pdECM bioink dokuya özgü bileşenleri ve mimarisi kullanarak pankreas adacıkları için yararlı bir mikroortam sağlayabilir ve hücre ölümlerini azaltmak ve yazdırılabilirliğini artırmak optimal nörolojik özelliklere sahiptir. Bu tekniğin ana avantajı dokuya özgü kompozisyon 3D pankreas doku yapıları ve kapsüllü adacıklar arasında yapıcı bir crosstalk teşvik pdECM bioink içinde korunabilir olmasıdır. pdECM bioink adacık kapsülleme gelişimi tip bir diyabet tedavisi için transplante edilebilir pankreas dokusu yapılması için uygulanabilir.
Bu bioink nakledilebilir yapılar yanı sıra diyabet, diyabete bağlı komplikasyonlar ve pankreas kanseri için in vitro doku modellerinin uygulanmasını genişletmek için kullanılabilir. Dondurulmuş domuz pankreas doku örneğinin hücreden arındırılması için, bir milimetre kalınlığında parçalar halinde dondurulmuş pankreas dilim ve 500 mililitrelik plastik konteyner içine dilimlenmiş doku 50 gram aktarmak için bir rende kullanın. Yaklaşık 12 saat boyunca dakikada 150 rotasyonlarda dijital orbital shaker üzerinde dört santigrat derece distile su 300 mililitre ile doku yıkayın.
Ne zaman bulutlu su kaybolur, 84 saat boyunca PBS% 1 Triton-X 100 400 mililitre ile su değiştirin. Deterjan tedavisinin sonunda, pankreastan kalan yağ kaldırmak için iki saat boyunca izopropanol 400 mililitre ile doku kuluçka, PBS 400 mililitre 24 saatlik yıkama takip. Yıkamasonunda, 400 mililitre %0,1 perasetik asitle 400 mililitre lik perasetik asitle iki saat boyunca, numuneyi 400 mililitre taze PBS ile yıkamadan önce altı saat boyunca sterilize edin.
Yıkamanın sonunda, doku parçalarını 50 mililitrelik konik bir tüpe aktarmak için forseps kullanın ve numuneyi eksi 80 derecede bir saat boyunca yeniden dondurun. Daha sonra konik tüpü kauçuk bantla sabitlenmiş tüy bırakmayan bir mendille kapatın ve hücredışı dokuyu eksi 50 derecede dört gün boyunca lyophilize edin. Bioink hazırlamak için, yeni bir 50 mililitre konik tüp içine dondurulmuş kurutulmuş pdECM 200 miligram transfer ve doku örneğine pepsin 20 miligram ve 8.4 mililitre 0.5 molar asetik asit ekleyin.
Daha sonra dakikada 300 dönüşte 96 saatlik bir kuluçka için tüpün içine manyetik bir karıştırma çubuğu yerleştirin. Kuluçka sonunda, 40 mikrometrelik bir hücre süzgeci ve pozitif yer değiştirme pipetini kullanarak çözeltiyi buz üzerinde yeni bir tüpe filtre uygulayarak sindirilmemiş parçacıkları filtreleyin ve tüpe bir mililitre 10X PBS ekleyin. Girdap tan sonra çözeltinin pH'ını yediye ayarlamak için sodyum hidroksit kullanın.
Desenli bir yapıya sahip pankreas yapısının 3Boyutlu hücre baskısı için bioink hazırlamak için, 0.4% Trypan Mavi ve Rose Bengal Çözüm ile bir aliquot pdECM bioink bir aliquot leke bir-20 oranında. Daha sonra her biyoink çözeltisini orta askıda adacık çözeltisi ile son %1,5 bioink konsantrasyonuna ve mililitre başına üç adacık eşdeğerine üç kat 10'luk bir hücre yoğunluğuna göre üç e-bir oranda hafifçe karıştırmak için pozitif bir yer değiştirme pipeti kullanın. Çok malzeme tabanlı pankreas dokusu yapılarının 3D hücre baskısı için, her bioink adacık karışımını, mavi ve kırmızının alternatif çizgileri olan bir kafes şeklinde 18 santigrat derecede optimize edilmiş baskı koşulları altında 25 gauge nozul ve 3D baskı ile donatılmış ayrı sterilize şırıngalara yükleyin.
Bioink çapraz bağlantı için, 30 dakika boyunca 37 derece santigrat ve% 5 karbondioksit hücre kültürü kuluçka baskılı yapı yerleştirin. Sonra RPMI içine basılı yapı batırın 1640 orta içine 10% fetal sığır serum ve penisilin ve streptomisin mililitre başına 100 adet ile takviye. Desellülerizasyon işleminden sonra, çift iplikçikli DNA'nın %97.3'ü çıkarılır ve kollajen ve glikozaminoglikanlar gibi temsili ekstrasellüler matriks bileşenleri sırasıyla %1278.1 ve %96.9'da kalır.
Bu temsili analizde, pdECM bioink saniyede bir yada yaklaşık 10 pascal değerinde bir kesme inceltme davranışı sergiledi ve biyoink bir meme yoluyla ekstrüzyon için uygun regl özelliklerini gösterdi. Ayrıca, bioink karmaşık modülü sıcaklık 15 santigrat dereceye ulaştığında artmaya başladı ve sıcaklık 37 santigrat derece de muhafaza edildiğinde hızla arttı çözeltinin sol-jel geçiş gösteren. PDECM bioink'in dinamik G prime ve G çift asal asal baskısı, baskı işleminden sonra stabilitesini sağlamak için fizyolojik olarak ilgili sıcaklıklarda incelenmiş ve frekans süpürme koşulu altında istikrarlı bir modül elde edilebistir.
Çok başlı bir baskı sistemi kullanarak, çeşitli türde 3D yapılar, doku benzeri bir düzenlemede iki veya daha fazla canlı doku türünü uyumlu hale getirmek için pdECM'nin çok yönlülüğünü gösteren ve geliştirilen pdECM kullanılarak üretilebilir. Kabarcıkların varlığı baskı çözünürlüğünü düşürür ve hücre canlılığını azaltır gibi hücre ölümü ve kabarcık oluşumunu önlemek için hücreleri ile bioink karıştırırken nazik olun. 3D pankreas dokusu yapıları içinde kapsüllenmiş pankreas adacıklarının işlevselliği immünoresans boyama veya glikoz tolerans testi ile değerlendirilebilir.
Bu pdECM bioink ve 3D biyobaskı tekniği potansiyel doku mühendisliği alanında fonksiyonel pankreas dokusu yapıları gelişimi için kullanılabilir. Araştırmacılar keskin rende ve reaktifleri kullanırken yaralanmaları önlemek için uygun kişisel koruyucu ekipman giymelidir.
