Bu yayında bildirilen araştırma Ulusal Enstitüsü artrit ve Musculoskeletal tarafından desteklendi ve cilt hastalıkları Ulusal Sağlık Enstitüleri Ödülü altında F30AR071201 ve R01AR066028 sayısı.

Bu iletişim kuralı hayvanlar gereksiz yere kullanılmaz ve tüm gereksiz acı ve sıkıntı kurtulmuş sağlamak için geliştirilmiştir; Tüm federal, eyalet, yerel ve kurumsal yasalara ve hayvan araştırma yöneten kurallar bağlı kalır. Protokol bir üniversite genelinde laboratuvar hayvan tıp programı yanında veterinarians laboratuvar hayvan tıpta uzman gözetiminde geliştirilmiştir. Protokol gözden geçirilmiş ve kurumsal hayvan bakım ve kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmış.
1. kırık kule İnşaat
Not: Malzeme kısım (Malzemeler tablo) tüm parçalar listelenir. Detaylı teknik çizimler ek rakamlar 1-12işlenmiş ve 3D baskılı bölümlerinde verilmektedir. Yarı mamul için teknik çizimler için tüm bağlı parçaları (ek rakamlar 1, 2, 7 ve 9) fastener ayrıntılarını içerir.
<ol><li>
Yarı mamul için destek Not: destek yarı mamul teknik çizim için ek resim 1bakın.<ol>
<li>Işın desteği--yatay bölümorta noktasını de Işın desteği--çene bölümüne ekleyin.</li>
		<li>Işın desteği--dikey 1 Işın desteği--çene bölümü, Işın desteği--yatay bölüm2 üst yüzeyine takın.</li>
		<li>Işın desteği--dikey 2 orta nokta (7 sonundan itibaren), Kiriş desteği--yatay bölüm üst yüzeyine takın.</li>
		<li>Eni, destek--plaka monte Işın desteği--dikey 1 ve Işın desteği--dikey 2ucunu takın. Plaka destek sona ermesi Işın destek--dikey 2arkası ile aynı hizada olmalıdır.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
RAM takılabilir düzeneği Not: ram yarı mamul teknik çizim için Tamamlayıcı Şekil 2bakın.<ol>
<li>Makineli blok durdurmak ve blok Kılavuzu (ek şekil 3); çubuk Ram (ek Şekil 4); vida hizalama (ek Şekil 5); ve montaj plakası (ek Şekil 6).</li>
		<li>Montaj plakası Işın destek--plaka monte destek düzeneği için ekleyin.</li>
		<li>Aşağıdaki sıraya göre ilk Doğrusal kol taşıyanslayt; blok Kılavuzu; İkinci Kol doğrusal rulman; ve blok durdurmak Rod Ramüzerinde. Kılavuzları ve bloklar Montaj plakasıiçin ekleyin.</li>
		<li>⅜-in üç fındık Rod Ramdişli bölümüne ekleyin. Bir çubuk ile Elektromıknatıs girişme sonu ile aynı hizada olmalıdır. Diğer 2 kırık derinliği ayarlamak için kullanılır.</li>
		<li>Yüzünü öne dön ve Hizalama vida Blok Kılavuzuvida dişli delik eklemek için Çubuk Ram koruda hizalayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Mıknatıs düzeneği Not: ek Şekil 7için teknik çizim mıknatıs düzeneği bakın.<ol>
<li>Elektromıknatıs yol açar tel lehim (polarite Elektromıknatıs işlemi için bir faktör değildir). Nerede kırık aygıt yerleştirilmiş olacak yere ulaşmak yeterli uzunluğa izin ver. Kullanım ZIP bağları ya da başka bir formu ek stres rahatlatmak tel.</li>
		<li>Güç kaynağı' nın son şerit ve Ayak pedalıiçin bağlayın. Son olarak, "(normalde açık) off" yapılandırmasında Ayak pedalı tel bağlayın. Ayak pedalı anahtarı değil basıldığında Elektromıknatıs üzerinde olduğundan emin olmak için devre test. Bu kırık önce ram konur.</li>
		<li>Mount mıknatıs (ek rakamlar 8A ve 8B) yazdırmak bir katkı üretim aygıtı kullanarak veya alüminyum bölümünden makine.</li>
		<li>Elektromıknatıs Mount mıknatısiçin ekleyin.</li>
		<li>2 köşesine parantez için ışın desteği--mıknatısiliştirin.</li>
		<li>Aşağıdaki sırada üst Köşe aparatı ile Çubuk mıknatıs konu ve ¼ içinde bir fındık ekleyin; Mount mıknatıs; ¼-in iki fındık; ve alt Köşe aparatı. Derleme ¼-in her ucunda iki fındık ile güvenli.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Tam derleme Not: tam derleme teknik çizim için Tamamlayıcı Şekil 9bakın.<ol>
<li>Mıknatıs düzeneği eni, destek--plaka monteüst yüzeyine takın.</li>
		<li>Mıknatıs çubuk, Ramile yürütmektedir Işın desteği--mıknatıs hizalamasını ayarlayın. Not: ayak pedalı basıldığında çubuk serbest bırakmıyor, elektromanyetik ve çubuk arasındaki temas bölgesinin Eni desteği--mıknatıshareket ettirerek azaltın.</li>
		<li>Çene parantez bacak (ek Şekil 10) makine.</li>
		<li>İki Parantez bacak çene için Işın desteği--çene bölümekleyin. Bıraktığımda, ram ucu her çene uzaklık eşit olmalıdır.</li>
		<li>Platform kırık yerleştirin (takıma giren rakamlar 11A ve 11B) Çene yukarıda.</li>
		<li>Jig konumlandırma kırık yazdırma (takıma giren rakamlar 12A ve 12B) ve Jig PIN ölçer (takıma giren rakamlar 13A ve 13B) bir katkı üretim aygıtı kullanarak veya makine Alüminyum parçalar. Not: 2. adımda ayrıntılı optimizasyonu adımda Jigs boyutları hesaplanır.</li>
		<li>Jig kırık konumlandırma için Platform kırıkiliştirin.</li>
		<li>Etkisi derinliği iki durak fındık üzerinde Çubuk Ramkullanılarak ayarlanabilir onaylayın.</li>
		<li>Çarpışma hızı Mount mıknatıs yukarı ve aşağı hareket ettirerek ayarlanabilir onaylayın.</li>
		<li>Kırık genişliğini Parantez bacak çene daha yakın veya uzak Rod Ramdaha fazla hareket ettirerek ayarlanabilir onaylayın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. kırık en iyi duruma getirme
<ol><li>Kırık konumu
	<ol>
<li>Ekstremite (femur veya tibia) 5 euthanized hayvanlar temsil edici bir örnek içinde kırılmış için ilerlemenin elde edilir. Not: Yaş, genotip ve seks dayalı deneysel protokolünde kullanılan numuneler için örnek uyumlu olması. Son iletişim kuralı yalnızca bir kırık bacak için ararsa bile, her iki örnek bacaklarda kullanılacaktır.</li>
		<li>Pozisyon kemik için true-lateral ve anterior/arka sayısı elde etmek için röntgen ışını teğet bacak. Analiz için bir ölçek sağlamak için görüntüleme uçak en bilinen Boyut nesne yerleştirin.</li>
		<li>Not: Eğer kemiklerine Imaging, femur tibia olarak Aksiyel aynı düzlemde nerede tam uzantısındaki ampütasyonu olduğundan emin olun.</li>
		<li>İstenen işaretlemek için bacak grafisi kırık konumunu kırılmış (Şekil 1A - kesikli çizgi). Tibial kalkaneal eklemi işaretli kırığı (Şekil 1A) düzeyini ölçmek. Kötü kırık uzunluğu (FL) tüm deneme örnekleri için hesaplayın. Uyluk kemiği kırıkları için intercondylar çentik üzerinden ölçmek.</li>
	</ol></li>
	<li>Jig kırık konumlandırma
	<ol>
<li>Bir destek örs dış yüzeyinden Giyotin etkisi (CGI) (Şekil 2) merkezine uzaklığı ölçmek. Kırık konumlandırma jig Derinlik (JD) hesaplamak için adım 2.1.4, açıklanan FL, üzerinden CGI çıkarma. Makine veya 3D baskı U şeklinde bir kanal bir yükseklik ve genişlik eşit örs ve bir derinlik JD için (Şekil 3A) eşit. Bir örnek teknik çizim ve CAD dosyası dahil edilen takıma giren rakamlar 12A ve 12B. Not: bacak içinde jig yerleştirildiğinde, ayak patolojisi Giyotin etkisi uzak yüzeye karşı yalan söylemeliyim. Bacak için ek boşluk gerekiyorsa U şeklinde kanal değiştirin.</li>
		<li>Numune kırık aparatı yüzükoyun uyluk kemiği kırıkları için veya tibia kırığı (Şekil 4) için sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Ayak kırığı konumlandırma jig sonu karşı patolojisi tuşuna basın. El ile Giyotin Ekstremite kırıkları kadar bunalıma girmek. Jig boyutu ve kırık yer (Şekil 2B) onaylamak için kırık bacak bir grafisi edinin.</li>
		<li>Kırık kemik üzerinde çok distal konumuysa JD artırıp kırık konumu çok proksimal kemik üzerinde ise JD azaltabilirsiniz.</li>
	</ol></li>
	<li>PIN parametrelerinin sabitleme
	<ol>
<li>
Pin süre: 2.1. adımda elde ilerlemenin kullanarak, ekstremite Uzunluk (LL) tibial Plato tibia kırığı için posterior fibula veya uyluk kemiği kırıkları için daha fazla trochanter için intercondylar çentik düzeyini ölçmek. Kemik uzunluğu (PL) (Şekil 1A ve 3B) PIN uzunluğunu hesaplamak için 0,9 tarafından çarpın.</li>
		<li>
Pin genişliği: 2.1. adımda elde ilerlemenin kullanarak, minimum medüller çap (MD) (resim 1A) kırık bacak ölçmek. Bir ölçüm medüller çapı ve uzunluğu yaklaşık olarak eşdeğer bir iğneyle fazla 1.5 x PLseçin. Not: Bir yaklaşık PIN 14-hafta-yaşlı C57BL/6J fare 22 G, 1½ içinde ve 27 G, femur ve tibia, içinde 1¼ sırasıyla boyutudur.</li>
	</ol></li>
	<li>PIN kesme ölçer
	<ol>
<li>2.4.1. makine veya 3D baskı bir ölçüm iğne uzunluğu (CGL) (Şekil 3B; PL için eşit uzunluğu Takıma giren rakamlar 13A ve 13B). Bir ucu iğne hub karşı dinlenmek için bir çıkıntı olmalıdır ve diğer PIN nerede kesilmelidir belirtmelidir. Bir örnek teknik çizim ve CAD dosyası dahil edilen takıma giren rakamlar 13A ve 13B.</li>
	</ol></li>
	<li>İntramedüller PIN kırılma sabitleme
	<ol>
<li>2.1. adımdaki kırılmış deneme örnekleri kullanarak, bir elektrik kesme makinesi veya depilatory krem ile orta tibia orta femur, diz eklemi açığa tüylerden.</li>
		<li>
Tibia sabitleme: patellar bağ iğneyle yanal iğne yerleştirin. Patella bağ hemen geri çekin ve iğne tibia eksenine göre hizalayın. Reaming bir hareket kullanarak, yavaşça tibial Plato ihlal ve iğne medüller kavite aşağı yol.</li>
		<li>
Femur sabitleme: patellar bağ iğneyle yanal iğne yerleştirin. Patella bağ hemen geri çekin ve iğne intercondylar çentik uyluk eksenine göre hizalayın. Reaming bir hareket kullanarak, yavaşça intercondylar çentik eklem yüzeyi ihlal ve iğne medüller kavite aşağı yol.</li>
		<li>Maruz kalan iğne ölçer uzunluğa eşit olana 2.4 adımda üretilen ölçer kullanarak, ream. Ölçer tarafından belirtilen düzeyinde iğne kesmek için yeterli yer (~ 3 mm) sağlamak için iğne geri çek. Not: tehlikeli bir mermi olmak değil bu yüzden iğne proksimal (plastik) sonu kesim sırasında tutmak emin olun.</li>
		<li>Bir PIN kesici kullanarak PIN distal ucunun 0.3 mm sarılmış ve PIN ölçer düzeyinde kesti. İğne çapı daha büyük x 1.5 çapında bir çubuk kullanarak eklem yüzeyi için PIN lavabo. Not: Sıkma döndürme iğne ve göç iğne-kemik temas artırarak önler.</li>
		<li>İğne ampütasyonu medüller Kanal uzunluğu genişletir ve proksimal veya distal ucundan (Şekil 1C) çıkıntı değil onaylamak için ilerlemenin elde edilir.</li>
	</ol></li>
	<li>Etki derinliği
	<ol>
<li>2.1. adımda elde ilerlemenin kullanarak, istenen kırığı (Şekil 1A) düzeyde korteks çapını ölçün. Ortalama kortikal çapı (CD) için tüm deneme örnekleri hesaplayın.</li>
		<li>2.2. adımda üretilen kırık konumlandırma jig ile kırık cihazın 2.5 adımda sabitlenmiş bir deneme örneği yerleştirin. Etkisi ram yaralı bacak üzerinde bekletin. Not: bırakmak ram izin vermez; kemik bu optimizasyon adım sırasında olduğu gibi kalır.</li>
		<li>Yeterince aşağı kuvvet yumuşak doku sıkıştırmak, ancak kemik kırık değil için ram üzerinde uygulamak. 0,75 x CD (Şekil 2) (ID) etkisi derinliğini ayarlayın. Not: İdeal etki derinliği 0.5 x CD olmadan herhangi bir yumuşak doku kemik kırılma olduğunda. 0,75 hesapları için ek yumuşak doku sıkıştırma kullanarak.</li>
	</ol></li>
	<li>Örs genişliği
	<ol>
<li>Örs genişliği (AW) 0,4 cm fare tibia veya uyluk kemiği (Şekil 2) için ayarlayın. Not: Daha geniş genişlik fareler gibi daha büyük örnekler için önerilir.</li>
	</ol></li>
	<li>RAM ağırlık
	<ol>
<li>En az bir kilo 250 g fare numuneler için önerilir. Not: Ek ağırlık büyük örnekler (Şekil 2) üstünde-e doğru belgili tanımlık koç dişli.</li>
	</ol></li>
	<li>Çarpma hızı
	<ol>
<li>Damla yüksekliği (DH) 2 cm (Şekil 2) ayarlayın. Ram için aktif Elektromıknatıs bağlanarak başlangıç konumuna getirin.</li>
		<li>Deneme bir bacak kırık cihaz getirin. 2.2. adımda üretilen kırık konumlandırma jig karşı ayak patolojisi tuşuna basın. Kısaca footswitch ram serbest bırakmak için basın ve sonra başlangıç konumuna sıfırlamak.</li>
		<li>Etkilenen deneme uzuv grafisi. Bacak bir kırık (Şekil 1D) herhangi bir kanıt için analiz. Not: Bu düşük hızları ile kontrollü etki derinliği kullanırken ince olabilir.</li>
		<li>Hiçbir kırık oluşturulursa, adımları 2.9.1 - 2.9.3 yineleyin ve 2 cm damla yüksekliğini artırın.</li>
		<li>Bir kırık oluşturulursa, damla yüksekliği kaydetmek ve 1.1 ile çarpın. Yeni DHburası.</li>
		<li>2.9.5 adımdaki DH kullanarak, bir sonraki deneme bacak kırığı.</li>
		<li>Hiçbir kırık oluşturulursa, adımları 2.9.1 - 2.9.6 yineleyin ve 2 cm damla yüksekliğini artırın.</li>
		<li>Bir kırık oluşturulan, tekrar adımları 2.9.6 - tüm örnekleri test kadar 2.9.7 kullanılır. Son DH ve optimizasyon üzerinden tüm parametreleri (FL, CGI, JD, PL, MD, PS, CGI, CD, kimliği, AWve RW) kaydedin. Deneme örnekleri yaş, cinsiyet, genotip ve ağırlık kaydedin.</li>
	</ol></li>
</ol>3. kapalı stabilize kırık üretimi
<ol><li>
Kurulum
	<ol>
<li>Tüm ekipman ve Araçlar üzerinden otoklav, sıcak boncuk daldırma veya onların eşdeğer sterilize.</li>
		<li>Bir ısıtma elemanı cerrahi tablasına yerleştirin ve en uygun sıcaklık ayarlayın. Öğe bir cerrahi örtüsü ile kapak. 3 x 3'te2 -cerrahi örtüsü ortasında kesip bir 0,75 içinde daire ile hazır olun.</li>
		<li>Her deneme (Şekil 2) önce kırık kule düzeltilmesi onaylayın. Kimliği, AW, RWve DH cinsiyet, yaş ve genotip belirlenmesi numune için belirli en iyi duruma getirme kuralından türetilmiş değerleri ayarlayın.</li>
		<li>Tartmak ve hayvan ağırlığını kaydedin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Cerrahi
	<ol>
<li>Yeterince soluk çeken anestezikler kullanarak fare sakinleştirici (isoflurane: indüksiyon için % 4-5; bakım için % 1-2) veya başka bir laboratuvar anestezi Protokolü kuruldu. Solunum hızı 55-100 nefes/dakika olmalıdır. Hayvan hind-bacak ayak birazcık duyarlı olmamalıdır.</li>
		<li>Ameliyat sonrası analjezi buprenorfin ilk doz (0.1 mg/kg subkutan).</li>
		<li>Oküler yağlama kornea kurutma önlemek için geçerlidir.</li>
		<li>Hayvanın saç bir elektrik kesme makinesi ile orta tibia orta femur, diz eklemi açığa çıkarın. Reaktif olmayan bant kullanarak kıllarında sitenin temiz. % 70 ile nemlendirilmiş bir ıslak bez ile sabitleme site hazırlamak alkol. Tüm saç kesi alanından kaldırmak gerektiğinde yineleyin.</li>
		<li>Hazırlamak ve sabitleme alanının povidone-iyot ve % 70 alternatif temizleme bezi ile temiz alkol. Kısırlık emin olmak için iki alternatif çubukla sıraları kullanın.</li>
		<li>Cilt uygun şekilde dezenfekte sonra bir örtüsü sonra cerrahi site çevresinde yer alıyor.</li>
		<li>PIN uzuv 2.5. adımda anlatılan protokolünü kullanarak kırılmış. PIN medüller Kanal uzunluğu genişletiyor ancak proksimal veya distal ucundan çıkıntı değil onaylamak için ilerlemenin elde etmek.</li>
		<li>Elektromıknatıs üzerinde açın ve başlangıç bulunduğu yere etkisi ram bağlayın.</li>
		<li>Numune yüzükoyun uyluk kemiği kırıkları için veya tibia kırığı için sırtüstü pozisyonda yerleştirerek kırık cihaz getirin. Sabitlenmiş uzuv örs ve jig dış karşı basıldığında ayak patolojisi ile kırık konumlandırma jig içinde yer almalıdır.</li>
		<li>Tek elle ayak basarak ve etkisi içinde sadece bacak sağlanması hedef alan ram olsa da, kısaca ram serbest bırakmak için footswitch düşürmek. Başlangıç pozisyonuna RAM'de değiştirin.</li>
		<li>İlerlemenin elde etmek ve kırık konumu ve türü onaylayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Ameliyat sonrası yönetim
	<ol>
<li>Her 15 dakikada kendi kurtarma sırasında anestezi hayvan kadar bilinçli, sternal recumbency koruyabilirsiniz.. hayvan izlemek Ambulatuar. Hayvan bir 72-saat süre içinde ambulate mümkün olduğunu doğrulayın.</li>
		<li>Tamamen iyileşmiş kadar hayvan tek tek ev.</li>
		<li>48-h süre buprenorfin ile analjezi sağlamak (0.1 mg/kg subkutan) her 12 h yönetilen.</li>
		<li>İzlemek ve günlük için 7-10 d veya ötenazi kadar hayvan sağlık durumunu kaydetmek.</li>
	</ol>
</li>
	<li>
Sonrası kırık Analizi
	<ol>
<li>Ölçü FL, PL, CD, MD ve kırık desen. Ölçümler bir ana veri dosyası olarak kaydedin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

<ol>
	<li>Corso, P., Finkelstein, E., Miller, T., Fiebelkorn, I., Zaloshnja, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Incidence+and+lifetime+costs+of+injuries+in+the+United+States.">Incidence and lifetime costs of injuries in the United States.</a> Injury Prevention. 12 (4), 212-218 (2006).</li><li>Nguyen, N. D., Ahlborg, H. G., Center, J. R., Eisman, J. A., Nguyen, T. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Residual+lifetime+risk+of+fractures+in+women+and+men.">Residual lifetime risk of fractures in women and men.</a> Journal of Bone and Mineral Research: The Official Journal of the American Society for Bone and Mineral Research. 22 (6), 781-788 (2007).</li><li>Thompson, Z., Miclau, T., Hu, D., Helms, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+model+for+intramembranous+ossification+during+fracture+healing.">A model for intramembranous ossification during fracture healing.</a> Journal of Orthopaedic Research: Official Publication of the Orthopaedic Research Society. 20 (5), 1091-1098 (2002).</li><li>Cheung, K. M. C., Kaluarachi, K., Andrew, G., Lu, W., Chan, D., Cheah, K. S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+externally+fixed+femoral+fracture+model+for+mice.">An externally fixed femoral fracture model for mice.</a> Journal of Orthopaedic Research. 21 (4), 685-690 (2003).</li><li>Connolly, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+reliable+externally+fixated+murine+femoral+fracture+model+that+accounts+for+variation+in+movement+between+animals.">A reliable externally fixated murine femoral fracture model that accounts for variation in movement between animals.</a> Journal of Orthopaedic Research. 21 (5), 843-849 (2003).</li><li>Histing, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+internal+locking+plate+to+study+intramembranous+bone+healing+in+a+mouse+femur+fracture+model.">An internal locking plate to study intramembranous bone healing in a mouse femur fracture model.</a> Journal of Orthopaedic Research. 28 (3), 397-402 (2010).</li><li>Gr&#246;ngr&#246;ft, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fixation+compliance+in+a+mouse+osteotomy+model+induces+two+different+processes+of+bone+healing+but+does+not+lead+to+delayed+union.">Fixation compliance in a mouse osteotomy model induces two different processes of bone healing but does not lead to delayed union.</a> Journal of Biomechanics. 42 (13), 2089-2096 (2009).</li><li>Bonnarens, F., Einhorn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+a+standard+closed+fracture+in+laboratory+animal+bone.">Production of a standard closed fracture in laboratory animal bone.</a> Journal of Orthopaedic Research. 2 (1), 97-101 (1984).</li><li>Huang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+spatiotemporal+role+of+COX-2+in+osteogenic+and+chondrogenic+differentiation+of+periosteum-derived+mesenchymal+progenitors+in+fracture+repair.">The spatiotemporal role of COX-2 in osteogenic and chondrogenic differentiation of periosteum-derived mesenchymal progenitors in fracture repair.</a> PloS One. 9 (7), 100079 (2014).</li><li>Waki, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Profiling+microRNA+expression+during+fracture+healing.">Profiling microRNA expression during fracture healing.</a> BMC Musculoskeletal Disorders. 17, 83 (2016).</li><li>Yee, C. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sclerostin+antibody+treatment+improves+fracture+outcomes+in+a+Type+I+diabetic+mouse.">Sclerostin antibody treatment improves fracture outcomes in a Type I diabetic mouse.</a> Bone. 82, 122-134 (2016).</li><li>Wong, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+low-molecular-weight+compound+enhances+ectopic+bone+formation+and+fracture+repair.">A novel low-molecular-weight compound enhances ectopic bone formation and fracture repair.</a> The Journal of Bone and Joint Surgery. American Volume. 95 (5), 454-461 (2013).</li><li>Prodinger, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Does+Anticoagulant+Medication+Alter+Fracture-Healing?+A+Morphological+and+Biomechanical+Evaluation+of+the+Possible+Effects+of+Rivaroxaban+and+Enoxaparin+Using+a+Rat+Closed+Fracture+Model.">Does Anticoagulant Medication Alter Fracture-Healing? A Morphological and Biomechanical Evaluation of the Possible Effects of Rivaroxaban and Enoxaparin Using a Rat Closed Fracture Model.</a> PloS One. 11 (7), 0159669 (2016).</li><li>Menzdorf, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+pamidronate+influences+fracture+healing+in+a+rodent+femur+fracture+model:+an+experimental+study.">Local pamidronate influences fracture healing in a rodent femur fracture model: an experimental study.</a> BMC Musculoskeletal Disorders. 17, 255 (2016).</li><li>Hagiwara, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fixation+stability+dictates+the+differentiation+pathway+of+periosteal+progenitor+cells+in+fracture+repair.">Fixation stability dictates the differentiation pathway of periosteal progenitor cells in fracture repair.</a> Journal of Orthopaedic Research: Official Publication of the Orthopaedic Research Society. 33 (7), 948-956 (2015).</li><li>Gardner, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+fracture+healing+resulting+from+fixation+stiffness+variability:+a+mouse+model.">Differential fracture healing resulting from fixation stiffness variability: a mouse model.</a> Journal of Orthopaedic Science: Official Journal of the Japanese Orthopaedic Association. 16 (3), 298-303 (2011).</li><li>Catma, M. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Remote+ischemic+preconditioning+enhances+fracture+healing.">Remote ischemic preconditioning enhances fracture healing.</a> Journal of Orthopaedics. 12 (4), 168-173 (2015).</li><li>Lichte, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impaired+Fracture+Healing+after+Hemorrhagic+Shock.">Impaired Fracture Healing after Hemorrhagic Shock.</a> Mediators of Inflammation. 2015, 132451 (2015).</li><li>Lopas, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fractures+in+geriatric+mice+show+decreased+callus+expansion+and+bone+volume.">Fractures in geriatric mice show decreased callus expansion and bone volume.</a> Clinical Orthopaedics and Related Research. 472 (11), 3523-3532 (2014).</li><li>Bonnarens, F., Einhorn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+a+standard+closed+fracture+in+laboratory+animal+bone.">Production of a standard closed fracture in laboratory animal bone.</a> Journal of orthopaedic research. 2 (1), 97-101 (1984).</li><li>Marturano, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+improved+murine+femur+fracture+device+for+bone+healing+studies.">An improved murine femur fracture device for bone healing studies.</a> Journal of Biomechanics. 41 (6), 1222-1228 (2008).</li><li>Jackson, R. W., Reed, C. A., Israel, J. A., Abou-Keer, F. K., Garside, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+a+standard+experimental+fracture.">Production of a standard experimental fracture.</a> Canadian Journal of Surgery. Journal Canadien De Chirurgie. 13 (4), 415-420 (1970).</li><li>Byrne, M., Cleveland, B., Marturano, J., Wixted, J., Billiar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Design+of+a+reproducible+murine+femoral+fracture+device.+Conference:+Bioengineering+Conference,+2007.">Design of a reproducible murine femoral fracture device. Conference: Bioengineering Conference, 2007.</a> NEBC '07. IEEE 33rd Annual Northeast. , (2007).</li><li>Carter, D. R., Hayes, W. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Compact+bone+fatigue+damage-I.+Residual+strength+and+stiffness.">Compact bone fatigue damage-I. Residual strength and stiffness.</a> Journal of Biomechanics. 10 (5), 325-337 (1977).</li><li>McGee, A., Qureshi, A., Porter, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Review+of+the+biomechanics+and+patterns+of+limb+fractures.">Review of the biomechanics and patterns of limb fractures.</a> Trauma. 6 (1), 29-40 (2004).</li></ol>

Yazarlar ifşa gerek yok.

Bu kırık en iyi duruma getirme ve üretimi iletişim kuralı araştırmacılar kırık parametreleri türetme yapıp yapmayacağınızı ve hassas, tekrarlanabilir, enine kırıklarında üretir minimal invaziv bir işlem gerçekleştirmek için verimli bir yöntem sağlar. Ayrıca, bu protokol yöntemi tutarlılık araştırmacılar arasında teşvik kırık üretimi parametreleri, ortak bir dizi oluşturur. Bu parametreler parametreleri (Örneğin, yaş, cinsiyet, cinsiyet ve genotip) çeşitli üzerinde day...

Kırık iyileşmesi araştırma büyük bir klinik ve ekonomik sorunu çözmek gereklidir. Her yıl 12 milyon kırıklar Amerika Birleşik Devletleri1, maliyet $80 milyar yıl2başına ele alınır. Bir erkek veya kadın bir kırık onların yaşam boyu acı olasılığı % 25 ve % 44, sırasıyla3olduğunu. Kırık iyileşmesi ile ilgili sorunları ile nüfus yaş olarak artan comorbidities artış bekleniyor. Çalışma ve bu sorunu çözmek için kırık üretimi ve sabitleme sağlam modellerinin gereklidir. Kemirgen modelleri ideal bu amaç için uygundur. Onlar klinik önemi sağlamak ve adresi belirli koşullara (yani, birden fazla yaralanmalar, açık, kapalı, iskemik ve virüslü kırıklar) değiştirilebilir. Klinik senaryoları çoğaltma ek olarak, hayvan kırık modelleri kemik biyoloji ve gelişmekte olan tedavi ve aygıtların anlamak için önemlidir. Ancak, müdahaleler arasında farklılıklar çalışmaya girişimleri tutarsız kırık oluşturma tarafından kullanılmaya başlandı değişkenlik karmaşık. Böylece, tekrarlanabilir ve sürekli olarak kapalı kırık hayvan modellerinde üreten kas-iskelet araştırma alanı için esastır.
Düzgün potansiyel konu heterojenite için uygun genetik arka plan, cinsiyet, yaş ve çevre koşulları sağlayarak kontrol rağmen klinik olarak ilgili tutarlı kemik kırıklarının önemli bir değişken yapımıdır etkileyen tekrarlanabilirlik kontrol altına alınmalı. Tutarsız kırıklar kullanarak istatistiksel karşılaştırmaları deneysel gürültü ve yüksek değişkenlik4ile veba; Buna ek olarak, kırık değişkenliğine örnek boyutu veya parçalanmış veya malpositioned kırıklar hayvanlarla ötenazi için zorunluluk artırmak için ihtiyacı nedeniyle gereksiz hayvan ölüme neden olabilir. Burada açıklanan yöntemin amacı örnek türüne özgü kırık üretimi parametreler optimize etmektir ve tutarlı kırık konumu ve desen verim.
Kırık nesil mevcut modelleri kendi güçlü ve zayıf yönleri ile her iki geniş kategoriye ayrılır. Açık-kırık (osteotomi) modelleri sonra bir kırık kemik kesme veya bu zayıflaması ve sonra el ile5,6,7,8kırılma indüklenen kemik, ortaya çıkarmak için ameliyat. Bu yöntem faydaları kırık site ve bir daha tutarlı kırık konum ve desen doğrudan görselleştirme vardır. Ancak, fizyolojik ve klinik yaklaşım alaka ve yaralanma mekanizması sınırlıdır. Ayrıca, açık kırık üretimi yöntemlerinin cerrahi yaklaşım ve kapatma sırasında kontaminasyon riski için kemirgenler maruz kalır uzun süre ile gerektirir.
Kapalı teknikleri birçok açık teknik sınırlamaları gidermek. Kapalı teknikleri kırık kemik ve çevre dokular, daha fazla insan klinik yaralanmaları görülen benzer yaralanma indükler bir dışarıdan uygulanan künt cisim travması kullanarak üretmek. En yaygın yöntem 19849' Bonnarens ve Einhorn tarafından tanımlanmıştır. Onlar herhangi bir dış deri yaraları neden olmadan kemik kırmaya künt travma vermek için kullanılan ağırlıklı bir Giyotin nitelendirdi. Bu yöntem yaygın genetik10,11, farmakolojik tedavi12,13,14,15, mekanik16, etkisini incelemek için kabul edilmiş 17ve Fizyoloji18,19,20 fare ve sıçanlar şifa kemik. Kapalı yöntemleri yararına fizyolojik ilgili kırıklar olmakla birlikte, deneysel tekrarlanabilirlik ve titizlik kırık heterojenite tarafından sınırlıdır. Tutarsız kırık üretimi sınırlı grup arasında ayırt etme, kayıp numuneler ve istatistiksel anlamlılık ulaşmak için gereken hayvan artış sonuçlanır.
Değişkenlik kırık üretimi ve istikrar kontrol anlamlı sonuçlar üretmek için esastır. Kırık tamir biyoloji düzgün çalışması için basit ama sağlam bir kırık manken gereklidir. Model kemirgen türleri, kemik türleri (femur veya tibiae, örneğin) ve değişken fare genetik arka planlar genelinde çevrilebilir olmalı ve mutasyonlar indüklenen. Ayrıca, ideal yordamı Teknik olarak basit ve tutarlı sonuçlar üretmek gerekir. Adres kırık heterojenite için burada açıklanan yöntemi daha sonra parametreler optimize etmek ve ne olursa olsun yaş, cinsiyet veya genotip sürekli kapalı kırık oluşturmak için kullanılabilir bir iyi kontrollü kırık aygıt yapıdır.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:911px;" width="910">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:240px;">Support Subassembly</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td style="width:315px;">Supplementary Figure 1</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Beam, Support--Jaw Section&#160;</td>
			<td style="width:209px;">80/20</td>
			<td>1003 x 9.00</td>
			<td>w/ #7042 at A, C, in Left End</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Beam, Support--Horizontal Section</td>
			<td style="width:209px;">80/20</td>
			<td>1002 x 14.00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Beam, Support--Vertical 1</td>
			<td style="width:209px;">80/20</td>
			<td>1050 x 10.50&#160;</td>
			<td>w/ #7042 at A in Left End and at A in Right End</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Beam, Support--Vertical 2</td>
			<td style="width:209px;">80/20</td>
			<td>1010 x 10.50&#160;</td>
			<td>w/ #7042 at D, B in Left End and at A in Right End</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Beam, Support--Plate Mount</td>
			<td style="width:209px;">80/20</td>
			<td>1030 x 8.00&#160;</td>
			<td>w/ #7036 at Left End</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Beam, Support--Magnet</td>
			<td style="width:209px;">80/20</td>
			<td>1010 x 13.50&#160;</td>
			<td>w/ #7042 at A, C, in Right End</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Anchors (3)</td>
			<td style="width:209px;">80/20</td>
			<td style="width:147px;">3392</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Double Anchor (3)</td>
			<td style="width:209px;">80/20</td>
			<td style="width:147px;">3091</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Bolt Assembly (6)</td>
			<td style="width:209px;">80/20</td>
			<td style="width:147px;">3386</td>
			<td>1/4-20 x 3/8&#34;</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Button Head Socket Cap Screw (6)</td>
			<td style="width:209px;">80/20</td>
			<td style="width:147px;">3604</td>
			<td>1/4-20 x 3/4&#34;</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Ram Subassembly</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td>Supplementary Figure 2</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Block, Stop</td>
			<td style="width:209px;">Custom</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td>Supplementary Figure 3</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Block, Guide</td>
			<td style="width:209px;">Custom</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td>Supplementary Figure 3</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Rod, Ram</td>
			<td style="width:209px;">Custom</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td>Supplementary Figure 4</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Alignment Screw</td>
			<td style="width:209px;">Custom</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td>Supplementary Figure 5</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Plate, Mounting</td>
			<td style="width:209px;">Custom</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td>Supplementary Figure 6</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Linear Sleeve Bearing (2)</td>
			<td style="width:209px;">McMaster-Carr</td>
			<td style="width:147px;">8649T2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Hex Nut (3)</td>
			<td style="width:209px;">McMaster-Carr</td>
			<td>92673A125</td>
			<td>3/8-16 UNC</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Socket Cap Screw (8)</td>
			<td style="width:209px;">McMaster-Carr</td>
			<td style="width:147px;">92196A108</td>
			<td>4/40 x 3/8&#34;</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Socket Cap Screw (6)</td>
			<td style="width:209px;">McMaster-Carr</td>
			<td style="width:147px;">92196A032</td>
			<td>4/40 x 1 1/8&#34;</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Socket Cap Screw (1)</td>
			<td style="width:209px;">McMaster-Carr</td>
			<td style="width:147px;">92196A267&#160;</td>
			<td>10/32 3/8&#34;</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Magnet Subassembly</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td>Supplementary Figure 7</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Mount, Magnet</td>
			<td style="width:209px;">Custom</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td>Supplementary Figure 8</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Power Supply</td>
			<td style="width:209px;">McMaster-Carr</td>
			<td>70235K23</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Foot Switch</td>
			<td style="width:209px;">McMaster-Carr</td>
			<td>7376k2</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Electromagnet</td>
			<td style="width:209px;">McMaster-Carr</td>
			<td>5698k111</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Wire - 10 feet</td>
			<td style="width:209px;">McMaster-Carr</td>
			<td style="width:147px;">9936k12</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">Rod, Magnet</td>
			<td style="width:209px;">McMaster-Carr</td>
			<td>95412A566</td>
			<td>1/4&#34; Threaded Rod x 7&#34;</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Corner Bracket (6)</td>
			<td style="width:209px;">80/20</td>
			<td style="width:147px;">4108</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Socket Cap Screw (1)</td>
			<td style="width:209px;">McMaster-Carr</td>
			<td style="width:147px;">92196A705</td>
			<td>10/32 1 1/4&#34;</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Hex Nut (4)</td>
			<td style="width:209px;">McMaster-Carr</td>
			<td>92673A113</td>
			<td>1/4-20 UNC</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Complete Assembly</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td>Supplementary Figure 9</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Bracket, Leg Jaw (2)</td>
			<td style="width:209px;">Custom</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td>Supplementary Figure 10</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Platform, Fracture</td>
			<td style="width:209px;">Custom</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td>Supplementary Figure 11</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Jig, Positioning-Fracture</td>
			<td style="width:209px;">Custom</td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td>Supplementary Figure 12</td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Other</td>
			<td style="width:209px;"></td>
			<td style="width:147px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Pin Cutter</td>
			<td style="width:209px;">Medical Supplies and Equipment</td>
			<td style="width:147px;">150S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;width:240px;">Needles</td>
			<td style="width:209px;">Sigma</td>
			<td style="width:147px;">Z192430, Z192376&#160;</td>
			<td>23g x 1.5&#34; - mouse femur, 27g x 1.25&#34; - mouse tibia</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

fracture apparatus design and protocol optimization for closed-stabilized fractures in rodents

Hayvan modellerinde tutarlı stabilize kırıklar güvenilir nesil kemik rejenerasyon biyoloji anlama ve tedavi ve cihazlar geliştirmek için önemlidir. Ancak, mevcut yaralanma modelleri boşa hayvanlar ve kaynakları ve kusurlu veri sonucu tutarsızlık boğulmuş. Kırık heterojenite bu sorunu çözmek için burada açıklanan yöntemin amacı kırık üretimi parametreleri her hayvan için belirli optimize etmek ve bir tutarlı kırık konum ve desen verim etmektir. Bu iletişim kuralı kemik boyutu ve fare suşları arasında bulunabilir ve tutarlı kırıklar sıçan gibi diğer türler oluşturmak için adapte edilebilir morfoloji hesapları. Ayrıca, bir maliyet-etkin, ayarlanabilir kırık aparatı açıklanmıştır. Geçerli stabil kırığı teknikleri için karşılaştırıldığında, en iyi duruma getirme Protokolü ve yeni kırık aparatı stabil kırığı desen ve mekanlar artan tutarlılık göstermektedir. Kullanarak parametreleri örnek türüne, açıklanan protokol artar bağlı travmalar, genellikle kapalı kırık üretimi yordamlarda gözlenen kırık heterojenite minimize duyarlığını optimize.

Daha önce bizim Laboratuvarda kullanılan Giyotin ve 2004 yılında geliştirilen Einhorn21tarafından yayınlanan modeller dayanıyordu. Tasarım ayarlamalar yeterli kemik morfoloji tüm farklılıkları hesaba izin ve tekrarlanabilir bir uzuv konumlandırma izin değil. Ayrıca, önceki aparatı bunu çalıştırmak iki kişi gerekir. Bu nedenle, biz tasarlanmış, mühendislik ve yeni bir kırık aparatı inşa. Ana tasarım hedefi kırık derinlik, darbe kuvve...

Watch this Scientific Journal Video about Fracture Apparatus Design and Protocol Optimization for Closed-stabilized Fractures in Rodents at JoVE.com

Fracture Apparatus Design and Protocol Optimization for Closed-stabilized Fractures in Rodents

Tutarlı kırıklar verim için kırık üretimi parametrelerini optimize etmek için protokol hedefidir. Bu iletişim kuralı kemik boyutu ve hayvanlar arasında varolabilir morfoloji değişimler hesapları. Ayrıca, bir maliyet-etkin, ayarlanabilir kırık aparatı açıklanmıştır.

Kırık cihazları tasarımı ve kapalı-sağlamlık kırıklar Rodents için protokol optimizasyon

The reliable generation of consistent stabilized fractures in animal models is essential for understanding the biology of bone regeneration and developing ...

fracture-apparatus-design-protocol-optimization-for-closed-stabilized

Research

JoVE Journal

Medicine

13.3K Görüntüleme.  Michigan State University. Tutarlı kırıklar verim için kırık üretimi parametrelerini optimize etmek için protokol hedefidir. Bu iletişim kuralı kemik boyutu ve hayvanlar arasında varolabilir morfoloji değişimler hesapları. Ayrıca, bir maliyet-etkin, ayarlanabilir kırık aparatı açıklanmıştır.

Video: Fracture Apparatus Design and Protocol Optimization for Closed-stabilized Fractures in Rodents

The Use of Cystometry in Small Rodents: A Study of Bladder Chemosensation

The lower urinary tract (LUT) functions as a dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a convenient time. While storing urine, however, the bladder is exposed for prolonged periods to waste products. By acting as a tight barrier, the epithelial lining of the LUT, the urothelium, avoids re-absorption of harmful substances. Moreover, noxious chemicals stimulate the bladder's nociceptive innervation and initiate voiding contractions that expel the bladder's contents. Interestingly, the bladder's sensitivity to noxious chemicals has been used successfully in clinical practice, by intravesically infusing the TRPV1 agonist capsaicin to treat neurogenic bladder overactivity1. This underscores the advantage of viewing the bladder as a chemosensory organ and prompts for further clinical research. However, ethical issues severely limit the possibilities to perform, in human subjects, the invasive measurements that are necessary to unravel the molecular bases of LUT clinical pharmacology. A way to overcome this limitation is the use of several animal models2. Here we describe the implementation of cystometry in mice and rats, a technique that allows measuring the intravesical pressure in conditions of controlled bladder perfusion.
	After laparotomy, a catheter is implanted in the bladder dome and tunneled subcutaneously to the interscapular region. Then the bladder can be filled at a controlled rate, while the urethra is left free for micturition. During the repetitive cycles of filling and voiding, intravesical pressure can be measured via the implanted catheter. As such, the pressure changes can be quantified and analyzed. Moreover, simultaneous measurement of the voided volume allows distinguishing voiding contractions from non-voiding contractions3.
	Importantly, due to the differences in micturition control between rodents and humans, cystometric measurements in these animals have only limited translational value4. Nevertheless, they are quite instrumental in the study of bladder pathophysiology and pharmacology in experimental pre-clinical settings. Recent research using this technique has revealed the key role of novel molecular players in the mechano- and chemo-sensory properties of the bladder.

Cystometry is an efficient technique to measure bladder function of small animals in vivo. The bladder is continuously infused at rates controlled through an intravesical catheter, whereas the urethra is left free for micturition. This allows for repetitive filling and emptying of the bladder, while intravesical pressure and voided volume are recorded.

Küçük Kemirgenler sistometri ve Kullanımı: Mesane Chemosensation Çalışması

	The lower urinary tract (LUT) functions as a  dynamic reservoir that is able to store urine and to efficiently expel it at a  convenient time. While ...

Tıp

Collection Protocol for Human Pancreas

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation of pancreas recovered from cadaveric organ donors. The pancreas is divided into 3 main regions (head, body, tail) followed by serial transverse sections throughout the medial to lateral axis. Alternating sections are used for fixed paraffin and fresh frozen blocks and remnant samples are minced for snap frozen sample preparations, either with or without RNAse inhibitors, for DNA, RNA, or protein isolation. The overall goal of the pancreas dissection procedure is to sample the entire pancreas while maintaining anatomical orientation.
Endocrine cell heterogeneity in terms of islet composition, size, and numbers is reported for human islets compared to rodent islets 1. The majority of human islets from the pancreas head, body and tail regions are composed of insulin-containing &beta;-cells followed by lower proportions of glucagon-containing &alpha;-cells and somatostatin-containing &delta;-cells. Pancreatic polypeptide-containing PP cells and ghrelin-containing epsilon cells are also present but in small numbers. In contrast, the uncinate region contains islets that are primarily composed of pancreatic polypeptide-containing PP cells 2. These regional islet variations arise from developmental differences. The pancreas develops from the ventral and dorsal pancreatic buds in the foregut and after rotation of the stomach and duodenum, the ventral lobe moves and fuses with the dorsal 3. The ventral lobe forms the posterior portion of the head including the uncinate process while the dorsal lobe gives rise to the rest of the organ. Regional pancreatic variation is also reported with the tail region having higher islet density compared to other regions and the dorsal lobe-derived components undergoing selective atrophy in type 1 diabetes4,5.
Additional organs and tissues are often recovered from the organ donors and include pancreatic lymph nodes, spleen and non-pancreatic lymph nodes. These samples are recovered with similar formats as for the pancreas with the addition of isolation of cryopreserved cells. When the proximal duodenum is included with the pancreas, duodenal mucosa may be collected for paraffin and frozen blocks and minced snap frozen preparations.

This video demonstrates a dissection procedure for processing human pancreas into multiple storage formats. Anatomical orientation is maintained throughout the pancreatic regions to allow definition of regional islet composition and density.

İnsan Pankreas için Toplama Protokolü

This dissection and sampling procedure was developed for the Network for Pancreatic Organ Donors with Diabetes (nPOD) program to standardize preparation ...

Parabiosis in Mice: A Detailed Protocol

Parabiosis is a surgical union of two organisms allowing sharing of the blood circulation. Attaching the skin of two animals promotes formation of microvasculature at the site of inflammation. Parabiotic partners share their circulating antigens and thus are free of adverse immune reaction. First described by Paul Bert in 18641, the parabiosis surgery was refined by Bunster and Meyer in 1933 to improve animal survival2. In the current protocol, two mice are surgically joined following a modification of the Bunster and Meyer technique. Animals are connected through the elbow and knee joints followed by attachment of the skin allowing firm support that prevents strain on the sutured skin. Herein, we describe in detail the parabiotic joining of a ubiquitous GFP expressing mouse to a wild type (WT) mouse. Two weeks after the procedure, the pair is separated and GFP positive cells can be detected by flow cytometric analysis in the blood circulation of the WT mouse. The blood chimerism allows one to examine the contribution of the circulating cells from one animal in the other.

Parabiotic joining of two organisms leads to the development of a shared circulatory system. In this protocol, we describe the surgical steps to form a parabiotic connection between a wild-type mouse and a constitutive GFP-expressing mouse.

Farelerde parabiyoz: Detaylı Bir Protokol

Parabiosis is a surgical union of two organisms allowing sharing of the blood circulation. Attaching the skin of two animals promotes formation of ...

Cell-based Assay Protocol for the Prognostic Prediction of Idiopathic Scoliosis Using Cellular Dielectric Spectroscopy

This protocol details the experimental and analytical procedure for a cell-based assay developed in our laboratory as a functional test to predict the prognosis of idiopathic scoliosis in asymptomatic and affected children. The assay consists of the evaluation of the functional status of Gi and Gs proteins in peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) by cellular dielectric spectroscopy (CDS), using an automated CDS-based instrument, and the classification of children into three functional groups (FG1, FG2, FG3) with respect to the profile of imbalance between the degree of response to Gi and Gs proteins stimulation. The classification is further confirmed by the differential effect of osteopontin (OPN) on response to Gi stimulation among groups and the severe progression of disease is referenced by FG2. Approximately, a volume of 10 ml of blood is required to extract PBMCs by Ficoll-gradient and cells are then stored in liquid nitrogen. The adequate number of PBMCs to perform the assay is obtained after two days of cell culture. Essentially, cells are first incubated with phytohemmaglutinin (PHA). After 24 hr incubation, medium is replaced by a PHA-free culture medium for an additional 24 hr prior to cell seeding and OPN treatment. Cells are then spectroscopically screened for their responses to somatostatin and isoproterenol, which respectively activate Gi and Gs proteins through their cognate receptors. Both somatostatin and isoproterenol are simultaneously injected with an integrated fluidics system and the cells&#39; responses are monitored for 15 min. The assay can be performed with fresh or frozen PBMCs and the procedure is completed within 4 days.

A structured protocol is presented for a cell-based assay as a functional test to predict the prognosis of idiopathic scoliosis using cellular dielectric spectroscopy (CDS). The assay can be performed with fresh or frozen peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) and the procedure is completed within 4 days.

Hücresel Dielektrik Spektroskopisi kullanarak İdiopatik Skolyoz Prognostik Tahmininde Hücre-tabanlı Deney Protokolü

This protocol details the experimental and analytical procedure for a cell-based assay developed in our laboratory as a functional test to predict the ...

Sequential In vivo Imaging of Osteogenic Stem/Progenitor Cells During Fracture Repair

Bone turns over continuously and is highly regenerative following injury. Osteogenic stem/progenitor cells have long been hypothesized to exist, but in vivo demonstration of such cells has only recently been attained. Here, in vivo imaging techniques to investigate the role of endogenous osteogenic stem/progenitor cells (OSPCs) and their progeny in bone repair are provided. Using osteo-lineage cell tracing models and intravital imaging of induced microfractures in calvarial bone, OSPCs can be directly observed during the first few days after injury, in which critical events in the early repair process occur. Injury sites can be sequentially imaged revealing that OSPCs relocate to the injury, increase in number and differentiate into bone forming osteoblasts. These methods offer a means of investigating the role of stem cell-intrinsic and extrinsic molecular regulators for bone regeneration and repair.

Sequential In vivo Imaging of Osteogenic Stem/Progenitor Cells During Fracture Repair

Quantitative measurement of bone progenitor function in fracture healing requires high resolution serial imaging technology. Here, protocols are provided for using intravital microscopy and osteo-lineage tracking to sequentially image and quantify the migration, proliferation and differentiation of endogenous osteogenic stem/progenitor cells in the process of repairing bone fracture.

Ardışık<em&gt; In vivo</em&gt; Kırık Onarım sırasında Osteojenik Kök / Progenitör Hücrelerinin Görüntüleme

Bone turns over continuously and is highly regenerative following injury. Osteogenic stem/progenitor cells have long been hypothesized to exist, but in ...

Catheterization of the Carotid Artery and Jugular Vein to Perform Hemodynamic Measures, Infusions and Blood Sampling in a Conscious Rat Model

The success of a small animal model to study critical illness is, in part, dependent on the ability of the model to simulate the human condition. Intra-tracheal inoculation of a known amount of bacteria has been successfully used to reproduce the pathogenesis of pneumonia which then develops into sepsis. Monitoring hemodynamic parameters and providing standard clinical treatment including infusion of antibiotics, fluids and drugs to maintain blood pressure is critical to simulate routine supportive care in this model but to do so requires both arterial and venous vascular access. The video details the surgical technique for implanting carotid artery and common jugular vein catheters in an anesthetized rat. Following a 72 hr recovery period, the animals will be re-anesthetized and connected to a tether and swivel setup attached to the rodent housing which connects the implanted catheters to the hemodynamic monitoring system. This setup allows free movement of the rat during the study while continuously monitoring pressures, infusing fluids and drugs (antibiotics, vasopressors) and performing blood sampling.

Vascular accesses to measure hemodynamics, provide fluids and perform blood sampling are important to any small animal model study. We present a technique for implanting catheters into the carotid artery and the common jugular vein in an anesthetized rat for connecting to a system to perform monitoring, infusions and sampling.

Karotis Arter ve Ven Juguler kateterizasyon bir Bilinçli Rat Modelinde, İnfüzyonları ve Kan Örnekleme hemodinamik Tedbirleri Gerçekleştirme

The success of a small animal model to study critical illness is, in part, dependent on the ability of the model to simulate the human condition. ...

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction (NeMO) in Female Small Rodents

Partial bladder outlet obstruction (pBOO) has a high prevalence, causes significant patient burden, and immense health care costs. The most common animal model to investigate bladder remodeling in pBOO are female rodents undergoing partial obstruction at the proximal urethra. Variability in the degree of obstruction and animal mortality are major concerns with proximal obstruction. Furthermore, dissecting around the proximal urethra and bladder neck jeopardizes bladder innervation.
We developed a nerve-sparing mid-urethral obstruction (NeMO) model for pBOO avoiding the disadvantages of the traditional model. We approached the urethra just inferior to the pubic symphysis, which obviated the need for laparotomy as well as for dissection in this area; also, the striated urethral sphincter remained untouched. We performed NeMO in female Sprague-Dawley rats (12 obstructions, 6 sham animals) as well as in female C57/bl6 mice (20 obstructions, 18 sham animals). After two weeks, we evaluated bladder function, bladder mass, and body mass.
We had no mortalities among obstructed- or sham-operated female rats; as described for the traditional proximal pBOO-method, we tied the suture around the proximal urethra and a temporarily placed 0.9 mm metal rod. NeMO induced an 85% increase in bladder mass after two weeks, average residual urine volume was 0.4 mL in partially obstructed rats while only 0.03 mL in sham animals. In mice, we tested 3 sizes of cannulas that we placed along the urethra when tying the suture. We found that using a 27-gauge cannula resulted in over 50% animal mortality; placing the 25-gauge cannula did not yield the desired response in increasing bladder mass; utilizing a 26-gauge cannula yielded favorable results with minimal animal mortality (1/8) yet a significant 2-fold increase in bladder mass.

Nerve-sparing Mid-urethral Obstruction NeMO in Female Small Rodents

Traditional modeling of partial bladder outlet obstruction in rodents is fraught with animal mortality. A denervation injury from dissection around the proximal urethra and bladder neck is also of major concern. We developed and evaluated a safe and reliable mid-urethral obstruction model, avoiding the shortcomings of the traditional model.

Kadın Küçük Kemirgenler Sinir koruyucu Orta üretral Tıkanıklığı (Nemo)

Partial bladder outlet obstruction (pBOO) has a high prevalence, causes significant patient burden, and immense health care costs. The most common animal ...

In Vivo Evaluation of Fracture Callus Development During Bone Healing in Mice Using an MRI-compatible Osteosynthesis Device for the Mouse Femur

Endochondral fracture healing is a complex process involving the development of fibrous, cartilaginous, and osseous tissue in the fracture callus. The amount of the different tissues in the callus provides important information on the fracture healing progress. Available in vivo techniques to longitudinally monitor the callus tissue development in preclinical fracture-healing studies using small animals include digital radiography and &#181;CT imaging. However, both techniques are only able to distinguish between mineralized and non-mineralized tissue. Consequently, it is impossible to discriminate cartilage from fibrous tissue. In contrast, magnetic resonance imaging (MRI) visualizes anatomical structures based on their water content and might therefore be able to noninvasively identify soft tissue and cartilage in the fracture callus. Here, we report the use of an MRI-compatible external fixator for the mouse femur to allow MRI scans during bone regeneration in mice. The experiments demonstrated that the fixator and a custom-made mounting device allow repetitive MRI scans, thus enabling longitudinal analysis of fracture-callus tissue development.

In Vivo Evaluation of Fracture Callus Development During Bone Healing in Mice Using an MRI-compatible Osteosynthesis Device for the Mouse Femur

The evaluation of tissue development in the fracture callus during endochondral bone healing is essential to monitor the healing process. Here, we report the use of a magnetic resonance imaging (MRI)-compatible external fixator for the mouse femur to allow MRI scans during bone regeneration in mice.

Vivo Fare uyluk için bir MRI uyumlu Osteosentez aygıtı kullanma farelerde kemik iyileşme sırasında kırık Kallus gelişimi değerlendirme

Endochondral fracture healing is a complex process involving the development of fibrous, cartilaginous, and osseous tissue in the fracture callus. The ...

A Minimally Invasive Model to Analyze Endochondral Fracture Healing in Mice Under Standardized Biomechanical Conditions

Bone healing models are necessary to analyze the complex mechanisms of fracture healing to improve clinical fracture treatment. During the last decade, an increased use of mouse models in orthopedic research was noted, most probably because mouse models offer a large number of genetically-modified strains and special antibodies for the analysis of molecular mechanisms of fracture healing. To control the biomechanical conditions, well-characterized osteosynthesis techniques are mandatory, also in mice. Here, we report on the design and use of a closed bone healing model to stabilize femur fractures in mice. The intramedullary screw, made of medical-grade stainless steel, provides through fracture compression an axial and rotational stability compared to the mostly used simple intramedullary pins, which show a complete lack of axial and rotational stability. The stability achieved by the intramedullary screw allows the analysis of endochondral healing. A large amount of callus tissue, received after stabilization with the screw, offers ideal conditions to harvest tissue for biochemical and molecular analyses. A further advantage of the use of the screw is the fact that the screw can be inserted into the femur with a minimally invasive technique without inducing damage to the soft tissue. In conclusion, the screw is a unique implant that can ideally be used in closed fracture healing models offering standardized biomechanical conditions.

This protocol describes a minimally invasive osteosynthesis technique using an intramedullary screw for standardized stabilization of femur fractures, which can be used to analyze endochondral bone healing in mice.

Endochondral standart biyomekanik koşullar altında farelerde şifa kırık çözümlemek için minimal invaziv bir Model

Bone healing models are necessary to analyze the complex mechanisms of fracture healing to improve clinical fracture treatment. During the last decade, an ...

The Generation of Closed Femoral Fractures in Mice: A Model to Study Bone Healing

Bone fractures impose a tremendous socio-economic burden on patients, in addition to significantly affecting their quality of life. Therapeutic strategies that promote efficient bone healing are non-existent and in high demand. Effective and reproducible animal models of fractures healing are needed to understand the complex biological processes associated with bone regeneration. Many animal models of fracture healing have been generated over the years; however, murine fracture models have recently emerged as powerful tools to study bone healing. A variety of open and closed models have been developed, but the closed femoral fracture model stands out as a simple method for generating rapid and reproducible results in a physiologically relevant manner. The goal of this surgical protocol is to generate unilateral closed femoral fractures in mice and facilitate a post-fracture stabilization of the femur by inserting an intramedullary steel rod. Although devices such as a nail or a screw offer greater axial and rotational stability, the use of an intramedullary rod provides a sufficient stabilization for consistent healing outcomes without producing new defects in the bone tissue or damaging nearby soft tissue. Radiographic imaging is used to monitor the progression of callus formation, bony union, and subsequent remodeling of the bony callus. Bone healing outcomes are typically associated with the strength of the healed bone and measured with torsional testing. Still, understanding the early cellular and molecular events associated with fracture repair is critical in the study of bone tissue regeneration. The closed femoral fracture model in mice with intramedullary fixation serves as an attractive platform to study bone fracture healing and evaluate therapeutic strategies to accelerate healing.

The murine closed femoral fracture model is a powerful platform to study fracture healing and novel therapeutic strategies to accelerate bone regeneration. The goal of this surgical protocol is to generate unilateral closed femoral fractures in mice using an intramedullary steel rod to stabilize the femur.

Farelerde kapalı femur kırığı nesil: kemik şifa çalışması için bir Model

Bone fractures impose a tremendous socio-economic burden on patients, in addition to significantly affecting their quality of life. Therapeutic strategies ...