زرع الغدة الصعترية هو وسيلة هامة للتحقيق في الغدة الصعترية وظيفة الخلايا الظهارية ونضوج الخلايا التى في الجسم الحي. يمكن استخدام هذا البروتوكول البسيط والفعال لعزل الماوس 18.5 وزراعة الغدة الصعترية في وقت لاحق في كبسولة الكلى. يمكن تعديل بروتوكول زرع 18.5 الغدة الصعترية لزرع الغدة الصعترية في مراحل النمو الأخرى أو للأنسجة الأخرى ذات الحجم المماثل.
أيضا، هذا الإجراء هو بسيط جدا. وينبغي استعراض تفاصيل بعض الطوابع حالة بعناية عند تنفيذ هذه التقنية للمرة الأولى. يحتوي هذا الإجراء على معالجة مفصلة يمكن أن تكون أفضل مع التصور.
بعد التضحية، مسح يوم الجنينية 18.5 الماوس الحوامل مع 70٪ الإيثانول واستخدام أدوات تعقيم autoclaved لجعل قطع على شكل حرف V على البطن من المثانة حتى كل قرن من الرحم. استخدام مقص لقطع mesometrium وعنقيا ومناطق المهبل وحصاد الرحم في طبق بيتري تحتوي على PBS الباردة على الجليد. قطع جدار الرحم الأمامي من أحد قرون الرحم إلى الآخر لفضح الأجنة داخل المغلفة ل decidua واستخدام ملاقط غرامة لقشر الأنسجة منققر مرة أخرى.
قطع الحبل السري لإطلاق الأجنة لنقلها إلى طبق بيتري جديد على الجليد. لحصاد الغدة الصعترية الأولى، امسح جنينًا واحدًا بـ 70٪ من الكحول ونقل الجنين إلى طبق بيتري جديد. بعد قطع الرأس، قم بإصلاح الجنين في الطبق في وضعية الوبين واستخدم مقصًا معقمة لقطع جدار الصدر الجانبي أفقيًا على طول جبهة الإبط.
قطع الحجاب الحاجز لفتح الصدر. يجب أن يكون الغدة الصعترية مرئية كما اثنين من الفصوص البيضاء الموجودة أمام القصبة الهوائية ومجاواة للقلب. إدراج بعناية ملقط طرف عازمة وراء الغدة الصعترية وسحب بلطف تصل إلى حصاد الأنسجة.
تحقق من سلامة الغدة الصعترية للتأكد من أنه يحتوي على اثنين من الفصوص المشتركة. ثم غسل الغدة الصعترية مع برنامج تلفزيوني قبل استخدام المجهر ستيريو لتقليم بعيدا الأنسجة الضامة والأوعية الدموية. عندما تم جمع كل من الزعتمي، نقل كل الأنسجة النظيفة في آبار فردية من 24 بئر لوحة تحتوي على 500 ميكرولترات من المتوسط الثقافة في البئر.
وإضافة 2'deoxygranosine إلى تركيز النهائي من 1.25 ميليمولار في بئر. ثم ضع الزعتي المعزول في حاضنة ثقافة الخلية لمدة ثمانية أيام. في اليوم الأخير من الثقافة ، استخدم المقص لقطع إبرة فروة الرأس الوريدية على جزء أنبوب التسريب بزاوية 45 درجة وتأكيد عدم الاستجابة لقرصة إصبع القدم في متلقٍ عارية.
ضع الماوس على طاولة العمليات في وضعية جانبية ية اليمنى واستخدم مسحة اليود 0.5٪povidone لمسحة الجلد في المنطقة الجراحية مرتين من الداخل إلى خارج الجسم. استخدم المشرط لعمل شق جلدي من خمسة إلى تسعة ملليمترات موازيًا للعمود الفقري في منطقة الكلى اليسرى وقطعه من خلال الأنسجة والعضلات تحت الجلد لفتح تجويف البطن. باستخدام زوج من ملاقط بيد واحدة، ورفع العضلات والأنسجة الدهنية من حافة شق الجانب العمود الفقري من الكلى المعرضة واستخدام اليد الأخرى للضغط بلطف خارج الكلى.
للحفاظ على كبسولة الكلى رطبة أثناء الجراحة ، الرطب سطح الكلى مع المالحة واستخدام إبرة فروة الرأس لخدش بلطف كبسولة الكلى على الجانب الأيمن السفلي حوالي 1/2 إلى 2/3 عرض الكلى. حرك أنبوب التسريب في الكبسولة وافصل بلطف الكبسولة الكلوية من الكلى طويلة على الجانب الطويل من الكلى حوالي ثلاثة إلى أربعة ملليمترات في كبسولة الكلى. ثم تراجع أنبوب التسريب.
لزرع الصعتور في الفضاء الفرعي إنشاؤها، وغسل الغدة الصعترية واحدة مرتين في المالحة الطازجة وربط أنبوب التسريب قص إلى حقنة. التعرق ببطء الغدة الصعترية المعدة في أنبوب التسريب المعدلة. وأدخل بلطف أنبوب التسريب في كبسولة الكلى حتى تصل إلى القطب المتفوق.
لتسليم الغدة الصعترية في كبسولة الكلى، تراجع الأنبوب ببطء في حين الاكتئاب في وقت واحد بلطف المكبس. باستخدام مصباح الكحول، تسخين قليلا إبرة فروة الرأس وبعد التأكد من أن الغدة الصعترية كلها داخل الفضاء الفرعي، واستخدام إبرة ساخنة لتكويد. استعادة الكلى الكي إلى تجويف البطن وإغلاق الصفاق والعضلات مع الغرز.
باستخدام خياطة فراش عمودية معدلة، أغلق شق الجلد بثلاث عقد على الأقل واستخدم مسحة اليود povidone لتطهير الشق. ثم توفير حقن تحت الجلد من المضادات الحيوية وال مسكن ووضع الماوس تحت مصباح الأشعة تحت الحمراء مع الرصد حتى الشفاء الكامل. هنا، يمكن ملاحظة يوم عزل الجنينية 18.5 الصعتر التي تحتوي على اثنين من الفصوص كاملة.
مباشرة بعد زرع, الغدة الصعترية يمكن تصور تحت كبسولة الكلى في غيض من الكلى المتلقي. بعد ثمانية أسابيع من النمو داخل المتلقي الماوس عارية، الصعتر الصعترية لا يزال تحت الكبسولة، ولكن يزيد بقوة في الحجم. يتم إنتاج الخلايا التائية في كل من الغدة الصعترية المزروعة والدم المحيطي من متلقي الماوس العاري.
ولكن كما هو متوقع، يتم الكشف عن أي خلايا T في الطرفية من الحيوانات عارية غير مزروعة. علاوة على ذلك ، في هذه التجربة التمثيلية ، لم يتم الكشف عن أي جين LacZ في الخلايا التائية الطرفية التي تم حصادها من الدم المحيطي لمستلمي الماوس العاريين المزروعين مع فصوص الغدة الصعترية التي تحتوي على أليل LacZ ، مما يشير إلى أن الخلايا التائية الطرفية ولدت من الحيوانات المتلقية. كن لطيفًا عند انزلاق الأنبوب إلى كبسولة كلوية.
تجنب كسر الكبسولة. وتأكد من أن لديك مساحة كافية في تسليم الغدة الصعترية. يمكن تحليل الخلايا الزعتية أو المحيطية الخلايا التى باستخدام مقياس تدفق الخلايا.
حيث، يمكن تحليل الاستجابات المناعية في الأنسجة الطرفية للمستلم عن طريق I2d والتحليل الهستوكيميائي المناعي.
