Ve Boston Çocuk Hastanesi&#39;nden Kalp İletim Fonu katkılar; Bu çalışma, araştırma, Ulusal Sağlık Enstitüleri hibe (HL088206 HL068915) tarafından desteklenmektedir.

Bölüm 1: hazırlayın çözümleri ve izole perfüze kalp sistemi <ol><li> [5, 6] açıklandığı gibi deney sabahı, Krebs-Henseleit çözüm 4.0 L hazırlanmıştır. </li><li> 11 mmol / L 2,3-butanedione monoxime (DGM) 1.0 L adım 1.1 &#39;de hazırlanan perfüzat dekante Krebs-Henseleit çözüm çözülür. </li><li> Krebs-Henseleit ek bir 150 ml, adım 1.1 &#39;de hazırlanan perfüzat kaldırılır ve 5 Mol / L di-8-ANEPPS (dimetil sülfoksit (DMSO) içinde çözünmüş 10 mmol / L stok seyreltilmiş) ile karıştırılır. </li><li> % 5 CO 2 gaz Bu 3 çözümler su-ceketli cam rezervuarlar (Radnoti) 41,0 ° C önceden ısınmış ve% 95 O 2 mikron filtreden 0.2 kullanarak bir batık bubbler (Radnoti) ile oksijenli aktarılır. 3 stok rezervuarları Çözümleri MASTERFLEX ™ L / S peristaltik pompalar ve düşük emme silikon tüp (Cole-Parmer) ile duvara monte Langendorff sistemine pompalanır. </li><li> Montaj öncesinde Langendorff sistem cam (Radnoti) titizlikle E-TOXA TEMİZ reaktif (Sigma-Aldrich) ile yıkanmış ve 0.1 M / L HCl,% 100 etanol ve saf su ile iyice durulanmalıdır. </li><li> Sirkülasyon olmayan Langendorff aparat, 3 ayrı su ceketli ısıtma bobinleri ve kabarcık tuzakları ile kalp ayrılır oksijenli depoları, 70 mmHg sabit basınç sağlamak için inşa edilmiştir (Radnoti) [7] . 3 bağımsız perfüzyon hatları 1.1 - 1.3 için adımları hazırlanan çözümler teslim bize tam kontrol etmeye izin veren, 3-yollu iki stopcocks kalp üzerinde birleşir. Su ceketli cam MASTERFLEX PharMed BPT boru (Cole-Parmer) ile seri olarak bağlı ve 39 ısındı ° C distile su kullanarak iki E100 sirkülatörler (Lauda). Isıtma bobinleri ve kabarcık tuzakları basınç baş rezervuarları bağlayan platin kurutulmuş silikon tüp (Cole-Parmer) yoluyla ısı kaybı, 37 ° C perfüzat kalp ulaşan sonuçlandı. </li></ol> Bölüm 2: Hasat sıçan kalp ve set-up Langendorff perfüzyon <ol><li> 200-250 g Lewis sıçanlarda derin genel anestezi uygulamak için, 100 mg / kg Ketamin ve 10 mg / kg Xylazine intraperitoneal boşluğuna enjekte edilir. Bu karışımı, biz eksplantasyonu işlemi sırasında kan pıhtılaşması ve miyokard iskemisi önlemek için 500 U / kg Heparin ekleyin. </li><li> Kalp ve büyük damarların kolay erişim için, göğüs ön duvarı kaldırılır. Bundan sonra, çevredeki doku dikkatlice disseke ve perikardiyal çuval açıldı. </li><li> Inferior vena kava belirlenmesini takiben, bu gemi, 5-0 ipek (Ethicon) ve tüm kalp-akciğer bloğu eksplante ile bağlandı. Doku hemen buz 50 ml beher bulunan buz Krebs-Henseleit çözüm yerleştirilir. </li><li> Asendan aorta hızla tespit ve çevresindeki doku disseke edilir. Uygun ölçekli bir kanül (Harvard Apparatus), çok ileri aort kökü içine kanül takarak, koroner arter zorunlu perfüzyon kesilmesini önlemek için özen, aort içine yerleştirilir. Kanül 5-0 ipek (Ethicon) ile çıkan aortun güvence altına alınmıştır. </li><li> Sıçan kalp sonra kanül içine hava kabarcıklarının tanıtan Langendorff aparat yerleştirilir. Retrograd koroner arter perfüzyon şimdi adım 1.6 &#39;da açıklanan basınç kafa sıcak, oksijenli Krebs-Henseleit çözümü ile kurulmuştur. </li><li> Ekstra doku, akciğerler dahil olmak üzere şimdi kaldırılır ve kalp fonksiyonu kurtarma izni ve ritmini istikrara kavuşturmak için 20 dakika boyunca perfüze. Bu süre zarfında, çok ince bir termokupl sıcaklık probu (Cole-Parmer) sol ventrikül boşluğuna tanıtıldı ve 5-0 Prolen sütür (Ethicon) ile de sütüre. Prob kalbin sıcaklığını sağlamak için bir termo-denetleyici (Digi-Sense) bağlı 37 muhafaza ° C su dolaşım pompalarının ayarlarını. Kalp ucundan damlayan perfüzat Hareket atık priz bir gazlı bez parçası koyarak en aza indirilmiştir. </li></ol> Bölüm 3: potansiyometrik boya ile Yük kalp ve elektrografik ve optik sinyalleri elde <ol><li> Di-8-ANEPPS (Invitrogen) içeren Krebs-Henseleit karışık bir stopcock kullanarak floresan boya ile perfüzyon hattına geçiş yaparak kalp yüklenir. Buna ek olarak, 18G kanül yeterince koroner arterler yoluyla getirilen boya ile perfüze değildir çünkü yavaş yavaş bu odaların her birine uygulanan boya çözüm sol ve / veya sağ atrium ve ek 50 ml yerleştirilir. </li><li> Yükleme işlemi sırasında, 3 EKG yol açar (Harvard Apparatus) haritalama için kullanılan optik karşı karşıya değiliz kalbin yüzeyine hafifçe yerleştirilir. Elektrot N o 1, arka sol ventrikül apikal kısmının, K sol atrium o 2 ve N tarafta konumlandırılmış <su<html> (Şekil 1) aort kökü bir referans elektrot olarak p&gt; o 3. Atriyal ve ventriküler elektrografik sinyaller, daha sonra amplifiye sayısallaştırılmış ve yazılım (RedShirt Görüntüleme) (Şekil 2) kullanarak optik sinyallerin yanında görüntülenir. Bir osiloskop (Tektronix modeli TDS 1002), aynı zamanda gerçek zamanlı olarak yüzey EKG s görselleştirmek için ve yeterli pacemaker sağlamak için kullanılır. </li><li> EKG amplifikatör (Hugo Sachs Elektronik) ayarları: High Pass Filtre: 0.1 Hz Alçak Geçiren Filtre: 150 Hz </li><li> CMOS kamera (RedShirt Görüntüleme) ve Makroskop&#39;ta kalbin yüzeyine odak ve satın çerçeve merkezli böylece XYZ ayarlamalarını kullanarak konumlandırılmış. Rezonans frekansları en aza indirmek için bir titreşim izolasyonu tablosu (Eksi K Teknolojisi) kamera ve optik üzerine monte edilir. Aynı zamanda, bir koaksiyel pacing elektrod (Harvard Apparatus), izole, S48 elektrik stimülasyon birimi (Çim) ile kontrol sağ atriyuma yerleştirilen ve kalp dakikada 300 vuruş (Şekil 1) tempolu. </li><li> Elektrik stimülasyon (Çim) ayarları: Hızı: saniyede 5 bakliyat Gecikme: 0,2 ms Süresi: 2 ms Volt: 6-12 V Modu: Tekrarla Nabız: Tek </li><li> Daralma hareket eserler eksikliği optik kayıtları, kalp elektromekanik Kuplajsız gerekir. Biz yine 11 mmol / L BDM içeren Krebs-Henseleit çözüm perfüzyon hatları geçiş yaparak bunu. Satın almalar arasında, kalp hazırlık canlılığı korumaya yardımcı olmak için katkısız Krebs-Henseleit ile perfüze. </li><li> Aşağıdaki satın alma ayarları ile yazılım (RedShirt Imaging) kullanarak kayıt parametreleri ayarlanır: Yapılandırma: 2.000 Hz, 128x128 piksel Kare Aralığı: 0.5 ms Kamera Amplifikatör Kazanç: 5x On-Chip Kazanç: 8x-12Me-kuyu Perde Hızı: 500 ms gecikme Çerçeveler sayısı: 4000 Süre: 2000 ms </li><li> Tüm oda ve ekipman ışıkları kapalı ya da kayıt sırasında arka plan gürültüsünü ortadan kaldırmak için korumalı. LED ışık fotoğraf ağartma ve boya toksisite azaltmak için optik kayıt sırasında sadece kalp yanar. Işık kaynağı, perde, kontrol paneli üzerinden bilgisayara D-A kurulu (RedShirt Görüntüleme) yolu ile teslim bir 5 V darbesi ile kontrol edilir. </li></ol> Bölüm 4: RedShirt Görüntüleme Yazılımı kullanarak satın alma bilgileri analiz <ol><li> Satın alınmasının ardından, veri, farklı filtre ayarları kullanarak işlenir. Biz genellikle Band / Durdur, 44.0 sol sınır ve sağ sınır 98,0 az filtre, pas ayarlarken dışında varsayılan ayarları kullanabilirsiniz. Daha sonra kaydedilen bilgiler işlenir ve bir film (RedShirt Görüntüleme) oluşturulur. </li><li> Bir satın alma elde edilen veriler, 2 saniyelik bir süre içinde kalp yüzeyinde 16.384 siteleri yerel elektrik aktivasyonu için karşılık gelir. Yazılım, bu yerel sinyaller doğrudan birbirleri ile ve atriyal ve ventriküler elektrografik kayıtları ile karşılaştırılmasına olanak tanır. Veri sonra renk yerel elektrik aktivasyon haritalama ve kalp yüzeyinde uzaysal elektrik aktivasyonu gösteren bir animasyon olarak bu bilgileri işleme ile görünür. Böyle bir animasyon oluşturmak için, biz için yazılım kullanabilirsiniz: <ul><li> zamansal ve / veya mekansal verilere filtre </li><li> animasyon için bir başlangıç ​​ve bitiş zamanı seçin </li><li> her pikselin dinlenme ışık yoğunluğuna göre renk haritası optik sinyalleri </li><li> kalp resmi ile ortaya çıkan renk veri bindirme </li><li> animasyon oluşturmak </li></ul></li></ol> Bölüm 5: Temsilci sonuçları Perfüze kalp hazırlanması kayıt sırasında hareketsiz ise, optik sinyalleri di-8-ANEPPS emisyon yoğunluğu değişikliği dahil her piksel için ayrı zirve göstermektedir. Ilgili filmleri (Şekil 3 ve 4), kalp gibi aynı anda alınan elektrografik kayıtları (Şekil 2) epikardiyal yüzeyi boyunca yayılan bir eksitasyon dalga ön göstermektedir. <img src="/files/ftp_upload/1138/Figure3.jpg" alt="Şekil 1" /> Şekil 1. Langendorff-perfüze kalp hazırlık bir fotoğraf, sağ atrium pacing elektrot pozisyonları resmeden ve EKG adım 3.2 &#39;de açıklandığı gibi açar . <img src="/files/ftp_upload/1138/Figure4thumb.jpg" alt="Şekil 2" border="0" /> Şekil 2, perfüze Lewis sıçan kalbinde Temsilcisi optik sinyalleri ve elektrografik kayıtları . Panel A epikardiyal yüzeyi optik görüntüleme için kullanılan bir görüntü gösterir. B Paneli zamanla floresans emisyon değişiklik göstermek üzere seçilen piksel konumunu renkli oklarla gösterilir. Panel C Elektrografik sinyalleri belirten atriyal aktivasyon ve ventriküler sinyale karşılık gelen açık mavi çizgi kırmızı çizgi ile gösterilmiştir. Lütfenve.com/files/ftp_upload/1138/Figure4.jpg &quot;&gt;, bu rakamın büyük bir halini görmek için buraya tıklayın .

<ol>
	<li>Efimov, I. R., Nikolski, V. P., Salama, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+imaging+of+the+heart.">Optical imaging of the heart.</a> Circ Res. 95 (1), 21-33 (2004).</li><li>Hucker, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Images+in+cardiovascular+medicine.+Optical+mapping+of+the+human+atrioventricular+junction.">Images in cardiovascular medicine. Optical mapping of the human atrioventricular junction.</a> Circulation. 117 (11), 1474-147 (2008).</li><li>Entcheva, E., Bien, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Macroscopic+optical+mapping+of+excitation+in+cardiac+cell+networks+with+ultra-high+spatiotemporal+resolution.">Macroscopic optical mapping of excitation in cardiac cell networks with ultra-high spatiotemporal resolution.</a> Prog Biophys Mol Biol. 92 (2), 232-257 (2006).</li><li>Entcheva, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+imaging+of+electrical+activity+in+cardiac+cells+using+an+all-solid-state+system.">Fluorescence imaging of electrical activity in cardiac cells using an all-solid-state system.</a> IEEE Trans Biomed Eng. 51 (2), 333-341 (2004).</li><li>Stamm, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+endotoxin-induced+alterations+in+myocardial+calcium+handling:+obligatory+role+of+cardiac+TNF-alpha.">Rapid endotoxin-induced alterations in myocardial calcium handling: obligatory role of cardiac TNF-alpha.</a> Anesthesiology. 95 (6), 1396-1405 (2001).</li><li>Choi, Y. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+conduction+through+engineered+tissue.">Cardiac conduction through engineered tissue.</a> Am J Pathol. 169 (1), 72-85 (2006).</li><li>Skrzypiec-Spring, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolated+heart+perfusion+according+to+Langendorff---still+viable+in+the+new+millennium.">Isolated heart perfusion according to Langendorff---still viable in the new millennium.</a> J Pharmacol Toxicol Methods. 55 (2), 113-126 (2007).</li><li>Fedorov, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Application+of+blebbistatin+as+an+excitation-contraction+uncoupler+for+electrophysiologic+study+of+rat+and+rabbit+hearts.">Application of blebbistatin as an excitation-contraction uncoupler for electrophysiologic study of rat and rabbit hearts.</a> Heart Rhythm. 4 (5), 619-626 (2007).</li></ol>

Boston Çocuk Hastanesi&#39;nden Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından belirlenen kurallara ve yönetmeliklere uygun olarak hayvanlar üzerinde deneyler yapıldı.

Miyokard iskemisi önlemek için anestezi uygulanmış sıçanlarda kalp kaldırılması hızla yapılmalıdır. Iskemi veya yetersiz koroner perfüzyon oluşursa, kalp büyük olasılıkla aritmiler geliştirmek ve enfarkte olabilir. Ayrıca, bu kalpleri bilgilendirici kayıtları ve daha sonraki analizler için yeterli floresan emisyon gösterecektir. Boya yüklemeden önce, miyokard hücrelerinin elektriksel impulsları istikrar için bir fizyolojik elektrolit ortam kurmak ve sürdürmek için yeterli Krebs-Henseleit...

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>CardioCMOS-SM128f</td>
<td>Equipment</td>
<td>RedShirt Imaging, Decatur, GA 30030 USA </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>CardioPlex Software</td>
<td>Equipment</td>
<td>RedShirt Imaging, Decatur, GA 30030 USA</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>LUXEON LED Light Source 460-490 nm </td>
<td>Equipment</td>
<td>Lumileds Lighting, US, LLC, San Jose, CA 95131 USA</td>
<td>LXHL-PB02</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>ECG Amplifier Type 689 Hugo Sachs Elektronik</td>
<td>Equipment</td>
<td>Harvard Apparatus, Holliston, MA 01746 USA</td>
<td>730149</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Dichroic Mirror 505 nm</td>
<td>Equipment</td>
<td>Semrock, Rochester, NY 14624 USA</td>
<td>FF505-SDi01-25x36</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Emission Filter 605 nm Long Pass</td>
<td>Equipment</td>
<td>SciMedia, Costa Mesa, CA 92626 USA </td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>THT Sideways</td>
<td>Equipment</td>
<td>SciMedia, Costa Mesa, CA 92626 USA</td>
<td>25 BM-8</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mini Ball Joint Holder</td>
<td>Equipment</td>
<td>Harvard Apparatus, Holliston, MA 01746 USA</td>
<td>BS4 73-0177</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Small Stimulation Electrode Set</td>
<td>Equipment</td>
<td>Harvard Apparatus, Holliston, MA 01746 USA</td>
<td>BS4 73-0160</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>BM-6 Benchtop Vibration Isolation Platform</td>
<td>Equipment</td>
<td>Technology Inc., Inglewood, CA 90301</td>
<td>25 BM-6</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Monopolar ECG Electrode</td>
<td>Equipment</td>
<td>Harvard Apparatus, Holliston, MA 01746 USA</td>
<td>BS4 73-0200</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Roller Pump SCI 400</td>
<td>Equipment</td>
<td>Watson-Marlow Bredel Inc., Wilmington, MA 01887 USA</td>
<td>401U/D1</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Roller Pump MasterFlex Easy Load II</td>
<td>Equipment</td>
<td>Cole Parmer, Vernon Hills, Illinois 60061 USA</td>
<td>Model 77201-60</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Tubing Marprene #14</td>
<td>Equipment</td>
<td>Watson-Marlow Bredel Inc., Wilmington, MA 01887 USA</td>
<td>902.0016.016</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>MasterFlex Tubing</td>
<td>Equipment</td>
<td>PharMed, Westlake, OH 44145 USA</td>
<td>06485-25</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>S48 Square Pulse Stimulator</td>
<td>Equipment</td>
<td>Grass Technologies, West Warwick, RI 02893 USA</td>
<td>Model S48</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>SIU5 RF TRANSFORMER ISOLATION UNIT</td>
<td>Equipment</td>
<td>Grass Technologies, West Warwick, RI 02893 USA</td>
<td>Model SIU5</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>5 Liter Water Jacketed Reservoir</td>
<td>Equipment</td>
<td>Radnoti Glass Technology Inc., Monrovia CA 91016 USA</td>
<td>120142-5</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2 Liter Water Jacketed Reservoir</td>
<td>Equipment</td>
<td>Radnoti Glass Technology Inc., Monrovia CA 91016 USA</td>
<td>120142-2</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.5 Liter Water Jacketed Reservoir</td>
<td>Equipment</td>
<td>Radnoti Glass Technology Inc., Monrovia CA 91016 USA</td>
<td>120142-0</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>0.25 Liter Water Jacketed Reservoir</td>
<td>Equipment</td>
<td>Radnoti Glass Technology Inc., Monrovia CA 91016 USA </td>
<td>120142-025</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>10 ml Heating Coil</td>
<td>Equipment</td>
<td>Radnoti Glass Technology Inc., Monrovia CA 91016 USA</td>
<td>158822</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Compliance Bubble Trap</td>
<td>Equipment</td>
<td>Radnoti Glass Technology Inc., Monrovia CA 91016 USA</td>
<td>130149</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Luer Disconnect Cannula</td>
<td>Equipment</td>
<td>Harvard Apparatus, Holliston, MA 01746 USA</td>
<td>72-1444</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>3-Way stopcock, FLL to MLT, No Port Covers</td>
<td>Equipment</td>
<td>Harvard Apparatus, Holliston, MA 01746 USA</td>
<td>BS4 72-2630</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Thermocouple Thermometer</td>
<td>Equipment</td>
<td>Cole Parmer, Vernon Hills, Illinois 60061 USA</td>
<td>WU-91100-40</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ultra Fine IT-Series Flexible Microprobe </td>
<td>Equipment</td>
<td>PhysiTemp Instruments Inc., Clifton, NJ 07013 USA</td>
<td>IT-24P</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Oscilloscope Tektronix TDS 1002</td>
<td>Equipment</td>
<td>Tektronix Inc., Beaverton, OR 97005 USA</td>
<td>TDS 1002B</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>2,3-Butanedione monoxime </td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma, St. Louis, MO 63132 USA</td>
<td>B0753</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Ketamine HCl</td>
<td>Reagent</td>
<td>Hospira Inc., Lake Forest, IL 60045 USA</td>
<td>RL-0065</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Xylazine</td>
<td>Reagent</td>
<td>Lloyd Inc., Iowa 51601 USA</td>
<td>LB15705A</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>E-TOXA-CLEAN&reg;</td>
<td>Reagent</td>
<td>Sigma, St. Louis, MO 63132 USA </td>
<td>E9029</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Di-8-ANEPPS</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen, Carlsbad, CA 92008 USA</td>
<td>D-3167</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

optical mapping of langendorff-perfused rat hearts

Voltaj duyarlı floresan boya ile kalp yüzey Optik haritalama deneysel modellerde elektrik uyarım araştırmak için önemli bir araç haline geldiğini hücre kültürleri bütün organları ölçek aralığı<sup&gt; [1, 2]</sup&gt;. Normal kalp ritmi sırasında veya aritmi başlaması ve bakım boyunca state-of-the-art optik görüntüleme sistemleri, üretim ve aksiyon potansiyelleri yayılmasını neredeyse anında görüntülenmiştir.<sup&gt; [1]</sup&gt;. Piyasada bulunan en son sistemleri, son derece yüksek uzaysal çözünürlüklerde bilgi sağlayabilir ve daha geleneksel elektrofizyolojik yöntemler dayattığı engelleri aşmak için başlangıçta geliştirilmiş özel tasarlanmis ekipmanlar dayalı<sup&gt; [1]</sup&gt;. Yüksek çözünürlüklü ve yüksek hızda tamamlayıcı metal oksit yarı iletkeni (CMOS) kameralar ve yoğun bir şekilde parlak ışık yayan diyot (LED) yanı sıra voltaj duyarlı boyalar, optik, ve filtreler Gelişmeleri elektrik sinyal alımı yapmaya başladı mikroskopları ile çalışmak için daha alışkın kardiyovasküler hücre biyologlar için pratik. CMOS kameraların en yeni nesil numune hazırlama türüne bağlı olarak 16.384 piksel saniyede 10.000 kare, edinebilirler rağmen, fotodiyot diziler, lazer tarama sistemleri ve soğutmalı olarak köklü floresan satın alma teknolojileri şarj çiftli aygıt (CCD dinamik aralık saygı, sinyal-gürültü oranı) kameralar hala bazı belirgin avantajları vardır ve kuantum verimliliği<sup&gt; [1, 3]</sup&gt;. Bu çalışmada, Lewis sıçan kalpleri perfüze edildi<em&gt; Ex vivo</em&gt; 37 kristalloid perfüzat (Krebs-Henseleit çözüm) ° C değiştirilmiş bir Langendorff aparat. 20 dakikalık bir istikrar döneminden sonra, kalpler aralıklı görüntü alımı sırasında kasılması ile ilişkili hareket ortadan kaldırmak için 11 mmol / L 2,3-butanedione monoxime ile perfüze edildi. Optik haritalama için, hızlı tepki potansiyometrik prob di-8-ANEPPS kalpleri yüklenir<sup&gt; [4]</sup&gt; (5 mmol / L) ve kısa bir süre 475 ± 15 nm uyarma ışığı ile hazırlık aydınlattı. &gt; Kalp hazırlık yayılan 605 nm ışık, aydınlatma tipik bir 2 ikinci dönemde yatay bir Makroskop&#39;ta bağlı bir yüksek hızda CMOS kamera ile görüntülendi. Bu gösteri için, kupa, izole edilmiş bir elektrik stimülasyonu ünitesine bağlı bir koaksiyel elektrot ile dakikada 300 atım tempolu. Eşzamanlı bipolar elektrografik kayıtları kolay kullanılabilen yazılım kullanarak gerilim sinyalleri ile birlikte satın alındı ​​ve analiz edildi. Bu şekilde, Langendorff perfüze sıçan kalpleri yüzeyinde aksiyon potansiyelleri görüntülenebilmekte ve elektrografik sinyalleri ile kayıtlı olabilir.

Watch this Scientific Journal Video about Optical Mapping of Langendorff-perfused Rat Hearts at JoVE.com

Optical Mapping of Langendorff-perfused Rat Hearts

Bu makale, potansiyometrik boya kullanarak (di-8-ANEPPS) Langendorff perfüze sıçan kalpleri yüzeyinde optik görüntü aksiyon potansiyeli hareketi yüksek bir zamansal ve mekansal çözünürlükte tekniği açıklar.

Langendorff perfüze sıçan Kalpler Optik Haritalama

Optical mapping of the cardiac surface with voltage-sensitive fluorescent dyes has become an important tool to investigate electrical excitation in ...

optical-mapping-of-langendorff-perfused-rat-hearts

Research

JoVE Journal

Biology

20.6K Görüntüleme.  Children's Hospital Boston and Harvard Medical School. Bu makale, potansiyometrik boya kullanarak (di-8-ANEPPS) Langendorff perfüze sıçan kalpleri yüzeyinde optik görüntü aksiyon potansiyeli hareketi yüksek bir zamansal ve mekansal çözünürlükte tekniği açıklar.