Hemorajik Şok GM053789 Finansman Kaynağı / Sayı Moleküler Biyoloji

1. Çalgı ve Cerrahi Alan Hazırlık: Tüm deneysel prosedürleri aseptik teknikler kullanılarak yapılmaktadır. Başlamadan önce, deney alanı iyice temizlenmeli ve sterilize edilmelidir. Benchtop hava kuru ve daha sonra% 70&#39;lik alkol ile silinmelidir izin dezenfekte edilmelidir. Deneysel çalışma alanı soyunma cerrahi mavi ped ve steril alan yerleştirin. Kullanmadan önce tüm malzeme ve aletler otoklavda sterilize edilir. Şırınga ve iğneler steril alınır. Araştırmacı uygun laboratuvar önlüğü, cerrahi maske ve steril cerrahi eldiven garbed olmalıdır. Her akşam Bizim cerrahi aletler otoklavda sterilize edilir. Cerrahisi sonrası antibakteriyel sabun ve su ile yıkanır. Onlar temiz bir cerrahi mavi ped üzerinde kurumasına izin verilir. Daha sonra dikkatli bir şekilde sterilizasyon kese içine yerleştirilir ve daha sonra kullanmak üzere sterilize edilir. ° F, deney başlamadan önce 300-350 uygun sıcaklığa ulaşıncaya sağlamak için sıcak boncuk sterilizatör açın. Bu sterilizatör ilgili fareler üzerinde deneysel prosedürleri arasında araçlarını temizlemek için kullanılan olacak. Paslanmaz çelik bir alet tepsisine alın ve% 70 etanol ile yolun 1 / 3 doldurun. Cerrahi aletler karşılamak için yeterli% 70 Etanol olmamalıdır. Dolaşımdaki ısıtma yastığı açın ve üzerine bir cerrahi mavi ped ve sonra bunun üstüne pansuman steril bir alana yerleştirmek. Bu ısıtıcı deneysel prosedür ve iyileşme döneminde fare yeterli sıcaklık sağlamak için kullanılır. Steril alanında soyunma tüm steril aletler, gazlı bez, şırıngalar, iğneler ve bir 1.5mL mikrofuge&#39;de tüp yerleştirin. Herhangi bir steril alet ve diğer öğeleri açarken dikkatli olun, onlara dokunarak kontamine. Bu kurulum işlemi yaparken steril eldiven kullanmak en iyisidir. 2. Pseudofracture Model Deney Prosedürleri: 1. Anestezi indüksiyonu ve fare konumlandırma. (70mg/kg) intraperitoneal Pentobarbitol yönetmek başlayın. Bu ilk kuyruğunu proksimal ucunu kullanarak, kafes fare kaldırma gerçekleştirilir. Fare sonra anestezi doğru dozu hesaplamak için tartılmalıdır. Hala kendi kuyruğunu tutarken Ardından, kafesinin üst hayvan. Fare fare forepaws hemen arkasında iki tarafında başparmak ve orta parmak ile boynun ense tut. Parmağı, baş / boyun bölgesinde cilt geri çekmek için kullanılan baş ve kısmen hareketsiz. Yüzük parmağı fare omurganın bel bölgeye basılı iken fare kuyruğu, küçük parmak ve yüzük parmağı arasında tutulur. Anestezi yaklaşık 5 dakika içinde tam etkisini almalı ve refleks testi ile teyid edilmelidir. Hayvan uykuda sonra, pleksiglas bir tahta üzerine fare yatar pozisyonda yerleştirin ve ekstremitelerde taping onları hareketsiz gevşek bir döngü bant tekniği kullanın. Gevşek döngü tekniği sadece ince şerit bant kesme ve her ekstremitenin distal kısmının etrafında gevşek bir şekilde bant sarma gerektirir. Kaset daha sonra kendisine geri sıkışmış ve bant üzerinde sol kuruluna bağlı. Bu tutarlı bir şekilde, farelerin ekstremitelerde sağlamak yanı sıra yapılacak deneysel manipülasyon daha doğal bir pozisyonu sağlar. Hayvanın karın, kasık ve uyluk bölgelerinden sonra steril bir alanda korumaya yardımcı olmak için Oster A5 kesme makineleri (boyutu 40 bıçak) kullanarak traş edilir. 4x4 gazlı bez betadin doused ve sonra sterilize etmek için cerrahi alan silinir. Steril bir alan soyunma sonra katlanmış ve sadece alt ekstremite ve baş maruz izin fare üzerinde bol dökümlü. Immobilizasyon ve sterilize edildikten sonra deney prosedürü başlamadan önce birkaç saniye için farenin burun üzerinde izofluran bir burun konisi. 50cc konik tüp gazlı bez ile dolu bir burun konisi oluşur. Tüpün alt ucunda yarısı farenin burun içine sığacak bir boşluk yaratarak kesilir. Izofluran buharlar tüp kullanılmadığı kalmasını sağlamak için bir kap (bir doku saklama kabı yani düz tarafı geniş ağızlı kavanoz alt) konik kesme ucuna yerleştirilir. Bir ml izofluran, koni içinde gazlı bez eklenmelidir. Titiz dikkat fare anestezi kullanımı sırasında ödenen ve özellikle burun konisi ile izofluran kullanmak olmalıdır. Hayvanın solunum yavaş başlar sonra, denemeyi başlatmak ve burun konisi kaldırılmış ve kapalı olmalıdır. Deney herhangi bir bölümü boyunca ek anestezi gerekiyorsa, ek pentobarbital enjekte veya izofluran uygulanan olabilir. Isofluorane yönetiminin alternatif yöntemler kullanılabilir ve güncellenen kılavuzlar Tavsiye Edilenmümkünse, anestezi daha iyi kontrol sağlamak için hassas bir buharlaştırıcı kullanımı sonunda. Ancak, farenin solunum fizyolojisi yakın ilgi, bu yöntemlerden herhangi biri ile güvence altına alınmalıdır. 2. Pseudofracture deney. Pseudo-kırık, yumuşak doku hasarının bir kombinasyonu yaralandı kas kemik çözüm enjeksiyon yoluyla takip ve arka ayaklarında iki taraflı olarak yapılır. Alıcı farelerde herhangi bir deneysel manipülasyon başlamadan önce kemik çözüm hazırlanmış olmalıdır. 3. Kemik çözeltisi. Bir donör fare hazırlanan kemik çözümü 3 alıcı fareler için yeterli olacaktır. Singeneik donör fare yaş ve alıcı deneysel fare kilo eşleştirilmiş olduğunu kullanılmalıdır. Fare donör inhale izofluran ile ötenazi olacaktır. Donör sonra bant sadece ayak ucunda alt ekstremite dikkat pleksiglas kurulu bantlanmış olacaktır. Alt ekstremitelerde dikkatle traşlı ve iyice betadin kaplı olacak ve daha sonra kısırlık için alkol ile silinmelidir gerekir. Sonra her iki alt ekstremite femur ve tibia cerrahi steril bir biçimde kaldırılmış olacaktır. Alt ekstremite uzun kemiklerin kaldırmak için, inguinal bölge deri içine bir cerrahi kesi yapmak ve ayak bileği, ekstremite uzunluğu boyunca deriyi kesmek için devam edin. Cilt geri çekin ve hem de maksimum maruz kalma medial ve lateral yönleri üzerinde subkutan fasya ve kas uzak teşrih. Makas, ön ve tibia (tibialis anterior, ekstansör digitorum longus, ekstansör hallicus longus, peroneus longus, peroneus brevis) ve temiz uzak kaslar kaldırmak için proksimale ve distale bıçak slayt yan yatan kasları altında bir bıçak takın kemik altında yatan. Posterior ve medial tibia alt kısmında tibia (gastroknemius, soleus, arka plantaris, tibialis, fleksör digitorum longus, fleksör hallicus longus) altındaki kasları ayırmak için bu tekniği tekrarlayın. Distalde sürgülü minimal bir ek efor, tibia fibula ek bileşenini için arka tarafında olmalıdır. Bu bacak kaslarında proksimal sonunda, küçük bir römorkör, ayak bileği eklemini aşağı moda bu kasların distal ekleri yayınlayacak birlikte kas grubu çekerken olarak mümkün olduğunca yakın, eklemeler tendon kesilmiş ve distal kaslar geri çekin. Ayak bileği eklemi, makas ile kesilebilir. Bu noktada femur tibia çıkarmayın! Bu bağlantı, kalça ekleminin femur diseksiyon yardımcı olacak ek kaldıraç verir. Femur kasların serbest bırakılması için benzer bir teknik takip edin ve bu posterior ve medial ve lateral gerekirse gerçekleştirmek. Diz eklemi onları serbest bırakmak için bu kas gruplarının distal ek kesin. Diseksiyon devam edin ve kalça ekleminin femur sonuna incelemek için kasların altına uygulayın. Bu diseksiyon yardımcı olmak için, cilt insizyonu kadar yeterli pozlama elde etmek için gerekli uzatılmalıdır. Kalça ekleminin femur Hareket Diseksiyon sırasında femur proksimal ucunu bulmak yardımcı olabilir. Femur (ekli tibia) donör fare kaldırılır steril bir 4x4gauze koyun. Sadece ayrı bir yandan her kemik açgözlü ve hafifçe büküm / uzun ekseni boyunca zıt yönlerde dönen iki kemiğin diz eklemi iki kemiğin ayrılabilir. Elle manipülasyon herhangi bir aşırı efor ile kolayca kırık olabilir, bu iki kemik Nazik diseksiyonu ve kullanım önerilir. Uzun kemiklerin kalan tendon ekleri kaldırmak için, kemik uzunluğu sarılı 4x4 gazlı bez, kuru steril bir parça kullanın. Gazlı bez yapışır ve kemiklerden çekti hızlı ve kolay bir şekilde bu gazlı bez kemiğe sıkıca kavrayın bir kemik birkaç kez tam uzunlukta çekin, bu kemik yüzeyinden kalan dokularda kazıyın. Toplanan kemiklerin sonra steril bir 1.5mL mikrofuge&#39;de tüp içine yerleştirilir ve taşıma için buz üzerinde yerleştirilmiş olmalıdır. Bu dört donör kemiklerin kemik çözümü için hazırlık için bir biyolojik güvenlik kabini alınacaktır. Kaput kullanmadan önce iyice dezenfekte edilmelidir, kaput içinde çalışma alanı üzerine pansuman steril bir alana yerleştirin. Çalışma alanında koyun steril bir harç ve havaneli, steril 8 ml tüp ve steril Fosfat Tamponlu Salin (PBS). 1mL pipetteman ve ilgili ipuçları kaput içinde mevcut olmalıdır. Bir steril forseps çifti 1.5mL mikrofuge&#39;de tüpten steril bir moda hasat kemikleri çıkarın ve harç yerleştirilir kullanılmalıdır; havaneli yavaşça kemiklerin ezmek için kullanılır. Phosphyedik Tamponlanmış Tuzlu, enjeksiyon için kemik parçaları tekrar süspansiyon kullanılan bir araçtır. Pipet harcın içine PBS 1mL ve tam tabanda sağlamak için ek dairesel hareketlerle, geri kalan parçaları ezmeye devam. Sonra başka bir 1ml PBS ekleyin ve &#39;kemik çözüm&#39; oluşturmak için kırma devam edin. Bu çözüm, pembe bir renk olmalı, ve tam olarak kırılamaz harç alt kısmında sol kalıntıları olacaktır. Yavaş yavaş, daha büyük kalıntıları harç arkasında kalır sağlarken, maksimum ses yakalamak için 8 ml tüp içine harç çözüm dökmek. Bu kemik çözüm deneysel kullanım kadar buz üzerinde kalmalı ve enjeksiyon için 1 ml şırınga transfer edilecektir. Yirmi iğne daha sonra fare yönetmek amacıyla kemik solüsyon içeren 1 ml şırınga eklenecektir. Bu büyük bir iğne boyutu, tüm kemik parçaları enjeksiyon üzerine bölgeye girmek ve iğne bloke etmezler sağlamak için seçildi. Alıcı fare, kemik çözümün bir damla enjeksiyon için bir kültür MacConkey agar plaka (24-48hours inkübasyon) yerleştirilmeden önce. Bu, kısırlık, kemik çözüm sağlamaktır. Kemik çözüm pH nötr pH sağlamak için kontrol edilmelidir. 4. Yumuşak doku yaralanması. Bu yumuşak doku yaralanması, iki taraflı bir hindlimb ezilme yaralanması. Arka bacaklarda biraz kaçırılmış ve yanal döndürülebilir fare ilk konumlandırma, doğru kas grubunu, diz fleksör (biseps femoris, mufl ve semimembranosus kasları) erişilebilirlik yardımcı olur. Büyük bir 18cm hemostat ezilme yaralanması gerçekleştirmek için kullanılacaktır. Bu uygulanan hemostat kuvveti dağılımı analiz ve hemostat bakan dışbükey eğri femur, femur boyunca arka uyluk kasları, orta noktası etrafında kenetli olmalıdır Sensör Ürünleri A.Ş. tarafından Topaq Basınç Analiz Sistemi kullanarak 270psi olarak tespit edildi. Hemostat sonra yalnızca ilk tıklama kapandı kilitli ve 30 saniye süreyle devam edilmelidir. Bu hemostatı yerleştirme dikkat önemlidir kırılmış değildir sağlamak için femur üzerinde sıkıştırılır olmamalıdır. Bu fareler arasında tekrarlanabilir bir yaralanma garanti altına almak için her zaman tutarlı bir şekilde yapılmalıdır. Bu ezilme yaralanması, her iki alt ekstremite yapılır. 5. Kemik çözüm enjeksiyon. Alıcı deneysel fare anestezi ve daha önce açıklandığı gibi hazırlanmış olacak ve bu kemik enjeksiyon için önce yumuşak doku yaralanması geçirmiş olacak. Kemik çözümü daha sonra bilateral alıcı fare ezilmiş uyluk kas içine enjekte edilecektir. Bu çözüm, 0.15mL bir 20 iğne kullanarak her uyluk arka kas içine enjekte edilecektir. Deri yoluyla yaklaşık 2 ~ 3mm girin ve iğne iğne yerleştirilmesi mesafe dikkat konik ucu femur karşı dokunur gibi hissedeceksiniz, bu pozisyon idealdir. Şimdi kemik solüsyon enjekte edilir. Iğneyi çekiniz ve enjeksiyon sitesi üzerinden hızlı bir şekilde yara kemik çözümün herhangi bir geri akışını durdurmak için steril eldivenli parmak yerleştirmek. Birkaç saniye boyunca basılı tutun. Fare, kafese sonra geri yerleştirilir ve tam özgürlük hareketinin doğrudan anestezi geçene izin olacaktır. Uygun ağrı yönetimi, fare uyanır olarak uygulanmalıdır. 6. Post-operative/recovery süre. Gevşek bir döngü bant kaldırılır ve hayvanların birkaç saat sonrası kurtarma için dolaşan ısıtma yastığı tutulur temiz bir kafes yerleştirilir. Uygun sıcaklık, gerekirse ek bir ısı lambası ile sağlanmalıdır. Gıda ve su hazır olacaktır. Hayvanlar anestezi ağrı doğru yönetmek için de uyanmak başlar Analjezik uygulanmalıdır. Buprenorfin (0.1mg/kg) olarak, hayvanların fiziksel aktivite başlamadan subkutan enjekte edilir, fakat önce, böylece solunum fonksiyon ele geçirmesine değil. Fareler sürekli olarak, anestezi sırasında anestezi ya da deneysel bir uç nokta kurtarma kadar izlenebilir olmalıdır. Fareler de ameliyat sonrası dönemde çok dikkatli bir şekilde izlenebilir olmalı ve gerekli olan tüm ek ağrı kesici ilaç gerektiği gibi uygulanmalıdır. Monitör hayvan fiziksel aktivite, solunum durum, yiyecek ve su alımı ve herhangi bir sıkıntı işaretleri (yorucu solunum, ağrı, yeme ve içme alışkanlıkları değişiklikleri) buna göre ele alınması gerekmektedir. % 70&#39;lik alkol içine yerleştirin ve cerrahi aletler, steril gazlı bez ile silin, sonra hayvanlar arasındaki sterilizasyon için ~ 20 saniye microbead sterilizatör içine koydu. Cerrahi aletler çıkarın ve% 70 alkol ile, onlara serinlemek yardımcı olmak için sprey. St üzerine yerleştirin.erile alanında soyunma. Sonraki hayvanların geri damla olacaktır araçların sol alkol olduğundan emin olun. 3. Karşılaştırmalı İkili Femur Kırılma Modeli - Deneysel Prosedürler: Deneysel fare anestezi ve başlangıçta açıklandığı gibi hazırlanmış olacaktır. Hindlimb diz bakan dışbükey yüzeyi ile diz eklemi üzerinde yaklaşık 2-3mm çapında büyük bir 18cm hemostat kenetli olmalıdır. Başparmak hemostat ve kalça arasında kenetli hemostat ve işaret parmağınızın üstüne yerleştirin. Kırılma nerede biliyorum büküm önce femur hissediyorum emin olun. Diğer elinizi saat yönünde büküm büküm hemostat saat yönünün tersine. Kontralateral bacak yordamı yineleyin. 4. Çoklu travma Model - Hemorajik Şok ile Pseudofracture kombinasyonu Deneysel Yöntem: Alıcı fare anestezi ve başlangıçta açıklandığı gibi hazırlanmış olacaktır. Pseudo-kırığı ile birlikte hemorajik şok geçmesi Fare pseudofracture işlem öncesi femoral arter kanülasyonu olacak ve daha sonra sözde kırık tamamlandıktan sonra bu kateter hemorrhaged olacaktır. 5. Başarı Sırları: Genel: <ul><li> Mümkün olduğu kadar steril kalmasını ekstra çaba emin olun. </li><li> Anestezi sırasında titiz bir dikkat, solunum hızı da dahil olmak üzere, fare genel fizyolojik durumuna ödenen ve burun konisi yoluyla özellikle izofluran olmalıdır. </li></ul> Kemik çözeltisi: <ul><li> Kemiklerin Nazik manipülasyon kadar kolay basit manuel manipülasyon sırasında aşırı efor ile kırılmış olabilir! </li><li> Diseksiyonu üzerine tibia Fibula kaldırılması sağlanmalıdır. </li><li> Ilk başta yavaşça kemikleri kırma başlayın harç içindeki tüm parçaları tutmak için! </li><li> Başlangıçta sadece 1 ml PBS ekleyin ve bir zamanlar iyi bir süspansiyon kurdu, geriye kalan kemik parçaları kırma devam kalan 1 ml ekleyin. </li><li> Sadece havanda çözüm olmalıdır toplanan tamamen aşağı kırılacak olamazdı büyük kalan dokularda olmadan bu alıcı fare içine enjeksiyon üzerine iğne teslim almak / engelleyebilir. </li></ul> Yumuşak doku yaralanması: <ul><li> Femur üzerinde ya da kırılmış olacak - bu hemostat dikkatli yerleştirme önemlidir. Kelepçe tekrarlanabilir yaralanma için doğru kas (diz fleksör arka uyluk) üzerinde hemostat. </li></ul> Kemik çözüm enjeksiyon: <ul><li> Solüsyon enjekte ederken, iğne yerleştirilmesi mesafe dikkat konik ucu femur karşı dokunur gibi hissedeceksiniz, bu pozisyon idealdir. </li><li> Iğneyi çekiniz ve yaranın hızlı bir şekilde kemik çözümün herhangi bir geri akışını durdurmak için enjeksiyon sitesi üzerinden bir parmak yerleştirmek. Orada birkaç saniye boyunca basılı tutun. </li></ul> 6. Operatif Endişeler Mesaj: <ul><li> Bacak enfeksiyon olup olmadığını kontrol edin. </li><li> Kemik çözüm kültürü kontrol edin. </li><li> Hayvan deneysel manipülasyon ve ilişkili enflamasyon sonucu olarak arka bacaklarda kullanırken sorun olabilir. Uygun ağrı yönetin. </li></ul>

<ol>
	<li>DeCamp, M. M., Demling, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Posttraumatic+multisystem+organ+failure.">Posttraumatic multisystem organ failure.</a> JAMA. 260, 530-534 (1988).</li><li>Deitch, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+organ+failure.+Pathophysiology+and+potential+future+therapy.">Multiple organ failure. Pathophysiology and potential future therapy.</a> Ann Surg. 216, 117-134 (1992).</li><li>Carrico, C. J., Meakins, J. L., Marshall, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+organ+failure+syndrome.">Multiple organ failure syndrome.</a> Arch Surg. 121, 196-208 (1986).</li><li>Hauser, C. J., Joshi, P., Jones, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Suppression+of+natural+killer+cell+activity+in+patients+with+fracture/soft+tissue+injury.">Suppression of natural killer cell activity in patients with fracture/soft tissue injury.</a> Arch Surg. 132, 1326-1330 (1997).</li><li>Faist, E., Baue, A. E., Dittmer, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiple+organ+failure+in+polytrauma+patients.">Multiple organ failure in polytrauma patients.</a> J Trauma. 23, 775-787 (1983).</li><li>Baker, C. C., Oppenheimer, L., Stephens, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidemiology+of+trauma+deaths.">Epidemiology of trauma deaths.</a> Am J Surg. 140, 144-150 (1980).</li><li>Faist, E., Kupper, T. S., Bakeer, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Depression+of+cellular+immunity+after+major+injury+its+association+with+posttraumatic+complications+and+its+reversal+with+immunomodulation.">Depression of cellular immunity after major injury its association with posttraumatic complications and its reversal with immunomodulation.</a> Arch Surg. 121, 1000-1005 (1986).</li><li>Lenz, A., Franklin, G. A., Cheadle, W. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systemic+inflammation+after+trauma.">Systemic inflammation after trauma.</a> Injury. 38, 1336-1345 (2007).</li><li>Flohe, S., Flohe, S. B., Schade, F. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immune+response+of+severely+injured+patients--influence+of+surgical+intervention+and+therapeutic+impact.">Immune response of severely injured patients--influence of surgical intervention and therapeutic impact.</a> Lang Arch Surg. 392, 639-648 (2007).</li><li>Ayala, A., Wang, P., Ba, Z. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+alterations+in+plasma+IL-6+and+TNF+levels+after+trauma+and+hemorrhage.">Differential alterations in plasma IL-6 and TNF levels after trauma and hemorrhage.</a> Am J Physiol. 260, R167-R171 (1991).</li><li>Kalicke, T., Schlegel, U., Printzen, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+a+standardized+closed+soft+tissue+trauma+on+resistance+to+local+infection.+An+experimental+study+in+rats.">Influence of a standardized closed soft tissue trauma on resistance to local infection. An experimental study in rats.</a> J Ortho Res. 21, 373-378 (2003).</li><li>Kobbe, P., Vodovotz, Y., Kaczorowski, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+role+of+fracture+associated+soft+tissue+injury+in+the+induction+of+sytemic+inflammation+and+remote+organ+dysfunction+after+bilateral+femur+fracture.">The role of fracture associated soft tissue injury in the induction of sytemic inflammation and remote organ dysfunction after bilateral femur fracture.</a> J Ortho Trauma. 22, 385-390 (2008).</li><li>Kobbe, P., Vodovotz, Y., Kaczorwoski, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pattern+of+cytokine+release+and+evolution+of+remote+organ+dysfunction+after+bilateral+femur+fracture.">Pattern of cytokine release and evolution of remote organ dysfunction after bilateral femur fracture.</a> Shock. 30, 43-47 (2008).</li><li>Flohe, S. B., Flohe, S., Schade, F. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Deterioration+of+the+immune+system+after+trauma:+signals+and+cellular+mechanisms.">Deterioration of the immune system after trauma: signals and cellular mechanisms.</a> Inn. Immun. 14, 333-344 (2008).</li><li>Maier, B., LeFering, R., Lhenert, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+versus+late+onset+of+multiple+organ+failure+is+associated+with+differing+patterns+of+plasma+cytokine+biomarker+expression+and+outcome+after+severe+trauma.">Early versus late onset of multiple organ failure is associated with differing patterns of plasma cytokine biomarker expression and outcome after severe trauma.</a> Shock. 28, 668-674 (2007).</li><li>Mestas, J., Hughes, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Of+mice+not+men:+differences+between+mouse+and+human+immunology.">Of mice not men: differences between mouse and human immunology.</a> J. Immunol. 172, 2731-2738 (2004).</li><li>Hoth, J. J., Wells, J. D., Brownlee, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toll+like+receptor+4-dependent+responses+to+lung+injury+in+a+murine+model+of+pulmonary+contusion.">Toll like receptor 4-dependent responses to lung injury in a murine model of pulmonary contusion.</a> Shock. 31, 376-381 (2009).</li><li>Matsutani, T., Samy, A. n. a. n. t. h. a., Rue, T. S., W, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transgenic+prolactin-/-+mice:+effect+of+trauma-hemorrhage+on+splenocyte+functions.">Transgenic prolactin-/- mice: effect of trauma-hemorrhage on splenocyte functions.</a> Am J Physiol Cell Physiol. 288, 1109-1116 (2005).</li><li>Matsutani, T., Samy, A. n. a. n. t. h. a., Kang, T. S., S-C, . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+genetic+background+influences+severity+of+immune+responses+following+trauma-hemorrhage.">Mouse genetic background influences severity of immune responses following trauma-hemorrhage.</a> Cytokine. 30, 168-117 (2005).</li><li>Tsukamoto, T., Pape, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+trauma+research:+What+are+the+options.">Animal models for trauma research: What are the options.</a> Shock. 31, 3-10 (2008).</li><li>DeMaria, E. J., Pellicane, J. V., Lee, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemorrhagic+shock+in+endotoxin+resistant+mice+:+Improved+survival+unrelated+to+deficient+production+of+tumor+necrosis+factor.">Hemorrhagic shock in endotoxin resistant mice : Improved survival unrelated to deficient production of tumor necrosis factor.</a> J Trauma. 35, 720-724 (1993).</li><li>Jamsa, T., Jalovaara, P., Peng, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+three-point+bending+test+and+peripheral+quantitative+computed+tomography+analysis+in+the+evaluation+of+the+strength+of+mouse+femur.">Comparison of three-point bending test and peripheral quantitative computed tomography analysis in the evaluation of the strength of mouse femur.</a> Bone. 23, 155-161 (1998).</li><li>Bounarens, F., Einhorn, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Production+of+a+standard+closed+fracture+in+laboratory+animal+bone.">Production of a standard closed fracture in laboratory animal bone.</a> J Ortho Res. 2, 97-101 (1984).</li><li>Holstein, J. H., Menger, M. D., Culemann, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+locking+femur+nail+for+mice.">Development of a locking femur nail for mice.</a> J Biomech. 40, 215-219 (2007).</li><li>Holstein, J. H., Garcia, P., Histing, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+establishment+of+defined+mouse+models+for+the+study+of+fracture+healing+and+bone+regeneration.">Advances in the establishment of defined mouse models for the study of fracture healing and bone regeneration.</a> J Orthop Trauma. 23, S31-S38 (2009).</li><li>Histing, T., Garcia, P., Matthys, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+internal+locking+plate+to+study+intramembranous+bone+healing+in+a+mouse+femur+fracture+model.">An internal locking plate to study intramembranous bone healing in a mouse femur fracture model.</a> J Orthop Research. 28, 397-402 .</li><li>Manigrasso, M. B., O'Connor, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+a+closed+femur+fracture+model+in+mice.">Characterization of a closed femur fracture model in mice.</a> J Ortho Trauma. 18, 687-695 (2004).</li><li>Mark, H., Bergholm, J., Nilsson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+external+fixation+method+and+device+to+study+fracture+healing+in+rats.">An external fixation method and device to study fracture healing in rats.</a> Acta Orthop Scand. 74, 476-487 (2003).</li><li>Bhandari, M., Shanghnessy, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+minimally+invasive+percutaneous+technique+of+intramedullary+nail+insertion+in+an+animal+model+of+fracture+healing.">A minimally invasive percutaneous technique of intramedullary nail insertion in an animal model of fracture healing.</a> Arch Orthop Trauma Surg. 121, 591-593 (2001).</li><li>Sonanis, S. V., Lampard, A. L., Kamat, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simple+technique+to+remove+a+bent+femoral+intramedullary+nail+and+broken+interlocking+screw.">A simple technique to remove a bent femoral intramedullary nail and broken interlocking screw.</a> J Trauma. 63, 435-438 (2007).</li><li>Kobbe, P., Kaczorwoski, D. J., Vodovotz, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+exposure+of+bone+components+to+injured+soft+tissue+induces+Toll-like+receptor+4-dependent+systemic+inflammation+with+acute+lung+injury.">Local exposure of bone components to injured soft tissue induces Toll-like receptor 4-dependent systemic inflammation with acute lung injury.</a> Shock. 30, 686-691 (2008).</li><li>Bumann, M., Henke, T., Gerngross, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Influence+of+haemorrhagic+shock+on+fracture+healing.">Influence of haemorrhagic shock on fracture healing.</a> Lang Arch Surg. 388, 331-338 (2003).</li><li>Santry, H. P., Alam, H. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluid+resuscitation:+past,+present,+and+the+future.">Fluid resuscitation: past, present, and the future.</a> Shock. 33, 229-241 (2010).</li><li>Hierholzer, C., Billiar, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+mechanisms+in+the+early+phase+of+hemorrhagic+shock.">Molecular mechanisms in the early phase of hemorrhagic shock.</a> Lang Arch Surg. 386, 302-308 (2001).</li><li>Chaudry, I., Ayala, A., Ertel, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hemorrhage+and+resuscitation:+immunological+aspects.">Hemorrhage and resuscitation: immunological aspects.</a> Am J Physiol. 259, 63-678 (1990).</li><li>Kawasaki, T., Hubbard, W. J., Choudhry, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trauma-hemorrhage+induces+depressed+splenic+dendritic+cell+functions+in+mice.">Trauma-hemorrhage induces depressed splenic dendritic cell functions in mice.</a> J Immunol. 177, 4514-4520 (2006).</li><li>Kohut, L., Darwiche, S. S., Frank, A. M., Brumfield, J. M., Billiar, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fixed+volume+or+Fixed+Pressure:+A+Murine+Model+of+Hemorrhgaic+Shock.">Fixed volume or Fixed Pressure: A Murine Model of Hemorrhgaic Shock.</a> J Vis Exp. , (2010).</li><li>Menzel, C. L., Pfeifer, R., Darwiche, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+lower+extremity+damage+in+mice:+time+course+of+organ+damage+and+immune+response.">Models of lower extremity damage in mice: time course of organ damage and immune response.</a> J Surg Res. 166, e149-e156 (2011).</li><li>Pfeifer, R., Kobbe, P., Darwiche, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+hemorrhage+in+the+induction+of+systemic+inflammation+and+remote+organ+damage:+Analysis+of+combined+pseudo-fracture+and+hemorrhagic+shock.">Role of hemorrhage in the induction of systemic inflammation and remote organ damage: Analysis of combined pseudo-fracture and hemorrhagic shock.</a> J Orthop Res. 29, 270-274 (2011).</li></ol>

Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu ve Araştırma Davranış ve Uyum Ofisi Pittsburgh Üniversitesi, bir AALAS / AAALAC akredite kurum tarafından belirlenen kurallara ve yönetmeliklere uygun olarak hayvanlar üzerinde deneyler yapıldı. Hayvansal kaynaklar Jackson Laboratuvarları ve Charles Rivers Laboratuvarları içerir. Bütün hayvanlar, her satıcı ile kapsamlı sağlık güvencesi yanı sıra, Pittsburgh iç hayvan sağlığı izleme programları Üniversitesi uğrarlar. Bu araştırma, omurgalı hayvanların kullanımı için ABD hükümeti müdürleri uyarınca yapılır. Program USDA ile kayıtlı, ve Halk Sağlığı Laboratuvarı Hayvan Refahı Hizmet Ofisi güvencesi için bir harf vardır.

Pseudofracture, steril kas-iskelet travma tekrarlanabilir bir fare modeli, post-travmatik bağışıklık yanıtlarının değerlendirilmesi için izin verir. Pseudofracture modeli immünolojik özellikleri uzun bir kemik kırığı rekreasyon üzerinden bir ekstremite kırığı ortamında taklit: 38,39 bifazik bir bağışıklık yanıtı şu yaralandı kas ve yumuşak doku yerli kemiği kırmadan zarar görmüş kemik ve kemik iliği maruz görülebileceği. 48hrs etrafında bir çukur olarak tasvir gecikm...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Surgical blue pad</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>50-7105</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sterile Field dressings</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>NC9517505</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Circulating heating pad 18"x26"</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harvard</td>
<td>py872-5272</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hot bead instrument sterilizer</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>11156-002</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stainless steel tray 8" x 11"</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>62687-049</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Plexiglass boards (10x15x0.5cm) </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>University of Pittsburgh Machine shop</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tape rolls 1"</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Corporate Express</td>
<td>MMM26001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>50cc conical tube</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>can be purchased through any global vendor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Straight side wide mouth jars (used as cap for nose cone)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>159000-058</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Oster A5 clippers w. size 40 blade</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>10749-020</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Surgical scissors (straight &#x2013; 12cm)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>14068-12</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Hemostats curved -18cm</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Harvard</td>
<td>81331718</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Forceps (0.8mm-tip, curved-10cm)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>11050-10</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Gauze 4"x4"</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>can be purchased through any global vendor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1.5cc microfuge tube</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>can be purchased through any global vendor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ice bucket</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>can be purchased through any global vendor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mortar and Pestle </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher</td>
<td>12-961AA</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1cc syringe w/ 25G needle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fisher Scientific</td>
<td>14-826-88</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>20G needle</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>can be purchased through any global vendor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL pipetteman</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>can be purchased through any global vendor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1mL pipette tips</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>can be purchased through any global vendor</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Falcon polystyrene 8ml tubes </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>60819-331</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sterilization pouch 3"x8"</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>24008</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Sterilization pouch 5"x10"</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>VWR</td>
<td>24010</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MacConkey II Agar plate</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>BD Biosciences</td>
<td>221172</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ethyl Alcohol - 200 proof </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Pharmaco-AAPER</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>[70%]</td>
</tr>
<tr>
<td>Pentobarbital Sodium (Nembutol Sodium Solution)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ovation </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>70mg/kg</td>
</tr>
<tr>
<td>Aerrane (Isoflurane)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Baxter </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>99.9%</td>
</tr>
<tr>
<td>Triadine Povidone Iodine (Betadine)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Triad disposables</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Buprenorphine HCl</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Bedford Laboratories</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>0.1mg/kg</td>
</tr>		</tbody>
		</table>
		</div>

pseudofracture: an acute peripheral tissue trauma model

Travması sonrası çoklu organ yetmezliği ve travma hastalarında yüksek mortalite yol açabilir erken bir hiper-reaktif inflamatuvar yanıtı yoktur; bu yanıtı, sık sık enfeksiyon klinik komplikasyonlar ekler gecikmiş bir immünosupresyon eşlik eder ve ayrıca mortaliteyi artırabilir 1-9. Birçok çalışma, bağışıklık sisteminin reaktivite travması sonrası bu değişiklikleri değerlendirmek üzere başladı. 10-15 Immünolojik çalışmalar büyük ölçüde transgenik ve in vivo modelleme için kullanılabilir knockout farelerde çeşitli yoluyla desteklenmektedir; ayrıntılı araştırmalarda bu suşların yardım immünolojik yanıtlar yer alan moleküler yollar değerlendirmek için 16-21 Farelerde kırık tespit teknikleri, karmaşık ve kolayca tekrarlanabilir gibi deneysel fare travma modelleme meydan okuma, uzun vadeli bir araştırmadır. 22-30 Bu pseudofracture modeli, kolayca çoğaltılabilir travma modelinde, anestezi sürekli, uzun süreli kullanımı olmadan, hayvan ve uzun süreli sağkalım açısından hareket özgürlüğü sağlayan, immünolojik bir ekstremite kırığı ortamında taklit ederek, bu zorlukların üstesinden. Amaç, uzun kemik kırığı özellikleri yeniden; yaralandı kas ve yumuşak doku yerli kemiği kırmadan zarar görmüş kemik ve kemik iliği maruz kalmaktadır. Ikili bir kas arka ayaklarında ezilme yaralanmaları, kemik çözüm bu yaralı kas içine enjeksiyon yoluyla takip pseudofracture modeli iki bölümden oluşmaktadır. Kemik çözüm, bir yaş ve kilo eşleştirilmiş singeneik donör her iki arka ayaklarında uzun kemiklerin hasat hazırlanmıştır. Bu kemikler daha sonra ezilmiş ve fosfat yeniden süspanse kemik çözüm oluşturmak için tamponlu salin. İkili femur kırığı ekstremite travma, yaygın olarak kullanılan ve köklü bir model ve pseudofracture modelinin geliştirilmesi sırasında karşılaştırmalı bir model oldu. Mevcut kırık modellerin çeşitliliği arasında, steril henüz orantılı olarak ciddi bir çevresel doku travması modeli istediği gibi, pseudofracture karşılaştırma olarak yumuşak doku yaralanması ile kırık kapalı bir yöntem kullanmayı seçti. 31 Hemorajik şok, ağır travma ayarı sık rastlanan bir bulgudur ve küresel hipoperfüzyon bir travma modelinde çok ilgili bir öğe ekler 32-36 pseudofracture modeli yüksek şiddeti bir çoklu travma modeli için bir hemorajik şok modeli ile kolayca kombine edilebilir . 37

Watch this Scientific Journal Video about Pseudofracture: An Acute Peripheral Tissue Trauma Model at JoVE.com

Pseudofracture: An Acute Peripheral Tissue Trauma Model

Pseudofracture, steril kas-iskelet travma tekrarlanabilir bir fare modeli, geç dönem post-travmatik immün yanıtların değerlendirilmesi için izin verir. Bu makale, usul yürütme, deneysel model kombinasyonları için potansiyel çoklu travma çalışma izni de dahil olmak üzere model adım adım açıklanmıştır.

Pseudofracture: Akut Periferik Doku Travma Modeli

Following trauma there is an early hyper-reactive inflammatory response that can lead to multiple organ dysfunction and high mortality in trauma patients; ...

pseudofracture-an-acute-peripheral-tissue-trauma-model

Research

JoVE Journal

Medicine

14.6K Görüntüleme.  University of Pittsburgh. Pseudofracture, steril kas-iskelet travma tekrarlanabilir bir fare modeli, geç dönem post-travmatik immün yanıtların değerlendirilmesi için izin verir. Bu makale, usul yürütme, deneysel model kombinasyonları için potansiyel çoklu travma çalışma izni de dahil olmak üzere model adım adım açıklanmıştır.

Video: Pseudofracture: An Acute Peripheral Tissue Trauma Model

Visualization and Analysis of Blood Flow and Oxygen Consumption in Hepatic Microcirculation: Application to an Acute Hepatitis Model

There is a considerable discrepancy between oxygen supply and demand in the liver because hepatic oxygen consumption is relatively high but about 70% of the hepatic blood supply is poorly oxygenated portal vein blood derived from the gastrointestinal tract and spleen. Oxygen is delivered to hepatocytes by blood flowing from a terminal branch of the portal vein to a central venule via sinusoids, and this makes an oxygen gradient in hepatic lobules. The oxygen gradient is an important physical parameter that involves the expression of enzymes upstream and downstream in hepatic microcirculation, but the lack of techniques for measuring oxygen consumption in the hepatic microcirculation has delayed the elucidation of mechanisms relating to oxygen metabolism in liver. We therefore used FITC-labeled erythrocytes to visualize the hepatic microcirculation and used laser-assisted phosphorimetry to measure the partial pressure of oxygen in the microvessels there. Noncontact and continuous optical measurement can quantify blood flow velocities, vessel diameters, and oxygen gradients related to oxygen consumption in the liver. In an acute hepatitis model we made by administering acetaminophen to mice we observed increased oxygen pressure in both portal and central venules but a decreased oxygen gradient in the sinusoids, indicating that hepatocyte necrosis in the pericentral zone could shift the oxygen pressure up and affect enzyme expression in the periportal zone. In conclusion, our optical methods for measuring hepatic hemodynamics and oxygen consumption can reveal mechanisms related to hepatic disease.

An optical system was developed to visualize hepatic microcirculation with FITC-labeled erythrocytes and to measure the partial pressure of oxygen in the microvessels with laser-assisted phosphorimetry. This method can be used to investigate physiological and pathological mechanisms by analyzing microvascular structure, diameter, blood flow velocity, and oxygen tension.

Akut Hepatit Model Uygulama: Görselleştirme ve Hepatik Mikrosirkülasyon Kan Akış ve Oksijen Tüketimi Analizi

There is a considerable discrepancy between oxygen supply and demand in the liver because hepatic oxygen consumption is relatively high but about 70% of ...

Tıp

Using Quantitative Real-time PCR to Determine Donor Cell Engraftment in a Competitive Murine Bone Marrow Transplantation Model

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules that regulate HSCs. In these transplant model systems, the function of HSCs is determined by the ability of these cells to engraft and reconstitute lethally irradiated recipient mice. Commonly, the donor cell contribution/engraftment is measured by antibodies to donor- specific cell surface proteins using flow cytometry. However, this method heavily depends on the specificity and the ability of the cell surface marker to differentiate donor-derived cells from recipient-originated cells, which may not be available for all mouse strains. Considering the various backgrounds of genetically modified mouse strains in the market, this cell surface/ flow cytometry-based method has significant limitations especially in mouse strains that lack well-defined surface markers to separate donor cells from congenic recipient cells. Here, we reported a PCR-based technique to determine donor cell engraftment/contribution in transplant recipient mice. We transplanted male donor bone marrow HSCs to lethally irradiated congenic female mice. Peripheral blood samples were collected at different time points post transplantation. Bone marrow samples were obtained at the end of the experiments. Genomic DNA was isolated and the Y chromosome specific gene, Zfy1, was amplified using quantitative Real time PCR. The engraftment of male donor-derived cells in the female recipient mice was calculated against standard curve with known percentage of male vs. female DNAs. Bcl2 was used as a reference gene to normalize the total DNA amount. Our data suggested that this approach reliably determines donor cell engraftment and provides a useful, yet simple method in measuring hematopoietic cell reconstitution in murine bone marrow transplantation models. Our method can be routinely performed in most laboratories because no costly equipment such as flow cytometry is required.

Determining donor cell engraftment presents a challenge in mouse bone marrow transplant models that lack well-defined phenotypical markers. We described a methodology to quantify male donor cell engraftment in female transplant recipient mice. This method can be used in all mouse strains for the study of HSC functions.

Rekabetçi bir mürin Kemik İliği Transplantasyon Modelinde Donör Hücre Aşı belirleme Kantitatif Gerçek-zamanlı PCR kullanarak

Murine bone marrow transplantation models provide an important tool in measuring hematopoietic stem cell (HSC) functions and determining genes/molecules ...

Acute Brain Trauma in Mice Followed By Longitudinal Two-photon Imaging

Although acute brain trauma often results from head damage in different accidents and affects a substantial fraction of the population, there is no effective treatment for it yet. Limitations of currently used animal models impede understanding of the pathology mechanism. Multiphoton microscopy allows studying cells and tissues within intact animal brains longitudinally under physiological and pathological conditions. Here, we describe two models of acute brain injury studied by means of two-photon imaging of brain cell behavior under posttraumatic conditions. A selected brain region is injured with a sharp needle to produce a trauma of a controlled width and depth in the brain parenchyma. Our method uses stereotaxic prick with a syringe needle, which can be combined with simultaneous drug application. We propose that this method can be used as an advanced tool to study cellular mechanisms of pathophysiological consequences of acute trauma in mammalian brain in vivo. In this video, we combine acute brain injury with two preparations: cranial window and skull thinning. We also discuss advantages and limitations of both preparations for multisession imaging of brain regeneration after trauma.

Acute brain trauma is a severe injury that has no adequate treatment to date. Multiphoton microscopy allows studying longitudinally the process of acute brain trauma development and probing therapeutical strategies in rodents. Two models of acute brain trauma studied with in vivo two-photon imaging of brain are demonstrated in this protocol.

Boyuna İki foton görüntüleme ile takip Farelerde Akut Beyin Travma

Although acute brain trauma often results from head damage in different accidents and affects a substantial fraction of the population, there is no ...

Ischemic Tissue Injury in the Dorsal Skinfold Chamber of the Mouse: A Skin Flap Model to Investigate Acute Persistent Ischemia

Despite profound expertise and advanced surgical techniques, ischemia-induced complications ranging from wound breakdown to extensive tissue necrosis are still occurring, particularly in reconstructive flap surgery. Multiple experimental flap models have been developed to analyze underlying causes and mechanisms and to investigate treatment strategies to prevent ischemic complications. The limiting factor of most models is the lacking possibility to directly and repetitively visualize microvascular architecture and hemodynamics. The goal of the protocol was to present a well-established mouse model affiliating these before mentioned lacking elements. Harder et al. have developed a model of a musculocutaneous flap with a random perfusion pattern that undergoes acute persistent ischemia and results in ~50% necrosis after 10 days if kept untreated. With the aid of intravital epi-fluorescence microscopy, this chamber model allows repetitive visualization of morphology and hemodynamics in different regions of interest over time. Associated processes such as apoptosis, inflammation, microvascular leakage and angiogenesis can be investigated and correlated to immunohistochemical and molecular protein assays. To date, the model has proven feasibility and reproducibility in several published experimental studies investigating the effect of pre-, peri- and postconditioning of ischemically challenged tissue.

The window of the murine dorsal skinfold chamber presented visualizes a zone of acute persistent ischemia of a musculocutaneous flap. Intravital epi-fluorescence microscopy permits for direct and repetitive assessment of the microvasculature and quantification of hemodynamics. Morphologic and hemodynamic results can further be correlated with histological and molecular analyses.

Mouse Dorsal Skinfold Odası&#39;nda İskemik Doku Yaralanması: Bir Cilt Flap Model Akut Kalıcı iskemisi Araştırma

Despite profound expertise and advanced surgical techniques, ischemia-induced complications ranging from wound breakdown to extensive tissue necrosis are ...

Direct Mouse Trauma/Burn Model of Heterotopic Ossification

Heterotopic ossification (HO) is the formation of bone outside of the skeleton which forms following major trauma, burn injuries, and orthopaedic surgical procedures. The majority of animal models used to study HO rely on the application of exogenous substances, such as bone morphogenetic protein (BMP), exogenous cell constructs, or genetic mutations in BMP signaling. While these models are useful they do not accurately reproduce the inflammatory states that cause the majority of cases of HO. Here we describe a burn/tenotomy model in mice that reliably produces focused HO. This protocol involves creating a 30% total body surface area partial thickness contact burn on the dorsal skin as well as division of the Achilles tendon at its midpoint. Relying solely on traumatic injury to induce HO at a predictable location allows for time-course study of endochondral heterotopic bone formation from intrinsic physiologic processes and environment only. This method could prove instrumental in understanding the inflammatory and osteogenic pathways involved in trauma-induced HO. Furthermore, because HO develops in a predictable location and time-course in this model, it allows for research to improve early imaging strategies and treatment modalities to prevent HO formation.

An Achilles tenotomy and burn injury model of heterotopic ossification allows for the reliable study of trauma induced ectopic bone formation without the application of exogenous factors.

Doğrudan Fare Travma / Heterotopik Kemikleşme Model Yanık

Heterotopic ossification (HO) is the formation of bone outside of the skeleton which forms following major trauma, burn injuries, and orthopaedic surgical ...

An Acute Retinal Model for Evaluating Blood Retinal Barrier Breach and Potential Drugs for Treatment

A low-cost, easy-to-use and powerful model system is established to evaluate potential treatments that could ameliorate blood retinal barrier breach. An inflammatory factor, histamine, is demonstrated to compromise vessel integrity in the cultured retina through positive staining of IgG outside of the blood vessels. The effects of histamine itself and those of candidate drugs for potential treatments, such as lipoxin A4, are assessed using three parameters: blood vessel leakage via IgG immunostaining, activation of M&#252;ller cells via GFAP staining and change in neuronal dendrites through staining for MAP2. Furthermore, the layered organization of the retina allows a detailed analysis of the processes of M&#252;ller and ganglion cells, such as changes in width and continuity. While the data presented is with swine retinal culture, the system is applicable to multiple species. Thus, the model provides a reliable tool to investigate the early effects of compromised retinal vessel integrity on different cell types and also to evaluate potential drug candidates for treatment.

A low-cost, easy-to-use and powerful system is established to evaluate potential treatments that could ameliorate blood retinal barrier breach induced by histamine. Blood vessel leakage, M&#252;ller cell activation and the continuity of neuronal processes are utilized to assess the damage response and its reversal with a potential drug, lipoxin A4.

Tedavi Kan Retina Bariyer ihlali ve Potansiyel İlaçlar değerlendirilmesi için bir Akut Retina Modeli

A low-cost, easy-to-use and powerful model system is established to evaluate potential treatments that could ameliorate blood retinal barrier breach. An ...

A Saline/Bipolar Radiofrequency Energy Device As an Adjunct for Hemostasis in Solid Organ Injury/Trauma

Solid organ (liver, spleen, and kidney) hemorrhage is often life-threatening and can be difficult to stop in critically ill patients. Traditional techniques for arresting this ongoing bleeding include coagulation by high voltage electrocautery, topical hemostatic application, and the delivery of ignited argon gas. The goal of this study/video was to demonstrate the efficacy of a new energy device for arresting persistent solid organ hemorrhage.A novel instrument utilizing bipolar radiofrequency (RF) energy which acts to ignite/boil dripping saline from a simple handpiece is employed to arrest ongoing bleeding from solid organ injuries in a porcine model. This instrument is extrapolated from experience within elective hepatic resections. An escalating series of injuries to solid organs within a porcine model will be created. This will be followed by arresting hemorrhage with this novel energy device in sequence. A standard suction device will also be employed. This simple saline/RF energy instrument has the potential to arrest ongoing solid organ surface/capsular bleeding, as well as moderate hemorrhage associated with deep lacerations.

The goal of this publication is to demonstrate the potential application of a novel device using simulated solid organ injuries in a porcine model.

Solid Organ Yaralanması/Travmasında Hemostaz Anedi Olarak Tuzlu/Bipolar Radyofrekans Enerji Cihazı

Solid organ (liver, spleen, and kidney) hemorrhage is often life-threatening and can be difficult to stop in critically ill patients. Traditional ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

İzometrik Contractility ölçüm tel Myography kullanarak fare mezenterik arter

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Flow Cytometry Analysis of Immune Cell Subsets within the Murine Spleen, Bone Marrow, Lymph Nodes and Synovial Tissue in an Osteoarthritis Model

Osteoarthritis (OA) is one of the most prevalent musculoskeletal diseases, affecting patients suffering from pain and physical limitations. Recent evidence indicates a potential inflammatory component of the disease, with both T-cells and monocytes/macrophages potentially associated with the pathogenesis of OA. Further studies postulated an important role for subsets of both inflammatory cell lineages, such as Th1, Th2, Th17, and T-regulatory lymphocytes, and M1, M2, and synovium-tissue-resident macrophages. However, the interaction between the local synovial and systemic inflammatory cellular response and the structural changes in the joint is unknown. To fully understand how T-cells and monocytes/macrophages contribute towards OA, it is important to be able to quantitively identify these cells and their subsets simultaneously in synovial tissue, secondary lymphatic organs and systemically (the spleen and bone marrow). Nowadays, the different inflammatory cell subsets can be identified by a combination of cell-surface markers making multi-color flow cytometry a powerful technique in investigating these cellular processes. In this protocol, we describe detailed steps regarding the harvest of synovial tissue and secondary lymphatic organs as well as generation of single cell suspensions. Furthermore, we present both an extracellular staining assay to identify monocytes/macrophages and their subsets as well as an extra- and intra-cellular staining assay to identify T-cells and their subsets within the murine spleen, bone marrow, lymph nodes and synovial tissue. Each step of this protocol was optimized and tested, resulting in a highly reproducible assay that can be utilized for other surgical and non-surgical OA mouse models.

Here, we describe a detailed and reproducible flow cytometry protocol to identify monocyte/macrophage and T-cell subsets using both extra- and intracellular staining assays within the murine spleen, bone marrow, lymph nodes and synovial tissue, utilizing an established surgical model of murine osteoarthritis.

Bir Osteoartrit Modelinde Minör Dalak, Kemik İliği, Lenf Düğümleri ve Sinovyal DokuDaki İmmün Hücre Alt Kümelerinin Akış Sitometri Analizi

Osteoarthritis (OA) is one of the most prevalent musculoskeletal diseases, affecting patients suffering from pain and physical limitations. Recent ...

Halogenated Agent Delivery in Porcine Model of Acute Respiratory Distress Syndrome via an Intensive Care Unit Type Device

Acute respiratory distress syndrome (ARDS) is a common cause of hypoxemic respiratory failure and death in critically ill patients, and there is an urgent need to find effective therapies. Preclinical studies have shown that inhaled halogenated agents may have beneficial effects in animal models of ARDS. The development of new devices to administer halogenated agents using modern intensive care unit (ICU) ventilators has significantly simplified the dispensing of halogenated agents to ICU patients. Because previous experimental and clinical research suggested potential benefits of halogenated volatiles, such as sevoflurane or isoflurane, for lung alveolar epithelial injury and inflammation, two pathophysiologic landmarks of diffuse alveolar damage during ARDS, we designed an animal model to understand the mechanisms of the effects of halogenated agents on lung injury and repair. After general anesthesia, tracheal intubation, and the initiation of mechanical ventilation, ARDS was induced in piglets via the intratracheal instillation of hydrochloric acid. Then, the piglets were sedated with inhaled sevoflurane or isoflurane using an ICU-type device, and the animals were ventilated with lung-protective mechanical ventilation during a 4 h period. During the study period, blood and alveolar samples were collected to evaluate arterial oxygenation, the permeability of the alveolar-capillary membrane, alveolar fluid clearance, and lung inflammation. Mechanical ventilation parameters were also collected throughout the experiment. Although this model induced a marked decrease in arterial oxygenation with altered alveolar-capillary permeability, it is reproducible and is characterized by a rapid onset, good stability over time, and no fatal complications.
We have developed a piglet model of acid aspiration that reproduces most of the physiological, biological, and pathological features of clinical ARDS, and it will be helpful to further our understanding of the potential lung-protective effects of halogenated agents delivered through devices used for inhaled ICU sedation.

We describe a model of hydrochloric acid-induced acute respiratory distress syndrome (ARDS) in piglets receiving sedation with halogenated agents, isoflurane and sevoflurane, through a device used for inhaled intensive care sedation. This model can be used to investigate the biological mechanisms of halogenated agents on lung injury and repair.

Akut Solunum Sıkıntısı Sendromunun Porcine Modelinde Yoğun Bakım Ünitesi Tipi Cihazla Halojenli Ajan Doğumu

Acute respiratory distress syndrome (ARDS) is a common cause of hypoxemic respiratory failure and death in critically ill patients, and there is an urgent ...