>Aşırı nem konteyner alt kısmında birikmiş Eğer temiz bir kapsayıcı Hamamböceklerine tıslama canlı kalan aktarın. Alternatif olarak, tek kullanımlık kağıt havlu aşırı nem silmek için kullanın.</li>
	<li>Çürük yiyecek günlük ve dönüş oksijen 37 ° C kuluçka Hamamböceklerine tıslama değiştirin.</li>
	<li>Çalışma sonunda kalan kurtulan bir biohazard torbaya koyun ve ötenazi yapmak-80 ° C'de dondurmak.</li>
	<li>LD50 belirlemek için veri14 istatistiksel analiz ve hayatta kalmak için Kaplan-Meier ve günlük sırası analizi tarafından. Tüm böcek deneme gibi bazı ölümler kontrol grubunda oluşabilir. Bu ölümlerin böcekler 15doğal ölüm atfedilen. Daha ayrıntılı bilgi için nasıl hesabına ölümlerinin kontrol grubunda, başvuru15bakın.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Sifri, C. D., Ausubel, F. M., Boquet, P., Cossart, P., Normark, S., Rappuoli, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cellular Microbiology. , 543-563 (2004).</li><li>Silcock, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Is+your+experiment+really+necessary?.">Is your experiment really necessary?.</a> New Sci. 134 (1817), 32-34 (1992).</li><li>Muller, U., Vogel, P., Alber, G., Schaub, G. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+innate+immune+system+of+mammals+and+insects.">The innate immune system of mammals and insects.</a> Contrib Microbiol. 15, 21-44 (2008).</li><li>Lavine, M. D., Strand, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insect+hemocytes+and+their+role+in+immunity.">Insect hemocytes and their role in immunity.</a> Insect Biochem Mol Biol. 32 (10), 1295-1309 (2002).</li><li>Bergin, D., Reeves, E. P., Renwick, J., Wientjes, F. B., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superoxide+production+in+Galleria+mellonella+hemocytes:+identification+of+proteins+homologous+to+the+NADPH+oxidase+complex+of+human+neutrophils.">Superoxide production in Galleria mellonella hemocytes: identification of proteins homologous to the NADPH oxidase complex of human neutrophils.</a> Infect Immun. 73 (7), 4161-4170 (2005).</li><li>Browne, N., Heelan, M., Kavanagh, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+analysis+of+the+structural+and+functional+similarities+of+insect+hemocytes+and+mammalian+phagocytes.">An analysis of the structural and functional similarities of insect hemocytes and mammalian phagocytes.</a> Virulence. 4 (7), 597-603 (2013).</li><li>Lemaitre, B., Hoffmann, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+host+defense+of+Drosophila+melanogaster.">The host defense of Drosophila melanogaster.</a> Annu Rev Immunol. 25, 697-743 (2007).</li><li>Mulder, P. G., Shufran, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Madagascar+hissing+cockroaches,+information+and+care.">Madagascar hissing cockroaches, information and care.</a> Oklahoma Cooperative Extension Service Leaflet L-278. , 4 (2016).</li><li>Nelson, M. C., Fraser, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sound+production+in+the+cockroach,+Gromphadorhina+portentosa:+Evidence+for+communication+by+hissing.">Sound production in the cockroach, Gromphadorhina portentosa: Evidence for communication by hissing.</a> Behav Ecol Sociobiol. 6 (4), 305-314 (1980).</li><li>Chua, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=pH+Alkalinization+by+Chloroquine+Suppresses+Pathogenic+Burkholderia+Type+6+Secretion+System+1+and+Multinucleated+Giant+Cells.">pH Alkalinization by Chloroquine Suppresses Pathogenic Burkholderia Type 6 Secretion System 1 and Multinucleated Giant Cells.</a> Infect Immun. 85 (1), e0058616 (2017).</li><li>Fisher, N. A., Ribot, W. J., Applefeld, W., DeShazer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Madagascar+hissing+cockroach+as+a+novel+surrogate+host+for+Burkholderia+pseudomallei,+B.+mallei+and+B.+thailandensis.">The Madagascar hissing cockroach as a novel surrogate host for Burkholderia pseudomallei, B. mallei and B. thailandensis.</a> BMC Microbiol. 12, 117 (2012).</li><li>Haraga, A., West, T. E., Brittnacher, M. J., Skerrett, S. J., Miller, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burkholderia+thailandensis+as+a+model+system+for+the+study+of+the+virulence-associated+type+III+secretion+system+of+Burkholderia+pseudomallei.">Burkholderia thailandensis as a model system for the study of the virulence-associated type III secretion system of Burkholderia pseudomallei.</a> Infect Immun. 76 (11), 5402-5411 (2008).</li><li>West, T. E., Frevert, C. W., Liggitt, H. D., Skerrett, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhalation+of+Burkholderia+thailandensis+results+in+lethal+necrotizing+pneumonia+in+mice:+a+surrogate+model+for+pneumonic+melioidosis.">Inhalation of Burkholderia thailandensis results in lethal necrotizing pneumonia in mice: a surrogate model for pneumonic melioidosis.</a> Trans R Soc Trop Med Hyg. 102 Suppl 1, S119-S126 (2008).</li><li>Finney, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Probit Analysis. , (1971).</li><li>Abbott, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+method+of+computing+the+effectiveness+of+an+insecticide.">A method of computing the effectiveness of an insecticide.</a> J Am Mosq Control Assoc. 3 (2), 302-303 (1987).</li><li>Schell, M. A., Lipscomb, L., DeShazer, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+genomics+and+an+insect+model+rapidly+identify+novel+virulence+genes+of+Burkholderia+mallei.">Comparative genomics and an insect model rapidly identify novel virulence genes of Burkholderia mallei.</a> J Bacteriol. 190 (7), 2306-2313 (2008).</li><li>Wand, M. E., Muller, C. M., Titball, R. W., Michell, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macrophage+and+Galleria+mellonella+infection+models+reflect+the+virulence+of+naturally+occurring+isolates+of+B.+pseudomallei,+B.+thailandensis+and+B.+oklahomensis.">Macrophage and Galleria mellonella infection models reflect the virulence of naturally occurring isolates of B. pseudomallei, B. thailandensis and B. oklahomensis.</a> BMC Microbiol. 11 (1), 11 (2011).</li><li>Pilatova, M., Dionne, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Burkholderia+thailandensis+is+virulent+in+Drosophila+melanogaster.">Burkholderia thailandensis is virulent in Drosophila melanogaster.</a> PLoS One. 7 (11), e49745 (2012).</li><li>Ramarao, N., Nielsen-Leroux, C., Lereclus, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+insect+Galleria+mellonella+as+a+powerful+infection+model+to+investigate+bacterial+pathogenesis.">The insect Galleria mellonella as a powerful infection model to investigate bacterial pathogenesis.</a> J Vis Exp. (70), e4392 (2012).</li><li>Eklund, B. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+orange+spotted+cockroach+(Blaptica+dubia,+Serville+1839)+is+a+permissive+experimental+host+for+Francisella+tularensis.">The orange spotted cockroach (Blaptica dubia, Serville 1839) is a permissive experimental host for Francisella tularensis.</a> PeerJ Preprints. 4, e1524v1522 (2016).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

En iyi deneysel koşullar tutarlı süre taahhüdü ama en az gerektiren bir sağlıklı Tıslayan hamamböceği koloni başlayın. Hamamböceği tıslama oldukça uzun bir süre için gidebilirsiniz, ancak (~ hafta) yiyecek ve su, haftalık veya iki haftalık kafes bakım sağlanmalıdır. Bu yiyecek ve su kaynağı kontrol ve kafes kurudur sağlanması içerir. Kuru yaşam koşulları Bakımı calıştıkları ve daha yüksek sıcaklıklarda kuluçka sırasında özellikle önemlidir; Biz daha Tıslayan hamamböceği ?...

Böcekler bakteriyel Patogenez ve doğuştan gelen ana savunma eğitim için alternatif sigara memeli hayvan modeller olarak kullanımı son yıllarda ivme kazanmaktadır. Lojistik, nispeten ucuz maliyet ve alma, işleme ve memeliler göre böcekler için bakım kolaylığı nedeniyle bu. Böcekler araştırma kullanımı ile ilgili hiçbir yasal ilke olduğunu; Amaç tabi değil veya herhangi bir hayvan tarafından belirtilen koşullar Komitesi veya devlet kurumu kullanın. Böcekler gibi vekil hayvan modelleri özellikle virülans faktörleri, ana bilgisayar-patojen etkileşimleri ve değerlendirmeler anti-mikrobiyal ilaç etkinliğinin kapsamlı tarama çalışmaları için mükellef bulunmaktadır. Bunların kullanımı araştırma böylece bazı etik ikilemler hayvan deney 1,2yürütülmesi için doğal üstesinden gelmek için kullanılan memeli sayısını azaltabilirsiniz.
Böcekler ve memeliler 1,3doğuştan gelen bağışıklık sistemi arasında ortak olması yüksek derecede olduğundan böcekler vekil ev sahibi olarak hizmet verebilir. Böcek plasmatocytes ve memeli makrofajlar mikroorganizmaların 4phagocytose. Nötrofil böcek Özgününü hemocyte 5,6' dır. Böcek ve memeli hücreleri hücre içi oksidatif patlama yollar benzer; Reaktif oksijen türleri hem de orthologous p47phox ve p67phox proteinleri 5tarafından üretilmektedir. Toll reseptörleri Toll benzeri reseptörler ve böcek ve memelilerde Interleukin-1 sinyal cascades nehrin aşağısında da oldukça benzer; her ikisi de defensins 7gibi antimikrobiyal peptidler üretiminde neden. Böylece, böcekler metazoans tarafından paylaşılan genel doğuştan gelen bağışıklık mekanizmaları incelemek için yararlı olabilir.
Hamamböceği cins Gromphadorhina, gelen tıslama Madagaskar denilen bir böcek var, genellikle 5-8 cm vade sonunda ulaşan en büyük Hamam böceği türlerinden biridir. Bu sadece Madagaskar adasında için yerel ve kolaylaştırır - tıslayan ses Tıslayan hamamböceği solunum açıklıklar vızıltısı 8denilen havada ihraç etti zaman üreten bir ses ile karakterizedir. Kendine özgü tıslamak hamamböceği Kur ve saldırganlık 9 tıslama arasında sosyal iletişim biçimi olarak hizmet verir ve bir erkek tabiatında rahatsız olduğunda duydum. Hamam böceği tıslama Madagaskar yavaş hareket Amerikan hamamböceği ve diğer kentsel zararlı türler için karşılaştırılır. Bu cins ve bakımı kolaydır; hamile Tıslayan hamamböceği teker teker 20-30 yavru üretebilir. Bir perisi olarak adlandırılan Hamam böceği, 5 ayda cinsel olgunluğa ulaşır tıslama bebek 6 molts geçiren ve 5 vahşi ve esaret 8olabilir yıl yaşamak sonra.
İntrasellüler patojenlerin Burkholderia mallei, B. pseudomalleiile enfeksiyon ve B. thailandensis 10,11. için bir vekil ev sahibi olarak hamamböceği tıslama Madagaskar kullanılan Hamamböceği tıslama içinde bu patojenler virülans Burkholderiaiçin Suriye hamster onların virülans kıyaslama hayvan modeli için karşılaştırıldı. B. pseudomallei ve B. mallei % 50 öldürücü doz (LD50) her iki model 11' benzer bulundu. İlginçtir, B. thailandensis, olmayan kemirgen modelindeki Tıslayan hamamböceği 11' öldürücü olmasına rağmen. Bu fark B. thailandensis enfeksiyon ile ilgili yardımcı programı Tıslayan hamamböceği model vurguluyor; Mutantlar inceltiyorum B. thailandensis daha kolay Tıslayan hamamböceği kemirgen modellerinde çözülebilir. Ayrıca, model organizma için inceltiyorum mutasyonların bu tanımlama B. pseudomallei B. mallei 10,12,ve13, B. thailandensis genellikle kullanılır indirilebilir daha öldürücü akrabaları benzer hedefleri yol.
B. thailandensis karşı Suriye hamster Tıslayan hamamböceği virülans farkı, bu tür 6 salgı sistemi-1 (T6SS-1), gibi kritik virülans faktörleri mutasyonların rağmen hangi inceltiyorum B. mallei içinde ve B. pseudomallei, çoğu benzer şekilde B. thailandensis 11için inceltiyorum. Suriye hamster virülans üzerinde hiçbir etkiye sahip, bireysel T6SS mutantlar (T6SS-2 T6SS-6) B. pseudomalleiiçinde Tıslayan hamamböceği 11' öldürücü kalır bu Tıslayan hamamböceği model daha fazla doğrulanır. Böylece, Tıslayan hamamböceği bir uygun Taşıyıcı hayvan üç Burkholderia türler için modeldir. Son zamanlarda Tıslayan hamamböceği Burkholderia enfeksiyon 10 ve onun toksisite karşı anti-sıtma ilaç klorokin (CLQ) etkinliğini incelemek için bir vekil hayvan modeli olarak kullanılmaktadır.
Burada, tarif biz yetiştirme ve bakım Madagaskar hamamböceği tıslama ve bu böcek üç Burkholderia türleri ile enfekte konusunda ayrıntılı bilgi sağlar. Ayrıca, biz virülans ve Burkholderia enfeksiyonlar ilaç etkinliğini ve bu büyük olasılıkla da benzer çalışmalar diğer bakteriyel patojenler için bir vekil olarak hizmet edebilir ki çalışmaya uygun vekil manken Tıslayan hamamböceği olduğunu göstermektedir.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Madagascar hissing cockroach 
			&#160;&#160; 
			&#160; 
			&#160; 
			&#160;</td>
			<td>Carolina Biological Supply Co, Burlington, NC&#160;</td>
			<td>143668</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Kibbles n Bits, any flavor</td>
			<td>Big Heart Pet Brands, San Francisco, CA</td>
			<td>UPC #079100519378</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Snap on disposable plastic containers or equivalent</td>
			<td>Rubbermaid, Huntersville, NC</td>
			<td>UPC #FG7F71RETCHIL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Screw on disposable plastic containers or equivalent</td>
			<td>Rubbermaid, Huntersville, NC</td>
			<td>UPC #FG7J0000TCHIL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tridak STEPPER series repetitive pipette</td>
			<td>Dymax Corporation 
			www.dymax.com</td>
			<td>T15469</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe (1 mL)&#160;</td>
			<td>Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ</td>
			<td>309659</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Needle (26 or 27G x 1/2)</td>
			<td>Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ</td>
			<td>305109, 305111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chloroquine diphosphate</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td>C6628</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline</td>
			<td>Gibco/ Thermo Fisher Scientific, Gaithersburg, MD</td>
			<td>10010023</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Difco Luria- Bertani (Lennox)</td>
			<td>Becton Dickinson, Sparks, MD</td>
			<td>240230</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agar&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td>A1296</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycerol</td>
			<td>Sigma-Aldrich, St. Louis, MO</td>
			<td>G6279</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

the madagascar hissing cockroach as an alternative non-mammalian animal model to investigate virulence, pathogenesis, and drug efficacy

Doğuştan gelen bağışıklık birçok özelliği memelileri ve böcekler arasında korunmuş. Bir böceği, Hamam böceği Gromphadorhina, cins gelen tıslama Madagaskar virülans, ana bilgisayar-patojen etkileşim, doğuştan gelen bağışıklık yanıtı ve ilaç etkinliğinin incelenmesi için alternatif bir hayvan model olarak yararlı olabilir. Ayrıntılar için yetiştirme, bakım ve Tıslayan hamamböceği üreme sağlanır. Biz de nasıl o intrasellüler patojenlerin Burkholderia mallei, B. pseudomallei ve d. thailandensisgibi bakteri ile enfekte göstermektedir. Tıslayan hamamböceği kullanımı ucuz ve araştırma memelilerde kullanımı ile ilgili düzenleme sorunları üstesinden gelir. Buna ek olarak, sonuç Tıslayan hamamböceği model kullanarak bulundu tekrarlanabilir ve memeli modelleri kullanılarak elde benzer. Böylece, Madagaskar Tıslayan hamamböceği hayvan çalışmaları yürüten zaman keşfedilmeyi bir çekici vekil konak temsil eder.

Bu bölümde Madagaskar Tıslayan hamamböceği B. mallei, B. pseudomallei, veya B. thailandensisile enfekte elde sonuçları göstermektedir; sonuçlar virülans, ilaç toksisitesi ve uyuşturucu etkinliği bakteriyel enfeksiyona karşı okumak bu böcek Burkholderia farklı türler için uysal bir hayvan modeli olduğunu gösterir. Daha fazla Tıslayan hamamböceği hayatta zayıflatılmış mutantlarla (Δhcp1) ile wildtype B. pseudomallei K...

Watch this Scientific Journal Video about The Madagascar Hissing Cockroach as an Alternative Non-mammalian Animal Model to Investigate Virulence, Pathogenesis, and Drug Efficacy at JoVE.com

The Madagascar Hissing Cockroach as an Alternative Non-mammalian Animal Model to Investigate Virulence, Pathogenesis, and Drug Efficacy

Biz Madagaskar kullanmak için bir protokol hamamböceği bakteriyel virülans, Patogenez, ilaç zehirlenmesi, ilaç etkinliğini ve doğuştan gelen bağışıklık yanıtı çalışmalar yapmak için alternatif bir non-memeli hayvan model tıslama mevcut.

Hamam böceği virülans, Patogenez ve uyuşturucu etkinliği araştırmak için alternatif bir Non-memeli hayvan Model tıslama Madagaskar

Many aspects of innate immunity are conserved between mammals and insects. An insect, the Madagascar hissing cockroach from the genus Gromphadorhina, can ...

the-madagascar-hissing-cockroach-as-an-alternative-non-mammalian

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

10.9K Görüntüleme.  United States Army Medical Research Institute of Infectious Diseases. Biz Madagaskar kullanmak için bir protokol hamamböceği bakteriyel virülans, Patogenez, ilaç zehirlenmesi, ilaç etkinliğini ve doğuştan gelen bağışıklık yanıtı çalışmalar yapmak için alternatif bir non-memeli hayvan model tıslama mevcut.

Video: The Madagascar Hissing Cockroach as an Alternative Non-mammalian Animal Model to Investigate Virulence, Pathogenesis, and Drug Efficacy

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

The chronic nature of many diseases is attributed to the formation of bacterial biofilms which are recalcitrant to traditional antibiotic therapy. Biofilms are community-associated bacteria attached to a surface and encased in a matrix. The role of the extracellular matrix is multifaceted, including facilitating nutrient acquisition, and offers significant protection against environmental stresses (e.g. host immune responses). In an effort to acquire a better understanding as to how the bacteria within a biofilm respond to environmental stresses we have used a protocol wherein we visualize bacterial biofilms which have formed in an 8-well chamber slide. The biofilms were stained with the BacLight Live/Dead stain and examined using a confocal microscope to characterize the relative biofilm size, and structure under varying incubation conditions. Z-stack images were collected via confocal microscopy and analyzed by COMSTAT. This protocol can be used to help elucidate the mechanism and kinetics by which biofilms form, as well as identify components that are important to biofilm structure and stability.

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

This article describes the procedure for the formation and visualization of a bacterial biofilm grown within an 8-well chamber slide

8-iyi Odası Slayt in vitro Biyofilm Oluşumu

The chronic nature of many diseases is attributed to the formation of bacterial biofilms which are recalcitrant to traditional antibiotic therapy. ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the initial and determining step of the pathogenesis. Although experimentally adhesion is mostly studied in static conditions adhesion actually takes place in the presence of flowing liquid. First encounters between bacteria and their host often occur at the mucosal level, mouth, lung, gut, eye, etc. where mucus flows along the surface of epithelial cells. Later in infection, pathogens occasionally access the blood circulation causing life-threatening illnesses such as septicemia, sepsis and meningitis. A defining feature of these infections is the ability of these pathogens to interact with endothelial cells in presence of circulating blood. The presence of flowing liquid, mucus or blood for instance, determines adhesion because it generates a mechanical force on the pathogen. To characterize the effect of flowing liquid one usually refers to the notion of shear stress, which is the tangential force exerted per unit area by a fluid moving near a stationary wall, expressed in dynes/cm2. Intensities of shear stress vary widely according to the different vessels type, size, organ, location etc. (0-100 dynes/cm2). Circulation in capillaries can reach very low shear stress values and even temporarily stop during periods ranging between a few seconds to several minutes 1. On the other end of the spectrum shear stress in arterioles can reach 100 dynes/cm2 2. The impact of shear stress on different biological processes has been clearly demonstrated as for instance during the interaction of leukocytes with the endothelium 3. To take into account this mechanical parameter in the process of bacterial adhesion we took advantage of an experimental procedure based on the use of a disposable flow chamber 4. Host cells are grown in the flow chamber and fluorescent bacteria are introduced in the flow controlled by a syringe pump. We initially focused our investigations on the bacterial pathogen Neisseria meningitidis, a Gram-negative bacterium responsible for septicemia and meningitis. The procedure described here allowed us to study the impact of shear stress on the ability of the bacteria to: adhere to cells 1, to proliferate on the cell surface 5and to detach to colonize new sites 6 (Figure 1). Complementary technical information can be found in reference 7. Shear stress values presented here were chosen based on our previous experience1 and to represent values found in the literature. The protocol should be applicable to a wide range of pathogens with specific adjustments depending on the objectives of the study.

During the infection process, a key step is the adhesion of pathogens with host cells. In most instances this adhesion step occurs in the presence of mechanical stress generated by flowing liquid. We describe a technique that introduces shear stress as an important parameter in the study of bacterial adhesion.

Bakteriyel Yapışma Çalışma Kesme Stres Tanıtımı

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of insects as infection models provides a valuable alternative. Compared to other non-vertebrate model hosts such as nematodes, insects have a relatively advanced system of antimicrobial defenses and are thus more likely to produce information relevant to the mammalian infection process. Like mammals, insects possess a complex innate immune system1. Cells in the hemolymph are capable of phagocytosing or encapsulating microbial invaders, and humoral responses include the inducible production of lysozyme and small antibacterial peptides2,3. In addition, analogies are found between the epithelial cells of insect larval midguts and intestinal cells of mammalian digestive systems. Finally, several basic components essential for the bacterial infection process such as cell adhesion, resistance to antimicrobial peptides, tissue degradation and adaptation to oxidative stress are likely to be important in both insects and mammals1. Thus, insects are polyvalent tools for the identification and characterization of microbial virulence factors involved in mammalian infections.
Larvae of the greater wax moth Galleria mellonella have been shown to provide a useful insight into the pathogenesis of a wide range of microbial infections including mammalian fungal (Fusarium oxysporum, Aspergillus fumigatus, Candida albicans) and bacterial pathogens, such as Staphylococcus aureus, Proteus vulgaris, Serratia marcescens Pseudomonas aeruginosa, Listeria monocytogenes or Enterococcus faecalis4-7. Regardless of the bacterial species, results obtained with Galleria larvae infected by direct injection through the cuticle consistently correlate with those of similar mammalian studies: bacterial strains that are attenuated in mammalian models demonstrate lower virulence in Galleria, and strains causing severe human infections are also highly virulent in the Galleria model8-11. Oral infection of Galleria is much less used and additional compounds, like specific toxins, are needed to reach mortality.
G. mellonella larvae present several technical advantages: they are relatively large (last instar larvae before pupation are about 2 cm long and weight 250 mg), thus enabling the injection of defined doses of bacteria; they can be reared at various temperatures (20 &deg;C to 30 &deg;C) and infection studies can be conducted between 15 &deg;C to above 37 &deg;C12,13, allowing experiments that mimic a mammalian environment. In addition, insect rearing is easy and relatively cheap. Infection of the larvae allows monitoring bacterial virulence by several means, including calculation of LD5014, measurement of bacterial survival15,16 and examination of the infection process17. Here, we describe the rearing of the insects, covering all life stages of G. mellonella. We provide a detailed protocol of infection by two routes of inoculation: oral and intra haemocoelic. The bacterial model used in this protocol is Bacillus cereus, a Gram positive pathogen implicated in gastrointestinal as well as in other severe local or systemic opportunistic infections18,19.

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

Oral and intra haemocolic infection of larvae of the greater wax moth Galleria mellonella is described. This insect can be used to study virulence factors of entomopathogenic as well as mammalian opportunistic bacteria. Rearing of the insects, methods of infection and examples of in vivo analysis are described.

Böcek<em&gt; Galleria mellonella</em&gt; Bakteriyel Patogenez İnceleyecek Güçlü Enfeksiyon Model olarak

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of ...

Following in Real Time the Impact of Pneumococcal Virulence Factors in an Acute Mouse Pneumonia Model Using Bioluminescent Bacteria

Pneumonia is one of the major health care problems in developing and industrialized countries and is associated with considerable morbidity and mortality. Despite advances in knowledge of this illness, the availability of intensive care units (ICU), and the use of potent antimicrobial agents and effective vaccines, the mortality rates remain high1. Streptococcus pneumoniae is the leading pathogen of community-acquired pneumonia (CAP) and one of the most common causes of bacteremia in humans. This pathogen is equipped with an armamentarium of surface-exposed adhesins and virulence factors contributing to pneumonia and invasive pneumococcal disease (IPD). The assessment of the in vivo role of bacterial fitness or virulence factors is of utmost importance to unravel S. pneumoniae pathogenicity mechanisms. Murine models of pneumonia, bacteremia, and meningitis are being used to determine the impact of pneumococcal factors at different stages of the infection. Here we describe a protocol to monitor in real-time pneumococcal dissemination in mice after intranasal or intraperitoneal infections with bioluminescent bacteria. The results show the multiplication and dissemination of pneumococci in the lower respiratory tract and blood, which can be visualized and evaluated using an imaging system and the accompanying analysis software.

Streptococcus pneumoniae is the leading pathogen causing severe community-acquired pneumonia and responsible for over 2&#160;million deaths worldwide. The impact of bacterial factors implicated in fitness or virulence can be monitored in real-time in an acute mouse pneumonia or bacteremia model using bioluminescent bacteria.

Biyoluminesen Bakteriler Kullanılarak Gerçek Zamanda Bir Akut Fare Pnömoni Modelinde Pnömokok virulans faktörlerinin etkisi aşağıdaki

Pneumonia is one of the major health care problems in developing and industrialized countries and is associated with considerable morbidity and mortality. ...

The Mesenteric Lymph Duct Cannulated Rat Model: Application to the Assessment of Intestinal Lymphatic Drug Transport

The intestinal lymphatic system plays key roles in fluid transport, lipid absorption and immune function. Lymph flows directly from the small intestine via a series of lymphatic vessels and nodes that converge at the superior mesenteric lymph duct. Cannulation of the mesenteric lymph duct thus enables the collection of mesenteric lymph flowing from the intestine. Mesenteric lymph consists of a cellular fraction of immune cells (99% lymphocytes), aqueous fraction (fluid, peptides and proteins such as cytokines and gut hormones) and lipoprotein fraction (lipids, lipophilic molecules and apo-proteins). The mesenteric lymph duct cannulation model can therefore be used to measure the concentration and rate of transport of a range of factors from the intestine via the lymphatic system. Changes to these factors in response to different challenges (e.g., diets, antigens, drugs) and in disease (e.g., inflammatory bowel disease, HIV, diabetes) can also be determined. An area of expanding interest is the role of lymphatic transport in the absorption of orally administered lipophilic drugs and prodrugs that associate with intestinal lipid absorption pathways. Here we describe, in detail, a mesenteric lymph duct cannulated rat model which enables evaluation of the rate and extent of lipid and drug transport via the lymphatic system for several hours following intestinal delivery. The method is easily adaptable to the measurement of other parameters in lymph. We provide detailed descriptions of the difficulties that may be encountered when establishing this complex surgical method, as well as representative data from failed and successful experiments to provide instruction on how to confirm experimental success and interpret the data obtained.

Here we describe a technique to cannulate the mesenteric lymph duct in rats which enables quantification of lipid and drug transport via the lymphatic system following intestinal delivery. The technique can be adapted to assess mesenteric lymph concentrations and/or transport of fluid, immune cells, peptides, proteins and lipophilic molecules.

Mezenterik Lenf Kanal Kanüllü Rat Modeli: Bağırsak Lenfatik İlaç Ulaştırma Değerlendirilmesine Uygulaması

The intestinal lymphatic system plays key roles in fluid transport, lipid absorption and immune function. Lymph flows directly from the small intestine ...

Applying an Inducible Expression System to Study Interference of Bacterial Virulence Factors with Intracellular Signaling

The technique presented here allows one to analyze at which step a target protein, or alternatively a small molecule, interacts with the components of a signaling pathway. The method is based, on the one hand, on the inducible expression of a specific protein to initiate a signaling event at a defined and predetermined step in the selected signaling cascade. Concomitant expression, on the other hand, of the gene of interest then allows the investigator to evaluate if the activity of the expressed target protein is located upstream or downstream of the initiated signaling event, depending on the readout of the signaling pathway that is obtained. Here, the apoptotic cascade was selected as a defined signaling pathway to demonstrate protocol functionality. Pathogenic bacteria, such as Coxiella burnetii, translocate effector proteins that interfere with host cell death induction in the host cell to ensure bacterial survival in the cell and to promote their dissemination in the organism. The C. burnetii effector protein CaeB effectively inhibits host cell death after induction of apoptosis with UV-light or with staurosporine. To narrow down at which step CaeB interferes with the propagation of the apoptotic signal, selected proteins with well-characterized pro-apoptotic activity were expressed transiently in a doxycycline-inducible manner. If CaeB acts upstream of these proteins, apoptosis will proceed unhindered. If CaeB acts downstream, cell death will be inhibited. The test proteins selected were Bax, which acts at the level of the mitochondria, and caspase 3, which is the major executioner protease. CaeB interferes with cell death induced by Bax expression, but not by caspase 3 expression. CaeB, thus, interacts with the apoptotic cascade between these two proteins.

The method described here is used to induce the apoptotic signaling cascade at defined steps in order to dissect the activity of an anti-apoptotic bacterial effector protein. This method can also be used for inducible expression of pro-apoptotic or toxic proteins, or for dissecting interference with other signaling pathways.

Bir uyarılabilir İfade Sistemi uygulamak Hücre içi Sinyali ile Bakteriyel Virulans Faktörler Girişim Eğitim için

The technique presented here allows one to analyze at which step a target protein, or alternatively a small molecule, interacts with the components of a ...

Zebrafish as a Model to Assess the Teratogenic Potential of Nitrite

High nitrate levels in the environment may&#160;result in congenital defects or miscarriages in humans. Presumably, this is due to the conversion of nitrate to nitrite by gut and salivary bacteria. However, in other mammalian studies, high nitrite levels do not cause birth defects, although they can lead to poor reproductive outcomes. Thus, the teratogenic potential of nitrite is not clear. It would be useful to have a vertebrate model system to easily assess teratogenic effects of nitrite or any other chemical of interest. Here, we demonstrate the utility of zebrafish (Danio rerio) to screen compounds for toxicity and embryonic defects. Zebrafish embryos are fertilized externally and have rapid development, making them a good model for teratogenic studies. We show that increasing the time of exposure to nitrite negatively affects survival. Increasing the concentration of nitrite also adversely affects survival, whereas nitrate does not. For embryos that survive nitrite exposure, various defects can occur, including pericardial and yolk sac&#160;edema, swim bladder noninflation, and craniofacial malformation. Our results indicate that the zebrafish is a convenient system for studying the teratogenic potential of nitrite. This approach can easily be adapted to test other chemicals for their effects on early vertebrate development.

Exposure to teratogens may cause birth defects. Zebrafish are useful for determining the teratogenic potential of chemicals. We demonstrate the utility of zebrafish by exposing embryos to various levels of nitrite and also at different times of exposure. We show that nitrite can be toxic and cause severe developmental defects.

Bir Model Olarak Zebra balığı Nitrit teratojenik potansiyelini değerlendirmek için

High nitrate levels in the environment may&#160;result in congenital defects or miscarriages in humans. Presumably, this is due to the conversion of ...

A High-throughput Compatible Assay to Evaluate Drug Efficacy against Macrophage Passaged Mycobacterium tuberculosis

The early drug development process for anti-tuberculosis drugs is hindered by the inefficient translation of compounds with in vitro activity to effectiveness in the clinical setting. This is likely due to a lack of consideration for the physiologically relevant cellular penetration barriers that exist in the infected host. We recently established an alternative infection model that generates large macrophage aggregate structures containing densely packed M. tuberculosis (Mtb) at its core, which was suitable for drug susceptibility testing. This infection model is inexpensive, rapid, and most importantly BSL-2 compatible. Here, we describe the experimental procedures to generate Mtb/macrophage aggregate structures that would produce macrophage-passaged Mtb for drug susceptibility testing. In particular, we demonstrate how this infection system could be directly adapted to the 96-well plate format showing throughput capability for the screening of compound libraries against Mtb. Overall, this assay is a valuable addition to the currently available Mtb drug discovery toolbox due to its simplicity, cost effectiveness, and scalability.

A High-throughput Compatible Assay to Evaluate Drug Efficacy against Macrophage Passaged Mycobacterium tuberculosis

New models and assays that would improve the early drug development process for next-generation anti-tuberculosis drugs are highly desirable. Here, we describe a quick, inexpensive, and BSL-2 compatible assay to evaluate drug efficacy against Mycobacterium tuberculosis that can be easily adapted for high-throughput screening.

Bir Yüksek verim Uyumlu Deneyi Makrofaj, pasajlamaya karşı ilaç etkinliğini değerlendirmektir<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em

The early drug development process for anti-tuberculosis drugs is hindered by the inefficient translation of compounds with in vitro activity to ...

Using Phylogenetic Analysis to Investigate Eukaryotic Gene Origin

Phylogenetic analysis uses nucleotide or amino acid sequences or other parameters, such as domain sequences and three-dimensional structure, to construct a tree to show the evolutionary relationship among different taxa (classification units) at the molecular level. Phylogenetic analysis can also be used to investigate domain relationships within an individual taxon, particularly for organisms that have undergone substantial change in morphology and physiology, but for which researchers lack fossil evidence due to the organisms&#39; long evolutionary history or scarcity of fossilization.
In this text, a detailed protocol is described for using the phylogenetic method, including amino acid sequence alignment using Clustal Omega, and subsequent phylogenetic tree construction using both Maximum Likelihood (ML) of Molecular Evolutionary Genetics Analysis (MEGA) and Bayesian Inference via MrBayes. To investigate the origin of eukaryotic Sugars Will Eventually be Exported Transporters (SWEET) genes, 228 SWEETs including 35 SWEET proteins from unicellular eukaryotes and 57 SemiSWEET proteins from prokaryotes were analyzed. Interestingly, SemiSWEETs were found in prokaryotes, but SWEETs were found in eukaryotes. Two phylogenetic trees constructed using theoretically distinct methods have consistently&#160;suggested that the first eukaryotic SWEET gene might stem from the fusion of a bacterial SemiSWEET gene and an archaeal SemiSWEET gene.&#160;It is worth noting that one should be cautious to draw a conclusion based only on phylogenetic analysis, although it is useful to explain the underlying relationship between different taxa, which is difficult or even impossible to discern through experimental means.

A method of constructing a phylogenetic tree based on sequence homology of SWEETs from eukaryotes and SemiSWEETs from prokaryotes is described. Phylogenetic analysis is a useful tool for explaining the evolutionary relatedness between homologous proteins or genes from different organism groups.

Ökaryotik gen kökenli araştırmaya filogenetik analizi kullanılarak

Phylogenetic analysis uses nucleotide or amino acid sequences or other parameters, such as domain sequences and three-dimensional structure, to construct ...

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

Infectious bursal disease virus (IBDV) is a birnavirus of economic importance to the poultry industry. The virus infects B cells, causing morbidity, mortality, and immunosuppression in infected birds. In this study, we describe the isolation of chicken primary bursal cells from the bursa of Fabricius, the culture and infection of the cells with IBDV, and the quantification of viral replication. The addition of chicken CD40 ligand significantly increased cell proliferation fourfold over six days of culture and significantly enhanced cell viability. Two strains of IBDV, a cell-culture adapted strain, D78, and a very virulent strain, UK661, replicated well in the ex vivo cell cultures. This model will be of use in determining how cells respond to IBDV infection and will permit a reduction in the number of infected birds used in IBDV pathogenesis studies. The model can also be expanded to include other viruses and could be applied to different species of birds.

An Ex Vivo Chicken Primary Bursal-cell Culture Model to Study Infectious Bursal Disease Virus Pathogenesis

Here we describe the isolation of chicken primary bursal cells from the bursa of Fabricius, the culture and infection of the cells with infectious bursal disease virus, and the quantification of viral replication.

Bursal bulaşıcı hastalık virüs patogenezi okumaya bir Ex Vivo tavuk birincil Bursal hücre kültürü modeli

Infectious bursal disease virus (IBDV) is a birnavirus of economic importance to the poultry industry. The virus infects B cells, causing morbidity, ...