Bu insan kan-beyin arayüz modeli nöro sisteme moleküllerin transferi çalışma için yararlıdır. Yanı sıra mikropların incelenmesi için enfekte bir beyin ağrısı tümörü ulaşmak. Bu kan beyin bariyeri veya BBB modeline mini beyin eklenmesi bbb beyinde tedavi neden bizim patojenler ve moleküllerin çalışma sağlar.
Prosedürü bozan Florian Bakao, laboratuvarımdaki doktora öğrencileri olacak. BBB mini beyin polyester membran kültür ekleme cihazı kurmak için, hücreleri kesici konsantrasyon uncomplete endotel hücre ortası başına beş kez 10 dördüncü hücrelere seyreltin ve her polyester membran kültür eklemek için uygun hacim eklemek 12 iyi plaka. Daha sonra, hücreler %100 biraraya gelene kadar kesici uçları ve hücre kültürünü kuluçkaya yatırın.
Oda sıcaklığında dört saat boyunca poli-D-lizin onu iyi bir mililitre ile 12 iyi plaka tutun. Bir gecede bir mililitre laminin takip ediyor. Laminayı %5 fetal sığır serumu veya FBS ile takviye edilmiş bir mililitre endotel hücreli orta ile değiştirin.
Bir saat için bir kuvöz de yer. Mini tahılı hazırlamak için CHME'deki insan nöronlarını beş hücreklonlayın. Hücre peletlerini tam endotel hücreli ortamla ilişkilendirin.
3.6 kez 10 beşinci nöronlar ve astrositler için 0.4 kez 10 beşinci CHME klon beş hücre sayma sonra iyi bir 12 iyi plaka var. Ve 12 kuyu tabağı tohum. Tohumlamadan 24 saat sonra BBB mini beyin oluşturmak için kullanılan ortamı taze komple endotel hücreli ortamla değiştirin ve serebral mikro vasküler endotel hücre kaplı polyester membran kültürünü mini beyin hücrelerinin üzerine yerleştirin.
Sonra, BBB birçok beyin cihazını kuvöze yerleştirin. BBB mini beyin endotel geçirgenliğini doğrulamak için yeni bir 12 kuyu plakası için kuyu başına 1.5 mililitre taşıma tamponu ekleyin. Ve endotel hücre bariyerini etkilemeden ortamı dikkatlice çıkarmak için her filtreyi ters çevirin.
Her filtreyi taşıma tampondolu plakanın bir kuyuya yerleştirin ve her kuyuya 0,5 mililitre Lucifer sarısı ekleyin. Daha sonra 12 kuyu plakadolu yeni bir taşıma tampon içine filtreler aktarmadan önce 10 dakika boyunca kuvöz içine plaka yerleştirin. Gösterildiği gibi bir BBB birçok beyin cihazı kurduktan sonra, sarı humma virüsü seyreltilmiş Fransız nörotrofik virüs suş 3500 platforming birimleri ve 50 mikrolitre ekleyin 2% FPS endotel hücre liyakat ortamı, çok dikkatli, luminal bölmesi üstüne.
Kontrol BBB mini beyin ile aşılamak 50 mikrolitre 2% FBS endotel hücreli orta virüs olmadan. Sonra virüsü niçin 24 saat boyunca kuvözde bbb birçok beyin cihazı maruz yerleştirin. Ertesi gün, endotel hücre geçirgenliğini ve bir arkadaşı belirlemek için ekler kaldırmak gibi gösterildiği gibi.
Orta bölmedeki virüs titresini belirlemek için her kuyudan bir mililitre numune sakçekin. Luminal bölmenin abluminal bölmelere sızmasını önlemek için kesici nizin altında nazikçe. Kan beyin bariyeri boyunca biyomoleküler hedefleyen bir nöron taşıma çalışma için, ekler ilgi biyo molekül ekleyin ve hücre kültürü kuluçka plaka dönmek.
24 saat sonra uzaktan ekler ve endotel geçirgenliğini belirlemek. Sonra mini beyin içinde ilgi biyo molekülün varlığını tespit etmek için uygun antikor ile birçok beyin hücreleri leke. İnsan serebral mikro vasküler endotel hücreleri, biyolojik işlevleri için önemli proteinler olan rececptors, Efflux taşıyıcılar veya taşıyıcıların tüm alt kümelerini ifade eder.
Sarı humma virüsübazı Fransız nöro tropik virüs türü 24 saat kan beyin bariyerini geçebilir. Virüsler daha sonra beyin hücrelerinin içinde virüs çoğalması ile önümüzdeki iki gün boyunca yükseltmek. Ayrıca, bu nöro invaziv viral popülasyon seri mini beyin hücreleri üzerinde geçit ve kesinlikle viral yük ile ilişkili olduğunda belirli viral biyobelirteçlerin ekspresyonu uyarılır.
Kompartıman hücre penetran molekül Neuro-Tag Neurovita sınırına eklendikten sonra kan beyin bariyerini geçer ve insan nöronlar hedef yapabiliyor. Hücre delici molekül nöro etiket Delta neurovita endotel hücre bariyerini geçer, ama daha az verimli insan nöronlar hedefler. Küçük orta bölmeye eklendikten sonra, hücre delici molekül Neuro-Tag Neurovita kan beyin bariyerini geçer ve insan nöronaksonlarını yenilemek mümkün, yaralandıktan sonra.
Hücre penetran molekülNeuro-Tag Neurovita Delta aksine, Neurovita inaktif formu. Akson çizilme hücre delici molekül Neuro-Tag Neurovita sonra uygulandığında yaralı nöronların nöro koruma ve x zonal rejenerasyon tetikler. Sadece uygulamaların iyiliği için.
i-hücre pasajları üzerinde kullanmayın. Orta ve bölgelerde bazı benzerlik korumaya çalışın ve mikoplazma yokluğu kontrol edin. Mini beyin ve ilaçlar arasındaki etkileşimler ilgi mikropları daha bu veya klasik biyoloji kimyasallaştırmak transkript tarafından incelenebilir teknikleri denir.
