Akut karaciğer yetmezliği veya ALF genellikle sağlıklı bir karaciğerde karaciğer hasarının hızlı gelişimi olarak tanımlanır ve önemli fonksiyonlarının ciddi bozukluğu eşlik eder. Ortotopik karaciğer nakli vakaların çoğunda mevcut tek tedavidir. Ancak karaciğer donör sıkıntısı nedeniyle, ALF hastalarında mortalite oranı çok yüksektir.
Alternatif terapötik yaklaşımların potansiyelini incelemek ve ALF'nin patofizyolojisini daha iyi anlamak için hastalığın hayvan modelleri kullanılmaktadır. ALF modellerinin çoğu asetaminofen, karbon tetraklorür, Concanavalin A, lipopolisakkarit, D-Galaktosamid ve tiyoasetamid in hepatotoksik etkilerine dayanmaktadır. Ancak, bu kötü tekrarlanabilirlik ve geri dönüş, diğer hayati organlara toksisite, insan hastalığı patoloji ve tür varyasyonunun kötü yansıması gibi çeşitli eksiklikleri var.
Bu nedenle, tekrarlanabilir ve terapötik bir müdahalenin etkilerini incelemek için yeterli zaman aralığı sağlayan daha iyi bir model sistemi için bir ihtiyaç vardır. Mevcut çalışmada, sıçanlarda bir ALF modeli kısmi hepatektomi ve asetaminofen hepatotoksisite etkileri birleştirerek oluşturulmuştur. Karaciğerin ortanca ve sol lateral lob% 70 karaciğer kütlesi çıkarmak için kaldırılır, ve daha fazla, asetaminofen ALF neden verilir.
Modelde ALF gelişimi biyokimyasal ve histolojik analiz ile karakterize edilmiş ve karaciğer hasarının geri dönüşümlülüğü syngenekkik sağlıklı sıçan hepatositlerinin transplantasyonu ile doğrulanmıştır. Mevcut çalışmada 180-250 gram aralığında vücut ağırlığına sahip Wistar Sıçanlar kullanılmıştır. Aşağıdaki adımlar bir sıçanda ALF indüksiyonu için cerrahi prosedürü açıklar.
Hayvan ketamin-Ksilazin karışımı intraperitoneally enjekte edilerek anestezi edilir. Tam anestezi hayvanın ayak sıkışma tarafından teyit edilir, ve daha fazla işlem sadece hiçbir pedal refleks olduğunda yapılır. Korneanın kurumasını önlemek için her iki göze de karboksi metil selüloz esaslı göz damlası uygulanır.
Hayvan beyaz bir bant kullanarak cerrahi tahtaya dizginlenir. Saç bir elektrikli makas kullanılarak sağ üst karın cerrahi bölgesinden kaldırılır. Cerrahi bölgeyi %70 etanol ve povione iyotlu üç adet alternatif önlük ile dairesel hareketle sterilize edilmiş pamuk pedler kullanarak dezenfekte edin.
Kesilecek deri, göğüs kafesinin hemen altında ksifoide dik ve göğüs kafesine paralel olarak işaretlenir. Bir santimetre yaklaşık üç santimetre lik bir açıklığa sahip steril bir örtü levha işaretli derinin üzerine yerleştirilir. Yaklaşık 2-3 santimetre lik bir enine kesi, neşter yardımıyla işaretli çizgi boyunca yapılır.
Kesici bölge çevresinde altta yatan kas tabakası ile cilt eki hafifçe steril nemlendirilmiş pamuk uçları tarafından kaldırılır. Daha sonra, bir enine kesi xiphoid sürecinin hemen altında periton tabakası ile yapılır. Karaciğerin sol lobu iki tuzlu nemlendirilmiş pamuk uçları yardımıyla toraks anazik bir basınç vererek maruz kalır.
Steril bir naylon iplik halkası maruz kalan karaciğer lobu etrafında kaymış. Döngü dikkatle mikro diseksiyon forceps veya pamuk tomurcukları yardımıyla lob tabanına alınır. Mikrocerrahi iğne tutucu ve mikro forceps yardımıyla, döngü nün iki ucu bağlanır, mümkün olduğunca lob tabanına yakın düğüm yerleştirerek.
Bu kan damarlarını daraltmak ve karaciğer lobu çıkarıldıktan sonra kanamayı azaltmak tır. Diğer tarafta iki düğüm daha var. Bağlı lob bir iskemik kütük bırakır mikrocerrahi makas kullanılarak düğüm hemen üzerinde kesilir.
Benzer şekilde, karaciğer median lob pamuk uçları kullanılarak kaldırılır. Karaciğer median lob benzersiz şekli tanıyın. Lob üzerine bir naylon iplik halkası yerleştirin, sıkıca uçlarını bağlayın.
Diğer tarafta iki düğüm daha bağlanır ve lob un rezeksiyonu yapılır. Loblar çıkardıktan sonra, periton basit kesme dikiş ile cilt dikiş takip sürekli dikiş ile emilebilir catgut kromik 4/ 0 emilebilir dikiş kullanılarak dikilir. Cilt kapatıldıktan sonra cerrahi bölgeye povison iyot solüsyonu uygulanır.
Örtü kağıdı çıkarılır ve hayvan ameliyat panosundan çıkarılır. Bir ml'de %5 glukoz çözeltisi olan 12 miligram sefotaksim dozunun intraperitoneal olarak hayvana verilmesi, postoperatif enfeksiyon riskinden korunması için. Ameliyat sonrası ağrı kesici için, analjezik meloksikam, genellikle 1 kg vücut ağırlığı başına mg hayvana subkutan verilir, iki gün boyunca her gün bir doz takip.
Hayvan sıcak bir iyileşme kafesine taşınır. Hayvan 30-40 dakika içinde bilincini yiyişecek ve hareket etmeye başlar. Ameliyat edilen hayvan, cerrahi yaralar tamamen iyileşene kadar izole tutulur, bu da üç ila dört gün sürebilir.
ALF indükleme için, asetaminofen kg vücut ağırlığı başına 750 miligram ve meloksikam ikinci doz kısmi hepatektomi işleminden 24 saat sonra intraperitoneally enjekte edilir. Bu doz rejimi 24 saat sonra tekrarlanır. ALF indüksiyonundan sonra hayvanlarda sağkalımda ciddi azalma saptandı.
ALF gelişimini karakterize etmek için, işletilen hayvanlar asetaminofen ikinci doz sonra ötenazi edildi, ve çeşitli biyokimyasal ve histolojik çalışmalar yapıldı. Sonuçlar videoda önceden açıklanmıştır. ALF indüklenen grupta sağkalım yüzdesi ciddi şekilde azalmış ve ikinci asetaminofen dozu 24 saat içinde %80'e kadar mortalite gözlenmiştir.
ALF indüklenen grupta morfolojik düzeyde karaciğer hasarı ve sadece %70 parsiyel hepatektomi grubu görüldü. Oysa kontrol grubu ve sadece asetaminofen tedavi edilen grup sağlıklı bir görünüme sahipti. Alanin amino transferaz, aspartat amino transferaz ve alkalen fosfataz enzim düzeyleri diğer gruplara göre ALF indüklenen grupta yüksek olduğu bulunmuştur.
QPCR ile gen ekspresyonu profilinin analizi, apoptozda yer alan genlerin yüksek ekspresyonu, inflamasyon ve karaciğer hasarının ilerlemesini gösterdi. Karaciğer dokusu kesitlerinin hematoksilin ve eozin boyaması kontrol grubunda çoğunlukla normal hepatositsapları saptadi. ALF grubunda çoğunlukla orta derecede makro vesiküler yağ dejenerasyonu gözlendi.
Protrombin zamanı ve Uluslararası Normalize Oranı ALF indüklenen grupta yüksek bulundu, bu da kan pıhtılaşma sürecinin engellendiğini gösteriyordu. Sinjenezik sağlıklı sıçan hepatositlerinin transplantasyonu ndan sonra ALF indüklenen grupta sağkalım yüzdesi geri bulundu. Hücre nakli sonrası ALF kaynaklı hayvanlarda alanin amino transferaz, aspartat amino transferaz ve alkalen fosfataz enzimlerinin serum düzeylerinin onarıldığı saptandı.
Sıçanlarda ALF indükleme Bu yöntem tekrarlanabilir, iyi geri dönüşümlülük gösterir ve yeni tedavileri test etmek için uygun bir zaman penceresi sağlar. Bu nedenle, bu model ALF tedavisinde potansiyel terapötik yaklaşımların değerlendirilmesi için etkili bir hastalık modeli olarak hizmet verebilir.
