Timus transplantasyonu timus epitel hücre fonksiyonu ve in vivo T-hücre olgunlaşmasını araştırmak için önemli bir yöntemdir. Bu basit ve verimli protokol izole etmek ve kültür fare 18.5 timus sonraki transplantasyon için bir böbrek kapsülü içine kullanılabilir. 18.5 timus transplantasyonu protokolü diğer gelişim evrelerinde veya benzer büyüklükteki diğer dokularda timik transplantasyon için değiştirilebilir.
Ayrıca, bu yordam çok basittir. Bu teknik ilk kez yapılırken bazı servis talebi damgalarının ayrıntıları dikkatle gözden geçirilmelidir. Bu yordam, görselleştirme ile daha iyi gösterilebilir ayrıntılı işlemeler içerir.
Fedakarlık tan sonra, embriyonik gün 18.5 hamile fare% 70 etanol ile silin ve rahim her boynuz kadar mesane karın üzerinde v şeklinde bir kesim yapmak için otoklavlı steril aletler kullanın. Mesometrium ve servikal ve vajinal alanları kesmek ve buz üzerinde soğuk PBS içeren bir Petri çanak içine rahim hasat makas kullanın. Bir rahim boynuzundan diğerine ön rahim duvarını kesin ve kesip içindeki embriyoları ortaya çıkararak yaprak kesip desidual dokuları soymak için ince cımbız kullanın.
Embriyoları serbest bırakmak için göbek kordonunu kes ve buz üzerinde yeni bir Petri kabına transfer edin. İlk timushas hasat için,% 70 alkol ile bir embriyo silin ve yeni bir Petri kabına embriyo transfer. Decapitation sonra, supine pozisyonda çanak embriyo düzeltmek ve aksiller ön boyunca yatay lateral göğüs duvarı kesmek için steril makas kullanın.
Göğüs açmak için diyafram ı kesin. Timus, trakeanın önünde ve kalbe bitişik iki beyaz lob olarak görülmelidir. Dikkatle timus arkasında bükülmüş ucu forceps takın ve yavaşça doku hasat kadar çekin.
İki eklemli lob içerdiğini doğrulamak için timusun bütünlüğünü kontrol edin. Sonra bağ dokuları ve kan damarları kesmek için bir stereo mikroskop kullanmadan önce PBS ile timus yıkayın. Tüm timi toplandığında, her temiz doku 24 kuyu plakası tek tek kuyular içine kuyu başına kültür orta 500 mikrolitre içeren aktarın.
Ve kuyu başına 1.25 milimolar son konsantrasyon2'deoksigranozin ekleyin. Sonra sekiz gün boyunca hücre kültürü kuluçka izole thymi yerleştirin. Kültürün son gününde, 45 derecelik açıyla infüzyon tüpü parçası üzerinde bir kafa derisi damar iğnesi kesmek ve çıplak alıcı bir hayvan ayak çimdik yanıt eksikliği onaylamak için makas kullanın.
Sağ lateral pozisyonda ameliyat masasına fare yerleştirin ve vücudun dışından iki kez cerrahi alanda cilt bezi için% 0.5 povidone iyot bezi kullanın. Sol böbrek bölgesinde omurga paralel bir beş ila dokuz milimetrelik deri kesi yapmak için neşter kullanın ve karın boşluğu açmak için deri altı doku ve kas ile kesti. Bir elinizle cımbız bir çift kullanarak, maruz kalan böbrek omurga yan kesi kenarından kas ve yağ dokusu kaldırın ve yavaşça böbrek sıkmak için diğer taraftan kullanın.
Ameliyat sırasında böbrek kapsülü nemli tutmak için, tuzlu ile böbrek yüzeyini ıslatın ve hafifçe yaklaşık 1/2-2 2/ 3 böbrek genişliği sağ alt tarafında böbrek kapsülü çizik kafa derisi iğne kullanın. Kapsül üniversitine infüzyon tüpünü kaydırın ve böbrek kapsülünü böbrek kapsülünün uzun tarafındaki böbrek kapsülünü hafifçe ayırın. Sonra infüzyon tüpünü geri çek.
Timusu oluşturulan subkapsüler alana yerleştirmek için, bir kültür timusu taze tuzlu iki kez yıkayın ve kırpılmış infüzyon tüpünü şırıngaya bağlayın. Yavaş yavaş modifiye infüzyon tüpü içine hazırlanan timus aspire. Ve infüzyon tüpünü böbrek kapsülüne üstün direğe ulaşana kadar nazikçe takın.
Böbrek kapsülü içine timus teslim etmek için, aynı anda yavaşça piston depresif ise yavaş yavaş tüp geri çekmek. Bir alkol lambası kullanarak, kafa derisi iğnesini hafifçe ısıtın ve tüm timusun subkapsüler alanın içinde olduğunu doğruladıktan sonra, nicki ikna etmek için ısıtılmış iğneyi kullanın. Karın boşluğuna kürerböbrek geri ve dikiş ile periton ve kas kapatın.
Modifiye edilmiş bir kesmeli dikey yatak sütür kullanarak, en az üç düğüm ile cilt kesi kapatın ve kesi dezenfekte etmek için bir povidon iyot bezi kullanın. Sonra antibiyotik ve analjezi bir deri altı enjeksiyon sağlamak ve tam iyileşme kadar izleme ile bir kızılötesi lamba altında fare yerleştirin. Burada, iki tam lob içeren bir izole embriyonik gün 18.5 timus görülebilir.
İmplantasyondan hemen sonra timus, böbrek kapsülünün altında alıcı böbreğin ucunda görüntülenebilir. Çıplak fare alıcı hayvan içinde büyüme sekiz hafta sonra, timus kapsül altında kalır, ancak boyutu sağlam artar. T-hücreleri hem nakledilen timus hem de çıplak fare alıcılarının periferik kanda üretilir.
Ama beklendiği gibi, hiçbir T-hücreleri nakledilmemiş çıplak hayvanların periferik tespit edilir. Ayrıca, bu temsili deneyde, lakz alel içeren timus lobları ile nakledilen çıplak fare alıcılarının periferik kanından alınan periferik T hücrelerinde lakz geni saptanmadı ve bu da alıcı hayvanlardan periferik T hücrelerinin üretildiğini gösterdi. Bir böbrek kapsülü içine tüp kaydırarak nazik olun.
Kapsülü kırmaktan kaçının. Ve timus teslimat için yeterli alana sahip olduğundan emin olun. Timik veya periferik T-hücre popülasyonları akış sitometresi kullanılarak analiz edilebilir.
Nerede, alıcının periferik dokularda bağışıklık yanıtları I2d ve immün histokimyasal analiz ile analiz edilebilir.
