Bu protokol, çözücü ile karbon etkileşimlerini azaltabilir polikasını kullanarak hem küçük moleküller hem de proteinler olabilecek kargo stabilitesini korumaya yardımcı olabilir. Aşı işlevleri genellikle verimsiz ulaşım ve depolama tesisleri nedeniyle tehlikeye olabilir gibi bu yeni teknik gelişmekte olan ülkelerde aşı kapsama geliştirmek için kullanılabilir. Polybubbles imal etmek için, ilk 0.92 mililitre cam şişe içine% 10 CMC 800 mikrolitre eklemek için bir mililitre transfer pipet kullanın.
PCLTA sentezlemek için, 200 mikrolitre DCM'de 14 kilodalton PCL mililitre başına 1.000 gram karıştırın. PLGADA sentezlemek için, kloroform 200 mikrolitre içine beş kilodalton PLGADA mililitre başına 1.000 gram karıştırın. 0,005-1 oranında ki polimer ilgi karışımıyla fotoinitiator'u karıştırın ve elde edilen çözeltinin 200 mikrolitresini, iç çapı 0,016 inç olan dağıtım paslanmaz çelik bir boruya bağlı bir şırınga pompasına monte edilmiş bir mililitrelik cam şırıngaya yükleyin.
Polimer tüpün ileri ve geri hareketini kontrol etmek için mikro motor kullanmak, polikabarcıklar oluşturmak ve 254 nanometre dalga boyunda ultraviyole ışık altında polikabarcıklar tedavi etmek için cam şişe% 10 CMC içine polimer enjekte ve santimetre kare iki watt 60 saniye boyunca ultraviyole ışık altında polibubbles tedavi, sonra flaş 30 saniye sıvı nitrojen polikabarcıklar dondurmak ve eksi 85 derece santigrat 0.01 milibar vakum gecede taşıyıcıları lyophilize. Bir polikabaron içinde ilgi kargo merkezleme için, bir rotator bir gecede kargo viskozitesini artırmak için bir gecede% 5 CMC ile kargo karıştırın elle polikabariçine kargo karışımı iki mikrolitre enjekte etmeden önce. Tüm kargo enjekte edildiğinde, yeniden tedavi, flaş dondurma, ve sadece gösterildiği gibi enjekte polybubble lyophilize.
Ertesi sabah, kurutulmuş CMC polikasını ayırmak için forseps kullanın ve kalan CMC'yi çıkarmak için polikasını deiyonize suyla yıkayın. Daha sonra polybubble'ı ikiye bölün ve kargonun ortalanıp ortalanıp konfokal mikroskopi ile yarıları görüntüleyin. Küçük moleküllü kargo salınımı için, uygun kuluçka uzunluğu için 37 santigrat derecede 400 mikrolitre PBS merkezli acriflavine ile polikabarcıklar kuluçka.
Her deneysel zaman noktasında, supernatant toplamak ve şişe taze PBS 400 mikrolitre ekleyin. Sonra toplanan supernatant floresan yoğunluğunu ölçmek için bir plaka okuyucu kullanın. Yakın kızılötesi aktivasyon için polimer çözeltiyi hidrofobik altın nano çubuklarla 1'e 9 oranında karıştırın ve 0,005-1 oranında fotoğraf başlatıcısı ekleyin.
Elde edilen karışımı %10 CMC'nin 800 mikrolitresini içeren 0,92 mililitrelik cam şişeye enjekte edin ve ultraviyole ışık altında polikabarcıkları iyileştirin. Flaş donma ve liyofilizizasyon dan sonra, polikabarcıkları deiyonize su ile yıkayın ve taşıyıcıları uygun kuluçka süresi için 37 derecede 400 mikrolitre PBS'de kuluçkaya yatırın. Kuluçka sonunda, PLGADA poliksalar için dört hafta boyunca haftada üç kez sekiz amper için sekiz amper 801 nanometre yakın kızılötesi lazer ile polibubbles aktive sonra ve pcl-PCLTA polibubbles için 14 hafta polikasını ileriye dönük kızılötesi görüntü elde edin.
Her deneysel zaman noktasında, supernatant toplamak ve şişe taze PBS 400 mikrolitre ekleyin. Daha sonra ileriye bakan kızılötesi görüntülerden gelen sıcaklık değerlerini temel alan lazer aktivasyonu öncesi ve sonrası polikasınılar arasındaki sıcaklık farklarını hesaplayın. %10 CMC bazlı sulu çözeltinin eklenmesi, polikabarcık sphercity'nin başarılı bir şekilde bakımı için tam bir polikabarcık süspansiyonu sağlar.
CMC yokluğunda polikabuna kargo enjeksiyonu sızıntıya ve bunun sonucunda polikasenin içinde kargo tutma eksikliğine neden olabilir. Bu sızıntıyı gidermek için PCLTA'nın viskozitesi, polikaprolakton'un triakritile kaplanmasından sonra izole edilen potasyum karbonat kullanılarak arttırılabilir ve kargonun viskozitesi %5 CMC ile karıştırılarak arttırılabilir. PLGADA polikasınıların viskozitesi kargonun merkezleştirilmesini kolaylaştırmak için yeterlidir ve potasyum karbonat ile modülasyon gerektirmez.
Hiv gp120/41 antijeni ile trehalose ile polikasız enjeksiyondan önce karıştırıldıktan sonra antikor bağlama veriminde istatistiksel olarak anlamlı bir fark gözlenmediğini unutmayın. Gecikmiş patlama bültenleri PLGADA polikabarcıkları içinde acriflavine ile 19 gün ortasında polibubbles 37 santigrat derece kuluçka ve polibubbles 50 santigrat derece kuluçka için beşinci gün gözlenir. Buna ek olarak, PLGADA polybubbles ve PCL ve PCLTA polibubbles altın nano çubuklar içeren başarıyla lazer birden çok kez aktive edilebilir.
Polikonu oluştururken, reaktifleri ışıktan korumaya ve çözümleri hemen kullanmaya özen lütfen. Bu teknolojiyi geliştirdikten sonra, bu süreci çok kabarcıklı üretimi büyütmek için otomatikleştirmek de istedik.
