Flaş nanoyağış, ya da FNP teknikleri burada polimerik nano tanecikleri içinde hidrofobik veya hidrofilik bileşikler kapsülleme için ölçeklenebilir ve basit bir platform sunuyoruz. Netlik için, biyolojik kapsüllemek için kullanılan teknik ters flaş nanoyağış denir, veya IFNP. Temel ilkeler değişmez, ancak ortaya çıkan nanopartikül yapısı farklıdır.
Genellikle, yeni kullanıcıların küçük nanopartikül toplu işlerini el ile yaparken giriş şırıngalarını tutarlı bir şekilde çalıştırmak için pratik yapması gerekir. Bilgisayar kontrollü şırınga pompaları ile daha büyük hacimlerde üretilebilir. Protokolümüz ayrıca, bir formülasyonun başarılı bir şekilde uygulanması için genellikle kritik öneme sahip olan nanopartikül çözeltilerinin post processing ile ilgili ayrıntıları da sağlamaktadır.
İşleme başlamadan önce, CIJ karıştırıcı bağlantı parçaları kontrol edin ve çıkış borusu kıvrılmış olmadığından emin olun. Sonra, iki beş mililitre polipropilen kauçuk ücretsiz Luer kilit şırıngalar aseton iki ila üç mililitre, ya da başka bir temizlik çözücü ile doldurun. Şırıngaları giriş adaptörlerine kilitleyin ve montajı bir atık kabının üzerine yerleştirin.
Birkaç saniye boyunca çözücüyu karıştırma odasından geçirmek için dalan ların baskısını sürekli olarak bastırın. Sonra, şırıngaları çıkarın ve azot gazı akışı ile karışımı kurulayın. Sonra, çözücü giriş akışı hazırlamaya başlamak için, pipet 0.25 mililitre e vitamini mililitre çözeltisi başına 10 mililitre, dengeleyici ücretsiz tetrahidrofuran, bir 1.5 mililitre mikrosantrifüj tüp içine.
Daha sonra, pipet 0.25 mililitre mililitre de thf'deki blok kopolimer stabilizatörün mililitre çözeltisi aynı tüpe. Karışımı 5 ila 10 saniye arasında girdap layın ve sonra kapağına yapışan sıvıyı kurtarmak için bin G'de 5 ila 10 saniye santrifüj edin. Anti-çözücü olarak 0,525 mililitre deiyonize su içeren 1,5 mililitrelik bir santrifüj tüp hazırlayın.
Sonra, pipet 20 mililitre liksinitasyon şişesiiçine deiyonize su dört mililitre söndürme banyosu yapmak için. Şişeye küçük bir karıştırma çubuğu yerleştirin. Temiz CIJ mikseri, bir karıştırma plakası üzerinde bir raf veya test tüpü bloğu içinde söndürme banyosu üzerine yerleştirin.
Mümkün olan maksimum hızın yaklaşık% 75'inde söndürme banyosunu karıştırmaya başlayın. Daha sonra, bir mililitre polipropilen kauçuk serbest şırınga künt uçlu iğne sığdırın ve anti-solvent kadar çizin. Dikkatle şırınga hava kabarcıkları dışarı ve sonra kaldırmak ve iğne bertaraf.
Sıvı şırınganın sonuna kadar gelmesi için pistonu ayarlayın. Ardından şırıngayı CIJ girişlerinden birine takın. Aynı şekilde ikinci bir şırınga içine solvent karışımı çizin ve diğer girişine takın.
Nano tanecikleri oluşturmak için, aynı anda 0,5 saniyeden daha kısa bir sürede düzgün bir düzgün hareket ile her iki dalma makinesinin deprese sini. Şırıngaları hızlı, dengeli ve sorunsuz bir şekilde bastırmak çok önemlidir. Aniden şırıngalar grev olmamalıdır, ama şırıngaüstleri ile temas zaten hareket başlamalıdır.
Daha sonra, soygun hacminin dağılıma akmaması için şırıngaları çıkarmadan CIJ mikseri atık kabının üzerine yerleştirin. Karıştırma çubuğunu ışıltı lı şişeden çıkarın ve kapağını kap. Daha sonra, solvent ve anti-solvent şırıngaları çıkarın ve atın.
Bir sonraki flaş nanoçökme denemesinden önce mikseri temizleyin. Dinamik ışık saçılma analizi için bir örnek hazırlamak için, pipet bir cuvette içine dağılım 100 mikrolitre. 900 mikrolitre banyo çözücüsi ekleyin ve numune analizine başlamadan önce borular üzerinde iyice karıştırın.
Mikro MIVM'i montaja başlamak için O-halkasını karıştırma geometrisi diskine yerleştirin. Karıştırma diskindeki delikleri üst diskteki mandallarla hizalayın ve O-halkasını yerinden etmemeye dikkat ederek birbirine sığdırın. Alt alıcıdaki çıkış borusu montajını gevşetin ve bağlı diskleri alıcıya vidalayın.
Üst diskin mandallarına bir anahtar anahtarı tonuyla tonuyla titreyin ve montajı sıkın. Karıştırma geometrisi diskinin alt yüzüne sıkıca yaslanması için çıkış borularını sıkın. Üst diskteki şırınga parçalarının rahat olduğundan emin olun.
Mikser standındaki mobil plakayı kaldırın ve onu yoldan uzak tutun, ardından monte edilmiş mikseri destek plakasına dişli çıkış borusuyla standa yerleştirin. Daha sonra, çıkış boru altında söndürme banyosu olarak kloroform 5,25 mililitre içeren bir 15 mililitre centrifuge tüp yerleştirin. Daha sonra, 0.75 mililitre çözelti A çizin, hangi bir mililitre gaz sıkı Luer kilit şırınga içine bir mililitre gaz sıkı Luer kilit şırınga içine, hacim olarak dimetil sülfoksit ovalbumin mililitre çözeltisi başına beş miligram, künt uçlu iğne ile bir mililitre gaz sıkı Luer kilit şırınga içine.
Dikkatlice hava kabarcıkları dışarı, iğne kaldırmak ve Luer montaj sonuna kadar çözüm astar. Şırıngayı mikser girişine bağlayın. DMSO blok kopolimer stabilizatör mililitre başına altı miligram olan B çözeltisinin her biri 0,75 mililitre ile bu işlemi ve THF olan C çözeltisi ile tekrarlayın.
Şırıngaları mikser girişlerine saat yönünde alfabetik sıraya göre bağlayın. Kloroform olan 1,85 mililitre d çözeltisi içeren 2,5 mililitrelik gaz geçirmez bir şırınga hazırlayın ve dördüncü girişe bağlayın. Şırınga yüksekliklerinde önemli bir fark olmadığını doğrulayın.
Daha sonra, mobil plakanın her iki tarafındaki rulman gövdesini dikkatlice tutun ve şırıngaların üzerinde zar zor eşit olarak dinlenene kadar plakayı yavaşça indirin. Nano tanecikleri oluşturmak için, sürekli ve sorunsuz yaklaşık 0,5 ila bir saniye içinde plaka depress. Sonra, çıkarın ve söndürme banyo tüpü kap.
Bittiğinde mikserini sökün ve temizleyin. Daha büyük hacimlerde çalışmak için, çözümleri gaz geçirmez şırıngalara yükleyin ve politetetrafloroetilen boruyu Luer bağlantı parçalarıyla şırıngalara bağlayın. Borunun uçlarına kadar çözümler asal.
Şırıngaları şırınga pompalarına bağlayın ve boruyu uygun mikser girişlerine takın. Başlangıç hacmini toplamak için çıkış borusu altına küçük bir atık tüpü yerleştirin. Söndürme banyosunu hazırlayın ve yakınlarda tutun.
Aynı anda, pompaları başlatmak ve atık şişe içine atık akışı yaklaşık beş mililitre sağlar. Sonra, her zamanki gibi söndürme banyosunda nano tanecikleri toplamaya başlayın. Bir karıştırma plakası istenirse söndürme banyosu karıştırmak için kullanılabilir.
Bir hidrofobik çekirdek ile polimerik nano tanecikleri FNP fnp dört kopyaları, CIJ karıştırıcı hazırlanan, yüksek çoğalabilirlik gösterdi, ve nispeten monodisperse edildi, 107 nanometre ortalama çapı ile. Yavaş veya düzensiz şırınga depresyonundan kaynaklanan temsili bir yanlış ateş, biraz daha büyük parçacıklar üretti, bu örnekte polidispersitten etkilenmezken, yanlış ateşler daha fazla polidisperse dağılımına neden olabilir. DLS otomatik korelasyon fonksiyonu temsili polimerik nanopartikül numunesi için sorunsuz bir şekilde çürütülür.
Bunun yerine mikron ölçekli yağ damlacıkları üreten blok kopolimer stabilizatör olmadan formülasyon denendiğinde bu pürüzsüz çürüme gözlenmemiştir. Sabitleyiciye ait göreceli çekirdek maddesi, burada gösterildiği gibi, polistiren çekirdekli nano taneciklerde parçacık boyutunu kontrol etti. PDI her formülasyonda 0.15'in altındaydı.
IFNP tarafından üretilen hidrofilik çekirdekli nano tanecikler. CIJ mikserinde hazırlanan maltodekstrin çekirdeğine sahip partiküller yaklaşık 65 nanometre çapındaydı ve PDI 0.08 idi. Mikro MIVM'de hazırlanan ovalbumin çekirdeği olan partiküllerin çapı yaklaşık 125 nanometre ve PDI 0.16 idi.
FNP ve IFNP, molekülleri ve nano parçacıkları işlemek için güçlü araçlardır. Her iki tekniği de gerçekleştirmeden önce, karıştırma sırasında yüksek süper doygunluk sağlamak için her bileşenin tüm çözücülerde veya çözücü karışımlarında çözünürlüklerini göz önünde bulundurun. Temel teknik basittir, ancak şırınga depresyon adımları mastering bazı uygulama alır.
Bu sorun varsa, tutarlılığı artırmak için bu videoda gösterilen gibi bir şırınga pompası kurulum kullanmayı düşünün. Yüklü hidrofilik moleküller veya ara çözünürlüğe sahip moleküller için FNP, verimli kapsülleme sağlamak için hidrofobik iyon eşleştirmesi ile birleştirilebilir. FNP aynı nanopartikül çekirdeğinde birden fazla bileşik kapsüllemek için de kullanılabilir.
İstediğiniz uygulamada nanopartikül dağılımlarından organik çözücüleri en iyi nasıl çıkarılamayınız için metin ve diğer literatür kaynaklarına başvurun. Depolama sırasında nano tanecikleri stabilize etmek için bir dizi teknik de vardır.
