Name: the identification of sea lamprey pheromones using bioassay-guided fractionation
Uploaded: 2018-07-17T15:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 35 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about The Identification of Sea Lamprey Pheromones Using Bioassay-Guided Fractionation at JoVE.com

Okyanus deniz lampreys sağlamak için Kanada ve ABD Jeolojik Araştırma Hammond Bay biyolojik İstasyonu onların araştırma tesislerinin kullanımı ve personel ABD balık ve vahşi yaşam servisi ve balıkçılık için teşekkür ederiz. Bu araştırma Weiming Li ve Ke Li büyük göl balıkçılık Komisyonu hibe tarafından desteklenmiştir.

Tüm yöntem tanımlamak burada kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi, Michigan State University (AUF # 03/14-054-00 ve 02/17-031-00) tarafından onaylanmış olması.
1. toplama ve çıkarma deniz taşemen su şartına
<ol><li>Yer cinsel olgun erkek deniz lampreys (15-30 hayvanlar) 250 L 16-18 ° C'de tutulan gazlı göl Huron su ile birlikte bir su tankında</li>
	<li>Her gece boyunca erkek şartına su Haziran ile Temmuz için toplamak. Not: deniz lampreys doğal yumurtlama sonra ölür. Bir balık onun hayatında bu noktaya yaklaşıyor olan taze ve olgun bir erkek yerine.</li>
	<li>Katı faz çıkarma tarafından şartına su ayıklayın.<ol>
<li>Reçine metanol 4 h için bir sütuna yüklemeden önce ıslatın. Reçine sütuna yük, o zaman 10 L su sütunu boyunca organik çözücü ortadan kaldırmak için pompa.</li>
		<li>Klimalı su tankı balık üzerinden pompalama sistemi için sütunun üstünde tutan geçmek. Bir yatak dört bir dizide bulunan Orta kutup polimerik iyon değiştirme reçine (e.g., Amberlite XAD-7 HP reçine), 2 kg su geçer 2.5 L kapasiteli cam sütunlar. Yükleme hızı 400 ve 600 mL/6 dk. metabolitleri 10 litre metanol ile hemen aseton 5 L tarafından takip Elute arasında korumak. Dikkat: Bu adımı metanol ve aseton kullanır. İkisi de yanıcı ve zehirli. Not: Havuza alınan kalan-80 ° daha fazla işlenen kadar C saklanır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Sütun (yaklaşık 10 L) su ile yıkayarak zenginleştirme 1 hafta sonra yeniden etkinleştirin.</li>
	<li>Organik çözücü (metanol ve su karışımı) kaldırmak ve düşük basınç (altında 300 mbar) 40 ° C'de altında 5 h için çevirme buharlaşma tarafından özü hasat Su kalıntı dondurma kuru kadar 48 h-20 ° C'de lyophilization kurutma makinesi tarafından konsantre ol.</li>
</ol>2. izolasyon-in kesir havuzları kromatografi ile
<ol><li>Silika jel (230-400 mesh) ilk mobil faz 30 dk. Transfer için jel bir cam sütun için çözücü (süspansiyon) ile ıslatın. Mobil faz üzerinden gitmek izin vermek için sütun vanayı aç. Silika jel çökelti ve silika jel yatak oluşturmak olanak sağlar.</li>
	<li>Özler silika jel (70-230 mesh) ile iyice karıştırın ve silika jel yatağa sıvı kromatografi sütuna yükleyin. Onları bir gradyan % 95 CHCl3 (kloroform) ile elute / MeOH (metanol) % 100 MeOH, toplam hacim içinde 2.5 L. Bireysel şişeleri (her 10 ml) eluent toplamak. Dikkat: Bu adımda kullanılan kloroform zehirli bir reaktif olduğunu.</li>
	<li>Eluents 20 kesirler göre ince tabaka Kromatografi (TLC) analiz havuzu kılavuz.<ol>
<li>TLC deney öncesi kaplı silika jel tabaklarda örnek başlangıç çizgisine uygulanması ve gelişmekte olan çözücüler (polarizasyonu CHCl3 oranında metanol için % 100-0 Seç) kapalı bir cam plaka başlangıç çizgisine çeker yerine getirilir Tank.</li>
		<li>Çözücü 0,3 arasında değişen her TLC noktalar saklama faktörü (Rf) yapmak için geliştirme oranı seçin - 0.8.</li>
		<li>Satır sonu gelişmekte olan çözücü ulaştıktan sonra plaka havuzdan al ve solvent buharlaşır için 10 dk bekle.</li>
		<li>Belgili tanımlık yer ilk UV 254 nm ve sonra leke ışığı altında görselleştirmek onları % 5 anisaldehyde (20 μL) bir kromatografi püskürtme tarafından bir asidik metanol çözümü ile püskürtme ve onları 3 dk 85 ° C'de Isıtma onları. Not: TLC plaka üzerinde renkli noktalar kesir ana bileşeni belirtir.</li>
		<li>Eluent 20 kesirler spot renk ve ana bileşeni Rf benzerlik göre için birleştirin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Yaklaşık 30 dakika için 40 ° C'de düşük basınç (çözücüler mülkiyeti göre 300 mbar) altında çevirme buharlaşma tarafından kesir bir kalıntı için konsantre.</li>
</ol>3. Elektro-olfactogram (EOG) kayıtları kokulu kesirler/bileşenleri tanımlamak için
<ol><li>Borosilikat cam kılcal çekin (dış çap: 1.5 mm; iç çap: 0,86 mm; uzunluğu: 100 mm) bir micropipette ile çektirme ısıtıcı düzeyi ayarlamak için 65.</li>
	<li>Puan edinildi ve cut bir cam elmas uçlu kesici ile kılcal ucundaki açma ve erimiş %0,4 agar % 0,9 serum fizyolojik ile doldurun. Kılcal ucu açılışında çapı yaklaşık 10 µm olmalıdır.</li>
	<li>Adımları 3.1-3.2 ve katı hal elektrotlar sahipleri çekti kapiller elektrotlar ön fabrikasyon 3 M KCl bir micropipette kullanarak ile Ag/AgCl granül (bkz: Malzemeler tablo) ile dolgu. Not: herhangi bir hava kabarcıkları kılcal veya Elektrot tutucu çıkarmak.</li>
	<li>Çekti elektrot elektrot sahipleri yerleştirin.</li>
	<li>10-5 M 100 mL hazırlamak L-arginin kömür filtre su 10-2 M L-arginin hisse senedi çözeltilerine volumetric flask deiyonize su (4 ° C'de depolanan) üzerinden. 10-5 M 20 mL transfer L-arginin bir cam şişe için.</li>
	<li>Konsantrasyon-yanıt eğrisi için kesir havuzlarının adım 2.3 cam şişe içinde 10 kat dilutions 10 mL hazırlayın. Her gün önce deneyler taze dilutions hazırlamak ve onları bir gün içinde kullanın. Sıcaklığı 8 ° C'ye equilibrate izin vermek için dolaşım bir su banyosu çalışma çözümleri, L-arginin ve kesir havuzu dilutions cam şişe koymak</li>
	<li>3-aminobenzoic asit etil ester (MS222; 100 mg/L) ile taşemen anestezi ve gallamine triethiodide (3 mg/kg vücut ağırlığı, % 0,9 serum) bir kas içi enjeksiyon ile steril bir şırınga hareketsiz. Not: Anestezi yeterli derinliğe no gill hareket, dik bir duruş korumak için bir yetersizlik ve hiçbir emme sözlü onun yuvarlak yüzey istimal belgili tanımlık tank kenarlarına gözlemci tarafından belirlenir. Herhangi bir mikrobiyal kirlenme öncesi ve ameliyat sırasında en aza indirmek için steril eldiven giymek ve % 70 etanol (v: v) diseksiyon araçlarında en az 10 dk kullanmadan önce deiyonize su ıslatın.</li>
	<li>V şeklindeki standı imzalat taşemen yönlendirmek ve kurutulma önlemek için ıslak kağıt havluyla sarın. Not: solungaç açıklıklar engel değil.</li>
	<li>Gazlı su 50 mg/L MS222 bukkal kavite içine içeren recirculating bir tüp takın, akış hızı ayarlamak ve gill açıklıklar sürekli solungaçları sulamak için su yolu ile çıkarken sağlamak.</li>
	<li>Steril neşter ve forseps kullanın [1,25 X büyütme, stereoskopik mikroskop altında ( Tablo malzemelerigörmek)] koku epitel ortaya çıkarmak için koku kapsül yüzeyi cilt 5 mm2 bölümünü kaldırmak için.</li>
	<li>Propil teslim boru filtrelenmiş su ile yıkayın ve bir micromanipulator üzerinde sıva üstü Vana bağlayın. Propil teslim kılcal tüp filtrelenmiş su kuruma odorants yönetirken değil önlemek için koku epitel sunmak için micromanipulator kullanarak koku epitel kavite içine koyun.</li>
	<li>Kayıt ve başvuru elektrotlar micromanipulators üzerinde bağlayın. Referans elektrot naris yakınındaki dış deri üzerine indir. Stereoskopik mikroskop (1,25 X), daha düşük koku epitel yüzeyi çok az dokunmak kayıt elektrot kullanarak.</li>
	<li>Propil teslim tüp alımını filtre arka plan su 10-5 M L-arginin çözüm için transfer.</li>
	<li>Bilgisayar, amplifikatör (DC modunda), filtre ve çizim tablası açınız. Vana sürücü yazılımını kullanarak program propil 4 bir s tek darbe T 4 olarak ayarlamak T1, kutusunu işaretleyerek yönetmek için bu yordamı s ve T2 kutunun işaretlenmesi.</li>
	<li>Veri toplama yazılımı (bakınız Tablo malzemeler), ayarla toplama modu için yüksek hızlı bir osiloskop, oyun simgesini tıklatın ve propil darbe tetiklemek için Vana sürücü Başlat ' ı tıklatın. Not: Veri toplama yazılımı otomatik olarak fark EOG yanıt genlik 20 kaydeder s (3 önce 4 s s propil darbe ve 13 sırasında daha sonra s). Kayıt elektrot, referans elektrot veya L-arginin standart en fazla yanıt ve bir çok az yanıt-e doğru boş denetim (sinyal-gürültü oranı artırmak için propil teslim tüp konumlarını manevra için micromanipulator kullanın filtrelenmiş su). Zemin elektrotlar hareket ederken AC-DC amplifikatör anahtar GND için değiştirme'yi amplifikatör.</li>
	<li>Boş kontrolü, L-arginin ve sonra adım 3.6'düşük 2 dk floş süzülmüş su ile yüksek konsantrasyonları uygulamalar arasında hazırlanan odorants kaydetmeye başlamak.</li>
	<li>Yanıt test edilecek tüm odorants için kayıt sonra amplifikatör zemin ve dikkatle elektrotlar ve propil teslim kılcal tüp geri çek. Onaylanmış kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) yöntemleri, EOG deney sona ermesi, takip ötenazi ile MS222 aşırı dozda imzalat taşemen (1 g/L). Not: başarılı ötenazi gill hareketi ve kalp atışı en az 5 min beyin pithing tarafından takip için eksikliği işaret ederek doğrulayın.</li>
	<li>Analiz ve analiz yazılımı kullanarak verileri çizmek. Yanıt-e doğru boş su kontrolü büyük temin kokulu kesirler tanımlamak için odorants22 algılama eşiği belirlemek. Boş su kontrolü farklı konsantrasyon bağımlı koku yanıt temin kesir havuzları sonra bir davranış tahlil (adım 4) test edilir.</li>
</ol>4. iki seçim labirent davranışsal aktif kesirler/bileşikler tanımlamak için davranış Bioassay
<ol><li>Cinsel Olgun kadın deniz taşemen labirent yayın kafeste alışmana ( ek Şekil 1bakınız) için 5 dk. labirent içinde nehir su akış hızı korumak Not: Labirent vernikli deniz sınıf ahşap ve önlemler 6.5 m uzunluğunda ve 1, 2 m genişliğinde bir bölücü 2.7 m uzunluğunda ters yönde sonunda iki kanal içine labirent ayırmak için ölçme ile inşa edilmiştir. Su içine labirent geçici olarak yönlendirilir. Su derinliği 0,19 m., saklanması gereken ve hız 0,07 m/s ± 0,01 muhafaza edilmelidir.</li>
	<li>Deniz taşemen yayın ve taşemen deneysel geçirdiği zaman ve denetim kanalı içeren her nehir su 10 dakikadır kümülatif miktarı kaydetmek. Not: deniz taşemen deneysel girin ve en az 10 için kanal denetlemek başarısız olursa bu 10 dk dönemde s son deneme bu hareketsizlik ya da güçlü yan önyargı bir göstergesi olarak.</li>
	<li>Test uyarıcı uygulamak (yani, 10-12 M, sözde bir feromon % 50 metanol/deiyonize su içinde çözünmüş) rasgele atanan deneysel kanal ve kanal denetimi kullanarak araç (% 50 metanol/deiyonize su) peristaltik 5 min için pompalar 200 mL/dk sabit bir fiyatla. Not: Electro-olfactogram kayıtları ile belirlenen test uyaran algılama eşik konsantrasyonu davranış testi için başlangıç konsantrasyonu kullanılmalıdır.</li>
	<li>Test uyarıcı ve aracın ek bir 10 min için geçerlidir ve taşemen geçirdiği zaman toplam miktarını Deneysel kayıt ve denetim kanalı.</li>
	<li>Labirent sonraki duruşma başlamadan önce 10 min için su ile yıkayın. Yeterli test uyarıcı kullanılabilir 4.1-4.4 en az 7 lampreys ile yineleyin.</li>
	<li>Bir dizin tercih22 her deneme için hesaplamak ve Wilcoxon imzaladı-rank testi kullanma önemini değerlendirmek. Not: Dizin sonuçlarda olumlu veya olumsuz olabilir tek bir numara. Oysa cazibe, değeri tercih Dizin gösterir tercih göstergeler itme dizinin negatif bir değer. Tercih dizin sıfırdan önemli ölçüde farklıysa, kesir etkin olarak kabul edilir. <img alt="Equation" src="/files/ftp_upload/58059/58059eq1v2.jpg"> Burada, Bc = propil uygulamadan denetim kanalı test taşemen tarafından harcanan zaman Be = propil uygulamadan deneysel kanaldaki harcanan zaman C = propil uygulamadan sonra denetim kanalı harcanan zaman ve E = propil uygulamadan sonra deneysel kanalda harcanan zaman.</li>
</ol>5. kromatografik yalıtım etkin kesirler gelen saf bileşiklerin
<ol><li>Tekrarlamak merdiven 2.1-2.4 koku yanıt (adım 3) neden kesir havuzlu ve davranışsal yanıt (adım 4) temin.</li>
	<li>Daha fazla etkin kesirler Sephadex LH-20 sütun kullanarak boyut-dışlama kromatografi ile bileşikler arındırmak.<ol>
<li>0.5 mL örnek ilk mobil aşamasında hazırlamak [CHCl3- MeOH (1:1) veya MeOH % 100], bir CHCl3- MeOH (1:1) sütun ve sonra bir MeOH (% 100) sütun karşılık gelen sütuna yüklemek ve onları bileşikleri vermeye elute.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. yapı aydınlatma kütle spektrometresi (MS) ve nükleer manyetik rezonans (NMR) ile saf bir bileşik
<ol><li>Dağıtılması ve saf bileşik ilk mobil aşamasında yüksek performanslı sıvı kromatografi (HPLC) yaklaşık 1 μg/ml 10 μL çözüm oluşturmak için (genellikle, metanol su, 1:1, v: v) oranında seyreltin.<ol>
<li>Örnek çözüm HPLC şişeleri için aktarmak ve HPLC Otomatik Örnekleyici koymak onları. Örnek (10 μL) electrospray iyonlaşma kütle spektrometresi (ESIMS) enjekte ve yüksek çözünürlüklü electrospray iyonlaşma kütle spektrometresi (HRESIMS) spectra kromatografi kütle spektrometre23kullanarak kaydedin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Moleküler formülü kütle spektrometre yazılım veritabanında göre tahmin (bakınız Tablo reçetesi)24.<ol>
<li>Eklenen örnek kromatografik açın ve kromatografik tepe seçerek onun kitle spektrum elde etme.</li>
		<li>Aracı modülü Elemental bileşiminde iyon (m/z) değeri (4 ondalık) ölçülen ayine girdi. PPM tolerance parametre ayarla < 5.</li>
		<li>Öğe oluşumu ölçülen molekülünün sığdırmak için sembol parametrelerini ayarlamak. Yazılım moleküler formülü tek kitle analizi dayalı bir tahmin oluşturur.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Deuterated çözücüler (600 μL, CH3OH -d4 veya DMSO -d6) örnekleri çözülmeye Protokolü25 göre seçin.<ol>
<li>Yaklaşık 0,1 10 mg/mL aralığında değişen bir konsantrasyon ile bir çözüm oluşturmak için seçili deuterated çözücüler örnek tamamen erimesi. Örnek çözüm 1 D (1H, 13C) kaydetmek için bir NMR tüp içine aktarmak ve 2D NMR [1H -1H korelasyon spektroskopisi (rahat), heteronuclear tek kuantum tutarlılık (HSQC), heteronuclear çoklu bağ korelasyon (HMBC)] Spectra 900 MHz NMR spektrometresi26.</li>
	</ol>
</li>
	<li>NMR tüp spinner türbin içinde örnek ile yerleştirin. Derinlik mastarı örnek yükseklik ölçme penceresinin ortasında olduğundan emin olmak için kullanın. NMR yazılımını açın (bkz. Tablo reçetesi) ve mıknatıs örnek değiştirmek için Kaldır düğmesini tıklatın. Not: magnet mıknatıs tepesinden gelen gaz hissetmek tepesinden bir elini tut. Aynı zamanda, bir ıslık sesi duyulabilir olmalıdır.</li>
	<li>Yavaşça örnek hava yastığı mıknatıs üstüne yerleştirin ve NMR mıknatısına örnek tekrar inmeye Kaldır düğmesine basın. Not: örnek doğru pozisyonda olduğunu belirtmek bir "tıklama" gürültü dinler.</li>
	<li>Yeni bir veri kümesi oluşturun ve NMR enstrüman tarafından önerilen varsayılan parametreler yük ( Tablo malzemelerigörmek).<ol>
<li>Otomatik kilitleme yordamı çağırmak ve solvent istemi sayfasindan seçmek için "kilit" yazın.</li>
		<li>İnce ayar için Unlock modelindeki düğmesini Değiştir masası' nda, ayarlamak, imleci işlemek panelindeki ayarlama ve mıknatıs kilit daha.</li>
		<li>İstemi Atma sayfa üzerinde bir kaç dakika sürebilir ayarlama yordamı işlemek paneline parametresinde ayarlayın. Devam etmek için ayarlama tamamlanana kadar bekleyin.</li>
		<li>Otomatik shimming rutin-e sevketmek içinde "topshim" yazarak başlatın. Titremeden devam tamamlanana kadar bekleyin.</li>
		<li>Türü "rga otomatik ayarlamak için" kazanç ayarlar, daha sonra "türü d1 Bakliyat, sonra"türü zg satın başlatmak ve satın alma bitene kadar bekleyin"arasındaki gecikme ayarlamak için" alınıyor.</li>
		<li>"Ef" veya "verileri işlemek ve sonra yazın"apk otomatik phasing için"e.f.P'yi" yazın. NMR işleme yazılımı verilerin işlenmesi.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Kimyasal yapısı NMR veri analizi bir yorumu tarafından aydınlatmak.</li>
	<li>13C NMR spektrumu karbon sinyalleri saymak. Yüksek çözünürlüklü kütle spektrometresi (HR-MS) öngörülen sonucu eşleşen moleküler formülü seçin.</li>
	<li>1H NMR spektrumu proton sinyalleri entegre ve belgili tanımlık connectivity, karbon ve proton-tabanlı HSQC spektrumda sinyalleri üzerinde atayın.</li>
	<li>Korelasyon 1H -1H rahat ve HMBC spektrum dayalı karbon iskeleti bağlantı atayın.</li>
	<li>Kesin olmayan biçimde kimyasal yapısı yapısı mantığı27tarihinde temel atayın. Geçici yapısı kimyasal yapısı veritabanlarında arama. Geçici yapısı başvurular analogları ile karşılaştırın.</li>
	<li>Nükleer Overhauser etkisi spektroskopisi (NOESY) spektrum göreli yapılandırmayla atayın. Not: spektrometresi ve spektroskopik yöntemler üzerinde görüntülenen enantiomers kimlik özelliklerini aynı olduğundan, bazı bileşiklerin, özellikle de 2'-alkol ve 2'-NH2, mutlak yapılandırma ile belirlenecek sahip bir derivatization reaksiyon. Derivatization reaksiyon sonra spectra üzerinde belirtilen farklılıklar çoğu bileşikler28mutlak konfigürasyonlar kesin atama kolaylaştırmak.</li>
</ol>7. EOG ve Bioassay saf bileşikler onaylamak için kokulu ve davranışsal aktif
<ol><li>3.1-3.5 adımları yineleyin.</li>
	<li>10-6 M - 10-13 M 10-3 M feromon hisse senedi çözüm % 50 metanol/su içinde belirlenen moleküler ağırlık temel-20 ° C'de depolanan gelen saf bileşiklerin 10 kat dilutions 10 mL konsantrasyonu-yanıt eğrisi için hazırlamak Adım 6.2. Sıcaklığı 8 ° C'ye equilibrate izin vermek için dolaşım bir su banyosu çalışma çözümleri, L-arginin ve saf bileşikler ile cam şişe koymak</li>
	<li>3.7-3.18 adımları yineleyin.</li>
	<li>4.1-4.2 adımları yineleyin.</li>
	<li>EOG algılama eşik konsantrasyon saf kampta rasgele atanan deneysel kanal ve 5 min için 200 mL/dk Sabit fiyatla peristaltik pompa kullanarak Denetim kanalında ve aracın (% 50 metanol/deiyonize su) uygulanır.</li>
	<li>4.4-4,6 adımları yineleyin.</li>
</ol>

<ol>
	<li>Wyatt, T. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pheromones and Animal Behavior: Chemical Signals and Signatures. , (2014).</li><li>Zhu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reverse+chemical+ecology:+Olfactory+proteins+from+the+giant+panda+and+their+interactions+with+putative+pheromones+and+bamboo+volatiles.">Reverse chemical ecology: Olfactory proteins from the giant panda and their interactions with putative pheromones and bamboo volatiles.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 114 (46), E9802-E9810 (2017).</li><li>Leal, W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reverse+chemical+ecology+at+the+service+of+conservation+biology.">Reverse chemical ecology at the service of conservation biology.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 114 (46), 12094-12096 (2017).</li><li>Carde, R. T., Minks, A. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+moth+pests+by+mating+disruption:+successes+and+constraints.">Control of moth pests by mating disruption: successes and constraints.</a> Annual Review of Entomology. 40 (1), 559-585 (1995).</li><li>Witzgall, P., Kirsch, P., Cork, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sex+pheromones+and+their+impact+on+pest+management.">Sex pheromones and their impact on pest management.</a> Journal of chemical ecology. 36, (2010).</li><li>Cheng, Y. -. n., Wen, P., Dong, S. -. h., Tan, K., Nieh, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poison+and+alarm:+the+Asian+hornet+Vespa+velutina+uses+sting+venom+volatiles+as+an+alarm+pheromone.">Poison and alarm: the Asian hornet Vespa velutina uses sting venom volatiles as an alarm pheromone.</a> Journal of Experimental Biology. 220 (4), 645-651 (2017).</li><li>Howse, P., Stevens, J., Jones, O. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Insect Pheromones and Their Use in Pest Management. , (2013).</li><li>Pizzolon, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=When+fathers+make+the+difference:+efficacy+of+male+sexually+selected+antimicrobial+glands+in+enhancing+fish+hatching+success.">When fathers make the difference: efficacy of male sexually selected antimicrobial glands in enhancing fish hatching success.</a> Functional Ecology. 24 (1), 141-148 (2010).</li><li>Stacey, N., Sorensen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Hormones in communication | Hormonal Pheromones Encyclopedia of Fish Physiology. , (2011).</li><li>Kobayashi, M., Sorensen, P. W., Stacey, N. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormonal+and+pheromonal+control+of+spawning+behavior+in+the+goldfish.">Hormonal and pheromonal control of spawning behavior in the goldfish.</a> Fish Physiology and Biochemistry. 26 (1), 71-84 (2002).</li><li>Stacey, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hormonally-derived+pheromones+in+teleost+fishes.">Hormonally-derived pheromones in teleost fishes.</a> Fish Pheromones and Related Cues. , 33-88 (2015).</li><li>Kuhlisch, C., Pohnert, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolomics+in+chemical+ecology.">Metabolomics in chemical ecology.</a> Natural Product Reports. 32 (7), 937-955 (2015).</li><li>Prince, E. K., Pohnert, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Searching+for+signals+in+the+noise:+metabolomics+in+chemical+ecology.">Searching for signals in the noise: metabolomics in chemical ecology.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 396 (1), 193-197 (2010).</li><li>Teeter, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pheromone+communication+in+sea+lampreys+(Petromyzon+marinus):+implications+for+population+management.">Pheromone communication in sea lampreys (Petromyzon marinus): implications for population management.</a> Canadian Journal of Fisheries and Aquatic Sciences. 37 (11), 2123-2132 (1980).</li><li>Moore, H., Schleen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Changes+in+spawning+runs+of+sea+lamprey+(Petromyzon+marinus)+in+selected+streams+of+Lake+Superior+after+chemical+control.">Changes in spawning runs of sea lamprey (Petromyzon marinus) in selected streams of Lake Superior after chemical control.</a> Canadian Journal of Fisheries and Aquatic Sciences. 37 (11), 1851-1860 (1980).</li><li>Vrieze, L. A., Bergstedt, R. A., Sorensen, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Olfactory-mediated+stream-finding+behavior+of+migratory+adult+sea+lamprey+(Petromyzon+marinus).">Olfactory-mediated stream-finding behavior of migratory adult sea lamprey (Petromyzon marinus).</a> Canadian Journal of Fisheries and Aquatic Sciences. 68, (2011).</li><li>Wagner, C. M., Jones, M. L., Twohey, M. B., Sorensen, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+field+test+verifies+that+pheromones+can+be+useful+for+sea+lamprey+(Petromyzon+marinus)+control+in+the+Great+Lakes.">A field test verifies that pheromones can be useful for sea lamprey (Petromyzon marinus) control in the Great Lakes.</a> Canadian Journal of Fisheries and Aquatic Sciences. 63 (3), 475-479 (2006).</li><li>Wagner, C. M., Twohey, M. B., Fine, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Conspecific+cueing+in+the+sea+lamprey:+do+reproductive+migrations+consistently+follow+the+most+intense+larval+odour?.">Conspecific cueing in the sea lamprey: do reproductive migrations consistently follow the most intense larval odour?.</a> Animal Behaviour. 78, (2009).</li><li>Siefkes, M. J., Winterstein, S. R., Li, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+that+3-keto+petromyzonol+sulphate+specifically+attracts+ovulating+female+sea+lamprey+Petromyzon+marinus.">Evidence that 3-keto petromyzonol sulphate specifically attracts ovulating female sea lamprey Petromyzon marinus.</a> Animal Behaviour. 70, (2005).</li><li>Siefkes, M. J., Steeves, T. B., Sullivan, W. P., Twohey, M. B., Li, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sea+lamprey+control:+past,+present,+and+future.">Sea lamprey control: past, present, and future.</a> Great Lakes Fisheries Policy and Management. , 651-704 (2013).</li><li>Li, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three+Novel+Bile+Alcohols+of+Mature+Male+Sea+Lamprey+(Petromyzon+marinus)+Act+as+Chemical+Cues+for+Conspecifics.">Three Novel Bile Alcohols of Mature Male Sea Lamprey (Petromyzon marinus) Act as Chemical Cues for Conspecifics.</a> Journal of Chemical Ecology. 43 (6), 543-549 (2017).</li><li>Hird, S. J., Lau, B. P. -. Y., Schuhmacher, R., Krska, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Liquid+chromatography-mass+spectrometry+for+the+determination+of+chemical+contaminants+in+food.">Liquid chromatography-mass spectrometry for the determination of chemical contaminants in food.</a> TRAC Trends in Analytical Chemistry. 59, 59-72 (2014).</li><li>Little, J. L., Williams, A. J., Pshenichnov, A., Tkachenko, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+&amp;#34;known+unknowns&amp;#34;+utilizing+accurate+mass+data+and+ChemSpider.">Identification of &amp;#34;known unknowns&amp;#34; utilizing accurate mass data and ChemSpider.</a> Journal of the American Society for Mass Spectrometry. 23 (1), 179-185 (2012).</li><li>Beckonert, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Metabolic+profiling,+metabolomic+and+metabonomic+procedures+for+NMR+spectroscopy+of+urine,+plasma,+serum+and+tissue+extracts.">Metabolic profiling, metabolomic and metabonomic procedures for NMR spectroscopy of urine, plasma, serum and tissue extracts.</a> Nature Protocols. 2 (11), 2692 (2007).</li><li>Kaiser, B., Wright, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Draft Bruker XRF Spectroscopy User Guide: Spectral Interpretation and Sources of Interference. , (2008).</li><li>Breitmaier, E., Sinnema, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Structure Elucidation by NMR in Organic Chemistry: A Practical Guide. , (1993).</li><li>Seco, J. M., Quino&#225;, E., Riguera, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+assignment+of+absolute+configuration+by+NMR.">The assignment of absolute configuration by NMR.</a> Chemical Reviews. 104 (1), 17-118 (2004).</li><li>Li, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bile+Salt-like+Dienones+Having+a+Novel+Skeleton+or+a+Rare+Substitution+Pattern+Function+as+Chemical+Cues+in+Adult+Sea+Lamprey.">Bile Salt-like Dienones Having a Novel Skeleton or a Rare Substitution Pattern Function as Chemical Cues in Adult Sea Lamprey.</a> Organic Letters. , (2017).</li><li>Li, K., Buchinger, T. J., Li, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Discovery+and+characterization+of+natural+products+that+act+as+pheromones+in+fish.">Discovery and characterization of natural products that act as pheromones in fish.</a> Natural Product Reports. , (2018).</li><li>Yambe, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=L-Kynurenine,+an+amino+acid+identified+as+a+sex+pheromone+in+the+urine+of+ovulated+female+masu+salmon.">L-Kynurenine, an amino acid identified as a sex pheromone in the urine of ovulated female masu salmon.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 103 (42), 15370-15374 (2006).</li><li>Rasmussen, L., Lee, T. D., Zhang, A., Roelofs, W. L., Daves, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification,+identification,+concentration+and+bioactivity+of+(Z)-7-dodecen-1-yl+acetate:+sex+pheromone+of+the+female+Asian+elephant,+Elephas+maximus.">Purification, identification, concentration and bioactivity of (Z)-7-dodecen-1-yl acetate: sex pheromone of the female Asian elephant, Elephas maximus.</a> Chemical Senses. 22 (4), 417-437 (1997).</li><li>Sorensen, P. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mixture+of+new+sulfated+steroids+functions+as+a+migratory+pheromone+in+the+sea+lamprey.">Mixture of new sulfated steroids functions as a migratory pheromone in the sea lamprey.</a> Nature Chemical Biology. 1 (6), 324-328 (2005).</li><li>Hoye, T. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Details+of+the+structure+determination+of+the+sulfated+steroids+PSDS+and+PADS:+New+components+of+the+sea+lamprey+(Petromyzon+marinus)+migratory+pheromone.">Details of the structure determination of the sulfated steroids PSDS and PADS: New components of the sea lamprey (Petromyzon marinus) migratory pheromone.</a> The Journal of organic chemistry. 72 (20), 7544-7550 (2007).</li><li>Fine, J. M., Sorensen, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+biological+activity+of+the+multi-component+sea+lamprey+migratory+pheromone.">Isolation and biological activity of the multi-component sea lamprey migratory pheromone.</a> Journal of Chemical Ecology. 34 (10), 1259-1267 (2008).</li><li>De Buchinger, T. J., Wang, H., Li, W., Johnson, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+a+receiver+bias+underlying+female+preference+for+a+male+mating+pheromone+in+sea+lamprey.">Evidence for a receiver bias underlying female preference for a male mating pheromone in sea lamprey.</a> Proceedings of the Royal Society of London B: Biological Sciences. 280, (2013).</li><li>De Bruyne, M., Baker, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Odor+detection+in+insects:+volatile+codes.">Odor detection in insects: volatile codes.</a> Journal of Chemical Ecology. 34 (7), 882-897 (2008).</li><li>Bradshaw, J., Baker, R., Lisk, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Separate+orientation+and+releaser+components+in+a+sex+pheromone.">Separate orientation and releaser components in a sex pheromone.</a> Nature. 304 (5923), 265-267 (1983).</li><li>Linn, C., Campbell, M., Roelofs, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pheromone+components+and+active+spaces:+what+do+moths+smell+and+where+do+they+smell+it.">Pheromone components and active spaces: what do moths smell and where do they smell it.</a> Science. 237 (4815), 650-652 (1987).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Balık bileşiklerin henüz tespit için tam bir kimyasal dünyada yaşıyoruz. Bioassay-güdümlü ayırma belirlemek ve bu masu somon31, Asya filler32ve deniz lampreys33gözlenen gibi birçok kimyasal etkileşimlerin arabuluculuk biyoaktif molekülleri karakterize temel kanıtlamıştır, 34,35. Bioassay-güdümlü ayırma doğru bir şekilde izleme ve belirlemekte başlangıç ...

Feromonlar gıda kaynakları bulma, yırtıcı algılama ve conspecifics1sosyal etkileşimlerin arabuluculuk yardım bireyler tarafından yayımlanan belirli kimyasal sinyaller. Feromon iletişim böceklerde de okudu2olmuştur; Ancak, kimyasal kimlik ve suda yaşayan omurgalı Feromonlar biyolojik fonksiyonu olarak kapsamlı bir şekilde incelenmiştir değil. Kimlik bilgisine ve serbest Feromonlar fonksiyonu tehdit türlerin3,4 veya kontrol haşere türü5,6kurtarma kolaylaştırmak için uygulanır. Bu tekniklerin uygulama yalıtım ve karakterizasyonu biyoaktif feromon bileşenleri gerektirir.
Feromon kimlik doğal ürün Kimya bir dalıdır. Feromon araştırma sürüyor kısmen feromon moleküller kendilerini yapısı nedeniyle sınırlı olmuştur. Feromonlar çoğu kez kararsız ve küçük miktarlarda yılında yayımlanan ve uçucu7,8 , suda çözünen bileşikler9dakika miktarda algılamak için sadece birkaç örnekleme teknikleri adlı biri yok. Feromonlar tanımlamak için bir yaklaşım bilinen bileşikler, 2) metabolomics ve 3) bioassay-güdümlü ayırma hedeflenen 1) bir tarama içerir. A hedeflenen perde bilinen bileşikler ticari olarak mevcut metabolik yan ürünleri Feromonlar çalışması için olan fizyolojik süreçlerin sınar. Araştırmacılar sadece bilinir ve kullanılabilir bileşenler test edebilirsiniz çünkü bu yaklaşım sınırlayıcı olduğunu. Ancak, Japon balığı cinsiyet hormonları başarılı tanımlaması bu işlevi Feromonlar10,11,12olarak sonuçlandı. Metabolomics biyolojik sistem13içinde potansiyel küçük molekül metabolik ürünler ayıran ikinci bir feromon kimlik bir yaklaşımdır. İki grubun (yani, bir etkin ve etkin olmayan bir özü) metabolik profilleri karşılaştırılması potansiyel bir metabolik profili kimliği sağlar hangi metaboliti saf üzerinden, yapısı aydınlatılmamıştır ve bioactivity teyit edilen14yaşında. Özel karışımlar karmaşık formülasyonları katkı maddesi ya da sinerjik etkileri metabolitleri birlikte yerine kesirler13bir dizi olarak kabul edilir çünkü metabolomics ile tespit edilebilir olasılığı daha yüksektir. Ancak, elde edilen verileri yeni yapıların aydınlatma kolaylaştırmak değil çünkü metabolomics uygulanması sentetik başvurular kullanılabilirliğine dayanır.
Bioassay-güdümlü ayırma yaklaşımdır iki alanı kapsayan bir entegre, yinelemeli: kimya ve biyoloji. Bu yaklaşım kılavuzu yalıtım ve bir etkin feromon bileşik tanımlaması için fizyolojik ve davranışsal biyoanalizler sonuçlarını kullanır. Ham bir özü bir kimyasal özelliği (yani, moleküler boyutu, polarite, vb) tarafından şeker ve elektro-olfactogram (EOG) kayýtlarý içeren ve/veya bir bioassay test edilmiştir. Biyoaktif bileşenler ayırma ve EOGs ve/veya biyoanalizler aşağıdaki adımları tekrar ederek dışarı ekranlı. Saf aktif bileşikler yapılarının moleküler ağırlık ve bahçedeki sentezlenmiş için bir şablon oluşturmak için yapısal bilgi sağlayan spektrometrik ve spektroskopik yöntemler tarafından aydınlatılmamıştır. Bioassay-güdümlü ayırma farklı metabolitleri ve potansiyel olarak Roman Feromonlar biyosentetik yolları öngörülen vermemektedirler benzersiz kimyasal iskeletler ile yol açabilir.
Burada, biz yalıtmak ve erkek deniz taşemen seks feromon bileşiklerin bioactivity karakterize için kullanılan bioassay güdümlü ayırma iletişim kuralı tanımlamak. Deniz taşemen (Petromyzon marinus) Bu balıklar ağır üç ayrı aşamadan oluşan anadromous onların yaşam öyküsü arabuluculuk kimyasal cues koku algılamayı dayandığından feromon iletişim eğitim için ideal bir omurgalı modelidir: Larvalar, çocuk ve yetişkin. Deniz taşemen larvaları tatlı su akışları tortu yuva, köklü bir metamorfoz geçmesi ve bir göl veya nerede büyük konak balık parasitize okyanus geçirmek gençlere dönüştürün. Ana bilgisayar balıktan ayırma sonra yetişkin yumurtlama akarsu geri akışı yerleşik larva15,16,17,18tarafından,19 serbest göçmen Feromonlar rehberliğinde göç . Olgun erkek yumurtlamabölgelerine dönmek çıkmak, arkadaşları çekmek, yaklaşık bir hafta için zaman zaman spawn ve sonra15,20ölmek çok bileşenli seks feromon serbest. Deniz taşemen Feromonlar tanımlaması önemli çünkü bir modülasyon feromon iletişim sisteminin Laurentian büyük göller21invaziv deniz lampreys kontrol etmek için kabul seçenekler arasında yer alıyor.

<table><tbody><tr><td>Premium standard wall borosilicate capillaries with filament&amp;nbsp;</td><td>Warner Instruments</td><td>G150F-4</td><td>recording and reference electrode (OD 1.5 mm, ID 0.86 mm)</td></tr><tr><td>Pipette puller instrument</td><td>Narishige</td><td>PC-10</td><td>pulls electrodes for EOGs</td></tr><tr><td>Diamond-tipped glass cutter</td><td>Generic</td><td></td><td>cut tip of electrodes for EOG</td></tr><tr><td>Borosilicate glass capillaries</td><td>World Precision Instruments</td><td>1B150-4</td><td>odorant delivery tube for EOG</td></tr><tr><td>Recording electrode holder E Series straight body with Ag/AgCl pellet for glass capillary OD 1.5 mm</td><td>Warner Instruments</td><td>ESP-M15N</td><td>recording electrode holder</td></tr><tr><td>Reference electrode holder E Series with handle with&amp;nbsp; Ag/AgCl pellet&amp;nbsp; for glass capillary OD 1.5 mm</td><td>Warner Instruments</td><td>E45P-F15NH</td><td>reference electrode holder</td></tr><tr><td>1 mm pin</td><td>Warner Instruments</td><td>WC1-10</td><td>to bridge reference and recording electrode holders</td></tr><tr><td>2 mm pin</td><td>Warner Instruments</td><td>WC2-5</td><td>to bridge reference and recording electrode holders</td></tr><tr><td>Agar</td><td>Sigma</td><td>A1296</td><td>molten agar to fill electrodes</td></tr><tr><td>Potassium chloride (KCl)</td><td>Sigma</td><td>P9333</td><td>3M KCl to fill electrodes and electrode holders</td></tr><tr><td>Micropipette microfil</td><td>World Precision Instruments</td><td>MF28G-5</td><td>to fill electrodes and electrode holders</td></tr><tr><td>L-Arginine</td><td>Sigma</td><td>A5006</td><td>positive control odorant for EOG</td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Sigma</td><td>34860</td><td></td></tr><tr><td>Water bath</td><td>Custom made</td><td>N/A</td><td>holds odorants for EOG</td></tr><tr><td>3-aminobenzoic acid ethyl ester (MS222)</td><td>Syndel USA</td><td>Tricaine1G</td><td>EOG anesthetic</td></tr><tr><td>Gallamine triethiodide</td><td>Sigma</td><td>G8134-5G</td><td>EOG paralytic</td></tr><tr><td>1 mL syringe</td><td>BD Biosciences</td><td>301025</td><td>to administer paralytic</td></tr><tr><td>Subcutaneous needle 26G 5/8</td><td>BD Biosciences</td><td>305115</td><td>to administer paralytic</td></tr><tr><td>Roller clamp</td><td>World Precision Instruments</td><td>14043-20</td><td>adjust flow rate of anesthic into lamprey&#039;s mouth</td></tr><tr><td>Sodium chloride (NaCl)</td><td>J.T. Baker</td><td>3624-05</td><td>for preparation of 0.9% saline</td></tr><tr><td>V-shaped plastic stand as specimen stage</td><td>Custom made</td><td>N/A</td><td>holds lamprey during EOG</td></tr><tr><td>Plastic trough</td><td>Custom made</td><td>N/A</td><td>holds V-shaped plastic stand during EOG</td></tr><tr><td>Scalpel Blades - #11</td><td>Fine Science Tools</td><td>10011-00</td><td>for EOG dissection</td></tr><tr><td>Scalpel Handle - #3</td><td>Fine Science Tools</td><td>10003-12</td><td>for EOG dissection</td></tr><tr><td>Straight ultra fine forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-00</td><td>for EOG dissection, Dumont #5SF Forceps</td></tr><tr><td>Curved ultra fine forceps</td><td>Fine Science Tools</td><td>11370-42</td><td>for EOG dissection, Moria MC40B</td></tr><tr><td>Straight pring Scissors</td><td>Fine Science Tools</td><td>15003-08</td><td>for EOG dissection</td></tr><tr><td>Stereomicroscope</td><td>Zeiss</td><td>Discovery V8</td><td>for EOG dissection</td></tr><tr><td>Illuminator light</td><td>Zeiss</td><td>CL 1500 ECO</td><td>for EOG dissection</td></tr><tr><td>Plastic tubing</td><td>Generic</td><td></td><td>to connect re-circulating EOG setup and water baths</td></tr><tr><td>Odorant delivery tubing</td><td>Custom made</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>In line filter and gasket set</td><td>Lee Company</td><td>TCFA1201035A</td><td></td></tr><tr><td>Micromanipulators</td><td>Narishige</td><td>MM-3</td><td>to position electrodes and odorant delivery capillary tube</td></tr><tr><td>Magnetic holding devices</td><td>Kanetec</td><td>MB-K</td><td></td></tr><tr><td>Valve driver</td><td>Arduino</td><td>custom made</td><td>to control the opening of the valve for odor stimulation</td></tr><tr><td>Electromagnetic valve</td><td>Lee Company</td><td>LFAA1201618H</td><td>valve for odor stimulation</td></tr><tr><td>NeuroLog AC/DC amplifier</td><td>Digitimer Ltd.</td><td>NL106</td><td>to increase the amplitude of the elictrical signal</td></tr><tr><td>NeuroLog DC pre-amplifier with headstage</td><td>Digitimer Ltd.</td><td>NL102G</td><td>to increase the amplitude of the elictrical signal</td></tr><tr><td>Low-pass 60 Hz filter</td><td>Digitimer Ltd.</td><td>NL125</td><td></td></tr><tr><td>Digitizer</td><td>Molecular Devices LLC</td><td>Axon Digidata 1440A</td><td></td></tr><tr><td>Dell computer (OptiPlex 745) running Axoscope data acquistion software</td><td>Molecular Devices LLC</td><td>AxoScope version 10.4</td><td></td></tr><tr><td>Faraday cage</td><td>Custom made</td><td>N/A</td><td>Electromagnetic noise shielding</td></tr><tr><td>Two-choice maze</td><td>Custom made</td><td>N/A</td><td>waterproofed marine grade plywood covered with plastic liner</td></tr><tr><td>Trash pump</td><td>Honda</td><td>WT30XK4A</td><td>fills maze with water from nearby river</td></tr><tr><td>Peristaltic pump with tubing</td><td>Cole Parmer</td><td>Masterflex 07557-00</td><td>to adminster odorants in maze</td></tr><tr><td>Inverter Generator</td><td>Honda</td><td>EU1000i</td><td>powers perstaltic pump</td></tr><tr><td>Release cage</td><td>Custom made</td><td>N/A</td><td>used to acclimate lamprey in the maze</td></tr><tr><td>Mesh</td><td>Generic</td><td></td><td>used to contain the dimensions of the maze and minimize water turbulance with mesh rollers</td></tr><tr><td>Buckets (5 gallon)</td><td>Generic</td><td></td><td>to mix odorants</td></tr><tr><td>Flow meter</td><td>Marsh-McBirney</td><td>Flo-Mate 2000</td><td>to measure discharge</td></tr><tr><td>XAD 7 HP resin</td><td>Dow chemical</td><td>37380-43-1</td><td>for extraction of conditioned water&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Sigma</td><td>34860</td><td>for extraction of conditioned water&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Water bath</td><td>Yamato</td><td>BM 200</td><td>for extraction of conditioned water&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Freeze dryer</td><td>Labconco</td><td>CentriVap Concentrator</td><td>for extraction of conditioned water</td></tr><tr><td>chloroform</td><td>Sigma</td><td>CX1050</td><td>for isolation of fraction pools</td></tr><tr><td>Silica gel 70-230 mesh</td><td>Sigma</td><td>112926-00-8</td><td>for isolation of fraction pools</td></tr><tr><td>Silica gel 230-400 mesh</td><td>Sigma</td><td>112926-00-8</td><td>for isolation of fraction pools</td></tr><tr><td>Pre-coated silica gel TLC plates</td><td>Sigma</td><td>99571</td><td>for isolation of fraction pools</td></tr><tr><td>anisaldehyde</td><td>Sigma</td><td>A88107</td><td>for isolation of fraction pools</td></tr><tr><td>Sephadex LH-20</td><td>GE Healthcare</td><td>17-0090-01</td><td>for isolation of fraction pools</td></tr><tr><td>Amberlite XAD 7 HP resin</td><td>Sigma</td><td>XAD7HP</td><td>for extraction of conditioned water&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>4, 2.5L capacity glass columns</td><td>Ace Glass Inc.</td><td>5820</td><td>for extraction of conditioned water&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>Acetone</td><td>Sigma</td><td>650501</td><td>for extraction of conditioned water&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>TQ-S TOF LC Mass spectrometer (or equivalent)</td><td>Waters Co.</td><td>N/A</td><td>for structure elucidation</td></tr><tr><td>Binary HPLC pump</td><td>Waters Co.</td><td>1525</td><td>for isolation of fraction pools/compounds</td></tr><tr><td>Agilent NMR spectrometer, 900MHz (or equivalent)</td><td>Agilent</td><td>N/A</td><td>for structure elucidation</td></tr><tr><td>Rotovap drying system</td><td>Buchi</td><td>RII</td><td>for extraction of conditioned water&amp;nbsp;</td></tr><tr><td>UV lamp (254 nm)</td><td>Spectronics Co.</td><td>ENF-240C</td><td>for thin layer chromatography&amp;nbsp;</td></tr></tbody></table>

the identification of sea lamprey pheromones using bioassay-guided fractionation

Bioassay-güdümlü ayırma Kılavuzu yalıtım ve bir etkin feromon bileşik tanımlaması için fizyolojik ve davranışsal biyoanalizler sonuçlarını kullanır yinelemeli bir yaklaşımdır. Bu yöntem başarılı alan nitelik özellikleri kimyasal sinyallerin Feromonlar hayvan türlerinin geniş bir alanda olarak bu işlev sonuçlandı. Deniz lampreys davranış ya da fizyolojik yanıt aracılık Feromonlar tespit etmek için koku alma üzerinde güveniyor. Biz bu bilgi balık biyoloji sözde Feromonlar işlevlerini yerine koymak ve Kılavuzu yalıtım ve etkin feromon bileşenleri tanımlaması için kullanın. Kromatografi ayıklamak, konsantre ve bileşikleri şartına sudan ayırmak için kullanılır. Elektro-olfactogram (EOG) kayıtları hangi kesirler koku yanıt-e doğru çıkarmak belirlemek için yapılmaktadır. İki seçenekli labirent davranış deneyleri daha sonra herhangi bir kokulu kesirler de davranışsal etkindir ve neden bir tercih belirlemek için kullanılır. Spektrometrik ve spektroskopik Yöntemler moleküler ağırlık ve yapısı aydınlatma ile yardımcı olacak yapısal bilgiler sağlar. Bioactivity saf bileşiklerin EOG ve davranışsal deneyleri ile doğrulanır. Labirent içinde gözlenen davranış yanıt sonuçta kendi işlevleriyle bir doğal akışı ayarı onaylamak için bir alan ortamda doğrulanması. Bu biyoanalizler 1) ayırma işlemi yol ve 2) onaylamak için ikili bir rol oynar ve daha fazla ayrılmış bileşenleri bioactivity tanımlamak. Burada, bioassay güdümlü ayırma yaklaşım yarar reaksiyonların bir deniz taşemen feromon kimlik temsilcisi sonuçları raporu. Deniz taşemen Feromonlar tanımlaması invaziv deniz taşemen Laurentian göller denetlemek için kabul seçenekler arasında bir modülasyon feromon iletişim sistemi olduğu için özellikle önemlidir. Bu yöntemi özellikleri geniş bir dizi iletişim kimyasal karakterize ve su bazlı kimyasal ekoloji ışık için kolayca adapte edilebilir.

Bioassay-güdümlü Ayırma Protokolü içinde açıklanan adımları özetleyen bir diyagram Şekil 1' de gösterilen. Protokol yalıtmak ve yapısı, koku kudret ve davranış etkinliği 5 sözde deniz taşemen Feromonlar (Şekil 2) ile karakterize için adımları içerir. Kütle spektrometrik ve NMR veri (Şekil 3 ve Şekil 4) kullanarak, petromyzene A-B ve petromyzo...

Watch this Scientific Journal Video about The Identification of Sea Lamprey Pheromones Using Bioassay-Guided Fractionation at JoVE.com

The Identification of Sea Lamprey Pheromones Using Bioassay-Guided Fractionation

Burada, ayırmak ve yapısını, koku kudret ve deniz lampreys, sözde feromon bileşiklerin davranışsal yanıt karakterize bir iletişim kuralı mevcut.

Bioassay-güdümlü ayırma kullanarak deniz taşemen Feromonlar tanımlaması

Bioassay-guided fractionation is an iterative approach that uses the results of physiological and behavioral bioassays to guide the isolation and ...

the-identification-sea-lamprey-pheromones-using-bioassay-guided

Research

JoVE Journal

Biochemistry

8.9K Görüntüleme.  Michigan State University. Burada, ayırmak ve yapısını, koku kudret ve deniz lampreys, sözde feromon bileşiklerin davranışsal yanıt karakterize bir iletişim kuralı mevcut.

Video: The Identification of Sea Lamprey Pheromones Using Bioassay-Guided Fractionation

A Fish-feeding Laboratory Bioassay to Assess the Antipredatory Activity of Secondary Metabolites from the Tissues of Marine Organisms

Marine chemical ecology is a young discipline, having emerged from the collaboration of natural products chemists and marine ecologists in the 1980s with the goal of examining the ecological functions of secondary metabolites from the tissues of marine organisms. The result has been a progression of protocols that have increasingly refined the ecological relevance of the experimental approach. Here we present the most up-to-date version of a fish-feeding laboratory bioassay that enables investigators to assess the antipredatory activity of secondary metabolites from the tissues of marine organisms. Organic metabolites of all polarities are exhaustively extracted from the tissue of the target organism and reconstituted at natural concentrations in a nutritionally appropriate food matrix. Experimental food pellets are presented to a generalist predator in laboratory feeding assays to assess the antipredatory activity of the extract. The procedure described herein uses the bluehead, Thalassoma bifasciatum, to test the palatability of Caribbean marine invertebrates; however, the design may be readily adapted to other systems. Results obtained using this laboratory assay are an important prelude to field experiments that rely on the feeding responses of a full complement of potential predators. Additionally, this bioassay can be used to direct the isolation of feeding-deterrent metabolites through bioassay-guided fractionation. This feeding bioassay has advanced our understanding of the factors that control the distribution and abundance of marine invertebrates on Caribbean coral reefs and may inform investigations in diverse fields of inquiry, including pharmacology, biotechnology, and evolutionary ecology.

This bioassay employs a model predatory fish to assess the presence of feeding-deterrent metabolites from organic extracts of the tissues of marine organisms at natural concentrations using a nutritionally comparable food matrix.

Bir Balık-besleme Laboratuvar biyodeneyinde Deniz Organizmaların Dokular Sekonder Metabolitlerin Antipredatory Aktivite değerlendirmek için

Marine chemical ecology is a young discipline, having emerged from the collaboration of natural products chemists and marine ecologists in the 1980s with ...

Çevre

Chemical Isolation, Quantification, and Separation of Skin Lipids from Reptiles

Reptiles signal to conspecifics using lipids in their skin, primarily to enable mate tracking and assessment. The isolation of these lipids has utility in research focused on evolutionary patterns and mechanisms of chemical communication, in addition to understanding the waterproofing role of lipids in the evolution of terrestrial life. In an applied approach, such skin-based cues have potential use for wildlife managers dealing with invasive species. The main steps for quantifying reptile skin lipids in the protocol presented here include extraction, total lipid determination, and fractionation via column chromatography, the latter process resulting in purified eluates of compounds which can then either be analyzed to assign compound identifications (e.g., gas chromatography-mass spectrometry [GC-MS]) and/or used directly in more refined bioassays. Skin lipids can be extracted from living skin, shed skin, or dead whole animals, using nonpolar organic solvents (e.g., hexane, benzene, toluene). Extraction solubilizes the lipids and, then, the solvent can be evaporated to yield a measurable lipid-only extract. Fractionation involves the separation of the total lipid extract into specific eluates via traditional column chromatography. The total lipid extract is first bound to a substrate-based column (e.g., alumina) and, then, individual eluates (&#34;fractions&#34;) of solvent at specific volumes are passed sequentially through the column to elute sets of compounds from the lipid mixture based on common polarity. The fractions progress in polarity at a standardized sequence by increasing the relative amount of polar solvent (e.g., diethyl ether) in nonpolar solvent. In this manuscript, we describe several methods for extracting skin lipids of reptiles and, then, provide a standard protocol for isolating different sets of compounds based on polarity, using traditional column chromatography. Whole lipid extracts or specific fractions can, then, be used in bioassays to determine any biological activity elicited by the compounds therein.

In reptiles, skin lipids from conspecifics are crucial for sexual signaling, with potential use in invasive species management. Here, we describe protocols for extracting skin lipids from shed skin or whole animals, determining and analyzing the total lipid mass, and separating the lipids using fractionation via column chromatography.

Kimyasal yalıtım, miktar ve sürüngenler cilt lipidler, ayrılık

Reptiles signal to conspecifics using lipids in their skin, primarily to enable mate tracking and assessment. The isolation of these lipids has utility in ...

Multi-Faceted Mass Spectrometric Investigation of Neuropeptides in Callinectes sapidus

Neuropeptides are signaling molecules that regulate almost all physiological and behavioral processes, such as development, reproduction, food intake, and response to external stressors. Yet, the biochemical mechanisms and full complement of neuropeptides and their functional roles remain poorly understood. Characterization of these endogenous peptides is hindered by the immense diversity within this class of signaling molecules. Additionally, neuropeptides are bioactive at concentrations 100x - 1000x lower than that of neurotransmitters and are prone to enzymatic degradation after synaptic release. Mass spectrometry (MS) is a highly sensitive analytical tool that can identify, quantify, and localize analytes without comprehensive a priori knowledge. It is well-suited for globally profiling neuropeptides and aiding in the discovery of novel peptides. Due to the low abundance and high chemical diversity of this class of peptides, several sample preparation methods, MS acquisition parameters, and data analysis strategies have been adapted from proteomics techniques to allow optimal neuropeptide characterization. Here, methods are described for isolating neuropeptides from complex biological tissues for sequence characterization, quantitation, and localization using liquid chromatography (LC)-MS and matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI)-MS. A protocol for preparing a neuropeptide database from the blue crab, Callinectes sapidus, an organism without comprehensive genomic information, is included. These workflows can be adapted to study other classes of endogenous peptides in different species using a variety of instruments.

Multi-Faceted Mass Spectrometric Investigation of Neuropeptides in Callinectes sapidus

Mass spectrometric characterization of neuropeptides provides sequence, quantitation, and localization information. This optimized workflow is not only useful for neuropeptide studies, but also other endogenous peptides. The protocols provided here describe sample preparation, MS acquisition, MS analysis, and database generation of neuropeptides using LC-ESI-MS, MALDI-MS spotting, and MALDI-MS imaging.

Callinectes sapidus'ta Nöropeptitlerin Çok Yönlü Kütle Spektrometrik Araştırması

Neuropeptides are signaling molecules that regulate almost all physiological and behavioral processes, such as development, reproduction, food intake, and ...

Kimya

Analysis of Lipid Signaling in Drosophila Photoreceptors using Mass Spectrometry

The activation of phospholipase C&#946; (PLC&#946;) is an essential step during sensory transduction in Drosophila photoreceptors. PLC&#946; activity results in the hydrolysis of the membrane lipid phosphatidylinositol 4,5 bisphosphate [PI(4,5)P2] leading ultimately to the activation of transient receptor potential (TRP) and TRP like (TRPL) channels. The activity of PLC&#946; also leads subsequently to the generation of many lipid species several of which have been proposed to play a role in TRP and TRPL activation. In addition, several classes of lipids have been proposed to play key roles in organizing the cell biology of photoreceptors to optimize signaling reactions for optimal sensory transduction. Historically, these discoveries have been driven by the ability to isolate Drosophila mutants for enzymes that control the levels of specific lipids and perform analysis of photoreceptor physiology in these mutants. More recently, powerful mass spectrometry methods for isolation and quantitative analysis of lipids with high sensitivity and specificity have been developed. These are particularly suited for use in Drosophila where lipid analysis is now possible from photoreceptors without the need for radionuclide labeling. In this article, the conceptual and practical considerations in the use of lipid mass spectrometry for the robust, sensitive, and accurate quantitative assessment of various signaling lipids in Drosophila photoreceptors are covered. Along with existing methods in molecular genetics and physiological analysis such lipid is likely to enhance the power of photoreceptors as a model system for discoveries in biology.

Analysis of Lipid Signaling in Drosophila Photoreceptors using Mass Spectrometry

The manuscript presents versatile, robust, and sensitive mass spectrometry protocols to identify and quantify several classes of lipids from Drosophila photoreceptors.

The activation of phospholipase C&#946; (PLC&#946;) is an essential step during sensory transduction in Drosophila photoreceptors. PLC&#946; activity ...

Biyokimya

Identification of Hemolytic and Phospholipase Activity in Crude Extracts from Sea Anemones by Straightforward Bioassays

Sea anemone venom composition includes polypeptide and non-proteins molecules. Cytolytic components have a high biotechnological and biomedical potential for designing new molecular tools. Sea anemone venom locates in glandular cells from ectoderm and sub-cellular structures called nematocysts, both of which are distributed throughout the sea anemone body. This characteristic implies challenges because the cells and nematocyst must be lysed to release the venom components with other non-toxic molecules. Therefore, first, the venom is derived from a crude extract (mixture of different and diverse molecules and tissue debris). The next step is to detect polypeptides with specific bioactivities. Here, we describe an efficient strategy to obtain the sea anemone crude extract and bioassay to identify the presence of cytolysins. The first step involves inexpensive and straightforward techniques (stirred and freeze-thaw cycle) to release cytolysins. We obtained the highest cytolytic activity and protein (~500 mg of protein from 20 g of dry weight). Next, the polypeptide complexity of the extract was analyzed by SDS-PAGE gel detecting proteins with molecular weights between 10 kDa and 250 kDa. In the hemolytic assay, we used sheep red blood cells and determined HU50 (11.1 &plusmn; 0.3 &#181;g/mL). In contrast, the presence of phospholipases in the crude extract was determined using egg yolk as a substrate in a solid medium with agarose. Overall, this study uses an efficient and inexpensive protocol to prepare the crude extract and applies replicable bioassays to identify cytolysins, molecules with biotechnological and biomedical interests.

Here, we describe a protocol to obtain crude venom extract from sea anemone and detect its hemolytic and phospholipase activity.

Deniz Anemonlardan Elde Edilen Ham Ekstraktlarda Hemolitik ve Fosfolipaz Aktivitesinin Basit Biyotahlillerle Tanımlanması

Sea anemone venom composition includes polypeptide and non-proteins molecules. Cytolytic components have a high biotechnological and biomedical potential ...

<meta charset="utf8"></head><body>C. elegans'ta Uçucu Seks Feromon Yanıtlarının Ekstraksiyonu ve Miktarının Belirlenmesi

Volatile Sex Pheromone Extraction and Chemoattraction Assay in Caenorhabditis elegans

Chemical communication is vital in organismal health, reproduction, and overall well-being. Understanding the molecular pathways, neural processes, and computations governing these signals remains an active area of research. The nematode Caenorhabditis elegans provides a powerful model for studying these processes as it produces a volatile sex pheromone. This pheromone is synthesized by virgin females or sperm-depleted hermaphrodites and serves as an attractant for males.
This protocol describes a detailed method for isolating the volatile sex pheromone from several C. elegans strains (WT strain N2, daf-22, and fog-2) and C. remanei. We also provide a protocol for quantifying the male chemotaxis response to the volatile sex pheromone. Our analysis utilizes measurements such as chemotaxis index (C.I.), arrival time (A.T.), and a trajectory plot to compare male responses under various conditions accurately. This method allows for robust comparisons between males of different genetic backgrounds or developmental stages. Furthermore, the experimental setup outlined here is adaptable to investigating other chemoattraction chemicals.

<meta charset="utf8"></head><body>Yazar Spotlight: Erkek C. elegans Davranışı Üzerindeki Uçucu Seks Feromon Etkisinin İncelenmesi

This protocol establishes methods for extracting and quantifying responses to the volatile sex pheromone in C. elegans, providing tools to study chemical communication and navigation trajectory.

Caenorhabditis elegans'ta Uçucu Seks Feromon Ekstraksiyonu ve Kemocazibe Testi

Chemical communication is vital in organismal health, reproduction, and overall well-being. Understanding the molecular pathways, neural processes, and ...

Davranış

Electroantennographic Bioassay as a Screening Tool for Host Plant Volatiles

Plant volatiles play an important role in plant-insect interactions. Herbivorous insects use plant volatiles, known as kairomones, to locate their host plant.1,2 When a host plant is an important agronomic commodity feeding damage by insect pests can inflict serious economic losses to growers. Accordingly, kairomones can be used as attractants to lure or confuse these insects and, thus, offer an environmentally friendly alternative to pesticides for insect control.3 Unfortunately, plants can emit a vast number volatiles with varying compositions and ratios of emissions dependent upon the phenology of the commodity or the time of day. This makes identification of biologically active components or blends of volatile components an arduous process. To help identify the bioactive components of host plant volatile emissions we employ the laboratory-based screening bioassay electroantennography (EAG). EAG is an effective tool to evaluate and record electrophysiologically the olfactory responses of an insect via their antennal receptors. The EAG screening process can help reduce the number of volatiles tested to identify promising bioactive components. However, EAG bioassays only provide information about activation of receptors. It does not provide information about the type of insect behavior the compound elicits; which could be as an attractant, repellent or other type of behavioral response. Volatiles eliciting a significant response by EAG, relative to an appropriate positive control, are typically taken on to further testing of behavioral responses of the insect pest. The experimental design presented will detail the methodology employed to screen almond-based host plant volatiles4,5 by measurement of the electrophysiological antennal responses of an adult insect pest navel orangeworm (Amyelois transitella) to single components and simple blends of components via EAG bioassay. The method utilizes two excised antennae placed across a "fork" electrode holder. The protocol demonstrated here presents a rapid, high-throughput standardized method for screening volatiles. Each volatile is at a set, constant amount as to standardize the stimulus level and thus allow antennal responses to be indicative of the relative chemoreceptivity. The negative control helps eliminate the electrophysiological response to both residual solvent and mechanical force of the puff. The positive control (in this instance acetophenone) is a single compound that has elicited a consistent response from male and female navel orangeworm (NOW) moth. An additional semiochemical standard that provides consistent response and is used for bioassay studies with the male NOW moth is (Z,Z)-11,13-hexdecadienal, an aldehyde component from the female-produced sex pheromone.6-8

A method to rapidly screen host plant volatiles by measurement of the electrophysiological response of adult navel orangeworm (Amyelois transitella) antennae to single components and blends via electroantennographic analysis is demonstrated.

Konak Bitki uçucu için bir tarama aracı olarak Electroantennographic Biyoassay

Plant volatiles play an important role in plant-insect interactions. Herbivorous insects use plant volatiles, known as kairomones, to locate their host ...

Biyoloji

C. elegans Chemotaxis Assay

Many organisms use chemotaxis to seek out food sources, avoid noxious substances, and find mates. Caenorhabditis elegans has impressive chemotaxis behavior.
 The premise behind testing the response of the worms to an odorant is to place them in an area and observe the movement evoked in response to an odorant. Even with the many available assays, optimizing worm starting location relative to both the control and test areas, while minimizing the interaction of worms with each other, while maintaining a significant sample size remains a work in progress 1-10. The method described here aims to address these issues by modifying the assay developed by Bargmann et al.1. A Petri dish is divided into four quadrants, two opposite quadrants marked "Test" and two are designated "Control". Anesthetic is placed in all test and control sites. The worms are placed in the center of the plate with a circle marked around the origin to ensure that non-motile worms will be ignored. Utilizing a four-quadrant system rather than one 2 or two 1 eliminates bias in the movement of the worms, as they are equidistant from test and control samples, regardless of which side of the origin they began. This circumvents the problem of worms being forced to travel through a cluster of other worms to respond to an odorant, which can delay worms or force them to take a more circuitous route, yielding an incorrect interpretation of their intended path. This method also shows practical advantages by having a larger sample size and allowing the researcher to run the assay unattended and score the worms once the allotted time has expired.

C. elegans Chemotaxis Assay

A method of quantitatively evaluating the chemotactic response of Caenorhabditis elegans is described. A chemotactic index (CI) was employed as a way to precisely evaluate the response of worms to certain targets, and serve as a platform of comparison between strains and compounds of interest.

C. elegans Kemotaksis Deneyi

Many organisms use chemotaxis to seek out food sources, avoid noxious substances, and find mates.  Caenorhabditis elegans has impressive chemotaxis ...

Bioassay-güdümlü ayırma kullanarak deniz taşemen Feromonlar tanımlaması

Özet

Daha Fazla Video Keşfet

Bu videodaki bölümler

Bir Balık-besleme Laboratuvar biyodeneyinde Deniz Organizmaların Dokular Sekonder Metabolitlerin Antipredatory Aktivite değerlendirmek için

Kimyasal yalıtım, miktar ve sürüngenler cilt lipidler, ayrılık

Callinectes sapidus'ta Nöropeptitlerin Çok Yönlü Kütle Spektrometrik Araştırması

Analysis of Lipid Signaling in Drosophila Photoreceptors using Mass Spectrometry

Deniz Anemonlardan Elde Edilen Ham Ekstraktlarda Hemolitik ve Fosfolipaz Aktivitesinin Basit Biyotahlillerle Tanımlanması

Caenorhabditis elegans'ta Uçucu Seks Feromon Ekstraksiyonu ve Kemocazibe Testi

Caenorhabditis elegans'ta Uçucu Seks Feromon Ekstraksiyonu ve Kemocazibe Testi

Caenorhabditis elegans'ta Uçucu Seks Feromon Ekstraksiyonu ve Kemocazibe Testi

Konak Bitki uçucu için bir tarama aracı olarak Electroantennographic Biyoassay

C. elegans Kemotaksis Deneyi