Biz kan bağış ve personel Kanada kan Hizmetleri Ağ merkezinde uygulanan geliştirme için toplama ve bu çalışmada kullanılan trombosit birim üretim için teşekkür ederim. Biz Kanada Vakfı yenilik ve Michael Smith Vakfı için sağlık araştırma için altyapı UBC merkezinde kan araştırma için fon için kabul edersiniz. Yayın için finansman LightIntegra Technology Inc., ThromboLUX üreticisi tarafından sağlanan.

Aşağıdaki iletişim kuralı tüm Kanada kan Hizmetleri (CBS) yönergelere uygun olarak yapılmıştır. Gönüllü onların bağış olabilir izin verdi bu çalışmalar taşımak için kullanılır. Trombosit konsantreleri CBS standart işletim yordamlar göre hazırlanmıştır. Tüm performans test burada açıklanan merkezinde kan Araştırma British Columbia Üniversitesi, Vancouver, Kanada için kurumsal araştırma Etik Kurulu onayı ile gerçekleştirilmiştir.
1. kalite kontrol
<ol><li>Gün DLS sisteminin düzgün çalıştığını doğrulamak için test başına en az bir kez bir kalite kontrol denetimi yapın. Üreticinin yönergelerine kullanmak için sağlanan denetim boncuk (50 nm RADIUS) ölçmek.</li>
	<li>Denetim şişe soğuk hava deposu almak ve oda sıcaklığına kadar ısıtmak 15 dk bekleyin. Boncuk kullanmadan önce oda sıcaklığına equilibrate gerekir.</li>
	<li>DLS sistem 15dk lazer dönemini oluşturan sıcak ilk örnek test için hazır olduğunu tamamlandı bu yüzden örnek hazırlama önce açın.</li>
	<li>Konsol başladıktan sonra giriş yapın ve denetimi örneğini ölçmek için sistem Test seçeneği seçmek için dokunmatik ekranda yönergeleri izleyin.</li>
	<li>Girdap karışımı 10 şişe s temsil edici bir örnek sağlamak için.</li>
	<li>Bir kılcal bir 100 µL sabit birim pipet, pipet ucu ve kılcal test kiti kullanarak denetim boncuk ile doldurun.</li>
	<li>Test tamamlandığında DLS sisteminin ekranındaki yönergeleri izleyin. Not: Denetim boncuk test sonuçlarını otomatik olarak denetim boncuk barkod etiket ve bir geçiş depolanan bilgilerden karşılaştırılır veya hata bildirimi hem de örnek bilgiler test sonunda DLS sistem ekranda gösterilir.</li>
</ol>2. bir trombosit konsantre bir örnek alma
Not: Aşağıdaki adımları işlemi trombosit transfüzyonu kılcal rutin trombosit stok yönetimi için test DLS içine üzerinden non-invaziv örnekleme için açıklar. Genel şekil 1' de gösterilen. Gerekli aksesuarları: tüp mühürleyen, manuel tüp striptizci, makas ve sıçrama kalkan.
<ol><li>Trombosit konsantre denenmemiş stoktan kaldırırken.</li>
	<li>Trombosit ürünü örnek bir kullanılmayan örnekleme kese ya da elde etmek (2.3 adıma) veya bir boru kesimi (2.4 boş bırakılmışsa tutamaçlarından veya adım 2.5 değilse boş). Belgili tanımlık kese kesmek için tüp ya da boru kesimi kullanın bir tüp mühürleyen. Tüp mühürleyen çalışması için üreticinin yönergelerini izleyin. Kısaca, iki ısıtmalı jaws arasında kesin bir konum kapalı gibi boru kelepçe. Elde taşınır bir aygıtta birlikte erimiş boru basın ve serin yüksek basınç altında (süresi yeşil ışık tarafından belirtilir) kolu basarken bir kalıcı, sızıntı geçirmez mühür kaynaklanan.</li>
	<li>
Bir kese örnekleme
	<ol>
<li>Trombosit çanta içeriğini de 5 için nazik yatay hareketi tarafından mix (uçtan uca beş kez devrilme) s.</li>
		<li>Kelepçe kılıfı için açın. Kese tahliye edildi ve kendisi tarafından doldurur. Sadece 100 µL örnek DLS test etmek için gerekli olacak gibi kese tamamen doldurmak gerekli değildir.</li>
		<li>Belgili tanımlık kese ısı sızdırmazlık bağlayan boru ile bir tüp mühürleyen tarafından çantasından çıkarın. 3 adımla devam edin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Boş boru örnekleme
	<ol>
<li>Trombosit çanta doğrulayın tüp boş depolanıp boru blok hala yerinde. Trombosit konsantre tüp içinde önemli miktarda değil doğrulamak için tüp kontrol edin. Tüp boş ise 2.5 adımla devam edin.</li>
		<li>Tüp striptizci olarak boru boru blok mümkün olduğunca yakın üzerinde boru Silindirler arasında sıkmak için kolları sıkıştırarak kapatın.</li>
		<li>Çantayı dikey asmak ve striptizci kolları sıkıştırmak tutun.</li>
		<li>Striptizci tutmak kapalı iken, boru blok serbest bırakın.</li>
		<li>Yavaş yavaş striptizci bırakmak için yavaş yavaş striptizci doldurmak boru boş boru aşağı çekin. Striptizci bölümüne tam şişirilmiş kadar veya striptizci içinde 1 inç hortumunun sonuna kadar devam edin.</li>
		<li>Striptizci ile durma noktasına ulaşıldığında, kullanım tüp mühürleyen ısı mühür tüp striptizci yukarıda 1 inç.</li>
		<li>Manuel tüp striptizci kolları serbest bırakın.</li>
		<li>Isıl yapı˛ma tekrar 1-2 santim üzerinden test segment oluşturmak için önceki mühür.</li>
		<li>Test kesimi trombosit biriminden kesti. Bu segment test DLS için kullanılacaktır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Boş değil boru üzerinden örnekleme
	<ol>
<li>Çantayı dikey olarak asmak ve boru blok yer eğer serbest bırakmak.</li>
		<li>Boru önemli herhangi bir katı kümeleri olup olmadığını belirlemek için kontrol edin. Katı kümeleri varsa, torbaya mahrum edemem öyle ki onları kapatın.</li>
		<li>Tüp striptizci olarak boru boru mümkün olduğunca kapalı sonuna yakın Tarih kapatın.</li>
		<li>Boru arasında silindirler ve sıkma gücü korurken sıkmak için kolları sıkıştırarak torbaya tüp içeriğini şerit doğru çanta boru boyunca tüp striptizci taşıyın.</li>
		<li>Trombosit çanta asılı kanca kaldır ve karışımı yavaşça çantayı 5 s striptizci tutarken beş kez uçtan uca devrilme tarafından kapalı.</li>
		<li>Çantayı dikey kapalı striptizci tutarken asmak.</li>
		<li>Yavaş yavaş yavaş yavaş striptizci doldurmak tüp için izin striptizci boş boru aşağı çekin. Striptizci bölümüne tam şişirilmiş kadar veya striptizci içinde 1 inç hortumunun sonuna kadar devam edin.</li>
		<li>Striptizci ile durma noktasına ulaşıldığında, kullanım tüp mühürleyen ısı mühür tüp striptizci yukarıda 1 inç.</li>
		<li>Yayın striptizci.</li>
		<li>Isıl yapı˛ma tekrar 1-2 santim üzerinden test segment oluşturmak için önceki mühür.</li>
		<li>Kesilmiş ve tüp son kısmını atın.</li>
		<li>Test kesimi trombosit biriminden kesti. Bu segment test DLS için kullanılacaktır.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. örnek kılcal test DLS dolum
<ol><li>Bir sıçrama kalkan ve temiz, Kuru makas kullanarak bir boru veya segment test kese ucunu kesti. Not: test DLS için kullanılan kılcal hemen dolu olması gerekir.</li>
	<li>Kılcal (birleştirilmiş 100 µL sabit birim pipet, pipet ucu ve kılcal damar) örnek doğrudan açılan kese veya boru kesimi kılcal damar çizmek için örnekleme aracını kullanarak doldurun.</li>
	<li>Dolu kılcal dibine hafifçe dolu kılcal damar kılcal tüp dolgu macunu hafif bir bükülme ve tepsiyi karşı bazı baskı uygularken iterek kapatın.</li>
	<li>Sabit birim pipet ve kılcal kalır sağlanması kılcal ucundan 100 µL sıkıca kılcal tüp dolgu macunu gömülü çıkarın.</li>
	<li>Kılcal damar kılcal tüp dolgu macunu tepsiden alın, bir temizlik iÖin izopropil alkol yastık ile silin ve hiçbir hava kabarcıkları yavaşça kılcal alt flicking tarafından tuzak vardır emin olun.</li>
	<li>Kılcal DLS sistemi içine yerleştirin.</li>
</ol>4. DLS sınadıktan
<ol><li>Trombosit örneği microparticle içeriği ölçmek için yeni DLS testi başlatmak için MP test seçeneği belirleyin.</li>
	<li>Örnek bilgileri (bağış kimlik numarası (ISBT), koleksiyon/üretim bitiş tarihini ve ürün kodu) girin barkod tarayıcı kullanarak veya el ile.</li>
	<li>Hiçbir ürün kodu varsa hangi DLS sistem sıvı orta bilgi almak, uygun sıvı orta el ile seçin (çoğu trombosit konsantreleri seçin plazma ama trombosit katkı çözüm (PAS) içeren örnekler için girin ««Artık plazma yüzdesi). Not: Nominal %65 PAS yüzdesi olarak küçük bir sapma en az hesaplanan MP RADIUS ama değil % MP etkiler (DLS sistem tarafından otomatik olarak hesaplanır) viskozite içinde küçük bir hata neden olur.</li>
	<li>Kılcal talimat zaman DLS sistem yerleştirin ve test başlatın.</li>
	<li>Test tamamlandığında, örnek kapiller tutucu ve sarf malzemeleri tesis yönergelere uygun şekilde elden çıkarın. Örnek kapiller tutucu ve sarf malzemeleri tesis yönergelere uygun şekilde elden çıkarın.</li>
	<li>Karşılık gelen sonuç, örneğin için turuncu renk ile trombosit çanta tag sigara-harekete geçirmek (homojen) % MP eşit veya % 15 ve pink için aşağıda üzerinden % %15 MP (heterojen) harekete geçirmek ile.</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56893/56893fig1.jpg"> Resim 1 : Yöntemi genel bakış. Rutin trombosit Stok Yönetimi'nde hastane kan Bankası için gerçekleştirilecek adımları genel bakış: bir örnek bir Trombosit elde etme konsantre ol, kılcal DLS ölçüm için içine örnek yükleme DLS performans test microparticles tanımlamak için ve trombosit aktive tanımlamak için bildirilen microparticle içerik kullanarak. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56893/56893fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>

EMS LightIntegra teknoloji A.ş., microparticle ve trombosit kalite test için ThromboLUX sistemi geliştirmek için bir tıbbi cihaz şirketin kurucusudur. Diğer yazarlar, LightIntegra teknoloji çalışanlardır. Üretim ve bu makale ücretsiz erişim LightIntegra teknoloji A.ş. tarafından desteklenen

Bu iletişim kuralı trombosit konsantreleri gibi biyolojik örnekleri bulundu yüksek parçacık konsantrasyonu için en iyi duruma getirilmiş microparticle tarama için bir dinamik ışık saçılma yöntemi açıklar. DLS yöntemi doğru boyutunu ölçmek için doğal olarak standartlaştırılmıştır. Microparticles göreli yoğunlaşmasını-ebilmek var olmak değiştirmek mutlak bir konsantrasyon trombosit konsantrasyon bilinen ve trombosit pik alanı başvuru tepe19kullanılır. Trombosit konsantrasyonları genelde Hematoloji Analizörleri ile elde edilen veya akış cytometers DLS eşlik eden teknolojiler bu yöntemler kabul edilebilir.
DLS sistemin işlevselliğini kontrol boncuk düzenli olarak çalıştırarak sigortalıdır. Distile su arka plan gürültü çok az olduğunu doğrulamak için ölçülebilir. Piyasada bulunan trombosit standartları MP-negatif denetimleri ve sonra 125 nm RADIUS boncuklar, ek MP-pozitif denetimleri olarak analiz edilebilir. Faiz MP biyolojik aralığı konsantrasyonları içinde pratik ve kan Bankası rutin bir parçası olarak gerçekleştirmek hızlı işlemlerdir.
Akış Sitometresi aksine parçacık saçılım yoğunluklarda ama oldukça onların Albert hareket hızını karşılaştırılmasına bu yöntem dayalı değildir. Bu nedenle, exosomes da küçük boyutlarına rağmen tespit edilebilir ve MP ayrı olarak raporlanır.
Bir tarama aracı olarak tasarlanmış, bu yöntemi sınırlamaları microparticles farklı türleri arasında ayırt etmek için onun yetersizlik ilgilidir. Potansiyel Oda için ilerleme ek yalıtım adımlar kullanılır olup; örnekleri önce ve sonra manyetik boncuk yakalama microparticles antikor aracılığıyla belirli kaldırılması birleştiğinde test olabilir. Buna ek olarak, algılanan tüm microparticles hiperlipidemi47,48 ve küçük bakteri veya virüs6 oluşan silomikron da microparticle aralığında rapor edilecektir çünkü türetilmiş hücre vardır kabul edemiyor. Ancak, diğer güvenlik önlemlerinin çok numunelerde veya hastane kan Bankası stoğa girmesinin kirlenmiş trombosit önlemek için kan akımı içinde bulunmaktadır.
Seçimi örnek antikoagülan, trombosit aktivasyon ve bu nedenle MP içerik49ölçüde etkiler. Farklı ürünler karşılaştırmalar için bu faktör dikkate alınması gerekiyor. Ayrıca, PAS gibi MP ücretsiz süspansiyon medya ile plazma değişimine MP içerik ve heterojenlik belirlemek için eşik sınırlıdır-yaklaşık üçte biri orijinal MP içerik içinde konsantre kalan plazmada yaptı eğer sadece bir Buna göre MP içerik eşiği düşük trombosit aktivasyon olduğu gibi % 100 plazma aynı düzeyde belirtir. Yüzde MP trombosit göre MP içeriğidir. Bu daha önce ortalama % MP hala %9,519olduğu kadar PAS ürün ortalama trombosit sayısı düşük olduğunu bildirildi. ABD'de lisanslı PAS trombosit için % MP eşik şu anda % 10'una ayarlanır.
MP birincil kaynak trombosit konsantreleri verici olmakla birlikte, trombosit için stres neden süreçleri MP düzeyine bağlı olarak stres trombosit duyarlılık artacak-trombosit zaten çok etkinleştirdiyseniz, stres gibi küçük raf ömrü, patojen inactivation, yıkama, genişletilmiş ışınlama veya uzun mesafe taşımacılığı MP içerik önemli artışa neden olabilir. Bu gerilim hiçbiri önemli ölçüde etkileyecek homojen, harekete geçirmek trombosit19göstermiştir. Ayrıca, dikkat için örnek kompozisyon kılcal içinde değişimler için potansiyel para değilse hemen hazırlık (Adım 3 Bu protokol tamamlanması) sonra test.
Bu protokol parçacıklar trombosit transfüzyonları ve trombosit aktivasyon biyolojik microparticles kullanılacak mevcut kompozisyon belirlenmesi üzerinde odaklanmıştır. Trombosit transfüzyonları ya sigara-harekete geçirmek (turuncu) öğesini ya da harekete geçirmek (pembe) dayalı bir % 15 microparticle yüzde eşiğinde. Eşik % 15 MP trombosit % 100 plazma için ampirik olarak ortalama 66inci yüzdelik birden çok site olarak belirlendi.
Non-immün trombosit refractoriness engelleyerek hasta bakım ve sürücü maliyet verimliliği artırmak için trombosit envanter yönetimi rutin microparticle DLS ile eleme temel amacı budur. Trombosit çanta ile taranması için DLS sisteminin uygulanması sigara aktive trombosit hasta nüfus en riski trombosit refractoriness geliştirmek için doğrudan kullanıcıya sağlayacaktır.

Microparticles ilgi çoğunlukla hücre hücre için iletişim ve biyolojik süreçler onların katılımı etrafında dönüyordu. 1 , 2 , 3 son zamanlarda microparticles da potansiyel erken tanı imleyicileri otoimmün ve kalp-damar hastalıklarının ilgi. 4 , 5 Microparticles, olarak da bilinen ekstraselüler veziküller veya exosomes, yaygın olarak Akış Sitometresi tarafından soruşturma. Ne yazık ki, geleneksel Akış Sitometresi protokolleri standartlaştırmak çabalarına rağmen hiçbir fikir birliği yoktur kullanmak için en uygun protokol. 6 , 7 , 8 , 9 , 10
Her ne kadar geleneksel Akış Sitometresi belirli MP altgrupları karakterize olabilir, birkaç vardır11 sınırlamalar bildirdi. 11 , 12 , 13 , 14 bu kısıtlamalar bazıları daha yüksek güçte lazer ve dedektörleri bir sözde kullanarak ele alınmıştır "küçük parçacıklar seçeneği",15,16 gibi algılama, 15 ° - 25 ° ileri dağılım açı ve kılıf basınç modifiye . 17 , 18 yine de, bu sofistike yöntemlerle kombine edilebilir bir hızlı ve kullanımı kolay tarama yöntemi hala microparticles erken tanı işaretleyici olarak kullanmak için gereklidir. Microparticles düzeyleri normal kan bağış19 yaklaşık üçte biri algılanabilir ve subklinik koşulları gösterebilir. Sonuç olarak, bağışlanan kan ürünleri seviyelerinde yüksek microparticle savunmasız alıcıları ile uyumlu olmayabilir. 20
Trombosit transfüzyonları sağlanırken, non-immün refractoriness - neyin bir hastanın vücut ardışık nakli reddeder ve trombosit dolaşmaya önemli bir bölümünü izin vermez bir koşul riski vardır. 21 , 22 Non-immün refractoriness boşa nakli neden olabilir, hastalar ve genişletilmiş hastane için sağlık komplikasyonları kalır. 23 microparticles sayısının fazlalığı içeren trombosit transfüzyonları savunmasız Hematoloji-Onkoloji hastalarında bağışıklık sigara refractoriness geliştirilmesi için bir faktör olabilir. 20 microparticles böylece savunmasız hastalar için riski azaltmak için tarama tarafından trombosit transfüzyonları bileşimi göre trombosit stoku yönetmek mümkündür. Ancak, çoğu microparticle testleri trombosit5,12 microparticles yalıtımı veya aksi takdirde çok emek yoğun24,25 ve bu nedenle düzenli olarak hastanede uygulanabilir değil Kan Bankası.
Açıklanan teknik burada dinamik ışık saçılma (DL) - foton korelasyon spektroskopisi veya yarı elastik ışık saçılma olarak da bilinen kullanır. On yıl için dinamik ışık saçılma yoğun ilaç endüstrisinde liposomal ilaç formülasyonları veya emülsiyonlar karakterize parçacık boyut alt mikron aralığında nerede kullanılmaya başlanmıştır. 26 , 27 ancak, bu uygulamalar için geliştirilmiş araçlar ekran kan ürünleri için optimize edilmiş değildir. Yeni bir DLS sistemi teknik sınırlamalar üstesinden ve dinamik ışık saçılma trombosit transfüzyonları ile taranması için yararlı hale getirmek için geliştirilmiştir. 28
Dinamik ışık saçılma ölçüleri askıya alınan parçacıklar lazer ışıklı aydınlatıcı ve süspansiyon hareket parçacıklar bir sonucudur dağınık ışık yoğunluğunu zaman varyasyon analizi tarafından gerçekleştirilir. Ayrıca, Partikül hızı ve boyutu - arasında ters ilişki bu yöntemi kullanan küçük parçacıklar hızlı hareket ve büyük parçacıklar yavaş - boyut dağılımları ve örnek bileşenleri göreli konsantrasyonları üzerinde bilgi sağlamak için hareket. DLS, ortalama microparticle kullanarak içerik ve ortalama RADIUS microparticle bileşeninin sayısal. Microparticles kan ürün içeriği % MP için parçacık yarıçapı 50-550 nm üzerinden ölçülen histogram alanına bağlı olarak verilir. Süre parçacıkları ile yarıçapı 50 aşağıda nm DLS tarafından algılanan ve rapor DLS sistem tarafından onlar % MP dahil değildir. Trombosit microparticles izole yerine, trombosit transfüzyonları heterojen microparticles ve trombosit örnek bir göreli içeriğine göre belirlenir. Aslında, trombosit ve microparticle doruklarına oranını trombosit sayısı bilindiğinde mutlak MP toplama hesaplamak için kullanılabilir. 19
DLS sistemi insan kan veya kan ürünleri türetilmiş örnekler bulunan microparticles hakkında Nitel ve nicel bilgi sağlık uzmanları sağlar. Akış Sitometresi, elektron mikroskobu,29 nanopartikül analiz30 veya31 algılama ayarlanabilir direnç darbe izleme gibi alternatif teknikleri ana avantajı açıklanan DLS teknik örnek hazırlıktır: trombosit konsantreleri aliquots, trombosit, Numune dilüsyonu veya diğer modifikasyon MP ayırmaya gerek kalmadan doğrudan ölçülebilir. 9 , 17 Ayrıca, DLS bir mutlak boyutlandırma yöntemidir ve Kalibrasyon boncuklar uygun Kırılma indisi ile eksikliği muzdarip değil. 14 , 32
Trombosit aktivasyon ve MP içerik arasında bir ilişki daha önce mikroskobu33,20 tarafından gösterilen ve MP içerik patolojik koşullar15,34, artış değişkenden 35 , 36 ve trombosit etkinleştirmek için bilinen vitro koşullarda. 19 , 37 , 38 ancak, daha ileri çalışmalar tamamen DLS ölçülen microparticle içerik ve trombosit aktivasyon arasındaki ilişkiyi anlamak için ihtiyaç vardır. Bizim şu anki bilgiye dayalı iken gelen sigara aktive Hematoloji-Onkoloji hastaları yarar aktif olarak hastaların39, kanama, tedavi için kullanılan aktif trombosit sayısının fazlalığı microparticles, onlar en iyi içeren trombosit olmayan veya düşük seviyelerde microparticles20. Vitro yanıt donör trombosit hızını önemli ölçüde kurtarma ve istikrarlı, çoğunlukla kanama Hematoloji-onkoloji hastalarına40 tek nakli bu trombosit yaşama etkisi olmadı ki son zamanlarda bildirilmiştir . Bu bulgu, yüksek MP içerik tarafından tanımlanan trombosit aktivasyon da hastalara profilaktik tedavi hiçbir önemli rol oynayan sonucuna. Ancak, hastaların dar yelpazesi nedeniyle, bu çalışma (çalışma hariç) febril karmaşık hastalar için donör faktörler etkisi ele vermedi, kararlı değil ve birçok birden fazla trombosit transfüzyonu alırsınız. -Hangi refractoriness azaltmak için söz sahibidir - hasta bu durumda karmaşıklığı nasıl giderilebilir soru cevapsız kalır.
Microparticles iltihabı41,42,43,44 ve trombosit aktivasyon45 erken işaretleri ve bu nedenle pek çok normal bağış algılanır. 19 sonuç olarak, aktif trombosit ve microparticles trombosit bağışlar mevcuttur. Ateş, yani, bir dolu harekete geçirmek doğuştan gelen bağışıklık sistemi, hastalarda ek zorluk aktif trombosit transfüzyonu, tahammül edemez broşürüne uygun olur. Ancak, çalışmalar bu varsayımı kanıtlamak için ihtiyaç vardır. Microparticle tarama trombosit transfüzyonları içeriği hakkında geçerli belirsizlik hafifletmek ve hasta tedavi karmaşıklığını azaltın.
Öncelikle donör nüfus ve taşıma, ışınlama, patojen inactivation ve trombosit aktivasyonu artırabilir diğer işlemleri üzerinde çok az bir ölçüde hastane kan Bankası içinde sigara-harekete geçirmek için harekete geçirmek trombosit oranı bağlıdır yoğunlaşmaktadır. 19 Amerika Birleşik Devletleri'nde büyük hastane kan Bankası verilerinden trombosit stok ortalama bileşimi aktif % 49 ve % 51 sigara aktive olduğunu gösterdi (aktif trombosit için aralığı: % 38-62, kişisel iletişim). Kan ürün sağlayıcılar veya hastane kan bankaları üretmek veya almak ve onların stok yönetmek istediğiniz kaç harekete geçirmek ve sigara aktive trombosit konsantreleri trombosit aktivasyon microparticle tarafından belirtildiği gibi temel bilmek istiyorsanız içerik, bu iletişim kuralı onlar için uygun olabilir.
Hastane kan Bankası sigara-harekete geçirmek, homojen trombosit hastalık koruyucusu için kullanın ve aktif, türdeş olmayan trombosit terapötik kullanım için yolu tarif etmek mümkün olacak trombosit kompozisyon dayalı. Trombosit tarama hastaneler hasta bakımı geliştirir ve maliyet azalır kullanılabilen stok kullanımını en üst düzeye çıkarmak izin verir. Bu iletişim kuralının temel kullanım ve kan ürünleri manipülasyon ile tanışık laboratuar personeli içindir.
Burada sunulan bir tarama için rutin olarak hastane kan Bankası stoku yönetmek için uygulanabilir trombosit transfüzyonları microparticles microparticle içeriğine göre ürün seçmek arzu nerede yöntemidir. Bu iletişim kuralının uygulanması ve değerlendirilmesi DLS bağışlanan trombosit tarama için anahat hedefidir. Açıklanan Protokolü örnekleri, non-invaziv erişim kan Bankası iş akışı ve performans özellikleri içine test Tümleştirme ortak sorular adresleri.

<table><tbody><tr><td>ThromboLUX-M</td><td>LightIntegra Technology Inc.&amp;nbsp;</td><td>LPN120</td><td>DLS System</td></tr><tr><td>ThromboSight Software</td><td>LightIntegra Technology Inc.&amp;nbsp;</td><td>LPN124</td><td>DLS analysis software</td></tr><tr><td>Capillaries</td><td>LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor Optinova MLE)</td><td>LPN065</td><td>Custom extruded non-activating, non-birefringent plastic tube, inspected and irradiated</td></tr><tr><td>MiniPet&amp;nbsp;</td><td>LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor TriContinent Scientific)</td><td>LPN082</td><td>100 &amp;micro;L fixed volume pipette for sampling&amp;nbsp;&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>MicroFlex 1-200 &amp;micro;L Pipette tips</td><td>LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor ESBE Scientific)</td><td>LPN080</td><td>Pipette tips for sampling</td></tr><tr><td>Critoseal&amp;nbsp;</td><td>LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor Fisher Scientific)</td><td>LPN075</td><td>Capillary Tube Sealant</td></tr><tr><td>Dukal Alcohol Pad or equivalent</td><td>LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor Dukal Corp.)</td><td>LPN085</td><td>Isopropyl pad (saturated with 70% isopropyl alcohol)</td></tr><tr><td>Control beads, 50 nm radius</td><td>LightIntegra Technology Inc. (included in test kit, vendor PolySciences Inc.)</td><td>LPN128</td><td>Control beads</td></tr><tr><td>Microbead NIST Traceable Particle Size Standard, 3 &amp;micro;m</td><td>PolySciences Inc.</td><td>64060</td><td>Standard microbeads: 1.5 &amp;micro;m radius Polystyrene beads; range 1.43-1.58 &amp;micro;m; 1% solids suspensions in de-ionized water</td></tr><tr><td>Nanobead NIST Traceable Particle Size Standard, 250 nm</td><td>PolySciences Inc.</td><td>64014-15</td><td>Standard nanobeads: 125 nm radius Polystyrene beads; range 120 - 130 nm; 1% solids suspensions in de-ionized water</td></tr><tr><td>Genesis BPS RapidSeal II or equivalent</td><td>Genesis BPS</td><td>428-SE640</td><td>Tube sealer</td></tr><tr><td>Fresenius Kabi Tube Stripper or equivalent</td><td>Fresenius Kabi</td><td>6R4452</td><td>Manual tube stripper</td></tr><tr><td>Biohazard Shield - Cell Counter or equivalent</td><td>CardinalHealth</td><td>S1389-75</td><td>Splash Shield</td></tr><tr><td>Corning LSE Vortex Mixer or equivalent</td><td>Corning Incorporated</td><td>6775</td><td>Vortex mixer</td></tr><tr><td>FACSCanto II Flow cytometer&amp;nbsp; with FACSDiva software version 6.1.3 or equivalent</td><td>BD Biosciences</td><td>338960</td><td>Flow cytometer</td></tr></tbody></table>

routine screening method for microparticles in platelet transfusions

Microparticle içeriği trombosit konsantreleri eleme üzerinde trombosit stok yönetimi, hastane kan bankalar için yeni bir kalite iyileştirme girişimidir. Onlar stresli olduğunda hücreleri microparticles (MP) parçası. Kan ve kan bileşenleri hücrelerden, aktif trombosit olmak üzere çeşitli hücresel parçaları içeriyor olabilir. Doğuştan gelen bağışıklık hücreleri ve büyük oyuncular rollerini koagülasyon ve hemostaz gerçekleştirirken, trombosit şekil değiştirme ve microparticles oluşturmak. Dinamik ışık saçılma (DL) ile-microparticle algılama, dayalı sigara-harekete geçirmek (düşük microparticle) trombosit transfüzyonları içinde harekete geçirmek (yüksek microparticle) ayırt ve bu kıt kan ürün kullanımını optimize etmek mümkündür. Önceki araştırma sigara aktive trombosit Hematoloji-Onkoloji hastalarda profilaktik kullanım için ateşe dayanıklı olma riskini azaltmak ve hasta bakımı geliştirmek olduğunu göstermektedir. Bu tarama yöntemi rutin olarak ayırt etmek için harekete geçirmek trombosit aktive hedefidir. Burada açıklanan yöntemi rutin trombosit Stok Yönetimi'nde hastane kan Bankası için gerçekleştirilecek adımları özetliyor: kılcal DLS ölçüm için içine örnek yükleme bir trombosit transfüzyonu dan bir örnek alma DLS gerçekleştirmek sınamak için microparticles ve aktif trombosit tanımlamak için bildirilen microparticle içeriği kullanarak tanımlar.

Ortalama hazırlama süresi DLS sistemini kullanarak işlem eleme trombosit şekil 1' de özetlenmiştir. Trombosit DLS sistemiyle kan tedarikçiden alındığı anda test edilmektedir. Tablo 1 ' deki ayrıntılı olarak eğitimli kullanıcıları için ortalama hazırlama süresi 2 dk. 23 s temizlik sırasında ve sonrası test çalışma saatlerinin 14 s ve 46 s, anılan sıraya göre. Toplamda, ortalama kullanıcı alır 3 dk ve 23 s test başına yakışıklı-üstünde zaman.
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td>Etkinlik</td>
			<td>Etkin Zamanı</td>
			<td>Yürüyüş koyma test zaman</td>
			<td>TOPLAM</td>
		</tr>
<tr>
<td>DLS sistemi hazırlamak</td>
			<td>14 s</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>Örnekleme aracı bir araya</td>
			<td>28 s</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>Segment elde</td>
			<td>52 s</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>Kılcal doldurun ve sınamayı Başlat</td>
			<td>49 s</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td>5 dk</td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>Temizlik</td>
			<td>14 s</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>Etiketi ve stok trombosit çanta</td>
			<td>46 s</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>Toplam süre örnek gerekli</td>
			<td>3 dk. 23 s</td>
			<td>5 dk</td>
			<td>8 dk. 23 s</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 1: etkin test zaman krizi. Testin kendisiyle bir ortalama süresi 5 dk yürüme uzak testidir. Ortalama kullanıcı DLS sistem bir test için hazırlamak, elde etmek ve bu protokol sonrası bir örnek test etmek ve trombosit çanta tag için 3 dk. 23 s alır.
Hassas DLS sistem duyarlığını üç microparticle düzeyde, 0-7 değerlendirildi %, % 12-25 ve 28-%75. Klinik % MP 3-%75 aralığıdır. İki işleç paralel iki DLS sistemlerde 16 çalışma gün için düşük, orta ve yüksek kontrol örnekleri test. Örnekleri yinelenen ama rasgele sırayla test etme her gün test edildi.
Tablo 2 yüzde Microparticles (% MP) DLS ölçülerini trombosit göre aygıt içinde duyarlığını özetler.
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td colspan="3">Microparticle içeriği</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>Düşük</td>
			<td>Orta</td>
			<td>Yüksek</td>
		</tr>
<tr>
<td>Yani % MP (%)</td>
			<td>4.4</td>
			<td>19,5</td>
			<td>53,8</td>
		</tr>
<tr>
<td>Standart sapma (%)</td>
			<td>1.8</td>
			<td>2.6</td>
			<td>5.8</td>
		</tr>
<tr>
<td>CV (%)</td>
			<td>40.4</td>
			<td>13,2</td>
			<td>10,6</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 2: yüzde Microparticles (% MP) aygıt içinde duyarlığını. Çok düşük microparticle içerik küçük trombosit % için katkıda bulunabilir, değişkenlik düşük microparticle içerik örnekleri için sonuçlanan MP arttı.
Tablo 3 ortalama microparticle RADIUS 50-550 nm arasında DLS ölçülerini aygıt içinde duyarlığını göstermektedir.
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td colspan="3">Microparticle içeriği</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>Düşük</td>
			<td>Orta</td>
			<td>Yüksek</td>
		</tr>
<tr>
<td>RADIUS (nm) demek</td>
			<td>331</td>
			<td>161</td>
			<td>188</td>
		</tr>
<tr>
<td>Standart sapma (mm)</td>
			<td>133</td>
			<td>41</td>
			<td>25</td>
		</tr>
<tr>
<td>CV (%)</td>
			<td>40.1</td>
			<td>25,2</td>
			<td>13,5</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 3: microparticle RADIUS duyarlığını aygıt içinde. Çok düşük microparticle yüzde Microparticles (% MP) içerik küçük trombosit katkıda bulunabilir sonuçlanan düşük microparticle içerik örnekleri için değişkenlik artar.
Tablo 4 yüzde Microparticles (% MP) ölçülerini DLS tekrarlanabilirlik gösterir.
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td colspan="3">Microparticle içeriği</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>Düşük</td>
			<td>Orta</td>
			<td>Yüksek</td>
		</tr>
<tr>
<td>Yani % MP (%)</td>
			<td>4.4</td>
			<td>29.2</td>
			<td>53.6</td>
		</tr>
<tr>
<td>Tekrarlanabilirlik (%)</td>
			<td>1.5</td>
			<td>2.3</td>
			<td>5</td>
		</tr>
<tr>
<td>CV (%)</td>
			<td>35</td>
			<td>11,8</td>
			<td>9,4</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 4: Tekrarlanabilirlik dinamik ışık saçılma (DL) ölçümler için yüzde Microparticles (% MP).
Doğrusallık DLS sonuçları doğrusal Şekil 2 gösterir, Yani, düz bir çizgi ile ilgili örnekleri atanan değer uygun. Yedi örnekleri farklı microparticle içerikle hazırlanmıştır. Örnekleri yüksek (MP7) ve düşük (MP1) microparticle içeriği ve eşleşen trombosit konsantrasyon ile kurumlara ve ara örnekleri (MPx) oluşturmak için farklı oranlarıyla karışık. Örnekleri daha önce19 ve DLS açıklandığı gibi Akış Sitometresi ile test edildi ve her konsantrasyonu % MP sonuçlara çizilen giriş ve çıkış olarak. Katsayısı 0.985 bulundu. DLS histogramlar düşük ve yüksek microparticle içerik için örnekleri şekil 3' teAgösterilmektedir. DLS sonuçları Akış Sitometresi (şekil 3B) tarafından teyit edildi.
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56893/56893fig2.jpg"> Resim 2 : Akış Sitometresi ve DLS sonuçları karşılaştırılması. % MP arasında doğrusal ilişki açık sembolü ○ tarafından işaretlenmiş iki örnek özgün DLS verilerden şekil 3' te gösterilmektedir Akış Sitometresi (giriş) ve (çıkış), DLS tarafından belirlenir. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56893/56893fig2large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56893/56893fig3.jpg"> Şekil 3 : Harekete geçirmek ve sigara aktive trombosit arasında ayırt etmek için Microparticle içerik. (A) DLS sonuçları'aktif trombosit (kesik çizgi) içeriğinde MP %4 oranında sigara aktive trombosit (düz çizgi) göre % 57 oldu. Testler gerçekleştirilen bir ölçüm sıcaklığı 37 ° c, plazma viskozite ayarı 1,06 x10-3 Pa·s ve 200-600 kHz arasındaki toplam yoğunluğunu ayarlar. (B) Akış Sitometresi sonuçları (19daha önce açıklandığı gibi elde edilen) (A); gösterildiği gibi aynı örnekleri ileri dağılım histogramlar P1 ve P2 MP ve trombosit kapıları sırasıyla temsil; için harekete geçirmek trombosit aktive trombosit (sağda) için % 6 göre MP geçide olayların (sol) %76 düştü. Doğrusal regresyon çizgisinin arka plan gürültü % MP için sürekli olarak daha yüksek sonuçlar önde gelen Akış Sitometresi tarafından sürekli bir göreli katkısını gösteriyor. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56893/56893fig3large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
Özgüllük/girişim Uluslararası organizasyon için Standartlar Kuruluşu (ISO) analitik özgüllük algılamak veya diğer miktarları aşağıdaki örnekte mevcut iken sadece measurand ölçmek için bir ölçüm yordam yeteneği olarak tanımlar. Microparticle Tarama analitik özgüllük kırmızı kan hücreleri (RBC) tarafından etkilenebilir. DLS MP içerik trombosit içeriği göre ölçer. RBC saçılma katkısını trombosit, saçılma katkı dahil çünkü RBC MP göreli katkısını azaltmak etkileyebilir. Kan ürünleri izin verilen RBC içeriğinde için yasal sınırları yok; eşik muhafazakar bir dönüşüm önerilen AABB tarafından izin verilen RBC yoğunlaşması trombosit konsantreleri-2 ml Paketli RBC bir birimi cinsinden trombosit sonuçlandı 8.0 x1010 hücreler/M (varsayımlar: RBC birimdir 8.5 x10-14L, paketlenmiş RBC Hematokrit % 68'i, trombosit birim hacmi 200 mL). Bildirilen kalan RBC konsantrasyonları farklı ürünlerde de bu eşik46bulunmaktadır.
Üç farklı bağış trombosit ve kırmızı kan hücreleri (RBC) üç bağımsız deneyleri için uygun olarak iki farklı gün bağışladı. 0,05 - trombosit konsantreleri (referans örnek) ilk RBC içeriğinde yapıldı 0,15 x109 hücre/M hemasitometre ile belirlendiği gibi. Beş ek örnek spiking olarak bilinen miktarda RBC aliquots trombosit konsantresi içine tarafından oluşturulan; Hedef RBC düzeyleri Bu örneklerdeki olduğunu 1.0, 5.0, 10, 40 ve 80 x109 hücre/L.
Kırmızı kan hücrelerinin girişim eşik yaklaşık 1,0 oldu x1010 hücreler/hangi Ayrıca kırmızı kan hücreleri varlığı görsel olarak belirgin (şekil 5) idi düzeyiyle ilişkili M (şekil 4). Bu seviyesinden % MP içinde görsel olarak kırmızı örnekleri-ki içeren RBC yerine hemoglobin bildirilen microparticle içeriği çok düşük olacaktır anlamına gelir göz ardı.
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56893/56893fig4.jpg"> Şekil 4 : % MP (DL) ve RBC konsantrasyon (hücre/L) arasında doğrusal ilişki. 0,1 RBC konsantrasyonları artan x109, 1.0 x109, 5.0 x109, 1.0 x1010, 4.0 x1010ve 8.0 x1010 hücreler/M (soldan sağa) üzerinden 3 bağımsız deneyler (○ deneme 1, ● deney 2, □ deney 3, doğrusal regresyon satırlar her deneme için görüntülenir). 1.0 yukarıda x1010 RBC/M önde için % MP küçümseme. RBC içeren örnekleri görünümünü şekil 5' te gösterilen. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56893/56893fig4large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/56893/56893fig5.jpg"> Şekil 5 : Örnekleri içeren RBC görünümünü. Trombosit kızarıklık örnekleri içeren RBC konsantrasyonları 0,1 x109, 1.0 x109, 5.0 x109, 1.0 x1010, 4.0 x1010ve 8.0 x1010 hücreler/M soldan sağa doğru. <a href="//cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/56893/56893fig5large.jpg" target="_blank">Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.</a>
Doğruluk Doğruluk bir tek ölçüm sonucu ve örnek için atanan bir gerçek miktar değeri arasındaki fark olarak tanımlanır. Bu ölçüm hata ölçüm önyargı tarafından tahmini sistematik bir bileşeni ve tarafından bir standart sapmayı tahmin rasgele bir bileşeni içerir. Böylece, bir ölçüm sonucu doğruluğunu vefa ve hassas bir kombinasyonudur.
Standart bir boncuk DL testin doğruluğunu belirlemek için kullanıldı. Doğruluk iki konsantrasyonları 3-%75 MP tahlil klinik aralığında incelendi. Başvuru boncuk karışımları çünkü başvuru boncuk bilinen boyutu ve konsantrasyon bilinen konsantrasyonları örnekleri hazırlamak için kullanıldı. Sonuç olarak, başvuru boncuk örnekleri istenilen parçacık boyut ve konsantrasyonları ile elde etmek için karışık olabilir.
125 nm RADIUS içeren standart polistren boncuk microparticles temsil etmek için kullanılan ve boncuk 1,5 µm RADIUS ile trombosit temsil etmek için kullanılmıştır. Microparticle tahlil doğruluğunu yaklaşık % 20 ve % 50 MP içerik boncuk karışımları ile değerlendirildi. Ölçülen parçacık yarıçapı doğruluğunu sertifikaları analizi Tablo 5' te gösterildiği gibi başvuru boncuk için belgelenen parçacık yarıçapı için karşılaştırıldı.
<table fo:keep-together.within-page="1"><tbody>
<tr>
<td></td>
			<td colspan="3">125 nm boncuk</td>
			<td colspan="3">1,5 µm boncuk</td>
		</tr>
<tr>
<td rowspan="2"></td>
			<td>Analiz belgesi</td>
			<td colspan="2"></td>
			<td>Analiz belgesi</td>
			<td colspan="2"></td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td>% 20 MP</td>
			<td>% 50 MP</td>
			<td></td>
			<td>% 20 MP</td>
			<td>% 50 MP</td>
		</tr>
<tr>
<td>RADIUS demek</td>
			<td>122.0</td>
			<td>113.8</td>
			<td>124.4</td>
			<td>1.5</td>
			<td>1.6</td>
			<td>1,60</td>
		</tr>
<tr>
<td>STD sapma</td>
			<td>4.5</td>
			<td>2.83</td>
			<td>3.6</td>
			<td>0.035</td>
			<td>0,06</td>
			<td>0,07</td>
		</tr>
<tr>
<td>CV</td>
			<td>%3,60</td>
			<td>%2,48</td>
			<td>%2,89</td>
			<td>%2.20</td>
			<td>%3.74</td>
			<td>%4.05</td>
		</tr>
<tr>
<td>Doğruluk</td>
			<td></td>
			<td>%6,70</td>
			<td>%2.00</td>
			<td></td>
			<td>%6,50</td>
			<td>%6,30</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 5: dinamik ışık saçılma (DL) ölçümlerin doğruluğu. Boyut Karşılaştırma DLS için boncuk 125 nm RADIUS ve 1,5 µm RADIUS için analiz belgesi karşı karışımları içinde sonuçlanır.

Watch this Scientific Journal Video about Routine Screening Method for Microparticles in Platelet Transfusions at JoVE.com

Routine Screening Method for Microparticles in Platelet Transfusions

Microparticle içeriği trombosit konsantreleri eleme üzerinde trombosit stok yönetimi, hastane kan bankaları yeni bir kalite iyileştirme girişimidir. Trombosit kullanımını optimize etmek için trombosit sigara-harekete geçirmek harekete geçirmek ayırt etmek için hedeftir. Hematoloji-Onkoloji hastaları için aktif trombosit sağlayan ateşe dayanıklı olmak için yüksek risk azaltabilir.

Trombosit transfüzyonları Microparticles için yöntem eleme rutin

Platelet inventory management based on screening microparticle content in platelet concentrates is a new quality improvement initiative for hospital blood ...

routine-screening-method-for-microparticles-in-platelet-transfusions

Research

JoVE Journal

Medicine

15.9K Görüntüleme.  LightIntegra Technology Inc.. Microparticle içeriği trombosit konsantreleri eleme üzerinde trombosit stok yönetimi, hastane kan bankaları yeni bir kalite iyileştirme girişimidir. Trombosit kullanımını optimize etmek için trombosit sigara-harekete geçirmek harekete geçirmek ayırt etmek için hedeftir. Hematoloji-Onkoloji hastaları için aktif trombosit sağlayan ateşe dayanıklı olmak için yüksek risk azaltabilir.

Video: Routine Screening Method for Microparticles in Platelet Transfusions

A Simple Protocol for Platelet-mediated Clumping of Plasmodium falciparum-infected Erythrocytes in a Resource Poor Setting

P. falciparum causes the majority of severe malarial infections. The pathophysiological mechanisms underlying cerebral malaria (CM) are not fully understood and several hypotheses have been put forward, including mechanical obstruction of microvessels by P. falciparum-parasitized red blood cells (pRBC). Indeed, during the intra-erythrocytic stage of its life cycle, P. falciparum has the unique ability to modify the surface of the infected erythrocyte by exporting surface antigens with varying adhesive properties onto the RBC membrane. This allows the sequestration of pRBC in multiple tissues and organs by adhesion to endothelial cells lining the microvasculature of post-capillary venules 1. By doing so, the mature forms of the parasite avoid splenic clearance of the deformed infected erythrocytes 2 and restrict their environment to a more favorable low oxygen pressure 3. As a consequence of this sequestration, it is only immature asexual parasites and gametocytes that can be detected in peripheral blood.
Cytoadherence and sequestration of mature pRBC to the numerous host receptors expressed on microvascular beds occurs in severe and uncomplicated disease. However, several lines of evidence suggest that only specific adhesive phenotypes are likely to be associated with severe pathological outcomes of malaria. One example of such specific host-parasite interactions has been demonstrated in vitro, where the ability of intercellular adhesion molecule-1 to support binding of pRBC with particular adhesive properties has been linked to development of cerebral malaria 4,5. The placenta has also been recognized as a site of preferential pRBC accumulation in malaria-infected pregnant women, with chondrotin sulphate A expressed on syncytiotrophoblasts that line the placental intervillous space as the main receptor 6. Rosetting of pRBC to uninfected erythrocytes via the complement receptor 1 (CD35)7,8 has also been associated with severe disease 9.
One of the most recently described P. falciparum cytoadherence phenotypes is the ability of the pRBC to form platelet-mediated clumps in vitro. The formation of such pRBC clumps requires CD36, a glycoprotein expressed on the surface of platelets. Another human receptor, gC1qR/HABP1/p32, expressed on diverse cell types including endothelial cells and platelets, has also been shown to facilitate pRBC adhesion on platelets to form clumps 10. Whether clumping occurs in vivo remains unclear, but it may account for the significant accumulation of platelets described in brain microvasculature of Malawian children who died from CM 11. In addition, the ability of clinical isolate cultures to clump in vitro was directly linked to the severity of disease in Malawian 12 and Mozambican patients 13, (although not in Malian 14).
With several aspects of the pRBC clumping phenotype poorly characterized, current studies on this subject have not followed a standardized procedure. This is an important issue because of the known high variability inherent in the assay 15. Here, we present a method for in vitro platelet-mediated clumping of P. falciparum with hopes that it will provide a platform for a consistent method for other groups and raise awareness of the limitations in investigating this phenotype in future studies. Being based in Malawi, we provide a protocol specifically designed for a limited resource setting, with the advantage that freshly collected clinical isolates can be examined for phenotype without need for cryopreservation.

A Simple Protocol for Platelet-mediated Clumping of Plasmodium falciparum-infected Erythrocytes in a Resource Poor Setting

This method investigates the platelet-mediated clumping phenotype of Plasmodium falciparum-infected erythrocytes (pRBC) in clinical isolates. This is performed by isolating and co-incubating platelet-rich plasma and a suspension of pRBC.

Trombosit-aracılı kesekleşme için Basit Protokolü<em&gt; Plasmodium falciparum</emBir kaynak Poor Setting&gt; ile enfekte Eritrosit

P. falciparum causes the majority of severe malarial infections. The pathophysiological mechanisms underlying cerebral malaria (CM) are not fully ...

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Microfluidic Flow Chambers Using Reconstituted Blood to Model Hemostasis and Platelet Transfusion In Vitro

Blood platelets prepared for transfusion gradually lose hemostatic function during storage. Platelet function can be investigated using a variety of (indirect) in vitro experiments, but none of these is as comprehensive as microfluidic flow chambers. In this protocol, the reconstitution of thrombocytopenic fresh blood with stored blood bank platelets is used to simulate platelet transfusion. Next, the reconstituted sample is perfused in microfluidic flow chambers which mimic hemostasis on exposed subendothelial matrix proteins. Effects of blood donation, transport, component separation, storage and pathogen inactivation can be measured in paired experimental designs. This allows reliable comparison of the impact every manipulation in blood component preparation has on hemostasis. Our results demonstrate the impact of temperature cycling, shear rates, platelet concentration and storage duration on platelet function. In conclusion, this protocol analyzes the function of blood bank platelets and this ultimately aids in optimization of the processing chain including phlebotomy, transport, component preparation, storage and transfusion.

Microfluidic Flow Chambers Using Reconstituted Blood to Model Hemostasis and Platelet Transfusion In Vitro

Platelet transfusion and hemostasis was modeled using blood reconstitution and microfluidic flow chambers to investigate the function of blood banking platelets. The data demonstrate the consequences of platelet storage lesion on hemostasis, in vitro.

Mikroakışkan Akış Chambers Hemostaz ve Trombosit Transfüzyon Model Sulandırılarak Kan kullanma<em&gt; İn Vitro</em

Blood platelets prepared for transfusion gradually lose hemostatic function during storage. Platelet function can be investigated using a variety of ...

Biyomühendislik

Megakaryocyte Differentiation and Platelet Formation from Human Cord Blood-derived CD34+ Cells

Platelet production occurs principally in the bone marrow in a process known as thrombopoiesis. During thrombopoiesis, hematopoietic progenitor cells differentiate to form platelet precursors called megakaryocytes, which terminally differentiate to release platelets from long cytoplasmic processes termed proplatelets. Megakaryocytes are rare cells confined to the bone marrow and are therefore difficult to harvest in sufficient numbers for laboratory use. Efficient production of human megakaryocytes can be achieved in vitro by culturing CD34+ cells under suitable conditions. The protocol detailed here describes isolation of CD34+ cells by magnetic cell sorting from umbilical cord blood samples. The necessary steps to produce highly pure, mature megakaryocytes under serum-free conditions are described. Details of phenotypic analysis of megakaryocyte differentiation and determination of proplatelet formation and platelet production are also provided. Effectors that influence megakaryocyte differentiation and/or proplatelet formation, such as anti-platelet antibodies or thrombopoietin mimetics, can be added to cultured cells to examine biological function.

Megakaryocyte Differentiation and Platelet Formation from Human Cord Blood-derived CD34+ Cells

A highly pure population of megakaryocytes can be obtained from cord blood-derived CD34+ cells. A method for CD34+ cell isolation and megakaryocyte differentiation is described here.

Kordon kan kaynaklı CD34 megakaryocyte farklılaşma ve trombosit oluşumu insan+ hücreleri

Platelet production occurs principally in the bone marrow in a process known as thrombopoiesis. During thrombopoiesis, hematopoietic progenitor cells ...

Investigating von Willebrand Factor Pathophysiology Using a Flow Chamber Model of von Willebrand Factor-platelet String Formation

Von Willebrand factor (VWF) is a multimeric glycoprotein coagulation factor that mediates platelet adhesion and aggregation at sites of endothelial damage and that carries factor VIII in the circulation. VWF is synthesized by endothelial cells and is either released constitutively into the plasma or is stored in specialized organelles, called Weibel-Palade bodies (WPBs), for on-demand release in response to hemostatic challenge. Procoagulant and proinflammatory stimuli can rapidly induce WPB exocytosis and VWF release. The majority of VWF released by endothelial cells circulates in the plasma; however, a proportion of VWF is anchored to the endothelial cell surface. Under conditions of physiological shear, endothelial-anchored VWF can bind to platelets, forming a VWF-platelet string that may represent the nidus of thrombus formation. A flow chamber system can be used to visually observe the release of VWF from endothelial cells and the subsequent platelet capture in a manner that is reproducible and relevant to the pathophysiology of VWF-mediated thrombus formation. Using this methodology, endothelial cells are cultured in a flow chamber and are subsequently stimulated with secretagogues to induce WPB exocytosis. Washed platelets are then perfused over the activated endothelium. The platelets are activated and subsequently bind to elongated VWF strings in the direction of fluid flow. Using extracellular histones as a procoagulant and proinflammatory stimulus, we observed increased VWF-platelet string formation on histone-treated endothelial cells compared to untreated endothelial cells. This protocol describes a quantitative, visual, and real-time assessment of the activation of VWF-platelet interactions in models of thrombosis and hemostasis.

In this paper, we describe a method to assess endothelial von Willebrand factor release and the subsequent platelet capture under fluid shear stress in response to inflammatory stimuli using an in vitro flow chamber system.

Soruşturma von Willebrand faktör patofizyolojisi kullanarak bir akışı odası Model von Willebrand faktör-trombosit dize oluşumu

Von Willebrand factor (VWF) is a multimeric glycoprotein coagulation factor that mediates platelet adhesion and aggregation at sites of endothelial damage ...

Tıp

Use of Capillary Electrophoresis Immunoassay to Search for Potential Biomarkers of Amyotrophic Lateral Sclerosis in Human Platelets

Capillary electrophoresis immunoassay (CEI), also known as capillary western technology, is becoming a method of choice for screening disease relevant proteins and drugs in clinical trials. Reproducibility, sensitivity, small sample volume requirement, multiplexing antibodies for multiple protein labeling in the same sample, automated high-throughput ability to analyze up to 24 individual samples, and short time requirement make CEI advantageous over the classical western blot immunoassay. There are some limitations of this method, such as the inability to utilize a gradient gel (4%&#8211;20%) matrix, high background with unrefined biological samples, and commercial unavailability of individual reagents. This paper describes an efficient method for running CEI in a multiple assay setting, optimizing protein concentration and primary antibody titration in one assay plate, and providing user-friendly templates for sample preparation. Also described are methods for measuring pan TDP-43 and phosphorylated TDP-43 derivative in platelet lysate cytosol as part of the initiative in blood-based biomarker development for neurodegenerative diseases.

Blood-based biomarkers for neurodegenerative diseases are essential for implementing large-scale clinical studies. A reliable and validated blood test should require a small sample volume as well as be a less invasive sampling method, affordable, and reproducible. This paper demonstrates that high-throughput capillary electrophoresis immunoassay satisfies criteria for potential biomarker development.

İnsan Trombositlerinde Amotrofik Lateral Sklerozun Potansiyel Biyobelirteçlerini Aramak İçin Kapiller Elektroforez İmmünoassay Kullanımı

Capillary electrophoresis immunoassay (CEI), also known as capillary western technology, is becoming a method of choice for screening disease relevant ...

Nörobilim

<meta charset="utf8"></head><body>Floresan Görüntüleme ve EPR Kullanılarak Trombositlerde Süperoksit Anyonunun Tespiti

Alternative Methods for the Detection of Superoxide Anion Generation in Platelets

Reactive oxygen species (ROS) are highly unstable oxygen-containing molecules. Their chemical instability makes them extremely reactive and gives them the ability to react with important biological molecules such as proteins, nucleic acids, and lipids. Superoxide anions are important ROS generated by the reduction of molecular oxygen reduction (i.e., acquisition of one electron). Despite their initial implication exclusively in aging, degenerative, and pathogenic processes, their participation in important physiological responses has recently become apparent. In the vascular system, superoxide anions have been shown to modulate the differentiation and function of vascular smooth muscle cells, the proliferation and migration of vascular endothelial cells in angiogenesis, the immune response, and the activation of platelets in hemostasis. The role of superoxide anions is particularly important in the dysregulation of platelets and the cardiovascular complications associated with a plethora of conditions, including cancer, infection, inflammation, diabetes, and obesity. It has, therefore, become extremely relevant in cardiovascular research to be able to effectively measure the generation of superoxide anions by&#160;human platelets,&#160;understand the redox-dependent mechanisms regulating the balance between hemostasis and thrombosis and, eventually,&#160;identify novel pharmacological tools for the modulation of platelet responses leading to thrombosis and cardiovascular complications. This study presents three experimental protocols successfully adopted for the detection of superoxide anions in platelets and the study of the redox-dependent mechanisms regulating hemostasis and thrombosis: 1) dihydroethidium (DHE)-based superoxide anion detection by flow cytometry; 2) DHE-based superoxide anion visualization and analysis by single platelet imaging; and 3) spin probe-based quantification of superoxide anion output in platelets by electron paramagnetic resonance (EPR).

<meta charset="utf8"></head><body>Yazar Spotlight: ROS Tespiti için Yenilikçi Teknikler ve Trombosit Araştırmaları için Çıkarımlar

The generation of superoxide anion is essential for the stimulation of platelets and, if dysregulated, critical for thrombotic diseases. Here, we present three protocols for the selective detection of superoxide anions and the study of redox-dependent platelet regulation.

Trombositlerde Süperoksit Anyon Oluşumunun Tespiti için Alternatif Yöntemler 

Reactive oxygen species (ROS) are highly unstable oxygen-containing molecules. Their chemical instability makes them extremely reactive and gives them the ...

A Uniform Shear Assay for Human Platelet and Cell Surface Receptors via Cone-plate Viscometry

Many biological cells/tissues sense the mechanical properties of their local environments via mechanoreceptors, proteins that can respond to forces like pressure or mechanical perturbations. Mechanoreceptors detect their stimuli and transmit signals via a great diversity of mechanisms. Some of the most common roles for mechanoreceptors are in neuronal responses, like touch and pain, or hair cells which function in balance and hearing. Mechanosensation is also important for cell types which are regularly exposed to shear stress such as endothelial cells, which line blood vessels, or blood cells which experience shear in normal circulation. Viscometers are devices that detect the viscosity of fluids. Rotational viscometers may also be used to apply a known shear force to fluids. The ability of these instruments to introduce uniform shear to fluids has been exploited to study many biological fluids including blood and plasma. Viscometry may also be used to apply shear to the cells in a solution, and to test the effects of shear on specific ligand-receptor pairs. Here, we utilize cone-plate viscometry to test the effects of endogenous levels of shear stress on platelets treated with antibodies against the platelet mechanosensory receptor complex GPIb-IX.

We describe an in-solution method to apply uniform shear to platelet surface receptors using cone-plate viscometry. This method may also be used more broadly to apply shear to other cell types and cell-fragments and need not target a specific ligand-receptor pair.

Koni-plaka viskozimetre ile ınsan trombosit ve hücre yüzeyi reseptörleri için Tekdüzen kesme tahlil

Many biological cells/tissues sense the mechanical properties of their local environments via mechanoreceptors, proteins that can respond to forces like ...

Biyoloji

Purification of Platelets from Mouse Blood

Platelets are purified from whole blood to study their functional properties, which should be free from red blood cells (RBC), white blood cells (WBC), and plasma proteins. We describe here purification of platelets from mouse blood using three-fold more iohexol gradient medium relative to blood sample volume and centrifugation in a swinging bucket rotor at 400 x g for 20 min at 20 &#176;C. The recovery/yield of the purified platelets were 18.2-38.5%, and the purified platelets were in a resting state, which did not contain any significant number of RBC and WBC. The purified platelets treated with thrombin showed up to 93% activation, indicating their viability. We confirmed that the purified platelets are sufficiently pure using flow cytometric and microscopic evaluation. These platelets can be used for gene expression, activation, granule release, aggregation, and adhesion assays. This method can be used for purification of platelets from the blood of other species as well.

Here, mouse blood was collected in the presence of an anti-coagulant. The platelets were purified by iohexol gradient medium using low speed centrifugation. The platelets were activated with thrombin to investigate if they were viable. The quality of the purified platelets was analyzed by flow cytometry and microscopy.

Fare kan trombosit arıtma

Platelets are purified from whole blood to study their functional properties, which should be free from red blood cells (RBC), white blood cells (WBC), ...

Trombosit transfüzyonları Microparticles için yöntem eleme rutin

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Trombosit-aracılı kesekleşme için Basit Protokolü

Mikroakışkan Akış Chambers Hemostaz ve Trombosit Transfüzyon Model Sulandırılarak Kan kullanma

Kordon kan kaynaklı CD34 megakaryocyte farklılaşma ve trombosit oluşumu insan⁺ hücreleri

Soruşturma von Willebrand faktör patofizyolojisi kullanarak bir akışı odası Model von Willebrand faktör-trombosit dize oluşumu

İnsan Trombositlerinde Amotrofik Lateral Sklerozun Potansiyel Biyobelirteçlerini Aramak İçin Kapiller Elektroforez İmmünoassay Kullanımı

Trombositlerde Süperoksit Anyon Oluşumunun Tespiti için Alternatif Yöntemler

Trombositlerde Süperoksit Anyon Oluşumunun Tespiti için Alternatif Yöntemler

Trombositlerde Süperoksit Anyon Oluşumunun Tespiti için Alternatif Yöntemler

Koni-plaka viskozimetre ile ınsan trombosit ve hücre yüzeyi reseptörleri için Tekdüzen kesme tahlil

Fare kan trombosit arıtma