The authors would like to acknowledge funding from the Horserace Betting Levy Board U.K. (grant number 721) and VetCell BioScience Ltd, U.K. and by Consejer&#236;a de Innovaci&#242;n, Ciencia y Empresa, Junta de Andaluc&#236;a, Spain.

Burada tarif edilen vakalar Colegio de Veterinarios de Malaga, İspanya Hayvan Etik ve Sosyal Komitesi ve Kraliyet Veteriner Koleji, Kuzey Mymms, İngiltere atlara kullanılan prosedürler tarafından verilen Etik izni aşağıdaki yapıldı vardır onaylı protokoller dayanmaktadır implantasyon sonrası sedasyon, kemik iliği aspirasyonu, intra-tendinöz enjeksiyon, bölgesel perfüzyon, intravenöz enjeksiyon, işlem sonrası tedavi ve ağrı yönetimi ve izleme içerir kök hücre bazlı terapiler alan atlara klinikte kullanılan. 1. Temel Düzenlemeler Advance Yapılacak <ol><li> Kurumsal etik ve hayvan refahı onayı Seek ve çalışmaya başlamadan önce yerel yasal gereklere uygun. </li><li> Personelin uygun koruma düzeyi ve çevre ve bulaşm bertarafı dahil olmak üzere yerel ve yasal düzenlemeler emrettiği gibi iyonlaştırıcı radyasyon ile çalışmak için kurumsal onayını alıniyice kirlerden atık. </li><li> Aşağıdaki dahil edilme kriterlerine kullanın: ön ayakları ve tendon içindeki bir arıza ve kusur sonucu lezyonların yüzeyel fleksör tendon dijital olmayan bir travmatik yaralanma aşırı yorgunluk (tendinopati veya desmopathy) ile mevcut atları sağlam tendon ve / veya paratenon çevrilidir . Not: Bu tür yaralanmalar ve hücre implantasyonu için atların klinik hazırlanması için muayene ve tanı başka 6,15 detaylı edilmiştir. Not: At kemik iliğinden türetilen BMMSC kültüründe izolasyonu ve genişleme önce 6,16 ayrıntılı edilmiştir. Atı MFDS yaralanmaları BMMSC enjekte geçerli protokol otolog kemik iliği süpernatant (BMS) 16 ml 4 başına 10 milyon hücreleri kullanır. </li><li> Yüksek geçiş numarası c ile ilişkili potansiyel hücre fenotipi genetik değişiklikleri önlemek için in vivo implantasyonu için en fazla 4 pasajlar geçirmiş hücreler kullanarakarşın. </li><li> BMS hücrelerin gerekli sayıda sunun (4 bir ürperti kutusuna 24 saat içinde - 8 o C) hücre implantasyonu yapılacak olan veteriner kliniğine. Not: Kemik iliği süpernatanda mezenkimal kök hücrelerin klinik kullanım yetkisi gerektirebilir ReCellerate Inc (ABD) ve kullanımı aittir patentli bir işlemdir. Not: Tc-99m, nispeten kısa bir yarı ömre sahip bir gamma yayıcı (140 keV) &#39;nin (6,0058 saat, bu nedenle de yaklaşık% 94, 24 saat 99 Tc istikrarlı formuna dönüşür). Gama enerjisi at ve hayvan taşıma personeli hem çok sınırlı radyasyona maruz kalma zamanında gama kameralar (sintigrafi) ve kısa yarılanma ömrü sonuçları tespiti için uygundur. Bu protokol [HMPAO (sodyum perteknetat gibi) Tc-99m ile işaretli] Tc-99m-HMPAO kullanarak hücrelerin bünyesinde etiketleme anlatır. </li><li> Hücrelerin zekâ etiketlemek için teslim ve kullanılan şekilde tedarikçiden taze Tc-99m SiparişTc-99m jeneratör elüsyon 2 saat hin. Tc-99m, 1 ml çözelti (tedarikçinin standart tamponu) 1 GBq olarak verilir emin olun. </li><li> RT&#39;de tüm tamponları kullanın. Etiketleme prosedürü uygulayın, alkol ile temizlenmelidir tüm ekipmanları ile bir izotop muhafaza odasında hücreleri ve görüntüleme (gama sintigrafi) implantasyonu Çalışmaya başlamadan önce, mendil. </li></ol> Ön ayakları Tendon Horse and Ultrasonografinin 2. Hazırlık <ol><li> Zaman noktasında daha sonra ilk (kemik iliği aspire edilir) yaralanma için başvuru ve Tutanak ultrason taramaları radyoaktif işaretli hücreler enjekte edildiğinde. </li><li> Atı ahır eşit ağırlık taşıyan ve (yerine genel anestezi yerine) sedasyon ayakta altında ultrasonografi ve hücre implantasyonu gerçekleştirin. 0,01 0,02 mg / kg IV detomidine HCI ve butorfanol tartrat karışımı, her biri kullanılarak sedasyon uygulayın. Not: Kurtarma hızlı ve ameliyat sonrası bir tedavi gerektirir hayırözel durumlar. </li><li> Perinöral anestezi etkilenen ekstremite (adım 2.6) uygulandıktan sonra, tedavi sırasında at hareketini azaltmak için sedasyon altında istasyonunda atı tutmak. Görme indirilmiş baş pozisyonu ve at tavır ve at hücre enjeksiyonu ve sintigrafik görüntüleri alımı sırasında gama kamera hareketleri sırasında rahat olduğunu karar sedasyon uygun seviyesini kontrol edin. Not: Çünkü sedasyon yanıp sönen altında gözlerin (kuruluğunu önlemek için) üzerine veteriner merhem uygulamak etkilenmez gerekli değildir ve at gözlerin hidrasyon koruyabiliyor. Hücrelerin implantasyon sonrası izlenmesi non-invaziv (ultrason ve gama sintigrafisi) &#39;dir. </li><li> Klip yakından (at kılı kesme makineleri ile) tendonuna örten saç sonra nihayet alkol klorheksidin cerrahi fırçalayın kombinasyonunu kullanarak kırpılmış alanı temizlemek. </li><li> Alan akustik bağlantı jel uygulayın veSeri on-insidansı enine ve boyuna görüntüler elde etmek için bir lineer transdüser (12 MHz veya benzeri) ile, 7 17 - tam palmar metakarp bölge taramaları, sırayla etiketli seviyelere 1 kayıt yöntemli tarayın. Kesit alanı ve maksimal yaralanma yeri 4 görüntü analizi yazılımı yardımı ile elde edilebilir ve böylece dijital görüntü saklayın. </li><li> Tendon ve yüzeyel fleksör tendon dijital örten derinin tam duyarsızlaştırma sağlamak için lokal anestezik aseptik enjeksiyon için carpus hemen distalinde palmar sinirleri örten alanı hazırlayın. Mepivicaine 2 mL deri altına ve (bunların alt fasyal konumda) palmar sinirlerin bitişik fleksor tendonları ile kolun her iki yanında el bileğinin hemen distal kasık bağı hem enjekte edilir. </li><li> Ön tarama klorheksidin cerrahi s alanı ovma yoluyla implantasyon sitesi hazırlamak gerçekleştirildikten sonracrub en az 5 dakika boyunca çözeltisi ve son olarak alkol emdirilmiş gazlı bezle. Aseptik moda sonraki tüm adımları uygulayın. </li></ol> Atçılık Mezenkimal Kök Hücre 3. Tc-99m-etiketleme Not: Hücre etiketleme adımlar tendon içine hücre etiketleme ve işaretli hücrelerin implantasyonu arasındaki bu minimize edecek izotop çürüme olarak ön ayakları ultrasonografi sırasında yapılabilir. <ol><li> O izotopun alımı engel olarak hücreleri BMS çıkarın. Bunu yapmak için, soğutma kutusundan BMMSC şişesini (BMS 1 ml 10.000.000 hücre) almak ve oda sıcaklığında 5 dakika boyunca 350 x g&#39;de bir mikrosantrifüj pelet hücreleri. Dikkatle hücre tabanda yardım etmek için bir tüp içinde, küçük bir damla (≤0.1 mi) bırakarak, bir 18G ya da (2 mi şınngaya bağlanmış) 19G iğnesi ile supernatant çıkarın. Steril bir mikrosantrifüj tüp içinde süpernatant (BMS) kaydedebilir ve daha sonra yeniden kullanım için buz üzerinde tutmak. </li><li> Fl süpernatanttan kalıntı damlacık hücrelerin tekrar(yerine girdap dışında) parmaklarınızla hafifçe tüp Icking ve oda sıcaklığında bir rafa tüp bırakın. Hücreler tamamen yeniden süspanse ve hiçbir görünür hücre kümeleri olmadığından emin olun. </li><li> Aşağıdaki gibi Tc-99m hazırlayın. Teknetyum devri 1 ml 1 ml şırınga ve iğneyi kullanarak HMPAO bir şişe içerisine perteknetat. Yavaşça ama iyice karıştırın ve kurşun koruyucu arkasında 5 dakika bekletin. Not: Hücreler adım 2.1 iplik ise bu adım yapılabilir. </li><li> Hücrelere 1 ml&#39;lik şırınga ve bir iğne kullanılarak Tc-99m-HMPAO karışımın tümü ekleyin ve yavaşça karıştırın. Talebi koruyucu örtünün arkasına oda sıcaklığında 30 dakika süreyle inkübe edilir. </li><li> Bir sonraki adımlar için, izotop (eldivenli) başparmak kirlenmesini ve daha sonra diğer donanımları en aza indirmek için mikrosantrifüj tüp kapağını açmak için forseps (ya da doku kağıt parçası) kullanın. Eklemek veya yıkama tamponu çıkarmak için 2 ml şırınga ve 21 G iğne kullanın. Not: Bir alan izotop monitörün kullanım yüzeylerinin ve ekipmanların kirlenmesini izlemek için teşvik edilmektedir. </li&gt; <li> , Kapağı kapatın hafifçe karıştırın ve sıkma adımında 3.1 olarak pelet hücreleri, Tc-99m-HMPAO hücre karışımına 1 ml PBS ekleyin. </li><li> Dikkatle yeni bir tüp (W1 olarak kurşun koruma ve etiket arkasında bu tasarruf) için PBS kaldırmak. Taze PBS 1 ml hücre pelletini. Tüp Santrifüj ve (W2 olarak bu ve etiketi kaydetmek) yukarıdaki gibi süpernatant kaldırmak. </li><li> W1 ve W2 tüplerinde karıştırıldı ve hücre peleti içerisindeki sayımları ölçülerek etiketleme verimi olarak hesaplanır. Bir Şey izotop doz kalibratör enstrüman her tüpleri yerleştirerek ve dakika (CPM) başına sayım olarak radyoaktivite kaydederek bunu yapın. (Hücre CPM olarak Radyoaktivite) olarak etiketleme verimliliği hesaplayın / (Radyoaktivite hücrelerinin + süpernatant) x 100. </li><li> BMS adım 3.1 kurtulmuş ekleyin kalıntı PBS iyice hücreleri tekrar süspansiyon ve. Hücreler lezyon içi implantasyon için hazırız. </li></ol> Tc-99m-HMPAO etiketli Hücre 4. implantasyonu <ol><li> İntralezyoner implantasyonultrason eşliğinde tendon içine <ol><li> Yavaş yavaş iğne ile paralel olarak 1,5 ya da 2 inç (50 mm) bir steril örtü kaplı ultrason transdüktörü ile uzunlamasına yönde lezyon maksimum yaralanma bölgesine 20 G iğne tanıtmak iğne uzunluğu olabilir ve böylece İğne doğru lezyonun merkezinde ise ultrasonografik teşhis ve ucu olabilir. </li><li> 2 ml şırınga içine hücreleri toplamak, uygun zırhlama kullanarak 20 G iğne kullanılarak (Luer kilidi dış kontaminasyon riskini ve kurşun-korumalı şırınga kapak aza indirmek için). Herhangi bir sıvıyı kaybetmemek için dikkatli olmak iğne atın. Şimdi iğne tendon önceden bulunan üzerine işaretli hücrelerin şırınga takmak. </li><li> Dokuda iğne yolu açıkça görülebilir şekilde iğnenin altında ultrason probu yerleştirin. Lezyon içine yavaş ama istikrarlı bir hızda hücreleri enjekte edilir. Enjeksiyona direnç olmadığından emin olun. Bu karşılaştıdikkatle ultrason eşliğinde iğne yerleştirin. Lezyon içine sıvı fırlatma hiperekojen hava kabarcıkları içeren anekoik sıvı gibi ultrason görüntüsünde görünür olduğundan emin olun. </li><li> İğneyi geri çek ve hemen enjekte edilen hücrelerin kaybını önlemek ve bacak dış yüzeyi üzerinde izotop yayılmasını en aza indirmek için iğne deliği üzerinde baskı yerleştirin. Hemen autoadhesive bandaj bir tabaka ile uzuv elbise. At şimdi gama sintigrafisi için hazırdır. Hemen bu gerçekleştirin. Not: tendon içine hücreler enjekte sonra şırınga içinde kalabilir hücrelerin olası doğrudan kaybını değerlendirmek için boş şırınga ve iğne sayısını kazanır. </li></ol></li><li> Tc-99m-HMPAO-işaretli hücrelerin Bölgesel perfüzyon <ol><li> Adımı 2.4 izleyin. </li><li> Medial ve lateral konumlandırılmış iki adet 100 mm&#39;lik pamuk rulo gazlı bez bandaj ile proksimal metacarpus&#39;un üzerinde 100 mm lastik turnike bandaj uygulayın. </li><li> Aseptik th hazırlamakEn az 5 dakika boyunca bir klorheksidin cerrahi fırçalayın çözeltisi ile bölgeyi ovma ve nihayet alkole batırılmış gazlı bez ile yanal Proksimal susam kemik seviyesinde yatay palmar dijital ven üzerinden e cilt. Aseptik moda sonraki tüm adımları uygulayın. </li><li> Heparinize steril serum fizyolojik ile doldurularak venipunktür için 21 G x ¾ &quot;(0.8 x 19 mm) kelebek iğne ile ayarlanmış bir 100 mm uzantısı hazırlayın ve daha sonra yan palmar dijital ven içine iğne tanıtmak. Damar girildikten sonra kan kısmen uzatma seti dolduracaktır. Luer lock konnektörü etiketli hücrelerin sonraki enjeksiyon kolaylaştırmak için bir Luer kilit lastik kapağı takın. </li><li> PBS ile önceden yüklenmiş bir 20 ml şırınga içinde hücrelerin toplanması ile PBS 19 ml MKH&#39;lerin seyreltilir. (- 40 sn 30) 18 G (1.2 x 40 mm) yavaş ama düzenli bir hızda derialtı iğne kullanılarak lastik fincan yoluyla hücrelere uygulayın. Bir Syring önceden yüklenmiş 1 ml PBS ile kateter yıkayıne. </li><li> Beş 4 x 4 pamuklu gazlı bezlerin tabakası ile iğne deliğinin üzerine deri baskı uygulamaktan derhal iğneyi çıkarın ve. Daha sonra Proksimal susam alanı üzerinde elastik yapışkan ile hafif bir bandaj yerleştirin ve enjeksiyondan sonra 30 dakika boyunca bir yerde turnike bırakın. </li><li> 30 dakika sonra turnike bırakın. At şimdi gama sintigrafisi için hazırdır. Not: hücrelerini enjekte ettikten sonra, şırınga içinde kalabilir hücrelerin olası doğrudan kaybını değerlendirmek için boş şırınga ve iğne sayısını kazanır. </li></ol></li></ol> 5. Gamma Sintigrafi <ol><li> Sintigrafi görüntüler <ol><li> Düşük enerji, paralel delik kolimatör ile donatılmış (% 20 simetrik penceresini kullanarak 140 KeV fotoelektrik zirvede ayarlanır) bir gama kamera ile düzlemsel sintigrafisi görüntüler elde. <ol><li> Adım 2.2 olarak sedasyon atları duran zaman 0 sonra tüm görüntüleri edinin. Zaman 0 sintigrafisine sonra, implantasyon si üzerinde ışık bandaj yerineBir yastıklı bandaj ile te. Her sintigrafi sınav öncesinde bu bandaj çıkarın. </li><li> &quot;Çalışma seçimi&quot; - - &quot;edinilen&quot; ile işleme yazılımı kullanarak 60 saniye, her (256 256 matris) statik görüntü elde &quot;kemik statik&quot; seçenekleri. Statik mod seçeneği hareketinin düzeltilmesi için bir modül olmadığından at görüntü elde etme dönemi boyunca hareket etmez esastır. </li><li> Intralezyonel enjeksiyon için, uzak ekstremiteye carpus gelen lezyon alanından yanal görüntüler elde kontralateral bacak, sol akciğer alanında ve sol tiroid eşdeğer alanı. Ön ayakları görüntülerin elde edilmesi sırasında, bacak Kontrlateral görüntülenmesinde önlemek için bacaklarının arasına bir kurşun ekrana yerleştirin. Enjeksiyonu (saat 0) 5 dakika sonra da görüntüler elde, ve daha sonra 1, 3, 6, 12, 24, 36 ve 48 saat sonra. </li><li> Bölgesel perfüzyon için, 5.1.1.3 gibi yanal ve dorsal gama görüntüleri elde edebilir. Görüntüleri 5 dk af edininter turnike bırakma. Bu hemen serbest bırakılmasını turnike öncesinde sayıları değerlendirmek için hücreler enjekte sonra bu uzuv görüntü için yararlı olabilir zaman 0. olacaktır. Hücrelerin verilmesinden sonra 1, 3, 6, 12, 24, 36 ve 48 saat sonra gama görüntüleri elde edilir. </li></ol></li><li> Görüntüleri elde edildikten sonra, süreç el &quot;Sokoloff&quot; renk ve &quot;Invert&quot; renk seçenekleri ile seçilen yazılımın &quot;işlem&quot; seçeneğini kullanarak görüntüleri. Bu lezyon alana seçim maske ve hareketin yeniden şekillendirilmesi izin verdiği Sonraki &quot;ilgi bölgesi&quot; (ROI) ve &quot;elips&quot; seçeneğini seçin. &quot;İstatistiklere ekle&quot; seçeneğini seçerek ROI üzerinde sayıları edinin. İlgi alanına (ROI) bu denk boyutlandırılmış bölgeleri, farklı zaman noktalarında her bir hayvan için kaydedildi emin olun. </li><li> Daha sonra, her bir zaman noktasında teknetyum tahmin edilen bozunma için sayıları düzeltin. Çürüme düzeltmek için aşağıdaki denklemi kullanın:A = A e o - (0.693t / T 1/2) çürüme sıfır zamanında radyoaktiviteyi düzeltilmiş bir o izotopun ilk faaliyettir, A, T geçen zaman ve T 1/2 yarısı izotopun -Hayat. Daha sonra aşağıdaki formül kullanılarak, kalan hücrelerin yüzdesini atlatmanın 0 zamanında ROI bir yüzdesi olarak her zaman bir noktada düzeltilmiş sayar ifade: </li></ol></li></ol> % hücreler geriye kalan (t) = 100 - {[(tahmin edilen bozunma (±) - bozunma (t)) / çürüme tahmin (t)]} x 100 bozunumu (t) = ROI (t) / ROI (0) x 100.

<ol>
	<li>Becerra, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+of+injected+technetium(99m)-labeled+mesenchymal+stem+cells+in+horses+with+naturally+occurring+tendinopathy.">Distribution of injected technetium(99m)-labeled mesenchymal stem cells in horses with naturally occurring tendinopathy.</a> Journal of Orthopaedic Research. 31, 1096-1102 (2013).</li><li>Nixon, A. J., Dahlgren, L. A., Haupt, J. L., Yeager, A. E., Ward, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+adipose-derived+nucleated+cell+fractions+on+tendon+repair+in+horses+with+collagenase-induced+tendinitis.">Effect of adipose-derived nucleated cell fractions on tendon repair in horses with collagenase-induced tendinitis.</a> American Journal of Veterinary Research. 69, 928-937 (2008).</li><li>Schnabel, L. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells+and+insulin-like+growth+factor-I+gene-enhanced+mesenchymal+stem+cells+improve+structural+aspects+of+healing+in+equine+flexor+digitorum+superficialis+tendons.">Mesenchymal stem cells and insulin-like growth factor-I gene-enhanced mesenchymal stem cells improve structural aspects of healing in equine flexor digitorum superficialis tendons.</a> Journal of Orthopaedic Research. 27, 1392-1398 (2009).</li><li>Smith, R. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Beneficial+effects+of+autologous+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+in+naturally+occurring+tendinopathy.">Beneficial effects of autologous bone marrow-derived mesenchymal stem cells in naturally occurring tendinopathy.</a> PloS one. 8, e75697 (2013).</li><li>Sole, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distribution+and+persistence+of+technetium-99+hexamethyl+propylene+amine+oxime-labelled+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+in+experimentally+induced+tendon+lesions+after+intratendinous+injection+and+regional+perfusion+of+the+equine+distal+limb.">Distribution and persistence of technetium-99 hexamethyl propylene amine oxime-labelled bone marrow-derived mesenchymal stem cells in experimentally induced tendon lesions after intratendinous injection and regional perfusion of the equine distal limb.</a> Equine Veterinary Journal. 45, 726-731 (2013).</li><li>Godwin, E. E., Young, N. J., Dudhia, J., Beamish, I. C., Smith, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Implantation+of+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+demonstrates+improved+outcome+in+horses+with+overstrain+injury+of+the+superficial+digital+flexor+tendon.">Implantation of bone marrow-derived mesenchymal stem cells demonstrates improved outcome in horses with overstrain injury of the superficial digital flexor tendon.</a> Equine Veterinary Journal. 44, 25-32 (2012).</li><li>Crevier-Denoix, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanical+properties+of+pathological+equine+superficial+digital+flexor+tendons.">Mechanical properties of pathological equine superficial digital flexor tendons.</a> Equine Veterinary Journal. 29, 23-26 (1997).</li><li>O'Meara, B., Bladon, B., Parkin, T. D., Fraser, B., Lischer, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+investigation+of+the+relationship+between+race+performance+and+superficial+digital+flexor+tendonitis+in+the+Thoroughbred+racehorse.">An investigation of the relationship between race performance and superficial digital flexor tendonitis in the Thoroughbred racehorse.</a> Equine Veterinary Journal. 42, 322-326 (2010).</li><li>Alexander, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Energy-saving+mechanisms+in+walking+and+running.">Energy-saving mechanisms in walking and running.</a> The Journal of Experimental Biology. 160, 55-69 (1991).</li><li>Guest, D. J., Smith, M. R., Allen, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monitoring+the+fate+of+autologous+and+allogeneic+mesenchymal+progenitor+cells+injected+into+the+superficial+digital+flexor+tendon+of+horses:+preliminary+study.">Monitoring the fate of autologous and allogeneic mesenchymal progenitor cells injected into the superficial digital flexor tendon of horses: preliminary study.</a> Equine Veterinary Journal. 40, 178-181 (2008).</li><li>Guest, D. J., Smith, M. R., Allen, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Equine+embryonic+stem-like+cells+and+mesenchymal+stromal+cells+have+different+survival+rates+and+migration+patterns+following+their+injection+into+damaged+superficial+digital+flexor+tendon.">Equine embryonic stem-like cells and mesenchymal stromal cells have different survival rates and migration patterns following their injection into damaged superficial digital flexor tendon.</a> Equine Veterinary Journal. 42, 636-642 (2010).</li><li>Sole, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scintigraphic+evaluation+of+intra-arterial+and+intravenous+regional+limb+perfusion+of+allogeneic+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+in+the+normal+equine+distal+limb+using+(99m)+Tc-HMPAO.">Scintigraphic evaluation of intra-arterial and intravenous regional limb perfusion of allogeneic bone marrow-derived mesenchymal stem cells in the normal equine distal limb using (99m) Tc-HMPAO.</a> Equine Veterinary Journal. 44, 594-599 (2012).</li><li>Carvalho, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluation+of+mesenchymal+stem+cell+migration+after+equine+tendonitis+therapy.">Evaluation of mesenchymal stem cell migration after equine tendonitis therapy.</a> Equine Veterinary Journal. 46, 635-638 (2014).</li><li>Welling, M. M., Duijvestein, M., Signore, A., van der Weerd, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vivo+biodistribution+of+stem+cells+using+molecular+nuclear+medicine+imaging.">In vivo biodistribution of stem cells using molecular nuclear medicine imaging.</a> Journal of Cellular Physiology. 226, 1444-1452 (2011).</li><li>Dowling, B. A., Dart, A. J., Hodgson, D. R., Smith, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Superficial+digital+flexor+tendonitis+in+the+horse.">Superficial digital flexor tendonitis in the horse.</a> Equine Veterinary Journal. 32, 369-378 (2000).</li><li>Kasashima, Y., Ueno, T., Tomita, A., Goodship, A. E., Smith, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimisation+of+bone+marrow+aspiration+from+the+equine+sternum+for+the+safe+recovery+of+mesenchymal+stem+cells.">Optimisation of bone marrow aspiration from the equine sternum for the safe recovery of mesenchymal stem cells.</a> Equine Veterinary Journal. 43, 288-294 (2011).</li><li>Avella, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ultrasonographic+assessment+of+the+superficial+digital+flexor+tendons+of+National+Hunt+racehorses+in+training+over+two+racing+seasons.">Ultrasonographic assessment of the superficial digital flexor tendons of National Hunt racehorses in training over two racing seasons.</a> Equine Veterinary Journal. 41, 449-454 (2009).</li><li>de Vries, E. F., Roca, M., Jamar, F., Israel, O., Signore, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Guidelines+for+the+labelling+of+leucocytes+with+(99m)Tc-HMPAO.+Inflammation/Infection+Taskgroup+of+the+European+Association+of+Nuclear+Medicine.">Guidelines for the labelling of leucocytes with (99m)Tc-HMPAO. Inflammation/Infection Taskgroup of the European Association of Nuclear Medicine.</a> European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging. 37, 842-848 (2010).</li><li>Trela, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scintigraphic+comparison+of+intra-arterial+injection+and+distal+intravenous+regional+limb+perfusion+for+administration+of+mesenchymal+stem+cells+to+the+equine+foot.">Scintigraphic comparison of intra-arterial injection and distal intravenous regional limb perfusion for administration of mesenchymal stem cells to the equine foot.</a> Equine Veterinary Journal. 46, 479-483 (2014).</li><li>Barbash, I. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+delivery+of+bone+marrow-derived+mesenchymal+stem+cells+to+the+infarcted+myocardium:+feasibility,+cell+migration,+and+body+distribution.">Systemic delivery of bone marrow-derived mesenchymal stem cells to the infarcted myocardium: feasibility, cell migration, and body distribution.</a> Circulation. 108, 863-868 (2003).</li><li>Heckl, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Future+contrast+agents+for+molecular+imaging+in+stroke.">Future contrast agents for molecular imaging in stroke.</a> Current Medicinal Chemistry. 14, 1713-1728 (2007).</li></ol>

JD and RKS are Scientific Advisory Board members to ReCellerate Inc.

Kemik iliğine ek olarak, yağ dokusu gibi kaynaklardan izole edilmiş kök hücrelerin bu protokol ile etiketlenmesi için uygundur. Bundan başka, bir donmuş durumdan hücreler canlandırıldı ve markalama çalışmaları 12 için arzu edilen numaralara kültürde genişletilebilir. BMMSC etiketleme etkinliğini belirleyen önemli bir faktör radyofarmasötiklerin molibdenyum jeneratöründen Tc-99m elüsyonu arasındaki zaman, Tc-99m-HMPAO hazırlanması ve klinikte radyofarm...

Hastalıklı ya da zarar görmüş dokuların onarımı için Rejeneratif stratejiler etkilenen bölgeye doku çeşitli türetilir ve implante multipotent kök hücreleri dayanmaktadır. Atlarda tendon ve bağ yaralanmalarının tedavisinde otolog BMMSC uygulamasında son gelişmeler hem deneysel 1-5 iyileştirmiştir önlemleri ve klinik çalışmalar 6 göstermiştir. At o yaşta muzdarip ve distal ön ayakları tendon yaralanmaları ile ilgili aşırı yorgunluk, bir atletik hayvan olduğu için tedaviler ile ilgili kök hücre etkinliğini değerlendirmek için özellikle çekici bir model olduğunu ve büyük bir kolaylaştırıcı kemik iliği kurtarma ve Doğru implantasyon. Tendon yaralanmaları fibrozis ile doğal iyileşir ama iyileşmiş tendon 7 işlevsel aşağı ve yeniden yaralanma 8 yüksek risk taşır. Bir elastik enerji olarak hareket etmek gelişti gibi yüzeysel dijital fleksör tendon (MFDS) en sık etkilenenmağaza ve deneyimler yüksek yükleme enerjisini verimli ve yüksek hızda lokomosyon elde vurguluyor. Yaralanma sonrası işlevini geri nedenle önemlidir. Bu yaralanmalar benzer bir işlevi 9 gerçekleştirir insanlarda Aşil tendonu etkileyen benzemektedir. Bu nedenle hücre tabanlı rejeneratif stratejiler sonuçlarını iyileştirmek için ve yeniden yaralanmaları azaltmak için cazip bir fırsat sunuyoruz, tedavi ya da yaralanmalar için iyi onarımını sağlamak iyi bir tedavi seçeneği vardır. Çalışmaların çoğunda 5-20.000.000 otolog BMMSC genellikle bu nedenle hücreler için bir kap gibi davranır tendon vücudun çekirdek içinde meydana lezyon içine doğrudan enjekte edilir. Bir kez enjekte edilen hücrelerin kaderi hücreleri son zamanlarda tarif edilmiştir izlemek için açık ve farklı hücre etiketleme yöntemleri değildir. Bir floresan etiket ile etiketlenmiş hücreler, sadece nispeten az sayıda (&lt;% 10) 10,11 hayatta gösterilmiştir. Floresan etiketleri gerektirenzaman alıcıdır ve değildir, histolojik analiz için doku çıkarma ve kesit hali hazırda büyük bir hayvan modelinde veya klinik vakalarda geçici analiz kolaylaştırır. Daha yeni çalışmada, hücreleri etiketlemek ve gama sintigrafisi 1 kendi kaderini takip radyoizotop 99m Tc kullandık. Bu yöntem, hızlı karşılaştırmalar intra-arteriyel 12 veya intravenöz enjeksiyon yoluyla 1,12 juguler ven 1 veya bölgesel perfüzyon yoluyla intravenöz lezyon içine dahil olmak üzere hücre teslim farklı yolları, arasında yapılacak sağlar. Hücrelerin sebat ve dağıtımı daha sonra çeşitli organlarda gama sintigrafisi ile görüntülenebilir. Bu hücrelerin sadece% 24 intralezyonel 24 saat 1 ile lezyonun kaldı enjekte ve deneysel oluşturulan lezyonlar kullanarak ve aynı radyoetiket 5 kullanarak bir başka çalışmada tarafından desteklenen olduğunu göstermiştir. Ayrıca, hücreler delivere tendon lezyonları içine eve sınırlı yeteneğini göstermekintravenöz bölgesel perfüzyon veya tarafından d ama ikincisi yolları 4 ile akciğerlere dağılır. Demir nanopartiküller ile etiketlenmiş BMMSC ön ayakları tendonların 13 implante hücreleri izlemek için alternatif bir yöntemdir. Demir nanopartikül etiketli hücreler MRI ile in vivo olarak, hücre izlenmesine izin birlikte, büyük bir hayvanda zamansal çalışmalar, anestezi MRG gerçekleştirmek için her bir zaman noktasında tatbik edilebilir kaç kez ile sınırlıdır. Ayrıca, demir nanopartiküller tendon vücuda işaretli hücrelerin göç hakkında bilgi sınırlar MR hipointens bulunmaktadır. Kullanılabilen diğer radyoizotoplar İndiyum-111 bulunur, ancak bu Tc-99m daha uzun bir yarı-ömür dezavantajına (2,8 gün vs 6,0 saat) ve daha yüksek bir gama ışını emisyonu enerji uğrar. İndiyum-111 14 ile etiketlenmiş Buna ek olarak, hücre canlılığı, azaltılabilir bildirilmiştir. Tc-99m, diğer taraftan, rutin olarak iki, at ve insan nükleer kullanılantıp periferik kan mononükleer hücreleri etiketlemek ve sintigrafi ile in vivo dağıtımını takip etmek. Bu nispeten kolay hücrelere, Tc-99m-HMPAO olarak, teknesyum bağlamak için bir bağlayıcı molekül olarak HMPAO ile hücreler tarafından alınabilir. Tc-99m-HMPAO BMMSC iyi canlılığı göstermek ve in vitro 4 çoğalırlar yapabilirsiniz etiketli. Bu protokol ön ayakları MFDS doğal olarak oluşan lezyonlar içine implante etiketleme ve at otolog BMMSC izleme ayrıntıları. Bu protokol sadece amaçlanan bir araştırma aracı olarak kullanılmak üzere dikkat etmek önemlidir. Klinik tedavi yöntemi olarak kullanımı tam olarak açıklığa kavuşturulamamıştır hücresel fenotip üzerindeki radyoaktif etkisi olarak tavsiye edilmez.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Technetium99m&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Please enquire with local ionisation radiation supplier in accordance with legal requirements.&#160; The isotope must be used within 2 h of elution from the molybdenum-99 generator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ceretec - Hexamethylpropyleneamine oxime (HMPAO)&#160;</td>
			<td>GE HealthCare</td>
			<td></td>
			<td>Please enquire directly with GE HealthCare</td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microfuge, Minispin/Minispin Plus</td>
			<td>Ependorf</td>
			<td>22620100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>18G and 19G Needles</td>
			<td>Terumo Medical</td>
			<td>NN-1838R (18G);&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160;&#160; NN1938R (19G)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringes 1 mL and 2 mL</td>
			<td>Scientific Laboratory Supplies Ltd</td>
			<td>SYR6200 (1 mL); SYR6003 (2 mL)</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microcentrifuge tubes 1.5 mL</td>
			<td>Greiner Bio-One Ltd</td>
			<td>616201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS - Phosphate-Buffered Saline</td>
			<td>LifeTechnologies</td>
			<td>14190</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sterile Gauze Swabs</td>
			<td>Shermond Ltd</td>
			<td>UNG602</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CoflexVet self adhering bandage</td>
			<td>Andover Healthcare, Inc.</td>
			<td>3540RB-018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultrasound imaging software</td>
			<td>Scion Image, Scion Corporation, USA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicasXplus Scintigram processing software</td>
			<td>Bartec Technologies Ltd</td>
			<td></td>
			<td>http://www.bartectechnologies.com/veterinaryscintigraphy.html</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Field isotope counter for monitoring isotope</td>
			<td>John Caunt U.K.</td>
			<td>GMS1800a</td>
			<td>http://www.johncaunt.com/</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Well counter for isotope measurements, dose calibrator</td>
			<td>Capintec Southern Scientific</td>
			<td>CRC-25R</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

in vivo imaging and tracking of technetium-99m labeled bone marrow mesenchymal stem cells in equine tendinopathy

At tendon ve bağ yaralanmalarının tedavisinde kemik iliği mezenkimal kök hücrelerin (BMMSC) uygulanması son gelişmeler deneysel ve klinik çalışmalarda hem de sonuç önlemleri geliştirilmiş öneririz. BMMSC sayıda tendon lezyon içine implante edilir, ancak (genellikle 10-20.000.000 hücre), sadece nispeten az sayıda hayatta (&lt;% 10), bu implantasyondan sonra 5 aya kadar devam edebilir rağmen. Bu BMMSC diğer dokulara implante edilmiş diğer türler ortak bir gözlem gibi görünüyor ve bu kayıp birçok ilk implantasyon sürecinin hayatta nasıl ve hücreler diğer organlara temizlenmiş olup olmadığını, ortaya çıktığında bunu anlamak önemlidir. Hücrelerin kaderini Takip hücrenin konumu ve hücre sayıları miktarının in vivo görüntüleme invazif olmayan implantasyon BMMSC önce radyo-etiketleme ile elde edilebilir. Bu protokol, bir hücre labeli tarifAtlarda yaralanan fleksör tendon içine Teknesyum-99m (Tc-99m) ve implantasyon izleyen bu hücrelerin izleme kullanan ng prosedürü. Tc-99m gama ışınları yayar ve lipofilik bileşik hexamethylpropyleneamine oksim (HMPAO) varlığında hücreler tarafından içselleştirilebilir kısa süreli (t 1/2 6,01 hr) izotoptur. Bu özellikler çok farklı hastalıkların tanısında nükleer tıp kliniklerinde kullanılmak için idealdir. Etiketli hücrelerin kaderini akciğer, tiroid ve diğer organlarda Lezyonun ve hücrelerin dağılımı birikmiş hücre sayısı hem de ölçmek için, gama parıldaması ile kısa süreli (en fazla 36 saat için) &#39;de izlenebilir. Bu teknik, kan lökositlerinin etiketleme uyarlanmıştır ve diğer organlarda BMMSC implante görüntüye yararlanılabilir.

BMMSs içine Tc-99m-HMPAO birleşme olumsuz doku kültürü plastik uymak için kendi yeteneğini etkilemez ve onlar (Şekil 1) tek tabakaları oluşturmak için çoğalma yeteneğini göstermek ederken çoğalma oranları veya diğer hücresel fenotipleri etkilenir olsun tam kararlı değil. Bunların morfoloji tipik iğ şekilli etiketlenmemiş hücrelerden benzer. Hücresel markalama etkinlik (yani. Etiketin, soğurulma) tipik olarak yaklaşık% 1.5 ila% 25 arasında değişir. Düşük etik...

Watch this Scientific Journal Video about In Vivo Imaging and Tracking of Technetium-99m Labeled Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Equine Tendinopathy at JoVE.com

In Vivo Imaging and Tracking of Technetium-99m Labeled Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Equine Tendinopathy

This protocol describes the radiolabeling of equine mesenchymal stem cells and their implantation into tendon injuries in the horse in order to determine cell survival and tissue distribution using gamma scintigraphy.

Atçılık tendinopatisinde Kemik İliği Mezenkimal Kök Hücreler Etiketli Teknesyum- 99m Vivo Görüntüleme ve Takip

Recent advances in the application of bone marrow mesenchymal stem cells (BMMSC) for the treatment of tendon and ligament injuries in the horse suggest ...

in-vivo-imaging-tracking-technetium-99m-labeled-bone-marrow

Research

JoVE Journal

Medicine

In Vivo Imaging and Tracking of Technetium-99m Labeled Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Equine Tendinopathy

9.7K Görüntüleme.  The Royal Veterinary College. This protocol describes the radiolabeling of equine mesenchymal stem cells and their implantation into tendon injuries in the horse in order to determine cell survival and tissue distribution using gamma scintigraphy.

Video: In Vivo Imaging and Tracking of Technetium-99m Labeled Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells in Equine Tendinopathy

Pre-clinical Evaluation of Tyrosine Kinase Inhibitors for Treatment of Acute Leukemia

Receptor tyrosine kinases have been implicated in the development and progression of many cancers, including both leukemia and solid tumors, and are attractive druggable therapeutic targets. Here we describe an efficient four-step strategy for pre-clinical evaluation of tyrosine kinase inhibitors (TKIs) in the treatment of acute leukemia. Initially, western blot analysis is used to confirm target inhibition in cultured leukemia cells. Functional activity is then evaluated using clonogenic assays in methylcellulose or soft agar cultures. Experimental compounds that demonstrate activity in cell culture assays are evaluated in vivo using NOD-SCID-gamma (NSG) mice transplanted orthotopically with human leukemia cell lines. Initial in vivo pharmacodynamic studies evaluate target inhibition in leukemic blasts isolated from the bone marrow. This approach is used to determine the dose and schedule of administration required for effective target inhibition. Subsequent studies evaluate the efficacy of the TKIs in vivo using luciferase expressing leukemia cells, thereby allowing for non-invasive bioluminescent monitoring of leukemia burden and assessment of therapeutic response using an in vivo bioluminescence imaging system. This strategy has been effective for evaluation of TKIs in vitro and in vivo and can be applied for identification of molecularly-targeted agents with therapeutic potential or for direct comparison and prioritization of multiple compounds.

Receptor tyrosine kinases are ectopically expressed in many cancers and have been identified as therapeutic targets in acute leukemia. This manuscript describes an efficient strategy for pre-clinical evaluation of tyrosine kinase inhibitors for the treatment of acute leukemia.

Akut lösemi tedavisi için Tirosin Kinaz İnhibitörleri klinik öncesi değerlendirilmesi

Receptor tyrosine kinases have been implicated in the development and progression of many cancers, including both leukemia and solid tumors, and are ...

Tıp

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. Here, we describe a general protocol for cell labeling, imaging, and image processing. The technique is applicable to various cell types and animal models, although here we focus on a typical mouse model for tracking murine immune cells. The most important issues for cell labeling are described, as these are relevant to all models. Similarly, key imaging parameters are listed, although the details will vary depending on the MRI system and the individual setup. Finally, we include an image processing protocol for quantification. Variations for this, and other parts of the protocol, are assessed in the Discussion section. Based on the detailed procedure described here, the user will need to adapt the protocol for each specific cell type, cell label, animal model, and imaging setup. Note that the protocol can also be adapted for human use, as long as clinical restrictions are met.

In vivo 19F MRI for Cell Tracking

We describe a general protocol for in vivo cell tracking using MRI in a mouse model with ex vivo labeled cells. A typical protocol for cell labeling, image acquisition processing and quantification is included.

Hücre Takip için vivo 19 F MRG

In vivo 19F MRI allows quantitative cell tracking without the use of ionizing radiation. It is a noninvasive technique that can be applied to humans. ...

Sequential In vivo Imaging of Osteogenic Stem/Progenitor Cells During Fracture Repair

Bone turns over continuously and is highly regenerative following injury. Osteogenic stem/progenitor cells have long been hypothesized to exist, but in vivo demonstration of such cells has only recently been attained. Here, in vivo imaging techniques to investigate the role of endogenous osteogenic stem/progenitor cells (OSPCs) and their progeny in bone repair are provided. Using osteo-lineage cell tracing models and intravital imaging of induced microfractures in calvarial bone, OSPCs can be directly observed during the first few days after injury, in which critical events in the early repair process occur. Injury sites can be sequentially imaged revealing that OSPCs relocate to the injury, increase in number and differentiate into bone forming osteoblasts. These methods offer a means of investigating the role of stem cell-intrinsic and extrinsic molecular regulators for bone regeneration and repair.

Sequential In vivo Imaging of Osteogenic Stem/Progenitor Cells During Fracture Repair

Quantitative measurement of bone progenitor function in fracture healing requires high resolution serial imaging technology. Here, protocols are provided for using intravital microscopy and osteo-lineage tracking to sequentially image and quantify the migration, proliferation and differentiation of endogenous osteogenic stem/progenitor cells in the process of repairing bone fracture.

Ardışık<em&gt; In vivo</em&gt; Kırık Onarım sırasında Osteojenik Kök / Progenitör Hücrelerinin Görüntüleme

Bone turns over continuously and is highly regenerative following injury. Osteogenic stem/progenitor cells have long been hypothesized to exist, but in ...

Femoral Bone Marrow Aspiration in Live Mice

Serial sampling of the cellular composition of bone marrow (BM) is a routine procedure critical to clinical hematology. This protocol describes a detailed step-by-step technical procedure for an analogous procedure in live mice which allows for serial characterization of cells present in the BM. This procedure facilitates studies aimed to detect the presence of exogenously administered cells within the BM of mice as would be done in xenograft studies for instance. Moreover, this procedure allows for the retrieval and characterization of cells enriched in the BM such as hematopoietic stem and progenitor cells (HSPCs) without sacrifice of mice. Given that the cellular composition of peripheral blood is not necessarily reflective of proportions and types of stem and progenitor cells present in the marrow, procedures which provide access to this compartment without requiring termination of the mice are very helpful. The use of femoral bone marrow aspiration is illustrated here for cytological analysis of marrow cells, flow cytometric characterization of the hematopoietic stem/progenitor compartment, and culture of sorted HSPCs obtained by femoral BM aspiration compared with conventional marrow harvest.

This protocol describes a procedure for serial sampling of femoral bone marrow (BM) without requiring the sacrifice of mice. This procedure facilitates longitudinal studies of the BM composition of mice over time and provides serial access to cells within the BM for ex vivo and transplantation studies.

Canlı Farelerde Femoral Kemik İliği Aspirasyon

Serial sampling of the cellular composition of bone marrow (BM) is a routine procedure critical to clinical hematology. This protocol describes a detailed ...

Studying Pancreatic Cancer Stem Cell Characteristics for Developing New Treatment Strategies

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor initiation, metastasis and resistance to radio- and chemotherapy. Here we describe a specific methodology for culturing primary human pancreatic CSCs as tumor spheres in anchorage-independent conditions. Cells are grown in serum-free, non-adherent conditions in order to enrich for CSCs while their more differentiated progenies do not survive and proliferate during the initial phase following seeding of single cells. This assay can be used to estimate the percentage of CSCs present in a population of tumor cells. Both size (which can range from 35 to 250 micrometers) and number of tumor spheres formed represents CSC activity harbored in either bulk populations of cultured cancer cells or freshly harvested and digested tumors 1,2. Using this assay, we recently found that metformin selectively ablates pancreatic CSCs; a finding that was subsequently further corroborated by demonstrating diminished expression of pluripotency-associated genes/surface markers and reduced in vivo tumorigenicity of metformin-treated cells. As the final step for preclinical development we treated mice bearing established tumors with metformin and found significantly prolonged survival. Clinical studies testing the use of metformin in patients with PDAC are currently underway (e.g., NCT01210911, NCT01167738, and NCT01488552). Mechanistically, we found that metformin induces a fatal energy crisis in CSCs by enhancing reactive oxygen species (ROS) production and reducing mitochondrial transmembrane potential. In contrast, non-CSCs were not eliminated by metformin treatment, but rather underwent reversible cell cycle arrest. Therefore, our study serves as a successful example for the potential of in vitro sphere formation as a screening tool to identify compounds that potentially target CSCs, but this technique will require further in vitro and in vivo validation to eliminate false discoveries.

Pancreatic cancer stem cells (CSCs) can be expanded in vitro using the anchorage-independent sphere culture technique, which represents a powerful tool to study CSC biology and can serve as the first step to develop novel CSC-targeting therapies. Here the methodology for expanding, analyzing and targeting of pancreatic CSCs is provided.

Pankreas Kanseri Yeni Tedavi Stratejileri Geliştirme Hücre Özellikleri Kök incelenmesi

Pancreatic ductal adenocarcinoma (PDAC) contains a subset of exclusively tumorigenic cancer stem cells (CSCs) which have been shown to drive tumor ...

Isolation and Cellular Phenotyping of Mesenchymal Stem Cells Derived from Synovial Fluid and Bone Marrow of Minipigs

Mesenchymal stem cells (MSCs) have been established after isolation from various tissue sources, including bone marrow and synovial fluid. Recently, synovial-fluid-derived MSCs were reported to have multi-lineage differentiation potential and immunomodulatory features, which indicates that these cells can be used for tissue engineering and systemic treatments. This study presents a protocol for simple and non-invasive isolation of MSCs derived from the bone marrow and synovial fluid of minipigs to analyze cell surface markers for cell phenotyping and in vitro culturing. Using sexually mature six-month-old minipigs, bone marrow was extracted from the iliac crest bone using a bone marrow extractor, and the synovial fluid was aspirated from the femorotibial joint. Procedures for the collection of samples from both sources were non-invasive. The protocols for effective isolation of MSCs from harvested cell sources and for creating in vitro culture conditions to expand stable MSCs from minipigs and the application of systemic autologous treatments are provided. For cell phenotyping, the cell surface markers of both cells were analyzed using flow cytometry. In the results, the MSCs were isolated from the synovial fluid of the minipigs and showed that synovial-fluid-derived MSCs have a similar morphology and cell phenotype to bone-marrow-derived MSCs. Therefore, non-invasively obtained synovial fluid is a valuable source of MSCs.

A protocol establishing mesenchymal stem cells (MSCs) isolated from the synovial fluid and bone marrow of minipigs and non-invasively collected using syringe aspiration is presented. Cellular phenotyping was performed using flow cytometry after cell isolation and in vitro cultivation of bone marrow and synovial fluids derived from MSCs.

Mini-domuzlarda sinovyal sıvı ve Kemik İliği Elde Edilen Mezenkimal Kök Hücrelerin İzolasyonu ve Hücresel Fenotiplendirme

Mesenchymal stem cells (MSCs) have been established after isolation from various tissue sources, including bone marrow and synovial fluid. Recently, ...

Depletion of Mouse Cells from Human Tumor Xenografts Significantly Improves Downstream Analysis of Target Cells

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic patient tumors in different assays1. Human tumor xenografts represent the gold standard with respect to tumor biology, drug discovery, and metastasis research 2-4. Tumor xenografts can be derived from different types of material like tumor cell lines, tumor tissue from primary patient tumors4 or serially transplanted tumors. When propagated in vivo, xenografted tissue is infiltrated and vascularized by cells of mouse origin. Multiple factors such as the tumor entity, the origin of xenografted material, growth rate and region of transplantation influence the composition and the amount of mouse cells present in tumor xenografts. However, even when these factors are kept constant, the degree of mouse cell contamination is highly variable.
Contaminating mouse cells significantly impair downstream analyses of human tumor xenografts. As mouse fibroblasts show high plating efficacies and proliferation rates, they tend to overgrow cultures of human tumor cells, especially slowly proliferating subpopulations. Mouse cell derived DNA, mRNA, and protein components can bias downstream gene expression analysis, next-generation sequencing, as well as proteome analysis 5. To overcome these limitations, we have developed a fast and easy method to isolate untouched human tumor cells from xenografted tumor tissue. This procedure is based on the comprehensive depletion of cells of mouse origin by combining automated tissue dissociation with the benchtop tissue dissociator and magnetic cell sorting. Here, we demonstrate that human target cells can be can be obtained with purities higher than 96% within less than 20 min independent of the tumor type.

Human tumor xenografts are vascularized and infiltrated by cells of mouse origin during the growth phase in vivo. To circumvent the bias caused by these contaminating cells during downstream analysis, we developed a method allowing for comprehensive depletion of all mouse cells by magnetic cell sorting.

İnsan Tümör ksenogratflarının gelen Fare Hücrelerinin tükenmesi Anlamlı Hedef Hücre Alt Analizi geliştirir

The use of in vitro cell line models for cancer research has been a useful tool. However, it has been shown that these models fail to reliably mimic ...

Nerve Stimulator-guided Injection of Autologous Stem Cells Near the Equine Left Recurrent Laryngeal Nerve

Recurrent laryngeal neuropathy (RLN) commonly affects horses and is characterized by abnormal respiratory sounds and exercise intolerance. The recurrent laryngeal nerve shows lesions of demyelination. The benefit of applying stem cells to demyelinated nerves has been demonstrated in various animal models. The aim of the study was to test the feasibility and safety of a peri-neuronal injection of autologous muscle-derived mesenchymal stem cells to the left recurrent laryngeal nerve in healthy horses by using an electrical nerve stimulator.
Muscle-derived stems cell are obtained from five healthy Standardbred horses by sampling 20 mg of muscle tissue with a semi-automatic 14 G biopsy needle from the triceps muscle. Movements of the larynx are monitored via upper-airway video endoscopy. The left recurrent laryngeal nerve is approached with an insulated nerve block needle. Nerve stimulation is applied, starting at 2 mA, and the successful abduction of the left arytenoid is monitored. The stimulation intensity is reduced progressively. When a loss of the motor response is observed at 0.5 mA, 107 autologous muscle-derived stem cells are injected. Two examiners, who are blinded to the time point, score the laryngeal function of the horses prior to the treatment and at day 1, day 7, and day 28 after the injection of the cells. In a sixth horse, 1 mL of 2% lidocaine is injected to further confirm the correct positioning of the needle. This leads to a temporary paralysis of the left arytenoid cartilage.
This study proves that the recurrent laryngeal nerve can be approached with the help of an electrical nerve stimulator and that the electrical stimulation of the nerve is well tolerated by the horses. No modification of the laryngeal function was observed in any of the horses after the injection of the stem cells. Further studies should be conducted to describe the effects of a peri-neuronal injection of autologous muscle-derived mesenchymal stem cells to horses suffering from RLN.

Here, we present a protocol to inject autologous muscle-derived stem cells in the proximity to the recurrent laryngeal nerve with the help of an electrical nerve stimulator. This novel technique may become useful for the treatment of equine recurrent laryngeal neuropathy.

Otolog kök hücre yakınındaki at sol tekrarlayan gırtlak sinir sinir Stimülatörü güdümlü enjeksiyon

Recurrent laryngeal neuropathy (RLN) commonly affects horses and is characterized by abnormal respiratory sounds and exercise intolerance. The recurrent ...

Quantitative [18F]-Naf-PET-MRI Analysis for the Evaluation of Dynamic Bone Turnover in a Patient with Facetogenic Low Back Pain

Imaging techniques that reflect dynamic bone turnover may aid in characterizing a wide range of bone pathologies. Bone is a dynamic tissue undergoing continuous remodeling with the competing activity of osteoblasts, which produce the new bone matrix, and osteoclasts, whose function is to eliminate mineralized bone. [18F]-NaF is a positron emission tomography (PET) radiotracer that enables visualization of bone metabolism. [18F]-NaF is chemically absorbed into hydroxyapatite in the bone matrix by osteoblasts and can thus noninvasively detect osteoblastic activity, which is occult to conventional imaging techniques. Kinetic modeling of dynamic [18F]-NaF-PET data provides detailed quantitative measures of bone metabolism. Conventional semi-quantitative PET data, which utilizes standardized uptake values (SUVs) as a measure of radiotracer activity, is referred to as a static technique due to its snapshot of tracer uptake in time.&#160; Kinetic modeling, however, utilizes dynamic image data where tracer levels are continuously acquired providing tracer uptake temporal resolution. From the kinetic modeling of dynamic data, quantitative values like blood flow and metabolic rate (i.e., potentially informative metrics of tracer dynamics) can be extracted, all with respect to the measured activity in the image data. When combined with dual modality PET-MRI, region-specific kinetic data can be correlated with anatomically registered high-resolution structural and pathologic information afforded by MRI. The goal of this methodological manuscript is to outline detailed techniques for performing and analyzing dynamic [18F]-NaF-PET-MRI data. The lumbar facet joint is a common site of degenerative arthritis disease and a common cause for axial low back pain.&#160; Recent studies suggest [18F]-NaF-PET may serve as a useful biomarker of painful facetogenic disease.&#160; The human lumbar facet joint will, therefore, be used as a prototypical region of interest for dynamic [18F]-NaF-PET-MRI analysis in this manuscript.

Quantitative [18F]-Naf-PET-MRI Analysis for the Evaluation of Dynamic Bone Turnover in a Patient with Facetogenic Low Back Pain

Imaging techniques that reflect dynamic bone turnover may aid in characterizing a wide range of bone pathologies. We present detailed methodologies for performing and analyzing dynamic [18F]-NaF-PET-MRI data in a patient with facetogenic low back pain using the lumbar facet joints as a prototypical region of interest.

Nicel [18F]-Facetogenic alçak sırt ağrısı olan bir hastada dinamik kemik cirosunun değerlendirilmesi Için NAF-Pet-MRI Analizi

Imaging techniques that reflect dynamic bone turnover may aid in characterizing a wide range of bone pathologies. Bone is a dynamic tissue undergoing ...

High-throughput Nitrobenzoxadiazole-labeled Cholesterol Efflux Assay

Atherosclerosis leads to cardiovascular disease (CVD). It is still unclear whether cholesterol-HDL (cHDL) concentration plays a causal role in atherosclerosis development. However, an important factor in early stages of atheroma plaque formation is cholesterol efflux capacity to HDL (the ability of HDL particles to accept cholesterol from macrophages) in order to avoid foam cell formation. This is a key step in avoiding the accumulation of cholesterol in the endothelium and a part of reverse cholesterol transport (RCT) to eliminate cholesterol through the liver. Cholesterol efflux capacity to serum or plasma in macrophage cell models is a promising tool that can be used as biomarker for atherosclerosis. Traditionally, [3H]-cholesterol has been used in cholesterol efflux assays. In this study, we aim to develop a safer and faster strategy using fluorescent labelled-cholesterol (NBD-cholesterol) in a cellular assay to trace the cholesterol uptake and efflux process in THP-1-derived macrophages. Finally, we optimize and standardize the NBD-cholesterol efflux method and develop a high-throughput analysis using 96-well plates.

Measurement of in vitro cholesterol efflux capacity to serum or plasma in macrophage cell models is a promising tool as a biomarker for atherosclerosis. In the present study, we optimize and standardize a fluorescent NBD-cholesterol efflux method and develop a high-throughput analysis using 96-well plates.