Burada gösterilen diyafiz femur kırığı modeli, uzun kemik kırığı iyileşmesinin temel ve klinik öncesi çalışmaları için uygun, basit ve düşük maliyetli bir murin modelidir. Açık cerrahi teknik, karmaşık cerrahi aletler ve sabitleme cihazları gerektirmez. Üretilen kırığın görsel olarak incelenmesini sağlar.
Bu model, perkütan veya sistemik enjeksiyonla verilemeyen kök hücreler, ilaçlar ve biyomateryaller dahil olmak üzere terapötik bileşenlerin lokal transplantasyonu ve in vivo testi için kullanılabilir. Ameliyat protokolü, kritik adımları gerçekleştirmek için temel cerrahi teknikler ve fare anatomisi hakkında biraz bilgi gerektirir. Bu çalışmadaki görsel gösteri, hayvan cerrahisi konusunda deneyimsiz olanlar için bile yardımcı olabilir.
Prosedürü gösteren, her ikisi de Kök Hücre ve Kemik Onarımı Laboratuvarı'ndan yüksek lisans öğrencileri olan Leonardo Muller ve Bianca Frade olacak. Anestezi uygulanan hayvanı ameliyat masasına transfer ettikten sonra %10'luk povidon iyot süngeri ile cildi ovalayarak kesilecek bölgeyi dezenfekte edin. Daha sonra ovuşturulan alanı steril gazlı bezle kurulayın,% 70 etanol ile yıkayın ve steril bir gazlı bezle tekrar kurulayın.
Ardından, fareyi sağ lateral dekübit pozisyonuna getirin ve fareyi örtün, sadece kesi bölgesini görünür hale getirin. Ameliyattan önce, kuruluğu önlemek için farenin gözlerine göz damlası yerleştirin ve cerrahi işlem sırasında farenin nefesini sürekli kontrol edin. Tibial tüberozite seviyesinden başlayıp patella seviyesine kadar uzanan ve daha sonra distal femura doğru eşit bir mesafe için 11 numaralı neşter bıçağı ile bir santimetre kutanöz lateral parapatellar kesi yapın.
Künt uçlu makasla, fasya lata, lateral vastus ve femoral biseps kaslarını ortaya çıkarmak için deri altı fasyayı insizyon hattının etrafında inceleyin. 11 numaralı neşter bıçağı ile, eklem kapsülünü açmak ve diz eklemine erişmek için tibial tüberozite seviyesinden başlayarak ve biseps femoris aponevroz boyunca distal femur seviyesine kadar ilerleyerek deride yapılana benzer fasya latasında başka bir kesi yapın. Düz tırtıklı hassas uçlu bir cımbızın ucunu altına yerleştirerek ve patella ve kuadriseps bağları ile birlikte yana doğru iterek patellanın medial lüksasyonunu gerçekleştirin, böylece femurun kondillerini açığa çıkarın.
Femuru tırtıklı uçlu bir cımbızla tutarak, dizi 90 derecede esnetin ve femurun intramedüller kanalını 26 gauge hipodermik iğne ile interkondiler fossadan manuel olarak delin. Dizin 90 derecede bükülmüş halde tutulmasıyla, 1.0 santimetrelik bir segment, 0.016 inçlik bir paslanmaz çelik çubuk tel, açıklıktan femurun medüller kanalına büyük trokantere doğru yerleştirin. Lateral kondile sıkıca sabitlemek için telin distal ekstremitesini düz tırtıklı uçlu bir cımbızla ayarlayın.
Daha sonra, femurun distal diyafizine erişmek için tırtıklı uçlu bir cımbızla künt uçlu diseksiyon yoluyla lateral vastus ve femoral biseps kaslarını ayırın. Femur diyafizinin etrafına yaklaşık 90 derecelik bir açıyla bir diseksiyon makası yerleştirin ve nazikçe tam bir kortikal osteotomi yapın. Düz tırtıklı, hassas uçlu bir cımbızın ucunu kondil bölgesi üzerinde iterek kasları ve patellayı yeniden konumlandırın.
Kas fasyasını 6-0 yeniden emilebilir bir sütürle ve ardından cildi 6-0 naylon sütür kullanarak kapatın, her ikisi de basit kesintili bir şekilde. Kabul edilebilir kırık paternlerinin radyografileri, kırık hatlarının kemiğin eksenine 90 derecelik bir açıda olduğu transvers diyafiz kırıklarını, kırık hattının kemiğin eksenine göre 30 dereceden az olduğu kısa eğik kırıkları, birkaç küçük kemik parçasının görüldüğü indirgenebilir parçalı kırıkları gösterir, Ancak kemiğin anatomik dizilimi kalır. Burada, telin proksimal femur fragmanının medüller kanalının içinde olmadığı, dolayısıyla kırık kemiğin yanlış fiksasyonuna neden olduğu ve telin herhangi bir kemik parçasından geçmediği ve kırık kemiğin tamamen hizalanmadığı bir vaka ile yanlış yerleştirilmiş tellerin temsili radyografileri gösterilmektedir.
Ameliyattan sonraki 14. ve 21. günde kırık bölgesinde gözle görülür nasır, modelin rejeneratif sürecini gösterir. Histolojik analiz, kırık bölgesindeki nasırın değerlendirilmesini gösterir. Nasır, başlangıçta yedinci günde, kırık hattı çevresinde geniş highline kıkırdak alanları sunar.
14. günde, kıkırdak bölgesi çevresinde kemikleşme cepheleri gözlenir, trabeküler kemik ve sulandırılmış kemik iliği ile dolu boşluklar oluşur. Son olarak, 21. günde, kıkırdak bölgeleri neredeyse tamamen trabeküler kemik ile değiştirilir ve bu da başarılı kemik köprülemesini gösterir. Modelin başarısı, telin doğru yerleştirilmesine bağlıdır.
Bu nedenle, bu adım sırasında dizin 90 derecelik bir açıyla bükülmesini sağlamak çok önemlidir. Ek olarak, mikro bilgisayarlı demografi, hücrenin evrimini ve oluşan kemiğin özelliklerini üç boyutlu ve nicel bir ölçekte değerlendirmek için kullanılabilir.
