Yazarlar Dr Su, doktora, verileri onun istatistiksel analiz için kabul etmek istiyorum. Yazarlar ayrıca Dr. McClure, DVM, doktora DACLAM, anestezi onu tavsiye için teşekkür ederiz ve ağrı yönetimi protokolleri çalışmada kullanılan. Bu proje araştırma (12678v) ve USDA bölüm 1433 fonları (2090) için Western Üniversitesi Sağlık Bilimleri dairesi Başkan Yardımcısı gelen hibe tarafından desteklenmiştir.

Tüm yöntem tanımlamak burada kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) Western Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü tarafından onaylanmıştır.
1. izolasyon ve MSCs at göbek kordonu matris genişlemesi
<ol><li>Plasenta foaling gözlenen sonra yetişkin bir kısrak (hamile) elde etmek ve aseptik göbek kordonu plasenta den yalıtır. Göbek kordonu fosfat tamponlu tuz (PBS) % 1 penisilin-streptomisin (P/S) ile 4 ° C'de aktarım sırasında işleme kadar tutun.</li>
	<li>Göbek kordonu oda sıcaklığında %1 PBS ile iki kez yıkayın P/S 50 mL tüp içinde. Bölüm 150 mm plaka ve yıkama PBS oda sıcaklığında 1 P/S bir 50 mL tüp iki veya üç kez, kanın çoğu, kadar durulanır dışarı % 2 inç uzun parçalara göbek kordonu.</li>
	<li>Boyuna gemiler ortaya çıkarmak için göbek bağını kestim. Gemiler, 2 damar, damar ve forseps ve makas kullanarak kablosu allantoic bir SAP gibi kaldırın. Bir neşter ile kazıma tarafından 150 mm plaka üzerine jöle benzeri matris çevresindeki damarları göbek kordonu matris (Wharton'ın Jelly), toplamak ve ince parçalar halinde jöle kıyma.</li>
	<li>2-3 göbek kordonu parçaları (yaklaşık 12-15 g) 15 mL %0,1 (w/v) collagenase türü IA çözümde PBS ile 50 mL tüp içinde yer Wharton'ın jöle. 37 ° C'de 3-4 eriyene kadar h için nazik sallayarak ile kuluçkaya.</li>
	<li>300 x g 15dk için de sindirilir doku santrifüj kapasitesi ve süpernatant Aspire edin. Oda sıcaklığında PBS % 1 ile 15 ml sindirilir doku resuspend P/S, karıştırmak pipetting tarafından santrifüj kapasitesi 150 x g 5 min için de ve (yıkama) süpernatant Aspire edin. İki kez daha fazla yıkama yineleyin.</li>
	<li>Oda sıcaklığında PBS % 1 ile 15 mL hücrelerde yıkanmış resuspend P/S, karıştırmak pipetting tarafından tarafından 100 µm hücre süzgeç, 5 min için 150 x g, santrifüj ile süzün ve süpernatant Aspire edin.</li>
	<li>Kültür orta (CM) düşük glikoz Dulbecco'nın karıştırılarak hazırlamak fetal sığır serum (FBS) ve %1 P ile modifiye kartal orta (LG-DMEM) / S. Sterilize orta filtrasyon tarafından.</li>
	<li>37 ° C için önceden ısınmış cm 10 mL gergin hücrelerde resuspend, pipetting tarafından mix, bir 25 cm2 doku kültürü şişesi aktarmak ve % 5 CO%2 90 nem ve 37,0 ° C. kuluçkaya Değişiklik CM 3 Kültür passaged zaman 70-%80 izdiham, kültür ulaşıncaya kadar günde.</li>
	<li>Kültür geçiş için şişesi CM Aspire edin, oda sıcaklığında PBS ile 5 mL iki kez yıkayın ve % 0.25 tripsin/ethylenediaminetetraacetic asit (EDTA) 5 min için 37 ° C'de 3 mL ile bağlantısını kesin.</li>
	<li>Tripsin/EDTA için 37,0 ° C önceden ısınmış cm 6 mL ile nötralize, pipetting tarafından mix, bir 15 mL tüp, 5 min için 150 x g, santrifüj içine aktarmak ve süpernatant Aspire edin. Müstakil cm 1 mL hücrelerde resuspend, pipetting tarafından mix. Trypan mavi ve hemasitometre kullanarak canlı hücreleri saymak. 5. 000 hücre/cm225 cm2 doku kültürü şişesi içine yeniden tohum ve % 5 CO%2 90 nem ve 37,0 ° C. kuluçkaya</li>
</ol>2. pulcuklarının UCM MSCs kitosan Filmler kültürlü ile hazırlanması
<ol><li>100 mL %1 (w/v) kitosan çözeltisi hazırlamak için kitosan 1 g 99 mL distile su (dH2O) ekleyin ve iyi bir manyetik karıştırıcı ile karıştırın.</li>
	<li>Buzul asetik asitin 670 µL ekleyin ve kitosan çözülür ve viskoz hale kadar karıştırma devam edin. Bu genellikle 3-4 saat sürer.</li>
	<li>Kitosan çözeltinin 500 µL 12-iyi doku kültürü plaka her kuyunun içine ekleyin ve kitosan çözüm eşit dağıtmak ve tüm alt yüzeyi kapsayacak için plaka girdap.</li>
	<li>Kitosan kaplama-çözüm plaka laminar akış için 24 saat bir kapak gece kabin altında kuru. Bir kez kuru, ince film kurdu ve plakasına yapıştırılır.</li>
	<li>Kitosan filmi 1 mL 0.5 N sodyum hidroksit (NaOH) çözeltisi her kuyuya ekleyerek nötralize ve oda sıcaklığında 2 h için kuluçkaya. NaOH her kuyudan Aspire edin ve her yıkama dH2O 1 mL ile üç kez iyi. Her yıkama 1 mL % 70 etanol (alkol) ile bir kez de.</li>
	<li>Kitosan film sterilize etmek için 1 mL % 70 alkol her şey ve kuluçkaya gecede laminar akış dolapta ekleyin. Her kuyudan kalan alkol içinde ertesi gün Aspire edin. Her yıkama 1 mL steril PBS ile üç kez iyi. Kitosan film ultraviyole ışık altında laminar akış gecede bir kapak kabine ile sterilize.</li>
	<li>İçin UCM MSCs formu pulcuklarının, tohum genişletilmiş ve 5. 000 hücre/cm2her kuyuya pasajlı hücreleri ve % 5 CO%2 90 nem ve 37,0 ° C. kuluçkaya Not: Hücreleri hipoksi veya normoxia, araştırmacı'nın faiz bağlı olarak altına inkübe.</li>
</ol>3. ifade yüzey işaretlerinin Akış Sitometresi ile analiz
<ol><li>
Bir tek hücre süspansiyon hazırlanması
	<ol>
<li>Çift plaka<ol>
<li>Orta her kuyudan çıkarın ve iki kere oda sıcaklığında PBS ile yıkayın.</li>
			<li>Bir hücre ayrılma reaktif 500 µL hücrelerle oda sıcaklığında 5-10 dk 12-şey plaka her kuyuya bağlantısını kesin.</li>
			<li>Kuluçka sonra arabellek (% 0.5 BSA içeren PBS) Boyama 1 ml her kuyuya ve hücreleri ayırmak için pipetting karıştırın.</li>
			<li>Hücre süspansiyon 15 mL konik tüp ve 5 min için 150 x g, santrifüj içine aktarın.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Kitosan plaka<ol>
<li>Tüm pulcuklarının alıyorum orta bir pipet 1000 µL uç ile kullanarak toplamak. Toplanan orta 15 mL konik tüp içine aktarın. Orta toplama sonra PBS 1 mL de ekleyerek yıkayın ve yıkanmış PBS aynı 15 mL konik tüp içine aktarın.</li>
			<li>150 x g 5 min için de pulcuklarının santrifüj kapasitesi ve süpernatant kaldırın.</li>
			<li>500 µL hücre ayrılma reaktif (örneğin, accutase) ekleyin ve oda sıcaklığında 5-10 dk için kuluçkaya. Pulcuklarının ayırmak ve artık görünür değildir kadar pipetting 1 mL ipucu kullanarak karıştırın.</li>
			<li>Boyama arabellek 1 mL tek hücre süspansiyon ve 5 min için 150 x g, santrifüj içine ekleyin.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Hücreleri yıkama
	<ol>
<li>Süpernatant konik tüp sizden kaldırmak ve soğuk arabellek boyama 3 mL hücrelerde yeniden askıya alma. Deney boyunca buzda hücreler bu adıma tutmak.</li>
		<li>300 x g 5 min (çamaşır) için de santrifüj kapasitesi.</li>
		<li>İki kez yıkayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Hücre boyama
	<ol>
<li>300 x g 5 min için de santrifüj kapasitesi ve süpernatant kaldırın.</li>
		<li>Bir trypan mavi ve hemasitometre kullanarak hücrelerin saymak. 1 x 106 hücre yeniden askıya 50 µL kapatmaktır (PBS içeren % 10 at serum) tampon ve buz üzerinde 30 dk için kuluçkaya.</li>
		<li>10 µL floresein Birleşik isothiocyanate (FITC) antikorları (CD44, CD90, CD105, CD34, MHC kompleksi (MHC) Sınıf II veya izotip kontrol her antikor için) ve tampon boyama 40 µL ekleyin, sonra ışık buz üzerinde 1 h için korumalı kuluçkaya.</li>
		<li>3 mL soğuk arabellek boyama ekleyin ve karıştırın, 300 x g 5 min için de santrifüj kapasitesi ve (çamaşır) süpernatant Aspire edin.</li>
		<li>İki kez yıkama yineleyin.</li>
		<li>Hücre Pelet arabellek boyama 0.5 mL içinde yeniden askıya alma</li>
		<li>7-AAD (canlılığı boya) 5 µL ekleyin ve buz üzerinde 30 dk için kuluçkaya</li>
		<li>Lekeli hücre örnekleri Akış Sitometresi tarafından analiz. Enkaz onların küçük SSC ve FSC tarafından dışlamak ve hücrelerin 7-AAD alt alımını belirlemek. Y - ve x-eksen üzerinde sırasıyla FL1 ve FL2 arsa. İzotip kontrol çapraz çizgi yukarıda bir kapı oluşturmak için kullanın. Alandaki olumlu lekeli hücrelerin yüzdesi ölçmek. Sayısı en az 20.000 olayları/örnek (ek şekil 1).</li>
		<li>Hücrelerin ve otomatik Floresans çoğunluğuna tarafından antikorlar ile lekeli hücre yüzdesi ölçmek ve yüzde izotip kontrol ile lekeli hücre çıkarma.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. ikili Patellar Tendon kusur sıçan modelinde
<ol><li>Sprague-Dawley Rat (yetişkin erkek, 4 – 5 ay yaşlı, vücut ağırlığı 350 – 375 g) seçin. Bu model için kullanılan sıçan nispeten büyük boyutuna dikkat edin.</li>
	<li>Anestezi ve çimdik-ayak refleks indüksiyon odasında kaybolması kadar maske % 8 sevoflurane 2 L/dk % 100 oksijen fareyle teslim yapay göz yağ uygulayın.</li>
	<li>Meloksikam (1 mg/kg) bir kas içi enjeksiyon preemptive analjezi olarak yönetmek.</li>
	<li>Yer fare iki 0,5 L su şişeleri arasında sıcak su ve vücut ısısı ve pozisyon, Cilt yaralanma engelleyen sırasında korumak için bir bezle kaplı. Tablo her ekstremite teyp. Hipotermi riskini azaltmak için kabarcık şal (şekil 1) ile vücudunu örtecek.</li>
	<li>Anestezi % 5 sevoflurane 1 L % 100 oksijen karışımı ile su ısıtma yastık üzerinde dorsal recumbency hayvan ile burun konisi, sürekli akış ile koruyun.</li>
	<li>Cilt travma önlemek için cerrahi siteleri küçük değil. Bunun yerine, her iki stifles üzerinde saç çıkarıcı krem uygulayın. Bir dil depressor kremi ve saç kaldırmak için kullanın.</li>
	<li>Cerrahi sitesi klorheksidin digluconate Maki ile fırçalayın ve % 70 etanol ile 3 kez yıkayın.</li>
	<li>Steril neşter #15 bıçak bastırmak craniomedial yönü üzerinde bir proksimal için distal yönde ile cilt deşmek. Belgili tanımlık kesme yaklaşık 1 cm patella seviyeye proksimal başlatın ve yaklaşık 5 mm için tibial tubercle distal genişletmek.</li>
	<li>Patellar tendon bir #15 neşter bıçakla temel subkutan doku boşaltarak ortaya çıkarmak için cilt yansıtır.</li>
	<li>
#15 neşter bıçak kullanarak, her patellar tendon (1 mm) Merkezi üçüncü tibial yumrunun patella distal açıdan tüketim.
	<ol>
<li>0,99 mm çaplı Kirschner teli tendon karşı her ekstremite (Şekil 2) üründe boyutunu standartlaştırmak için şablon olarak hizalayın.</li>
		<li>2 tam-kalınlık insizyon Kirschner teli her tarafında tendon (şekil 3) merkez bölümünü yalıtmak için #15 neşter bıçak ile yapmak. Merkezi bölümde uzağından ve klemple iyi Iris makasla (şekil 4) çıkarabileceğim.</li>
		<li>Bastırmak fasya kapatmadan önce (karma hücre süspansiyon ve ACP) pıhtı 5.5 açıklandığı gibi uygun tedavi grupları ekleyin. Şerit çapraz bir desen ile hem 5-0 polyglactin 910 dikiş (şekil 5) kullanarak bir intradermal desen deri kapatın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kontralateral bastırmak yordamı yineleyin. Not: Bir kusur rasgele bir tedavi (kök üzerinde kitosan şartına veya standart Tabaklarda kültürlü hücreleri) atanır. Kontralateral kusur iç denetimi hizmet için boş bırakılır.</li>
	<li>Ameliyattan sonra 4 tablet Enrofloksasin yönetmek (2 mg/tablet, sözlü olarak, bir kez her gün) ve bir tablet Meloksikam (2 mg/tablet, sözlü olarak, bir kez günlük) 7 gün için. Bu doz bir laboratuvar hayvan veteriner tarafından önerilen ve IACUC protokolünde onayladı.</li>
</ol>5. teslim MSCs Patellar Tendon kusur içinde
<ol><li>%8 sevoflurane 2 L/dk % 100 oksijen maskesi ile çimdik-ayak refleks indüksiyon odasında kaybolması kadar teslim ile patellar tendon kusur oluşturmak için kullanılan değil sağlıklı bir sıçan anestezi.</li>
	<li>5 mL kan tarafından kalp ponksiyon imzalat Sprague-Dawley rat (yetişkin erkek, 4 – 5 ay yaşlı, vücut ağırlığı 350 – 375 g), bir 5 mL şırınga asit-sitrat-dekstroz (5:1 v/v) 1 mL içeren bir 20 G iğne ile toplamak.</li>
	<li>Fare Fentobarbital (100 mg/kg), süre aynı anestezi altında intracardial enjeksiyonla kardiyak ponksiyon ve kan toplama, sonra ötenazi.</li>
	<li>350 x g için oda sıcaklığında 15 dk da örneğine santrifüj kapasitesi. Süpernatant aktarın ve aliquots (120 her µL)-20 ° c kadar kullanmak depolayın.</li>
	<li>Vivo implantasyonu, hemen önce yukarıdaki aliquot çözülme ve 0.5 x 10 ile 20 µL tripsin/EDTA kullanarak standart plakalar müstakil6 MSCs (veya'den alınan 1.9 3.1.2.1) mix veya (PBS/orta) temizlenerek kitosan plakalar toplamak.</li>
	<li>Çözdürülen plazma plazma etkinleştirmek ve pıhtı oluşumu teşvik için 96-şey plaka bir kuyu içinde kalan 100 µL % 10 Kalsiyum klorür (CaCl2) 6 µL eklemek (şartına plazma aktif: ACP).</li>
	<li>Mix hücre süspansiyon (20 µL) ve ACP (100 µL pıhtı (şekil 6) oluşturmak için). Bastırmak fasya kapatmadan önce oluşturulan patellar tendon kusur içinde pıhtı yerleştirin (bkz. Adım 4.10.3).</li>
</ol>6. fonksiyonel sonuç
<ol><li>Fareler üzerinde fare yüz buruşturma ölçek (RGS)37,38 dayalı ve implantasyon siteleri üzerinde şişlik ağrı belirtileri için günde iki kez izlemek. Not: Puanlama sistemi (0-6) ayaktan işlevin (0-3) 3 faaliyetleri, desteklenen ön ayakları ile zamanlanmış arka bacak ayakta dahil olmak üzere temel geliştirilmiştir, desteksiz hind bacak ayakta (0-2) ve yeteneği bir 17 cm plastik kafes duvar (0-1) (tırmanmak için zaman aşımına uğradı Tablo 1).</li>
	<li>Fareler iki arka bacak ayakta faaliyetleri için sabah ve akşam ortalama puan hesaplamak için her zaman noktasının değerlendirin.</li>
	<li>Fareler için başarıyla bir 17 cm plastik kafes üst ulaşan her iki arka bacaklarda ile tırmanma yeteneği değerlendirmek.</li>
</ol>7. görünüm ve Patellar Tendon histopatoloji Brüt
<ol><li>Fareler (iltihap değerlendirmek için) 7 gün ötenazi veya (doku şifa değerlendirmek için) 28 gün Fentobarbital (100 mg/kg) % 8 sevoflurane ve 2 L % 100 oksijen maskesi ile teslim ile anestezi altında intracardial iğne ile tedavi sonrası.</li>
	<li>Diz kapağı-tendon-tibia yumrunun birimlerle neşter ve makas ötenazi sonra hasat. Yumuşak doku ve kasları patellar tendon dışında bastırmak çevresinde kaldırın.</li>
	<li>Her numune brüt görünüm ve tendon (Şekil 7) kalinlasma inceleyin.</li>
	<li>Numune tendon proksimal ve yanal yönü üzerinde bir cerrah 's düğüm 5.0 Polydioxanone yerleştirerek gelecek şekilde yönlendirin. Her numune % 10 tarafsız tampon formalin çözümde düzeltmek ve enine bölümler (5 mikron) her tendon orta kısmından elde etmek.</li>
	<li>Hematoksilen Eozin ve standart protokolleri takip boyama Masson'ın Trichrome kullanarak bölümleri leke.</li>
	<li>Hematom iltihabı gibi patolojik değişikliklerin yanı sıra kusur içinde olup olmadığını belirlemek için bölümünü inceleyin.</li>
	<li>Kollajen sınıfa, anjiogenez ve kıkırdak oluşumu (Tablo 2)39derece alınarak daha önce yayımlanmış puanlama sistemi kullanma bölümlerine histolojik Puan değerlendirmek.</li>
</ol>

Yazarlar hiçbir ifşa etmek çıkar çatışması var.

Biz sonunda at doğal tendinopathies yönetiminde aday yaklaşımlar test niyetinde çünkü at hücreleri bu proje için seçildi. Nitekim, tendon yaralanmalarının at at yüzeysel dijital fleksör ve Aşil tendonu insanlar41yılında arasındaki biyolojik benzerliği nedeniyle tendinopathy adam doğal modelleri olarak çekici bulunmaktadır. Hücre yüzey işaretleyicileri CD44, CD90, CD105, CD34 ve MHC II immunophenotyping hücrelerinin hücresel tedavi42için uluslarar...

Tendon hasarı önemli ağrı ve kas atrofi en yaygın nedenlerinden biri arasında tür1' dir. Veteriner tıpta, tendon ve bağ yaralanmaları atlar, özel ilgi ve yarış atları tüm yaralanmaları % 82 kas-iskelet sistemi dahil olanların % 46'sı tendon ve bağ2,3etkiler şunlardır. Skar dokusu oluşumu iyileşmiş tendonları biyomekanik özellikleri etkiler ve atletik kullanmak dönmek için korunan prognoz fleksör tendon yaralanmalarının sonra açıklar; Re-yaralanma 2 yıl içinde ilâ % 67'atların konservatif4ele meydana gelmektedir. Rejeneratif tıp geleneksel tedaviler zorluklar bir koşul yeni alternatifler sağlar. Otolog kök hücre tedavisi biraz cesaret verici sonuçlar5,6 üretti ama doku koleksiyonu, hücre işleme/yeniden programlama nedeniyle gecikmiş yönetim ve etkisi ile ilişkili morbidite ile sınırlıdır hastanın sağlık durumu (örneğin, yaş) özelliklerinde kök,7,8hücreleri. Bu sınırlamalar kapalı alternatif olarak Allojeneik Kök hücre araştırma için bir gerekçe sağlamak. Çünkü onlar etik kaygılar ve embriyonik kök hücreleri ile ilişkili teratoma oluşumu riskini engelleyecek fetal adnexa elde edilen hücreleri çekici adaylardır. Fetal adnexa arasında adı da Wharton'ın Jelly, göbek kordonu matrix (UCM), bol ve basit-e doğru toplamak var.
Hücre kaynağı ne olursa olsun, stemness artırılması allojenik rejeneratif tıp için bir hücre banka kurmak için önemlidir. Bir fonksiyonel açıdan stemness kendini yenileme ve çoklu soy farklılaşması9için potansiyel olarak tanımlanabilir. Stemness kanıtı yayılması ve farklılaşma deneyleri, gene işaretleri Oct4, Sox2 ve MicroRNAs9ifade ile birlikte kullanır. Geçersiz dolgu maddeleri ve yayılmasını önleme ve UCM MSCs farklılaşma geliştirme taşıyıcıları hizmet etmek için Biyomalzeme kullanımı stemness geliştirmek için bir strateji kullanır. Bu yaklaşım işleme transkripsiyon faktörlerin İndüklenmiş pluripotent hücreler Olgun Hücreler yeniden programlamak için ilgili endişeleri ortadan kaldırır. Kök hücre için potansiyel taşıyıcıları olarak kabul Biyomalzeme arasında kitosan Biyouyumluluk ve çözünebilirlik10için itiraz ediyor. Bu doğal aminopolysaccharide öncelikle kabuklu deniz ürünleri10subproduct elde edilen kitin, ikinci en bol doğal polisakkarit alkalin deasetilasyonu tarafından oluşturulur. Biz daha önce MSCs ve kitosan iskele arasındaki etkileşimler araştırıldı ve pulcuklarının11,12,13,14,15, oluşumu gözlenen 16. biz de kitosan matrisler12,13,14,15,16,17, chondrogenesis üstünlüğünü bildirdi 18. Daha yakın zamanlarda, iki bağımsız çalışmalar pulcuklarının oluşumu yağ dokusu tarafından açıklanan ve plasenta doku kitosan film19,için20kültürlü MSCs türetilmiş. Pulcuklarının Bu oluşumu sadece stemness gelişmiş, ama aynı zamanda kök hücre saklama vivo içinde implantasyon20sonra geliştirilmiş.
Yaygınlık ve morbidite tendinopathy türlerin karşıdan karşıya tendinopathies Patofizyoloji çalışma ve kök hücre Enjeksiyonlar gibi yeni terapiler test modeller geliştirilmesi istenir. Atları, collagenase kaynaklı tendinit MSCs tendon onarım21' kullanarak etkinliğini göstermek için yaygın bir modeldir. Klinik tendinopathies genellikle kronik gelen neden ise22,23overstrain, akut enflamatuar degisimler enjeksiyonları neden bu yaklaşım alaka sınırlıdır. Buna ek olarak, kimyasal indüksiyon tendon hastalığın şifa bir yanıt neden olmaktadır ve Engelli iyileşme süreci klinik durumlarda22,23' mevcut çoğaltmaz. Eksizyon, yüzeysel dijital fleksör tendon bir kesim tendinit atları24içinde cerrahi bir model olarak tarif edilmiştir. Daha yakın zamanlarda, minimal invaziv bir yaklaşım travmatik hasar yüzeysel dijital fleksör tendon25Merkezi çekirdeğe sınırlandırmak için kullanılır. Cerrahi modeller doğal tendon hastalığa yol ve meyletmek-e doğru25oluşturulan hasar ölçüde tekrarlanabilirlik eksikliği yorgunluk mekanizma taklit değil. Model, morbidite ve tendon at modelleri ile ilişkili maliyeti ne olursa olsun yeni tedaviler vivo değerlendirilmesi için bir ilk adım olarak bir ilgi kemirgen modelleri haklı ek sınırlamalar hastalıklardır.
Rodents deneysel modeller ana avantajlarından biri maliyet ve arası bireysel farklılıklarına kontrol yeteneği oluşur. Kemirgenler çeşitli fizyolojik faktörler nedeniyle onların hızlı büyüme oranları ile ilgili standart ve nispeten kısa ömürleri, varyasyon kaynakları sınırlama ve bu nedenle hayvanların farklılıkları algılamak için gerekli sayısını azaltarak. Tendon hastalıkları Rodents ikna etmek için stratejiler kimyasal indüksiyon, aynı zamanda cerrahi kısmi tendon kusurları21oluşturulması yararlanmıştır. Cerrahi modeller doğal tendinopathies kimyasal modeller daha iyi taklit, ancak daha yüksek morbidite ve hasarlı tendon geri dönülemez hata yol açabilir. Onların boyutu daha büyük kusurları, böylece doku şifa değerlendirme kolaylaştırmak oluşturulmasına izin verir gibi bu bakımdan sıçanlar fareler bu modeller için daha iyi adaylar gibi görünüyor. Sprague-Dawley Rat tendinopathies dört büyük tendon gruplar halinde deneysel çalışmalarda kullanılmıştır: rotator manşet, fleksör, Achilles ve patellar tendon26. Bunlar arasında patellar tendon içeren bu tendon daha büyük boyutunu ve27erişim kolaylığı nedeniyle özellikle çekici modeller. Patellar tendon kuadriseps kas için tibial yumrunun ekler. İçindeki bu ekstansiyon mekanizmasını, patella kuadriseps eylem yönlendirir ve patellar tendon proksimal ölçüde delineates sesamoid bir kemiktir. Patellar tendon proksimal ve distal kapsamlarını, kemikli çapa varlığı biyomekanik testleri kolaylaştırır. Patellar tendon genellikle içeren modelleri tek taraflı cerrahi kusurları üzerinde bir denetim28,29hizmet veren bir kontralateral sağlam tendon ile güveniyor. En yaygın patellar tendon kusur model kontralateral patellar tendon değişmeden kalır iken diz kapağı, distal tepe üzerinden patellar tendon tibial yumrunun ekleme Merkezi bölümü (1 mm genişliğinde) bilincin içerir. Sonuçlar ölçü Histoloji, tahribatsız biyomekanik test veya biyomekanik başarısızlık, ultrason görüntüleme, ex vivo floresan görüntü, brüt gözlem ve işlevsel testleri28,30 test dahil ettik ,31. Tek taraflı modeller aynı hayvan içinde benzer bir yaralanma muhafazakar yönetimi ile önerilen tedavinin karşılaştırma izin vermez. Benzer şekilde, çeşitli tedaviler arasında karşılaştırma ayrı hayvanlar gerektirir. İkili bir model arası bireysel farklılıklar ortadan kaldırmak ve hayvanlar için bir çalışma32gerekli sayısını azaltın. Ancak, ikili yaralanmaları morbidite artırabilir ve ikili topallık tedavi değerlendirme sekteye uğrayabilir. Birkaç çalışmalar kısaca peri-operatif yönetimi yerine tedavi etkileri ve morbidite modeli33,34üzerinde ikili patellar tendon kusurları fareler ama odak kullanımı rapor.
Bu çalışmanın uzun vadeli hedef UCM MSCs allojenik nakli için mukadder stemness ve in vivo yaşam geliştirmek için bir strateji geliştirmek etmektir. Bu hedefe ulaşmak için biz son zamanlarda UCM MSCs geliştirilmiş stemness pulcuklarının oluşumu tarafından kitosan film ve kuluçka hipoksik ortam35altında bildirdi. Bu vitro özellikleri geliştirilmiş biyomekanik özellikleri patellar tendon kusurların şartına UCM ile tedavi ile ilişkili bulunmuştur-MSCs. bu sonuçlara göre fare ikili patellar tendon kusur modeli aday test etmek uygun görünüyor tendon yaralanmaları36tedavisi. İşte yalıtım ve UCM-MSCs, kök hücre, oluşturma ve ikili diz kapağı tendon kusur ve post operatif tedavi için biyolojik bir iletim sistemi hazırlanması karakterizasyonu için detaylı iletişim kuralları sağlamak için çalışmada bildirdi Kurtarma ve doku içinde kusurları şifa değerlendirilmesi.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>PBS 10X</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30258.01</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase type IA</td>
			<td>Worthington</td>
			<td>LS004197</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM low glucose</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30021.FS</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30910.03</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin 100X</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SV30010</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin 0.25%</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30042.01</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Accutase</td>
			<td>Innovative Cell Technologies</td>
			<td>AT104</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan blue</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SV30084.01</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dimethyl Sulfoxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>D2650</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chitosan</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C3646</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodium Hydroxide</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S8045</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30574.01</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Round bottom polystyrene tube</td>
			<td>Corning</td>
			<td>149591A</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-horse CD44 (FITC)</td>
			<td>AbD serotec</td>
			<td>MCA1082F</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-rat CD90 (FITC)</td>
			<td>AbD serotec</td>
			<td>MCA47FT</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-horse MHC-II (FITC)</td>
			<td>AbD serotec</td>
			<td>MCA1085F</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG1 (FITC) - Isotype Control</td>
			<td>AbD serotec</td>
			<td>MCA928F</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse monoclonal [SN6] to CD105 (FITC)</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab11415</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IgG1 (FITC) - Isotype Control</td>
			<td>abcam</td>
			<td>ab91356</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse anti-human CD34 (FITC)</td>
			<td>BD</td>
			<td>BDB560942</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse IdG1 kappa (FITC)</td>
			<td>BD</td>
			<td>BDB555748</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>7-AAD</td>
			<td>BD</td>
			<td>BDB559925</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BD Accuri C6 Flow Cytometer</td>
			<td>BD</td>
			<td></td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vacutainer 5ml</td>
			<td>Med Vet International</td>
			<td>RED5.0</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acid-citrate-dextrose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C3821</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium Chloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C5670</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sevoflurane</td>
			<td>JD Medical</td>
			<td>60307-320-25</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rats</td>
			<td>Charles River</td>
			<td>Strain code: 400</td>
			<td>Experimental animal</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat surgical kit</td>
			<td>Harvard apparatus</td>
			<td>728942</td>
			<td>Equipment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Surgical Blade #15</td>
			<td>MEDLINE</td>
			<td>MDS15115</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat MD&#39;s Baytril (2 mg/Tablet), 
			Rimadyl (2 mg/Tablet)</td>
			<td>Bio Serv</td>
			<td>F06801</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polyglactin 910, 5-0</td>
			<td>Ethicon</td>
			<td>J436G</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eosin alchol shandon</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>6766007</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Harris Hematoxylin</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>143907</td>
			<td>Consumable</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluation of stem cell therapies in a bilateral patellar tendon injury model in rats

Rejeneratif tıp geleneksel tedaviler meydan koşullar yeni alternatifler sağlar. Yaygınlık ve morbidite tendinopathy türlerin, karşıdan karşıya bu doku sınırlı iyileştirici özellikleri ile birlikte, hücresel tedaviler için arama istenir ve onların etkinliğini incelemek için deneysel modelleri geliştirilmesi tahrikli. Göbek kordonu matris elde edilen Mezenkimal Kök hücre (UCM-MSC) adaylardır çekici oldukları için bol, basit-e doğru toplamak, etik kaygılar ve teratoma oluşumu riskini engelleyecek, henüz ilkel embriyonik kök hücreleri daha yakından benzer daha Yetişkin doku kaynaklı MSCs. önemli ilgi kitosan üzerinde MSCs özellikleri kullanılarak küresel oluşumu geliştirmek için bir strateji olarak odaklanmıştır. UCM-MSCs, izole etmek için bu kağıt ayrıntıları teknikleri pulcuklarının kitosan film hazırlamak ve küresel oluşumu yüzey marker ifade üzerinde etkisini analiz. Sonuç olarak, bir ikili patellar tendon yaralanma modelinde fareler oluşturulması kitosan filmde oluşan UCM-MSC pulcuklarının vivo içinde implantasyonu için tanımlanır. Komplikasyon gözlenmedi morbidite ile ilgili olarak çalışmada, efektleri veya doku enfeksiyonu stres. Toplam fonksiyonel puanı 7 gün itibariyle işletilen Rats'in normal fareler daha düşük ama ameliyattan sonra 28 gün içinde normale döndü. Histolojik dokusu şifa puanları pıhtı yabancı cisim reaksiyonu ve 28 gün şifa ilerliyor tedavi Defektlerde 7 gün değerlendirildi varlığına doğruladı. Bu iki taraflı diz kapağı tendon kusur model arası bireysel değişim her fare iç denetimde oluşturulması yoluyla denetler, kabul edilebilir morbidite ile ilişkili ve tedavi edilmezse tendon ve tedaviler arasındaki farklar tespiti izin.

Mevcut çalışmada, ± SD (Standart sapma) demek gibi sonuçları sunulmuştur. Hücreleri 6 kısraklarda göbek bağları izole ve her hücre yüzey işaretçisine standart veya kitosan Klima altında ifade izole hücre satırlarının yüzdesi karşılaştırıldığında Friedman testi ile parametrik olmayan bir Varyans analizi ile olarak tekrarlanan önlemler. Tendon kusur modeli oluşturmak için 8 sıçan 7 gün ameliyat sonrası değerlendirme için kullanıldı ve 12 fareler 28 g...

Watch this Scientific Journal Video about Evaluation of Stem Cell Therapies in a Bilateral Patellar Tendon Injury Model in Rats at JoVE.com

Evaluation of Stem Cell Therapies in a Bilateral Patellar Tendon Injury Model in Rats

Kök hücre tedavileri Sıçanlarda bir ikili Patellar Tendon yaralanma modelinde değerlendirilmesi

Bu kağıt hazırlık ve göbek kordonu matris elde edilen Mezenkimal Kök hücre pulcuklarının bir ikili patellar tendon kusur modelinde bir fare ile değerlendirilmesi açıklanmaktadır. Bu model ile kabul edilebilir bir hastalık ilişkili ve tedavi edilmezse ve tedavi tendon arasındaki farklılıkları algılamak için bulundu ve iki tedaviler arasında test.

Regenerative medicine provides novel alternatives to conditions that challenge traditional treatments. The prevalence and morbidity of tendinopathy across ...

evaluation-stem-cell-therapies-bilateral-patellar-tendon-injury-model

Research

JoVE Journal

Medicine

11.1K Görüntüleme.  Western University of Health Sciences. Bu kağıt hazırlık ve göbek kordonu matris elde edilen Mezenkimal Kök hücre pulcuklarının bir ikili patellar tendon kusur modelinde bir fare ile değerlendirilmesi açıklanmaktadır. Bu model ile kabul edilebilir bir hastalık ilişkili ve tedavi edilmezse ve tedavi tendon arasındaki farklılıkları algılamak için bulundu ve iki tedaviler arasında test.

Video: Evaluation of Stem Cell Therapies in a Bilateral Patellar Tendon Injury Model in Rats

A Mouse Model of in Utero Transplantation

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus. For example, in utero transplantation (IUT) of hematopoietic stem cells has been used to successfully treat patients with severe combined immunodeficiency.1,2 In several other conditions, however, IUT has been attempted without success.3 Given these mixed results, the availability of an efficient non-human model to study the biological sequelae of stem cell transplantation and gene therapy is critical to advance this field. We and others have used the mouse model of IUT to study factors affecting successful engraftment of in utero transplanted hematopoietic stem cells in both wild-type mice4-7 and those with genetic diseases.8,9 The fetal environment also offers considerable advantages for the success of in utero gene therapy. For example, the delivery of adenoviral10, adeno-associated viral10, retroviral11, and lentiviral vectors12,13 into the fetus has resulted in the transduction of multiple organs distant from the site of injection with long-term gene expression. in utero gene therapy may therefore be considered as a possible treatment strategy for single gene disorders such as muscular dystrophy or cystic fibrosis. Another potential advantage of IUT is the ability to induce immune tolerance to a specific antigen. As seen in mice with hemophilia, the introduction of Factor IX early in development results in tolerance to this protein.14 
In addition to its use in investigating potential human therapies, the mouse model of IUT can be a powerful tool to study basic questions in developmental and stem cell biology. For example, one can deliver various small molecules to induce or inhibit specific gene expression at defined gestational stages and manipulate developmental pathways. The impact of these alterations can be assessed at various timepoints after the initial transplantation. Furthermore, one can transplant pluripotent or lineage specific progenitor cells into the fetal environment to study stem cell differentiation in a non-irradiated and unperturbed host environment.
The mouse model of IUT has already provided numerous insights within the fields of immunology, and developmental and stem cell biology. In this video-based protocol, we describe a step-by-step approach to performing IUT in mouse fetuses and outline the critical steps and potential pitfalls of this technique.

A Mouse Model of in Utero Transplantation

The mouse model of in utero transplantation is a versatile tool that can be used to study the potential clinical applications of stem cell transplantation and gene therapy in the fetus. In this protocol, we present a general approach to performing this technique

Bir Fare Modeli Utero Organ Nakli

The transplantation of stem cells and viruses in utero has tremendous potential for treating congenital disorders in the human fetus.  For example, in ...

Tıp

A Contusion Model of Severe Spinal Cord Injury in Rats

The translational potential of novel treatments should be investigated in severe spinal cord injury (SCI) contusion models. A detailed methodology is described to obtain a consistent model of severe SCI. Use of a stereotactic frame and computer controlled impactor allows for creation of reproducible injury. Hypothermia and urinary tract infection pose significant challenges in the post-operative period. Careful monitoring of animals with daily weight recording and bladder expression allows for early detection of post-operative complications. The functional results of this contusion model are equivalent to transection models. The contusion model can be utilized to evaluate the efficacy of both neuroprotective and neuroregenerative approaches.

A contusion model of severe spinal cord injury is described. Detailed pre-operative, operative and post-operative steps are described to obtain a consistent model.

Sıçanlarda Şiddetli Spinal Kord Yaralanması bir bere modeli

The translational potential of novel treatments should be investigated in severe spinal cord injury (SCI) contusion models. A detailed methodology is ...

A Radio-telemetric System to Monitor Cardiovascular Function in Rats with Spinal Cord Transection and Embryonic Neural Stem Cell Grafts

High thoracic or cervical spinal cord injury (SCI) can lead to cardiovascular dysfunction. To monitor cardiovascular parameters, we implanted a catheter connected to a radio transmitter into the femoral artery of rats that underwent a T4 spinal cord transection with or without grafting of embryonic brainstem-derived neural stem cells expressing green fluorescent protein. Compared to other methods such as cannula insertion or tail-cuff, telemetry is advantageous to continuously monitor blood pressure and heart rate in freely moving animals. It is also capable of long term multiple data acquisitions. In spinal cord injured rats, basal cardiovascular data under unrestrained condition and autonomic dysreflexia in response to colorectal distension were successfully recorded. In addition, cardiovascular parameters before and after SCI can be compared in the same rat if a transmitter is implanted before a spinal cord transection. One limitation of the described telemetry procedure is that implantation in the femoral artery may influence the blood supply to the ipsilateral hindlimb.

We present a protocol for using a radio-telemetric system to record cardiovascular parameters in T4 spinal cord transected rats eight weeks after embryonic brainstem neural stem cell grafting into the lesion site. Telemetry is an advanced technique to accurately evaluate cardiovascular function in conscious freely moving spinal cord injured rats.

A Radyo-telemetrik Sistemi Omurilik transeksiyonu ve Embriyonik Nöral Hücre Greftler Kök Sıçanlarda Kardiyovasküler Fonksiyonu Monitör

High thoracic or cervical spinal cord injury (SCI) can lead to cardiovascular dysfunction. To monitor cardiovascular parameters, we implanted a catheter ...

Neural Stem Cell Transplantation in Experimental Contusive Model of Spinal Cord Injury

Spinal cord injury is a devastating clinical condition, characterized by a complex of neurological dysfunctions. Animal models of spinal cord injury can be used both to investigate the biological responses to injury and to test potential therapies. Contusion or compression injury delivered to the surgically exposed spinal cord are the most widely used models of the pathology. In this report the experimental contusion is performed by using the Infinite Horizon (IH) Impactor device, which allows the creation of a reproducible injury animal model through definition of specific injury parameters. Stem cell transplantation is commonly considered a potentially useful strategy for curing this debilitating condition. Numerous studies have evaluated the effects of transplanting a variety of stem cells. Here we demonstrate an adapted method for spinal cord injury followed by tail vein injection of cells in CD1 mice. In short, we provide procedures for: i) cell labeling with a vital tracer, ii) pre-operative care of mice, iii) execution of a contusive spinal cord injury, and iv) intravenous administration of post mortem neural precursors. This contusion model can be utilized to evaluate the efficacy and safety of stem cell transplantation in a regenerative medicine approach.

Spinal cord injury is a traumatic condition that causes severe morbidity and high mortality. In this work we describe in detail a contusion model of spinal cord injury in mice followed by a transplantation of neural stem cells.

Omurilik Yaralanması Deneysel Kontuzif Modelinde Sinir Kök Hücre Nakli

Spinal cord injury is a devastating clinical condition, characterized by a complex of neurological dysfunctions. Animal models of spinal cord injury can ...

Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model

Bladder cancer is one of the most common malignancies of the urogenital tract. Intravesical injection of Bacillus Calmette-Gu&#233;rin (BCG) is the gold standard treatment for the high-grade non-muscle invasive bladder cancer (NMIBC). However, since the treatment-related side effects are relevant, newer biological response modifiers with a better benefit/side effects ratio are needed.
The tumour microenvironment can influence both tumour development and therapy efficacy. In order to obtain a good model, it is desirable to implant tumour cells in the organ from which the cancer originates.
In this protocol, we describe a method for establishing a tumour in the bladder cavity of female mice and subsequent delivery of therapeutic agents; the latter are exemplified by our use of Helicobacter pylori neutrophil activating protein (HP-NAP). A preliminary chemical burn of the mucosa, followed by the injection of mouse urothelial carcinoma cell line MB49 via urethral catheterization, enables the cells to attach to the bladder mucosa. After a period, required to allow an initial proliferation of the cells, mice are treated with HP-NAP, administrated again via catheterization. The anti-tumour activity of HP-NAP is evaluated comparing the tumour volume, the extent of necrosis and the degree of vascularization between vehicle- and HP-NAP-treated animals.

Evaluation of the Efficacy of the H. pylori Protein HP-NAP as a Therapeutic Tool for Treatment of Bladder Cancer in an Orthotopic Murine Model

Here the method to establish a syngeneic mouse model of orthotopic bladder tumour to evaluate the anti-tumour efficacy of the bacterial protein HP-NAP is described.

Etkinliğinin Değerlendirilmesi<em&gt; H. pylori</emOrtotopik Fare Modelinde Mesane Kanseri Tedavisinde Terapötik Aracı Olarak&gt; Protein HP-NAP

Bladder cancer is one of the most common malignancies of the urogenital tract. Intravesical injection of Bacillus Calmette-Gu&#233;rin (BCG) is the gold ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor initiation, metastasis and resistance to radio- and chemotherapy. Here we describe a specific methodology for culturing primary human pancreatic CSCs as tumor spheres in anchorage-independent conditions. Cells are grown in serum-free, non-adherent conditions in order to enrich for CSCs while their more differentiated progenies do not survive and proliferate during the initial phase following seeding of single cells. This assay can be used to estimate the percentage of CSCs present in a population of tumor cells. Both size (which can range from 35 to 250 micrometers) and number of tumor spheres formed represents CSC activity harbored in either bulk populations of cultured cancer cells or freshly harvested and digested tumors 1,2. Using this assay, we recently found that metformin selectively ablates pancreatic CSCs; a finding that was subsequently further corroborated by demonstrating diminished expression of pluripotency-associated genes/surface markers and reduced in vivo tumorigenicity of metformin-treated cells. As the final step for preclinical development we treated mice bearing established tumors with metformin and found significantly prolonged survival. Clinical studies testing the use of metformin in patients with PDAC are currently underway (e.g., NCT01210911, NCT01167738, and NCT01488552). Mechanistically, we found that metformin induces a fatal energy crisis in CSCs by enhancing reactive oxygen species (ROS) production and reducing mitochondrial transmembrane potential. In contrast, non-CSCs were not eliminated by metformin treatment, but rather underwent reversible cell cycle arrest. Therefore, our study serves as a successful example for the potential of in vitro sphere formation as a screening tool to identify compounds that potentially target CSCs, but this technique will require further in vitro and in vivo validation to eliminate false discoveries.

Pancreatic cancer stem cells (CSCs) can be expanded in vitro using the anchorage-independent sphere culture technique, which represents a powerful tool to study CSC biology and can serve as the first step to develop novel CSC-targeting therapies. Here the methodology for expanding, analyzing and targeting of pancreatic CSCs is provided.

Pankreas Kanseri Yeni Tedavi Stratejileri Geliştirme Hücre Özellikleri Kök incelenmesi

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

A Neonatal Mouse Spinal Cord Compression Injury Model

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal cord. A major current area of research is focused on the mechanisms of adaptive plasticity that underlie spontaneous or induced functional recovery following SCI. Spontaneous functional recovery is reported to be greater early in life, raising interesting questions about how adaptive plasticity changes as the spinal cord develops. To facilitate investigation of this dynamic, we have developed a SCI model in the neonatal mouse. The model has relevance for pediatric SCI, which is too little studied. Because neural plasticity in the adult involves some of the same mechanisms as neural plasticity in early life1, this model may potentially have some relevance also for adult SCI. Here we describe the entire procedure for generating a reproducible spinal cord compression (SCC) injury in the neonatal mouse as early as postnatal (P) day 1. SCC is achieved by performing a laminectomy at a given spinal level (here described at thoracic levels 9-11) and then using a modified Yasargil aneurysm mini-clip to rapidly compress and decompress the spinal cord. As previously described, the injured neonatal mice can be tested for behavioral deficits or sacrificed for ex vivo physiological analysis of synaptic connectivity using electrophysiological and high-throughput optical recording techniques1. Earlier and ongoing studies using behavioral and physiological assessment have demonstrated a dramatic, acute impairment of hindlimb motility followed by a complete functional recovery within 2 weeks, and the first evidence of changes in functional circuitry at the level of identified descending synaptic connections1.

This article describes a method for generating a reproducible spinal cord compression injury (SCI) in the neonatal mouse. The model provides an advantageous platform for studying mechanisms of adaptive plasticity that underlie spontaneous functional recovery.

Bir Yenidoğan Fare Omurilik Sıkıştırma Yaralanması Modeli

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal ...

Murine Flexor Tendon Injury and Repair Surgery

Tendon connects skeletal muscle and bone, facilitating movement of nearly the entire body. In the hand, flexor tendons (FTs) enable flexion of the fingers and general hand function. Injuries to the FTs are common, and satisfactory healing is often impaired due to excess scar tissue and adhesions between the tendon and surrounding tissue. However, little is known about the molecular and cellular components of FT repair. To that end, a murine model of FT repair that recapitulates many aspects of healing in humans, including impaired range of motion and decreased mechanical properties, has been developed and previously described. Here an in-depth demonstration of this surgical procedure is provided, involving transection and subsequent repair of the flexor digitorum longus (FDL) tendon in the murine hind paw.&#160;This technique can be used to conduct lineage analysis of different cell types, assess the effects of gene gain or loss-of-function, and to test the efficacy of pharmacological interventions in the healing process. However, there are two primary limitations to this model: i) the FDL tendon in the mid-portion of the murine hind paw, where the transection and repair occur, is not surrounded by a synovial sheath. Therefore this model does not account for the potential contribution of the sheath to the scar formation process. ii) To protect the integrity of the repair site, the FT is released at the myotendinous junction, decreasing the mechanical forces of the tendon, likely contributing to increased scar formation. Isolation of sufficient cells from the granulation tissue of the FT during the healing process for flow cytometric analysis has proved challenging; cytology centrifugation to concentrate these cells is an alternate method used, and allows for generation of cell preparations on which immunofluorescent labeling can be performed. With this method, quantification of cells or proteins of interest during FT healing becomes possible.

Flexor tendons in the hand are commonly injured, leading to impaired hand function. However, the scar-tissue healing response is not well characterized. A murine model of flexor tendon healing is demonstrated here. This model can enhance overall understanding of the healing process and assess therapeutic approaches to improve healing.

Murin Flexor Tendon yaralanmaları ve onarım Cerrahisi

Tendon connects skeletal muscle and bone, facilitating movement of nearly the entire body. In the hand, flexor tendons (FTs) enable flexion of the fingers ...

Balloon-based Injury to Induce Myointimal Hyperplasia in the Mouse Abdominal Aorta

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine balloon denudation model, which is comparable with established vessel injury models in large animals. The aorta denudation model with balloon catheters mimics the clinical setting and leads to comparable pathobiological and physiological changes. Briefly, after performing a horizontal incision in the aorta abdominalis, a balloon catheter will be inserted into the vessel, inflated, and introduced retrogradely. Inflation of the balloon will lead to intima injury and overdistension of the vessel. After removing the catheter, the aortic incision will be closed with single stiches. The model shown in this article is reproducible, easy to perform, and can be established quickly and reliably. It is especially suitable for evaluating expensive experimental therapeutic agents, which can be applied in an economical fashion. By using different knockout-mouse strains, the impact of different genes on MH development can be assessed.

This article demonstrates a murine model to study the development of myointimal hyperplasia (MH) after aortic balloon injury.

Fare Abdominal aort Myointimal Hiperplazi ikna etmek için balon tabanlı yaralanma

The use of animal models is essential for a better understanding of MH, one major cause for arterial stenosis.In this article, we demonstrate a murine ...

Evaluation of Coronary Flow Reserve After Myocardial Ischemia Reperfusion in Rats

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via recanalization of the coronary artery is the most effective strategy for reducing the size of ischemic myocardium. The coronary microvasculature cannot be visualized and imaged&#160;in vivo, but there are several invasive and noninvasive techniques that can be used to assess parameters which depend directly on coronary microvascular function. The endothelial function after ischemia reperfusion can be assessed also at the level of the coronary circulation via the coronary flow reserve (CFR).&#160;In this study, peak velocity of left anterior descending (LAD) coronary arteries was measured in rats in vivo via Transthoracic Doppler Echocardiography during resting and stress challenge (induced by Dobutamine). A normal heart can increase its coronary blood flow up to four times above the resting values during stress induction. Following ischemia reperfusion, we found a significantly diminished CFR, which can be used as a marker of coronary microvascular dysfunction. CFR has opened a window on the importance of microvascular dysfunction and has been shown to predict cardiovascular risk independent of whether the severe obstructive disease is present.

Coronary flow reserve (CFR), is defined as the ratio of maximal coronary blood flow to the resting coronary blood flow. We present a protocol for evaluating CFR in rats via ultrasound, which offers the opportunity to predict cardiovascular risk factors in the absence of obstructive coronary disease.

Farelerde miyokardiyal Iskemi reperfüzyon sonrası koroner akış rezervi değerlendirilmesi

Coronary artery disease is the leading cause of death worldwide. After an acute myocardial infarction, early and successful myocardial intervention via ...