Bu yeni protokol araştırmacısisive mitokondriyal oksijenasyon un yanı sıra sitosolik redoks durumu da dahil olmak üzere birden fazla metabolik parametreleri izlemeizni verir. Aynı anda miyokardfonksiyonunun geleneksel ölçümlerini ölçerken. Bu tekniğin en büyük avantajı, yansıma spektroskopisi ile ilişkili eserlerden kaçınan perfüzyon kalpteki mitokondriyal metabolizmanın önemli unsurlarının basit bir nonkafil dinamik izlenmesidir.
Bu teknikte yeni olanlar, vanaya zarar vermeden kateteri takmakta zorlanabilir ve oda ışığının kirlenmesini önleyebilir. Kateter dikkatlice takılmalıdır. Toplama fiber de zor olabilir sol ventrikül serbest duvar boyunca iletilen ışık maksimize etmek için düzgün bir şekilde konumlandırılmalıdır.
Sol atriyal aparatın küçük bir parçasını kesmeye başlamak ve mitral kapak aracılığıyla sol ventriküle fiber optik kateter takın. Sonra ışıklı sol ventrikül serbest duvar elde etmek için döndürün. Pick up fiberin diğer ucunu hızlı bir tarama spektrometresine bağlayın.
Kalpten yaklaşık bir santimetre de sol ventrikül maksimum aydınlatma bölgesinin tam karşısında fiber optik pozisyon. Oda ışık kaynakları sıfır olmalıdır. Kateterin dönüşü ve optik fiberin konumlandırılması dedektörün doygunluğu olmadan yeterli ışığı elde etmek için ayarlanmalıdır.
Tam bir karanlık elde etmek için deneysel alandaki ışıkları kapatın. Veri toplama ve iletilen ışığın gerçek zamanlı analizini gerçekleştirmek için spektrometre sürücülerini içeren özel programı başlatın. Perfüzyon kalp spektroskopisi edinme modu için tüm istemleri seçerek gidin.
Bir sonraki sayfada yardımcı veri toplamanın oluşup oluşmadığını belirtin. Son olarak, hem kromofor referans spektrumunun ve kaydedilecek verilerin yerini içeren edinme parametrelerini girin. Şimdi 490-630 nanometre bant genişliği girin.
İki hertz bir örnekleme oranı girin. Işık kaynağını kapatarak arka plan sinyal düzeylerini düzeltmek için koyu akım veya sıfır ışık spektrumu toplayın. Montaj rutininde kullanılmak üzere istenilen kromofor referanslarını seçmek için tıklayın.
Elde edilen veri sayfasında, oksijenli miyoglobin absorbanslarının gözlenmesi gereken 500 nanometre lik bölgede sinyal genliğine özel bir dikkat gösterilmiş olarak yazılımda görüntülenen iletilen ışığı en üst düzeye çıkarmak için hem kateterin hem de pick up fiberin konumunu ayarlayın. İletilen ışığın 600 nanometre lik bölgede dedektörü doytunolmadığından emin olun. Kateter aydınlatmasını kapatarak ve artık ışık algılanamamasını onaylayarak toplanan spektruma harici ışık kaynaklarının katkıda bulunmadığından emin olun.
Spectra'yı Kaydet düğmesini tıklatarak veri toplamaişlemini başlatın. Mevcut kontrol spektrumuna göre gelecekteki spektrumlardan fark emici spektrumu görüntülemek için Kontrol olarak Ayarla'yı tıklatın. Bu noktada istenilen herhangi bir fizyolojik tedirginlik gerçekleştirin.
Örneğin, siyanürün kardiyak performans ve kromofor emilimi üzerindeki etkilerini belirlemek için, geri dönüşüm siyanür önlemek için perfusate dolaşımını durdurmak. Kalbe akan perfusate siyanür istenilen konsantrasyonları elde etmek için aort kanula hemen önce perfusatiçine farklı oranlarda siyanür enjekte etmek için bir şırınga pompası kullanın. Aynı anda kardiyak fonksiyon ve optik özellikleri izleyin.
Koroner akış ve kalp hızı etkileri, kalp duvarı ile optik iletim ile birlikte sabit durumda olduğunda siyanür şırınga pompası durdurun. Siyanür infüzyonu durduktan beş dakika sonra köpüren gazı %100 oksijenden %100 nitrojene çevirerek oksijeni sistemden uzaklaştırın. Yaklaşık 10 dakika sonra toplam iskemik ve hipoksik durumu simüle etmek için akışı durdurmak.
Spektral veri analizi için perfüze kalp analizi modunda programı çalıştırın. Uygun analiz programını seçin. Veri dosyası yolunu ve başvuru spectra dosyasını girin.
Kateter ışık kaynağının önceden kaydedilmiş spektrumuna yüklenen kateter ışık kaynağını seçin. Oku Kutusu Verilerini seçin. Ardından, Minimum ve Maksimum Dalga Boyunu Ayarla'yı seçin.
Veri analizi için bant genişliğini 490-630 nanometre olarak girin. Ana Menüye Dön'u ve ardından Başvuruları Oku'u seçin. Analizde kullanılacak referans spektrumlarını onaylayın.
Ana Menüye Dön'u seçin ve ardından ana menüde Zaman Noktaları'nı seçin. Şimdi denetim olarak bir zaman sıfır zaman noktası seçin ve aralığı 100 puan olarak ayarlayın. Ayrıca 100 puan aralığında deneysel dönem olarak bir kez nokta seçin.
Ortalama Emici Spektrum sekmesindeki ham fark spektrumuna göz önünden tıklayın. Sığdırma Katsayılarını Hesapla'yı seçin ve ardından geriye dönük uyumun zaman seyrini gözlemlemek için Sığdırma Katsayıları sekmesine tıklayın. Ana menüye dönün ve Fark Emilimini Hesapla'yı seçin.
Tüm pozisyonlarda sıfır ile saat 1 arasındaki zaman sıfır ve fark'ı seçin. Farklı spektrum penceresindeki spektrumu ve referans ağırlık penceresindeki montaj elemanlarını gözlemleyin. Denemedeki diğer zaman noktalarını karşılaştırmak için bu yordamı tekrarlayın.
Ana menüye dönün. İstenilen bir ada yazarak ve diğer programlarla daha fazla analiz için Verileri Kaydet'i seçerek verileri ve analizi elektronik tablo raporuna kaydedin. Burada gösterilen kateter spektrumu ve tavşan kalp serbest duvardan iletilen ışığın ham spektrumudur.
Bu veriler, spektrumun mavi bölgesinde ışığın çok büyük bir zayıflamaortaya koymaktadır. Ancak, miyoglobin ve mitokondriyal sitokromlardan emici bantlar doğrudan 490 ve 580 nanometre ler arasında ek olarak görülebilir. Kontrol ve siyanür le tedavi edilen kalbin fark spektrumu burada gösterilmiştir.
Fit spektrumu referans spektrumundan hesaplanır. Artıklar spektrumu, uygunluktan ham verilerden çıkarmadır. Burada gösterilen referans spektrumlarının spektrum genlikleridir.
Sitokromların çoğunun emilmesinde güçlü artışlar gözlenirken, sitokrom zincirdeki elektronların akışı sabit durumda siyanür tarafından engellenir. Buna ek olarak, oksijenli miyoglobin emilmesi siyanür ile oksijen tüketimi ortadan kaldırıldı olarak artmıştır. Siyanür yıkama dan siyanür enjeksiyonu arasındaki fark spektrumu siyanür etkisikısmi bir ters ortaya koymaktadır.
Burada gösterilen no-akış iskemi durumu kontrol karşı fark spektrumudur. Bu spektrum sitosolent mitokondri verus kontrol koşulunun tamamen deoxygenated ve azaltılmış durumunu temsil eder. Şu anda nitrik oksitin kardiyak metabolizma üzerindeki etkilerini inceliyoruz.
Yukarıda belirtilen kromoforlara ek olarak, nitrik oksit tarafından üretilen metmyoglobin dahil diğer optik olarak saptanabilir türleri de takip edebiliriz. Ayrıca, kateter raman spektroskopi kullanarak lipid metabolizması çalışmak için bir lazer bağlanabilir. Kalsiyum kardiyak metabolizması da eksojen veya genetik olarak dahil kalsiyum probların emilimi ile incelenebilir.
